Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка параметров качества сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh. Определение ланатозида С и активности эндогенных ферментов
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Оглавление диссертации Балакина, Мария Владимировна :: 2006 :: Москва
Введение.
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Общая характеристика сердечных гликозидов".
1.2. Препараты кардиотонического действия, получаемые из сердечных гликозидов.
1.3. Биологические методы стандартизации лекарственных растений, содержащих сердечные гликозиды.
1.4. Сердечные гликозиды из наперстянки шерстистой.
1.5. Лекарственное растительное сырье: выращивание, сбор, заготовка, хранение.
1.6. Особенности переработки сырья.
1.7. Реакции обмена сердечных гликозидов.
1.8. Методы определения сердечных гликозидов.
1.8.1. Принципы пробоподготовки сырья.
1.8.2. Физико-химические методы определения сердечных гликозидов.
1.8.3. Химические методы определения сердечных гликозидов.
1.8.4. Хроматографические методы анализа сердечных гликозидов.
1.8.4.1. Тонкослойная хроматография.
1.8.4.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография.
Глава 2. Объекты, материалы и методы исследования.
Глава 3. Обсуждение результатов
3.1. Усовершенствование методики ВЭЖХ-анализа сырья наперстянки шерстистой.
3.2. Методика определения активности эндогенных ферментов сырья наперстянки шерстистой с использованием метода ВЭЖХ.
3.3. Изучение зависимости содержания ланатозида С и уровня активности эндогенных ферментов от условий сушки и заготовки образцов сырья наперстянки шерстистой I и II года вегетации.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Балакина, Мария Владимировна, автореферат
Актуальность темы. Сердечные гликозиды - известная группа природных соединений, обладающая кардиотоническими свойствами. Основными представителями сердечных гликозидов, присутствующими в растении наперстянка шерстистая Digitalis lanata Ehrh. семейства норичниковых (Scrophulariaceae) являются ланатозид С, дигоксин, дигитоксин. В лечебной практике широкое распространение получили препараты, субстанциями для которых служат ланатозид С (препараты ланатозид С, целанид, лантозид и ряд других) и дигоксин, производство которых в течении десятилетий осуществляется как в России так и за рубежом.
Лист наперстянки шерстистой наряду с первичными (основной представитель - ланатозид С) и вторичными (основной представитель — дигоксин) гликозидами содержат систему ферментов, обусловливающих процесс автоферментации. При активации ферментов, присутствующих в сырье, происходит переход первичных гликозидов во вторичные (переход ланатозида С в дигоксин). Данный процесс лежит в основе получения препарата дигоксина.
В последнее время отдается предпочтение производству дигоксина, что обусловлено популярностью данного препарата у врачей и пациентов.
Главной проблемой технологии при производстве препаратов сердечных гликозидов Digitalis lanata Ehrh. является нестабильное качество сырья.
Оценку качества сырья наперстянки шерстистой проводят по содержанию (уровню накопления) ланатозида С. ФС 42-614-89 регламентирует содержание ланатозида С не менее 0,06%. Уровень активности эндогенных ферментов при оценке качества сырья и при определении путей его переработки ранее не учитывался и не регламентировался. Это было связано с недостаточным изучением характера и механизмов внутриклеточных процессов. Сведения, полученные в последние годы о ферментативных процессах, протекающих внутри клетки растения Digitalis lanata Ehrh., создали предпосылки к количественному определению активности ферментов гидролиза в сырье. Это делает актуальным разработку принципов такого определения.
Цель и задачи исследования. Целью данного исследования является разработка высокоэффективных и научно обоснованных методик анализа лекарственного растительного сырья наперстянки шерстистой по содержанию ланатозида С и уровню активности эндогенных ферментов.
Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:
• усовершенствовать методику ВЭЖХ-анализа ланатозида С
• разработать способ количественного определения активности гидролаз в сырье Digitalis lanata Ehrh. с целью оценки уровня активности эндогенных ферментов в различных образцах сырья
• изучить изменения содержания ланатозида С в образцах сырья Г и II года вегетации, в образцах сырья разных сроков сбора, сроков хранения; в образцах сырья, обработанных средствами защиты растений и регуляторами роста
• установить зависимость содержания ланатозида С и уровня активности эндогенных ферментов от условий заготовки сырья (сбор, сушка, хранение)
Связь темы диссертации с планом научных исследований.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с «Программой фундаментальных и приоритетных прикладных исследований Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений по научному обеспечению агропромышленного комплекса Российской Федерации на 2001-2005 гг.»
