Сравнительное фитохимическое исследование лекарственного растительного сырья березы бородавчатой (Betula verrucosa Ehrh.)

Стеняева, Виктория Викторовна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Сравнительное фитохимическое исследование лекарственного растительного сырья березы бородавчатой (Betula verrucosa Ehrh.)

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Сравнительное фитохимическое исследование лекарственного растительного сырья березы бородавчатой (Betula verrucosa Ehrh.) - тема автореферата по фармакологии

Стеняева, Виктория Викторовна Самара 2005 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Сравнительное фитохимическое исследование лекарственного растительного сырья березы бородавчатой (Betula verrucosa Ehrh.)

На правах рукописи

Стеняева Виктория Викторовна

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ БЕРЕЗЫ БОРОДАВЧАТОЙ (BETULA VERRUCOSA EHRH.)

15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Самара-2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Куркин Владимир Александрович Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Агапов Альберт Иванович; доктор фармацевтических наук, профессор

Бубенчикова Валентина Николаевна

Ведущее учреждение - Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Защита состоится « Ю»еи<яМ)Ц 2005 г. в Ж часов на заседании диссертационного советА К 208.085.03 при ГОУ ВПО СамГМУ Росздрава (443079, г. Самара, проспект К. Маркса, 165 Б).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке

ГОУ ВГ10 СамГМУ Росздрава (Самара, ул. Арцыбушевская, 171).

Автореферат разослан " ^"__(/?1ъф 2005 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета кандидат фармацевтических

наук

Е. В. Авдеева

^do п ¿м6сй-ч8

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В последние десятилетия значительно возросла потребность медицинской практики в использовании лекарственных растений и препаратов на их основе. Их востребованность связана с рядом положительных свойств фитопрепаратов. Растительные препараты, как правило, обладают низкой токсичностью при достаточно высокой эффективности, широким спектром терапевтического действия, комплексным органопротекторным действием на организм больного. В настоящее время хорошо себя зарекомендовали растительные препараты, обладающие мочегонным, противовоспалительным, антисептическим действием. Одним из признанных сырьевых источников для получения препаратов данных фармакотерапевтических групп являются листья и почки березы (Betula verrucosa Ehrh.). Проблематичной в отношении обсуждаемых объектов представляется состояние нормативной документации (НД) (ФС 41 ГФ XI «Почки березы», ФС 42-2487-95 «Листья березы»), особенно в части решения вопросов химической стандартизации. Разработка объективных и унифицированных методов анализа сырья и препаратов основывается на результатах изучения химического состава, выделении ведущей и анализируемой групп биологически активных соединений (БАС). Фотохимические аспекты оценки показателей качества в обсуждаемом случае нуждаются в дальнейшем изучении, поскольку в ФС 42-2487-95 на листья березы в разделе «Качественные реакции» используется только цианидиновая проба, которая характерна для многих лекарственных растений, содержащих соответствующие группы флавоноидных соединений и не является достаточно специфичной. В ФС 41 ГФ XI на почки березы раздел «Качественные реакции» отсутствует. Кроме того, использование в спектофотометрической методике (раздел "Количественное определение" в фармакопейной статье "Листья березы") Государственного стандартного образца (ГСО) рутина, на наш взгляд, не является оптимальным. В случае оценки качества почек р соответствии с действующей НД оп-

ределяется содержание эфирного ¿для разрабатываемых

суммарных препаратов на основе водно-спиртовых экстрактов. Результаты современных исследований химического состава, взаимосвязи «структура вещества - биологическая активность» и «химический состав - фармакологическое действие» обусловливают необходимость изучения других фармакологических эффектов данного лекарственного растительного сырья. Кроме того, в настоящее время почки и листья березы применяются в основном в виде настоев. При этом не учитывается в полной мере природу БАС в плане их растворимости в различных экстрагентах.

Таким образом, представляется актуальным дальнейшее фитохимическое исследование сырья березы бородавчатой, разработка новых подходов к решению проблемы химической стандартизации, а также поиск новых путей в области применения препаратов березы в медицинской практике.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является фитохимическое исследование листьев и почек березы как перспективных сырьевых источников для получения новых препаратов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучение химического состава листьев и почек березы бородавчатой.

2. Разработка подходов к стандартизации сырья и препаратов листьев и почек березы бородавчатой с позиций определения ведущей группы БАС и с учетом принципа унификации методик в ряду лекарственное растительное сырье -субстанция - лекарственная форма.

3. Разработка методик качественного анализа листьев и почек березы бородавчатой.

4. Разработка методик количественного анализа листьев и почек березы бородавчатой.

5. Разработка методик качественного и количественного анализа препаратов «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка».

6. Разработка и изучение числовых показателей препаратов: «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка».

7. Разработка проектов и йзменечри на дистья и почки березы.

Научная новизна. В результате изучения химического состава березы бородавчатой (Betula verrucosa Ehrh.) выделено и идентифицировано 10 индивидуальных веществ фенольной природы. Для установления структуры и изучения физико-химических свойств выделенных соединений были использованы УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопия и масс-спектрометрия, а также результаты различных химических превращений. Из листьев березы выделен салидрозид, которых впервые описан для видов рода Betula.

Научно обоснована целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов березы бородавчатой по флавоноидам, и, в частности, по содержанию гиперозида - в случае листьев березы, и лютеолина, пиностробина - в случае почек березы. Обоснована целесообразность использования тонкослойной хроматографии (ТСХ) для определения подлинности листьев (гиперозид) и почек (пиностробин).

На основе изучения химического состава сырья и с учетом методологических подходов по выделению целевой группы действующих веществ выполнены фотохимические и аналитические исследования по разработке лекарственных средств «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка».

Практическая значимость.

1 Разработаны методики качественного и количественного анализа почек и листьев березы бородавчатой: в ФС 42-2487-95 предложено ввести новый раздел «Качественные реакции» и числовой показатель «Сумма флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 2,0 %».

2. Разработаны методики качественного и количественного анализа препаратов «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка» с использованием ТСХ-анализа и спектрофотометрии.

3. Разработаны показатели качества препаратов «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка», в том числе «Содержание суммы флавоноидов», «Сухой остаток», «Концентрация спирта», а также установлены сроки годности.

4. Показана целесообразность использования разработанных препаратов березы бородавчатой «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка» в медицинской практике в качестве антисептических, противовоспалительных, а также нейротропных и адаптогенных лекарственных средств.

5. Оформлены проекты ФС "Березы почки" (письмо № 125 от 27.01.05 г.) и Изменения № 1 к ВФС 42-2487-95 "Березы листья" (письмо № 129 от 27.01.05 г.), которые приняты к рассмотрению Фармакопейным государственным комитетом Министерства здравоохранения и социального развития РФ.

6 Результаты исследований используются в научных изысканиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (акты внедрения от 17.02.05 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения химического состава листьев и почек березы бородавчатой.

2. Результаты исследований по разработке методов стандартизации сырья и препаратов березы бородавчатой.

3. Методики качественного и количественного анализа ЛРС «Березы листья», «Березы почки» и препаратов «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка».

4. Результаты разработки и определения показателей качества JIPC и соответствующих препаратов.

5. Способы получения препаратов «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка».

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и

социальному развитию" (№ Государственной регистрации 01200105332) и Республиканских программ:

1. «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях» по теме: «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптоген-ного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

2. «Разработка методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды и флаво-ноиды» (№ Государственной регистрации 01990007536).

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на Международной научной конференции «Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности» (Томск, 2000); на Международной научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современной науки» (Самара 2000, 2001); на VII, VIII и IX Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2001, 2002, 2004); на межрегиональной конференции «Аспирантские чтения (Самара 2002, 2003); на IX и X Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2002; 2003); на VI Симпозиуме по феноль-ным соединениям (Москва, 2004); на XXI (Marrakech-Morocco, 2002) и XXII (Helsinki-Finland, 2004) International Conference on Polyphenols.

Основное содержание диссертации опубликовано в 15 научных работах.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 130 страницах машинописного текста, содержит 25 таблицы, 14 рисунков. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, описания объектов и методов исследования, 3-х глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 221 источников, из которых 73 - на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.

Глава 1 содержит аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по современному состоянию исследований березы бородавчатой, в котором обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава растения, фармакологической активнрсти, применению в медицинской практике.

В главе 2 представлены характеристика объектов и методов исследования. Приведены методики химического, физического и физико-химического изучения лекарственного сырья, индивидуальных веществ и препаратов, а также методы контроля качества лекарственных форм на основе березы бородавчатой.

В главах 3-5 экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований по изучению химического состава почек и листьев березы бородавчатой, совершенствованию методов стандартизации данного сырья и препаратов на его основе, разработке новых препаратов и оценке их качества.

В приложение вынесены материалы по разработке нормативной документации, акты внедрения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Изучение химического состава листьев и почек березы бородавчатой

В результате изучения химического состава почек и листьев березы бородавчатой, произрастающей в Самарской области, выделено 10 индивидуальных веществ, относящихся к флавоноидам и простым фенолам (табл. 1).

Препаративное разделение веществ осуществлялось методом колоночной хроматографии. Для элюирования использовали смеси растворителей, а именно: хлороформ - этиловый спирт, этиловый спирт - вода в различных соотношениях. Эффективное разделение и очистка веществ достигалось чередованием

сорбентов (силикагель, полиамид, сефадекс) и соответствующих систем растворителей. Кристаллизация и перекристаллизация веществ осуществлялась с помощью гексана, этанола, воды.

Таблица 1

Физико-химические константы выделенных соединений

№ Название, химическая формула Состав м+ Т.пл. °С Хгаах(ЕЮН), нм

листья

1. Гиперозид он О ¿н С21Н20О12 302 (агликон) 233-235 258, 267пл, 362нм

2. Рутин НО О С27Н30О16 302 (агликон) 189-191 258,267пл, 362нм

3. Апигенин ОН О С15Н10О5 270 341-343 270, 340

4. 7,4'-диметиловый эфир скутелляреина ^-Ч^ОСНз СпНиОб 315 138-140 280, 320нм

5. Салидрозид С14Н20О7 138 (агликон) 160-162 224, 279

почки

6. Пиностробин ОН 0 С16Н14О4 270 96-98 289, 360 пл нм

7. Пиноцембрин но^О он о с16н12о4 256 193-195 289, 325 пл нм

8. Сакуранетин НЗСО^^О^Д^ ОН О С16Н1405 286 149-151 289, 325 нм

9. 5-гидрокси-7,4'-диметоксифлавон /Ч^ОСНз ОН О С17НН05 298 170-175 269, 330 нм

10 Кемпферол ОН О СиНюОб 286 285-287 268, 362 нм

Для установления структуры выделенных веществ использованы данные УФ, 'Н-ЯМР- и масс-спектров, а также результаты химических превращений и непосредственное сравнение с достоверными образцами веществ. Отсутствие примесей в получаемых соединениях контролировалась методом ТСХ в нескольких системах и с использованием различных способов детекции.

