Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Новые подходы к определению гормональной чувствительности аденокарциномы матки

од

1 8 МАР

На правах рукописи

СЛФАРОВА Сепинда Алекпер кызы

НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГОРМОНАЛЬНОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ АДЕНОКАРЦИНОМЫ МАТКИ

14.00.14 - ОНКОЛОГИЯ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва,1996

■ Работа выполнена в Онкологическом научном центре им. Н.Н. Блохина Российской Академии медицинских наук и на кафедре онкологии Азербайджанского Медицинского Университета им.Н.Нариманова

Научные руководители:

заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук, профессор А.Т.Амирасланов. доктор биологических наук М.А.Красильников Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Н.Е.Кушлинский доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, профессор Е.М.Вихляева

Ведущее учреждение: Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А.Герцена МЗ МП РФ

Защита состоится года в----часов

на заседании диссертационного совета К.001.17.01 в Онкологическом научном центре им. Н.Н.Блохина РАМН (115478, г. Москва. Каширское .шоссе, 24)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Онкологического научного центра им.Н.Н.Блохина РАМН

Автореферат разослан " " -^—=^1996 г.

Ученый секретарь специализированного Совета

доктор медицинских наук, профессор В.С.ТУРУСОВ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Диагностика, лечение и профилактика онкологических заболеваний по-прежнему является центральной проблемой современной медицины. Среди связанных с данной проблемой вопросов одно из ведущих мест занимает комплексная диагностика и лечение опухолевого процесса у больных раком тела матки.

Рак тела матки объединяет группу различных морфологических вариантов опухолей, встречающихся у женщин среднего и пожилого возраста и часто характеризуется быстрым прогрессирующим течением (В.П.Козаченко. 1993). Отсутствие выраженной клиники затрудняет раннюю диагностику этого заболевания, а эффективность терапии зависит от своевременной диагностики и адекватного хирургического гормонального лечения (0.Л.Смахтина.1989).

Широко используемая гормональная терапия для лечения больных с опухолями матки в настоящее время является одним из главных методов лечения этого заболевания. При назначении гормональной терапии врачи сталкиваются с проблемой установления степени гормональной чувствительности опухоли.Практически единственным показателем гормональной чувствительности является на сегодняшний день содержание внутриклеточных рецепторов гор-МО.НОВ, как правило, эстрогенов и прогестерона.

Однако, рецепторы гормонов отражают лишь потенциальную способность клеток реагировать на гормон, в то время как конечный ответ клеток зависит также и от эффективности пострецептор-ных стадий действия стероидов. В связи с этим чрезвычайно актуальным представляется изучение биохимических путей реализации рост-ингибирующего действия прогестерона в клетках-мишенях и

разработке на основе этих исследований новых методов определения чувствительности опухолей к гормонам. Речь идет о взаимодействии гормонов с клеточной мембраной и о влиянии гормонов на скорость обмена внутриклеточных фосфолипидов - одного из ключевых этапов в размножении опухолевых клеток.

Вместе с этим во многих исследованиях продемонстрирована способность опухолей также продуцировать повышенное количество простагландинов - соединений, синтез которых зависит от скорости обмена фосфолипидов. Установлено, что повышенная продукция определенных серий простагландинов может быть маркером метастатического потенциала опухоли.

Изучение синтеза простагландинов серии Е в опухолях с различной чувствительностью к прогестерону и анализ зависимости ■ между синтезом простагландинов и скоростью обмена отдельных фосфолипидов позволит определить роль этих параметров в прогнозе заболевания и оценке метастатического потенциала опухоли.

Цель и задачи исследования

Цель настоящего исследования - изучение гормональной чувствительности аденокарциномы матки в зависимости от стадии заболевания. степени дифференцировки и инвазии опухоли.

Для решения этой цели были поставлены следующие задачи.

1. Провести сравнительное исследование действия прогестерона на синтез внутриклеточных фосфолипидов в опухолях, различающихся по глубине инвазии и степени дифференцировки.

2. Исследовать изменения синтеза различных фракций фосфолипидов (фосфатидилинозитола и фосфатидилхолина) в опухолях матки в зависимости от степени дифференцировки.' глубины инва-

зии и стадии заболевания.

