Фармакогностическое исследование по обоснованию создания антидепрессантных препаратов на основе травы зверобоя

Зимина, Любовь Николаевна

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое исследование по обоснованию создания антидепрессантных препаратов на основе травы зверобоя

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Зимина, Любовь Николаевна Самара 2011 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакогностическое исследование по обоснованию создания антидепрессантных препаратов на основе травы зверобоя

На правах рукописи

4852ДО'

Зимина Любовь Николаевна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПО ОБОСНОВАНИЮ СОЗДАНИЯ АНТИДЕПРЕССАНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ТРАВЫ ЗВЕРОБОЯ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

¡1 5 СЕН 2011

Самара-2011

4852987

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор

кандидат фармацевтических наук, доцент

Куркин Владимир Александрович

Киселева Татьяна Леонидовна

Климова Любовь Дмитриевна

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «_£>> октября 2011 г. в ¿Очасов на заседании диссертационного совета Д 208.085.06 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» по адресу: 443079, г. Самара, пр. К.Маркса, 165 Б.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171).

Автореферат разослан « $ » 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент

И.К. Петрухина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время депрессивные состояния рассматриваются как одна из важнейших проблем современной медицины. В материалах ВОЗ имеются данные, свидетельствующие о том, что более 110 млн. человек в мире страдают депрессией, и тенденция к последовательному увеличению распространенности депрессивных расстройств сохраняется.

Лечение депрессивных состояний, как правило, длительное, в результате чего важное значение приобретают безопасность и переносимость применяемых лекарственных средств. В связи с этим возрос интерес к препаратам растительного происхождения, которым на сегодняшний день отдают предпочтение до 80% населения.

В настоящее время в качестве источника антидепрессантных лекарственных препаратов природного происхождения служит зверобой продырявленный (Hypericum perforatum L.). Однако на фармацевтическом рынке Российской Федерации имеются только импортные дорогостоящие препараты («Деприм», «Негрустин» и др.). В нашей стране фармакопейными видами являются зверобой продырявленный и зверобоя пятнистый (Самылина И.А., Север-цев В.А.,2003; Киселева Т.Д. и др., 2007), из травы которых производят антисептические, противовоспалительные и вяжущие лекарственные средства, и в этом плане данные виды рассматриваются как равноценные. Однако по последним литературным данным обнаружены некоторые отличия между ними как по химическому составу, так и по спектру биологической активности. Учитывая тот факт, что антидепрессантные свойства обусловлены несколькими группами действующих веществ (антраценпроизводными, некоторыми флавоноидами, флороглюцинами), представляется актуальным изучение особенностей химического состава биологически активных соединений (БАС) менее исследованной в этом плане травы зверобоя пятнистого. Результаты данных исследований могут явиться обоснованием рациональности использования сырья травы зверобоя пятнистого в качестве источника импортозамещающих антидепрессантных лекарственных средств.

Кроме того, до настоящего времени не изучены возможности применения высокоэффективной жидкостной хроматографии для стандартизации сырья и препаратов видов рода Зверобой.

На данный момент остается нерешенным и вопрос определения качества сырья по такому критерию, как числовой показатель содержания плодов в сырье, введение которого позволит более жестко регулировать сбор сырья с точки зрения фазы вегетации. Кроме того, не до конца изученным представляется вопрос по анатомо-морфологическим признакам плодов видов рода зверобой.

С учетом особенностей химического состава целесообразно изучение спектра нейротропной активности травы и субстанций зверобоя пятнистого.

Учитывая ограниченный ассортимент антидепрессантов растительного происхождения, актуальными являются исследования по обоснованию создания лекарственных форм в виде сиропа и таблеток.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы является фарма-когностическое исследование по обоснованию целесообразности разработки антидепрессантных препаратов на основе травы зверобоя.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Исследование анатомо-морфологических признаков плодов и семян зверобоя продырявленного (.Hypericum perforatum L.), зверобоя пятнистого (Hypericum maculatum Grantz.) и зверобоя изящного (Hypericum elegans Steph.).

2. Препаративное выделение и разделение основных БАС зверобоя пятнистого и установление структуры и физико-химических характеристик выделенных веществ.

3. Оценка возможностей и перспектив метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для анализа сырья и лекарственных препаратов зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного.

4. Разработка новых импортозамещающих антидепрессантных препаратов «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки».

5. Разработка методов качественного и количественного анализа новых лекарственных препаратов «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки» на основе травы зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого.

6. Обоснование целесообразности использования травы зверобоя пятнистого в качестве сырьевого источника БАС с антидепрессантной активностью на основании фармакологических исследований.

Научная новизна. В результате морфолого-анатомического изучения плодов в траве зверобоя, заготовленного в разные фазы вегетации, выявлены новые диагностические признаки. Даны рекомендации по нормированию содержания плодов в доброкачественном сырье.

Впервые в Российской Федерации разработаны методики ВЭЖХ-анализа для стандартизации зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого, а также выявлены возможности использования ВЭЖХ в качестве метода для определения видовой принадлежности и проведения химической таксации. При исследовании химического состава травы зверобоя пятнистого идентифицированы 6 индивидуальных соединения: рутин, гиперозид, кверцетин, гиперицин, хлоро-геновая кислота, гиперфорин, установление структуры которых проводилось с использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии в сочетании с традиционными методами химического анализа.

Разработаны методики спектрофотометрического количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы антраценпроизвод-ных в пересчете на гиперицин для нового лекарственного препарата «Зверобоя сироп», предусматривающие предварительную ацетоновую экстракцию анализируемых БАС.

Основываясь на принципе унификации методики в ряду «ЛРС -лекарственная субстанция - лекарственный препарат» (Самылина И.А. и др., 1994 г.), разработана методика стандартизации сухого экстракта зверобоя для нового лекарственного препарата «Зверобоя таблетки», основанная на определении суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы антраценпроиз-водных в пересчете на гиперицин.

Сравнительное изучение спектра и выраженности нейротропной активности препаратов изучаемых видов зверобоя показало преимущество анти-депрессантной активности экстракционных препаратов зверобоя пятнистого в два раза по сравнению с подобными препаратами зверобоя продырявленного. Для фармакопейных видов зверобоя впервые выявлена анксиолитиче-ская активность, а для антрахинона гиперицина - антидепрессантный эффект. Результаты этих исследований свидетельствуют о целесообразности использования травы зверобоя пятнистого в качестве источника антиде-прессантных фитопрепаратов. Доказано наличие диуретической активности для экстракционных препаратов зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного.

Результаты исследования острой токсичности препаратов зверобоя, проведенные на белых нелинейных крысах на кафедре фармакологии ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России, показали, что исследуемые препараты относятся к классу малотоксичных, не вызывают отсроченной гибели животных и нарушения жизненно важных функций организма.

На основе результатов фармакологического исследования обоснована целесообразность разработки импортозамещающих антидепрессантных лекарственных препаратов «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки», причем в качестве дополнительного сырьевого источника трава зверобоя пятнистого.

Практическая значимость. По результатам морфолого-анатомического анализа плодов и семян зверобоя продырявленного, зверобоя пятнистого и зверобоя изящного разработаны допонительные подходы к определению качества сырья и наличию в нем примесного вида. Показана целесообразность нормирования в сырье зверобоя числового показателя «Содержание плодов не более 5%» и включение данного параметра в ФС «Зверобоя трава».

Разработаны методики качественного и количественного анализа новых лекарственных препаратов «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки», которые включены в соответствующие проекты ФСП.

По результатам сравнительного исследования спектра нейротропной активности препаратов зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного доказана возможность применения травы зверобоя пятнистого в качестве источника импортозамещающих антидепрессантных лекарственных средств.

Результаты исследований используются в научных исследованиях и учебном процессе кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии и кафедры химии фармацевтического факультета ГОУ ВПО Минздравсоцразви-тия России (акты внедрения от 25.04.2011 г.). Также результаты исследований используются на ЗАО «Самаралектравы», в ГУЗ «Центр контроля качества лекарственных средств Самарской области».

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты сравнительного морфолого-анатомического изучения плодов фармакопейных и примесного видов зверобоя.

2. Результаты изучения химического состава травы зверобоя пятнистого.

3. Обоснование целесообразности применения метода ВЭЖХ-анализа для-качественной и количественной оценки содержания основных БАС в траве зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого.

4. Разработка показателей качества сырья и препаратов исследуемых видов зверобоя и обоснование их включения в НД.

5. Результаты исследований по обоснованию создания импортозамещающих препаратов на основе травы зверобоя.

Связь задач исследования с планами научных работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по темам «Комплексные исследования по проблеме создания новых лекарственных препаратов природного и синтетического происхождения» (№ Государственной регистрации 01200900658) и «Фарма-когностическое и химико-фармацевтическое исследование лекарственных растений и фитопрепаратов» (№ Государственной регистрации 01200405620), а также соответствует тематике Проблемной комиссии по химико-фармацевтическим наукам.

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на XI и XII Всероссийских конгрессах "Экология и здоровье человека" (Самара, 2007, 2010), на научно-практической конференции «Аспирантские чтения» (Самара,

2009, 2010), на VII Международном симпозиуме по фенольным соединениям: фундаментальные и прикладные аспекты (Москва, 2009). Выполнение фрагментов диссертационного исследования поддержаны по линии программы «У.М.Н.И.К-2008» (Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере).

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 28 научных работах, из них 9 статей в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 121 странице машинописного текста, содержит 24 таблицы, 55 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4-х глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 177 источников, из которых 38 - на иностранных языках. В Приложения вынесены: материалы по разработке НД, акты внедрения, рационализаторские предложения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Морфолого-анатомическое исследование плодов зверобоя продырявленного, зверобоя пятнистого и зверобоя изящного

Современная нормативная документация, регламентирующая качество травы зверобоя, имеет в своей структуре раздел «Микроскопия». Однако, за последние пять лет некоторыми отечественными авторами проводились исследования по диагностике травы зверобоя, и предлагались новые усовершенствованные трактовки указанного раздела ФС. Анализ литературы выявил некоторую несогласованность в представлении о сроках заготовки сырья и качестве травы зверобоя продырявленного. В частности, недостаточно корректно описано наличие плодов в сырье и их значимость при определении времени сбора сырья, значительно влияющего на концентрацию в нём действующих веществ.

В некоторых источниках, в частности, в издании «Правила сбора и сушки лекарственных растений» при описании времени сбора травы указано, что заготовку ведут в фазу цветения, до появления незрелых плодов, что подразумевает под собой отсутствие плодов в сырье. Однако в ГФ СССР XI издания наличие плодов в сырье при сборе травы не оговаривается, указана лишь фаза цветения, а в разделе «Внешние признаки сырья» присутствует описание плодов в цельном и измельченном виде. Между тем, многочисленные исследования указывают на целесообразность сбора травы зверобоя именно в фазу цветения, когда отличается содержание БАС. Очевидно, что наличие плодов, особенно зре-

лых свидетельствует о несвоевременном сборе сырья и о низком содержании целевых веществ. Следовательно, необходимо усовершенствование раздела «Микроскопия» позволяющего обнаружить присутствие в сырье компонента, который является маркёром нарушения регламента заготовки сырья. В нашем случае таким маркёром является зрелый плод зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного.