Фрагмент структурных исследований выделенных соединений на примере гиперозида представлен на рис. 1.

Рис. 1. 'Н-ЯМР спектр гиперозида

Гиперозид. Светло-желтое аморфное вещество состава С21Н20О12 с т.пл. 233-235 °С (водный ацетон); УФ- спектр: Хтах 258, 266 пл, 362 нм. 1Н-ЯМР-спектр: 12,40 м.д. (с, 5-ОН), 9,83 (с,7-ОН), 8,05 (д, 2,5 Гц, Н-2'), 7,64 (дц, 2,5 и 9 Гц, Н- 6"), 6,93 (д, 9 Гц, Н-5'), 6,52 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,30 (д, 2,5 Гц, Н-6), 5,20 (д, 7,5 Гц, Н-1"), 3,5-4,0 (м, 6Н- галактозы).

2. Совершенствование методов стандартизации листьев и почек березы бородавчатой

Современные тенденции развития методов стандартизации лекарственных

средств служат предпосылкой для формирования новых фармакопейных требований к качеству и, соответственно, возникает необходимость доработки проектов ФС (Арзамасцев А.П. и др., 2000; Багирова В.Л. и др., 2001).

Оценка качества листьев березы осуществляется на основании ВФС

42-2487-95 «Листья березы, а почек березы - на основании ФС "Почки березы" ст. 41 ГФ СССР XI издания.

Необходимость во внесении изменений по разделам химической стандартизации, включению некоторых новых разделов и изменению редакции отдельных уже имеющихся - продиктована рядом обстоятельств. Целесообразность в совершенствовании разделов «Качественные реакции» и «Количественное определение» обусловлена расширением спектра представлений о химическом составе и повышением уровня требований к объективности и унифицированности методов анализа сырья, фитосубстанций и лекарственных средств.

Так, фитохимические аспекты оценки показателей качества в обсуждаемом случае нуждаются в дальнейшем изучении, поскольку в ФС 42-2487-95 на листья березы в разделе «Качественные реакции» используется только цианиди-новая проба, которая характерна для многих лекарственных растений, содержащих соответствующие группы флавоноидных соединений и не является достаточно специфичной для их идентификации. В ФС 41 ГФ XI на почки березы раздел «Качественные реакции» - отсутствует. Кроме того, использование в спектофотометрической методике (раздел "Количественное определение" в фармакопейной статье "Листья березы") Государственного стандартного образца ГСО рутина, на наш взгляд, не является оптимальным поскольку по результатам наших исследований доминирующим флавоноидом листьев березы является гиперозид. В случае оценки качества почек березы в соответствии с действующей НД определяется содержание эфирного масла, что неприемлемо для разрабатываемых суммарных препаратов на основе водно-спиртовых экс-

трактов, несмотря на то, что данная субстанция является ведущей группой БАС обсуждаемого сырья (Куркин В.А., 2002; 2004).

На сегодняшний день ряд работ отечественных и зарубежных ученых демонстрируют перспективность дальнейшего изучения фенольных соединений листьев и почек обсуждаемого растения, и особенно флавоноидов. Учитывая тот факт, что биологическая активность препаратов почек и листьев березы бородавчатой обусловлена в значительной мере флавоноидами, в частности, основными компонентами растения - пиностробином, пиноцембрином, гиперозидом и другими соединениями, представляется целесообразным проводить анализ данного препарата именно по этой группе веществ.

В связи с этим нами изучена возможность оценки качества сырья по группе БАВ - флавоноидам. Результаты исследований свидетельствуют о том, что для этих целей целесообразно использовать гиперозид (листья березы), пиност-робин и лютеолин (почки березы).

2.1. Качественный анализ листьев и почек березы бородавчатой

2.1.1. Качественный анализ листьев березы бородавчатой Для определения подлинности данного лекарственного растительного сырья березы бородавчатой использовали ТСХ-анализ, основанный на обнаружении и идентификации доминирующего флавоноида растения.

В ходе разработки методики были проведены исследования по выбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющих эффективно разделить основные компоненты сырья и однозначно идентифицировать доминирующее БАС.

В результате проведенных опытов с различными хроматографическими системами, содержащими в различных соотношениях хлороформ, этанол, метанол и воду, было установлено, что наиболее четкое разделение доминирующих БАС удается достичь в системе растворителей хлороформ - метиловый спирт -вода (26:14:3).

В предлагаемой методике используются готовые пластинки "Силуфол" или "Сорбфил-ГТТСХ-П-А-УФ". Пластинки "Силуфол" предварительно активируют в сушильном шкафу не менее 1 ч при 100-105 "С для четкого разделения компонентов С той же целью хроматографическую камеру насыщают парами системы растворителей не менее 24 ч.

1 г измельченного сырья с размером частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, экстрагируют 10 мл 40 % этилового спирта при нагревании с обратным холодильником при умеренном кипении на электроплитке с закрытой спиралью в течение 15 мин. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр с красной полосой.

Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру и хроматографи-руют восходящим способом.

Рис. 2. ТСХ анализ листьев березы

1 - водно-спиртовое извлечение листьев березы;

2 - ГСО гиперозида;

3 - ГСО рутина.

При просмотре хроматограммы водно-спиртовых извлечений листьев березы в УФ - свете при длине волны 254 нм гиперозид обнаруживается в виде доминирующего пятна фиолетового цвета при длине волны 254 нм с величиной Г?г около 0,5-0,6 на уровне пятна ГСО гиперозида; допускается наличие пятен других флавоноидов, в том числе второго по значимости флавоноида - рутина с величиной Иг около 0,4 (рис. 2).

Хроматограмму проявляют свежеприготовленным щелочным раствором диазобензолсульфокислоты, помещают в сушильный шкаф и выдерживают при температуре 110 °С в течение 5 мин На хроматограмме должно проявиться доминирующее пятно желтовато-оранжевого цвета с около 0,5, допускается наличие других пятен (рутина и других флавоноидов).

В ВФС 42-2487-95 «Листья березы» нами предлагается включить раздел «Качественные реакции», а именно методику, основанную на обнаружении с использованием ТСХ доминирующего флавоноида растения - гиперозида.

2.1.2. Качественный анализ почек березы бородавчатой

Для определения подлинности почек березы бородавчатой использовали ТСХ-анализ, основанный на обнаружении и идентификации доминирующего флавоноида растения.

В предлагаемой методике используются готовые пластинки "Силуфол" или "Сорбфил-ПТСХ-П-А-УФ". Пластинки "Силуфол" предварительно активируют в сушильном шкафу не менее 1 ч при 100-105°С.

1 г измельченного сырья с размером частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, экстрагируют 10 мл 80 % этилового спирта при нагревании с обратным холодильником при умеренном кипении на электроплитке с закрытой спиралью в течение 15 мин. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр с красной полосой.

Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру и хроматографи-руют восходящим способом.

При просмотре хроматограммы водно-спиртовых извлечений почек березы в УФ - свете при длине волны 254 нм пиностробин обнаруживается в виде пятна фиолетового цвета с величиной R/~ 0,8 на уровне пятна ГСО пиностробина Допускается наличие других пятен с меньшими значениями R/, доминирует среди них главное действующее вещество - пиноцембрин с величиной R/= 0,7 (относительно ГСО пиноцембрина). При обработке хроматограммы щелочным раствором диазобензолсульфокислоты пиностробин обнаруживается в виде доминирующего пятна желтовато-оранжевого цвета на уровне ГСО пиностробина

(R/= 0,8)

В ФС 41 ГФ XI «Почки березы» нами предлагается включить раздел «Качественные реакции», а именно методику, основанную на обнаружении с использованием ТСХ доминирующего флавоноида растения - пиностробина.

2.2. Количественный анализ почек и листьев березы бородавчатой

2.2.1. Количественное определение суммы флавоноидов в листьях березы бородавчатой.

С целью разработки методики количественного определения биологически активных веществ в данном лекарственном растительном сырье нами были изучены УФ-спекгры исходного водно-спиртового извлечения и в присутствии комплексообразующего реагента алюминия хлорида (III).

В процессе разработки методики изучены следующие стадии: степень из-мельченности сырья, выбор экстрагента, режим экстракции сырья (время экспозиции, соотношение сырье-экстрагент), аналитическая длина волны, разведение.

В УФ-спектре (рис. 3) обнаруживаются два максимума поглощения в области 250-270 нм и около 360 нм, характерные для веществ флавоноидной природы, в частности, флавонов и флаванонов. Наличие флавоноидных веществ подтверждается также батохромным сдвигом в области 412 нм в присутствии алюминия хлориды (III).

Длина волны, нм

Рис. 3. УФ-спектр водно-спиртового извлечения листьев березы:

1- листья березы;

2- листья березы + А1С13;

3 - дифференциальная кривая поглощения раствора листья березы

Принимая во внимание то обстоятельство, что в кривую поглощения могут вносить вклад другие вещества для анализа листьев березы нами также было отдано предпочтение дифференциальной спектрофотометрии.

В качестве аналитической длины волны, на наш взгляд, целесообразно использовать 412 нм (рис. 3, кривая поглощения 3), так как максимум поглощения в этой области УФ-спектра обусловлен веществами флавоновой и флавоноло-вой природы. В качестве стандарта нами рекомендовано использовать ГСО ги-перозида (ВФС 42-1088-81).

Метрологические характеристики методики качественного определения гиперозида в сырье березы обыкновенной рассчитаны из результатов анализа в 11 независимых повторностях (табл. 2).

Таблица 2

Метрологические характеристики методики количественного определения гиперозида в листьях березы обыкновенной

/ X 5 Р, % '(Р./) Ах Е, %

10 2,43 0,067 95 2,23 ±0,14 ±5,70

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью составляет 5,70%. Опыты с добавками ГСО гиперозида к навеске сырья показали, что ошибка анализа находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки разработанной методики.

В соответствии с этим, целесообразно введение в НД нового значения нижнего предела содержания флавоноидов в листьях березы - не менее 2%.

Цельное и измельченное сырье, на котором проводилась отработка по показателю качества «содержание суммы флавоноидов», соответствовало ВФС 42-2487-95 «Листья березы» по внешнему виду.

В связи с введением методики количественного определения суммы флавоноидов нами предлагается внести изменение в ВФС 42-2487-95 «Листья березы», в раздел "Числовые показатели".

2.2.2. Количественное определение суммы флавоноидов в почках березы бородавчатой.

При разработки методики количественного определения БАС в почках березы бородавчатой нами были изучены УФ-спектры исходного водно-спиртового извлечения и в присутствии комплексообразующего реагента алюминия хлорида (III).

