Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка лекарственных форм репаративного действия на основе инозитолсодержащих фосфолипидов

л

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ И. М. СЕЧЕНОВА

На правах рукописи

УДК 615.014.2:665.37:615.26

МУСОЕВ Сафол Мирахмадович

РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ

РЕПАРАТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ ИНОЗИТОЛСОДЕРЖАЩИХ ФОСФОЛИПИДОВ

15.00.01 — технология лекарств и организация фармацевтического дела

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

москва — 1991

Работа выполнена в Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова.

Научный руководительг доктор фармацевтических наук, профессор

Я.М.БРАТИЩЕВА

Официальные оппоненты:доктор фармацевтических наук, профессор

Ведущая организация: Всесоюзный научно - исследовательский

зпшико - фармацевтический институт гол. С.Орджоникидзе.

часов на заседании Специализированного Совета Д.074.05.06 при Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова по адресу: 121019, Москва, СуворовскиЁ бульвар, д.13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

М.Т.АЛШИН

кандидат фармацевтических: наук 3.В.ЧУМАКОВА

Защита состоится " !%

н

199 ( т. ъ

Автореферат разослан " М" атЬ

1991 г.

УчеянЗ секретарь Специализированного Совета Д.074.05.06 доцент

Н.П.Садчикова

" ^тотальность. В медицинской практике все более широкое применение находят препараты биотехнологического происхождения.

Наиболее распространенной группой биологически активных соединений, получаемых биотехнологическим способом, являются фосфолипиды - главные компоненты липидного бислоя клеточных мембран и регулирующие их проницаемость. Имеются данные об у элегии фосфолипидов в ферментативном транспорте ионов через м^м-брацу, в синтезе белков и гормонов в процессе регенерации различных тканей.

В настоящее время источниками фосфолипидов для получения лекарственных препаратов являются соевые бобы, яичный желток, а также отдельные органы крупного рогатого скота, которые представляют ценность в качестве пищевого продукта и их запас ограничен. В связи с этим создание лекарственных форм фосфолипидов из сырья биотехно логического происхождения является актуальной задачей фармацевтической технологии.

Ц§5ь_исслезования. Целью настоящего исследования являлась научно - обоснованная разработка составов и технологий масляных растворов и мазей на основе биологически активных веществ, полученных ИЗ гриба Ризаг1ит за;пЬис1пим 1),

За5ачи_исследования. Для достижения поставленной цели необходимо было решать следующие'задачи:

- исследовать фракционный состав липидного комплекса гриба Риааг1ша БатЬис!:. 1: ■ •

I

- теоретически и экспериментально обосновать и разработать составы и технологии масляных растворов и мазей;

- исследовать физико-химические и реологические свойства лекарственных форм;

- исследовать кинетику освобождения действующих веществ из лгкчрсттчгтмх форм;

- :с;слодовать специфическую активность препаратов;

-■ иеслецонять стабильность лекарственных форм при хранении;

- на основании полученных результатов разработать норма-тилно - техническую документацию на получение мази.

Научная_ндйузна_исслездвания. Впервые исследован фракци-■ онный состав извлечения подученного из гриба Ризагд.и:а ог..*оис1пии Подобраны условия для ТСХ анализа фосфолипидов; разработана методика ионообменной колоночной хроматографии для получения фос-фатидилинозитола. Получено положительное решение по заявке на изобретение /№ 4841ь84, от 2Ь.03.1991 г./. Впервые теоретически и экспериментально обоснованы составы и технологии лекарственных форм липидного комплекса гриба ^изахЧиг» згидоас ¡.".и ) и фосфатидилинозитола. Впервые исследованы бентонитовые глины таджикского месторождения и показана возможность их применения в качестве мазевой основы. Исследована специфическая активность лекарственных форм и установлено их высокое ранозаживляюэдее действие при лечении полнослойных кожных ран у крыс.

Ш§£1ИН§£кая_значимость_исследования. На основании физико-химических, биофармацевтических и фармакологических исследований предложен состав мазей на основе бентонита и мясл.-тьтч растворов в подсолнечном масле, разработаны технологии л ¡тредя">-?е-ны методы их анализа.

Исследованием на лабораторных животных показана икокяя репаративная активность лекарственных форм, пояйоляячззн сократить сроки лечения полнослойных кожных ран по сравнению с гл-диционными способами лечения.

Состот^енг !»я скноее рсоульсятор .игл ¡-.опан'/й ."а'чтр^т«!'-ныи регламент : ; !:•.; г >' »/аз и г-г;)п{ -р.!-: ¡1 ьаГ'.о фаршщ-вти-ческз:: г, . ^.У-Ч; ■! (? ■

ч'рг:.1■ ■ гч^ото г.н- дрен ( учебный • • -.'С в Таджикекгм гос.мединстит/тс ккс-ря .¿;али и' н Сино, пс г ; су технологии ГЛС.

-'ном^фармацевти-

ческих_н§хк. диссертационная работа выполн>-н-> ь соответствии с проблемой 10 А'вН СССР "Фармация", плац,;1,: научно-исследовательских работ Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова Г.Р. 7о00204с).

Апробация работы. Результаты экспериментальных исследований доложены на конференции молодых ученых ВНШФармация (январь 1991 г.), на кочференции молодых ученых Ташкентского фармацевтического института (февраль 1990 г.), на Всесоюзной конференции молодых ученых: посвященной 225-летию I ММИ имени И.М.Сеченова (декабрь 1990 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 2 работы и получено положительное решение по заявке на изобретение.

П^ложония_вьщвигаемые_на_зациту. Результаты физико-хими-чс>':.-:их. биофармацевтических и фармакологических исследований по рпяраб-— ;;с лекарственных форм лилидного комплекса гриба Рчлнгдч. у '.»иг; =:■>:•. и фосфатидилинозитола.

0(у;.ом и структура.диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора лит .т'йтуг". четырех глав собственных исследований, ркродор, с г т иска ли?',/урн и приложения. Содержит страниц •.•ожинопиаюг.) т'„-:;тя. таблицы, ТЬ рисунков. Библиографический указатель метнет 172 источников литературы, из них 9Ь на иностпзтягс языках.

Во введении показана актуальность, научная новизна .• практическая значимость работы, сформулированы цели и задачу исследования.

В литературном обзоре рассматриваются вопросы касающиеся биологической активности фосфолипидов и их участия в биохимических процессах; проведен анализ литературных данных по получению фосфолипидов из природных источников, методов их фракционирования и анализа, а также по технологии лекарственных форм фосфолипидов.

Во 2 главе диссертации характеризуется объект исследования и вспомогательные вещества. Представлены используемые в работе современные методы физико-химического анализа фосфолипидов в исходной субстанции и в лекарственных формах, а также биологические методн испытания последних.

В 3, 4, 5 главах приведены результаты экспериментов по получению и анализу биологически активных соединений гриба ?исаг1им ойкЪ-дсШия л > разработке технологий и исследованию масляных растворов и мазей на их основе.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

^2териаш_и_методы_исследования. Объектом исследования служил продукт получаемый экстрагированием гриба Х'иоо Чит

\г:1ш о , культивированного в ферментере на среде

Чапека.

Использованы вспомогательные вещества, растворители, реактивы отвечающие требованиям соответствующей НТД.

Экстрагирование липидов из биомассы проводили органическими растворителями. Фосфолип/.днув фракцию получали методом ТСХ пластинках с закреплен"-'м слоем силикагеля марки КСКГ, в си-

стеме хлороформ - метанол - уксусная кислота - вода /90 : Ь : I : 0,а/. Количественное определение фосфолипидной фракции проводили по содержанию общего фосфора, после минерализации неорганическими кислотами. Разделение фосфолипидной фракции на индивидуальные вещества проводили хроматографированием в системе хлороформ - метанол - вода /65 : 25 : 4/. Количественное определение индивидуальных фосфолипидов проводили колориметрически - по содержанию общего фосфора и денситометрически. Еирнокислотный состав фосфолипидов анализировали методом ГЖХ на приборе ЛХМ Ь МД.

Значение рН масляных растворов липидного комплекса и фос-фатидилинозитола определяли потенциометрически /ПШ/. Вязкость растворов определяли по Оствальду. Измерение плотности и кислотных чисел проводили по ГФХ1. Перекисные числа определяли по ГОСТ Ё2Ь5-74.

Исследование кинетики высвобождения действующих веществ из масляных растворов проводили методом равновесного диализа.

Стабильность масляных растворов липидного комплекса гриба

У и а а гаи:;) заяЪасгпаяг I) И фосфЭТИДИЛИНОЗИТОЛа к ОКИСЛИТвЛЬ-

ной деструкции исследовали в условиях "ускоренного" и естественного хранения.

Для определения оптимальной мазевой основы пользовались методом равновесного диализа. Совместимость компонентов мазей, а также стабильность действующих веществ в процессе хранения проверяли методом ГС.Х,

Для исследования реологических показателей мазей использовали ротационный вискозиметр 'Реотест 2" /ГДР/.

Стабильность действующих веществ в кзэях исследовали в

- 6 -

условиях "ускоренного" и естественного хранения.

Ранозаживлкющую активность масляных растворов и мазей изучали на крысах - самцах линии "Вистар", весом около 200 г. Экспериментальной моделью служили полнослойные кожные раны.

Излагаемый в диссертации материал статистически обработан по ГШ.

По^чение_и_исследование_липи^ __

>ашЬисышт_ О,

Гриб Риеаг1иш иатЬис±гши го выращивали в ферментере

объемом 100 л на среде Чапека при аэрации I л/л/мин, температуре 26° и перемешивании со скоростью 210 об/мин. По окончании роста гриба биомассу и культура ль ную жидкость отделяли на цут« -фильтре. Получали биомассу с выходом 40 кг/м3 при ь0% влажности.

Биомассу смешивали с двухкратным количеством этилового спирта (масса - объем) и выдерживали при комнатной температуре в течение 5-5,5 суток. Смесь фильтровали, фильтрат упаривали в вакууме до 1/7 объема. Водно-спиртовый остаток подкисляли 2 и соляной кислотой до рН 4,0-4,4 и экстрагировали хлороформом.3 раза. Экстрагирование биомассы проводили еще 3 рала. Все экстракты после четырех экстракций биомассы этанолом объединяли и упаривали, досуха.

Культуральцую жидкость после отделения биомассы гриба подкисляли 2 н соляной кислотой до рН 4,П-4,4 и трижды экстрагировали хлороформом. Объединенные хлороформные экстракты промывали водой, упаривали и объединяли с экстрактом полученным при обработке биомассы. Полученный продукт представляет собой маслянистую вязкую жидкость светло-коричневого цвета со специфическим запахом. Выход липидов составляет 14,1%.

Фосфолипидную фракцию отделяли от нейтральных липидов методом ТСХ. Хроматографирование липидного извлечения гриба

Уизаг^т затЪисз-пит о , проводили на пластинках с

закрепленным слоем силикагеля марки КСКГ, в системе хлороформ -метанол - уксусная кислота - вода /90 : 6 : I : 0,6/. При хрома-тографировании в данной системе фосфолипиды остаются на старте. Поэтому участок силикагеля, соответствующий указанной зоне, переносили на стеклянный фильтр № 4 и элюировали смесью растворителей хлороформ - этиловый спирт /I : I/. Элюэнт удаляли упариванием в вакууме при температуре не более 45°, добавляя к остатку 2-3 раза по 2-3 мл абс бензола для обезвоживания.

Количественное определение фосфолипидной фракции в липидном извлечении гриба ¡?изаг1ит sambucinu.ni и проводили гравиметрическим способом и по содержанию общего фосфора, после ее минерализации неорганическими кислотами. Фосфолипидная фракция в ли-пидном извлечении гриба ^иаагчит затЪисшит о со-

ставляла 21-25%.

Разделение полученной фосфолипидной фракции на индивидуальные вещества проводили хроматографированием в системе хлороформ -метанол - вода /65 : 25 : 4/. Хроматограмма фосфолипидов в указанной системе представлена на рисунке I. Хроматографирование суммы фосфолипидов проводили в сравнении со стандартными образцами фирмы Лдта (США), а также были использованы стандарт фосфа-гидилинозитола изготовленный на Харьковском предприятии по производству бактериальных препаратов, фосфатидилхолин и фосфати-дилэтаноламин выделенные из лецитина Олаинского завода "Биохим-реактип".

Как видно из рисунка I в состав липидного комплекса гриба

- Ь -

1',изаг1ит ааиЬис1пит и входят фосфатидилсерин (ФС) , фос-

фатидилинозитол (ФИ), фосфатидилхолин (ФХ), фосфатидилглицерол (ФГл) и фосфатидилэтаноламин. (ФЭА).

Количественное определение индивидуальных фосфолипидов проводили следующими двумя методами : 1. Колориметрически - по содержанию общего фосфора, после минерализации фосфолипидов неорганическими кислотами. 2. Тонкослойная хроматография с последующей денситометрией хроматограмм.

Рис. I. Хроматограмма фосфолипидов в системе хлороформ-метанол - вода /65 : 25 : 4/.

1. ФС д£ 0,13

2. ФИ иг 0,19

3. ФХ 0,3

4. ФГл кг0,45

5. ФЭА 1и0,67

Результаты количественного определения индивидуальных фосфолипидов представлены в таблице I.

Таблица I

Фракционный состав фосфолипидов в % от веса липидов -

Метод _____________&а£Ни°Шый_сосгав____________

ФС Ш ФХ ФЭА ФГЛ

Колориметрический 12,В+0,59 4,1+0,6 1,5+0,16 5,2+0,55 2,0+0,2 Денситометричеекий • 10,7+1,8 4,25+0,65 0,9+0,17 3,Ь+0,53 2,5+0,2

Как показали результаты исследований, указанный штамм является активным биопродуцентом фосфатидилинозитола. Его содержание составляет 3,5-5,1% от веса липидов, что в 1,5-2 раза больше, чем в ранее исследованных штаммах.

Жирные кислоты фосфолипидов анализировали в виде их метиловых эфиров, которые получали при обработке образцоз раствором диазометана, после их щелочного гидролиза. Для сравнения использовали стандартные образцы - жирные кислоты фирмы зхцта (США). Хроматограмма жирных кислот фосфолипидов представлена на рис. 2.

Как видно из рисунка 2 в составе фосфолипидов идентифицированы следующие жирные кислоты: миристиновая.пзгтьмлтолеиовая,стеариновая, олеиновая, линолевая, арахидоновая и бегеновая.

Количественное определение жирных кислот проводили по площади пиков на хроматограмме. Результаты количественного определения жирных кислот представлены в таблице 2.

Распределение жирных кислот между положениями I и 2 глицеринового остатка, определяли после их фериомгл-л^л- •• гидролиза

А

20:4

" 5 § ^ 12 15 18~ Ш

Рис. 2. Хроматограмма жирных кислот фосфолипидов на приборе ЛХМ Ь МД

Таблица 2

Жирнокислотный состав фосфолипидов.

Название жирных кислот Время удерживания Содержание в % от' веса липидов

Миристиновая /14 : 0/ 0,9 0,2Ь-0,3

Пальмитоленовая /16 : I/ 6,5 1,5-1,ь

Стеариновая /IЬ : 0/ б,ь 0,65-0,Ь

Олеиновая /1Ь : I/ 7,3 4,4-5,3

Линолевая /16 : 3/ II, а 0,5-0,6

Арахидоновая /20 : 4/ 19 1,6-2,2

Бегеновая /22 : 0/ 21,5 0,06-0,08

фосфолипазой А^ змеиного яда, которая избирательно гидролизует ацилэфирцую связь в фосфоглицеридах в положении 2. Результаты

показывают, что насыщенные жирные кислоты расположены преимущественно в первом положении, а ненасыщенные во втором.

С целью исследования самостоятельной роли фосфатидилинозито-ла в биологическом действии липидного комплекса гриба Ризалит

затЬис1пш1 V нами разработана методика ионообменной ко-

лоночной хроматографии для получения фосфатидилинозитола.

Липиды наносили на колонку с катионитом КО - I и элюирова-ли последовательно хлороформом, этиловым спиртом и раствором аммиака в этиловом спирте.

Спиртовые фракции после концентрирования в вакууме пропускали через колонку заполненную анионитом АО - I. Колонку элюиро-вали последовательно хлороформом, этиловым спиртом и 0,2 н раствором муравьиной кислоты. Анализ фракций проводили методом ТСХ, в сравнении со стандартными образцами.

Фракции, содержащие хроматографи'тески чистый фосфатидилино-

- II -

зитол, использовали для разработки его лекарственных форм.

Разработка технологии масляных растворов липидного комплекса

гриба Рияагтпт ¡^гфп^тт п_____О?_биофармауевтическое

исследование.

Ранее в лаборатории простагландинов ША имени И.М.Сеченова были разработаны составы и технологии растворов липидного комплекса гриба ..'иаагэлип затЬис1гш.га штамм Ь42 в оливковом, косточковом и подсолнечном маслах. Учитывая что оливковое масло в нашей стране не производится, а косточковое производится ограниченно, при выборе растворителя мы остановились на подсолнечном масле.

Составы масляных растворов:

1. Раствор липидного комплекса (раствор состава I): Липиды 2 г

Масло подсолнечное 9Ь г

2. Раствор фосфатидилинозитола (раствор состава 2): Фосфатидилинозитол 0,1 г

Масло подсолнечное 99,9 г После приготовления растворы фильтровали и помещали во флаконы из стекломассы темного цвета и хранили сериями при температурах 4 и 20°.

Физико-химический анализ растворов проводили по еле,дующим показателям: рН, плотность, вязкость, кислотное число и перекис-ное число.

Для раствора состава I получены следующие физико-химические показатели: значение рН 7,0-7,3, плотность 0,ь-0,95, вязкость 0,05-0,06, кислотное число 45-55, перикисное число 0,003-0,006. Для раствора состава 2 значение рН составляет 7,1-7,3, плотность

0,ь5-0,9, вязкость 0,045-0,55, кислотное число 39-51,7, пере-кисное число 0,003-0,006.

Исследования по кинетике высвобождения действующих веществ из растворов проводили по Крувчинскому через целлофановую мембрану толщиной 25 мкм в условиях термостатирования при 34+0,5°. Средой высвобождения служил 96% этиловый спирт. Количество продиф-фундированных веществ определяли взятием проб диализата через 15, 30, 60, 120, 160 мин, о, 12, 24 ч.

Предварительно определяли уменьшение количества спирта в результате улетучивания при температуре 34° и через выше указанные промежутки времени восполняли объем диализата новой порцией этилового спирта.

Результаты показывают, что максимум высвобождения для раствора состава I составляет оЗ,1% и достигается через 12 часов. Для раствора состава 2 максимум высвобождения составляет Ь6,2% и достигается через Ь часов.

Исследование специфической активности растворов проводили на 50 крысах - самцах чинии "Вистар" весом около 200 г. Экспериментальной моделью служили полнослойние кожные раны размером о

400 мм . Животные были разделены на 5 групп. Первую и вторую группу животных лечили исследуемыми растворами. В третьей контрольной группе на поверхность раны наносили 0,5 г подсолнечного масла. В четвертой контрольной группе для сравнения использовали облепиховое масло. О пятой контрольной группе лечение не проводилось. Заживление ран оценивали планиометрическим методом.

Диаграмма динамики заживления ран представлена на рисунке 3.

Полное заживление ран в первой группе происходит за 16, Ь+ 0,32 сут, л;, .-¡торой группе за 16,3+0,63 сут, в третьей контроль-

ной группе за 21,65+1,2 сут, в четвертой группе за 21,0+0,32 сут. В пятой контрольной группе время окончательного заживления ран составляло 23,3+0,4 сут. Индекс ускорения заживления ран для раствора состава I составляет 30,04, а для раствора состава 2 -27,Ь9.

(в % к исходному)

Предварительное исследование стабильности масляных растворов проводили методом "ускоренного" хранения, термостатированием при 40°. В качестве контроля использовали подсолнечное масло при тер-мостатировании в тех же условиях. Отбор проб проводили через каждый час, определяя в них содержание действующих веществ и пере-кисное число. Полное разрушение фосфатидилинозитола в растворе состава 2 происходит быстрее - за 4,5-5 часов, а полное разруше-

- 14 -

ние фосфолипидов в растворе состава 1 - 5,5 - 6 часов.

Графически определяли д*!^ ^ - время, за которое значение перекисного числа достигает 0,1. Л I, д ^ для раствора состава I составляет 29 часов, для раствора состава 2 - часов, а для подсолнечного масла - 16 часов.

Исследования стабильности масляных растворов в условиях естественного хранения проводили во флаконах из стекломассы темного цвета объемом 100 мл, с завинчивающимися крышками при температурах 4 и 20°. Качество исследуемых растворов в процессе хранения оценивали по содержанию действующих веществ, значение рН и изменению перекисного числа.

Результаты показывают, что исследуемые растворы стабильны при 4° в течение I года.

Р§2Е§ботка_мазей_с_липидшм_кошл^ ____

_затЬш^1пиш___в__и фосфатидилинозитолом и их биофармацев-

тическое_иссле£ОЕаще

С целью выбора оптимальной мазевой основы для исследуемых субстанций нами приготовлены образцы мазей на 9 основах гидрофильного, гидрофобного и дифильного характера. Составы исследуемых основ представлены в таблице 3. Содержание фосфатидили-нозитола I мг в I г мази.

Выбор оптимальной мазевой основы, обеспечивающей максимальное высвобождение действующих веществ из мазей, проводили также как и для растворов методом равновесного диализа со средой высвобождения 96% этиловым спиртом. Результаты показывают, что наиболее интенсивное и полное высвобождение действующих веществ происходит из мазей на основе № 4 - смесь бентонита, глицерина и воды.

- 15 -Составы основ для мазей

Таблица 3

Мазевая основа

Инградиенты (в г)-----------------------------------

1 234 567Ь9

Вазелин 100 60 Зь

Ланолин 40 5

Бентонит 20

ПЭ0 400 Ь0

ПЭ0 1500 20

М" карбоксиметил-

целлюлоза 5

Метилцеллюлоза 6

Пентол 2

Аэросил ь

Подсолнечное масло 92

Глицерин 20 6 20 5

Вода дистиллированная 60 60 83 74 75

Эмульгатор № I 15

Максимум высвобождения для мазей с липвдным комплексом гриба РизаГ2аш затЬаогпит о и фосфатидилинозитолом со-

ставляет 74 и 33% соответственно и достигается через 3 часа.

Кроме того, экспериментально установлено, что основа № 4 оказывает стабилизирующее действие на исследуемые субстанции.

Исходя из полученных результатов, дальнейшему исследованию подвергались образцы мазей на бентонитовой основе. Разработанная технология мазей представлена на схеме:

|Водно-глицеринова я смесь]

Раствор липидов

(фосфатидилинози-Т9Да)_

-НМазевая основа"!

{готовый продукт)

Далее мазь с липидным комплексом гриба Риааг1им аатЬислтдт э на бентонитовой основе обозначали как мазь состава I, а мазь с фосфатидилинозитолом - мазь состава П.

Дальнейшие наши исследования были направлены на изучение возможности применения бентонитовых глин таджикского месторождения в качестве мазевой основы34. С этой целью нами было проведено их сравнительное изучение и установлено, что натриевая форма бентонитовых глин таджикского месторождения соответствует требованиям ФС 42-1269-79, утвержденной на бентонитовые глины грузинского месторождения.

Результаты физико-химического анализа исследуемых минералов представлены в таблице 4.

По разработанной технологии были приготовлены образцы мазей С ЛИПВДНЫМ комплексом гриба Риваггит аатЬисз.пит Б и фосфатидилинозитолом на основе бентонитовых глин таджикского месторождения (мази составов Ш и 1У).

* Выполнены совместно с канд. фарм. тук Д.Р.Халифаевым, которому автор приносит свою глубокую благодарность.

Таблица 4

Результаты физико-химического анализа бентонитовых глин таджикского месторождения

№ п/п Исследуемый параметр Метод Требуемый интервал Результаты анализов исследуемого объекта

I Подлинность Прокаливание порошка, смоченного раствором нитрата кобальта (качественная реакция на алюминий) , остаток синего цвета положительная реакция

2 рн Потенциометрический.ГФХ 7,2-- 6,5 7,2 - Ь,0

3 Испытание на карбонаты Качественная реакция на карбонаты, ГФХ, с.74Ь отрицательная реакция Отрицательная реакция

4 Содержание хлоридов .ГФ X, с. 74Ь не более 0,4% 0,34%

5 Содержание мышьяка Г^ X, с. 74ь отрицательная реакция в I г порошка отрицательная реакция

6 Содержание железа ГФ X, с. 748 не более 1,5% 1,2%

7 Содержание кальция ГФ X, с. 74о не более 3,5% 3,0%

Ь Потеря массы при высушивании ГФ X, о. 991 не более 13,5% 9,6%

Так как при лечении ран важную роль играет способность маэе вой основы впитывать раневое отделяемое и очищать рацу, была изучена осмотическая активность мазевых основ (контроль - 10% раствор натрия хлорида). Установлено, что осмотическая активность бентонитовых основ составляет 136-140%.

Определены структурно-механические свойства разрабатываемых мазей на приборе "Реотест-2". Определяли эффективну10 вязкость и тиксотропность мазей. Как показали результаты исследований, на реограммах текучести мазей образуются петли гистерезиса, что указывает на тиксотропность исследуемых систем.

Определение кинетики высвобождения действующих веществ из мазей проводили методом диффузии в агар, в сравнении с образцом мази с липидным комплексом на вазелин - ланолиновой основе.

Результаты исследования показывают, что диаметр зоны диффузии через 72 часа для мази состава I составляет 33,4+1,5 мм, для мази состава П - 22,7+0,6 мм, для мазей составов Ш и 1У - 32,3+ 0,5 и 21,6+1,5 мм, соответственно. Для образца мази на вазелин -ланолиновой основе диаметр зоны диффузии через 72 часа составляет только 16,0+2 мм. Полученные результаты показывают обоснованность использования бентонитовой основы для исследуемых субстанц!

Изучение ранозаживляющей активности мазей проводили на 50

крысах-самцах линии "Висгар" весом около 200 г на модели полно-

о

слойных кожных ран размером 400 мм . Животные были разделены на 5 групп. Первую опытцуго группу лечили мазью состава I, а вторую группу - составом П. В третьей контрольной группе на поверхность раны наносили 0,5 г мазевой основы. В четвертой контрольной группе для сравнения использовали облепиховое масло. В пятой контроль ной группе лечение не проводилось.

Диаграмма динамики заживления ран представлена на рисунке 4.

Рис. 4. Диаграмма динамики заживления ран (в % к исходному)

Полное заживление ран в первой группе происходило за 19+0,33 сут, во второй группе за 19,33+0,55 сут, в третьей группе за 22,0 сут, в четвертой группе за 21,0+0,32 сут, в 5 группе за 23,0+0,4 сут. Индекс ускорения заживления ран для первой группы составляет 18,45, а для второй группы - 17,16.

Исследование стабильности мазей проводили в условиях "ускоренного" и естественного хранения. Критерием оценки качества мазей в условиях "ускоренного" хранения служило изменение концентрации действующих веществ. В условиях естественного хранения исследуемые мази оценивались по изменению концентрации действующих веществ, а также по рК водных суспензий и изменению эффективной вязкости.

При "ускоренном" хранении - термостатировании при 40° и свободном доступе воздуха - полное разрушение действующих ве-

ществ в образцах мазей составов I и Ш происходит за Ь-9 часов, а в образцах мазей составов Г1 и 1-У за 6-7 часов.

Результаты исследований стабильности мазей составов № I - 1У при естественном хранении показывают, что исследуемые лекарственные формы в течение 24 месяцев при 4° сохраняют свои необходимые качества.

ВЫВОДЫ:

1. Впервые исследован фракционный состав липидного комплекса гриба Ризаг1ат аатЬас1пит • и , выращенного в ферментере на среде Чапека. Установлено, что исследуемый штамм является активным биопродуцентом фосфатидилинозитола, содержание которого составляет 3,5-5,1% от веса липидов.

2. Разработана методика ионообменной колоночной хроматографии для получения фосфатидилинозитола, с целью приготовления и исследования его лекарственных форм.

3. Разработаны технологии растворов липидного комплекса гриба 1''изаг1и:а запЪисЬиш о и фосфатидилинозитола в подсолнечном масле и изучены их физико-химические характеристики. Исследована кинетика высвобождения действующих веществ из лекарственных форм. Максимум высвобождения для раствора липидного комплекса составляет Ь3,1% и достигается через 12 часов, а для раствора фосфатидилинозитола соответственно 86,2% и через Ь часов. Установлено высокое репарагивное действие масляных растворов, приводящее к сокращению сроков заживления ран с индексом ускорения 2о-30%.

4. Проведено сравнительное исследование мазей с липидным комплексом гриба ''U3ar.iu.rn затЬисАпшп Л „ фосфатидилинозитолом по скорости высвобождения биологически активной субстанции. Установлено, что оптимальной мазевой основой для исследуемых

- 2.1 -

субстанций является смесь бентонита, глицерина и воды. Максимум высвобождения для мазей на указанной основе составляет 74 и ЪЪ% соответственно и достигается через 3 часа. Показано, что мазевая основа обладает стабилизирующим действием на биологически активные компоненты мазей. Впёрвые охарактеризованы и исследованы бентонитовые глины таджикского месторождения и разработаны составы и технологии мазей с фосфолипидами на их основе.

4. Исследованы структурно-механические свойства мазей и выявлено их тиксогропное свойство.

5. Проведено сравнительное исследование кинетики высвобождения фосфолипидов и фосфатидилинозитола из мазей на бентонитовой и вазелин-ланолиновой основах методом диффузии в агар. Показано, что диаметр зоны диффузии за 72 часа из мази на бентонитовой основе в 2 раза больше чем из мази на вазелин - ланолиновой основе. Установлена высокая репаративная активность мазей на бентонитовой основе, приводящая к сокращению сроков заживления с индексом ускорения 17-18%.

7. Проведены исследования по стабильности лекарственных форм в условиях "ускоренного" и естественного хранения. Рекомендуемые сроки хранения при температуре 4°, для масляных растворов I год, а для мазей 2 года.

Ь. На основании проведенных физико-химических и биофармацевтических исследований и результатов изучения специфической активности разработан лабораторный технологический регламент на получение мази с липидным комплексом гриба УиаагЗллп затЬиоапит я на основе бентонита. Лабораторный регламент апробирован на базе фармацевтической фабрики г.Душанбе.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Л.М.Брагинцева, Т.К.Устынюк, Р.Н.Зеленова, С.М.Мусоев "Способ получения фосфатидилинозитола" - Положительное решение по заявке № 4641ьЬ4 от 26.03Л991 г.

2. Ш.Х.Абдуллаев, С.М.Мусоев - Биотехнология получения проста-гландинов и инозитольных фосфолипидов с помощью культур дей-теромицетов //Тезисы докладов Ш научной конференции молодых ученых Ташкентского фармацевтического института - Ташкент, 1990 г. - С. 9.

3. С.М.Мусоев - Разработка технологии мази с комплексным препаратом простагландинов // Тезисы докладов Всесоюзной научной конференции молодых ученых, посвященной 225 летию I ММИ

им. И.М.Сеченова. - Москва, 1990 г. - С. 53.