Микроскопическое исследование цельных и измельченных плодов зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого проводили при помощи световых микроскопов (цифровой микроскоп Мойс БМ111 с увеличением х40; хЮО; =<400; хЮОО, цифровой стереоскопический микроскоп Мойс БМ-39С-К9СО-А с увеличением *40; х20). Исследованию подвергалась плоды и семена зверобоя продырявленного, зверобоя пятнистого и зверобоя изящного, а также порошки вышеперечисленных растений (рис. 1-4).

Рис. 1. Плод зверобоя продырявленного. Поперечный срез (х20)

Обозначения-. 1 - оболочка плодолистика; 2 -полость плодолистика; 3 - перегородка син-карпной коробочки; 4 - эндокарпий; 5 - плацента плода.

Рис. 2. Экзокарпии плода зверобоя продырявленного. Вид с поверхности (х400)

■ I

А Б

Рис. 3. Кожура семени зверобоя пятнистого. Вид с поверхности (х400)

А - Фокус на поверхности эпидермальных клетки; Б - Фокус на нижележащие вместилища мезокарпия. Обозначения: 1 - эпидермальная стенка; 2 -перегородка вместилищ

А Ь

Рис. 4. Порошок травы зверобоя изящного

А - Фрагмент порошка травы (х20); Б - Фрагмент плода в порошке травы (х40)

В результате проведенных морфолого-анатомических исследований изучены возможности использования особенностей строения плодов при определении примесных видов зверобоя, а также определены анатомо-морфологические признаки зрелых плодов и семян фармакопейных видов зверобоя, позволяющие идентифицировать некачественное сырье. Результаты исследований свидетельствуют о том, что в качественных образцах сырья зверобоя содержание плодов варьируется от 2,0 до 4,1%, что дает основание рекомендовать в качестве нового числового показателя для сырья «Зверобоя трава» - «Содержание плодов не более 5%».

2. Изучение химического состава травы зверобоя пятнистого (Hypericum maculatum Gantz.)

Проведено предварительное сравнительное исследование компонентного состава извлечений из травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного методом ТСХ (рис. 5).

На хроматограмме визуально наблюдалось отличие в содержании флаво-ноидов (рис. 5). Обнаружено, что в зверобое продырявленном рутин преобладает над гиперозидом, тогда как в случае зверобоя пятнистого гиперозид является доминирующим флавоноидом. Этот факт имеет важное значение, так как ранее было доказано, что гиперозид обладает антидепрессантной активностью.

SYB(4:1:2)

о О

Оо о оОо

Рис. 5. Схема ТСХ препаратов зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого.

Обозначения: 1 - спирто-водное извлечение из травы зверобоя продырявленного; 2 - спирто-водное извлечение из травы зверобоя пятнистого; 3 - PCO гиперозида; 4 - PCO рутина; 5 -PCO бисапигенина.

Наличие батахромного сдвига при реакции комплексообразования с алюминия хлоридом свидетельствует о наличии флавоноидов (рис. 6). Следовательно, эта реакция является качественной на определение флавоноидов в траве зверобоя пятнистого.

Проведен спектральный анализ спирто-водного извлечения зверобоя пятнистого зверобоя. В этом случае, как и в траве зверобоя продырявленного, наблюдаются максимумы длин волн, характерные для флавоноидов и антрацен-производных данного растения.

ff———

:—1

4M__^

190 2?0 250 310 WO 370 400 430 4M 490 5Й 550 МО 610 640 670 700 Дтшвеолны. нм

100 220 КО 2В0 110 340 270 40D 4'j'J 460 400 БгО SSO SSO 610 640 670 700

Рис. 6. Электронные спектры раствора извлечения из травы зверобоя пятнистого

Обозначения; исходный спектр (1) и спектр в присутствии алюминия хлорида (2)

Рис. 7. Дифференциальный спектр раствора извлечения из травы зверобоя пятнистого

Максимум поглощения, характерный для флавоноидов (рутин, гиперо-зид), наблюдался при длине волны 412 нм (рис. 7).

Также диагностическим признаком для травы зверобоя пятнистого является наличие антраценпроизводных, для которых характерен максимум поглощения при длине волны 591± 2 нм.

Результаты исследований спектральных характеристик основных групп БАС фармакопейных видов зверобоя легли в основу количественной оценки действующих веществ изучаемых объектов. Для количественного определения суммы флавоноидов и суммы антраценпроизводных использовали метод спек-трофотометрии, что в сравнительном аспекте представлено в табл. 1.

Таблица 1

Содержание основных групп действующих веществ в траве и препаратах

зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного

Объект Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, % Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин, %

Трава зверобоя пятнистого 8,69±0,01 0,41 ±0,01

Трава зверобоя продырявленного 6,18 ±0,01 0,61±0,01

После установления природы основных групп БАС изучаемых видов зверобоя с целью выделения индивидуальных веществ фенольной природы из травы зверобоя пятнистого использована колоночная хроматография. Для этого из сырья был получен жидкий экстракт зверобоя пятнистого (1:1). Затем полученный экстракт высушивали на силикагеле марки Ь 40/100 и наносили на слой силикагеля, сформированный в хлороформе. В качестве сорбента служил сшга-кагель марки Ь 40/100, а элюентами являлись спирто-хлороформные смеси и спирт.

В результате хроматографического разделения веществ на колонке силикагеля и последующей рехроматографии на полиамиде выделены 6 индивидуальных соединений, идентифицированных на основании данных УФ-, ЯМР-, масс-спектров и результатов химических превращений. Данные соединения идентифицированы как гиперозид, рутин, кверцетин, гиперицин, хлорогеновая кислота, гиперфорин (табл. 2).

Таблица 2

Выделенные и идентифицированные вещества травы зверобоя пятнистого

Выделенное вещество Формула

он "VYV^ V Y CGO' НО О Гиперозид C2iH2oOi2,Xmiix 362 нм; Т. пл. 233-235° он ^ ООсЯтяп НО О Рутин С27Нзо016;^шге 362 нм; Т. пл. 192-194°

он А^ОН Vv^ НО О Кверцетин С15Н,0О7: 372 нм; Т. пл. 312-314° НО О ОН но о он Гиперицин C3oHi608; Хшах 592 нм Т. пл. 280-285°

* у\н он Хлорогеновая кислота Ci6H)809; Хшах 243 нм Т. пл.203-205° х'Х Гиперфорин С35Н54О4; А,,,^ 275 нм

На рисунке 8 приведен ЯМР-спектр кверцетина, который лежит в основе гликозидов рутина и гиперозида.,

Рис. 8. ЯМР-спектр кверцетина

3. Сравнительное исследование флавоноидного состава травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного методом ВЭЖХ

Исследованию подвергались воздушно-сухие образцы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного, заготовленные в фазу цветения (июль 2008 г.). Заготовку осуществляли в Республике Марий Эл и Самарской области. В качестве веществ сравнения использовали достоверно известные рабочие стандартные образцы (PCO) гиперозида, рутина, кверцетина и бисапигенина.

В ходе сравнительных исследований качественного и количественного флавоноидного состава методом ВЭЖХ использовали водно-спиртовые извлечения, полученные из травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного с использованием 70% этилового спирта.

Сравнительный фитохимический анализ осуществляли методом обра-щенно-фазовой ВЭЖХ на хроматографе «Милихром-5» в изократическом режиме (колонка КАХ 6-80-4 №6 25.01.99, стационарная фаза - «Seporon С|8»), В качестве подвижной фазы использовали смесь ацетонитрила и воды в различных соотношениях с добавлением 1 % ледяной уксусной кислоты. Скорость потока элюента в анализе составляла 0,1 мкл/мин.

Достоверность идентификации пиков на хроматограммах подтверждали путем использования в методиках анализа соответствующего внутреннего стандартного вещества. Значения времени удерживания пиков индивидуальных веществ представлены в таблице 3 и 4 и на хроматограмме извлечений.

Таблица 3

Время удерживания пиков веществ травы зверобоя продырявленного

№ пика на Соотношение Время Время удер-

Вещество хромато- ацетона и воды удерживания живания

грамме (подвижная фаза) на хроматограмме извлечения PCO

25:75 2,922 3,121

Рутин 1 30:70 2,819 2,716

25:75 3,878 3,994

Гиперозид 2 30:70 2,819 3,016

25:75 15,805 14,237

Кверцетин 3 30:70 9,563 9,905

25:75 - -

Бисапигенин 4

30:70 23,150 22,357

Таблица 4

Время удерживания пиков веществ травы зверобоя пятнистого

№ пика на Соотношение Время Время удер-

Вещество хромато- ацетона и воды удерживания живания

грамме (подвижная на хромато- PCO

фаза) грамме

извлечения

25:75 3,12 3,121

Рутин 1

30:70 2,819 2,716

25:75 3,919 3,994

Гиперозид 2

30:70 2,819 3,016

25:75 14,395 14,237

Кверцетин 3

30:70 8,607 9,905

Бисапигенин - - - -

Детекцию осуществляли при пяти длинах волн: 254; 270; 290; 330; 360 нм. Исследования по подбору оптимальных условий разделения показали, что элюирующая система растворителей в соотношении 25:75 ацетонитрила и воды с добавлением 1% уксусной кислоты позволяет разделять и детектировать в сравниваемых объектах три доминирующих флавоноидных соединеня: рутин гиперозид и кверцетин (рис. 9 и 10).

Рис. 9. Хроматограмма извлечения из травы зверобоя пятнистого

Обозначения пиков: 1 - рутин; 2 - гиперозид; 3 - кверцетин

В области соответствующего времени удерживания для PCO рутина (пик №1) в аналогичных условиях хроматографирования в траве зверобоя пятнистого обнаружен незначительный пик данного вещества (рис.9).

Известно, что для травы зверобоя продырявленного характерно наличие флавоноида бисапигенина (Куркин В.А., Правдивцева O.E., 2008), однако в условиях системы растворителей 25:75 ацетонитрила и воды с добавлением 1% уксусной кислоты бисапигенин не обнаруживается ни в зверобое продырявленном, ни в зверобое пятнистом (рис.9 и 10).

о. зга- и

о.зоа-

о. 40а

о.эоп.

тая

о.зои

О. LOO -а.аао .

-.024 -

о.

Рис. 10. Хроматограмма извлечения из травы зверобоя продырявленного

Обозначения пиков: 1 - рутин; 2 - гиперозид; 3 - кверцетин

В этой связи проведены дополнительные исследования по подбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющие детектировать наличие бисапигенина в траве зверобоя продырявленного (рис. 11). Однако в случае зверобоя пятнистого бисапигенин не обнаружен (рис. 12). Следовательно, наличие бисапигенина характерно лишь для травы зверобоя продырявленного.