В процессе разработки методики изучены следующие стадии: степень из-мельченности сырья, выбор экстрагента, режим экстракции сырья (время экс-

позиции, соотношение сырье-экстрагент), аналитическая длина волны, разведение.

В УФ-спектре обнаруживаются коротковолновый и длинноволновый максимумы поглощения, характерные для веществ флавоноидной природы, в частности, флавонов и флаванонов. Наличие флавоноидных веществ подтверждается также батохромным сдвигом в области 430 нм в присутствии алюминия хлориды (III).

Принимая во внимание то обстоятельство, что в кривую поглощения могут вносить вклад другие вещества для количественного анализа почек березы нами было отдано предпочтение дифференциальной спектрофотометрии.

В ходе предварительных исследований было показано, что наибольший выход целевого продукта достигается при размере частиц не более 1 мм и экстракции сырья 80 % этанолом в соотношении 1:40 в течение 1 ч на кипящей водяной бане.

Метрологические характеристики методики количественного определения лютеолина в сырье березы бородавчатой рассчитаны из результатов анализа в 11 независимых повторностях (табл. 3).

Таблица 3

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в почках березы обыкновенной

/ X S Р, % t(PJ) Ах Е, %

10 2,83 0,0570 95 2,23 0,13 ±4,60

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью составляет 4,60%. Опыты с добавками ГСО лютеолина к навеске сырья показали, что ошибка анализа находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки разработанной методики.

На основании полученных данных в ФС 41 ГФ XI предлагается ввести новый показатель "Содержание суммы флавоноидов не менее 2,0%".

Следует отметить, что цельное и измельченное сырье, на котором проводилось изучение по показателя качества "содержание суммы флавоноидов", соответствовало ФС 41 ГФ XI.

3. Исследования по разработке и стандартизации новых препаратов

При разработке подходов к решению проблемы стандартизации препаратов березы бородавчатой мы придерживались принципа унификации методик анализа в ряду лекарственное растительное сырье - субстанция - лекарственная форма (Самылина И.А., 1994,1995)

3.1. Разработка способа получения настойки

В ходе проведенных исследований были приготовлены образцы настоек почек и листьев березы различными методами. Использовались методы мацерации, перколяции и модифицированной мацерации. Полученные образцы настоек были проанализированы по разработанной методике (раздел З.2.). Результаты данных исследований приведены в табл. 4.

Таблица 4

Результаты анализа различных образцов настоек почек и листьев березы

№ Методы получения настойки Содержание суммы флавоноидов, %

Настойка почек березы Настойка листьев березы

1 Мацерация 0,41-0,43 0,4-0,42

2 Перколяция 0,46-0,48 0,42-0,44

3 Модифицированная мацерация 0,50-0,54 0,43-0,46

Все образцы настоек соответствовали по разработанному числовому показателю - содержание суммы флавоноидов. Наибольший выход действующих веществ наблюдался при использовании метода модифицированной мацерации, сочетающего экстракцию при комнатной температуре и при нагревании в интервале температур 70-80 °С.

3.2. Качественный анализ настойки листьев и почек березы

Для качественного анализа настойки листьев и почек березы, как и в случае анализа сырья растения, предложен метод тонкослойной хроматографии с использованием ГСО гиперозида и ГСО пиностробина соответственно.

3.2 1. Качественный аналиа настойки листьев березы. В предлагаемой методике используют готовые пластинки "Силуфол УФ-254" или "Сорбфил-ПТСХ-П-А-УФ", на которые микропипеткой наносят 0,01 мл препарата. Пластинку с нанесенной пробой помещают в вертикальную камеру, которую предварительно насыщают не менее 24 ч смесью растворителей: хлороформ-метиловый спирт-вода (26:14:3), и хроматографируют восходящим способом.

Когда фронт растворителей пройдет около 13 см (силуфол) или 8 см (сорб-фил), пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм. На хроматограмме должно обнаруживаться доминирующее пятно фиолетового цвета (гиперозид) на уровне пятна ГСО гиперозида с Яг около 0,5. Допускается наличие других пятен. На хроматограмме после проявления свежеприготовленным щелочным раствором диазобензолсульфокислоты должно проявиться доминирующее пятно желтовато-оранжевого цвета с около 0,5, допускается наличие других пятен (рутина и других флавоноидов).

3.2.2. Качественный анализ настойки почек березы. В предлагаемой методике используют готовые пластинки "Силуфол" или "Сорбфил-ПТСХ-П-А-УФ", на которые микропипеткой наносят 0,02 мл препарата. Хроматографиче-скую пластинку помещают в камеру, которую предварительно насыщают не менее 24 ч смесью растворителей: хлороформ-этанол (9:1), и хроматографируют восходящим способом.

Когда фронт растворителей пройдет около 13 см (силуфол) или 8 см (сорбфил), пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм. Пиностробин обнаруживается в виде пятна фиолетового цвета с величиной 11/= 0,8 на уровне пятна ГСО пиностробина, допускается наличие других пятен с меньшими значениями

Я/ других флавоиоидов, доминирует среди них главное действующее вещество - пиноцембрин с величиной 0,7 (относительно ГСО пиноцембрина). При обработке хроматограммы щелочным раствором диазобензолсульфокислоты пиностробин обнаруживается в виде доминирующего пятна желтовато-оранжевого цвета на уровне ГСО пиностробина (Я/= 0,8).

3.3. Количественный анализ настойки листьев и почек березы

В основу методики количественного анализа БАВ в настойке почек и листьев березы положено дифференциальное спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин - для настойки почек березы и в пересчете на гиперозид - для настойки листьев березы.

Поскольку, как ранее было обосновано, оценку качества сырья целесообразно проводить по содержанию суммы флавоноидов, то аналитическая длина волны для анализа настойки почек березы - 430 нм, для настойки листьев березы - 412 нм. В данной области спектра спиртовой раствор настойки и ГСО имеют прямопропорциональную зависимость оптической плотности от концентрации. Данное обстоятельство позволяет использовать спектрофотометрию для количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на соответствующий ГСО. Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в настойке почек и листьев березы представлены в табл. 5 и 6.

Таблица 5

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в настойке листьев березы бородавчатой

/ X 5 Р.% Ах Е.%

10 0,46 0,0095 95 2,23 ±0,0212 +4,61

Таблица 6

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в настойке почек березы бородавчатой

/ X 5 Р.% Ах Е.%

10 0,54 0,0074 95 2,23 ±0,0165 ±3,06

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет 3,06 % и 4,61 % соответственно. Опыты с добавками соответствующих ГСО в препараты (настойка почек березы и настойка листьев березы) и в раствор А показали, что ошибка анализа находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки методики.

Результаты анализа 5 серий образцов настойки почек и листьев березы, полученных в условиях химической лаборатории, по количественному определению суммы флавоноидов, проведенные с использованием разработанных методик, показали, что содержание суммы флавоноидов в настойке почек березы составляет в диапазоне 0,43-0,47%, 0,52-0,54%, 0,45-0,48%, 0,41-0,43% и 0,47-0,49%; в настойке листьев березы 0,43-0,46%, 0,48-0,51%, 0,44-0,47%, 0,50-0,53%, 0,45-0,48%.

В качестве нижнего предела содержания суммы флавоноидов в настойке почек и листьев березы рекомендованы показатель 0,4%.

Проведенные технологические исследования позволили установить показатели качества настойки и экстракта, которые приведены в таблице 4.

Нами показано, что настойки почек и листьев березы бородавчатой стабильны по всем показателям качества, в том числе в плане количественного содержания суммы флавоноидов в течение двух лет.

В плане обоснования целесообразности применения в медицинской практике новых лекарственных средств из листьев и почек березы бородавчатой, на кафедре фармакологии СамГМУ, в опытах на животных, проведено изучение специфической активности настоек из данного лекарственного растительного сырья: было доказано наличие тонизирующего и адаптогенного действия для обоих препаратов.

ВЫВОДЫ

1. В результате изучения химического состава почек и листьев березы (Betula verrucosa Ehrh.), произрастающей в Самарской области, выделено 10 индивидуальных веществ, относящихся к фенольным соединениям.

2. Выделенные вещества идентифицированы с использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии, а также различных химических превращений как гиперозид, рутин, апигенин, 7,4'-диметиловый эфир скутелля-реина, пиностробин, пиноцембрин, сакуранетин, 5- гидрокси-7,4-диметоксифлавон, кемпферол (флавоноиды), а также салидрозид (простые фенолы), причем последний компонент впервые выделен и впервые описан для видов рода Betula.

3. Предложены новые подходы к стандартизации сырья и препаратов березы бородавчатой, заключающийся в использовании ГСО гиперозида (листья березы бородавчатой), ГСО пиностробина и ГСО лютеолина (почки березы бородавчатой) с учетом принципа унификации методик в ряду лекарственное растительное сырье - субстанция - лекарственная форма.

4. Разработана методика качественного анализа почек и листьев березы бородавчатой, основанная на обнаружении с использованием ТСХ доминирующих флавоноидов растения - гиперозида (листья березы) и пиностробина (почки березы).

5. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в почках и листьях березы с использованием дифференциальной спектрофо-тометрии. Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,60% и +5,70%, соответственно.

6. В качестве нижнего предела содержания суммы флавоноидов в почках и листьях березы рекомендован показатель «не менее 2,0 %».

Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов в настойках почек и листьев березы с помощью разработанных методик с доверительной вероятностью 95% составляет +3,06 и ±4,61%, соответственно.

8. Определены показатели качества новых лекарственных средств "Березы почек настойка", "Березы листьев настойка".

9 В качестве нижнего предела содержания суммы флавоноидов в настойке листьев березы и настойке почек березы рекомендован показатель «не менее 0,4%».

10.На основании экспериментальных данных, полученных в ходе химического изучения и анализа различных образцов почек и листьев березы бородавчатой (Betula verrucosa Ehrh.), оформлен проект ФС «Почки березы» (письмо № 125 от 27.01.05) и Изменения № 1 к ВФС 42-2487-95 «Листья березы» (письмо № 129 от 27.01.05), которые приняты к рассмотрению Фармакопейным государственным комитетом Министерства здравоохранения и социального развития РФ.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Купцова, В В. Листья и почки березы - уникальный источник лекарственных средств / В В. Купцова II Актуальные проблемы современной науки: Тез. док. международ, конф. молодых ученых и студентов, Самара, 12-14 сентября 2000 г. - Самара, 2000. - Ч. 2. - С. 60.