Новизна исследований. На основании наших многочисленных исследований оптимизирован ВЭЖХ-метод анализа сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh., отличающийся малыми затратами сырья, растворителей и времени проведения анализа.
Нами предложены два основных параметра для оценки качества сырья, наперстянки шерстистой, а именно: содержание первичного гликозида ланатозида С и уровень активности эндогенных ферментов. Определение активности эндогенных ферментов дает возможность оптимизировать выбор пути переработки сырья на ланатозид С или дигоксин.
Установлено влияние года, фазы вегетации, условий сбора, заготовки сырья и параметров сушки на содержание в нем ланатозида С и на уровень активности эндогенных ферментов.
Практическая значимость полученных результатов.
Оценка активности эндогенных ферментов и содержания ланатозида С с применением ВЭЖХ-метода анализа позволяет подойти к пересмотру документации и традиционных норм оценки качества сырья Digitalis lanata Ehrh. и созданию рациональной технологии его переработки.
Методика определения данных параметров качества сырья передана в Научно-исследовательский центр растениеводства ВИЛАР и на ЗАО «Фармцентр ВИЛАР» для использования в процессе выращивания и переработки сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh.
Разработанная методика определения содержания ланатозида С в сырье наперстянки шерстистой' использована в работах по определению эффективности различных средств защиты и регуляторов роста в лаборатории интродукции и защиты растений ВИЛАР.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждены на II Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Казань, 2002), на 6-ом Международном Съезде «Актуальные проблемы создания новых, лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2002), на Международной научно-практической конференции «Состояние и перспективы повышения экологической безопасности» (Санкт-Петербург, 2004); представлены на международной конференции, посвященной памяти А.И.Шретера (Москва, 2004), на 60-ой региональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2005).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ.
На защиту выносятся:
• три способа пробоподготовки и результаты ВЭЖХ-определения содержания ланатозида С в сырье Digitalis lanata Ehrh.
• результаты по изучению активности эндогенных ферментов в сырье Digitalis lanata Ehrh. сорта «Спектр» за 2001-2005 годы заготовки
• исследование накопления ланатозида С в листьях наперстянки шерстистой в зависимости от обработки средствами защиты растений (за 2003-2005 гг)
• результаты по влиянию условий сбора, заготовки сырья на накопление ланатозида С и уровень активности эндогенных ферментов в сырье
• методика определения содержания ланатозида С и активности эндогенных ферментов в сырье Digitalis lanata Ehrh.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 95 страницах машинописного текста, содержит 7 таблиц, 2 схемы и 13 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, трех глав экспериментальных исследований, выводов и списка литературы. Список литературы включает 141 источник, из них 81 на иностранных языках.
Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка параметров качества сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh. Определение ланатозида С и активности эндогенных ферментов"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Усовершенствована методика ВЭЖХ-анализа сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh. и предложено три способа пробоподготовки с использованием жидкофазной и твердофазной экстракции (картриджи ГЖН-200-С8 и Strata SDB-L). Предложенная методика характеризуется малыми затратами сырья, растворителей и времени проведения анализа.
2. Изучена зависимость содержания (уровень накопления) ланатозида С от условий выращивания, применения средств защиты растений и регуляторов роста, сроков сбора, сушки, хранения сырья.
3. Предложен способ оценки активности эндогенных ферментов разных партий сырья Digitalis lanata Ehrh. с применением разработанной методики ВЭЖХ-анализа и проанализировано влияние этого показателя на качество сырья.
4. Подтверждена необходимость оценки качества сырья наперстянки шерстистой как по содержанию ланатозида С, так и по уровню активности эндогенных ферментов при выборе путей заготовки и переработки сырья Digitalis lanata Ehrh.
5. Методика определения данных параметров качества сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh. утверждена на Комиссии по стандартизации ВИЛАР, передана в Научно-исследовательский Центр Растениеводства ВИЛАР и на ЗАО «Фармцентр ВИЛАР» и рекомендована для включения в НД на лист наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh.
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2006 года, Балакина, Мария Владимировна
1. Аитова Р.З., Масленникова В.А., Абубакиров Н.К. Определение 2-дезоксиальдоз и их природных гликозидов с помощью ксантгидрола // Хим. природ, соед. 1973. - №5. - с. 641- 645.