Установлено, что доминирующим флавоноидом извлечений из травы зверобоя пятнистого является гиперозид (пик № 2), тогда как рутин определен лишь в следовых количествах (рис.9).

Что касается зверобоя продырявленного, то в извлечениях из сырья данного растения преобладает рутин (пик I) на фоне достаточно высокого содержания гиперозида (пик 2) (рис. 10).

Кверцетин (пик 3) обнаружен в обоих видах (рис. 9 и 10), однако содержание данного компонента невысокое.

1 .зоо

1.300

подвижна* фаза ацетогапркгГ

вода 50:70 с добавлением I % ледяной уксусной кислоты

а.ши Э.иии 1и.иии га.иии 20.000 2Э.9ав

Рис. 11. Хроматограмма извлечения из травы зверобоя продырявленного

Обозначения пиков: 1 - рутин; 2 - гиперозид; 3 - кверцетин; 4 - бисапигенин

О.бЗО 0.600

! подвижная фа« ацетонгарип-яода 50"70 с добавлением \ % ледлмой уксусной кислоты

А.

ШЕЗ

г?в

20.000 23.9

Рис. 12. Хроматограмма извлечения из травы зверобоя пятнистого

Обозначения пиков: 1 - рутин; 2 - гиперозид; 3 - кверцетин

Принимая во внимание то обстоятельство, что флавоноидный состав зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого имеет некоторые различия, представляет интерес количественная оценка уровня содержания флавоноидов в исследуемых видах зверобоя.

С целью количественного определения содержания отдельных флавоноидов разработана методика ВЭЖХ-анализа.

Методика количественного определения содержания флавоноидов в траве зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного. Около 1 г (точная навеска) воздушно-сухого образца измельченного сырья с размером частиц, проходящих через сито с отверстиями диаметром ! мм, помещали в колбу с притертой крышкой емкостью 100 мл, добавляли 40 мл 70% этилового спирта. Колбу взвешивали на тарирных весах с точностью до ± 0,01 г и присоединяли к обратному холодильнику. Экстракцию осуществляли при нагревании на кипя-шей водяной баке в течение 60 мин. Извлечение охлаждали, доводили на тарирных весах до первоначальной массы 70% этиловым спиртом и фильтровали через бумажный фильтр с красной полосой.

5 мкл полученного извлечения вводили в хроматограф «Милихром-5» и хроматогра-фировали со скоростью потока 0,1 мл/мин. Детекцию анализируемых веществ проводили при аналитической длине волны 360 нм. Анализ осуществляли в трех повторностях.

Параллельно осуществляли анализ растворов РСО рутина, кверцетина, гиперозида, бисапигешгна при длине волны 360 нм.

Содержание флавоноидов в процентах (X) в траве зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного в пересчете на абсолютно сухое сырьё и соответствующий стандарт вычисляли по формуле:

„ Яхт„с.„хКл.хК„х100х100

Х =-——-—--,где

HPCOxmxVnxVKx(\0Q~W)

Н - значение высоты пика определяемого флавоноида на хроматограмме испытуемого раствора;

Н рсо - значение высоты пика на хроматограмме раствора соответствующего РСО;

Vk - объём разведения пробы, мл;

Vn - объём пробы раствора, вводимого в колонку, мкл;

m - масса сырья, г;

трсо - масса РСО, г

Установлено, что содержание доминирующего флавоноида - гиперозида в траве зверобоя пятнистого составляет в среднем 6,50±0,01%, в траве зверобоя продырявленного - 2,50±0,01%%. Рутин присутствует в следовых количествах в траве зверобоя пятнистого, тогда как в зверобое продырявленном его содержание достигает 1,30±0,01%%. Содержание кверцетина в обоих видах невысокое и составляет для зверобоя продырявленного - до 0,40±0,01%%, для зверобоя пятнистого - до 0,23±0,01%%. Бисапигенин не выявлен в образце травы зверобоя пятнистого, тогда как в траве зверобоя продырявленного fcro содержание составляет около 1,05±0,01%%.

4. Получение и стандартизация новых лекарственных препаратов на основе сырья зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного

Данные исследования направлены на обоснование создания импортозамещающих антидепрессантных лекарственных препаратов на основе травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного. Проведены исследования по разработке новых лекарственных форм (сироп и таблетки), а также по подбору дозы и способу приготовления вышеперечисленных препаратов. По результатам этих исследований был получен сироп на основе сахарозы и сироп на основе сорбита с использованием жидкого экстракта, полученного на 70% этиловом спирте (1:2), Hypericum maculatum Grantz. и Hypericum perforatum L. Препарат «Зверобоя таблетки» получен с использованием сухого экстракта зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного.

4.1. Стандартизация лекарственного препарата «Зверобоя сироп»

С целью разработки способа получения препарата «Зверобоя сироп» было подготовлено по две партии препаратов сиропа на основе сахара-рафинада с 5%

и 10% концентрацией и сиропа на основе сорбита с 5% и 10% концентрацией. Данные виды сиропа изготавливались как без добавления стабилизатора, так и со стабилизатором - лимонной кислотой, в количестве 1% от массы экстракта.

Для новых препаратов «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки» разработаны методики качественного и количественного анализа. Определены числовые показатели содержания основных действующих веществ препарата «Зверобоя сироп» (сумма флавоноидов в пересчете на рутин не менее 0,020%, сумма антраценпроизводных в пересчете на гиперицин не менее 0,0015%) и препарата «Зверобоя таблетки» (сумма флавоноидов в пересчете на рутин от 0,012 г до 0,017 г, сумма антраценпроизводных в пересчете на гиперицин от 0,0011 г до 0,0015 г). Для новых импортозамещающих препаратов «Зверобоя сироп» и "Зверобоя таблетки разработаны проекты ФСП.

Качественный анализ лекарственного препарата «Зверобоя сироп» предложено осуществлять методом ТСХ системы растворителей: бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2).

При этом не выявлены качественные отличия между сиропом без стабилизатора и сиропом со стабилизатором (рис. 13).

БУВ{4:1.2)

о 0 „ „ о ©

ООО О О

О О ООО О о

Оо ООО о О

-о-оооо 12 3 4} ь - S » 10

Рис. Схема ТСХ лекарственного препарата «Зверобоя сироп»

Обозначения: 1 - жидкий экстракт зверобоя продырявленного; 2 - жидкий экстракт зверобоя пятнистого; 3 - 5% сироп на основе экстракта зверобоя продырявленного без стабилизатора; 4 - 5% сироп на основе экстракта зверобоя продырявленного со стабилизатором; 5 - 5% сироп на основе экстракта зверобоя пятнистого без стабилизатора; 6 - 5% сироп на основе экстракта зверобоя пятнистого со стабилизатором; 7 -PCO рутина; 8 - PCO гиперозида; 9 -PCO кверцетина; 10 - PCO бисапигенина.

Для нового лекарственного препарата «Зверобоя сироп» разработаны методики количественного определения с использованием метода спектрофото-метрии.

Результаты анализа ТСХ и спектрофотометрии свидетельствуют о том, что сироп зверобоя как на основе сахара, так и на основе сорбита не требует стабилизации, что в последующем было подтверждено при изучении всех нормируемых параметров при хранении образцов.

В ходе разработки нового импортозамещающего лекарственного препарата «Зверобоя таблетки» использовали сухой экстракт. В качестве сырья использовалась высушенная трава зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого.

Из полученного сухого экстракта была сформирована таблеточная масса и получены таблетки, которые были исследованы на прочность на раздавливание, прочность на истирание, распадаемость, растворение. Качество таблеточной массы проверяли методом ТСХ-анализа.

Для нового лекарственного препарата «Зверобоя таблетки» разработана методика количественного определения с использованием метода спектрофотометрии.

4.2. Обоснование целесообразности создания новых импортозамещающих лекарственных препаратов «Зверобоя сироп» и «Зверобоя

таблетки»

С целью обоснования целесообразности создания антидепрессантных лекарственных препаратов на основе травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного на базе кафедры фармакологии ГБОУ ВПО Сам ГМУ Минздрав-соцразвития России изучена антидепрессантная активность исследуемых образцов спирто-водных извлечений с использованием теста «Отчаяние» и ан-ксиолитическая активность с использованием теста «Приподнятый крестообразный лабиринт».

Изучению подвергали спирто-водные извлечения, на основе 70% спирта из травы обоих растений.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что антидепрессантная активность препарата зверобоя пятнистого в два раза выше, чем у препарата зверобоя продырявленного (табл. 7). На наш взгляд, этот факт связан с высоким содержанием флавоноида гиперозида в траве зверобоя пятнистого по сравнению с травой зверобоя продырявленного (6,5% и 2,0% соответственно), поскольку ранее для гиперозида была определена антидепрессантная активность.

Интересно, что для гиперицина также характерна антидепрессантная активность (табл. 7). В качестве препаратов сравнения использовали антидепрес-сантный препарат «Деприм» и синтетический препарат «Амитриптилин».

Таблица 7

Результаты исследования антидепрессантной активности препаратов

зверобоя

Препарат Время движения, секунды

Контроль (1) 78,3 ± 13,8

Настойка зверобоя продырявленного 97,9 ± 15,2

Настойка зверобоя пятнистого 180,0 ± 15,3*

Контроль (2) 64,2 ± 7,4

Гиперицин 112,1 ± 15,7

Амитриптилин 138,3 ± 11,9

Деприм 94,3 ± 12,3

Примечание к таблице 1: * - различия достоверны по отношению опыта и контроля при Р < 0,01.

Результаты исследований, полученных с помощью теста «Приподнятый крестообразный лабиринт», свидетельствуют о том, что препараты обоих видов зверобоя обладают анксиолитической активностью (табл. 8).

Таблица 8

Результаты исследования анксиолитической активности препаратов

зверобоя

Препарат Латентный период, секунды Пребывание в открытых рукавах, секунды Пребывание в закрытых рукавах, секунды Пребывание на центральной площадке, секунды Число заходов в открытые рукава Число заходов в закрытые рукава

Контроль (1) 4,4 ±2,2 4,2 ± 2,0 287,5 ± 3,9 3,9 ±1,2 0,7 ±0,3 2,4 ± 4,3

Настойка зверобоя продырявленного 8,6 ±5,6 2,5 ±1,6 280,5 ± 6,5 8,4 ±3,7 0,3 ± 0,2 2,1 ±0,6

Настойка зверобоя пятнистого 3,2 ± 0,7 9,3 ± 5,9 268,0 ±9,3 19,5 ±6,1* 0,8 ± 0,6 2,8 ±0,8

Контроль (2) 2.7 ±1,1 10,2 ± 5,0 270,5 ± 10,9 16,7 ± 6,6 1,7 ±0,8 3,8 ± 1,1

Гиперицин 1,8 ±0,4 22,2 ± 6,7 241,8± 11,0 33,5 ±5,4 3,3 ± 0,8 5,2 ± 0,4

Примечание к таблице 2: * - различия достоверны по отношению опыта и контроля при Р < 0,05.