2. Итоги и перспективы исследований в области создания препаратов на основе лекарственного растительного сырья, содержащего фенилпропанойды / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Е.В. Авдеева и др. II Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности: Материалы докладов международной науч. конф., Томск, 27-29 июня 2000 г. - Томск, 2000. - С. 40-42

3. Купцова, В.В. Перспективы использования листьев и почек березы для создания новых фитопрепаратов I В В Купцова II Актуальные проблемы современной науки: Тез. докл. 2-й международ, конф. молодых ученых и студентов, Самара, 11-13 сентября 2001 г. - Самара, 2001,- Ч. 2. - С. 89.

4. Купцова, В.В. Сравнительное фитохимическое исследование сырья и препаратов березы бородавчатой / В В. Купцова, В.А. Куркин II Экология и здоровье человека: Тез. докл. VII Всерос. конгр., Самара, 2-4 октября 2001 г. -Самара,2001.-С. 100-101.

5. The flavonoids as the bioantioxidants / A.V. Kurkin, A.A. Lebedev, G.G. Zapesochnaya et al. II Polyphenols communications: XXII International Conference on Polyphenols, Marrakech, 9-12 September 2002. - Marrakech-Morocco. - 2002. - P. 285-286.

6 Купцова, В В Листья и почки березы - уникальный источник создания лекарственных средств / В В. Купцова II Аспирантские чтения - 2002: Тез. док. межрегион, конф., Самара, 25 сен. 2002 г.- Самара, 2002. - С. 104.

7. Флавоноиды как экопротекторы антиоксидантного действия IBA. Куркин, И.Ф. Шаталаев, КС. Пименов II Актуальные проблемы экологии человека: Тез. докл. VIH Всеросс. конгр., Самара, 3-5 декабря 2002 г. - Самара, 2002. -С. 132-133.

8. Флавоноиды как гепатопротекторы и антиоксиданты ! Г Г Запесочная, В.А. Куркин, А.А. Лебедев и др. II Человек и лекарство: Тез. докл. IX рос. нац.конгр., Москва, 8-12 апреля 2002 г. - М., 2002. - С. 164.

9. Купцова, В.В. Качественный и количественный анализ листьев березы / В.В. Купцова II Молодые ученые - медицине (Аспирантские чтения - 2003): Тез. док. всерос. конф., Самара, 25-26 сентября 2003 г. - Самара, 2003. - С. 154.

10. Флавоноиды как государственные стандартные образцы и их значение для целей стандартизации сырья и препаратов / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, А А Лебедев и др // Человек и лекарство: Тез. докл. X рос. нац.конгр., Москва, 7-11 апреля 2003 г. - М., 2003. - С. 728.

11. Флавоноиды как стандартные вещества / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Е.В. Авдеева и dp И VT Симпозиум rio фенольным соединениям: Тез. док. международ. конф , Москва, 28-30 апреля 2004 г. - М., 2004. - С. 101.

12. Экспериментальная оценка влияния фитопрепаратов, содержащих флавоноиды, на центральную нервную систему: Сб. науч. тр. / Пятигорск, гос. фармац акад; Редкол. - Пятигорск, 2004. - С. 277-278.

13. Стеняева, В.В. Береза бородавчатая - перспективный источник получения препаратов с противовоспалительными и антимикробными свойствами / В.В. Стеняева, В.А. Куркин И Экология и здоровье человека: Тез. докл. IX Всеросс. конгр., Самара, 5-7 октября 2004 г. - Самара, 2004. - С. 272-274.

14. The new possibilities in the standardization of the some medicinal plants containing the flavonoids / V.A. Kurkin, G.G. Zapesochnaya, E.A. Avdeeva et al. II Polyphenols communications: XXII International Conference on Polyphenols, Helsinki, 25-28 august 2004. - Helsinki-Finland, 2004. - P. 621-622.

15. Куркин, В.А. Стандартизация листьев березы / В.А. Куркин, В.В. Стеняева II Фармация. - 2004. - Т. 52, № 6. - С. 10-12.

Подписано в печать 21.07.05 Формат 60x84 /16. Печ. л. 1,5. Тираж 100 экз. Бумага офсетная. Печать оперативная. Заказ 345.

Отпечатано в типографии ООО "Офорт". Самара, ул. Межевая, 7. Тел.: 35-37-51, 79-08-22.

»13 14 9

РНБ Русский фонд

2006-4 10078

Оглавление диссертации Стеняева, Виктория Викторовна :: 2005 :: Самара

Введение.

Глава 1. Современное состояние исследований березы бородавчатой обзор литературы).

1.1. Историческая справка.

1.2. Ботанико-фармакогностическая характеристика.

1.3. Географическое распространение.

1.4. Лекарственное сырье.

1.5. Химический состав.

1.6. Фармакологические свойства.

1.7. Клиническое применение.

1.7.1. Перспективы создания новых препаратов.

Выводы к главе 1.

Экспериментальная часть

Глава 2. Объекты и методы исследования.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Метод колоночной хроматографии.

2.2.2. Методы тонкослойной хроматографии и хроматографии на бумаге.

2.2.3. Метод спектрофотометрии.

2.2.4. Методы, использованные для установления строения и идентификации выделенных соединений.

2.2.5. Методы получения и анализа разрабатываемых лекарственных средств.

Глава 3. Изучение химического состава JIPC березы бородавчатой.

3.1 Препаративное выделение биологически активных веществ из ЛРС березы бородавчатой.

3.1.1. Выделение и очистка индивидуальных соединений из почек березы бородавчатой и их хроматографическое разделение.

3.1.2. Выделение и очистка индивидуальных соединений из листьев березы бородавчатой и их хроматографическое разделение.

3.2. Установление структуры и физико-химическая характеристика выделенных соединений и их производных.

Выводы к главе 3.

Глава 4. Совершенствование методов стандартизации почек и листьев березы бородавчатой.

4.1. Качественный анализ.

4.1.1. Методика качественного анализа почек березы бородавчатой.

4.1.2. Методика качественного анализа листьев березы бородавчатой.

4.2. Количественное определение.

4.2.1. Методика количественного определения суммы флавоноидов в почках березы бородавчатой.

4.2.2. Методика количественного определения суммы флавоноидов в листьях березы бородавчатой.

4.3. Изучение динамики накопления биологически активных веществ в листьях березы бородавчатой.

Выводы к главе 4.

Глава 5. Исследования по разработке и стандартизации новых препаратов.

5.1. Качественный анализ препаратов березы.

5.1.1. Методика качественного анализа настойки почек березы.

5.1.2. Методика качественного анализа настойки листьев березы.

5.2. Количественное определение суммы флавоноидов в препаратах березы.

5.2.1. Методика количественного определения суммы флавоноидов в настойке почек березы.

5.2.2. Методика количественного определения суммы флавоноидов в настойке листьев березы.

5.2.3. Разработка числовых показателей и срока годности настойки почек березы.

5.2.4. Разработка числовых показателей и срока годности настойки листьев березы.

5.3. Разработка препаратов.

5.3.1. Разработка способа получения настойки.

5.4. Определение фармакологической активности настойки почек и листьев березы.

5.4.1. Влияние фитопрепаратов на длительность тиопенталового и хлоралгидратоного сна.

5.4.2. Влияние фитопрепаратов на физическую работоспособность и выносливость.

Выводы к главе 5.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Стеняева, Виктория Викторовна, автореферат

Актуальность темы. В последние десятилетия значительно возросла потребность медицинской практики в использовании лекарственных растений и препаратов на их основе. Их востребованность связана с рядом положительных свойств фитопрепаратов. Растительные препараты, как правило, обладают низкой токсичностью при достаточно высокой эффективности, широким спектром терапевтического действия, комплексным органопротекторным действием на организм больного. В настоящее время хорошо себя зарекомендовали растительные препараты, обладающие мочегонным, противовоспалительным, антисептическим действием. Одним из признанных сырьевых источников для получения препаратов данных фармакотерапевтических групп являются листья и почки березы (Betula verrucosa Ehrh.). Проблематичной в отношении обсуждаемых объектов представляется состояние нормативной документации (НД) (ФС 41 ГФ XI «Почки березы», ФС 42-2487-95 «Листья березы»), особенно в части решения вопросов химической стандартизации. Разработка объективных и унифицированных методов анализа сырья и препаратов основывается на результатах изучения химического состава, выделении ведущей и анализируемой групп биологически активных соединений (БАС). Фитохимические аспекты оценки показателей качества в обсуждаемом случае нуждаются в дальнейшем изучении, поскольку в ФС 42-2487-95 на листья березы в разделе «Качественные реакции» используется только цианидиновая проба, которая характерна для многих лекарственных растений, содержащих соответствующие группы флавоноидных соединений и не является достаточно специфичной. В ФС 41 ГФ XI на почки березы раздел «Качественные реакции» отсутствует. Кроме того, использование в спектофотометрической методике (раздел "Количественное определение" в фармакопейной статье "Листья березы") Государственного стандартного образца (ГСО) рутина, на наш взгляд, не является оптимальным. В случае оценки качества почек березы в соответствии с действующей НД определяется содержание эфирного масла, что неприемлемо для разрабатываемых суммарных препаратов на основе водно-спиртовых экстрактов. Результаты современных исследований химического состава, взаимосвязи «структура вещества - биологическая активность» и «химический состав - фармакологическое действие» обусловливают необходимость изучения других фармакологических эффектов данного лекарственного растительного сырья. Кроме того, в настоящее время почки и листья березы применяются в основном в виде настоев. При этом не учитывается в полной мере природа БАС в плане их растворимости в различных экстрагентах.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучение химического состава листьев и почек березы бородавчатой.

2. Разработка подходов к стандартизации сырья и препаратов листьев и почек березы бородавчатой с позиций определения ведущей группы БАС и с учетом принципа унификации методик в ряду лекарственное растительное сырье - субстанция - лекарственная форма.

3. Разработка методик качественного анализа листьев и почек березы бородавчатой.

4. Разработка методик количественного анализа листьев и почек березы бородавчатой.

7. Разработка проектов и изменений НД на листья и почки березы.

Научная новизна. В результате изучения химического состава березы бородавчатой {Betnla verrucosa Elirh.) выделено и идентифицировано 10 индивидуальных веществ фенольной природы. Для установления структуры и изучения физико-химических свойств выделенных соединений были использованы УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопия и масс-спектрометрия, а также результаты различных химических превращений. Из листьев березы выделен салидрозид, которых впервые описан для видов рода Betnla.

На основе изучения химического состава сырья и с учетом методологических подходов по выделению целевой группы действующих веществ выполнены фитохимические и аналитические исследования по разработке лекарственных средств «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка».

Практическая значимость.

1. Разработаны методики качественного и количественного анализа почек и листьев березы бородавчатой: в ФС 42-2487-95 предложено ввести новый раздел «Качественные реакции» и числовой показатель «Сумма флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 2,0 %».

6. Результаты исследований используются в научных изысканиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (акты внедрения от 17.02.05 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения химического состава листьев и почек березы бородавчатой.

2. Результаты исследований по разработке методов стандартизации сырья и препаратов березы бородавчатой.