3. Изучить содержание простагландинов серии Е в аденокар-циномах матки с различной чувствительностью к прогестерону и исследовать зависимость между уровнем простагландинов и скоростью обмена отдельных фосфолипидов.

4. На основании проведенных исследований разработать дополнительный метод определения гормональной чувствительности аденокарциномы матки, различающихся по степени дифференцировки. а также по стадиям заболевания.

Научная новизна

Впервые изучено действие прогестерона на обмен фосфолипидов в аденокарциномах матки в зависимости от стадии заболевания, степени дифференцировки и инвазии опухоли.

Установлена возможность использования метода, основанного на анализе скорости обмена фосфолипидов, для определения степени гормональной зависимости опухолей матки.

Впервые выявлена зависимость между некоторыми дифференциро-вочными функциями клеток ( в частности, синтезом простагландинов и скоростью обмена отдельных фракций внутриклеточных фосфолипидов), а также установлена возможность использования последнего показателя ( синтеза фосфолипидов) в качестве одного из факторов прогноза заболевания.

Показано, что изменение синтеза отдельных фракций фосфолипидов (фосфатидилинозитола и фосфатидилхолина) характеризует злокачественный потенциал опухоли и. соответственно, тяжесть заболевания.

Научно-практическая значимость

работы

Проведенное исследование позволяет повысить точность и надежность предсказания гормональной чувствительности рака тела матки и тем самым повысить эффективность эндокринной терапии этих больных.

В результате работы предложен дополнительный метод определения гормональной чувствительности аденокарциномы матки, прогноза заболевания и эффективности гормональной терапии, основывающийся на определении скорости обмена фосфолипидов в опухолевых тканях с различной степенью дифференцировки и глубиной инвазии.

Предложено проведение анализа изменений синтеза различных фракций фосфолипидов (фосфатидилинозитола и фосфатидилхолина) для диагностики степени злокачественности опухолей.

Апробация диссертации

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на юбилейной конференции ученых медиков Азербайджана, посвященной 100-летию М.А.Топчибашева и на совместной конференции кафедры биохимии, онкологии и ЦНИЛ Азмедуниверситета им. Н.Нариманова, а также на совместной научной конференции лабораторий биохимии опухолей, клинической биохимии, отделений общей онкологии, гинекологии. опухолей молочных желез ОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН.

- 5 - .

Публикация результатов диссертации

Всего по теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста. состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методик исследования, -трех глав, посвященных изложения результатов и их обсуждению, заключения, выводов и списка литературы. ■

Диссертация содержит 4 рисунка и 23 таблицы. Список литературы включает 173 источника, в том числе 94 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под нашим наблюдением находилось 56 больных аденокарцино-мой матки в возрасте от 32 до 7б лет, средний возраст группы Ы лет. лечившихся в ОНИ РАМН. У-всех выполнены с целью удаления опухоли хирургические операции в объеме экстирпации и расширенной экстирпации матки. Все удаленные во время операции опухоли подвергались гистологическому анализу для установления типа опухоли.

Количество больных на 1 стадии заболевания составило 38 человек (67,9%); на II стадии заболевания - 12 человек (21.4?); на III стадии заболевания - 6-человек ( 10,7%).

Количество больных с высокой степенью дифференцировки опу-

холи составило 25 человек (44,6%), с умеренной -14 (25,0%), с низкой - 17 (30.4%). '

Опухоли с глубиной инвазии до 0,5 см были выявлены у 35 больных, более 0,5 см - у 24 больных. 43 (76,8%) обследуемых женщин находились 'в постменопаузальном периоде. Из них: 14 (25,0%) с длительностью менопаузы до 5 лет; 11' ( 19,6%) _ находились в предменопаузе, 2(3,6%) - менструировали.

С целью проведения исследования из злокачественной опухоли; удаленной ' во время операции, ' иссекался участок весом 1000-1500 мг, после чего помещенные на лед образцы доставлялись в клинико-биохимичёскую лабораторию, где они разделялись на 3 части,' в одной из которых исследовался цикл обращения фосфоли-пидов. ' другие хранились при температуре -70° С до определения рецепторов (прогестерона) и простагландинов.

Клетки опухолей ад'енокарциномы матки получали из опухолевых тканей по методу Ь. 0иез1а<3 и К. Ту1аИ1988). С этой целью проводилось измельчение 1 г ткани с последующим разведением в 5 мл среды Игла в присутствии смеси ферментов (0,5 мл 1% коллаге-назы + 0.1% гиалуронидазы +0,02% ДНКазы). Затем инкубировали при комнатной температуре 18 часов. Гомогенат фильтровали и центрифугировали через слой фикол-верографина (Р=1,077) при 400 xg 30 минут. Затем сконцентрированные в интерфазе клетки отбирали. отмывали и ресуспендировали в среде Игла.

Для определения включения 32Р в фосфолипиды был использован модифицированный метод анализа фосфолипидов. предложенный М.А.Красильниковым в 1992 году и основанный на одновременном проведении экстракции и тонкослойной хроматографии (ТСХ) липи-дов из целых клеток, предварительно иммобилизованных на силика-геле. Определение рецепторов производилось в цитозолях исследу-

-.7. - . j

емых опухолей методом, предложенным.Е. ORTC Breast Cancer Cooperative group,1973., с небольшими модификациями. Цитозолем считали, суперййтант, полученный на .ультрацентрифуге К-32 при 105000 xg. Цитозоли инкубировали 18-20 часов при 0°-4°С с (ЗН)-эстра-диолом (для определения рецепторов прогестерона).,

Для разделения (ЗН) гормон-рецепторных комплексов и свободного (ЗН)-стероида использовали обработку цитозолей углем, покрытым дострпном. Радиоактивность образцов определяли п.сцин-тилляционном счетчике Mark III.

Специфическое,связывание гормонов с цитоплазматическими белками рецепторов рассчитывали по.разнице,между общим и неспецифическим связыванием в, присутствии 100-200-кратного избытка соответствующих немеченных стероидов и,выражали в фентомолях связанного с рецепторами стероида на 1. мг общего1 цитозольного белка в пробе (фмоль/мг).. . ■ - . 1. .

Белок определяли методом O.H.Lowry' (1956). Оценка рецепторного статуса .проводилась совместно.с .сотрудниками лаборатории клинической биохимии. . . .

Простагландины (ПГ) серии Е определяли с помощью наборов, реактивов радиоиммунологическим методом. Высокая чувствительность метода позволяет определить простагландины в малых коли-, чествах. ' (

Перед определением ПГ серии Е производилась предварительная экстракция в кислой среде (pH 3.5-4,0) по методу, разработанному R. А. Karmali, и соавторами (1983).. Экстракт ПГ хранили в небольшом объеме этилацетата при температуре 20°.С до определения в течение 1,5-2 месяцев. Проведение анализа основывалось на количественном учете связывания меченного тритием и немеченного простагландина со специфическими антителами к определенной

фракции простагландинов.

После проведения пробы и центрифугирования реакционной среды надосадочная жидкость, содержащая меченный тритием прос-тагландин, отбиралась, а затем проводилось ее радиометрическое

исследование.

I

Так как количество меченого антигена и специфического антитела к пробе всегда известно, то уровень радиоактивности в надосадочной жидкости будет зависеть от концентрации эндогенного ( или стандартного) простагландина.

Предварительно выполняется построение калибровочной (стандартной) кривой, для чего в различных разведениях исследовались стандартные (содержащие известное количество простагландинов) образцы.

Используя стандартную кривую, определяли содержание ПГЕ в испытуемых пробах. Концентрация ПГЕ определялась после предварительного выпаривания в токе азота этилацетата с использованием стандартных коммерческих наборов реактивов, выпускаемых фирмой " Klinical Assus" и выражали в пикограммах на 1,0 грамм испытуемого образца ткани.

Все полученные данные исследования обрабатывались общепринятыми статистическими методами (М.А.Лакин.1990) на персональных компьютерах IBM-PC-XT с использованием компьютерной программы Paradox.

- 9 -

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние прогестерона на обмен фосфолипидов в клетках аденокарциномы матки

Для определения скорости обмена внутриклеточных фосфолипидов из аденокарцином матки, удаленных во время хирургических операций, выделяли опухолевые клетки, которые затем инкубировали в присутствии 32Р-ортофосфата ( см. раздел " Материалы и методы"). За 100 % принимали значение включения в фисфолипиди згР, зарегистрированное в клетках культуры опухоли до воздействия прогестерона или ЭФР. Опухоли, в которых прогестерон вызывал снижение включения 32Р в фосфолипиды менее, чем на 25% (75% от контрольного уровня и ниже) считались высокочувствительными к прогестерону. Опухоли, в которых изменение синтеза фосфолипидов после действия прогестерона не опускалось ниже 75% от контрольного уровня, были отнесены к слабочувствительным к прогестерону. Эти исследования были проведены с учетом степени дифференцировки, глубины инвазии опухоли и стадии заболевания.

Было обнаружено, что в высокочувствительных к прогестерону опухолях наблюдаются достоверные различия в чувствительности к прогестерону в зависимости от глубины инвазии опухоли (рис.1). Для опухолей с глубиной инвазии до 0,5 см среднее снижение включения згР составило 47,1%, при глубине инвазии более 0,5 см - 63.3%. (16=3.41: р< 0.01). В опухолях, слабочувствительных к прогестерону, подобной' зависимости обнаружено не было. Эти показатели составили соответственно 95,4% и 93,5% (1(1=0, 07). что практически означает отсутствие каких-либо различий.

32—Р,

Рисунок 1. Влияние прогестерона на включение 32Р в фосфолипиды опухолей матки, различающихся по степени дифференцировки. глубине инвазии и стадиям заболевания.

H. У. В - опухоли матки, соответственно, низко,-, умеренно-

и высокодифференцированные.

I, II. III - стадии заболевания.

>0.5 и >0,5 - глубина инвазии опухоли (в см ).

При анализе гормональной чувствительности опухолей матки.

удаленных на разных стадиях заболевания, были выявлены следующие закономерности. В группе опухолей, высокочувствительных к прогестерону, обнаружены близкие к статистически значимым различия между показателями включения згР: в I - 51,4% и Ш-66,8% (td=1.15). а также высокодостоверные различия между средними показателями во II стадии П-57.8% и Ш-66.8% (td=2,5; р<0.01). При этом различий в интенсивности обмена фосфолипидов в опухолях, слабочувствительных к прогестерону практически не наблюдалось. Эти показатели колебались в пределах от 89,0% от уровня контроля во II группе до 100,5% уровня включения 32Р в группе III. Не было выявлено и статистически достоверной разницы в степени чувствительности к прогестерону у больных в зависимости от степени дифференцировки опухоли.

Анализируя вышеизложенные результаты, можно заключить, что в группе опухолей, слабочувствительных к прогестерону, эффективность действия прогеЬтерона на обмен фосфолипидов не зависит от стадии заболевания и глубины инвазии опухоли.

Таким образом, как становится ясно из вышеизложенного материала, в целом ряде случаев обработка опухолевых клеток прогестероном позволяет выявить изменения в интенсивности обмена фосфолипидов после действия гормона.

Это позволяет рекомендовать проведение данного анализа для определения гормональной чувствительности, а также в некоторых случаях для прогнозирования исхода заболевания. При этом определение интенсивности обмена фосфолипидов не является показателем. исключающим диагностическую ценность определения рецепторов прогестерона, а относится к числу методов, позволяющих дополнительно оценить эффективность рост-ингибирующего действия гормона.

Сравнительный анализ содержания рецепторов прогестерона и эффективности действия прогестерона на обмен фосфолипидов в опухолях матки

При анализе содержания рецепторов прогестерона (РП) в опу-•холях матки оказалось, что большая часть исследованных опухолей (около 90%) характеризуется высокой концентрацией РП (больше 50 фмолей/мг белка).

Данные, представляющие количественное содержание рецепторов прогестерона в опухолях с1различной степенью дифференциров-ки, глубиной инвазии и на разных стадиях заболевания, представлены на рис.2. Как видно, наиболее высокие значения рецепторов прогестерона были выявлены у больных с высокодифференцированны-ми опухолями (347+29 фмолей/мг белка).

Статистически достоверные различия в содержании рецепторов прогестерона были обнаружены между опухолями I и III стадии заболевания (td=2,82. р<0,01). опухолями низкой и умеренной (td=2.19.р<0.05). низкой и высокой (td=3.65.р<0.01) степенью дифференцировки Различия менее значительные были выявлены между опухолями II и III стадии заболевания (td=l,68,р>0,5) и опухолями с различной глубиной инвазии (td=l,81,р>065). Практически никакой разницы в содержании рецепторов прогестерона а опухолях, находящихся в I и II стадии заболевания выявлено не было. Таким образом можно заключить, что ткани аденокарциномы матки содержат различное количество рецепторов прогестерона, изменяющееся в зависимости от стадии заболевания, степени дифференцировки и глубины инвазии опухоли. При этом общая тенденция изменения гормональной чувствительности опухолей в зависимости от

fmol/mg , РП

Рисунок 2. Содержание рецепторов прогестерона в опухолях матки с различной глубиной инвазии. степенью дифференцировки и на разных стадиях заболевания.

H. У, В - опухоли матки, соответственно, низко-, умеренно-

и высокодифференцированные.

I, II, III - стадии заболевания.

>0,5 и >0.5 - глубина инвазии опухоли (в см ).

этих показателей в целом совпадает с выявленными ранее закономерностями изменения эффективности действия прогестерона на обмен фосфолипидов:. чувствительность к прогестерону и содержание рецепторов прогестерона закономерно снижается с увеличением инвазии опухоли, на поздних стадиях заболевания, а также в низко-дифференцированных опухолях.

Вместе с тем. внутри каждой из групп больных, разделенных в соответствии с этими показателями (глубина инвазии, стадия заболевания, степень дифференцировки) нам практически не удалось обнаружить прямой корреляции между эффективностью действия прогестерона на обмен фосфолипидов и содержанием рецепторов прогестерона.

Данные сравнительного анализа содержания рецепторов прогестерона и чувствительности опухолей к ингибирующему действию прогестерона представлены в таблице 1.

Как видно из табл.1. статистически значимые различия в содержании рецепторов прогестерона в зависимости от эффективности действия прогестерона на обмен фосфолипидов в опухолях были выявлены только у больных, находящихся на первой стадии заболевания ( 16=2.68. р<0.01): на всех остальных стадиях, а также в группах больных, разделенных по глубине инвазии и степени дифференцировки опухолей, статистически значимых различий обнаружено не было.

Таким образом, подводя итог сравнительному анализу количественного содержания рецепторов прогестерона и эффективности действия прогестерона на обмен фосфолипидов в опухолях матки, можно сделать вывод об отсутствии прямой корреляции между этими показателями. Во многом это может быть связано с тем, что реализация гормональных эффектов в опухолевой ткани определяется

Таблица 1

Сравнительная характеристика содержания рецепторов прогестерона в опухолях, различающихся по чувствительности к прогестерону

Стадии заболеваний Число больных Средние уровни рецепторов (фмолей/'мг белка) td Р

I 18 120, 6± 10.5

I* 20 248±46,4 2.68 р<0,01

11 7 132, 6±24. 85

II* 5 384+147 1.6 р>0, 5

III 3 181,7+63.8

III» 3 80.3±21.3 1.41 р>0, 5

Степень дифферен- цировки Число больных Средние уровни рецепторов (фмолей/мг белка) td Р

Н 13 149.6125', 0 р>0, 5

н* 4 126, 8±29, 14 0.6' р>0, 5

У 7 206+56

У* 7 266, 4±79. 5 0. 62 р>0. 5

в 7 433, 9±120, 3

в* 15 280,9±60,3 1. 006 р>0. 5

Глубина инвазии опухоли Чувствительность Число больных Средние уровни рецепторов (Фмолей/мг белка) td р

до 0,5см высоко-чувств. 15 332, 0+71.6

слабо-чувств. 17 261.0±51.2 0, 8 р>0, 5

более 0.5 см высоко-чувств. 14 193135,8

слабо-чувств. 10 270.2+67,7 1, 006 р>0. 5

* - опухоли, чувствительные к прогестерону по критерию изменения интенсивности обмена фосфолипидов

не только наличием рецепторов прогестерона, но зависит от действия целого ряда соединений, контролирующих скорость роста опухоли.

Влияние эпидермального фактора роста на обмен фосфолипидов и сравнительный анализ скорости обмена фосфатидилинозитола и фосфатидилхолина в аденокарциномах матки

Одними изд.показателей пролиферативной активности опухолевых клеток могут'' ::лукить Ьазальный уровень'. 'Активации обмена ют-дельных форм';\фрОфолипидов и чувствительность клеток к действию ростовых факторов',;..« частности - к эпидермал'ьному фактору роста (ЭФР). Проведенное в. наших эксперимен-щх'исследование влияние ЭФР на скорость обращения фосфолипидов выявило достоверную разницу в чувствительности к ЭФР опухолей в зависимости от стадии заболевания и степени дифференцировки: максимальной чувствительностью к ЭФР обладали высокодифференцированные опухоли матки. а также опухоли, удаленные на II стадии заболевания (рис.3)'.

Параллельно был проведен сравнительный анализ обмена отдельных фосфолипидов в опухолях матки с различной степенью дифференцировки. глубиной инвазии и на разных стадиях заболевания. Для сравнительной оценки скорости синтеза фосфолипидов мы ввели понятие индекса обмена фосфолипидов, который определялся как отношение количества 32Р, включившегося во фракцию фосфатидилинозитола. к количеству 32Р, включившегося во фракцию фосфатидилхолина. Были обнаружены достоверные изменения в значении индекса обмена фосфолипидов у больных с различными формами рака эндометрия. Как видно из данных, приведенных в таблице 2. ин-

32-P, %

Рисунок 3. Влияние эпидермального фактора роста на включение згР в фосфолипиды клеток аденокарцином матки в зависимости от стадии заболевания и степени дифференцировки опухолей.

H, У. В - опухоли матки, соответственно, низко-, умеренно--

и высокодифференцированные.

I, II. III - стадии заболевания.

декс обмена фосфолипидов у больных с низкодифференцированными

опухолями составляет 4,45, "что достоверно превышает уровень,

зарегистрированный у больных с умеренно- и ' высокодифференциро-

ванными формами рака эндометрия.-:, При этом сравнительный анализ

скорости обмена фосфатидилинрзитола, и фосфатидилхолина выявил 1 1 ! ! ! ' . ; характерную отрицательную-корреляцию между синтезом этих фоефо-

лийидов,: к;'оторая обнаруживается в: большинстве исследованных

групп больных (табл.3 и 4).. -------'■- • ] -"' -1

! | | У;'!':. ; ' "V ! м | ч-* : ¡Таблица 2

I Изменение: индекса-.обмена фосфолипйдов в кденокарцйномах :

1 1 I Л .-'I ! ; : ;' >' ) , ' Л-' !

!- - - !■-натки различной1 степени дифференцировки - ;

- Степень • -дифферент • цировкй !Колич-; чество■ ' больных |Среднее значение} ; индекса .; : | фосфолипидов ; ' 1<ИГГ \ р;:

Н (30,35%) - ' -17 ■! - 4.45 '.....1 *

У (25,0%) 14 1,82 3, 14 р<0, 05

В (44, 65%) ' 25 ' 1.83 4.2 р<0. 05)

.......... '. Таблица 3

Корреляция 'синтеза фосфатидилинозитола (ФДИ) и фосфатидилхолина" (ФДХ) в опухолях различной степени дифференцировки

Фракции Степень ■■ Число :. Средние: ¡. . Коэффи-. Ьс1 ■Р

дифферен- больных значения циент

цировки : ФДИ и ФДХ ■ корре-, .

опухоли ляции

ФДИ 17 4.95 -

низкая ,! .... - ■ •. , 8.3 0.01

ФДХ 17 0,56 0. 62+0, 06

ФДИ умеренная 14 0. 99 -3,7 корреляция

ная . отсутст-

ФДХ 14 0,93 вует

ФДИ "25 '2,9 ' -

высокая . . 4.2 0.01

ФДХ 25 0,42 0.31±0,12

... , . Таблица 4 Корреляция синтеза ФДХ и ФДИ в. опухолях с различной глубиной инвазии й на разных стадиях заболевания

Фрак; ции Состоя-' ние опухоли.'. Число' больных ; Среднее--; ■ значение ФДИ и ФДХ "Коэффициент -Корреляции ■ td Р'

.ФДИ ФДХ ■1 стадия 38- ' 38 2; 62 ■ 0.56 -0,274 ' 0,09 " 4. 3 ! 0.01

ФДИ . ФДХ ; II стадия 12 12 3.13 0.7 -0, 53± • 0, И 6. 1 0.01

ФДИ ФДХ .III ■ стадия 6 6 1,98 : 0.43 •"-0.23± • 0.12 2; 9 ' 0.01':

ФДИ ФДХ инвазия до 0.5см 32 32 - 2,67 0.84 -0.31± ; 0. 16 - 4.3 0.01

ФДИ ФДХ инвазия' более 0. 5 см : 24 24 2.45 0;64 ■ -0,29± . 0, И ' : 3.3 ; 0,01

На наш взгляд,: обнаруженные различия в индексе обмена фос-фолипидов могут быть связаны с преимущественной активацией метаболизма фосфатидилинозитола в опухолях, характеризующихся высокой пролиферативной активностью, в частности - в низкодиффе-ренцированных опухолях матки. Судя по полученным данным, усиление синтеза фосфатидилхолина и.!соответственно, снижение синтеза фосфатидилинозитолов можно рассматривать как один из дополнительных маркеров дифференцировки опухрлевых клеток.

В дальнейших экспериментах мы провели сравнительное исследование скорости обмена фосфатидилхолина и фосфатидилинозитола в опухолях матки, различающихся по чувствительности к прогестерону. Оказалось, что прогестерон эффективно тормозит обмен фос-фолипидов преимущественно в опухолях матки, отличающихся исход-

но высоким уровнем, метаболизма фосфатидилинозитола, Так. в опухолях матки, чувствительных к,прогестерону, 84% случаев индекс обмена фосфолипидов превышал ,1. 0. , тогда как среди опухо-,лей. нечувствительных,к прогестерону., около половины (47%) опухолей отличались низким уровнем обмена фосфатидилинозитола (индекс фосфолипидов меньше 1)., Полученные результаты свидетельствуют о том, что , степень предактивации обмена фосфолипидов в опухолевых клетках может, во . многом определять эффективность гормонального контроля обмена фосфолипидов а, ■в конечном итоге, и уровень гормональной .зависимости опухолей. ,

Таким образом.,, определение скорости обмена,внутриклеточных фосфолипидов можно рассматривать как один из дополнительных методов оценки пролиФеративного потенциала опухолевых клеток. При исследовании данного показателя в целом ряде случаев обнаруживаются статистически достоверные различия, характеризующие различные этапы течения заболевания. .

Роль цикла обращения внутриклеточных фосфолипидов в регуляции синтеза простагландинов Е опухолями матки

На этом этапе работы мы,исследовали роль цикла обращения фосфолипидов в регуляции синтеза соединений.. участвующих в" формировании метастатического потенциала опухолей. В частности, к таким соединениям относятся простагландины серии ,Е (ИГЕ), активная продукция которых .характерна для опухолей с повышенной способностью к метастазированию и инвазии. Известно, что синтез ПГЕ регулируется ферментами цикла обращения фосфолипидов. в том числе фосфолипазой А2, что позволяет'предположить наличие определенной взаимосвязи между интенсивностью обмена основных внут-

- 21 -

риклеточных фосфолипидов и продукцией опухолями ПГЕ.

На'материале, полученном от 37 больных, был проведен анализ синтеза ПГЕ в опухолях матки в зависимости от степени диф-ференцировки. глубины'инвазии'опухоли'и стадии заболевания. Была обнаружена тенденция к усилению синтеза ПГЕ при увеличении глубины инвазии опухоли й на поздних стадиях заболевания. Однако. наиболее четкие "различия-в содержании ПГЕ были установлены при анализе опухолей матки с различной степенью дифференциров-ки. Как видно из данных', приведенных на рис. 4. синтез ПГЕ в низкодифференцированных опухолях достоверно превышает уровень ПГЕ, зарегистрированный в высоко- и умереннодифференцированных опухолях.

Выше мы отмечали, что низкодифференцированные опухоли.отличает высокий показатель индекса обмена фосфолипидов, что, вероятно. связано с активацией обмена фосфатидилинозитола в низкодифференцированных, быстропролиферирующих опухолях. При анализе синтеза ПГЕ нам удалось установить достоверную положительную корреляцию между индексом обмена фосфолипидов и синтезом в опухолях ПГЕ. Таким образом', полученные данные свидетельствуют о том, что анализ скорости обмена внутриклеточных фосфолипидов можно расценивать как комплексный показатель, характеризующий метаболическую активность и уровень диффренцировки опухолевой ткани.

Суммируя полученные результаты, следует заключить, что-определение скорости обмена внутриклеточных фосфолипидов является одним из информативных биохимических показателей состояния опухоли. который может быть использован в качестве дополнительного критерия для определения степени гормональной зависимости и злокачественности опухолевых клеток.

и

10

ПГЕ (пкг/г)

& -

д\Ь>\

#1 ЖА\

н

Рисунок 4. Содержание простагландинов Е в опухолях матки с различной степенью дифференцировки.

Н, У, В ~ опухоли матки, соответственно, низко-, умеренно-и высокодифференцированные.

•Все вышеизложенное позволяет рекомендовать использование этого показателя при диагностике и определении схем гормонотерапии у больных с аденокарциномой матки. '■■'•• ■

ВЫВОДЫ

1. Добавление к изолированным клеткам' аденокарциномн матки стероидного гормона прогестерона в 52% опухолей вызывает снижение скорости обмена1 фосфолипидов. что- выявляется ■ при анализе ПКЛЮ'К'ПИЛ И фосфоЛИПИДН "Г ортофосфлта-.

2. Степень прогестерон-зависимого- торможения^ обмёна фосфолипидов достоверно не отличается в опухолях с различной концентрацией цитонлазматических рецепторов прогестерона.

3. Обнаружено, что эффективность ингибирующего действия прогестерона на обмен фосфолипидов в аденокарциномах матки снижается при увеличении глубины инвазии опухоли' и на поздних стадиях заболевания.

4. Сравнительный анализ синтеза отдельных фракций фосфолипидов ( фосфатидилхолина. и фосфатидилинозитола) в аденокарциномах матки выявил существенную активацию обмена1 фосфатидилинозитола в низкодифференцированных опухолях по сравнению с умеренно и пысокодифференцированными формами' рака эндометрия.

5. Обнаружена положительная корреляция между скоростью обмена отдельных Фракций фосфолипидов и уровнем простагландинов серии Е в аденокарциномах матки.

6. Анализ синтеза фосфолипидов в аденокарциномах матки может быть использован для определения гормональной чувствительности этих опухолей, а также может служить дополнительным показателем при определении степени дифференцировки и .злокачествен-

ности аденокарциномы матки.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Сафарова С.А., Красильников М.А., Трапезников H.H. /Изменение синтеза фракций фосфолипидов в аденокарциномах матки различной степени дифференцировки. (Тезисы. посвященные 100-летнему юбилею академика М.Топчибашева). Баку. 1995.

2. Сафарова С.А., Красильников М. А. /Критерии оценки чувствительности к прогестерону аденокарциномы матки. (Тезисы, посвященные 100-летнему юбилею академика М.Топчибашева). Баку. 1995.

3. Красильников М.А.. Шатская В.А..Сафарова С.А./Биохимическая оценка эффективности действия половых стероидных гормонов и тамоксифена на злокачественные опухоли. Тезисы доклада на II Российском национальном конгрессе " Человек и лекарство". Остр. 155.-1995.

4. Сафарова С.А.. Красильников М.А../ Сравнительный анализ изменения синтеза различных фракций фосфолипидов в клетках аденокарциномы матки (Журнал "Здоровье". 5,-стр. 12-20. Баку,1995.

5. Сафарова С.А..Амирасланов А.Т., Красильников М.А./Сравнительная оценка эффективности методов определения чувствительности аденокарциномы матки к прогестерону. Журнал "Здоровье". 6. стр. 14-20. Баку, 1995.

6. Сафарова С.А.. Красильников М.А. /Характеристика синтеза различных фракций фосфолипидов в аденокарциноме матки. Журнал " Здоровье" 1, стр.62, Баку. 1996.

Участок множительной техники ОНЦ РАМН

Тираж <j00 jk-i

Подп. к печати 96 Заказ у]