Кроме того, по результатам теста «Приподнятый крестообразный лабиринт» обнаружено наличие анксиолитической активности для гиперицина (табл. 8).

Параллельно с изучением спектра нейротропной активности была исследована диуретическая активность препаратов зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого. В результате исследований обнаружено наличие диуретической активности для препаратов зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого, характерной в равной степени для препаратов обоих видов, сопоставимой с эффектом фуросемида.

Проведены исследования по определению класса токсичности препаратов зверобоя. В качестве исследуемых препаратов использовали сухой экстракт зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого. В результате опыта все животные выжили. Каких-либо изменений в их поведении не наблюдалось. Нарушение работы ЖКТ, выпадение шерсти и прочих проявлений не выявлено. По результатам опыта следует относить препараты зверобоя к IV классу токсичности - малоопасные.

ВЫВОДЫ

1. В результате сравнительного морфолого-анатомического изучения плодов и семян зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) , зверобоя пятнистого (Hypericum maculatum Grantz) и зверобоя изящного {Hypericum elegans Steph.) выявлены особенности строения плодов (форма, гистологические особенности), что может быть дополнительно использовано при определении близкородственных видов зверобоя и идентификации некачественного сырья. Обосновано включение в ФС «Зверобоя трава» нового числового показателя «Содержание плодов не более 5%».

2. С использованием ТСХ и ВЭЖХ проведен сравнительный анализ травы зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого. При этом выявлены отличия флавоноидного состава растений. В траве зверобоя пятнистого доминирующим флавоноидом является гиперозид, обладающий выраженной антидепрессантной активностью, а в траве зверобоя продырявленного преобладает рутин. В условиях ВЭЖХ изучены особенности поведения флавоноидов травы зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого на сорбенте с обращенной фазой. При этом бисапигенин, характерный для травы зверобоя продырявленного, не обнаружен в траве зверобоя пятнистого.

3. С использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии в сочетании с традиционными методами химического анализа из травы зверобоя пятнистого выделены и идентифицированы 6 индивидуальных веществ: флавоноиды рутин, гиперозид и кверцетин, антраценпроизводное гиперицин, флорог-люцин гиперфорин, фенилпропаноид - хлорогеновая кислота.

4. С использованием ВЭЖХ проведено сравнительное исследование доминирующих флавоноидов в траве зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого и определено, что количество гиперозида составляет - 6,50% ±0,3%, рутина - 0,10%±0,02% и кверцетина - 0,23%±0,02% в траве зверобоя пятнистого, в траве зверобоя продырявленного содержание гиперо-

зида - 1,30%±0,2%, рутина - 2,5%±0,3%, бисапигенина 1,05%±0,03% и кверцетина 0,40%±0,05%.

5. Разработана методика качественного анализа новых лекарственных препаратов на основе травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки» методом ТСХ-анализа, с использованием PCO гиперозида, рутина, кверцетина, бисапигенина. Определены числовые показатели содержания основных действующих веществ препарата «Зверобоя сироп» (сумма флавоноидов в пересчете на рутин не менее 0,020%, сумма антраценпроизводных в пересчете на гипе-рицин не менее 0,0015%) и препарата «Зверобоя таблетки» (сумма флавоноидов в пересчете на рутин от 0,012 до 0,017, сумма антраценпроизводных в пересчете на гиперицин от 0,0011 до 0,0015).

6. Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы антраценпроизводных, в пересчете на гиперицин для новых лекарственных препаратов на основе травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки». Полученные результаты положены в основу разработки проектов ФСП «Зверобоя сироп», «Зверобоя таблетки».

7. Установлено, что лекарственные препараты на основе травы зверобоя пятнистого по своей антидепрессантной активности в два раза превосходят таковой эффект препаратов из травы зверобоя продырявленного. Для фармакопейных видов зверобоя впервые выявлена анксиолитическая активность, а для антраценпроизводного гиперицина - антидепрессантный эффект.

8. Обоснована целесообразность использования в качестве источника антидепрессантных препаратов наряду с травой зверобоя продырявленного травы зверобоя пятнистого.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Зимина, Л.Н. Нейротропная активность настоек двух видов зверобоя / Л.Н. Зимина, В.А.Куркин//Фармация.-2011. -Т. 55,- №5.-С. 12-14.

2. Зимина, Л.Н. Изучение ресурсосберегающих морфолого-анатомических качественных характеристик зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого / Л.Н. Зимина,

B.А. Куркин, В.М. Рыжов, Л.В. Тарасенко // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2011. - Т. 13. - № 1(4). - С. 827-830.

3. Куркин, В.А. Вопросы стандартизации сырья и препаратов зверобоя / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Фармация. - 2007. - Т. 55. - № 4. - С. 12-14.

4. Куркин, В.А. Сравнительное микроскопическое исследование некоторых видов зверобоя / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Фармация. - 2009. - Т. 57. -№ 3. - С. 11-12.

5. Правдивцева, O.E. Перспективы создания антидепрессантных лекарственных средств на основе сырья зверобоя продырявленного / O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Труды XI Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека. - Самара, 2006. -

C. 210-211.

6. Куркин, В.А. Актуальные аспекты создания нейротропных фитопрепаратов / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, Л.Н. Зимина, A.B. Дубищев, Д.Г. Буланкин, Д.В. Корчагина // Медицинский альманах. - 2009. - № 1. - С. 46-49.

7. Куркин, В.А. Изучение нейротропной активности новых лекарственных препаратов зверобоя травы / В.А. Куркин, А.В. Дубшцев, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина,

A.А. Аюпова, Е.А. Боткин /У Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Издательство: Самарский научный центр российской академии наук.-2009.-Т. П.-№ 1(6). -С. 1300-1303.

8. Правдивцева, О.Е. Ресурсосберегающие аспекты заготовки высококачественного сырья зверобоя. / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин, Л.Н. Зимина И Изв. Самарского научного центра Российской академии наук (Спец. Выпуск «XII Конгресс "Экология и здоровье человека»), - 2008. - Т. 2. - С. 258-260.

9. Куркин, В.А. Создание ресурсосберегающих технологий переработки лекарственного растительного сырья / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, О.Е. Правдивцева,

B.Б. Браславский, А.В. Куркина, М.В. Егоров, Л.В.Тарасенко, В.В. Стеняева,

B.М. Рыжов, Н.Р. Шагалиева, М.М. Анисимова, А.В. Егорова // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2010. - Т.12. - № 1(3). -

C. 737-740.

10. Куркин, В.А. Анализ номенклатуры антидепрессантов, представленных на фармацевтическом рынке Российской Федерации / В.А. Куркин, Е.П. Гладунова, Л.Н. Зимина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. - Пятигорск, 2007. - Вып. 63. - С. 605-609.

11. Куркин, В.А. Исследование зверобоя травы на содержание суммы флавоноидов и ан-траценпроизводных / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин, Л.Н. Зимина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. - Пятигорск, 2008. -Вып. 63.-С. 85-86.

12. Куркин, В.А. Изучение подходов к оптимизации методик анализа травы зверобоя / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Материалы III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». -Барнаул, 2007. - Кн. 2. - С. 287-291.

13. Куркин, В.А. Анализ номенклатуры антидепрессантных лекарственных средств, представленных на фармацевтическом рынке Российской Федерации / В.А. Куркин, Е.П. Гладунова, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина И Фармацевтический менеджмент. - 2008. - № 3. - С. 3-5.

14. Куркин, В.А. Актуальные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего фенольные соединения / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, О.Е. Правдивцева, А.В. Куркина, В.В. Стеняева, Рыжов, Ф.Ш. Сат-дарова, Л.Н. Зимина, Ламрини М.Х., Д.Г. Буланкин, М.М. Анисимова, Л.Р. Сулейма-нова // Тезисы докладов XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2009. - С. 690.

15. Куркин, В.А. Актуальные вопросы создания нейротропных фитопрепаратов /

B.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина, Д.Г. Буланкин // Материалы VII Международной конференции «Медико-социальная экология личности состояние и перспективы». - Минск, 2009. - С. 268-270.

16. Правдивцева, О.Е. Сравнительный анализ химического состава надземных частей некоторых видов рода Hypericum L. / О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина, В.А. Куркин // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. - Пятигорск, 2009. - Вып. 64. - С. 96-98.

17. Правдивцева, О.Е. Перспективы создания антидепрессантных лекарственных средств на основе сырья зверобоя продырявленного / О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Труды XI Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека. - Самара, 2006. -

C. 210-211.

18. Зимина, Л.Н. Исследование химического состава травы зверобоя продырявленного методом колоночной хроматографии / Л.Н. Зимина, В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева //

Труды 1-го Международного форума (б-й Международной конференции). - Самара, 2005.-С. 17-19.

19. Куркин, В.А. Актуальные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего фенольные соединения / Куркин В.А., Авдеева Е.В., Браславский

B.Б., Правдивцева О.Е., Куркина А.В., Стеняева В.В., Рыжов В.М., Сатдарова Ф.Ш., Зимина Л.Н., Ламрини М.Х., Буланкин Д.Г., Анисимова М.М., Сулейманова Л.Р. // XVI Росс. нац. конг. «Человек и лекарство». - М., 2009. - С. 690.

20. Зимина, Л.Н. Совершенствование методов стандартизации сырья и препаратов зверобоя продырявленного / Л.Н. Зимина II Тезисы докладов XXXI Самарской областной студенческой научной конференции. - Самара, 200S. - С. 113.

21. Зимина, Л.Н. Фитохимическое исследование сырья и препаратов травы зверобоя продырявленного / Л.Н. Зимина // Тезисы докладов 53-й итоговой студенческой научной конференции с международным участием. - Москва, МГМСУ, 2005 -

C. 148-149.

22. Зимина, Л.Н. Фитохимическое исследование травы зверобоя / Л.Н. Зимина // 79-я Всероссийская студенческая научная конференция, посвященная 1000-летию Казани. Сборник тезисов. Казань, 2005. - С. 202.

23. Зимина, Л.Н. Исследования химического состава зверобоя продырявленного / Л.Н. Зимина, Ю.М. Шачнева // Тезисы докладов 74-й итоговой конференции СНО «Человек и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты российской науки». Самара, 2006. - С. 117-118.

24. Зимина, Л.Н. Химико-фармацевтическое исследование сырья и препаратов зверобоя / Л.Н. Зимина // Материалы региональной конференции дипломированных специалистов Молодые ученые - медицине. - Самара, 2010.-С.300-302.

25. Зимина, Л.Н. Сравнительное химико-фармацевтическое исследование сырья и препаратов зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого / Л.Н. Зимина // Сборник научных трудов «II Российский фитотерапевтический съезд». - Москва, 2010. -С. 132-135.