3. Методики качественного и количественного анализа JIPC «Березы листья», «Березы почки» и препаратов «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка».

4. Результаты разработки и определения показателей качества ЛРС и соответствующих препаратов.

5. Способы получения препаратов «Березы почек настойка», «Березы листьев настойка».

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (№ Государственной регистрации 01200105332) и Республиканских программ:

1. «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях» по теме: «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

2. «Разработка методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды и флавоноиды» (№ Государственной регистрации 01990007536).

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на Международной научной конференции «Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности» (Томск, 2000); на Международной научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современной науки» (Самара 2000, 2001); на VII, VIII и IX Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2001, 2002, 2004); на межрегиональной конференции «Аспирантские чтения (Самара 2002, 2003); на IX и X Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2002; 2003); на VI Симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2004); на XXI

Marrakech-Morocco, 2002) и XXII (Helsinki-Finland, 2004) International Conference on Polyphenols.

Основное содержание диссертации опубликовано в 15 научных работах.

Заключение диссертационного исследования на тему "Сравнительное фитохимическое исследование лекарственного растительного сырья березы бородавчатой (Betula verrucosa Ehrh.)"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. В результате изучения химического состава почек и листьев березы {Betula verrucosa Ehrh.), произрастающей в Самарской области, выделено 10 индивидуальных веществ, относящихся к фенольным соединениям.

2. Выделенные вещества идентифицированы с использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии, а также различных химических превращений как гиперозид, рутин, апигенин, 7,4'-диметиловый эфир скутелляреина, пиностробин, пиноцембрин, сакуранетин, 5- гидрокси-7,4-диметоксифлавон, кемпферол (флавоноиды), а также салидрозид (простые фенолы), причем последний компонент впервые выделен и впервые описан для видов рода Betula.

5. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в почках и листьях березы с использованием дифференциальной спектрофотометрии. Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,60 % и ±5,70 % соответственно.

7. Разработаны методики качественного и количественного анализа препаратов "Березы почек настойка", "Березы листьев настойка" с использованием тонкослойной хроматографии и дифференциальной спектрофотометрии. Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов в настойках почек и листьев березы с помощью разработанных методик с доверительной вероятностью 95% составляет +3,06 и ±4,61 % соответственно.

9. В качестве нижнего предела содержания суммы флавоноидов в настойке листьев березы и настойке почек березы рекомендован показатель «не менее 0,4%».

10.На основании экспериментальных данных, полученных в ходе химического изучения и анализа различных образцов почек и листьев березы бородавчатой {Betula verrucosa Ehrh.), оформлен проект ФС «Почки березы» (письмо № 125 от 27.01.05) и Изменения № 1 к ВФС 42-2487-95 «Листья березы» (письмо № 129 от 27.01.05), которые приняты к рассмотрению Фармакопейным государственным комитетом Министерства здравоохранения и социального развития РФ.

106

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2005 года, Стеняева, Виктория Викторовна

1. Акопов, И.Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение / И.Э. Акопов.- Ташкент: Медицина, 1990. С. 35-37.

2. Аллерговакцина из пыльцы березы. Снижение анафилактогенных свойств / P.M. Хаитов, В.Н.Федосеева, А.В. Некрасова и др. // Иммунология, 1997,-№3.-С. 33-35.

3. Аллерговакцина из пыльцы березы. Гипосенсибирующие свойства / P.M. Хаитов, В.Н Федосеева, А.В Некрасова и др. // Иммунология.- 1997.- № 5. С. 47-49.

4. Аналитическая хроматография / К.И. Сакодынский, В.В. Бражников, С.А. Волков и др. М.: Химия, 1993. - 464 с.

5. Аносова, О.Г. Совершенствование анализа и технологии настоев и отваров, содержащих флавоноиды / О.Г. Аносова, М.В. Колпакова, Н.И. Минникова// Фармация. 1994. - Т. 43, № 1. - С. 30-34.

6. Антибактериальная и цитостатическая активность полиолов даммаранового ряда / С.И. Стехова, Е.Б. Шевцова, М.М. Анисимов и др.// Новые лекарственные препараты Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. науч. конф. Томск, 1988. - Т. 2. - С. 168.

7. Антимикробная активность гликозидов бетулафолиентриола и его 3-эпимера / С.И. Стехова, М.М. Анисимов, Л.И. Атопкина и др.// Растит, ресурсы,- 1989. Т. 25, вып. 1. - С. 103-105.

8. Багирова, B.JI. О стандартизации лекарственных средств на современном этапе / B.J1. Багирова, E.JI. Ковалева, Садчикова Н.П. // Хим.-фармац. журн,- 2000. Т. 34, № 5. - С. 47-48.

9. Балицкий, К.П. Лекарственные растения и рак / К.П. Балицкий, А.Л. Воронцова. Киев: Наукова думка, 1982. - С. 50-51.

10. Бандюкова, В.А. Полифенольные и тритерпеноидные соединения растений рода Betula. Хим.-фарм. пр-во: Обзорн. информ. / В.А. Бандюкова, В.Г. Беликов, Ю.В. Березовская.- М.: НИИСЭНТИ, 1997. -вып. 5, № 11. - 23 с.

11. Барабой, В.А. Растительные фенолы и здоровье человека / В.А. Барабой.-М.: Наука, 1984.- 160 с.

12. Барнаулов, О.Д. Сравнительная оценка влияния некоторых флавоноидов на альтерацию стенки желудка у резерпированных мышей / О.Д. Барнаулов, О.А. Маничева, Н.Ф. Комисаренко // Хим.-фармац. журн.-1983,-№8.-С. 946-951.

13. Баранов, В.И. Хемотаксономическое исследование видов Betula L. // В.И. Баранов, Г.В. Малиновская, Н.Д. Похилло // Растит, ресурсы. 1983. - Т. 19, вып. 2.-С. 159-167.

14. Беликов, В.Г. Идентификация компонентов эфирного масла почек березы / В.Г. Беликов, Ю.В. Березовская, С.В. Клочков // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (53; 1998; Пятигорск): Материалы. .- Пятигорск, 1998. С. 65-66.

15. Биохимия фенольных соединений / Под ред. Дж. Харборна. М.: Мир, 1968.-451 с.

16. Ботанико-фармакогностический словарь / Под ред. К.Ф.Блиновой, Г.П.Яковлева. М.: Высшая школа, 1990. - 272 с.

17. Василенко, Ю.К. Экспериментальное обоснование новых препаратов из коры березы / Ю.К. Василенко, В.Ф. Семенченко, Л.М.Фролова и др. // Фармация,- 1994. Т. 44, № 6. - С. 6-9.

18. Вергейчик, Е.Н. Разработка методов производной и дифференциальной спектрофотометрии для анализа лекарственных средств: Дис. . д-ра фармац. наук./ Пятигорская государственная фармацевтическая академия Пятигорск, 1988. - 260 с.

19. Вичканова, С.А. К вопросу об изучении антимикробных свойств эфирных масел / С.А. Вичканова, Л.В. Макарова, М.А. Рубинчик, В.В. Алгина // Лекарственные растения. М.: Колос, 1971. - С. 221-230.

20. Волобуев, А.Н. Курс физики и биофизики. / А.Н. Волобуев.- Самара: ФГУП «Изд-во «Самарский Дом печати», 2004,- С. 334-338.

21. Гаврилов, А.С. Адаптогенное действие препарата чаги / А.С. Гаврилов, А.А. Щеголев, Е.В. Гусельникова // Хим.-фармац. журн.- 2003. Т. 37, № 2. - С. 43-45.

22. Галашкина, Н.Г. Флавоноиды почек Betula pendula Roth / Н.Г. Галашкина, Д.Н. Ведерников, В.И. Рощин // Растит, ресурсы,- 2004.- Т. 40, вып. 1.-С. 62-76.

23. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е Дмитрук. -Новосибирск: Наука, Сиб. отд., 1990. 333 с.

24. Гиполипидемические свойства гликозидов бетулина / А.С. Иванов, Т.С. Захарова, J1.E. Одинокова и др. // Хим. фармац. журн. 1987.- Т. 1, № 9. -С. 1091-1094.

25. Гликозилирование тритерпеновых спиртов ряда лупана / Л.Э Одинокова, Н.В. Денисенко, В.А. Денисенко и др.// Химия природ, соедин.- 1988. № 2,-С. 212.

26. Головкин, Б.Н. О чем говорят названия растений / Б.Н. Головкин М.: Колос, 1992. - 192 с.

27. Гордиенко, А.Д. Гепатопротекторный механизм действия флавоноидов // Фармация. 1990. - Т. 39, № 3. - С. 75-78.

28. Горовой, П.Г. Бетулафолиетриол в листьях четырех дальневосточных видов Betula L. / П.Г. Горовой, Н.И. Уварова, Г.И. Ошиток // Растительные ресурсы,- 1975. Т. 11, вып. 1. - С. 97-98.

29. ГОСТ 17768-80. Средства лекарственные. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение.

30. Государственная Фармакопея СССР // МЗ СССР. 10-е изд.- М.: Медицина, 1968. - С. 236-237.

31. Государственная Фармакопея СССР. Вып.1. Общие методы анализа // МЗ СССР. 11-е изд.- М.: Медицина, 1987. - 336 с.

32. Государственная Фармакопея СССР. Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье // МЗ СССР. 11-е изд.- М.: Медицина, 1989. - 400 с.

33. Грибель, Н.В. Противометастатический эффект подорожника, полыни, алоэ, почек березы, бефунгина / Н.В. Грибель // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов: Тез.докл,-Томск. 1984. - С. 119-124.

34. Грибель, Н.В. Гастропротективные свойства бефунгина / Н.В. Грибель // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов: Тез. докл.- Томск,- 1990. С. 162-167.

35. Гризодуб, О.И. Создание современных методов анализа лекарственных средств. Стандартизация / О.И. Гризодуб // Фармацевтичный журн. -1994,- № 5-6. С. 72-74.

36. Гринкевич, Н.И. Легенды и быль о лекарственных растениях / Н.И. Гринкевич, А.А. Сорокина.- М.: Наука, 1998. 176 с.

37. Данченко, A.M. Качество древесины Betula pubescens Ehrh. и Betula verrucosa ЕЬгЬ.из Северного Казахстана / A.M. Данченко // Растительные ресурсы,- 1975. Т. 11, вып. 4. - С. 560-566.

38. Денисова, Г.А. Терпеноидсодержащие структуры растений. Монография / Г.А. Денисова. Л.: Наука, 1989. - 140 с.

39. Долгодворова, С.Я. К исследованию коры березы / С.Я. Долгодворова, Г.Н. Черняева // Проблемы освоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Всесоюз. конф. Новосибирск.- 1983.- С. 113-114.

40. Достижения и перспективы создания различных лекарственных препаратов / В.И. Литвиненко, М.Ф. Комисаренко, И.Х. Макаревич, О.П. Прокопенко // Фармацевтичный журн. 1994. - № 5-6. - С. 236-237.

41. Еськин, А.П. Метод количественного фотометрического определения дигидрокверцетина / А.П. Еськин, В.А. Левданский, Н.И. Волежаева // Химия растит, сырья.- 1998.- № 3. С. 111-114.

42. Жизнь . растений / Под ред. А.Л. Тахтаджяна Т. 5, Ч. 1, М.: Просвещение, 1981. - С. 311-324.49.3апесочная Г.Г. Исследование природных флавоноидных гликозидов и их ацилпроизводных: Автореф. дис. . д. хим. наук./ Г.Г. Запесочная М., 1984.- 35 с.

43. Захаров, В.П. Лекарственные вещества из растений и способы их производства / В.П. Захаров, Н.И. Либизов, Х.А. Асланов. Ташкент: ФАН, 1980. - С. 190-195.

44. Захаров, Н.А.Экспериментальное и клиническое изучение действия настойки березовых почек на инфицированные раны / Н.А. Захаров, Н.М. Приданцев, А.А. Хохлова//Клинич. хирургия. 1984,- № 1. - С. 72-73.

45. Кашникова, М.В. Методика количественного определения гиперозида в цветках и настойке цветков боярышника / М.В. Кашникова // Хим.-фармац. журн,- 1984. Т. 18, № 2. - С. 192.

46. Кинтя, П.К. Тритерпеноиды растений / П.К. Кинтя, Ю.М.Фадеев, JI.C. Алюкина. Кишинев: Штиинца, 1990. - 151 с.

47. Клышев, JI.JI. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования) / JI.JI. Клышев, В.А. Бандюкова, JI.C. Алюкина. Алма-Ата: Наука КазССР, 1978. - 228 с.

48. Кольтовер, В.К. Свободнорадикальная теория старения: современное состояние и перспективы / В.К. Кольтовер // Успехи геронтологии. 1998. -вып. 2.-С. 37-42.

49. Конина, JI.B. Динамика липидов в почках некоторых видов березы, произрастающих в Карелии / JI.B. Конина // Растительные ресурсы.- 1978. Т. 14, вып. 2. - С. 222-224.

50. Коробейникова, Э.Н. Модификация определения продуктов перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой / Э.Н. Коробейникова // Лаб. дело. 1989. - № 7. - С. 8-10.

51. Костенникова, З.П. Контроль качества настоек / З.П. Костенникова, Л.В. Акашкина, Т.Э. Терещенко // Фармация,- 1991.- Т. 40, № 3. С. 58.

52. Крылова, А.А. Руководство по фитотерапии / А.А Крылова, В.А. Марченко. СПб.: «Питер», 2000. - С. 42-48.

53. Кузнецова, М.А. Сказания о лекарственных растениях. / М.А. Кузнецова. М.: Высшая школа, 1992. - С. 42-48.

54. Куликов, Е.П. Лекарственные растения в реабилитации онкологических больных / Е.П. Куликов, В.Н. Дармогай. Рязань, 2002. - С. 40-41.

55. Куркин, В.А. Современные аспекты химической классификации биологически активных соединений лекарственных растений / В.А. Куркин // Фармация. 2002. - Т. 50, № 2. - С. 8-16.

56. Куркин, В.А. Иллюстрированный словарь терминов и понятий в фармакогнозии / В.А. Куркин, В.Ф. Новодранова, Т.В. Куркина.- Москва; Самара: ГП «Перспектива», СамГМУ, 2002. С. 25-26.

57. Курочкин, Е.И. Лекарственные растения Среднего Поволжья / Е.И. Курочкин- Куйбышев: Куйбышевское книжное изд-во, 1989. С. 29-31.

58. Кучеров, Е.В. Целебные растения и их применение / Е.В. Кучеров. Уфа, 1993. - С. 75.

59. Лавренова, Г.В. Энциклопедия лекарственных растений / Г.В. Лавренова, В.К. Лавренов. Донецк: Донетчина, 1996. - Т. 2. - 512 с.

60. Ладынина, Е.А. Фитотерапия. / Р.С. Морозова, Е.А Ладынина.- Л.: Медицина, 1987. С. 16-21.

61. Лекарственные растения- антигипоксанты // А. Л. Буданцев, Е.Е. Лесновская, Л.В. Пастушенков, Е.Н. Саканян // Fito Ремедиум 2001. - № 1. - С. 34-36.

62. Лекарственные растения: Каталог. М.: Медицина, 1985. 250 с.

63. Лекарственные растения: Справочное пособие / Под ред. Н.И. Гринкевич.- М.: Высшая школа, 1991. С. 57.

64. Лекарственные растения в педиатрии: Справочник / В.Ф. Косун, Е.В. Корсун, Ю.А. Захаров.- М.: Издательский дом «Русский врач», 2003. С. 18-19.

65. Лекарственные растения леса / Авт. текста Т.Д. Никиточкина. М.: Изобразительное искусство, 1991. - С. 27-29.

66. Максютина, Н.П. Флавоноиды // Растительные лекарственные средства -Киев.: Наука, 1985. С. 85-102.

67. Махлаюк, В.П. Лекарственные растения в народной медицине / В.П. Махлаюк. Саратов: Приволж. кн. изд-во, 1993. - С. 17-19.

68. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: В 2 ч.-14 изд. перераб., испр. и доп. / М.Д. Машковский. М.: Волна, 2000. - Т. 1. - 736 е.; Т. 2. - 688 с.

69. Минаева, В.Г. Лекарственные растения Сибири / В.Г. Минаева. -Новосибирск: Наука, 1991. 430 с.

70. Науменко, З.М. Продуктивность и биохимический состав фитомассы березы в чистых березняках нечерноземной зоны РСФСР / З.М. Науменко // Растительные ресурсы.- 1978. Т. 14, вып. 1. - С. 126-131.

71. Николаева, В.Г. Антимикробное действие некоторых растений используемых в народной медицине СССР в качестве антисептиков / В.Г. Николаева, А.А. Хохлова // Растит, ресурсы. 1978. - Т. 14, вып. 2. - С. 234-237.

72. Николаева, В.Г. Действие настойки почек березы бородавчатой на стафилококк / А.А. Хохлова, В.Г. Николаева // Растит, ресурсы. 1981. -Т. 17, вып. 3. - С. 410-413.

73. Носаль, М.А. Лекарственные растения и способы их применения в народе /М.А. Носаль, И.М Носаль. Минск: Полымя, 1997. - С. 75-78.

74. Носов, A.M. Лекарственные растения / A.M. Носов М.: ЭКСМО-Пресс, 2001.-С. 49-53.

75. ОСТ 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения,- Введен 01.01.01.- Б.м., 2000 .- 12 с.

76. Павелковская, Г.П. Новые подходы к созданию фитопрепаратов / Г.П. Павелковская, Р.С. Куздынбаева // Человек и лекарство: Тез. докл. VI Российского национального конгресса, 19-23 апреля 1999 г. М., 1999. -С. 453.

77. Палов, М. Энциклопедия лекарственных растений / М. Палов ; пер. с немецкого И.А. Губанова. М.: Мир, 1998. - С.74-75.

78. Пасешниченко, В.А. Биосинтез и биологическая активность растительных тритерпеноидов и стероидов / В.А. Пасешниченко // Итоги науки и техники. Биологическая химия. М., 1987. Т. 5. - С. 5-194.

79. Пастушенков, JI.B. Фармакотерапия с основами фитотерапии / JI.B. Пастушенков, Е.Е. Лесиоввская. Ч. I. - СПб: СПХФИ, 1995. - С. 56-57.

80. Передрий, В.А. Рецептурный справочник фитотерапевта / В.А. Передрий. Киев: АО «Обереги», 1995. - 423 с.

81. ЮО.Похилло, Н.Д. Изопреноиды различных видов рода Betula / Н.Д. Похилло, Н.И Уварова // Химия природ, соедин. 1988. - № 3. - С. 325340.

82. Почему растения лечат / М.Я. Ловкова, A.M. Рабинович, И.К. Пономарева, и др.- М.: Наука, 1990. 256 с.

83. Проблемы стандартизации сырья некоторых видов лекарственных растений, содержащих флавоноиды / В.А.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.В.Авдеева и др. // Актуальные проблемы фармацевтической химии: Научные труды, Т. XXXV НИИФ. Москва, 1996. - С. 164-174.

84. Программа по курсу "Основы фитотерапии" (для студентов медицинских институтов, слушателей ФПК и ФУВ) / В.А.Куркин. -Самара, 1992. -21 с.

85. Пронченко, Г.Е. Лекарственные растительные средства / Г.Е. Пронченко; Под ред. А.П. Арзамасцева, И.А. Самылиной. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. - С. 37-38.

86. Пронченко, Г.Е. Символ России: Береза / Г.Е. Пронченко // Медико-фармац. вестник 1997. - № 1. - С. 49-53.

87. Прудников, Е.Д. Проблемы теории погрешностей в анализе / Е.Д. Прудников, Е.Е. Прудников // Всерос. конф. по истории и методол. аналит. химии, (2; 1999; Москва): Тез. докл. .- М., 1999. С. 38-40.

88. Прудников, Е.Д. Чувствительность в анализе / Е.Д. Прудников // Всерос.конф. по истории и методол. аналит. химии, (2; 1999; Москва): Тез. докл. .-М., 1999.-С. 40-41.

89. Разработка аллерговакцины из пыльцы березы ииммуностимулятора полиоксидония / В.А. Камышева, P.M. Хаитов, В.Н. Федосеева и др. // Человек и лекарство: Тез. докл. VI Российского национального конгресса, Москва 19-23 апреля 1999 г.- М., 1999. С. 415.

90. ПО.Рапп, О.А. Противоязвенная активность экстракта из коры Betula pendula Roth. / О.А. Рапп, В.Г. Пашинский, Т.П. Фомина // Раст. ресурсы. 1995. - Т. 31, вып. 2. - С. 50-52.

91. Рапп, О.А. Сравнительная оценка фармакологической активности экстрактов из сырья березы, полученных на этаноле различной концентрации / О.А Рапп, В.Г.Пашинский, B.C. Чучалин // Растит, ресурсы. 1996. - Т. 30, вып. 6. - С. 23-24.

92. Рапп, О.А. Сравнительная оценка фармакологической активности экстрактов коры березы, приготовленных на этаноле различной концентрации / О.А Рапп, В.Г.Пашинский, B.C. Чучалин // Хим.-фармац. журнал. 1999. - Т. 33, № 1. - С. 3-5.

93. Рапп, О.А. Фармакологическая активность экстракта коры березы / О.А. Рапп, В.Г. Пашинский // Бюллетень Сибирского отделения РАМН, 1997. № 4. - С. 138-142.

94. Растения для нас: Справочное издание / Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой,- СПб: учебная книга, 1996. С. 181-183.

95. Самылина, И.А. Основные направления исследований лекарственных растений на современном этапе / И.А. Самылина, И.С. Грицаенко, Н.К. Горчакова // Современные аспекты изучения лекарственных растений: Научные труды, Т. XXXIV. М„ 1995. - С. 3-6.

96. Связь между химическим строением и антистафилококковой активностью полиолов даммаранового ряда и их глюкозидов / С.И. Стехова, М.М. Анисимов, JI.H. Атопкина и др. // Растит, ресурсы. -1998.-Т. 34, вып. 1,- С. 51-56

97. Семенченко, В.Ф. Сравнительная оценка способов выделения тритерпенсидов из коры березы. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (49; 1994; Пятигорск):г'

98. Материалы.- Пятигорск. 1994. - С.71-72.

99. Смирнова, JI.B. Количественное определение суммы" флавоноидов в цветках бессмертника / JI.B. Смирнова, JI.H. Первых // Хим.-фармац. журн. 1998. - Т. 32, № 6. - С. 35-38.

100. Смирнова, Л.П. Особенности применения стандартного образца рутина в анализе растительного сырья, витаминных и фитопрепаратов / Л.П. Смирнова, С.С. Николаева, В.А. Быков // Хим.-фармац. журн. 2000. -Т. 34, №1,-С. 29-31.

101. Современная фитотерапия / Под ред. В. Петкова,- София: Медицина и физкультура, 1988. С. 61-65.

102. Соколов, C.JI. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей./ C.JI Соколов М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2000. - С. 171-175.

103. Соколов, С .Я. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия)./ С.Я. Соколов Харьков: Изд-во Основа при Харьковском гос. ун-те, 1993.-С. 78-79.

104. Справочник биохимика: Пер. с англ./ Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К.-М.: Мир, 1991. 544с.

105. Справочник по лекарственным растениям / A.M. Задорожный, А.Г. Кошкин, С.Я. Соколов и др.- 2-е изд.- М.: Экология, 1992. С. 67-70.

106. Степень, Р.А. Эфирное масло почек Betula pendala Якутии / Р.А.Степень, В.А.Хан, В.М. Вершняк // Химия природ, соедин. 1987. -№ 6.- С. 803-805.

107. Сур, С.В. Методы выделения, идентификации и определения терпеновых соединений (обзор) / С.В. Сур // Хим.-фармац. журн,- 1990. Т. 24, № 5. - С. 42-50.

108. Тритерпеноиды и флавоноиды из листьев сибирских видов рода Betula / Н.Д. Похило, В.А. Денисенко, В.В. Маханько и др. // Химия природ, соедин. 1983.- №3,- С. 392-393.

109. Тритерпеноиды из листьев Betula pendula Roth, различных мест произрастания / Н.Д. Похило, В.А. Денисенко, В.В. Маханько, Н.И. Уварова//Химия природ, соедин. 1986. - № 2. - С. 179-185.

110. Турищев С.Н. Рациональная фитотерапия / С.Н. Турищев. М.: Информпечать, 2000,- С.85.

111. Фармакогнозия: Учебник / В.А. Куркин.- Самара: ООО «Офорт»; ГОУВПО «СамГМУ», 2004. 1180 с.

112. Фармакогнозия: Учебник / Д.А. Муравьева. М.: Медицина, 1991. - 560 с.

113. Фармакогнозия: Учебник / Д.А. Муравьева, И.А. Самылина, Г.П. Яковлев.- 4 изд. перераб., испр. и доп.- Москва: Медицина,- 2002. 656 с.

114. Фармакологические свойства тритерпеноидов из коры березы // Ю.К. Василенко, В.Ф. Семенченко, М.Н. Ивашев // Экологическая патология и ее фармакокоррекция.- Чита, 1991. Т. 3 - С. 9-10.

115. Физико-химические методы исследования природных биологически активных соединений. Ч. 1. Хроматографические методы / В.А. Куркин, В.Б. Браславский, Е.В. Авдеева и др.- Самара: СамГМУ, 1997. 38 с.

116. Филина, Л.И. Технология фитопрепаратов из коры березы/ Л.И. Филина, В.Ф Семенченко // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (49; 1994; Пятигорск): Материалы.- Пятигорск,-1994. С. 78.

117. Фитотерапия: Учеб. пособие для студ. высш. мед. учеб. заведений / Под ред. С.Н. Турищев.- М.: Издательский центр «Академия», 2003. С. 148-157.

118. Фитотерапия с основами клинической фармакологии (справочник) / Под ред. В.Г. Кукеса. М.: Медицина, 1999. - С. 61-64.

119. Фитохимическое исследование лекарственных растений родов родиола, тополь, ива, расторопша, одуванчик, содержащих флавоноиды /

120. B.А.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.В.Авдеева и др. // Современные аспекты изучения лекарственных растений: Научные труды, Т. XXXIV НИИФ. -Москва, 1995. С. 151-157.

121. Хасанов, В.В. Биоантиоксиданты в препаратах природного происхождении / В.В. Хасанов, Г.Л. Рыжова // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. науч. конф,- Томск, 1989. С. 185-186.

122. Химический анализ лекарственных растений / Под ред. Н.И. Гринкевич. Л.Н. Сафронич.- М.: Высшая Школа, 1983.- 176 с.

123. Хисамов, Г.Х. Справочник по применению лекарственных растений / Г.Х. Хисамов. Казань: Тат. кн. из-во, 1994. - С. 87-91.

124. Чирков, А.И. Лекарственные сборы / А.И. Чирков, B.C. Серый. М.: Медицина, 1993. - С. 24.

125. Чирков, Н.С. Наука и лекарственные растения / Н.С. Чирков, М.Н. Павлов.- М.: Знание, 1981. С. 56-57.

126. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учеб. пособие / Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой,- СПб.: Специальная литература, 1999. С. 80-81.

127. Эффективность разработки лекарственных средств из растительного сырья / В.А. Быков, В.К. Колхир, С.А. Вичканова и др. // Химия, технология, медицина: Труды ВИЛАР- М., 2000. С. 177-185.

128. A bicentennial of Betulin / Е. Hayek, U. Iordis, F. Moche et al. // Phytochemistry. 1989. - Vol. 28, N. 9. - P. 2229-2242.

129. Acker, van S.A.B.E. Structural aspects of antioxidant activity of flavonoids / Acker an S.A.B.E., Bast A., Vijgh W.J.F. // Flavonoids in health and diseases.- Chapter, 5. 1999. - P. 221-251.

130. Adzet, T. Polyphenols compounds with biological and pharmacological activity / T. Adzet // Herbs Spices Medicinal Plants. 1986. - N. 1. - S. 167184.

131. Analyse der flavonoid glycoside aus Betulae folium // K. Dallenbach-Tolke, S, Nyiredy, B. Meier et al. // Planta Medica.- 1987. Vol. 53, K2.-V. 189192.

132. Arzneipecase des lahers Birke (Betula) // Therapeuticon, 1993. Vol. 7, N. 10.-C. 440.

133. Balza, F. Phytochemistry / F. Balza, Towers G.H.W. 1984. - Vol. 23, N. 10. -P. 2333.

134. Besley, Т.Н. Separation of major components in licorice using High-performance liquid chromatography / Т.Н. Besley, H.W. Ziegler, A.D. Bell // J. Chromatogr. 1979. - Vol. 175. - P. 350-355.

135. Birch sap and birch leaves extract: screening for antimicrobial, phagocytosis-influencing, antiphlogistic and antipyretic activity / W. Klinger, R. Hirscheimann, I. Suss //Pharmazie.- 1989. Bd. 44, H. 8. - P. 558-560.

136. Brasseur, T. Proprieties antiinflammatoires de flavonoids / T. Brasseur // I. Pharm. Belg.- 1989. Vol. 44, N. 3. - P. 235-241.

137. Burch, W. Cell death of apoptosis and its protective role against disease / W. Burch, F. Oberhammer, R. Schulte-Hermann // Trends Pharmacol. Sci.-1992. -N. 13. P. 245-251.

138. Cassady, J.M. Natural Products as a source of potential cancer chemotherapeutica and chemopreventive agents / J.M. Cassady, W.M. Baird,

139. С J. Chang // J. Nat. Prod. 1990. - Vol. 53, N. 1. - P. 23-41.

140. Characterization of hydrolysable tannins from leaves of Betula pubescens by high-performance liquid chromatography-mass spectrometry / J-P. Salminen, V. Ossipov, J. Loponen et al. // J. Chromatogr.-A.- 1999,- Vol. 864, N. 2. -P. 283-291.

141. Composition of essential oils from two endemic sideritics species of Turkey / N. Kirimer, N. Tabanca, T. Ozek and ets. // Химия природ, соедин. 1999,1. N. I . С.76-80.

142. Kostyuk, V.A. Protective effect of natural flavonoids on rat peritoneal macrophages injury caused by asbestos fibers/ V.A. Kostyuk, A.I.

143. Potapovich, S.D.Speransky // Free Radic. Biol. Med., 1996. N. 4. - P. 487493.

144. Danzer, K. Three- and higher-dimensional calibration in analytical chemistry: Abstr. 14 th Semin. Atom. Spectrochem., Hightatras-Podbanske, Sept. 7-11,1998 / K. Danzer // ISP Inf. Newslett. 1999. - Vol. 24, N. 8. - P. 642.

145. Die Triterpene von Betula pendula Roth, und Betula pubescens Ehrh. / H. Rimler, H. Kuhn, Ch. Leuckert et al. // Arch. Pharm. 1966. - Bd. 299, H. 5. - S. 422-428.

146. Dulelenbach-Tollke, К. Flavonoid glycosides from Betula pubescens and Betula pendula / K. Dulelenbach-Tollke, Sz. Nyiredy, G.A. Gross, 0. Sticher // J. Natiir. Prod. 1986. - Vol. 49, N. 6. - P. 1155-1156.

147. Ekman, R. The Suberin Monomers and triterpenoids from outer Bark of Betula verrucosa Ehen / R. Ekman // Holzforschung.- 1983. Vol. 37, N. 4.-P. 205-211.

148. Elbanowska, A. The flavonoid content and diuretic activity of birch leaves (Betula verrucosa) at different phases of growth / A. Elbanowska, F. Kaczmarek // Herba Polonica 1966. - Vol. 11, N. 1-2. - P. 47-56.

149. Ellis, B.E. Natural products from plant tissue culture / B.E. Ellis // Phytochemistry. 1988. - Vol. 5, N. 9. - P. 581-612.