2. Ахрем А.А., Титов Ю.А. Стероиды и микроорганизмы. М.: Наука, 1970. -528 с.
3. Балакина М.В., Звонкова Е.Н., Дюмаев К.М., Быков В.А. Оптимизация контроля качества сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh. с использованием метода ВЭЖХ //Химико-фармацевтический журнал. 2005. -т.39, №11. - с.24-29.
4. Балакина М.В., Звонкова Е.Н., Быков В.А. Усовершенствование метода ВЭЖХ- анализа сырья наперстянки шерстистой // Сборник научных трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». -Выпуск 60. Пятигорск, 2005. - с. 180.
5. Бокарева С.Ю., Звонкова Е.Н., Либизова Л.Ф., Вечканова Л.Д., Быков В.А. Способ получения технического дигоксина// Патент РФ № 2186069. 2002.
6. Брун Е. Жидкостная хроматография полимеров: настоящее и будущее // Рос. Хим. Журн. 2003. - т.47, № 1. - с. 90- 101.
7. Вещиков В.В., Кривут Б.А. Количественное определение ланатозида С в листьях наперстянки шерстистой // Хим.- фарм. журн. 1988. - т.22, № 22. - с. 1241- 1244.
8. Власенко Л.М., Рубцов А.Ф. Извлечение дигоксина органическими растворителями // Фармация. 1974. - т.23, № 6. - с. 58- 59.
9. Воробьев А.И. .Нужно учиться жить и мыслить по-новому // Ремедиум. -1999.-№.3.-с. 8-14.
10. Гарбузова В.М., Либизов Н.И. Спектрофотометрический метод количественного определения ланатозидов А, В, С в листьях наперстянки шерстистой // Фармация. 1971. - т.20, № 4. - с. 30- 33.
11. Генкина Г.Л., Абакумов Н.К., Шакиров Т.Т. Методы определения сердечных гликозидов // Ташкент:ФАН, 1985. 160 с.
12. Георгиевский В.П., Гризодуб А.И., Левин М.Г., Леонтьев Д.А. Стандартизация хроматографического анализа лекарственных средств // Фармаком. Харьков, 1996. - № 3 (44). - с. 12- 23.
13. Горбунов В.Д., Янковский Б.А., Рыжиков A.A. Способ получения гликозидов из листьев наперстянки шерстистой // Авторское свидетельство СССР №114428. Москва, 1983.
14. Государственная Фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. М.: Медицина, 1989. - вып. 2. - 400 с.
15. Гото М., Джинно К., Исии Д., Сенда М., Такеучи Т., Уода А., Хиби К., Хигсидате С. Введение в микромасштабную высокоэффективную жидкостную хроматографию. М.: Мир, 1991. - 240 с.
16. Гринкевич Н.И., Попов В.А., Решетняк В.Ю., Фетисов A.A. Определение оптимальной температуры сушки сырья наперстянки шерстистой // Хим.-фарм. журн. 1984. - т.18, № 8. - с. 968- 971.
17. Евстратова К. И., Сташуленок В. К. Изучение условий экстрагирования и хроматографического разделения стероидов на примере дигиланидов // Журн. прикл. хим. 1998. - т.71, №3. - с. 381- 386.
18. Евстратова К.И., Сташуленок В.К., Хлебникова JI.A. Разделение суммы дигиланидов А, В и С методом ТСХ и определение дигиланида С // Хим.- фарм. журн. 1988. - т.22, № 2. - с. 242- 247.
19. Захаров В.П., Либизов Н.И., Асланов Х.А. Лекарственные вещества из растений и способы их производства // Ташкент: ФАН, 1980. 260 с.
20. Златкис А., Кайзер Р. Высокоэффективная тонкослойная хроматография. М.: Мир, 1979. 245 с.
21. Карташов B.C., Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П., Попов Д.М. Спектроскопия ЯМР !Н в анализе лекарственных средств. Идентификация сердечных гликозидов // Фармация. 1992. - т.41, №3. - с. 26- 29.
22. Мавлянова М.Б. Стандартизация и сравнительная оценка препаратов наперстянки шерстистой физико-химическими и биологическими методами. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. Москва, 1989. - 25 с.
23. Мавлянова М.Б., Попов Д.М. Хроматофотоколориметрическое определение целанида // Хим. природ, соед. 1986. - № 3. - с. 332- 336.
24. Мавлянова М.Б., Попов Д.М. Использование хроматометрических методов для анализа препаратов наперстянки шерстистой при их хранении // Хим.- фарм. журн. 1985. - т.20, № 11. - с. 1377- 1379.
25. Макаревич И.Ф., Новохатская Н.Т., Топчий Л.Я., Хаджай Я.И., Ангарская М.А., Воробьев Н.Е., Бухарина Б.В., Евсеева У.В., Карабин H.A. Медилазид -новый препарат для лечения сердечно-сосудистых заболеваний //
26. Темы докладов Всесоюзной научной конференции «Научно-технический прогресс и оптимизация процессов создания лекарственных препаратов» -Львов, 1987.-с. 137.
27. Макаревич И.Ф., Алистренко А.И., Бондарь Н.Я. "Способ получения дигоксина." // Авторское свидетельство СССР № 1501341. Москва, 1987.
28. Макаревич И.Ф., Губин Ю.И., Кисличенко С.Г. Способ получения ланатозидов ABC // Авторское свидетельство № 1253005. Москва, 1984.
29. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая Волна. - 2000. -вып.2. - т.1. - 540 с.
30. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1988. - т.1.- 624 с.
31. Мелентьева Г.А. Фармацевтическая химия. М.: Медицина, 1976. - т. 2.- 734 с.
32. Митченко Ф.А. Спектрофотометрический метод количественного определения дигитоксина, гитоксина, целанида и дигоксина // Фарм. журн. -1971.-№4.-с. 28-30.
33. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия. М.: Медицина. - 2002. - 656 с.
34. Муравьева А.Д. Фармакогнозия. М. : Медицина, 1978. - 656 с.
35. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Просвещение, 1987. -815 с.
36. ОПР № 391051 на производство абицина и целанида. // Москва, Минмедпром. Техническое управление ВПО «Союзмедсредства». 1982.
37. ОПР № 391037 на производство абицина и целанида. // Москва, Минмедпром. Техническое управление ВПО «Союзмедсредства». 1980.
38. Попов Д.М., Мавлянова М.Б. Хромато-фотоколориметрическое определение дигоксина // Хим. природ, соед. 1985. - № 1. - с. 66- 71.
39. Российская газета, 26 октября 2004. № 236 (3613). - с. 2.
40. Рудаков О.Б., Востров И.А., Федоров C.B., Филиппов A.A., Селеменев В.Ф., Приданцев A.A. Спутник хроматографиста. Воронеж: Водолей, 2004. -528 с.
41. Сациперов Ф.А., Демьянец П.Р., Заболоцкий Е.С., Иванина Л.И., Легков А.И., Турова А.Д. Наперстянка. М.: Медгиз, 1954. - 219 с.
42. Сидоренко Б.А., Преображенский Д.В. Медикаментозное лечение хронической сердечной недостаточности // Труды VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2000. - с. 217- 227.
43. Смирнова Т.В., Попов Д.М. Количественное определение ланатозида С в листьях наперстянки шерстистой методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Фармация. 1997. - т.46, №. 6. - с. 28- 30.
44. Сонияси Р., Сандра П., Шлетт К. Анализ воды: органические микропримеси. Практическое руководство. Санкт- Петербург: Теза, 2000. - 248 с.
45. Староверов С.М. Хроматография в отечественной фармацевтической промышленности // Рос. Хим. Журн. 2003. - т.47, № l.-c. 111- 118.
46. Фетисов A.A., Гаевский A.B., Гринкевич Н.И. Количественное определение ланатозида С в листьях наперстянки шерстистой // Хим.- фарм. журн. 1984. - т. 18, № 5. - с. 588- 592.
47. Фетисов A.A., Гаевский A.B., Гринкевич Н.И., Цыбулько Н.С. Современные методы определения ланатозида С и дигоксина в листьях наперстянки шерстистой (обзор) // Хим.- фарм. журн. 1984. - т. 18, № 11.-е. 1348- 1356.
48. Фонин B.C., Хорлин А.Я. Получение биотрансформированного сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh. и выделение из него дигоксина // Прикл. биохим. микробиол. 2003. - т.39, № 5. - с. 588- 592.
49. Чернобай Н.Х., Власова Г.Ф., Гулый Е.В., Либизов Н.И. Влияние сроков уборки и условий сушки на качество сырья наперстянки шерстистой // Раст. Ресур. 1969. - т.5 (1). - с. 213- 219.
50. Шаин С.С. Биорегуляция продуктивности растений. М.Юверлей, 2005. -218 с.
51. Шаин С.С., Головкина Г.И., Гейер Н.И., Бондаренко А.К., Фонин B.C., Кузнецова Г.К., Сапа Н.П. Способ регулирования роста наперстянки шерстистой // Патент РФ № 2051583. 1996.
52. Шаин С.С., Головкина Г.И., Гейер Н.И., Курапов П.Б., Шевелуха B.C. Экзогенная регуляция продуктивности в онтогенезе наперстянки // Физиол. раст. 1995. - т.42, № 5. - с. 780- 786.
53. Шилов Ю.М., Королева М.Я., Вещиков В.В. Сравнительная характеристика хроматоспектральных методов анализа сердечных гликозидов на примере ланатозидов А, В и С // Фармация. 1985. - т.34, №2. - с. 46- 50.
54. Шилов Ю.М., Королева М.Я. Идентификация и определение сердечных гликозидов дигиталиса методом ИК- спектроскопии в сочетании с ТСХ // Журн. анал. хим. 1984. - т.32, №11.- с. 2055- 2957.
55. Яшин Я.И., Яшин А.Я. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Состояние и перспективы // Рос. Хим. Журн. 2003. - т.47, № 1. - с. 64- 79.
56. Bärish Н., Fischer F., Schmidt J. Biochemishe Aktivität von Digitalisextrakten // Pharmazie. 1972. - v.27. - p. 416.
57. Baruah P., Swain T. ß-glycosidase of potato // J. Biochem. London. - 1957. v.66. - p. 321-327.
58. Belsner K, Büchele B. Fluorescence detection of cardenolides in reversed-phase high-performance liquid chromatography after post-column derivatization // J. Chrom. B. 1996. - v.682. - p. 95- 107.
59. Braga F.C., Kreis W., Recio R.A., Braga de Oliveria A. Variation of cardenolides with growth in a Digitalis lanata brazilian cultivar 11 Phytochemistry. -1997.-v.45,№3.-p. 473-476.
60. Braga F.C., Kreis W., Braga de Oliveira A. Isolation of cardenolides from a Brazilian cultivar of Digitalis lanata by rotation locular counter- current chromatography // J. Chrom. A. 1996. - v.'756. - p. 287- 291.
61. Britten A.Z., Njau E. The specific fluorimetric determination of digoxin // Anal. chim. acta. 1975. - v.76,№ 2. - p. 409- 417.
62. Debska W., Saskowska A. Metoda oznaczania zawartosci lanatosydu C w lisciach naperstnicy welnistej // Herba Pol. 1982. - v.28, № 3/4. - p. 139- 144.
63. Debusschere L., Demesmay C., Rocca J.L., Lachatre G, Lofti H. Separation of cardiac glycosides by micellar electrokinetic chromatography and microemulsion electrokinetic chromatography // J.Chrom. A. 1997. - v.119. - p. 227- 233.
64. Diettrich B., Emst S., Luckner M. Haploid plants regenerated from androgenic cell cultures of Digitalis lanata II Planta Med. 2000. - v.66. - p. 237- 240.
65. Dimov N., Simova M. Unexpected behavior of digoxin at elevated temperatures in reversed- phase liquid chromatography // Chromatographia. 1999. -v.49, № 5/6. - p. 306- 308.
66. Dinan L., Harmatha J., Lafont R. Chromatographic procedures for the isolation of plant steroids // J. Chrom. A. 2001. - v. 935. - p. 105- 123.
67. Eisenbeiß M., Kreis W., Reinhard E. Cardenolide biosynthesis in light- and dark-grown Digitalis lanata shoot cultures // Plant Physiol. Biochem. 1999. - v.37., № 1 - p. 13- 23.
68. Finsterbush A., Lindemann P., Grimm R., Eckerskorn C., Luckner M. A5-3ß-hydroxysteroid dehydrogenase from Digitalis lanata Ehrh. a multifunctional enzyme in steroid metabolism ? // Planta. - 1999. - v. 209. - p. 478- 486.
69. Franzmair R., Schneider H., Becker J. Verfahren zur Herstellung vob beta-Methyldigoxin// EP 0 093 266 Bl. 1985.
70. Fujii Y., Ikeda Y., Okamoto I., Yamazaki M. Separation and determination of lanatosides in Digitalis lanata leaves by high- performance liquid chromatography // J. Chrom. 1990. - v.508. - p. 241- 246.
71. Fuska J., Proksa В., Khandlova A., Sturdicova M. Microbial transformations of cardioglycosides //Appl. Microbial. Biotechnol. 1987. - v.26. - p. 313- 317.
72. Gadiva I., Perez-Bermudez P. Cardenolides of Digitalis obscura: the effect of phosphate and manganese on growth and productivity of shoot-tip cultures // Phytochemistry. 1997. - v.45, № 1. - p. 81- 85.
73. Haslinger E., Korhammer S., Schubert-Zsilavecz M. Sequential analysis of oligosaccharide structures by modern NMR techniques // Liebigs Ann. Chem. 1990. -p. 713-714.
74. Heropolitanski R., Stasiak M., Zieborak K., Majer Z. Sposob wydzielanja kompleksu lanatozydow ABC z roztworow wodnych // Патент ПНР № 138021. -1987.
75. Horac P. Chromatograficko-fotometricke stanoveni jednotlivych lanatosidu v susenych listech Digitalis lanata Ehrh // Ceskoslov. Farm. 1963. - v. 12, № 8. -p. 398- 403.
76. Hornberger M., Bottigheimer U., Hillier- Kaiser A., Kreis W. Purification and characterization of the cardenolide- specific beta- glucosidase CGH II from Digitalis lanata leaves // Plant Physiol, and Biochem. 2000. - v.38, № 12. - p. 929- 936.
77. Kaminski M., Sledzinska В., Klawiter J. Studies on the optimization of parameters of preparative liquid chromatographic columns for production of cardiac glycosides // J. Chrom. 1986. - v.367. - p. 45- 58.
78. Kandzia R., Grimm R., Eckerskorn C., Lindemann P., Luckner M.i
79. Purification and characterization of lanatoside 15 O- acetylesterase from Digitalis lanata i i Planta. - 1998. - v.204 (3). - p. 383- 389,
80. Kelly K.L., Kimball B.A., Johnston J.J. Quantitation of digitoxin, digoxin and their metabolites by high- perfomance liquid chromatography using pulsed amperometric detection // J. Chrom. A. 1995. - v.711. - p. 289- 295.
81. Kohlmay K.H. Verfahren zur Extraktion von herzwirksameb Glicoziden aus Digitalis lanata, bzw. Digitalis purpurea // Патент ГДР № 106369. 1974.
82. Kreis W., Hoelz H., Sutor R., Reinhard E. Cellular organization of cardenolide biotransformation in Digitalis grandiflora Mill II Planta. 1993. - v.191. -p. 246-251.
83. Kreis W., May U. Cardenolide glycosyltransferases and glucohydrolases in leaves and cell cultures of three Digitalis (Scrophulariaceae) species // J. Plant Physiol. 1990. - v.136. - p. 247-252.
84. Krzek J., Moniszewska M. Densytometrycz na metoda oznaczania lanatosydu С w lekach recepturowych // Farm. Pol. 1984. - v.40, № 11. - p. 655- 656.
85. Langlume N. Precede de preparation de la digoxine // Патент Франции № 2552767. 1983.
86. Lepojevic Z., Pekic B. Enzymatic transformation of de- О- acetyl- lanatoside С into digoxin // Carbohydr. Res. 1995. - v.271. - p. 119- 123.
87. Lindemann P, Luckner M. Biosynthesis of pregnane derivatives in somatic embryos of Digitalis lanata II Phytochem. 1997. - т.46, № 3. - p. 507- 513.
88. Макаревич 1.Ф., Черняев Ю.А., Воробйов M.G., Евсеева Л.В., Алютренко A.I. Про ферментний пдрол1з серцевих глшозщцв у npoueci их екстракщу ух з рослинноу сировини спирто-водними розчинниками // Фарм. журн. Киев, 1987. - №4. - с.71-72.
89. Markowski W., Matysik G. Analysis of plant extracts by multiple development thin-layer chromatography // J. Chrom. 1993. - №. 646. - p. 434-438.
90. Metzner M., Ruecknagel K.P., Knudsen J., Killlertz G., Mueller-Uri F., Diettrich B. Isolation and characterizatuin of two acyl-CoA-binding proteins from proembryogenic masses of Digitalis lanata Ehrh II Planta. 2000. - v.210. - p. 683685.
91. Milica S., Velea I., Vintilescu M., Nichiforescu E. Procedeu de izolare a glicozidelor cardiotonice din Digitalis lanata // Патент Румынии № 56948. 1974.
92. Ozosz F., Nuridsany M., Ovadi S . Isolation and quantayive determination of some cardioactive glycosides from Digitalis lanata by high- performance liquid chromatography // Anal. Biochem. 1986. - v. 156. - p. 171- 175.
93. Pekic В., Slobodan M., Slavica P., Slavica B. High-performance liquid chromatography of some digitalis glycosides and their aglycones on chemically bonded phases // J. Chrom. 1983. - v.268. - p. 237- 244.
94. Pinkwart W., Diettrich В., Luckner M. Uptake of cardenolides from phloem sap into crown galls of Digitalis lanata И Phytochemistry. 1998. - v.49, № 1. - p. 7177.
95. Pitra J., Sterba J., Horak P. Prispevek к objasneni pomeru pri suseni listu naprstniku vlnateho {Digitalis lanata Ehrh.) I I Cesk. Farm. 1970. - v. 19, № 10. - p. 363-365.
96. Pitra J., Sterba J., Horak P. Navaznost pomeru v rostline, sklizenych listech a drogach naprstniku vlnateho {Digitalis lanata Ehrh.) // Cesk. Farm. 1969. - v. 18, № l.-p. 43-45.
97. Pitra J., Sterba J., Kolarova H. Zpusob zpracovani koncentratu glycosidu naprstniku // Патент ЧССР № 231299. 1987.1 lO.Pitra J., Reichelt J., Cekan Z. Spusob deleni smesi lanatosidu chromatografii na aktivnim uhli // Патент ЧССР № 142413. 1971.
98. Plum J., Daldrup T. Detection of digoxin , digitoxin, their cardioactive metabolites and derivatives by high-performance liquid chromatography and highperformance liquid chromatography-radioimmunoassay // J. Chrorn. 1986. - v.377. -p. 221-231.
99. Ponder G.W., Stewart J.T. High-perfomance thin-layer chromatographic determination of digoxin and related compounds, digoxigenin bisdigitoxoside and gitoxin, in digoxin drug substance and tablets // J.Chrom. A. 1994. - v.659, № 1. -p. 177- 183.
100. Rothe К, Diettrich, Rahfeld В, Luckner M. Uptake of phloem-specific cardenolides by Cuscuta sp. Growing on Digitalis lanata and Digitalis purpurea II Phytochem. 1999. - v.51. - p. 357- 361.
101. Schöniger R., Lindemann P., Grimm R., Eckerskorn C., Luckner M. Cardenolide 16- O- glucohydrolase from Digitalis lanata. Purification and characterization II Planta. 1998. - v.205 (3). - p. 447- 482.
102. Shoppe C.W. Chemistry of the steroids. London. : Butterworths Scientific Publications, 1958. p. 375.
103. Sledzinska B. Investigation of condition of the preparative liquid chromatography separation of cardiac glycosides present in Digitalis lanata II J. Chrom. 1984. - v.303. - p. 179- 184.
104. Sledzinska В., Klawiter J., Kaminski M., Majer Z., Klauze M. Verfahren zur Herstellung A-, В- und С- lanatosiden aus deren Gemischen // Патент ГДР № 216027.- 1984.
105. Sledzinska В., Wiwala Т., Klauze M., Majer Z. Sposob otrzymywania digoksyny z lisci naparstnicy welnistej // Патент ПНР № 140548. 1989.
106. Solich P., Harlicek R., Jokl V. Spektrofotometricke stanoveni kardioactivnich glykosidu hydroxamovou reakci II. Stanoveni lanatosidu // Cesk. Farm. 1987. - т.37, № 5. - p. 193- 197.
107. Solich P., Sedliakova V., Karlicek. Spectrophotometric determination of cardiac glicosides by flow- injection analisis // Anal. chim. acta. 1992. - v.269. - p. 199- 203.
108. Stankovic M., Dordevic S., Stankovic S., Stojanovic О. Enzimske transformacije primarnih glikozida vunastog digitalisa // Hem.Ind. 1983. - v.37, №. 10.-p. 241-247.
109. Stankovic M., Dordevic S., Stankovic S., Stojanovic O. Ispitivanje uticaja susenja lisca vunastog digitalisa (Digitalis lanata Ehrh.) na sadrzaj digitalis glikozida // Hem.Ind. 1983. - v.37, № 9. - p. 209- 218.
110. Stankovic M., Dordevic S., Stankovic S., Stojanovic O. Komparativna analiza rastvaraca primenjivanih za ekstrakciju lisca vunastog Digitalisa // Hem. Ind. -1985. v.39, № 3. - p. 57- 60.
111. Stary F, Kucera M. Obsah a vzajemny pomer lanatosidu u druhu Diditalis lanata Ehrh. ssp. Lanata v prubehu onthogenese // Cesk. Farm. 1965. - v.14, № 8. -p. 394- 397.
112. Sterba J., Pitra J. Sposob izolace lanatosidu А // Патент ЧССР № 260701. -1989.
113. Stoll A., Hoffmann A., Kreis W. Über glykosidspaltende Enzyme der Digitalisblätter. 12.Mitt. über Herzglykoside // Hoppe-Seylers Z. Physiol. Chem. -1935.-v. 235.-p. 249-264.
114. Sutor R., Hoelz H., Kreis W. Lanatoside 15-O-acetylesterase from Digitalis (Scrophulariaceae) plants and cell cultures I I J. Plant Physiol. 1993. - v. 136. - p. 289294.
115. Sutor R., Kreis W. Partial purification and characterization of the cell-wall-associated lanatoside 15-O-acetylesterase from Digitalis lanata suspension cultures // Plant Physiol. Biochem. 1996. - v.34. - p. 763-770.
116. Vanek M., Michalek D., Wojtczak S., Tucholski K., Wyzykowska B. Sposob otrzymywania czystych Ianatozydow А, В i С z ich mieszanin // Патент ПНР № 141646. 1987.
117. Wagner H., Bladt S. Plant drug analysis. Berlin, Springer , 1996.
118. Wiegrebe H., Wichtl M. Zur bestimmung von cardenoliden aus gewebeculturen von digitalis- arten // J. Chrom. 1982. - v. 234. - p. 437- 442.
119. Wiegrebe H, Wichtl M. High- performance liquid chromatographic determination of cardenolides in Digitalis lanata leaves after solid- phase extraction // J. Chrom. 1993. - v.630. - p. 402- 407.
120. Wolf L., Dancsi L., Koch L. Eljaras a friss digitalis lanata novenybol kapott nyers vizes gllikozidoldatok tisztitasara // Патент ВНР 183223. 1986.
121. Wyrzykowska В., Banek M., Wojtczak S., Tucholski K., Tobiasz W. Sposob otrzymywania digoksyny z lisci naparstnicy welnistej // Патент ПНР № 143815. -1990.
122. Wyrzykowska В., Michalek D., Tucholski K., Kurek Z. Sposob wydzielanja kompleksu Ianatozydow ABC z zanieczyszczonych roztworow wodnych // Патент ПНР № 138386.- 1988.
123. Yao M., Zhang H., Chong S., Zhu M., Morrison R.A. A rapid and sensitive LC/MS assay for quantative determination of digoxin in rat plasma // J. Pharm. Biomed. Anal. 2003. - v.32, № 6. - p. 1189- 1197.
124. Zurkowska J, Adamiec A. Oznaczanie aktywnosci digilanidazowej za pomoca naturalnych I syntetycznych substratow // Herba Pol. 1975. - v.3. - p. 277283.
125. Zurkowska J, Adamiec A. Wyodrebnianie oczyszczanie i wlasciwosci digilanidazy ze slodu jeczmiennego // Herba Pol. 1975. - v.3. - p. 270- 276.
126. Zyner M., Kurek Z., Sienkiewics- Wraga M. Sposob usuwania balastow roslinnych z metanolowych ekstraktow w procesie wyodrebniania kompleksu lanatozydow ABC z lisci naparstnicy welnistej // Патент ПНР № 78425. 1975.