26. Куркин, В.А. Актуальные аспекты использования государственных стандартных образцов в фармацевтическом анализе растительного сырья и фитопрепаратов / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, О.Е. Правдивцева, А.В. Куркина, М.В. Егоров, В.В. Стеняева, В.М. Рыжов, Л.Н. Зимина, Д.Г. Буланкин, М.М. Анисимова, Л.Р. Сулейманова, Н.Р. Шагалиева, А.И. Хусаинова // Человек и лекарство: Тезисы докладов XVII Российского национального конгресса. - М., 2010. - С. 658-659.

27. Зимина, Л.Н. Совершенствование методов стандартизации сырья и препаратов зверобоя / Л.Н. Зимина // 15 Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые ученые в медицине». - Казань, 2010. - С. 247.

28. Kurkin, Vladimir A. The new methodological approaches to the standardization of the some medicinal plants containing the flavonoids and phenylpropanoids /Vladimir A. Kurkin, Elena V. Avdeeva, Vitaly M. Ryzhov, Valery B. Braslavsky, Olga E. Pravdivtseva, Anna V. Kurkina, Maxim V. Egorov, Olga V. Shariva, Elena S. Artamonova, Farida Sh. Satdarova, Anna V. Egorova, Mohammed Lamrini, Lyubov N. Zimina, Mariya M. Anisimova, Denis G. Bulankin, Andrey V. Smimov // XXIV International Conference on Polyphenols "Polyphenols Communication 2008". - Salamanca, 2008. - P. 185-186.

29. Удостоверение на рационализаторское предложение № 163 ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России от 20.06.2011 Способ получения средства «Зверобоя экстракт сухой» / В.А. Куркин, Л.Н. Зимина.

30. Удостоверение на рационализаторское предложение № 164 ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России от 20.06.2011 «Способ получения гиперицина из травы зверобоя пятнистого» / Л.Н. Зимина, В.А. Куркин.

Подписано в печать 21.06.2011 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать оперативная. Объем 1,45 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1366.

Отпечатано в типография ООО «Офорт». 443080, г. Самара, ул. Революционная, 70, литера П. Тел.: 372-00-56, 372-00-57.

Оглавление диссертации Зимина, Любовь Николаевна :: 2011 :: Самара

п/п Наименование раздела № страницы

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ИТОГИ И ПЕРСПЕКТИВЫ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ФАРМАКОПЕЙНЫХ ВИДОВ ЗВЕРОБОЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Историческая справка

1.2. Ботанико-фармакогностическое описание некоторых представителей рода Hypericum

1.2.1. Ботаническое описание. Распространение

1.2.2. Химический состав фармакопейных видов зверобоя

1.2.3. Применение фармакопейных видов зверобоя -зверобоя пятнистого Hypericum maculatiim Granz. и зверобоя продырявленного Hypericum perforatum L.

1.2.4. Заготовка и сушка

1.2.5. Изучение перспектив создания импортозамещающих антидепрессантных препаратов

1.2.6. Сравнительный анализ побочных действий разных групп антидепрессантов

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Химические и хроматографические методы

2.2.2. Метод тонкослойной хроматографии

2.2.3. Метод колоночной хроматографии

2.2.4. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

2.3. Физико-химические и спектральные методы ('Н

ЯМР-спектроскопия, УФ- и масс-спектрометрия)

2.4. Количественное определение

2.4.1, Методика спектрофотометрического количественного определения суммы флавоноидов в траве зверобоя

2.4.2. Методика прямого спектрофотометрического определения суммы антраценпроизводных в траве зверобоя

2.5. Методики морфолого-анатомическго анализа

2.6. Технологические методы

2.7. Методики фармакологического исследования

2.7.1. Тест «Отчаяние»

2.7.2. Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт»

ГЛАВА 3. МОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПЛОДОВ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РОДА HYPERICUM

3.1. Морфолого-анатомическое исследование плодов Hypericum perforatum L.

3.1.1. Изучение морфологических характеристик плодов Hypericum perforatum L.

3.1.2. Изучение анатомо-гистологических особенностей плодов Hypericum perforatum L.

3.2. Морфолого-анатомическое исследование плодов Hypericum maculaium Grantz.

3.2.1. Изучение морфологических характеристик плодов Hypericum maculatum Grantz.

3.2.2. Изучение анатомо-гистологических особенностей плодов Hypericum maculatum Grantz.

3.3. Морфолого-анатомическое исследование плодов Hypericum elegans Steph.

3.3.1. Изучение морфологических характеристик плодов Hypericum elegans Steph.

3.3.2. Изучение анатомо-гистологических особенностей плодов Hypericum elegans Steph.

3.4. Микроскопия измельченного сырья зверобоя Hypericum perforatum L., Hypericum maculatum Grantz., Hypericum elegans Steph.

ГЛАВА 4. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ТРАВЫ И ПРЕПАРАТОВ ЗВЕРОБОЯ ПЯТНИСТОГО

HYPERICUMMACULATIJM Grantz.) И ЗВЕРОБОЯ ПРОДЫРЯВЛЕННОГО {HYPERICUM PERFORATUM L.)

4.1. Качественный и количественный анализ травы и препаратов зверобоя пятнистого {Hypericum maculatum Grantz.)

4.2. Выделение и идентификация индивидуальных соединений из травы зверобоя пятнистого {Hypericum maculatum Grantz.)

ГЛАВА 5. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПЛЕКСНОГО СОСТАВА ТРАВЫ ЗВЕРОБОЯ ПЯТНИСТОГО И ЗВЕРОБОЯ ПРОДЫРЯВЛЕНОГО МЕТОДОМ ВЭЖХ

5.1. ВЭЖХ-анализ индивидуальных веществ из травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного

5.2. Методика количественного определения содержания суммы флавоноидов в траве зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного

ГЛАВА 6. СТАНДАРТИЗАЦИЯ И СОЗДАНИЕ ИМПОРТОЗАМЕЩАЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ «ЗВЕРОБОЯ СИРОП» И «ЗВЕРОБОЯ ТАБЛЕТКИ»

6.1. Разработка способа получения и методов анализа препарата «Зверобоя сироп»

6.1.1. Методика качественного анализа препарата «Зверобоя сироп"

6.1.2. Методика количественного анализа препарата «Зверобоя сироп»

6.1.2.1. Определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин

6.1.2.2. Определение суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин

6.2. Разработка способа получения нового препарата «Зверобоя таблетки»

6.2.1. Методика качественного анализа препарата «Зверобоя таблетки»

6.2.2. Методика количественного определения препарата «Зверобоя таблетки»

6.2.2.1. Определение флавоноидов в пересчете на рутин

6.2.2.2. Определение антраценпроизводных в пересчете на гиперицин

6.3. Определение фармакологической активности препаратов фармакопейных видов зверобоя

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Зимина, Любовь Николаевна, автореферат

В настоящее время в качестве источника антидепрессантных лекарственных препаратов природного происхождения служит зверобой продырявленный (.Hypericum perforatum L.). Однако на фармацевтическом рынке Российской Федерации имеются только импортные дорогостоящие препараты («Деприм», «Негрустин» и др.). В нашей стране фармакопейными видами являются зверобой продырявленный и зверобоя пятнистый (Самылина И.А., Северцев В.А.,2003; Киселева T.JI. и др., 2007), из травы которых производят антисептические, противовоспалительные и вяжущие лекарственные средства, и в этом плане данные виды рассматриваются как равноценные. Однако по последним литературным данным обнаружены некоторые отличия между ними как по химическому составу, так и по спектру биологической активности. Учитывая тот факт, что антидепрессантные свойства обусловлены несколькими группами действующих веществ (антраценпроизводными, некоторыми флавоноидами, флороглюцинами), представляется актуальным изучение особенностей химического состава биологически активных соединений (БАС) менее исследованной в этом плане травы зверобоя пятнистого. Результаты данных исследований могут явиться обоснованием рациональности использования сырья травы зверобоя пятнистого в качестве источника импортозамещающих антидепрессантных лекарственных средств.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакогностическое исследование по обоснованию целесообразности разработки антидепрессантаых препаратов на основе травы зверобоя.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Исследование анатомо-морфологических признаков плодов и семян зверобоя продырявленного {Hypericum perforatum L.), зверобоя пятнистого {Hypericum maculatum Grantz.) и зверобоя изящного {Hypericum elegans Steph.).

4. Разработка новых импортозамещающих антидепрессантных препаратов «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки».

5. Разработка метода качественного анализа новых лекарственных препаратов «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки» на основе травы зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого.

Впервые в Российской Федерации разработаны методики ВЭЖХ-анализа для стандартизации зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого, а также выявлены возможности использования ВЭЖХ в качестве метода для определения видовой принадлежности и проведения химической таксации. При исследовании химического состава травы зверобоя пятнистого идентифицированы б индивидуальных соединения: рутин, гиперозид, кверцетин, гиперицин, хлорогеновая кислота, гиперфорин, установление структуры которых проводилось с использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии в сочетании с традиционными методами химического анализа.

Разработаны методики спектрофотометрического количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин для нового лекарственного препарата «Зверобоя сироп», предусматривающие предварительную ацетоновую экстракцию анализируемых БАС.

Основываясь на принципе унификации методики в ряду «ЛРС -лекарственная субстанция - лекарственный препарат» (Самылина И.А. и др.,1994 г.), разработана методика стандартизации сухого экстракта зверобоя для нового лекарственного препарата «Зверобоя таблетки», основанная на определении суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин.

Сравнительное изучение спектра и выраженности нейротропной активности препаратов изучаемых видов зверобоя показало преимущество антидепрессантной активности экстракционных препаратов зверобоя пятнистого в два раза по сравнению с подобными препаратами зверобоя продырявленного. Для фармакопейных видов зверобоя впервые выявлена анксиолитическая активность, а для антрахинона гиперицина - антидепрессантный эффект. Результаты этих исследований свидетельствуют о целесообразности использования травы зверобоя пятнистого в качестве источника антидепрессантных фитопрепаратов. Доказано наличие диуретической активности для экстракционных препаратов зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного.

Результаты исследований используются в научных исследованиях и учебном процессе кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии и кафедры химии фармацевтического факультета ГОУ ВПО Минздравсоцразвития России (акты внедрения от 25.04.2011 г.). Также результаты исследований используются на ЗАО «Самаралектравы», в ГУЗ «Центр контроля качества лекарственных средств Самарской области».

Положения, выдвигаемые на защиту:

2. Результаты изучения химического состава травы зверобоя пятнистого.

3. Обоснование целесообразности применения метода ВЭЖХ-анализа длякачественной и количественной оценки содержания основных БАС в траве зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого.

5. Результаты исследований по обоснованию создания импортозамещающих препаратов на основе травы зверобоя.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по темам «Комплексные исследования по проблеме создания новых лекарственных препаратов природного и синтетического происхождения» (№ Государственной регистрации

01200900658) и «Фармакогностическое и химико-фармацевтическое исследование лекарственных растений и фитопрепаратов» (№ Государственной п регистрации 01200405620), а также соответствует тематике Проблемной комиссии по химико-фармацевтическим наукам.

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на XI и XII Всероссийских конгрессах "Экология и здоровье человека" (Самара, 2007, 2010), на научно-практической конференции «Аспирантские чтения» (Самара, 2009, 2010), на VII Международном симпозиуме по фенольным соединениям: фундаментальные и прикладные аспекты (Москва, 2009). Выполнение фрагментов диссертационного исследования поддержаны по линии программы «У.М.Н.И.К-2008» (Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере).

Основное содержание диссертации опубликовано в 28 научных работах, из них 9 статей в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 122 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы, 55 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4-х глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 177 источников, из которых 38 - на иностранных языках. В Приложения вынесены: материалы по разработке НД, акты внедрения, рационализаторские предложения.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое исследование по обоснованию создания антидепрессантных препаратов на основе травы зверобоя"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. В результате сравнительного морфолого-анатомического изучения плодов и семян зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) , зверобоя пятнистого (Hypericum maculatum Grantz) и зверобоя изящного (Hypericum elegans Steph.) выявлены особенности строения плодов (форма, гистологические особенности), что может быть дополнительно использовано при определении близкородственных видов зверобоя и идентификации некачественного сырья. Обосновано включение в ФС «Зверобоя трава» нового числового показателя «Содержание плодов не более 5%».

3. С использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии в сочетании с традиционными методами химического анализа из травы зверобоя пятнистого выделены и идентифицированы 6 индивидуальных веществ: флавоноиды рутин, гиперозид и кверцетин, антраценпроизводное гиперицин, флороглюцин гиперфорин, фенилпропаноид - хлорогеновая кислота.

104 гиперозида- 1,30%±0,2%, рутина - 2,5%±0,3%, бисапигенина 1,05%±0,03% и кверцетина 0,40%±0,05%.

5. Разработана методика качественного анализа новых лекарственных препаратов на основе травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного «Зверобоя сироп» и «Зверобоя таблетки» методом ТСХ-анализа, с использованием PCO гиперозида, рутина, кверцетина, бисапигенина. Определены числовые показатели содержания основных действующих веществ препарата «Зверобоя сироп» (сумма флавоноидов в пересчете на рутин не менее 0,020%, сумма антраценпроизводных в пересчете на гиперицин не менее 0,0015%) и препарата «Зверобоя таблетки» (сумма флавоноидов в пересчете на рутин от 0,012 г до 0,017 г, сумма антраценпроизводных в пересчете на гиперицин от 0,0011 г до 0,0015 г).

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Зимина, Любовь Николаевна

1. Акопов, И.Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение / И.Э. Акопов. М.: Медицина, 1986. - С. 172-174.

2. Андрющенко, А.В. Выбор терапии при депрессиях / А.В. Андрющенко. -1998.-Т. 1. -№ 2. С. 10-14.

3. Арзамасцев, А.П. Валидация аналитических методов / А.П. Арзамасцев, Н.П, Садчикова, Ю.Я. Харитонов // Фармация. 2006. -Т. 54, № 4. - С.8-12.

4. Арзамасцев, А.П. Основные аспекты совершенствования фармакопейного анализа / А.П. Арзамасцев, B.JL Багирова, Н.П. Садчикова // Хим.- фармац. журн. 2000. - Т. 34, № 5. - С.47-48.

5. Айзенман, Б.Е. Антимикробные препараты из зверобоя / Б.Е. Айзенман, Н.А. Дербенцева. Киев: Наукова думка, 1976. - С. 6-87.

6. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. М.: ГУГК, 1980. -С. 242-243.

7. Атлас по описательной морфологии высших растений З.Т. Артюшенко, А.А. Федоров «плод» Издательство «Наука», 1986. 81с.

8. Бандюкова, В.А. О полифенольных соединениях некоторых видов Hypericum L. / В.А. Бандюкова, Х.Х. Хаматов // Растительные ресурсы. -1972.-Т. 8, вып. 4.-С. 541-547.

9. Ю.Беликов, В.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов / В.В. Беликов, Т.В. Точкова // Фенольные соединения и их физиологические свойства. Алма-Ата, 1973. - С. 168-172.

10. П.Беликов, В.В. Методы анализа флавоноидных соединений // В.В. Беликов, М.С. Шрайбер // Фармация. 1970. - Т. 19, № 1. - С. 66-72.

11. Беликов, B.B. Количественное определение основных действующих веществ у видов Hypericum L. / B.B. Беликов, T.B. Точкова, J1.B. Шатунова, Н.Т. Колесник, И.И. Баяндина // Растительные ресурсы. 1990. - Т. 26, вып. 4. - С. 571-578.

12. Вайс, Р.Ф. Фитотерапия. // Р.Ф. Вайс, Ф. Финтельманн /Руководство: Пер. с нем. -М.: Медицина, 2004. С. 325-354.

13. Власова, A.M. Индикаторные компоненты водных извлечений травы зверобоя / A.M. Власова, К.И. Эллер, Е.В. Чукарина, H.A. Беседина // Фармация. 2006. - Т. 54, № 4. - С. 15-18.

14. ВФС 42-2733-96. Экстракт зверобоя сухой.

15. ВФС 42-275-73. Брикет травы зверобоя.

16. Гаммерман, А.Ф. Лекарственные растения: справочное пособие / А.Ф. Гаммерман, Т.Н. Кадаев, A.A. Яценко-Хмелевский. М.: Высшая школа, 1990.-С. 131-133.

17. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. -Новосибирск: Наука, Сиб. отд., 1990. С. 330

18. Государственная фармакопея КНР (на китайском языке). Пекин, 2000. -Т. 1.-668 с.

19. ГОСТ 15161-64 Трава зверобоя // Лекарственное растительное сырье. М. 1980. С. 95-99.

20. ГОСТ 15161-93. Трава зверобоя. Технические условия. Минск, 1993.

21. Государственный реестр лекарственных средств / Фонд фармацевт, информации. Офиц. изд. (Данные. По состоянию на 10 февраля 2006 г.) -М.: Миндздрав РФ, 2006. Т.1 - 1300 с.

22. Государственный реестр лекарственных растений. Том 2. Г72 Официальное издание. 2008г. С.896

23. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье/ МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. -400с., ил.

24. Гринкевич, Н.И. Легенды и быль о лекарственных растениях / Н.И. Гринкевич, A.A. Сорокина. М.: Наука, 1988. - С. 159-161.

25. Гильдеева, Г.Н. Российский рынок фармацевтических субстанций в 2004г. /Г.Н. Гильдеева, О.В. Соловьева, C.B. Глаголев// Фармация. 2005. - №6. -С. -14.

26. Губанов, И.А. и др. Дикорастущие полезные растения СССР. /И.А. Губанов и др.// М.: «Мысль», 1976. С. 234-236.

27. Денисова, М.Н. Российский фармацевтический рынок в 2004 г. / М.Н. Денисова// Фармация. 2005. - №4. - С. 18-22.

28. Дикевич Е.А., Иванова Д.Н. Применение препаратов растительного происхождения при лечении соматоформных расстройств. // РМЖ, независимое издание для практикующих врачей. 2008. - №26. - С.1801.

29. Дробижев, М.Ю. Гелариум Гиперикум при лечении депрессий в общесоматической сети / М.Ю. Дробижев, А.Л. Сыркин, М.Г. Полтавская, М.Б. Печерская // Психиатрия и психофармакотерапия. 2002. - Т. 4, № 5. -С. 198-199.

30. Дубищев, A.B. Нейротропная активность растительных препаратов, содержащих флавоноиды / A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Тезисы докладов X Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2003.-С. 713.

31. Жариков, М.Н. Основы психиатрии для врачей общего профиля: Библиотека практикующего врача / М.Н. Жариков. М.: Медицина, 2001. -С. 37-42.

32. Завражнов, В.Н. Лекарственные растения: Лечебное и профилактическое использование / В.Н. Завражнов, Р.И. Китаева, К.Ф. Хмелев. Воронеж, 1993.-С. 227-229.

33. Здоровый образ жизни системный подход / В.А. Куркин, А.А. Лебедев, Г.В. Симонова и др. // V Всерос. науч.-практ. конф. «Экология и здоровье человека»: тез. докл. - Самара, 1998. - С. 109-111.

34. Зенкевич, И.Г. Методы количественного хроматографического анализа лекарственных веществ: пособие для фармацевтических работников / И.Г. Зенкевич, В.М. Косман. СПб.: СПХФА, 1999. - 81 с.W

35. Йорданов, Д. Фитотерапия /Д. Йорданов и др.. София: Медицина и физкультура, 1970. - 350 с.

36. Китанов, Г.М. Фитохимическое изучение и анализ видов Hypericum L., произрастающих в Болгарии / Г.М. Китанов // Растительные ресурсы. -1988.-Т. 24, вып. 1.-С. 114-121.

37. Китанов, Г.М. Фитохимическое исследование и анализ видов рода Hypericum L., распространенных в Болгарии / Г.М. Китанов // Фармация (София). 1987. - Т. 37, № 3. - С. 24-29.

38. Киселева,T.JI. Краткая энциклопедия современной фитотерапии с основами гомеопатии. Справочник практического врача. / Т.Л. Киселева и др.. М.: Изд-во профессиональной ассоциации натуротерапевтов, 2010. - 552 с.

39. Красная книга Самарской области. Т1. Редкие виды растений, лишайников и грибов /Под ред. чл.-корр. РАН Г.С. Розенберга и проф. С.В. Саксонова. -Тольятти: ИЭВБ РАН, 2007. 372 с.

40. Колесова, В.Г. Лекарственные растения: Мифы и реальность / В.Г. Колесова,В.А. Марченко, Н.В. Сыровежко // Спб.: СПХФА. 1998.-26 с.

41. Ковров, Г.В. Депрессия в общей практике./Г.В. Ковров, М.А. Лебедев, С.Ю. Палатов// РМЖ, независимое издание для практикующих врачей. 2010. -№8. С.504.

42. Косарев, В.В. Введение в фармакоэкономику. Основы доказательной фармакотерапии / В.В. Косарев. Самара 2004г. - 82 с.

43. Котуков, Г.Н. Культивируемые и дикорастущие лекарственные растения (Справочник) / Г.Н. Котуков. Киев: Наукова думка, 1974. - С. 34-37.

44. Кузнецова, М.А. Сказания лекарственных растениях. / М.А. Кузнецова, A.C. Резникова. М.: «Высшая школа»,1992. С. 85-87.

45. Куркин, В.А. Проблемы рационального использования лекарственных и пищевых растений в научной и народной медицине / В.А. Куркин // Материалы международной научно-практической конференции «Самара в контексте мировой культуры». Самара, 2001. - С. 15-25.

46. Куркин, В.А. Поиск действующих веществ травы зверобоя продырявленного, обладающих нейротропным действием / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, A.B. Дубищев, Д.В. Кадацкая // Тезисы Международного съезда Фитофарм. Микелли, Финляндия, 2004. - С. 278-280.

47. Куркин, В.А. Антидепресантная активность некоторых фитопрепаратов и фенилпропаноидов / В.А. Куркин, A.B. Дубищев, В.Н. Ежков, И.Н. Титова, Е.В. Авдеева // Химико-фармацевтический журнал. 2006. - Т. 40, № 11.-С. 33-38.

48. Куркин, В.А. Анализ номенклатуры антидепрессантов, представленных на фармацевтическом рынке Российской Федерации / В.А. Куркин, Е.П.

49. Гладунова, JI.H. Зимина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Пятигорск, 2007. - Вып. 63. - С. 605-609.

50. Куркин, В.А. Фармакогнозия: Учебник. 2-е изд., перераб. и доп. / В.А. Куркин. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. - С. 794-799.

51. Куркин, В.А. Флавоноиды надземной части Hypericum perforatum / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева // Химия природных соединений. 2007. - № 5. -С. 512-513.

52. Куркин, В.А. Фенилпропаноиды и флавоноиды как источник импортозамещающих лекарственных растительных средств / В.А. Куркин // Тезисы докладов XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2009. - С. 689.

53. Куркин, В.А. Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева. Самара: ГОУ ВПО «СамГМУ»; ООО «Офорт», 2008. - 127 с.

54. Куркин, В.А. Сравнительное исследование содержания суммы флавоноидов и антраценпроизводных в препаратах травы зверобоя / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева // Химико-фармацевтический журнал. 2008. -Т. 42, №10.-С. 39-42.

55. Кудашкина, Н.В. Лекарственная форма из травы зверобоя для применения в гинекологии / Н.В. Кудашкина // Фармация. 2004. - Т. 52, № 3. - С. 36-37.

56. Куркин, В.А. К вопросу о стандартизации лекарственного сырья,содержащего флавоноиды и фенилпропаноиды / В.А. Куркин, О.В.in

57. Маевская, В.Б. Браславский и др. // Применение хроматографии в пищевой, микробиологической и медицинской промышленности: материалы Всесоюз. конф.: тез. докл. Геленджик, 1990. - С. 85-86.

58. Лавренов, В.К. Полная энциклопедия лекарственных растений. Том I. / В.К. Лавренов, Г.Н. Лавренова // СПб.: «Издательский Дом «Нева»; М.: «Олма-Пресс», 1999.-С. 450-456.

59. Ладынина, Е.А. Фитотерапия / Е.А. Ладынина, Р.С. Морозова. Л.: Медицина, 1987.

60. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи / Под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева. М.: «АНМИ», 2001. -488 с.

61. Лекарственные растения. Справочник. -М.: Юнвес. 2002. - С. 91-94.

62. Лекарственные средства: 5000 наименований лекарственных препаратов и их форм: Справочник / Под редакцией М.А. Клюева. М.: Книжный дом локус, рипол классик, 2004. - С. 221-222.

63. Маевский,П.Ф. Флора средней полосы Европейской части СССР. / Под ред. чл.-корр. АН СССР Б.К. Шишкина. 9-е изд. - Л.: Отд. Изд.-во «Колос», 1964.-880 с.

64. Максютина, Н.П. Полифенолы травы Hypericum perforatum и препарата новоиманина / Н.П. Максютина, Т.А. Когет // Химия природных соединений. -1971. № 3. - С. 363-367.

65. Малин, И.И. Побочное действие антидепрессантов./И.И. Малин, В.М. Медведев// Психиатрия и психофармакотерапия. 2002. - № 5. - С. 10-19.

66. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. В 2 т. / М.Д. Машковский. -Изд. 14 -е, перераб., испр. и доп. М.: Новая Волна, 2002, - Т.1 - 540 с.

67. Мельникова, В.А. Новые подходы к комплексной переработке сухой травы зверобоя / В.А. Мельникова, В.А. Вайнштейн, А.Н. ИГиков, И.Е. Каухова // Химико-фармацевтический журнал. 1999. - Т. 33, № 12. - С. 27-30.

68. Мельникова, В.А. Экстракция травы и цветков зверобоя растворителями различной полярности / В.А. Мельникова, В.А. Вайнштейн // Тезисы докладов Международной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции». Санкт-Перербург, 1999. - С. 61.

69. Морозов, П.В. Терапия депрессии и тревожных расстройств в современной психиатрии / П.В. Морозов// Психиатрия и психофармакотерапия. 2005. -№3. - С. 166-168.

70. Мизина, П.Г. Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности / П.Г. Мизина, В.А. Быков, В.А. Куркин // Материалы докл. Междунар. науч. конф. -Томск, 2000. С. 229-230.

71. Михайлов, И. А. Современные препараты из лекарственных растений / И. Михайлов, А. Шретер // М.: Издательский Дом МСП, 1999.

72. Муравьева, Д.А. Технология лекарств: в 2 т. / Д.А. Муравьева. М.: Медицина, 1980. - Т.1. - С. 174.

73. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / под ред. B.JI. Багировой, В.А. Северцева. СПб.: Спец Лит, 2001. - 223 с.

74. НД 42-7136-97. Деприм таблетки, покрытые оболочкой. 8 с.

75. НД 42-12050-01. Негрустин. 6 с.

76. Независимый Профсоюз Провизоров. Обзор рынка антидепрессантов /Независимый Профсоюз Провизоров// Провизор. 2005. - №4. - С. 23-24.

77. Никитина A.A., Панкова И.А. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений. Л; Наука 1982г. - С.556-560.

78. Новиков, B.C. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений./В.С. Новиков, И.А. Губанов//Москва: Дрофа, 202. С. 267-269.

79. Носаль, М.А. Лекарственные растения и способы их применения в народе / М.А. Носаль, И.М. Носаль. Мн.: Полымя, 1997. - С. 77-82.

80. Омельчук-Мякушко, Т.Я. Динамика накопления антимикробных веществ у зверобоя продырявленного / Т.Я. Омельчук-Мякушко, А.Я. Фастовская // Растительные ресурсы. 1968. - Т. 4, вып. 3. - С. 346-349.

81. ОСТ «Стандарты качества лекарственных средств». Основные положения 91500.05.001 -00 (ОСТ).

82. Палов, М. Энциклопедия лекарственных растений. Пер. с немецкого / М. Палов. М.: Мир, 1998. - С. 133-135.

83. Пастушенков, J1.B. Фармакотерапия с основами фитотерапии / JI.B. Пастушенков, Е.Е. Лесиовская. СПб.: СГТХФИ, 1995. т Ч. I, II. - С. 56.

84. Плаксина, Т.П. Редкие, исчезающие растения Самарской области / Т.И. Плаксина. Самара: Издательство «Самарский университет», 1998. - С. 41.

85. Правдивцева, О.Е. Исследование химического состава травы зверобоя продырявленного / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Науки о человеке (Сборник статей). Томск, 2004. - С. 179.

86. Правдивцева, О.Е. Фитохимическое исследование травы Hypericum perforatum L. / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. Томск, 2006. - С. 282-285.

87. Правдивцева, О.Е. Исследование химического состава травы зверобоя / О. Е. Правдивцева // Химия и медицина тезисы докладов VI Всероссийского научного семинара с молодежной научной школой. Уфа, 2007. - С. 206.

88. Правдивцева, О.Е. Новые подходы к созданию и стандартизации лекарственных средств на основе видов рода Hypericum L.: дис.докт.фармац.наук: 14.04.02/Правдивцева Ольга Евгеньевна. Самара, 2011.-245 с.

89. Правдивцева, О.Е. Сравнительное исследование химического состава надземной части некоторых видов рода Hypericum L. / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Химия растительного сырья. 2009. - № 1. - С. 79-82.

90. Правдивцева, О.Е. Рациональная заготовка травы зверобоя / О.Е. Правдивцева, В.А. Куркин // Фармация. 2009. - Т. 57, № 5. - С. 10-12.

91. Правила сбора и сушки лекарственных растений (сборник инструкций). М.: Медицина, 1985. С. 104-106.

92. Полежаева, Н.С. Содержание флавоноидов, дубильных веществ и каротинов в Hypericum maculatum Crantz. / Н.С. Полежаева, Г.К. Канючкова // Растительные ресурсы. 1985. - Т. 21, вып. 3. - С. 340-343.

93. Пронченко, Г.Е. Лекарственные растительные средства / Г.Е. Пронченко. М.: «Гэотар-мед», 2002. - 288 с.

94. Прокошева Л.И., Шатунова Л.В. Содержание действующих веществ в надземной части Hypericum perforatum L. / Л.И. Прокошева, Л.В. Шатунова // Растительные ресурсы. 1985. - Т. 21, вып. 4. - С. 461-463.

95. Пилат, Т. Биологически активные добавки к пище. Теория. Производство. Применение / Т. Пилат, А. А. Иванов. М., 2002. - 496 с.

96. Растения для нас: Справочное издание / Под. Ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. С.-Пб.: Учебная книга, 1996. - С. 465-468.

97. Рейхарт, Д.В. Проблемы экспертизы и утверждения фармакопейных статей предприятий на лекарственные средства / Д.В. Рейхарт, В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева // Хим.- фармац. журн. 2002. - Т. 36, № 1. - С. 4243.

98. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ОАО Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.

99. Сабоиев, С.С. Запасы сырья двух видов P. Hypericum L. и Origanum tyttanthum Gontsch. в западных районах Горно-бадахшанской АО Таджикистана / С.С. Сабоиев, Х.С. Мастоншоева // Растительные ресурсы. 1992. - Т. 28, вып. 2. - С. 36-46.

100. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас: учебное пособие: в 2-х томах / И.А. Самылина, О.Г. Аносова // М.: Гэотар-медиа, 2007. Т. 2. - 384 с.

101. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас: учебное пособие: в 3-х томах / И.А. Самылина, В.А. Ермакова, И.В. Бобкова, О.Г. Аносова // М.: Гэотар-медиа, 2009.-Т. 3.-488 с.

102. Самылина, И.А. Основные направления исследований лекарственных растений на современном этапе / И.А. Самылина, И.С. Грицаенко, Н.К. Горчакова// Современные аспекты изучения лекарственных растений: науч. тр. М., 1995. - Т. XXXIV. - С. 3-6.

103. Самылина, И.А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизация / И.А. Самылина, И.А. Баландина. М.: Фармация. - 2004. - №2. - С. 39-41.

104. Соколов, С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей / С.Я. Соколов. М.: Медицинское информационное агентство, 2000. -С. 214-216.

105. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия) / С. Я.Соколов, И. П. Замотаев. М.: Металлургия, 1989. -428 с.

106. Справочник по лекарственным растениям / A.M. Задорожный, А.Г. Кошкин, С.Я. Соколов, А.И. Шретер. М.: Экология, 1992. - С. 139-142.

107. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: справ. OVPEE-АстраФармСервис. М.: АсираФармВестник, 2008. - 1696 с.

108. Сычев, С.Н. Методы совершенствования хроматографических систем и механизмы удерживания в ВЭЖХ: моногр. / С.Н. Сычев. Орел, 2000. -212 с.

109. Табеева, Г.Р. Фармакотерапия депрессий / Г.Р. Табеева, A.M. Вейн // Психиатрия и психофармакотерапия. 2000. №4. - С. 12-19.

110. Тайны народной медицины. Полная энциклопедия / сост. A.B. Маркова. М., 2003. - 637 с.

111. Терехов, А.Ф. Определитель весенних и осенних растений Среднего Поволжья и Заволжья / А.Ф. Терехов. Изд. 3-е, исправл. и доп. Куйбышев. Кн. Изд-во.- 1969. -464 с.

112. Телятьев, В.В. Целебные клады / В.В. Телятьев. Иркутск: ВосточноСибирское книжное изд-во. - 1991. - 400 с.

113. Турищев, С. П. Фитотерапия: Учебное пособие для студентов высших медицинских учебных заведений / С. П. Турищев. М.: Издательский дом «Академия», 2003. - С. 137-143.

114. Турищев, С.П. Рациональная фитотерапия / С. П. Турищев. М.: Информпечать. - 2000. - 240 с.

115. Тюрина, Е.В. Опыт возделывания Hypericum perforatum L. в Новосибирской области / Е.В. Тюрина, Н.К. Шохина, И.Н. Гуськова // Растительные ресурсы. -1983. Т. 19, Вып. 4. - С. 507-509.

116. Харитонов, Ю.Я. Аналитическая химия (аналитика): в 2 кн., кн. 2: Количественный анализ. Физико-химические (инструментальные) методы анализа: учеб для вузов / Ю.Я. Харитонов. М., Высш. шк, 2001. - 559 с.

117. Физико-химические методы исследования природных биологически активных соединений. Ч. I: Хроматографические методы / под ред. В.А. Куркина. Самара, СамГМУ, 1997. - 38 с.

118. Флора СССР. Москва, Ленинград: Издательство академии наук СССР, 1949. С. 201-254.

119. ФС 42-814-73. Настойка зверобоя.

120. ФС 42-1889-95. Настойка зверобоя.

121. Цветковые растения Т.5 ч 2 Под редакцией академика АН СССР А.И. Тахтаджяна. Москва «Просвещение». 1981г.

122. Цветковые растения Т.5 ч 2 Под редакцией академика АН СССР А.И. Тахтаджяна. Москва «Просвещение». 1981г.

123. Химический анализ лекарственных растений / под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. М., Высш. Шк, 1983. - С. 176.

124. Шаршунова, М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец. М.: Мир, 1980.-Т. 1,2.-С. 20.

125. Шатунова, Л.В. Изучение полифенольных соединений растений рода зверобой / Л.В. Шатунова // Тезисы 3-его Всесоюзного съезда фармацевтов, Кишинев,1980.-С. 191-192.

126. Чаплинская, М.Г. Исследования фотодинамического действия зверобоя при наружном его применении / М.Г. Чаплинская, М.А. Штейнберг, З.Ф. Трибульска // Фармацевтический журнал. 1965. - Т. 20, вып. 2. - С. 47-53.

127. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учебное пособие / Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. СПб.: Специальная литература, 1999. - 407 с.

128. Bergmann, R., Nüßner, J., Demling, J. Behandlung leichter bis inittelschwerer Depressionen. TW Neurol Psychiatr. 7. 1993. - P. 235-240.

129. Georghiu A., Jonescu-Matiu E., Boteanu S. Contributii la studiul uleirilor esentiale isolate din Hypericum perforatum L. si Hypericum acutum L. // Coinun. Bot. (RSR). 1969. - Vol. 8. - P. 119-124.

130. Jurgenliemk G., Nahrstedt A. Phenolic compounds from Hypericum perforatum // Planta Medica. 2002. - Vol. 68. - No. 1. - P. 88-91.

131. Kudger Beerhyes. Molecules of Interest Hyperforin // Pharmacopsychiatry. London, New York. 2006. - Vol. 67. - No. 20. - P. 2201-2207.

132. Kasper S. Hypericum perforatum~a review of clinical studies. Pharmacopsychiatry. 2001. P. 51-55.

133. Kurkin V.A. Phenylpropanoids from medicinal plants: distribution, classification, structural analysis and biological activity // Chemistry of Natural Compounds. -2003. Vol. 39. -No. 2. -P. 123-153.

134. A.V., Pravdivtseva O.E., Kurkin V.A., Dubishchev A.V. Pharmacological activity of flavonoid-containing plants // Internationaler medizinischer Kongress. Hannover. 2006. - P. 37-38.

135. Kurkin V.A., Zapesochnaya G.G., Avdeeva E.V., Braslavsky V.B., Pravdivseva O.E., Supilnicova A.V., Egorov M.V., Stenyaeva V.V., Bontsevich119

136. A.I. The new possibilities in the standardization of the some medicinal plants containing the flavonoids // XXII International Conference on Polyphenols. Helsinki, Finland. 2004. - P. 621-622.

137. Kurkina, A.V. Pharmacological activity of flavonoid-containing plants / A.V. Kurkina, O.E. Pravdivtseva, V.A. Kurkin, A.V. Dubishchev // Internationaler medizinischer Kongress. Hannover. - 2006. - P. 37-38.

138. Laakmann G., Schule C., Baghi T/ St. John's Wort in mild to moderate depression: the relevance of Hyperforin for the clinical efficacy. Pharmacopsyciatry. 1998. (Suppl.). - P. 54-59.

139. Linde K., Ramires G., Mulrow CD., et al. St. John's Wort for Depression: An overvief and Meta-Analysis of randomized clinical trials. Brit Med J. 1996. 313.-P. 253-258.

140. Linde K., Mulrow CD. Revief. St. John's Wort for Depression. The Cochrane Library. 1998. 4. - P. 1-15.

141. Ludger Beerhues. Hyperforin / Ludger Beerhues // Phytocheinistry. -2006. Vol. 67. - P. 2201-2207.

142. Mathis C., Ourisson G. Etude chimio-taxonomique du genre Hypericum/1 Phytochemistry.- 1964.-Vol. 3,-No. l.-P. 115-131, 133-141,377-378.

143. Maurer A., Johne A., Bauer S., et al. Interaction of St. John's Wort for extract with Phenprocoumon. Eur. J. Clin. Pharmacol. 1999. - 55 A22 (Abstr.)

144. Muruganandam A.V., Bhattacharya S.K., Chosal S. Antidepressant activy of the St. Jon's wort, Hypericum perforatum Linn.: An experimental study // Indian J. Exp. Biol. 2001.-Vol. 39,- No. 12.-P. 1302-1304.

145. Montgomery SA, Hubner WD, Grigoleit HG. Efficacy and tolerability of St. John's wort extract compared with placebo in patients with mild to moderate depressive disorder. Phytomedicine. 2000. - 7. - P. 107.

146. Naonobu Tanaka, Yoshihisa Takaishi Xanthones from Stems of Hypericum chinense II Chem. Pharm. Bull. 2007. Vol. - 55. - No. 1. - P. 19-21.

147. Middleton, E.J. The Effects of Plant Flavonoids on Mammalian Cells: Implications for Inflammation, Heart Disease, and Cancer / E.J. Middleton, C.

148. Kandaswami, T.C. Theoharides // Fannacol. 2000. - Rev. - Vol. 52. - P.673-751.

149. Piscitelli SC, Burstein AH, Chain D, et al. Indinavir concentrations and St. John's wort. Lancet. 2000. - P. 547-548.

150. Schräder E, Meier B, Brattsrom A. Hypercium treatment of mild-moderate depression in a placebo-controlled study. A prospective, double-blind, randomized, placebo-controlled, multicenter study. Hum Psychopliarmacol 1998. -13.-P. 163-169.

151. Schilcher, H. Die Bedeutung der Phytoterapie in der Schulmedizin Europas / H. Schilcher // Zeitschrift für Phytotherapie. 1991. - Vol. 12. - No. 3. - P. 71-76.

152. Sommer, H., Harrer, G. Placebo-controlled double-blind study examining the effectiveness of an Hypericum preparation in 105 mildly depressed patients. J Geriatr Psychiatr Neurol 7. 1994. - P. 9-11.

153. The pharmacology of Chinese herbs / Ku Chang Huang. USA: CRC Press LLC, 1999. - P. 255-257.'

154. United States Pharmacopeia. — 31-th Ed. — Rockville: United States Pharmacopeial Convention, Inc. 2008. - 2105 p.

155. Vogel G. Natural substances with effects on the liver // New Natural Products and Plant Drugs with Parmacological. Biological or Therapeutical activity / G. Vogel // Berlin-Heidelberg-New York: Springer Verlang. 1977. -P. 249-265.

156. Vorbach EU, Hubner WD, Arnoldt KH. Effectiveness and tolerance of the Hypericum extract LI 160 in comparison with imipramine: randomized doubleblind study with 135 outpatients. J Geriatr Psychiatry, Neurol. 1994. - 7. - P. 19-23.

157. Vorbach. EU., Arnoldt. KH., Hubner. WD. Efficacy and tolerability of St. John's wort extract LI 160 versus Imipramine in patients with severe depressive episodes according to ICD-10. Pharmacopsychiatry.30, Suppl 2. 81-85. - 1997

158. U.S. Pharmacopeia. The official Compendia of Standards. The USP 30 NF 25. - Official May 1. - 2007.

159. Wagner H. Pharmazeutische Biologie. Drogen und ihre Inhaltsstoffe // Stuttgart-New York: Gustav Fischer Verlag. 1993. - 522 p.

160. Wagner, H. Pharmazeutische Biologie / H. Wagner.- Stuttgart-New York, 1993.-522 p.

161. Woelk H. Comparison of St. John's wort and imipramine for treating depression: randomised controlled trial. BMJ. 2000. - 321. - P. 536-539.

162. Witte B, Harrer G, Kaplan T, Podzuweit H, Schmidt U. Treatment of depression with a highly concentrated hypericum preparation: a multicentre, placebo-controlled, double-blind study. Fortschr Med. 1995. - 113. - P. 404-408.

163. Van AcKer, S.A. A guantum chemical explanation of the antioxidant activity of flavonoids / S.A. Van AcKer, M.I. de Groot, D.I. van den Berg et al. // Chem. Res. Toxical. 1996. - Vol.9. - P. 1305 - 1312.

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакогностическое исследование по обоснованию создания антидепрессантных препаратов на основе травы зверобоя

Оглавление диссертации Зимина, Любовь Николаевна :: 2011 :: Самара

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Зимина, Любовь Николаевна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Зимина, Любовь Николаевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций