Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка контроля качества лишайников рода CLADINA и CLADONIA и создание на их основе лекарственного средства

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ

^ БУРЯТСКИЙ ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ «■V

НИКОЛАЕВА МАРИНА ГЕННАДЬЕВНА

РАЗРАБОТКА КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ЛИШАЙНИКОВ РОДА СЬАЛША И СЬАООтл И СОЗДАНИЕ НА ИХ ОСНОВЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА. (15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия)

на правах рукописи

УДК 615.4:54+615.43

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Улан-Удэ 1997 г

Работа выполнена в Бурятском институте биологии Сибирского отделения Российской Академии Наук

Научный руководитель - доктор фармацевтических наук

Т.А. Асеева

Официальные оппоненты - доктор биологических наук,

профессор Б.Б. Намзалов

Ведущая организация - Научно-исследовательский институт Фармации Министерства здравоохранения РФ

заседании диссергац >0.55.02. при Бурятском

институте биологии СО РАН. 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6

С диссертацией можно ознакомиться в центральной научной библиотеке Бурятского научною центра СО РАН

Автореферат разослан 1997 года

кандидат фармацевтических наук Л.С. Семенова

Защита состоится

года в -/¿7 часов на

Ученый секретарь диссертационного Совета к.м.н.

О.Д. Цыренжапова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. В настоящее время в арсенале лекарственных средств, применяемых в клинической медицине, около 40% приходится на долю препаратов растительного происхождения. Действие указанных средств обусловлено присутствием в них биологически активных веществ: полифенолов, полисахаридов, минеральных веществ, аминокислот, органических кислот, витаминов и др., которые обеспечивают широкий спектр фармакологического действия фитопрепаратов.

Растительные препараты: экстракты, отвары, настои, настойки, а также растительные экстракты с добавками других лекарственных средств, повышают общую неспецифическую резистентность организма, стимулируют защитные механизмы, нормализуют обмен веществ, что особенно важно при хронических формах заболеваний.

В связи с особенностями течения, в частности, хронической лучевой болезни и способностью поражающего воздействия радиации к кумуляции (суммированшо) отрицательных реакций, а также продолжающимся риском попадания радионуклидов в организм и накоплением их в тканях, важным представляется использование наряду с химическими радиопротекторами радиозащитных препаратов, полученных на основе природных видов сырья: растений, животных, минералов, не оказывающих, как правило, побочного действия и безвредных при длительном применении.

Следует отметить, что в последнее время во многих странах проводятся широкие исследования по поиску радиозащитных средств среди лекарственных растений, применявшихся в народной медицине, а также в арсенале средств традиционных китайской, тибетской и монгольской медицинских системах. Установлен ряд преимуществ в использовании средств природного происхождения перед синтетическими аналогами. Прежде всего -возможность длительного приема, отсутствие отрицательных реакций, высокая фармакотерапевтическая эффективность. Синтетические препараты, как Б- или Бе-содержащие, при больших дозировках и при длительном применении оказывают токсическое действие, что исключает их использование при хронических

лучевых поражениях. Кроме того, для синтетических радиопротекторов существует понятие предела, или порога в радиозащитной эффективности препарата. Одним из существенных недостатков основных синтетических радиопротекторов является снижение радиозащитной активности при уменьшении мощности дозы облучения. Лекарственные препараты и средства, полученные из растений, содержат комплекс биологически активных веществ, отличающихся по своему строению и принадлежащих к разным классам химических веществ. Фармакологическое действие их определяется наличием соответствующего спектра биологически активных веществ и количественным соотношением каждого из них в используемой смеси. Отсюда очень важной задачей является качественная и количественная характеристика фитопрепарата.

Другими, не менее важными задачами являются унификация методов контроля уже известных препаратов, создание стандартных образцов, а также разработка и систематический пересмотр нормативно-технической документации на лекарственные средства с учетом современных требований стандартизации.

На основании вышеизложенного проблема поиска и создания новых лекарственных средств с радиозащитным действием, их стандартизация с использованием современных методов анализа является актуальной.

ЦЕЛЬЮ НАСТОЯЩИХ ИССЛЕДОВАНИЙ является разработка методов контроля качества лишайников рода ОасИпа и С1а<1ота, получение и стандартизация лекарственной формы, а также разработка и получение стандартного образца кислоты усниновой.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ:

- качественное исследование сырья, стандартизация его и составление проекта изменения на «Лишайники»; определение ежегодного объема заготовок;

- разработка способа получения гранул лишайника и оформление лабораторного технологического регламента;

- разработка метода стандартизации гранул и составление проекта временной фармакопейной статьи на гранулы лишайника;

- разработка технологической схемы, показателей качества и составление лабораторного технологического регламента, проекта временной фармакопейной статьи на Государственный стандартный образец (ГСО) кислоты усниновой

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

На основании исследования состава и свойств комплекса лишайниковых веществ лишайников родов Cladina и Cladonia разработаны методические основы стандартизации сырья и препарата, заключающиеся в необходимости проведения оценки их качества по содержанию суммы лишайниковых веществ в пересчете на кислоту усниновую-стандарт.

С использова1шем спектрофотометрической методики, варьируя заданные параметры экстрагирования подобраны оптимальные параметры экстракции и выделения кислоты усниновой и представлены показатели качества кислоты усниновой - стандартного образца.

На основании проведенных комплексных исследований обоснован оптимальный состав лекарственной формы в виде гранул, обладающих радиозащитным действием.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- лабораторный технологический регламент на производство кислоты усниновой -стандарта (Утв. на заседании Ученого Совета Бурятского института биологии СО РАН от 02.10.97.)

- показатели качества стандартного образца кислоты усниновой, включенные в проект ВФС на ГСО кислоту усниновую (Утв. на заседании Ученого Совета Бурятского института биологии СО РАН от 02.10.97)

- ежегодный объем заготовок лекарственного растительного сырья лишайников в Прибайкальском районе республики Бурятия.

- методики количественного определения суммы лишайниковых кислот в пересчете на кислоту усниновую -стандарт в растительном сырье лишайника и гранулах.

- способ получения средства, обладающего радиозащитной активностью, получено уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 09.12.96. по заявке № 96119231/14 (025590) от 25.09.96.

- лабораторный технологический регламент на производство гранул лишайника (Утв. на заседании Ученого Совета Бурятского института биологии СО РАН от 02.10.97)

- показатели качества гранул лишайника и рекомендованы методы их анализа (проект ВФС на гранулы лишайника, утв. па заседании Ученого Совета Бурятского института биологии СО РАН от 02.10.97)

- гранулы лишайника .обладают радиозащитным действием (Заключение Бурятского института биологии СО РАН, лаборатории экспериментальной .фармакологии, утвержденное на заседании Ученого Совета Бурятского института биологии СО РАН от 02.10.97.)

Положения, выдвигаемые на защиту:

- разработке методики стандартизации сырья лишайников рода С1ас1та и ОасЗоша;

- но поиску новых лекарственных средств радиозащитного действия;

- по выделению стандартного образца кислоты усниновой.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ и ПУБЛИКАЦИИ. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научной конференции преподавателей, аспирантов Восточно-Сибирского технологического института (Улан-Удэ, 1994, 1995), Всероссийской научной конференции "Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники"(Чита, 1995), на I Региональной конференции "Сохранение биологического разнообразия в Байкальском регионе: проблемы, подходы, практика"(Улан-Удэ, 1996); годичных сессиях Бурятского института биологии СО РАН 1994, 1995, 1996,1У-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1997)

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ НАУЧНОГО СОВЕТА ПО ФАРМАКОЛОГИИ И ФАРМАЦИИ. Тема исследований связана с выполнением комплексных программ "Здоровье человека в Сибири" на 19901995 гг., "Лекарственное растительное сырье Бурятии и разработка эффективных лекарственных препаратов на основе тибетской медицины" на 1990-2000 гг. и "Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка лекарственных препаратов" на 1996-2000 гг. № гос. регистрации 01.9.40003183.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных наблюдений, выводов и списка литературы, включающего 128 источников, из них 64 зарубежных авторов, иллюстрирована таблицами, рисунками.

В 1-ой главе на основании данных литературы, рассмотрены: применение лишайников в народной, тибетской, современной клинической медицине, биологически активные вещества лишайников, механизмы их фармакологического действия, а также их распространение в лишайниках родов С1ас1ша и С1ас1оша, методы химического исследования и выделения лишайниковых веществ, в том числе кислоты усниновой.

В четырех экспериментальных главах описаны методики изучения лишайниковых веществ с использованием ТСХ, ВЭЖХ, аминокислотного состава с использованием аминокислотного анализатора, свободных Сахаров, полисахаридного комплекса; разработка методики количественного определения суммы лишайниковых веществ в пересчете на кислоту усниновую -стандарт в растительном сырье; изложены товароведческие показатели сырья лишайников; представлен ежегодный объем заготовок лишайника ОасПпа яГеПап.ч (Ор1г.) Вгос1о; описаны условия и технологическая схема получения стандартного образца кислоты усниновой; рассмотрен подбор оптимального состава лекарственной формы в виде гранул и изложены условия и технологическая схема получения лекарственной формы (гранул).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

В обзоре литературы представлены данные по механизмам радиопротекторного действия природных лекарственных средств, их преимуществах перед синтетическими аналогами, приведены сведения о современных фармакологических исследованиях природных радиопротекторов. Кроме того, отражено положение видов родов ОасПпа и С1ас1ота, их химический состав, методах исследования лишайниковых веществ, в том числе кислоты усниновой.

Отмечена перспективность изучения лишайников как источников для создания противолучевых средств.

Разработка способа получения стандартного образца кислоты усниновой й его идентификация.

В связи с широким спектром биологического действия лишайников и вытяжек из них разработка оптимальных методов их контроля качества является важной задачей. В этом направлении разработаны оптимальные параметры экстракции, выделения и идентификации кислоты усниновой из лишайника С1ас1та 51е11аг1Б (Ор12.) Вгос1о.

Выбор кислоты усниновой в качестве стандарта обусловлен следующими обстоятельствами:

1) кислота усниновая является действующим веществом, обеспечивая фармакологический эффект.

2) кислота усниновая - доминирующий компонент и в значительных количествах содержится во многих видах лишайников, в частности в С1ас1та эгеНагиз (Оркг.) Вгос1о.

3) кислота усниновая - достаточно устойчивое соединение.

Подобраны оптимальные параметры экстракции: экстрагент - хлороформ-этанол 96%(4:1); соотношение сырье -экстрагент (1:11); температура экстракции 80°С; степень измельчения сырья - 1 мм. Контролирующими параметрами были выход суммы лишайниковых веществ в пересчете на кислоту усниновую и суммы экстрактивных веществ (ГФ 11, вып. 1, с. 295) Для очистки кислоты усниновой выбран метод перекристаллизации вещества из хлороформного раствора 96% этанолом. На примере трех балансовых загрузок была разработана технологическая схема получения стандартного образца кислоты усниновой.

Технологическая схема производства.

ТП-1. Измельчение сырья лишайника С1асИпа Б1е11ап5 (0р17.) Вгос1о.

ТП-2. Получение хлороформно-спиртового экстракта.

ТП-3. Очистка от балластных веществ отстаиванием и фильтрованием.

ТП-4. Получение технической усниновой кислоты.

ТП-5. Получение готового продукта.

УМО-1. Фасовка готового продукта.

На каждой стадии процесса получения ведется контроль на присутствие кислоты усниновой (в исходном растительном сырье, шроте, маточных растворах, технической кислоте усниновой, готовом продукте).

С целыо разработки единых требований к стандартному образцу кислоты усниновой были изучены образцы вещества кислоты усниновой, полученных по лабораторному регламенту (3 серии)

Формула кислоты усниновой:

С18Н1607

Вещество представляет собой игольчатые кристаллы желтого цвета, без запаха.

Кислота усниновая практически нерастворима в воде, очень мало растворима в этаноле, растворима в хлороформе, ацетоне.

Для определения подлинности кислоты усниновой предложены УФ-, ИК- и ПМР-спектры.

1) УФ-снектр раствора кислоты усниновой- стандарта в хлороформе в интервале 220-360 нм имеет максимум поглощения при длине волны 285±2 нм (рис. 1).

2) Инфракрасный спектр в области характеристических частот содержит в области 1600-1626 см"1 полосы поглощения, соответствующие валентным колебаниям С=С, полосы поглощения в области 1670-1730 см"1 - валентным колебаниям групп С=0, в области 2700-3000 смС-Н валентным колебаниям (рис. 2).

ОН

он

сосн

3) В ПМР спектре (рис. 2.4.2, 0 - ТМС, 200 МГц), снятом в с!-ацетоне 1,11 (б., ЗН, СН3); 1,83 (б., ЗН, СН3); 2,64 (е., ЗН, СОСН3); 2,68 (б., ЗН, СОСНз); 6,20 (е., 1Н, Н); 10,27 (б., 1Н, ОН); 11,20 (я., 1Н, ОН); 13,41 (б., 1Н, ОН) (рис. 3).

Удельный показатель поглощения хлороформного раствора усниновой кислоты-стандарта при длине волны 285 нм должен быть от 720 до 750.

Температура плавления 203-204 °С.

Удельное вращение от +490 до +500 (1% раствор в хлороформе), посторонние примеси, потеря в массе при высушивании не должна превышать 2%.

Упаковка, маркировка, транспортирование, хранение, срок годности регламентируются проектом ВФС 42- на " Кислота усниновая -стандартный образец".

Рис. 1 УФ-спектр кислоты усниновой -стандартного образца.

Рис. 2. ИК-спектр кислоты усниновой -стандартного образца.

II |; I! >0 V к 7 6 5 4 3 2 ] О

0-ГМГ, ЗООМГц.йшстор

Рис. 3. ПМР-спектр кислоты усниновой -стандартного образца

Характеристика растительного сырья лишайников.

Собранное высушенное сырье лишайников представляет собой лишайниковую массу, состоящую из кусочков или цельных кустиков или больших рыхлых подушек лишайников, легко ломающихся, чаще всего желтовато-зеленоватого, желтовато-серого цвета. При сборе или чистке сырья освобождаются от лишайника серого цвета, не содержащего кислоту усниновую. Видовой состав лишайников представлен Cladina stellaris (Opiz.) Brodo, С. mitis (Sandst.) Hale et W. Culb., Cladonia uncialis (L.) Wigg. Для определения подлинности растительного сырья лишайников основным критерием является внешнее описание видов лишайников.

На нескольких партиях сырья были разработаны и рекомендованы товароведческие показатели на растительное сырье лишайников: потеря в массе при высушивании не более 10%, содержание минеральных примесей не более 1%, органических примесей не более 5%, содержание других видов лишайников не более 5%., содержание золы общей не более 3,5%.

Для лишайника Cladina stellaris (Opiz.) Brodo определен ежегодный объем заготовок, который соответствует 1,62 т; частота сбора в одних и тех же ценопонуляциях через 10-15 лет.

Фитохимичсское исследование некоторых видов лишайников рода Cladina и рода Cladonia

При фитохимическом изучении состава лишайников Cladina stellaris (Opiz.) Brodo, С. mitis (Sandst.) Hale et W. Culb., Cladonia uncialis (L.) Wigg. произрастающих на территории республики Бурятия были обнаружены свободные сахара, аминокислоты, полисахариды, лишайниковые вещества.

Количественное содержание полисахаридного комплекса определяли весовым методом в лишайнике Cladina stellaris (Opiz.) Brodo - 0,28%±0,001, в С. mitis (Sandst.) Hale et W. Culb. -0,300%±0,001, в Cladonia uncialis (L.) Wigg. - 0,550%±0,001.

Качественное и количественное определение аминокислот определяли с помощью аминокислотного анализатора.

Методом ТС хроматографии с использованием серии систем были исследованы виды лишайников с достоверными образцами лишайниковых веществ (кислоты усниновой, перлатоловой, фумарпротоцетраровой, атранорина).

Для дальнейшего исследования были выбраны лишайники, содержащие в составе кислоту усниновую. Это Cladina stellaris (Opiz.) Brodo, С. mitis (Sandst.) Hale et W. Culb., Cladonia uncialis (L.) Wigg.

С целью получения достоверных результатов о присутствии кислоты усниновой в различных видах лишайников нами разработана методика качественного определения кислоты усниновой с использованием современного инструментального метода - ВЭЖХ. Качественной характеристикой при использова-нш1 данного метода являлось время удерживания равное 1,75 мин. Достоверность идентификации была подтверждена при использовании "метода добавки". Идентификация в данном случае достигается за счет наблюдений в увеличенной площади пика идентифицируемого компонента.

В связи с тем, что фармакологическая активность лишайников и их вытяжек, в основном, обусловлена присутствием специфических лишайниковых веществ, то необходимо было определить количественное содержание этих веществ в данном сырье. Для этого был использован прямой спектрофотометрический метод.

В основу метода положено сопоставление оптических плотностей стандартного образца кислоты усниновой известной концентрации и испытуемого образца. Измерение оптической плотности проводили в области максимума полосы поглощения кислоты усниновой и хлороформного извлечения в УФ области при длине волны 285 нм. На основании проведенных исследований выбраны оптимальные параметры, обеспечивающие максимальный выход действующих веществ, что позволяет объективно отражать содержание суммы лишайниковых веществ в растительном сырье лишайников: экстрагент - хлороформ, соотношение сырья и экстрагента - 1 : 50, температура экстракции - (80 - 100)°С, продолжительность экстракции - 3 часа.

Метрологическая характеристика методики приведена в

табл. 1.

Таблица 1

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы лишайниковых веществ в растительном сырье лишайника С1ас1та Б^НапБ в пересчете на усниновую кислоту-стандарт.

р X Б 8Х Р Ах А(>1Ц

9 1,83 0,044721 0,014152 95 2,26 0,031980 1,75

Данные, представленные в табл. 1, показывают, что относительная ошибка методики количественного определения суммы лишайниковых веществ в растительном сырье лишайника в пересчете на усниновую кислоту-стандарт не превышает 1,75%.

Для проверки отсутствия систематической ошибки в методике были проведены эксперименты с добавками кислоты усниновой непосредственно при экстракции сырья. Полученные результаты приведены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты опытов с добавками кислоты усниновой

№ п/ п Содержание лишайниковых веществ в 1 г лишайника, мг Добавлено усниновой кислоты, мг Должно быть лишайнико -вых веществ и кислоты усниновой, мг Найдено лишайниковых веществ и кислоты усниновой, мг Относительная ошибка, %

1. 12,90 3,23 16,13 16,27 0,87

2. 12,90 6,45 19,58 19,58 1Д9

3. 12,90 9,68 22,58 22,35 1,02

Относительная ошибка опытов с добавками находится в пределах величины случайной ошибки, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки.

Разработанная методика была использована для определения суммы лишайниковых веществ в исследуемых видах лишайников (С1ас1ша $1е11ап5 (Ор1г.) Вгос1о - 1,83%; в С. пнИэ

(Sandst.) Male et W. Culb. - 2,08%, в Cladonia uncialis (L.) Wigg. -1,70%).

Разработка способа получения гранул лишайника и их стандартизация.

С целью создания удобной лекарственной формы из растительного сырья лишайников, обладающего радиозащитным действием, были разработаны гранулы.

Фармакологические исследования, проведенные в Бурятском Институте биологии СО РАН, показали радиозащитную активность измельченных талломов лишайников Cladina stellaris (Opiz.) Brodo, С. mitis (Sandst) Hale et W. Culb., Cladonia uncialis (L.) Wigg. и гранул лишайника.

Измельченные талломы лишайников Cladina stellaris, С. mitis, Cladonia uncialis представляют собой мелкодисперсные порошки, пылящие и раздражающие дыхательные пути. В связи с этим были проведены исследования физико-химических и технологических свойств порошков (табл. 3).

Данные представленные в табл. 3 показывают отсутствие достоверных различий в физических и технологических свойствах порошков разных видов лишайников. По показателям насыпной массы и удельной плотности порошки талломов лишайников можно отнести к легким лекарственным порошкам, для которых характерна неплотная укладка частиц и требуется большой начальный объем матричного канала.

При изучении сыпучести на приборе со стационарно закрепленной воронкой было установлено, что порошки не обладают сыпучестью, что характерно для группы мелкодисперсных лекарственных порошков с большой контактной поверхностью, имеющих неправильную форму частиц, контуры которых создают возможность взаимных зацеплений.

При изучении гигроскопичности талломов лишайников обнаружили, что измельченные талломы лишайников гигроскопичны при относительной влажности 66%, 88%, 100%.

Таблица 3

Физические и технологические свойства порошков талломов лишайников (проба 1, 2, 3)

№ физические и № пробы

технологические 1 2 -»

свойства

1. Гранулометрический состав, пылевая фракция %<0,1 4,'720 5,010 4,950

2. Сыпучесть без вибровсряхивания, г/сек.

3. - " - - " - С вибровстряхиванием, г/сек. 0,840±0,080 0,860+0,080 0,860±0,080

4. насыпная масса в свободнонасыпанном состоянии, г/см3 0,216±0,009 0,217+0,009 0,216+0,009

5. -"--"- после уплотнения, г/см' 0,244±0,009 0,244±0,009 0,245+0,009

6. коэффициент виброунлотнения 0,200+0,030 0,200+0,030 0,210±0,030

7. прессуемость 1,730+0,090 1,550±0,090 1,670±0,090

8. истинная (удельная) плотность 1,128±0,002 1,126+0,002 1,12510,002

Таким образом, при изучении физико-химических и технологических свойств выявлено, что субстанции лишайников являются легкими объемными порошками, гигроскопичны, имеют хорошую прессуемость, но сравнительно небольшую насыпную массу. Сыпучестью порошки не обладали.

Т.к. показатели физических и технологических свойств исследуемых порошков не имели существенных различий, то для дальнейшего изучения и разработки технологической схемы получеты гранул был выбран порошок 1 (измельченное сырье лишайника ОасНпа $1е11ап5).

Для изучения влияния связующих веществ на качество гранулята были использованы связующие вещества: 64% раствор сахарного сиропа, 10% раствор поливинилпирролидона (ПВП), 5% раствор крахмала, 2% раствор метилнеллюлозы-16 (МЦ-16), 3% раствор альгината натрия. На основашш экспериментальных данных для гранул лишайника в качестве связующего средства был выбран 64% раствор сахарного сиропа.

Для подбора наполнителя изучены вспомогательные вещества в разных соотношениях с субстанцией лишайника, такие как лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал. Выбор наполнителя проводили на основашш получения удовлетворительных характеристик гранулятов.

На основании полученных технологических свойств гранул с учетом фармакологических данных для получения средства, обладающего радиозащитным действием, был выбран состав, соответствующий требованиям ГФ XI, вып. 2, стр. 139, а также выдерживающий сроки хранения лекарственных средств. Состав : измельченный порошок лишайника 50% : лактоза 25% : крахмал 25% с увлажнителем 64% раствором сахарного сиропа.

Разработку технологической схемы получения гранул лишайника отрабатывали на сырье лишайника С1ас1ша 5(е11ат (Ор1г.) Вгос1о, собранное в Прибайкальском районе в 1994 г. с содержанием лишайниковых веществ в пересчете на усниновую кислоту 2,14% и влажностью 8,94%.

На схеме 1 предложена технологическая схема получения гранул лишайника.

Для разработки показателей качества гранул лишайника были исследованы образцы каждой серии.

При фотохимическом изучении гранул лишайника методом ТСХ были обнаружены усниновая и перлатолоая кислоты (КТ=0,69; 11Г=0,57, соответственно); методом ВЭЖХ - усниновая кислота с показателем времени удерживания равный 1,75 мин.

В связи с тем, что фармакологический эффект растительного сырья лишайников, в основном, обусловлен наличием в нем лишайниковых веществ, разработку технологической схемы, контроль на отдельных стадиях производства и стандартизацию гранул осуществляли по содержанию этих соединений.

Схема 1. Технологическая схема изготовления гранул лишайника.

Измельчение ВР-1.1. растительного -сырья

Просеивание ВР-1.2. всех

ингредиентов

ВР-1.3. Подготовка увлажнителя ТП-1.1. Смешивание

и увлажнение -—

ТП-1.2. Влажное

гранулирование•

ТП-1.3. ТП-1.4. ТП-1.5. ВР-1.4.

УМО-2.1.

Сушка

гранулята

Сухое

гранулирование -Просеивание гранул —

Подготовка тары

Фасовка —

-ВР-1. Подготовка сырья

I

Потери: механические

4— ТП-1. Изготовление

гранул ^ ^ ^

Отходы: Влага Потери механические

1

—УМО-2. Фасовка гранул

Для оценки качества и разработки ВФС на гранулы лишайника были выбраны показатели: описание внешнего вида, определение подлинности, потеря в массе при высушивании и содержание биологически активных веществ.

Гранулы лишайника состоят из одной части измельченного сырья лишайника и трех частей вспомогательных веществ.

Внешний вид. Гранулы в виде крупинок круглой цилиндрической или неправильной формы серовато-зеленоватого цвета, со специфическим запахом, сладкого вкуса. Размеры гранул 0,2-3,0 мм.

Определение подлинности проводили методом ТСХ на присутствие кислоты усниновой с ИТ" 0,69.

Для количественной характеристики использовали спектрофотометрическую методику определения суммы лишайниковых веществ в пересчете на усниновую кислоту-стандарт.

Содержание лишайниковых веществ должно быть не менее 0,45%.

Метрологическая характеристика методики приведена в

табл. 4.

Таблица 4

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы лишайниковых веществ в гранулах лишайника в пересчете на усниновую кислоту-стандарт

{ X Б Эх Р 1 Ах -А-ОТН.

м

9 0,537 0,007862 ±0,002481 95 2,26 ±0,013921 2,67

Данные представленные в табл. 4 показывают, что относительная ошибка методики количественного определения суммы лишайниковых веществ в гранулах лишайника в пересчете на усниновую кислоту-стандарт не превышает 2,67%.

Отсутствие систематической ошибки методики подтверждено опытами с добавками кислоты усниновой к растворам гранул лишайника. Результаты анализа приведены в табл. 5.

Таблица 5

Результаты опытов с добавками кислоты усииновой

№ Содержание Добавлено Должно Найдено Относит

и! лшашшко- усниновой быть лшайни- ельная

п вых веществ в кислоты, лишайн ковых ве ошибка,

3,0 г гранул мг и- ществ и %

лишайника, мг ковых кислоты

ве- уснино-

ществ и вой, мг

кислоты

уснино-

вой, мг

1. 16,11 4,03 20,14 20,45 1,54

2. 16,11 8,06 24,17 23,86 1,28

3. 16,11 12,08 28,19 27,82 1,31

Относительная ошибка опытов с добавками находится в пределах величины случайной ошибки, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ.

1. Изучен качественный состав видов лишайников, при этом идентифицированы: кислота усниновая, атранорин, кислоты перлатоловая и фумарпротоцетраровая; свободные сахара; полисахариды; аминокислоты.

2. Установлены числовые показатели для оценки качества сырья. Для лишайника С1ас1ша 51е11аш (0р17.) Вгос1о ежегодный объем заготовок не должен превышать 1,62 т;

3. Разработана методика количественного определения суммы лишайниковых веществ в пересчете на кислоту усниновую -стандарт спектрофотометричсским методом в сырье. Относительная ошибка методики не превышает 1,75%. Методика включена в проект Изменения № 1 к ФС-42766-73 на «Лишайники».

4. Разработан способ получения стандартного образца кислоты усниновой. Составлен лабораторный технологический регламент на производство кислоты усниновой - стандарта.

5. Разработаны показатели качества стандартного образца кислоты усниновой, включенные в проект временной фармакопейной статьи и установлен срок годности - 1,5 года.

6. Разработана схема получения гранул лишайника и оформлен лабораторный технологический регламент на гранулы.

7. Разработана методика количественного определения суммы лишайниковых веществ в гранулах лишайника. Относительная ошибка методики не превышает 2,67%.

8. Разработаны показатели качества для гранул лишайника, которые включены в проект временной фармакопейной статьи и установлен первоначальный срок годности - 2 года.

По теме диссертационной работы опубликованы следующие работы:

1. Николаева М.Г., Асеева Т.А., Танхаева Л.М. Лишайники Бурятии - источники биологически активных веществ // Биотехнология пищевых производств. Химия и химические технологии: Сб. науч. статей. - Улан-Удэ, 1994. - С. 101-104.

2. Николаева М.Г., Танхаева Л.]М., Асеева Т.А. Перспективы использования лишайников в качестве лекарственного растительного сырья // Химия биологически активных веществ. Выпуск 2: Сб. науч. трудов. - Улан-Удэ, 1995. -С. 29-33.

3. Николаева М.Г., Танхаева Л.М., Ракшаина М.Ц., Николаева Г.Г., Асеева Т.А., Даргаева Т.Д. Количественная характеристика растительного сырья лишайника / / Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники: Тез. докл. Всеросс. науч. конф. - Чита., 1995. -Ч. 1. - С. 157.

4. Николаева М.Г., Николаева Г.Г., Асеева Т.А. Разработка лекарственной формы "С1а(1о5еп1:" / / Сохранение биологического разнообразия в Байкальском регионе: проблемы, подходы, практика: Тез. докл. I регион, конф. - Улан-Удэ, 1996. - С. 145-146.

5. Николаев С.М., Асеева Т.А., Даргаева Т.Д., Бураева Л.Б., Николаева М.Г., Пожарицкая О.Н., Корсун Л.Н., Николаева Г.Г., Танхаева Л.М., Пахолков Г.В. Радиозащитное действие гранул кладонии звездчатой // Человек и лекарство: Тез. докл. IV-го Российск. национ. конгр. - Москва, 1997. - С.172-173.