150. Extraction method for the isolation of terpenes from plant-tissue and subseguent determination by gas-chromatography / Bowman J.M., Braxton M.S., Churchill M.A. and ets //Microchem. J. 1997. - Vol. 56, N. 3. - P.10-18.

151. Flavonoid and antioxidant agents: impotance of their interaction with biomembranes / F. Saija, M. Scalese, M. Lanza et al. // Free Radical Biol.

152. Med.- 1995. Vol. 19, N. 4. - P. 481-486.

153. Gaspar, G. Cromatographie in plase gazeuse. Pasymetrir de pin n'est pas une fatalite /G. Gaspar// Srectra anal. 1997. - Vol. 26, N. 199. - P.36-37.

154. Geisman, T.A. The chemistry of flavonoid compounds / T.A. Geisman.

155. Oxford; London; New-York; Paris, 1962. 666 p.

156. Gilani, A.H. Studies on the hepatoprotective effects of rutin on chemical-induced hepatotoxicity in rodents / Gilani A.H.; Janbaz K.H. // Proc. Austral. Physiol, and Pharmacol. Soc. 1998. - N. 2.- P. 272

157. Glasby, T.S. Encyclopedia of the Terpenoids.- Chiechester / I.S. Glasby, New-York, Brislane, Toronto, Singapore: John Wiley & sons, 1982. 421 p.

158. Hakola, H. The hydrocarbon emission rates of tea-leafed willow (Salix phylicifolia), silver birch (Betula pendula) and european aspen (Populus tremula) / H. Hakola, J. Rinne, T. Laurila // J. Atmos-Environ. 1998. - Vol.32, N. 10.-P. 1825-1833.

159. Haslam, E. Natural polyphenols (vegetable tannins) as drugs: possible modes of action / E. Haslam // J. Nat. Prod. 1996. -N. 59. - P. 205-215.

160. High-performance liquid-chromatographic separation and identification of phenolic compounds from leaves of Betula pubescens and Betula pendula I V. Ossipov, K. Nurmi, J. Loponen et al. // J. of Chromatography A.- 1996. -Vol. 721, N. 1.-P. 59-68.

161. Hiroyuki, F. Chemical evaluation of Betula species in Japan / F. Hiroyuki, S. Tetsuya, T. Nobutoshi // Chem. and Pharm. Bull. 1995. - N. 11. - P. 19371942.

162. Horhammer, L. Uber das Vorkommen zyklischer Pflanzensauren beieinigen Polygonaceen und Betulaceen / L. Horhammer, A. Scherm // Arch. Pharm.-1955. Bd. 29, H. 10. - S. 441-447.

163. HPLC isolation and identification of flavonoids from white birch Betula ■ pubescens leaves -/ V. Ossipov, K. Nurmi, J. toponen et al. // Biochemicalsystematics and ecology. 1995. - Vol. 23, N. 3. - P. 213- 222.

164. Karrer, W. {Constitutions und Vorkommeder organischen Pflanzenseffen / W. Karrer. Basel und Stuttgart:- Birkhauser Verlag, 1958. - 1207 p.

165. Karrer, W. Konstitution und Vorkommen der organischen Pflanzenstoffe./ W. Karrer Basel-Boston-Stuttgart: Birkhauser Verlag, 1985,- Erganzung 2,-Teil 2. - 2328 s.

166. Keinanen, M. Comparison of methods for the extraction of flavonoids from birch leaves (Betula pendula Roth.) carried out using high-performance liquid chromatography / M. Keinanen // J. Agric-Food-Chem. Nov. 1993.

167. Vol. 41, N. 11.- P. 1986-1990.

168. Keinanen, M. Effect of sample preparation method on birch {Betula pendula Roth) leaf phenolics / M. Keinanen, R. Julkunen-Tiitto // J. Agric-Food

169. Chem. Sep.- 1996. Vol. 44, N. 9. - P. 2724-2727.

170. Keinanen, M. High-performance liquid-chromatographic determination of flavonoids in Betula pendula and Betula pubescens leaves / M. Keinanen, R.

171. Julkunen-Tiitto // J-Chromatogr, A.- 1998,- Vol. 793, N. 2. P. 370-377.

172. Kolodziej, H. Procyanidins from medicinal birch: bonding patterns and sequence of units in triflavanoids of mixed stereochemistry / H. Kolodziej // Phytochemistry.- 1989. Vol. 28, N. 12. - P. 3487-3492.

173. Lawrence, B.M. Progress in essential oils / B.M. Lawrence // Perfum. and Flavor.- Vol. 14, N. 5. P. 57-65.

174. Mabry, T.J. The Systematic Identification of Flavonoids / T.J. Mabry, K.R. Markham, M.B.Thomas. Springer Verlag: Berlin - Heidelberg - New York. - 1970. -354 p.

175. Morphological and molecular variation in natural-populations of Betula / D.E. Howland, R.P. Oliver, A.J. Davy //New Phytologist, 1995. Vol. 26, N.1.-P. 117-124.

176. Nakano, K. Flavonol and phenylpropanoid glycosides from Lihum cordatum / K.Nakano, K.Nishizawa, I.Takemoto et al. // Phytochemistry. 1989. - Vol.28, N.1.-P, 301-303.

177. Okuda, T. In Polyphenols phenomena / T. Okuda // Scalbert, A., Ed., INRA Publications: Paris, 1993. P. 221-235.

178. On terpens: the constitution of betulenols from oil from the buds of white birch (Betula alba L.) / M. Holub, V. Herout, M. Horak et al. // Collect. Czech. Chem. Commns.- 1959. Vol. 24, N. 11. - P. 3730-3738.

179. Phytocemical evaluation of essential oils, medicine plants and their preparations / E. Lemberkonics, A. Kery, G. Marcral et al. // Acta

180. Pharmaceutica Hungarica.- 1998. Vol. 68, N. 3. - P. 141- 149.

181. Rice-Evans, C. Stxucture-antioxidant activity relationship of flavonoids and phenolic acids / C. Rice-Evans, N.J. Miller, G. Paganga // Free Radical Biol. Med.-1996. Vol. 20, N. 7. - P. 933-956.

182. Santamour, F.S. The distribution of Rhododendrin in birch {Betula) species / F.S. Santamour, H.F. Vettel // Biochem. Syst. and Ecol. 1978. - Vol. 6, N.2.-P. 107-108.

183. Schoplce, Th. Triterpenoid saponins. Part. VI / Th. Schopke, K. Hiller //Pharmazie. 1990. - Bd. 45, H. 5. - S. 313-342.

184. Singia, A.K. Quantitative spectrofluorometry determination of flavonoids and their glycosides / A.K. Singia, KamlaPathak // Indian J. Pharm. Sci. 1991. -Vol. 53, N. 1. -P.27-30.

185. Simons, J.M. Metabolic activation of natural phenols into selective oxidative burst agonists by activated human neutrophils / J.M.Simons, B.A.'t Hart, T.R. Ip Vai Ching // Free Radic. Biol. Med. 1990. -N. 8. - P. 251-258.

186. Skulachev, V.P. A Possible Role of Reactive Oxygen Spicies in Antiviral Defense / V.P. Skulachev // Biochemystry, 1998. Vol. 63, N. 12. - P. 14381440.

187. Sorata, Y. Protective effect of quercetin and rutin on photosensitizedlysis of human erythrocytes in the presence of hematoporphyrin / Y. Sorata, U. Takahama, M. Kimura // Biochem. Biophys. Acta. 1982. - Vol. 799. - P. 313-317.

188. Tegelberg, R. Red: far-red light ratio and UV-B radiation: their effects on leaf phenolics and growth of silver birch seedlings / R. Tegelberg, RJ. Julkunen-Tiitto, PJ. Aphalo // Plant, Cell & Environment. 2004. - Vol. 27,1. N. 8. P. 1005-1013.

189. The Flavonoids / Ed. by J.B. Harborne, T.J. Mabry, H. Mabry. London: Chapman and Hall, 1975. - 1204 p.

190. The Flavonoids: Advances and Research / Ed. by J.B. Harborne, T.J. Mabry. London: Chapman and Hall, 1982. - 744 p.

191. The standart addition methodology for evaluation of results in chromatographic analysis / M.G. Bagur, D. Gazguer, M. Sanchervinas etc //

192. Analysis. 1997. - Vol.24, N. 9-10. - P. 374-380.

193. The flavonoids as the bioantioxidants / A.V. Kurkin, A.A. Lebedev, G.G. Zapesochnaya et al. // Polyphenols communications: XXII International Conference on Polyphenols, Marrakech, 9-12 sep. 2002.- Marrakech -Morocco. 2002,-P. 285-286.

194. Tritepenoids from Betula ainoides / C. Kamperdick, T.T. Thuy, T.Vansung &etc // Planta Medica. 1995. - Vol. 61, N. 5. - P. 453-456.

195. Valkama, Е. Changes in leaf trichomes and epicuticular flavonoids during leaf development in three birch taxa / E. Valkama, JP. Salminen, J. Koricheva, K. Pihlaja // Annals of Botany. 2004. - Vol. 94, N. 2. - P. 233242.

196. Vogel, G. A peculiarity among the Flavonoids silymarin, a compound active on the liver / G. Vogel // In: Flavonoids and Bioflavonoids: Akademiai Kiado. - Budapest, 1982. - P. 461-474.

197. Vogel, G. Natural substances with effects on the liver / G.Vogel // New Natural Products and Plant Drugs with Pharmacological, Biological or Therapeutical activity. Berlin - Heidelberg - New York: Springer Verlag, 1977.-P. 249-265.

198. Wagner, H. Pharmazeutische Biologie. Drogen und ihre Inhaltsstoffe. Gustav Fischer Verlag- Stuttgart-New York, 1993. 522 s.

199. Wagner, H. Plant Drug Analysis. A Thin Layer Chromatography Atlas / H. Wagner, S. Bladt, Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg New York, 1995. -384 p.

200. Wildfeuer, A. The effects of plant preparations on cellular functions in body defense / A. Wildfeuer, D. Mayerhofer // Arzneimittelforschung. 1994. -Vol. 44, N. 3.-P. 361.

201. Wollenweber, E. Flavonoid muster im Knopsenexkret der Betulaceen / E. Wollenweber // Biochem. Syst. and Ecol.- 1975. Bd. 3, H. 1. - S. 47-52.

202. Yahara, S. Flavonoid glucosides from licorice / S.Yahara, I. Nishioka // Phytochemistry. 1984. - Vol. 23, N. 9. - P. 2108-2109.

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Сравнительное фитохимическое исследование лекарственного растительного сырья березы бородавчатой (Betula verrucosa Ehrh.)

Оглавление диссертации Стеняева, Виктория Викторовна :: 2005 :: Самара

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Стеняева, Виктория Викторовна, автореферат

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2005 года, Стеняева, Виктория Викторовна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций