Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Стандартизация Фукуса пузырчатого (Fucus) и настоек гомеопатических матричных, получаемых на его основе
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему Стандартизация Фукуса пузырчатого (Fucus) и настоек гомеопатических матричных, получаемых на его основе
На правах рукописи
Саканян Карен Маисович
СТАНДАРТИЗАЦИЯ ФУКУСА ПУЗЫРЧАТОГО (FUCUS) И НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ, ПОЛУЧАЕМЫХ
НА ЕГО ОСНОВЕ
15 00 02- фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических нау!
□03170874
Москва, 2008 г
003170874
Диссертационная работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН
Научный руководитель:
доктор фармацевтических наук
профессор Сокольская Татьяна Александровна
Официальные оппоненты:
доктор фармацевтических наук доктор фармацевтических наук
Лякина Марина Николаевна Маркарян Артем Александрович
Ведущая организация Военно-медицинская Академия им С М Кирова, Санкт-Петербург
Защита диссертации состоится « » U'/PtfptsÁL 2008 г в на заседании Диссертационного Совета Д 006 070 01 во Всероссийском НИИ лекарственных и ароматических растений РАСХН по адресу 117216, г Москва, ул Грина,7
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВИЛАР по адресу 117216, г Москва, ул Грина, д 7
Автореферат разослан «__»_2008 г
Ученый секретарь Диссертационного совета
Д 006 070 01 ^ф--
доктор фармацевтических наук
Громакова А И
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В последние годы в отечественном практическом здравоохранении наблюдается устойчивая тенденция применения наряду с аллопатическим гомеопатического метода лечения, что в свою очередь, сопровождается появлением на фармацевтическом рынке России отечественных гомеопатических лекарственных средств (ГомЛС)
Однако, их ассортимент существенно уступает таковому зарубежных гомеопатических препаратов, что обусловлено рядом причин как объективного, так и субъективного характера К их числу следует отнести отсутствие Российской Государственной Гомеопатической фармакопеи, нормирующей качество отечественных ГомЛС, ограниченный перечень отечественных гомеопатических субстанций различного происхождения, в том числе настоек гомеопатических матричных (НГМ), производство которых может быть организовано на базе отечественных предприятий
В связи с этим достаточно актуальной задачей отечественной медицинской практики является увеличение ассортимента ГомЛС, назначаемых для профилактики и лечения наиболее выраженных патологий, к числу которых следует отнести нарушение обменных процессов, протекающих в человеческом организме
Среди растительных объектов, используемых для этих целей в мировой гомеопатической практике, следует отметить различных представителей бурых водорослей Наиболее часто используются представители рода ламинария - Laminariacae L, которые в настоящее время применяются в отечественной и зарубежной медицинской практике как лекарственные средства и биологически активные добавки (БАД) к пище Однако не менее интересен с этой точки зрения другой представитель бурых водорослей - Phaeophyta, фукус пузырчатый - Fucus vesiculosus L
Благодаря высокому содержанию йода, полисахаридов и других биологически активных веществ (БАВ) различные виды бурых водорослей применяются при заболеваниях щитовидной железы, воспалениях лимфатических желез, нарушение обменных процессов приводящих к ожирению
НГМ Фукус включена в руководство В Швабе, а также в различные отечественные и зарубежные гомеопатические
рецептурные справочники и фармакопеи, в том числе Германии, Великобритании, Франции, Индии и др
На российском фармацевтическом рынке представлены такие препараты Фукуса, как Fucus vesiculosus - Injeel (forte), Strumeel (forte), Thyreoidea compositum (Heel), капли ЭДАС-107, ЭДАС-907 (в их состав входит разведение Fucus СЗ)
Основное действие этих препаратов заключается в том, что влияют на нервную и эндокринную системы, на жировой и углеводный обмен и применяются при нарушениях обмена веществ, предрасположенности к избыточной массе тела, ожирении, заболеваниях щитовидной железы
Химический состав слоевищ Фукуса как лекарственного растительного сырья изучен недостаточно, методики стандартизации отсутствуют Поэтому, актуальным является комплексное фитохимическое изучение фукуса с использованием современных физико-химических методов, разработка методик стандартизации и их совершенствование, создание нормальной документации.
Цель и задачи исследования. Целью диссертационного исследования является фармакогностическое изучение слоевищ Фукуса пузырчатого, получение и фитохимическое исследование настоек гомеопатических матричных Фукус, препаратов Фукуса и их стандартизация
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи
1 Изучить фитохимический состав свежесобранного и высушенного сырья Фукуса пузырчатого и разработать методики качественного и количественного анализа основных груп БАВ
2 Предложить технологию получения и провести исследования химического состава НГМ из свежесобранного и высушенного сырья Фукуса. Разработать методики контроля качества НГМ
3 Разработать методики установления подлинности гомеопатических разведений Фукуса
4 Провести предварительную оценку фармакологической активности НГМ Фукус и ее разведений
5. Оформить проекты Фармакопейных статей на «Фукуса пузырчатого слоевища», «Фукуса пузырчатого слоевища свежие», (.(.Fucus vesiculosus настойку гомеопатическую матричную» и «Fucus vesiculosus Dl настойку гомеопатическую матричную»
Научная новизна. Определены основные макро- и микродиагностические признаки сырья, его товароведческие показатели, установлены оптимальные сроки заготовки и условия сушки, для свежезаготовленного сырья - сроки использования и методы консервации
С применением современных методов химического и физико-химического анализа установлен качественный и количественный состав БАВ свежих и высушенных слоевищ Фукуса пузырчатого Определено, что в слоевищах Фукуса пузырчатого содержатся соединения йода и полисахариды Так как полисахариды являются основной группой БАВ для этого растительного сырья, то с применением тонкослойной хроматографии (ТСХ), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и спектроскопии ядерного магнитного резонанса (13С) определен их компонентный состав Показана необходимость стандартизации лекарственного растительного сырья Фукуса по содержанию в нем полисахаридов (гравиметрический метод), суммы моносахаридов после гидролиза в пересчете на глюкозу (метод УФ-спектроскопии) и йода (титриметрический метод)
Предложена технология и разработаны показатели качества, а также методы их оценки для НГМ Фукус из свежего и высушенного JIPC и лекарственных препаратов на их основе Установлено, что для препаратов Фукуса также целесообразно использовать в качестве основных показателей качества содержание в них свободных Сахаров, полисахаридов и йода
Впервые проведено тестирование НГМ Фукус и их разведений, свободных и связанных моносахаридов с использованием биотест-систем в опытах in vitro, позволившая выявить выраженное антиоксидантное действие анализируемых объектов
Практическая значимость работы. На основании проведенных
исследований разработаны проекты ФС
• «Фукуса пузырчатого слоевища свежие»,
• «Фукуса пузырчатого слоевища»,
• «Fucus vesiculosus (Fucus) настойка гомеопатическая матричная»,
• (.(.Fucus vesiculosus (Fucus) D1 настойка гомеопатическая матричная».
Связь задач исследования с проблемным планом развития фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГУ ВИЛАР РАСХН по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2001-2005 и 2006-2010 г г»
Основные положения, выносимые на защиту:
• Результаты исследований химического состава свежесобранного и высушенного сырья Фукуса и НГМ Фукус, приготовленных из него, в сравнительном аспекте,
• Методики качественного и количественного анализа действующих веществ в JIPC и НГМ Фукус, их разведениях,
• Результаты оценки фармакологической активности НГМ Фукус, и их разведений, а также выделенных из них моно- и полисахаридных комплексов,
• Проекты фармакопейных статей на JIPC и НГМ Фукус
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ
Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулирована научная новизна и практическая значимость работы
В первой главе на основании литературных данных рассмотрены сведения о ботанико-морфологической характеристике Фукуса и близких ему видов водорослей, химическом составе, фармакологической активности и медицинском применении сырья и настоек гомеопатических матричных (НГМ) Фукуса пузырчатого, методах анализа основных действующих веществ и вопросах стандартизации сырья и НГМ Фукуса
В разделе Пояснение к эксперименту приводится характеристика объектов исследования - свежесобранного и высушенного JIPC фукуса пузырчатого (Fucus vesiculosus L ), , заготовленного в 2002 - 2004 гг в Чупинском заливе Белого моря (вблизи поселка Чупа, Архангельской области) а также НГМ, полученных из этого сырья Описываются использованные в исследовании методы и приборы, хроматографические системы, сорбенты и реактивы
Вторая глава посвящена товароведческому анализу сырья Фукуса, установлению его морфолого-диагностических признаков и числовых показателей Впервые подробно описаны внешний вид и диагностически значимые микроскопические признаки сырья Фукуса и его отличия от сырья ламинарии
Втретьей главе излагаются результаты фитохимического исследования сырья Фукуса, приводится разработка и обоснование методик качественного и количественного определения суммы полисахаридов, суммы связанных моносахаридов после гидролиза (в пересчете на глюкозу) и содержание йода в сырье Фукуса, а также динамика накопления полисахаридов и йода за один вегетационный период
Вчетвертой главе приводятся результаты фитохимического изучения НГМ Фукус, краткая технология их получения, разработка и обоснование методик качественного и количественного определения суммы моносахаридов после гидролиза в пересчете на глюкозу, а также соединений йода в НГМ Фукус
Глава пять содержит результаты предварительной оценки фармакологической активности НГМ Фукус, их разведений, а также выделенных из них моно- и полисахаридных фракций, выполненных методом биотестирования
Шестая глава посвящена разработке показателей качества и установлению сроков годности JIPC и НГМ Fucus vesiculosus, методикам идентификации БАВ в гомеопатических разведениях изучаемых настоек
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 137 страницах, содержит 33 таблицы, 22 рисунка и состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальной части, библиографии из 217 источников литературы, из которых 52 - на иностранных языках и приложений
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Объекты, материалы и методы исследования.
В качестве объектов исследования использовали образцы сырья слоевищ фукуса пузырчатого Fucus vesiculosus L, заготовленные в Чупинском заливе Белого моря (вблизи поселка Чупа Архангельской области) Исследовали как свежезаготовленное, так и высушенное сырье
При качественном анализе использовали общие и специфические реактивы на группы действующих веществ, рекомендованные ГФ XI При этом применяли методы химического и физико-химического анализа В частности, использовали бумажную и тонкослойную хроматографию, которую осуществляли согласно методике, описанной в статье ГФ XI «Хроматография». Детекцию действующих веществ на хроматограммах осуществляли в видимом и УФ- свете до и после их обработки специфическими реактивами
Приготовление реактивов, используемых в экспериментальной части работы осуществляли согласно требованиям ГФ XI
Для проведения фитохимических исследований использовали свежевыжатый сок, а также водные и водно-спиртовые извлечения из слоевищ фукуса пузырчатого
Спектры поглощения соединений в УФ- и видимой областях спектра записывали на приборах СФ-46 (Россия), UV-VIS (Германия), Hitacyi (Япония), Gelios (США), СФ-2000 (Россия) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см
Качественный состав Сахаров анализировали методом ВЭЖХ на хроматографе марки "GILSTON", Франция, с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром для Windows»
Изучение полисахаридных комплексов осуществляли путем снятия ЯМР- 13 С спектров на спектрометре АС-200 фирмы «Вгикег» (частота 50 МГц) Использовали в качестве растворителей
демитилсульфоксид ДМСО, D2O, натрия гидроксид в D2O
Первичный скрининг по определению биологической активности анализируемых объектов проводили с помощью биотест-систем в опытах in vitro в НИЦ БМТ ВИЛАР
В аналитических исследованиях использовали статистические расчеты принятые ГФ XI (вып 1, с 199) Математическое моделирование осуществляли с использованием критерия Стьюдента.
2. Товароведческий анализ ЛРС Фукуса Микроскопический анализ. Для микроскопического анализа готовили препараты с поверхности слоевищ Фукуса (ГФ XI изд, вып. 2 с 277)
Поперечный срез таллома характеризуется наличием корового слоя, состоящего из клеток почти квадратной формы с утолщенными
стенками Далее следуют клетки - псевдоткани с многочисленными округлыми слизистыми вместилищами, а также полостями округлой формы, предназначенными для осуществления функции дыхания Наличие этих отверстий фиксируется и на продольном срезе таллома.
При изучении анатомического строения органов размножения Фукуса - рецептакул установлено, что они имеют коровый слой по строению аналогичный таковому таллома Анализ особенностей строения скафидий (концептакул) показал, что их внутренняя часть заполнена слизью, в которой хаотично распределены споры
Таким образом, в качестве основных анатомо-диагностических признаков высушенного и свежего сырья Фукуса пузырчатого может быть использовано характерное строение клеток корового слоя и псевдоткани таллома, наличие дыхательных отверстий и слизистых вместилищ, а также особенности строения рецептакул и скафидий
Все вышеописанные микроскопические признаки слоевищ Фукуса подтверждены фотографическими снимками и включены в разработанные фармакопейные статьи «Фукуса пузырчатого слоевища»
Проведено сравнительное изучение числовых показателей (влажность, зола, содержание допустимых примесей, микробиологическая чистота и радиационный контроль) для ЛРС Фукуса пузырчатого
3. Фотохимическое изучение ЛРС Фукуса
Для ЛРС фукуса разработаны критерии подлинности, включающие качественные реакции на углеводы, соединения йода и тонкослойную хроматографию
Для обнаружения свободных моносахаров применяли метод ТСХ В качестве исследуемого раствора использовали свежевыжатый сок из свежих слоевищ (разведенный водой в соотношении 1 2) и спирто-водные извлечения из высушенных слоевищ Фукуса пузырчатого В качестве свидетелей применяли 0,05 % спиртовые растворы аутентичных образцов моносахаров Для разделения моносахаров использовали хроматографические пластинки БогЬШ «ПТСХ-П-А» размером 15x15 см В качестве подвижной фазы применяли смесь растворителей вода-метанол-уксусная кислота ледяная-хлористый этилен в соотношении 10 15 25 50 Зоны
адсорбции моносахаров обнаруживали опрыскиванием
хроматограммы 0,5 % раствором тимола в 95 % этиловом спирте
В табл. 1 представлены обобщенные данные по хромато-графическому анализу сырья фукуса на содержание моносахаров
Таблица 1
Величины зон адсорбции испытуемых растворов и растворов
стандартных образцов (по фруктозе) на хроматограммах
Хроматограмма СО моносахаров Хроматограмма сока из свежих слоевищ Фукуса Хроматограмма спиртового извлечения из высушенных слоевищ Фукуса, Rs
глюкоза 0,80 0,78
рамноза 1,73 1,74
галактоза 0,75 0,76
арабиноза 1,82 1,84
фруктоза 1,0 1,0
Для уточнения результатов предварительного изучения состава моносахаров в сырье Фукуса с помощью тонкослойной хроматографии проводили их исследование на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы "GILSON", ФРАНЦИЯ с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы "Мультихром для "Windows"
Анализ осуществляли на металлической колонке размером 6,5x300 мм ALLTECHOA-1 ООО Organic Acids, подвижная фаза-0,005М раствор серной кислоты Скорость подачи элюента - 0,4 мл/мин Температура колонки 65°С Продолжительность анализа 16 мин Для детектирования моносахаридов применяли УФ-детектор при длине волны 190 нм Исследование проводили в образцах сока из свежих слоевищ Фукуса пузырчатого и спирто-водного извлечения из сухих слоевищ (табл 2)
Подготовка пробы 1 мл сока из свежих слоевищ или спиртового извлечения из сухих слоевищ помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 10 мл 0,005М раствора серной кислоты, перемешивали и доводили объем раствора до метки 0,005М раствором серной кислоты, затем перемешивали и фильтровали (исследуемый раствор)
Параллельно готовили серию 0,05 % растворов стандартных образцов в 95 % этиловом спирте Оценка хроматограммы проводилась по временам удерживания и площади пика, в автоматическом режиме
На основании данных ВЭЖХ установлено, что в сырье Фукуса пузырчатого идентифицированы свободные сахара - мальтоза, сахароза, лактоза, глюкоза, ксилоза, фруктоза, рамноза и арабиноза Содержание фруктозы превалирует как в соке из свежих слоевищ (50,63 %), так и в спиртовом извлечении из сухих слоевищ Фукуса (42,18%)
Таблица 2
Результаты исследования свободных Сахаров в сырье Фукуса
методом ВЭЖХ
Соединение Время % содержание в % содержание в
удерживания, пробе сока пробе спиртового
мин извлечения
мальтоза 1,12 6,27 4,14
сахароза 1,24 5,28 4,36
лактоза 11,50 7,94 4,85
глюкоза 13,45 5,21 4,49
ксилоза 14,30 9,84 7,17
фруктоза 14,95 50,63 42,18
рамноза 15,66 9,72 5,32
арабиноза 15,97 5,11 3,48
Для изучения мономерного состава полисахаридов Фукуса была выделена сумма полисахаридов из сырья и проведен ее гидролиз с использованием для этих целей методики, основанной на применении трифторуксусной кислоты (ТФУ)
Дальнейшее исследование качественного и количественного состава полисахаридного комплекса осуществляли методом денситометрии. Изучение качественного состава Сахаров проводили с применением следующих систем элюентов этилацетат-спирт изопропиловый- вода (5 3,2 1,6) и этилацетат-кислота муравьиная-вода(6 1,5 1,5).
Метод денситометрии был использован и для количественной оценки содержания Сахаров Результаты количественного
определения приведены в табл 3
Полученные данные свидетельствуют о том, что преобладающими соединениями в составе полисахаридного комплекса являются глюкуроновая кислота и глюкоза
Таблица 3
Результаты количественного определения моносахаров и их производных в гидролизате полисахаридного комплекса Фукуса
№ Соединение Количество, в пере- Количество, в пересчете
счете на 100 мг на 100 мг гидролизата
гидролизата полисахаридов,
полисахаридов, полученного из
полученного из сока спиртового извлечения
Фукуса, мг из Фукуса, мг
1 Кислота
глюкуроновая 11,25 1,599
2 Ксилоза 1,32 0,145
3 Арабиноза 0,24 0,0387
4 Мальтоза 1,26 0,134
5 Рамноза 2,25 0,278
6 Глюкоза 9,687 0,845
Для подтверждения данных денситометрии было проведено спектроскопическое исследование суммы полисахаридов на ЯМР -спектрометре
Полученные результаты свидетельствуют о том, что полисахаридный комплекс слоевищ Фукуса пузырчатого содержит значительное количество уроновых кислот, они являются преобладающим компонентом Кроме того, подтверждено наличие в составе полисахаридного комплекса глюкозы, ксилозы, рамнозы, арабинозы, мальтозы, что согласуется с данными
декситометрического определения
Для оценки содержания БАВ в ЛРС Фукуса разработаны методики их количественного определения Сырье предложено характеризовать по содержанию суммы полисахаридов, суммы моносахаров после гидролиза в пересчете на глюкозу, а также по содержанию йода
Содержание суммы полисахаридов, определяемое методом гравиметрии в пересчете на абсолютно сухое сырье в исследуемых
образцах Фукуса пузырчатого (Fucus vesiculosus L) составляет около 35,29 % (свежее сырье) и 27,60 % (высушенное сырье) Ошибка единичного определения с 95% вероятностью методики количественного определения суммы полисахаридов в JIPC Фукуса не превышает 8,11% (табл 4)
Таблица 4
Метрологические характеристики методики количественного определения полисахаридов в сырье Фукуса _ _пузырчатого __
Хср f SJ S Sx Px tP,f) ДХср
ЛРС Фукуса пузырчатого (свежее сырье)
35,292 4 3,6407 1,9081 0,8533 0,95 2,78 2,3722 6,72
ЛРС Фукуса пузырчатого (высушенное сырье)
27,602 4 3,2442 1,8012 0,8055 0,95 2,78 2,239 8,11
Для определения содержания суммы связанных моносахаров после гидролиза в пересчете на глюкозу и абсолютно сухое сырье в исследуемых образцах Фукуса пузырчатого была разработана методика дифференциальной УФ-спектроскопии На рис 1 представлены спектры поглощения анализируемых компонентов
Рис 1 - Спектры поглощения комплекса моносахаров с пикриновой кислотой 1 - испытуемый раствор (из высушенных слоевищ), 2 - испытуемый раствор (из свежих слоевищ), 3 - стандартный образец глюкозы
Оно составляет около 31,84 % (для свежего сырья) и около 27,78 % (для высушенного сырья)
Ошибка единичного определения с 95 % вероятностью методики количественного определения суммы моносахаров в пересчете на глюкозу в ЛРС Фукуса не превышает 4,69 % (табл 5).
Для подтверждения отсутствия систематической ошибки были проведены опыты с добавками глюкозы к сумме полисахаридов Фукуса пузырчатого (табл 6)
Таблица 5
Метрологические характеристики методики количественного определения суммы связанных моносахаров после гидролиза в
пересчете на глюкозу в сырье Фукуса
с2 С С Г 5 I » Т> Р
ДХС,
е,%
ЛРС Фукуса пузырчатого (свежее сырье)
31,844
4 | 0,28838 | 0,53701 | 0,2402 | 0,95 | 2,78 | 0,6676 | 4,69
ЛРС Фукуса пузырчатого (высушенное сырье)
27,782
4 0,16142 | 0,40177 | 0,1797 | 0,95 2,78 | 0,4996 | 4,02
Таблица 6
Результаты опытов с добавками глюкозы для методики количественного определения суммы связанных моносахаров в
Взято Добавле Должно Найде Ошибка
полисахарида но быть (г) но (г) Абсолют Относитель
в, г глюкозы (г) ная (г) ная (%)
0,2812 0,0703 0,3515 0,3509 -0,0006 ±0,171
0,2812 0,1406 0,4218 0,4222 + 0,0004 ± 0,0947
0,2812 0,2109 0,4921 0,49017 -0,00193 ± 0,394
0,2812 0,2812 0,5624 0,5628 + 0,0004 ±0,0711
Опыты с добавками глюкозы для методики количественного определения суммы связанных моносахаров показали, что относительная ошибка не превышает ошибки единичного определения и имеет отклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки
Содержание йода в пересчете на абсолютно сухое сырье, определяемого титриметрическим методом по ГОСТ 26185-84, составляет 0,886% (для свежего сырья) и около 0,780 % (для высушенного сырья)
Ошибка единичного определения с 95 % вероятностью методики количественного определения йода в ЛРС Фукуса не превышает 7,22%(табл 7)
Таблица 7
Метрологические характеристики метода количественного
определения йода в сырье Фукуса _^_
Хер Г Б2 Б Рх 1 1Р,0 I ДХср е,%
ЛРС Фукуса пузырчатого (свежее сырье)
0,8864 4 0,000295 0,01717 0,007679 0,95 | 2,78 | 0,02135 5,38
ЛРС Фукуса пузырчатого (высушенное сырье)
0,7800 4 0,00041 0,02025 0,00906 0,95 | 2,78 | 0,02517 7,22
Для подтверждения отсутствия систематической ошибки были проведены опыты с добавками йода, относительная ошибка определения составила не более ±0,175 %
С помощью разработанных методик изучена динамика накопления полисахаридов и йода в ЛРС Фукуса Полученные результаты свидетельствуют о том, что заготовку слоевищ Фукуса пузырчатого можно осуществлять в течение всего вегетационного периода, то есть с мая по сентябрь
Результаты выполненных исследований по определению условий и сроков хранения ЛРС Фукуса позволяют сделать вывод о том, что высушенные слоевища Фукуса пузырчатого следует хранить не более 3 лет в сухом, защищенном от света месте при температуре не выше 15° С, а свежие слоевища Фукуса необходимо хранить не более 24 часов при температуре не выше 4° С в холодильной камере
4. Фотохимическое исследование настоек гомеопатических матричных Fucus Для получения НГМ Фукуса из свежего и высушенного JTPC использовали методы 3 и 4а ОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные», так как содержание сока в свежем и высушенном сырье составило менее 60 %, установлено наличие слизей Изучение компонентного состава НГМ Фукус пузырчатого осуществляли с помощью методов ТСХ, ВЭЖХ, и дифференциальной спектроскопии в УФ-области спектра
Анализ свободных моносахаров, содержащихся в НГМ Фукус, осуществляли методом ТСХ на пластинках Sorbfil «ПТСХ-П-А» размером 15x15 см В качестве свидетелей применяли 0,05% спиртовые растворы аутентичных образцов моносахаров Зоны адсорбции моносахаров обнаруживали опрыскиванием
хроматограммы 0,5 % раствором тимола в 95 % этиловом спирте.
В табл 8 представлены обобщенные данные по хроматографи-ческому анализу настоек гомеопатических матричных Фукус на содержание моносахаров
Таблица 8
Величины Rs зон адсорбции испытуемых растворов и растворов СО моносахаров (по фруктозе) на хроматограммах НГМ Fucus
Хроматограмма СО моносахаров Хроматограмма НГМ из свежего сырья Хроматограмма НГМ из высушенного сырья
Вода-метанол-уксусная кислота безв -этиленхлорид (10 15 25 50)
глюкоза 0,82 0,80
рамноза 1,75 1,72
галактоза 0,76 0,72
арабиноза 1,84 1,80
фруктоза 1,0 1,0
Для уточнения результатов предварительного изучения состава свободных моносахаров в НГМ Фукус с помощью тонкослойной хроматографии проводили их исследование на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы "GILSON", ФРАНЦИЯ с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы "Мультихром для "Windows"
Оценка хроматограммы проводилась, по временам удерживания и площади пика, в автоматическом режиме, в условиях, аналогичных условиям проведения эксперимента для сырья Фукуса
Подтверждено наличие в составе свободных Сахаров глюкозы, галактозы, ксилозы, рамнозы, арабинозы, мальтозы, сахарозы и фруктозы
Содержание суммы связанных моносахаров после гидролиза в пересчете на глюкозу определяемое методом дифференциальной спектрофотометрии составляет около 5,94 % (для НГМ из свежего сырья) и около 4,37 % (для НГМ из высушенного сырья) Ошибка единичного определения с 95 % вероятностью методики количественного определения суммы моносахаридов в пересчете на глюкозу в НГМ Фукус не превышает 3,66 % (табл 9)
Для подтверждения отсутствия систематической ошибки были проведены опыты с добавками глюкозы к НГМ из высушенного сырья Фукуса (табл 10)
Таблица 9
Метрологические характеристики методики количественного определения суммы связанных моносахаров в пересчете на глюкозу
ХСр { Б2 Б 8х Рх ДХср в, %
НГМ Фукуса пузырчатого (из свежего сырья)
5,9388 4 0,003751 0,06125 0,027391 0,95 2,78 0,07615 2,87
НГМ Фукуса пузырчатого (из высушенного сырья)
4,3672 4 0,003313 0,05756 0,02574 0,95 2,78 0,07156 3,66
Таблица 10
Результаты опытов с добавками глюкозы для методики количественного определения суммы связанных моносахаров в НГМ
Взято Добавлено Должно Найде Ошибка
полисахаридо глюкозы быть (г) но (г) Абсолют Относитель
в, г (г) ная (г) ная (%)
0,04455 0,01114 0,05569 0,05575 + 0,00006 ±0,108
0,04455 0,02228 0,06683 0,06678 - 0,00005 ±0,0748
0,04455 0,03342 0,07797 0,07802 + 0,00005 ±0,0641
0,04455
0,04455
0,08910
0,08901
- 0,00009
±0,101
Опыты с добавками глюкозы для методики количественного определения суммы связанных моносахаров показали, что относительная ошибка не превышает ошибки единичного определения и имеет отклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки.
Содержание йода, определяемое титриметрическим методом, использованным для анализа ЛРС составляет около 0,184 % для НГМ из свежего сырья и около 0,149 % для НГМ из высушенного сырья Ошибка единичного определения с 95% вероятностью методики количественного определения йода в НГМ Фукус не превышает соответственно 6,76 % (табл 11)
Таблица 11
Метрологические характеристики методики количественного определения йода в НГМ Фукус
хср f S2 S Sx Px tP,f) AXcp
НГМ Фукуса пузырчатого (из свежего сырья)
0,1844 4 0,000078 0,00883 0,00395 0,95 2,78 0,01098 5,95
НГМ Фукуса пузырчатого (из высушенного сырья)
0,1494 4 0,000066 0,00812 0,00363 0,95 2,78 0,0101 6,76
Для подтверждения отсутствия систематической ошибки проведены опыты с добавками йода Ошибка опытов с добавками не превышает ±0,106 %
5. Предварительная оценка фармакологической активности НГМ Fucus, их разведений а также моно- и полисахаридных комплексов.
Первичный скрининг по определению биологической активности анализируемых объектов проводили с помощью запатентованных биотест-систем в опытах in vitro в НИЦ БМТ ВИЛАР
Полученные экспериментальные данные свидетельствуют об активации антиоксидантных ферментов супероксидцисмутазы (СОД), каталазы (КАТ) и глютатионпероксидазы (ГП) с помощью настоек Fucus, а также разведений НГМ и фракций поли- и
моносахаров, содержащихся в НГМ Почти для всех изученных гомеопатических образцов (исключение составляет влияние свободных моносахаров на скорость СОД - реакции) в активности ферментов имеется выраженный максимум, соответствующий оптимальной концентрации вещества, а увеличение или уменьшение концентрации приводит к снижению эффекта Матричные настойки, изначально имеющие высокую концентрацию действующих веществ, как правило, ингибирует скорость реакций ферментов антиоксидантной защиты Поэтому, тестирование только настоек может вызвать представление о направленности фармакологического действия гомеопатического препарата, который обычно применяется в виде потенцированных растворов
Тестирование с помощью биотест-систем в опытах in vitro показало, что матричные настойки и их разведения, полученные из высушенных слоевищ Фукуса, оказывают более выраженный эффект на ферменты антиоксидантной защиты При этом, препараты из высушенных слоевищ значительно сильнее по сравнению с контролем увеличивают скорости СОД-, КАТ- и ГП-реакций, чем препараты из свежих слоевищ.
Поли- и моносахариды, содержащиеся в JIPC и НГМ, в большей степени активируют ферменты СОД, ГП и КАТ, чем настойки гомеопатические матричные и их разведения При этом они, в отличие от настоек, приготовленных из высушенных и свежих слоевищ, практически не оказывают влияния на скорость ГР-реакции
Полученные результаты свидетельствуют о наличии у анализируемых объектов выраженной антиоксидантной активности и способности оказывать влияние на липидный обмен
6. Разработка показателей качества и установление срока годности ЛРС, НГМ Fucus vesiculosus. Анализ гомеопатических разведений.
Для контроля качества ЛРС Фукуса пузырчатого предложены следующие показатели, описание ЛРС, диагностически значимые признаки, качественные реакции, числовые показатели, количественное определение БАВ - суммы полисахаридов, суммы связанных моносахаров после гидролиза в пересчете на глюкозу и содержание йода
Предложены следующие нормативы, влажность для свежего сырья - не менее 50 %, для высушенного сырья - не более 12 %, содержание золы общей не более 14 %, золы, не растворимой в 10 % хлористоводородной кислоте - не более 4 %, содержание минеральной и органической примеси не более 1,5 %, содержание суммы полисахаридов - не менее 28 %, содержание суммы моносахаридов после гидролиза (в пересчете на глюкозу) - не менее 27 %, содержание йода - не менее 0,50 %
Предлагается установить срок годности высушенного ЛРС 3 года, срок использования свежего ЛРС - 24 часа
Контроль качества НГМ Фукус регламентируется по следующим показателям состав настойки, описание, критерии подлинности, сухой остаток, содержание спирта, плотность, тяжелые металлы, микробиологическая чистота, количественное определение суммы связанных моносахаров после гидролиза в пересчете на глюкозу, содержание йода, срок годности.
Разработка показателей качества настойки проводилась на пяти сериях препарата Критерии подлинности настоек включают реакции на углеводы с реактивом Фелинга (выпадение красно-оранжевого осадка, указывающее на наличие восстанавливающих Сахаров); с дифениламином в кислой среде (на кетогруппу в углеводном остатке), а также с помощью метода ТСХ
Хроматография в тонком слое сорбента проводится на пластинках ЗогЬШ «ПТСХ-П-А» размером 15x15 см В качестве свидетелей применяли 0,05% спиртовые растворы аутентичных образцов моносахаров. Зоны адсорбции моносахаров обнаруживали опрыскиванием хроматограммы 0,5 % раствором тимола в 95 % этиловом спирте
Содержание сухого остатка должно быть не менее 0,4 %, плотность - в пределах от 0,8325 до 0,8350 Содержание тяжелых металлов составляет не более 0,001%
Количественное определение суммы связанных моносахаров после гидролиза в пересчете на глюкозу было проведено по разработанной нами методике, в НГМ Фукус пузырчатого содержание должно быть не менее 4 %
В настойках проведено испытания на микробиологическую чистоту Результаты испытаний показали, что в 1 мл препаратов содержание сапрофитных форм бактерий не превышает 10. Бактерии
сем Enterobaceriaceae, St aureus, Ps aeruginosa не обнаружены Настойки соответствуют требованиям, предъявляемым к данной лекарственной форме.
Нами проведено изучение состояния НГМ Фукус пузырчатого в процессе естественного хранения по всем показателям качества, регламентируемым проектом ФС Срок годности НГМ Фукус установлен 2 года Наблюдение за настойками в процессе хранения продолжаются
Для оценки подлинности гомеопатических разведений Fucus, которые применяется в гомеопатической практике в качестве монопрепаратов, и для изготовления комплексных лекарственных средств, использованы качественные реакции и испытание методом ТСХ, при этом важным является установление наличия веществ, обуславливающих терапевтический эффект, в том числе моносахаров Разведения настоек Fucus готовили по правилам гомеопатической технологии (ОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные»)
Первое десятичное (1D) разведение Fucus представляет собой прозрачную жидкость красно-коричневого цвета, со своеобразным запахом Второе десятичное разведение (2D) - прозрачная жидкость светло-коричневого цвета практически без запаха, третье десятичное разведение (3D) - жидкость бледно-желтого цвета, спиртового запаха и четвертое десятичное разведение (4D) - бесцветная жидкость спиртового запаха
Подлинность первого, второго, третьего, четвертого и последующих десятичных разведений (ID, 2D, 3D, 4D и тд) фукуса пузырчатого предлагается устанавливать сггектрофотометрическим методом
Проведенные нами исследования позволили установить, что разведения до D7 имеют характерный УФ-спектр поглощения, который в дальнейшем может быть использован для оценки подлинности препаратов (рис 2) Кроме того, могут быть использованы реакции подлинности на присутствие моносахаров с последующим снятием спектра в УФ-свете (рис 3) Для оценки количественного содержания свободного и связанного йода, а также полисахаридов могут быть использованы методики, предложенные для анализа НГМ Фукус
Рис 2 - УФ-спектр D7 разведений рис 3 _ уф-спектр фракции НГМ Фукус моносахаров
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Проведен товароведческий анализ JIPC Фукуса, установлены диагностически значимые микроскопические признаки сырья «Фукуса пузырчатого слоевища», определены числовые показатели для ЛРС Фукуса
2. С помощью методов физико-химического анализа (ТСХ, ВЖХ, ЯМР С -спектроскопии и др ) изучен в сравнительном аспекте углеводный состав ЛРС Фукуса, как свежего, так и высушенного, и НГМ, изготовленных из него
3 Разработаны методики количественного определения суммы связанных моносахаров после гидролиза в пересчете на глюкозу в слоевищах Фукуса пузырчатого свежих и высушенных и НГМ Фукус с помощью метода дифференциальной УФ-спектрофотометрии, а также содержания йода с помощью титриметрического метода.
4 По результатам предварительной оценки фармакологической активности НГМ Fucus определено, что настойки гомеопатические матричные слоевищ Фукуса пузырчатого, их разведения, а также моно- и полисахаридные фракции, выделенные из них, обладают выраженной антиоксидантной активностью
5 Установлен срок годности высушенного ЛРС Фукуса - 3 года, срок использования свежего сырья Фукуса - 24 часа, НГМ - 2 года.
6 По результатам исследований разработаны проекты ФС на ЛРС Фукуса «Фукуса пузырчатого слоевища свежие» и «Фукуса пузырчатого слоевища», а также на НГМ Фукуса «Fucus vesiculosus настойка гомеопатическая матричная» и «Fucus vesiculosus DI настойка гомеопатическая матричная» предназначенных для включения в Государственную гомеопатическую фармакопею РФ.
список работ, опубликованных по теме диссертации
1 Сокольская ТА, Саканян КМ, Фукус пузырчатый (Fucus vesiculosus L ) в отечественной гомеопатической практике и методы оценки качества в гомеопатической практике //Тезисы докладов XVI Московской международной гомеопатической конференции, Москва, 2729 января 2007 г,С 119-120
2 Саканян К M , Даргаева Т Д , Сокольская Т А Определение показателей качества настойки матричной гомеопатической Фукус //Сборник материалов региональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 40-летию фармацевтического факультета КГМУ, Курск, 15 декабря 2007г,С 312-314
3 СаканянКМ, Сокольская ТА , Даргаева Т Д Fucus vesiculosus L и его применение в традиционной, народной и официнальной медицине //Сборник научных трудов конгресса «Традиционная медицина», Москва, 13 марта 2007 г, С 82-85
4 СаканянКМ, Сокольская Т А, Даргаева ТД Изучение анатомо-диагностических признаков лекарственного растительного сырья Фукуса пузырчатого слоевищ (Fucus vesiculosus L ) //Сборник научных трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», Пятигорск, 2007г,С 106-108
5 Саканян К M , Даргаева Т Д , Сокольская Т А Анализ и стандартизация настойки матричной гомеопатической Фукус //Вестник Бурятского Государственного университета, Улан-Удэ, 2007 г, вып 8, С 25-29
6 Саканян КМ, Еникеева РА, Гаккель В А, Сокольская ТА. Некоторые гомеопатические препараты в отечественной медицинской практике //Вестник Российской Военно-медицинской академии, С-Пб ,2007 г, №1 (17), С 480-481
7 Саканян К M Настойка Фукус и методы ее стандартизации //Сборник научных трудов «Российский гомеопатический съезд», Москва, 1921 октября 2007 г, С 216-217
А
1
Подписано к печати 12 05 2008 г Ф А5 Бум офс Печать офсетная Тираж 100 экз Заказ № 175
Отпечатано в типографии ООО "Полиграфист" Ленинградская обл , г Шлиссельбург,
ул 1 Мая, д 20а тел (812)975-11-93,(81362)77-586
Оглавление диссертации Саканян, Карен Маисович :: 2008 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ФУКУС ПУЗЫРЧАТЫЙ - FUCUS 9 VESICULOSUS L. И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В СОВРЕМЕННОЙ МЕДИЦИНСКОЙ И ГОМЕОПАТИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ 1.1. Морские водоросли и их значение для медицины
1.2 Фукус пузырчатый и его применение
1.3 Современные требования к качеству настойки гомеопатической 19 матричной Фукус
1.4 Полисахариды, как основной компонент биологически активного 24 комплекса морских водорослей. Химическое строение, методы анализа
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ I
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. ПОЯСНЕНИЕ К ЭКСПЕРИМЕНТУ
ГЛАВА II. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА СВЕЖЕГО 37 И ВЫСУШЕННОГО СЫРЬЯ ФУКУСА ПУЗЫРЧАТОГО
2.1 Макроскопический анализ
2.1.1 Определение макроскопических признаков слоевищ Фукуса 37 пузырчатого свежих
2.1.2 Определение макроскопических признаков слоевищ Фукуса 37 пузырчатого высушенных
2.2 Микроскопический анализ
2.3 Определение содержания сока в свежем сырье и влажности сухого 42 сырья Фукуса пузырчатого
2.4 Определение содержания золы общей и золы, не растворимой в 43 растворе 10 % хлористоводородной кислоты
2.5 Определение содержания допустимых примесей
2.6 Определение микробиологической чистоты
2.7 Радиационный контроль сырья
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ II
ГЛАВА III. ФОТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЫРЬЯ ФУКУСА 49 ПУЗЫРЧАТОГО
3.1 Разработка критериев подлинности для сырья Фукуса пузырчатого
3.2 Разработка методик качественного и количественного определения 51 биологически активных веществ
3.2.1 Методики качественного определения моносахаридов в сырье 52 Фукуса
3.2.1.1 Исследование моносахаридов в соке и спиртовом извлечении из 55 слоевищ Фукуса методом ВЭЖХ
3.2.1.2 Изучение мономерного состава полисахаридного комплекса, 57 выделенного из сырья Фукуса пузырчатого
3.2.2 Методики количественного определения суммы полисахаридов и 66 суммы моносахаридов в сырье Фукуса
3.2.2.1 Методика количественного определения суммы полисахаридов в 66 сырье Фукуса гравиметрическим методом
3.2.2.2 Методика количественного определения суммы моносахаридов 67 в пересчете на глюкозу спектрофотометрическим методом
3.2.3 Разработка методики количественного определения йода в сырье 71 Фукуса
3.3. Исследование динамики накопления полисахаридов и соединений 74 йода в слоевищах Фукуса пузырчатого в зависимости от стадии вегетации
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ Ш
ГЛАВА IV. ФОТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НАСТОЕК 77 ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ FUCUS
4.1 Технология настоек гомеопатических матричных Fucus
4.2 Разработка методик качественного определения биологически 78 активных веществ в HTM Fucus
4.3 Разработка методик количественного определения действующих 84 веществ в HTM Fucus
4.3.1 Методика количественного определения суммы моносахаридов 84 после гидролиза в HTM Fucus
4.3.2 Количественное определение йода в НГМ Fucus
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ IV
ГЛАВА V. ОЦЕНКА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ 91 НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ FUCUS, ИХ РАЗВЕДЕНИЙ И ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ НИХ MOHO- И ПОЛИСАХАРИДНЫХ ФРАКЦИЙ
5.1 Современные подходы к использованию биотест-систем для оценки 91 фармакологической активности настоек гомеопатических матричных и их разведений
5.2 Результаты исследований фармакологической активности Fucus 92 ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ V
ГЛАВА VI. РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА И 97 УСТАНОВЛЕНИЕ СРОКА ГОДНОСТИ ЛРС, НГМ FUCUS. АНАЛИЗ ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ РАЗВЕДЕНИЙ
6.1 Разработка показателей качества ЛРС Фукуса. Установление срока 97 годности сырья.
6.2 Разработка показателей качества и установление сроков годности 102 НГМ Фукуса
6.3 Методика анализа гомеопатических разведений НГМ Fucus 108 vesiculosus
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ VI
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Саканян, Карен Маисович, автореферат
Актуальность темы. В последние годы в отечественном практическом здравоохранении наблюдается устойчивая тенденция применения наряду с аллопатическим гомеопатического метода лечения, что в свою очередь, сопровождается появлением на фармацевтическом рынке России отечественных гомеопатических лекарственных средств (ГомЛС) [100,101].
Однако, их ассортимент существенно уступает таковому зарубежных гомеопатических препаратов, что обусловлено рядом причин как объективного, так и субъективного характера. К их числу следует отнести отсутствие Российской Государственной Гомеопатической фармакопеи, нормирующей качество отечественных ГомЛС, ограниченный перечень отечественных гомеопатических субстанций различного происхождения, в том числе настоек гомеопатических матричных (HTM), производство которых может быть организовано на базе отечественных гомеопатических предприятий [2,3,4].
Наряду с этим, не менее актуальной задачей отечественной медицинской практики является увеличение ассортимента ГомЛС, назначаемых для профилактики и лечения, наиболее выраженных патологий, к числу которых следует отнести нарушение обменных процессов, протекающих в человеческом организме [79, 105].
Среди растительных объектов, используемых для этих целей в мировой гомеопатической практике, следует отметить различных представителей бурых водорослей. Наиболее часто используются представители рода ламинария - Laminariacae L., которые в настоящее время применяются в отечественной и зарубежной медицинской практике как лекарственные средства, так и биологически активные добавки (БАД) к пшце [54,92,120,121,144,162]. Однако не менее интересен с этой точки зрения другой представитель бурых водорослей - Phaeophyta, фукус пузырчатый — Fucus vesiculosus L.
Благодаря высокому содержанию йода, полисахаридов и других биологически активных веществ (БАВ) различные виды бурых водорослей применяются при заболеваниях щитовидной железы, воспалениях лимфатических желез и различных видах алиментарного ожирения [19,76,77,80,123,146,148,162,191,195,196, 197].
HTM Fucus включена в руководство В. Швабе, а также в различные отечественные и зарубежные гомеопатические рецептурные справочники и фармакопеи, такие как гомеопатическая фармакопея России (1913 г.), государственные гомеопатические фармакопеи Германии, Великобритании, Франции, Индии и др. [44,46,47,49].
В связи с подготовкой гомеопатической фармакопеи России представляется актуальным проведение исследований, необходимых для разработки нормативной документации (НД) на лекарственное растительное сырье (JIPC) и HTM Fucus.
Цель и задачи исследования. Целью диссертационного исследования является фармакогностическое изучение слоевищ Фукуса пузырчатого, получение и фотохимическое исследование настоек гомеопатических матричных Fucus, препаратов Фукуса и их стандартизация.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Изучить фотохимический состав свежесобранного и высушенного сырья Фукуса пузырчатого и разработать методики качественного и количественного анализа основных групп БАВ.
2. Предложить технологию получения и провести исследования химического состава HTM из свежесобранного и высушенного сырья Фукуса. Разработать методики контроля качества HTM.
3. Разработать методики установления подлинности гомеопатических разведений Фукуса.
4. Провести предварительную оценку фармакологической активности HTM Фукус и ее разведений.
5. Оформить проекты Фармакопейных статей на «Фукуса пузырчатого слоевища»; «Фукуса пузырчатого слоевища свежие»; «Fucus vesiculosus настойку гомеопатическую матричную» и «Fucus vesiculosus Dl настойку гомеопатическую матричную».
Научная новизна. Определены основные макро- и микродиагностические признаки сырья, его товароведческие показатели, установлены оптимальные сроки заготовки и условия сушки, для свежезаготовленного сырья — сроки использования и методы консервации.
С применением современных методов химического и физикохимического анализа установлен качественный и количественный состав
БАВ свежих и высушенных слоевищ Фукуса пузырчатого. Определено, что в слоевищах Фукуса пузырчатого содержатся соединения йода и полисахариды. Так как полисахариды являются основной группой БАВ для этого растительного сырья, то с применением тонкослойной хроматографии (ТСХ), высоко-эффективной жидкостной хроматографии l'î
ВЭЖХ) и спектроскопии ядерного магнитного резонанса ( С) определен их компонентный состав. Показана необходимость стандартизации лекарственного растительного сырья Фукуса по содержанию в нем полисахаридов (гравиметрический метод), суммы моносахаридов после гидролиза в пересчете на глюкозу (метод УФ-спектроскопии) и йода (титриметрический метод).
Предложена технология и разработаны показатели качества, а также методы их оценки для HTM Фукус из свежего и высушенного JIPC и лекарственных препаратов на их основе. Установлено, что для препаратов Фукуса также целесообразно использовать в качестве основных показателей качества содержание в них свободных Сахаров, полисахаридов и йода.
Впервые проведено тестирование HTM Фукус и их разведений, свободных и связанных моносахаридов с использованием биотест-систем в опытах in vitro, позволившая выявить выраженное антиоксидантное действие анализируемых объектов.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны проекты ФС:
• «Фукуса пузырчатого слоевища свежие»;
• «Фукуса пузырчатого слоевища»;
• «Fucus vesiculosus (Fucus) настойка гомеопатическая матричная»;
• «Fucus vesiculosus (Fucus) Dl настойка гомеопатическая матричная».
Связь задач исследования с проблемным планом развития фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГУ ВИЛАР РАСХН по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2001-2005 и 2006-2010 г.г».
Основные положения, выносимые на защиту:
• Результаты исследований химического состава свежесобранного и высушенного сырья Фукуса и HTM Фукус, приготовленных из него,
• в сравнительном аспекте;
• Методики качественного и количественного анализа действующих веществ в ЛРС и HTM Фукус, их разведениях;
• Результаты оценки фармакологической активности HTM Фукус, и их разведений, а также выделенных из них моно- и полисахаридных комплексов;
• Проекты фармакопейных статей на ЛРС и HTM Фукус.
Заключение диссертационного исследования на тему "Стандартизация Фукуса пузырчатого (Fucus) и настоек гомеопатических матричных, получаемых на его основе"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Проведен товароведческий анализ JIPC Фукуса, установлены диагностически значимые микроскопические признаки сырья «Фукуса пузырчатого слоевища», определены числовые показатели для JIPC Фукуса.
2. С помощью методов физико-химического анализа (ТСХ, ВЖХ, ЯМР 1
С -спектроскопии и др.) изучен в сравнительном аспекте углеводный состав JIPC Фукуса, как свежего, так и высушенного, и HTM, изготовленных из него.
3. Разработаны методики количественного определения суммы связанных моносахаров после гидролиза в пересчете на глюкозу в слоевищах Фукуса пузырчатого свежих и высушенных и HTM Фукус с помощью метода дифференциальной УФ-спектрофотометрии, а также содержание йода с помощью титриметрического метода.
4. По результатам предварительной оценки фармакологической активности HTM Fucus определено, что настойки гомеопатические матричные слоевищ Фукуса пузырчатого, их разведения, а также моно- и полисахаридные фракции, выделенные из них, обладают выраженной антиоксидантной активностью.
5. Установлен срок годности высушенного JIPC Фукуса - 3 года, срок использования свежего сырья Фукуса - 24 часа, HTM — 2 года.
6. По результатам исследований разработаны проекты ФС на JIPC Фукуса: «Фукуса пузырчатого слоевища свежие» и «Фукуса пузырчатого слоевища»; а также на HTM Фукуса: «Fucus vesiculosus настойка гомеопатическая матричная» и «Fucus vesiculosus Dl настойка гомеопатическая матричная» для Государственной гомеопатической фармакопеи РФ.
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2008 года, Саканян, Карен Маисович
1. Акашкина Л. В. Теоретические и прикладные аспекты стандартизации некоторых лекарственных средств (Субстанции и препараты получаемые из лекарственного растительного сырья) / автореф. дис. докт. фарм. наук - С-Пб, 2000 - 72 с.
2. Алюшин М. Т. Проблемы гомеопатической фармации в России. // Народная медицина России. Тез. докл. М., 1993.- С. 179.
3. Алюшин М. Т., Костенникова 3. П. Перспективы развития гомеопатической фармации в России. // Гомеопатический вестник.- 1994.- № 1.- С. 109-113.
4. Алюшин М. Т., Тракман Ю. Г. Стандартизация в технологии и контроль качества гомеопатических лекарственных средств.// Народная медицина России. Тез. докл. М., 1993.- С. 180.
5. Ахрем А. А., Кузнецова А. И. Тонкослойная хроматография. М.: Наука, 1965.-С. 19-55.
6. Бандюкова В. А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографирования на бумаге // Растит, ресурсы. 1965.-Т. 1, №4.- С. 591-597.
7. Бараш Г. И., Рейхарт Д. В., Гольдберг Е. Д. и др. Новые возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе лекарственных средств. // Фарматека. 2002. - № 11. - С. 71-74.
8. Барбакадзе В. В. Предварительное исследование водорастворимых полисахаридов некоторых растений Грузии / В. В. Барбакадзе, Р. А.
9. Гахокидзе, 3. С. Шенгелия, А. И. Усов // Химия природных соединений. -1989. Вып. 3.-С. 330-335.
10. Беликов В. Г., Пономорев В. Д., Коковкин-Щербак Н. И. и др. Применение математического планирования и обработка результатов эксперимента в фармации. М.: Медицина, 1973. — 117 с.
11. Беляков К. В. Количественное определение полисахаридов в листьях мать-и-мачехи (Tussilago farfara L.) / К. В. Беляков, Д. М. Попов // Фармация. -1999. №1. - С. 23-24.
12. Беляков Н. А. Адсорбенты / П. А. Беляков, С. В. Королькова. СПб.: МАЛО, 1997.-С. 80.
13. Бережная JI. А. Выделение и фракционное разделение углеводов свекловичных выжимок / JI. А. Бережная, Н. Ш. Кайшева // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 138 - 139.
14. Берике В. Metería medica гомеопатических препаратов // Под ред. Захаренкова В. М. М.: Гомеопатическая медицина. - 1998.- С. 290.
15. Бернштейн И. Я., Каминский Ю. JI. Спектрофотометрический анализ в органической химии. JL: Химия, 1986. - 199 с.
16. Блажей Н., Шутый JI. Фенольные соединения растительного происхождения. М.: Мир, 1977. - 239 с.
17. Болотова В. Ц. Спектрофотометрический метод определения содержания полисахаридов в листьях Tilia cordata Mill. / В. Ц. Болотова, Е. И. Саканян, Е. Е. Лесиовская, Л. В. Пастушенков // Растит, ресурсы. 2001. -Т.37.-Вып. З.-С. 109-112.
18. Большаков Г. Ф., Ватаго В. С., Агрест Ф. Б. Ультрафиолетовые спектры гетероорганических соединений. Изд-во «Химия». - 1969. - 504 с.
19. Ботанический атлас // Под общей редакцией чл. кор. АН СССР Б. К Шишкина М.: Изд-во сельскохоз. лит-ры, журналов и плакатов. 1963.-С. 9.
20. Ботанико-фармакогностический словарь / под ред. К. Ф. Блиновой, Г. П. Яковлева. — М.: Высшая школа, 1990. 271 с.
21. Бродова М. С. Исследование фитопрепаратов и оценка их качества с использованием специфических ферментных биосистем инвитро. Автореф. дис. канд. фарм. наук. М. 2003. 23 с.
22. Брутко JI. И., Даргаева Т. Д., Николаева Г. Г. Количественный анализ лекарственных препаратов растительного происхождения. Улан-Удэ, 1985.-149 с.
23. Бурлакова Е. Б. Особенности действия сверхмалых доз биологически активных веществ и физических факторов низкой интенсивности // Российский химический журнал -1999. Т. 43, № 5. - С. 3-11.
24. Быков В. А., Дубинская В. А., Минеева М. Ф„ Ребров Л.Б., Колхир
25. B. К. Способ выявления веществ, обладающих антиоксидантными свойствами, in vitro. Патент РФ № 2181892. Chtm / Abstr. 137: 379959. -2003.23.
26. Быков В. А., Минеева М. Ф., Дубинская В. А., Стрелкова Л. Б., Колхир В. К., Ребров Л. Б. Первичный биохимический скрининг in vitro веществ с адаптогенной активностью // Биомедицинские технологии. 1997. -В.7-С.5 13.
27. Вавилова Н. М. Гомеопатическая фармако динамика.-«Гомеопатический центр», Смоленск. М.: Эверест. - 1994.- Т 1, 2.- 475 с.
28. Варшавский В. И. Практическая гомеопатия (лечение внутренних болезней) / под. Ред. докт. мед. Наук Е. А. Жук. -М.: Медицина, 1989.-1761. C.
29. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. // Под ред. Е. Е. Сироткиной. Томск, 1987. 184 с.
30. Георгиевский В. П. Применение хроматографии в тонком слое сорбента для идентификации и количественного определения биологически активных веществ растительного происхождения. М.: Наука, 1975. - 68 с.
31. Георгиевский В. П., Казаринов Н. А., Каррыев М. О. Физико-химические методы анализа биологически активных веществ растительного происхождения. -Ашхабад, 1976.- С.
32. Георгиевский В. П., Комиссаренко М. Ф., Дмитрук С. Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск, 1990. -333 с.
33. Голубева И. С. Сорокина А. А. Изучение углеводов сырья алтея лекарственного // Традиционная медицина-2007. 2007. — С. 50-51.
34. Гомеопатическая фармакопея России. СПб., 1813. - С. 23, 83-84.
35. Гомеопатические лекарственные средства «Эдас» (Справочно пособи для врачей, аптечных работников и населения) / Под ред. Т. Л. Киселевой, И. А. Рудакова. -М.- 2002.- С. 59, 64.
36. Гомеопатический метод лечения и практического здравоохранение // Сборник нормативных документов и информационных материалов. 1-е издание. -М., 1996.- 327 с.
37. Гомеопатическая фармакопея Франции. — Париж. 1989. - С. 132134.
38. Горин А. Т. Получение и химическое исследование полисахаридов из лекарственных растений // Матер, съезда фармацевтов. Свердловск, 1975.-С. 313-314.
39. Государственная фармакопея СССР X изд. М.: Медицина, 1968. -1078 с.
40. Государственная фармакопея СССР XI изд. М.: Медицина, 1987. -Вып.1. -338 с.
41. Государственная фармакопея СССР XI изд. М.: Медицина, 1989. -Вып.2. - 400 с.
42. Государственный реестр лекарственных средств VII ежегодное периодическое издание. — М.: техническая книга, 2002.- 1301 с.
43. Граник В. Г. Метаболизм эндогенных соединений. М. "Вузовская книга". 2006.-525 с.
44. Граник В. Г. Химические аспекты воздействия лекарственных средств на функции организма. // Известия Акад. наук. Сер. хим. -2001,- №8 - С. 1291-1313.
45. Гранникова Т. А. Краткий курс по гомеопатии. Ленинград: Медицина, 1991.-70 с.
46. Демьянов Н. А. Общие приемы анализа растительных веществ / Н. А. Демьянов, Н. Д. Прянишников. М., 1933. - 254 с.
47. Дорогойченков В. Н. Количественное определение восстанавливающих Сахаров в полисахаридном комплексе из цветков липы сердцелистной / В.Н. Дорогойченков, В.Н. Чушенко // Фармация. 1988. -№ 4. - С. 39-40.
48. Дроздова И. Л. Анализ полисахаридного состава листьев рода Arctium (Asteraceae) флоры Центрального Черноземья / И.Л. Дроздова // Растит. Ресурсы.-2005.-Т. 41.-Вып. 2. С. 101-106.
49. Дроздова И. Л. Выделение и химическое изучение полисахаридов травы донника рослого (МеШоШэ аШвзипш Ь.) / И.Л. Дроздова // Вестник Воронежского Государственного Университета, Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004. - № 1. - С. 173-175.
50. Дубинина Е. Е., Сальникова Л. А., Ефимова Л. Ф. Активность и изоферментный спектр супероксиддисмутазы эритроцитов и плазмы крови человека. // Лаб. дело. 1982. - № 10. - С. 30 - 3.
51. Дубинская В. А., Минеева М. Ф., Ребров Л. Б., Быков В. А. Биотест-системы для первичного скрининга и оценки действия веществ с антиоксидантной активностью.// Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 2007. -№4. -С.
52. Дюмаев К. М., Воронина Т. А., Смирнов Л. Д. Антиоксиданты в патологии и терапии заболеваний ЦНС. М. 1995. - С. 117-121.
53. ЕС: О своде законов Сообщества в отношении лекарственных средств для человека // директива 2001 / 83 / ЕС Европейского Парламента и Совета ЕС от 06.11.2001 г
54. Завадская А. И. Развитие гомеопатического метода в современной медицине. // Тезисы докладов XIII Московской международной гомеопатической конференции. 24-25 января 2003 г. М.: Валанг, 2003. -С. 9-10.
55. Зактрова А. Н. Корреляционные связи перекисного окисления липидов, антиоксидантной защиты и микрореологических напушений в развитии ИБС. // Терапевтический архив.- 1996.- № 9. С.37 - 40.
56. Залялиева С. В. Жидкостная хроматография полисахаридов / С. В. Залялиева, Б. Д. Кабулов, К. А. Ахунджанов, С.Ш. Рашидова // Химия природных соединений. 1999. - №1. - С. 3-16.
57. Захарова И. Я., Косенко JI. В. Методы изучения микробных полисахаридов. Киев: Наукова Думка, 1982. 192 с.
58. Зевахина Ю. А. Пектиновые вещества Galega orientalis / Ю.А. Зевахина, E.H. Офицеров // VI Международный Съезд «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» 4 - 6 июля 2002 г. Санкт-Петербург. - СПб., 2002. - С.
59. Зейдака А. А. Выделение полисахаридных фракций из лишайника Cetraria islandica и изучение их химической структуры / A.A. Зейдака, Х.Ф. Басс-Шадхан // Прикладная биохимия и микробиология. 1977. - Т. 13. -Вып. 3.- С. 359-364.
60. Зенкевич И. Г., Багирова В. JL, Сокольская Т. А. и др. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки. // Фармация. 2002. - № 1. С. 40-42.
61. Изменение №3 к статье Государственной фармакопеи XI издания «Методы микробиологического контроля лекарственных средств», 2003. -5 с.
62. Кейн С. Гомеопатическая фармация. Введение и руководство / пер. с англ. Федотовой Г. А. — М.: Гомеопатическая медицина, 2002.- 252 с.
63. Келлер Г. Гомеопатия / Пер. с нем. Ю. И. Коршиковой, М.: Медицина, 1989.- 592 с.
64. Кемертелидзе Э. П., Георгиевский В. П. Физико-химические методы анализа некоторых биологически активных веществ растительного происхождения. Тбилиси, 1976. - 80 с.
65. Киселева Т. JI. Место гомеопатии в системе здравоохранения России (Глава 1) // В кн.: Гомеопатия в помощь специалисту / приложение №3 2001 к журналу «Новая аптека». М.: МЦФР, 2001С. 9-103.
66. Кларк Д. Г. Словарь практической Materia medica. М. - 2000. - С. 241-243.
67. Колеса М. Анализ препарата «Перигран», исходного сырья и промежуточного продукта его получения. Количественное определение полисахаридов / М. Колеса, Г. Китанов, Н. Наков // Фармация.-1981.-№1. -С. 32-36.
68. Комина О. Н. Получение и исследование полисахаридного комплекса листьев малины обыкновенной / О.Н. Комина, Н.С. Фурса // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 69 - 70.
69. Королюк М. А., Иванова JI. И., Майорова И. Г., Токарева В.Е. Метод определения активности каталазы. // Лаб. дело. 1988. -№1.- С. 16-19.
70. Костенникова 3. П., Акашкина Л. В. Анализ и стандартизация гомеопатических лекарственных средств растительного происхождения. // Фармация. 1993.- №. 6.- С. 59-62.
71. Костенникова 3. П., Акашкина Л. В., Островский А. 3. Введение в гомеопатическую фармацию. М.: Симилия, 2003. - 208 с.
72. Кочетков Н. К. Химия биологически активных природных соединений. М.: Химия, 1970. - 378 с.
73. Кочетков Н. К. Химия углеводов / Н.К. Кочетков, А.Ф. Бочков, Б.А. Дмитриев и др. М., 1967 - 672 с.
74. Кузнецова Г. А. Природные кумарины и фурокумарины. Л., 1967. -120 с.
75. Кулинский В. И., Колесниченко Л. С. Биологическая роль глутатиона. //Успехи совр. биол. 1990. - Т. 110. - В. 1 (4). - С. 20 -28.
76. Лекарственные растения государственной фармакопеи / под ред. И. А. Самылиной, В. А. Северцева.- М., «АНМИ». 1999 Г.-488 С.
77. Лигай Л. В. Изучение полифенолов и полисахаридов некоторых растений сем. Мальвовых: автореф. дис. канд. фарм. наук: 15.00.02. -Пятигорский фарм. ин-т. Пятигорск, 1992. - 24 с.
78. Лимаренко Ю. А. Комплексная переработка сухого сырья бурых водорослей с применением метода экстракции двухфазной системой экстрагентов: автореф. дис. канд. фарм. наук: 15.00.01. С-Пб. - 2000. — 24 с.
79. Лоенко Ю. Н., Артюков А. А., Козловская Э. П., Мирошниченко В. А., Еляков Г. Б. Зостерин. Владивосток.: «Дальнаука». - 1997. - С. 13-37.
80. Мартынов А. М. Исследование полисахаридного комплекса фиалки одноцветковой Viola uniflora L. / A. M. Мартынов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. - Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 91 - 92.
81. МЗ РСФСР: О развитии гомеопатического метода в медицинской практике и улучшение организации обеспечения населения гомеопатическими лекарственными средствами // Приказ от 01.07.91 г. 115 с.
82. МЗ и МП РФ: Об использование метода гомеопатии в практическом здравоохранении / Приказ от 29.11.95 г. № 335.
83. Мид Дж. Свободнорадикальные механизмы повреждения липидов и их значение для клеточных мембран. // Свободные радикалы в биологии. Ред. У. Прайор. - М. - "Мир". - 1979. - С. 68-87.
84. Микулич Д. В., Волощенко И. А., Медведева Е. И. студнеобразующая способность полисахаридов бурых водорослей // Растительные ресурсы. 1988. Т. 24, вып. 3. С. 456-460.
85. Михеев А. Д. Содержание и моносахаридный состав водорастворимых полисахаридов корней некоторых видов Егетшиэ В1еЬ., интродуцированных в Пятигорске / А.Д. Михеев, Н.И. Смирнова, В.Д. Щербухин // Растит, ресурсы. 2003. - Т. 39. - Вып. 2. - С. 69-72.
86. Мищенко В. С., Иванова А. М. Гомеопатические лекарственные средства (пособие для врачей и провизаров). М.: Гомеопатический центр, -1995.-147 с.
87. Назарова И. В. Влияние полисахаридов из морских водорослей и трав на систему комплемента: автореф. дис.канд. мед. наук/И.В. Назарова; Ин-т биологии моря Дальневосточного отд-я РАН-Владивосток, 1999.-24 с.
88. Облучинская Е. Д. Совершенствование комплексной технологии лекарственных средств из фукуса пузырчатого (Fucus vesiculosus L.): автореф. дис. канд. фарм. наук: 15.00.01 / Е.Д. Облучинская; СПХФА, Мурманск, морск. биол. ин-т. СПб., 2004. - С. 23.
89. Османова Н. А. Выделение и изучение полисахаридов галеги лекарственной и галеги восточной // Труды 76-й научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук центрально-черноземного научного центра РАМН (Часть П).-Курск, 2002. С. 112-113.
90. ОСТ91 500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».
91. ОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные».
92. Охременко О. С. Экстракция полисахаридов из плодов софоры японской в присутствии поверхностно-активных веществ / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 196 - 197.
93. Патудин А. В., Мищенко В. С., Ильенко JI. И. // Гомеопатические лекарственные средства, разрешенные в Российской Федерации для применения в здравоохранении и ветеринарии. М.:«Валанг», 2005.- 348 с.
94. Петерсоне Э. Ю., Батова Р. С., Осадчюк JI. П., Туманова Е. Б. Метод выделения водорастворимых растительных гетерополисахаридов // Научн. Тр. ВНИИФ, 1983.-T. XX.-С. 116-117.
95. Пилат Т. П., Иванов А. А. Биологически активные добавки к пище (Теория, производство, применение). — М. 2002. - С. 364-365.
96. Племенков В. В. Введение в химию природных соединений. -Казань, 2001.-376 с.
97. Подколзин А. А., Гуревич К. Г. Действие биологически активных веществ в малых дозах. М.: изд. КМК., 2002. - 170 с.
98. Практикум по химии углеводов / под ред. Ю. А. Жданова. М.: Высшая школа, 1973. -213 с.
99. Растения для нас / под ред. Г. П. Яковлева, К. Ф. Блиновой. СПб.: Учебная литература. 1996. - 654 с.
100. Растительные лекарственные средства / Н. П. Максютина, Н. Ф. Комиссаренко, А. П. Прокопенко и др.; под ред. Н. П. Максютиной. К.: Здоровье. - 1985. - 280 с.
101. Рачинский В. В, Князятова Е. И., Кравцова Б. Е. Методика получения и качественного анализа бумажных хроматограмм Сахаров // Биохимия. 1952. Т. 17, вып. 5.- С. 551-556.
102. Реквег Г. Г. Гомеопатическая антигомотоксикология. Систематизированное практическое лекарствоведенье. Смоленск: Гомеопатическая медецина. - 1997. -591 с.
103. Рудаков И. А., Мищенко В. С., Кондэ JI. А., Оленьев A. JI. Российская гомеопатическая школа и комплексные гомеопатические препараты // Гомеопатический ежегодник. — М.: Валанг. 1997. - С. 4-9.
104. Руководство по стандартизации лекарственных средств / под ред. Р. У. Хабриева, В. JI. Багировой, В. Б. Герасимова. Москва, 2006 г.- С 219286.
105. Саар В. Г. Определение моносахаридов в физиологических жидкостях / В.Г. Саар, C.B. Кузнецова, Е.М. Королева // Химическийанализ веществ и материалов: тез. докл. всероссийской конф. М., 2000. -С.102.
106. Савицкая Е. М. Физико-химические методы определения углеводов / Е.М. Савицкая, Б.П. Брунс, А. А. Коробицкая, В.Д. Карцева // Журн. аналитической химии. 1955. - Т.Н. - №2. - С. 124-127.
107. Саушкина А. С. Изучение некоторых полисахаридных комплексов растительного происхождения / A.C. Саушкина, В.А. Карпенко, Т. Т. Лихота, О. М. Маркова, О. И. Попова // Фармация в XXI веке: инновации и традиции. СПб., 1999. - С. 247.
108. Сафонова М. Ю., Саканян Е. И., Лесиовсая Е. Е. Спектрофотометрический способ определения содержания полисахаридов в слоевищах Cetraria islandica (L.) Ach // Растит, ресурсы. 1999. - Т. 35, вып. 2.-С. 101-105.
109. Сбежнева В. Г., Козлов Н. Е. Анализ полисахаридов // Тезисы докладов 46 ой региональной конференции по фармации и фармакологии. Пятигорск, 1991. - С. 95-96.
110. Сборник фармакопейных статей по гомеопатии / Под ред. Р. У. Хабриева. Москва, 2005 г.- 80 С.
111. Свиридова А. Ф., Чижов А. С. Химические методы частичного расщепления полисахаридов // Биоорганическая химия. 1976. Т. 2, №3. — С. 315-345.
112. Смирнов Н. И. Галактоманнаны некоторых видов сем. Fabaceae / Н.И. Смирнов, Н. Е. Лобанова, О, В. Анулов // Растительные ресурсы. -1998. №2.-С. 68-71.
113. Степаненко Б. Н. Химия и биохимия углеводов. (Полисахариды) / Б.Н. Степаненко. -М., 1978. С. 332.
114. Технология и стандартизация лекарств / под ред. В. П. Георгиевского В. А. Конева. Харьков: ООО "РИРЕГ". - 1996 С. 412-539.
115. Томкевич М. С. Основы Гомеопатии. М., 2004. 250 с.
116. Тулайкин А. И. Углеводы надземной части Ononis arvensis (Fabaceae): структура полисахаридов / А.И. Тулайкин, Л.Ф. Стрелкова, B.C. Березина // Растит, ресурсы. 2005 Т. 41. - Вып. - 4. - С. 73-80.
117. Туманов А. А. Методы определения целлюлозы и ее водорастворимых производных / А. А. Туманов, Е.А. Коростылева // Растит, ресурсы. 1985. - Т.21. - Вып.4. - С. 490-498.
118. Турова, А.Д. Биологическая активность полисахаридов растительного происхождения / А.Д. Турова, A.C. Гладких // Фармакология и токсикология. 1965. - Т.28. - Вып.4. - С. 498-504.
119. Турпаев К. Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов. // Биохимия. 2002. Т. 67. -№.3. - С. 339-352.
120. Усов А. И., Рехтер М. А. Обнаружение невосстанавливающих Сахаров при хроматографировании на бумаге. // Журн. общей химии. 1969, Т.39. Вып.4. -С. 912-913.
121. Федеральный закон №86-ФЗ от 22 июня 1998 г «О лекарственных средствах» (с изменениями от 2 января 2000 г).
122. Федеральный реестр биологически активных добавок к пище. Изд. 2, перераб. и доп. - М. - 2001. - 431 с.
123. Филиппов М. П. Колориметрическое определение уронидной части в пектиновых веществах / Изв. АН МССР: Сер. биол. и хим. наук. 1973. -№3. - С. 76-79.
124. Френкель Л. Д. Гомеопатический лечебник. Полное руководство в самопомощи в болезнях гомеопатическими реакциями и домашними вспомогательными мерами (в 4 частях). С-Пб. - 1911. - С. 787.
125. Фтиц В. В., Матвеева И. Ю. Количественное определение микробных полисахаридов с использованием антронсерного реактива / Творчество молодежи научно-техническому прогрессу: тезисы докладов конференции молодых ученых. - JL, 1988. - С. 98.
126. Хагер Г. Руководство к фармацевтической и медико-химической практике / Под. Ред. Д-ра Н. П. Иванова. С-Пб.: Издание К. JI. Риккера. -Т 2.- 1892.- С. 647-650.
127. Химический анализ лекарственных растений. / Под ред. Н. И. Гринкевия, JI. Н. Сафронич. // М., Высшая школа. 1983. - 175 с.
128. Хрещенюк С. И., Гончаренко Г. К., Прокопенко О. П. и др. Влияние метода измельчения на процесс экстракции лекарственного растительного сырья // Фармацевтич. Журнал. 1974. - № 2. - С. 61-63.
129. Хроматография. Практическое приложение метода. / Под ред. Э. Хефтман. М., «Мир», 1986. - Ч. 1. - 336 с.
130. Хубер JI. Применение диодно-матричного детектирования в ВЭЖХ / Пер. с англ. под ред. Березкина В.Г. М.: Мир, 1993.
131. Цаль О. Я., Роговская JI. Я., Бензель JI. В. Спектрофотометрическое определение полисахаридов в корнях кульбабы лекарственной // Фармацевтичный журнал. 1992. №2. С. 64-65.
132. Черепанов С. К. Сосудистые растения СССР. JL, 1981. - 357 с.
133. Чушенко В. Н., Жуков Г. А., Карамова О. Е. и др. Углеводы соцветий Calendula officinalis. // Химия природных соединений. 1988. т № 4. - С 585-586.
134. Шаретт Ж. Практическое гомеопатическое лекарствоведение. Руководство. (Пер. с франц.).- Киев, 1990. 389 с.
135. Шаршунова М., Шварц В., Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. М.: Мир, 1980. - 606 с.
136. Шелухина Н. П. Пектиновые вещества, их некоторые свойства и производные / Н. П. Шелухина, 3. Д. Ашубаева, Г. Б. Аймухамедова. -Фрунзе, 1970.-73 с.
137. Шилов Ю. М. О возможности количественного определения гликозидов в смеси с агликоном и сахаром методом ИК-спектроскопии / Ю. М. Шилов, М. Л. Королева, А. В. Котов // Журнал прикладной спектроскопии. 1983. - №5. - С. 793-797.
138. Шталь Э. Хроматография в тонких слоях. М.: Мир, 1965. - 508 с.
139. Щербак С. И. Количественное определение пектинов методом потенциометрического титрования / С. И. Щербак, В. А. Компанцев // Фармация.- 1993. №5. - С. 24-27.
140. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения / под ред. Г. П. Яковлева, К. Ф. Блиновой. -СПб.: Спец. лит., 1999. 407 с.
141. Яковлев Г. П., Аверьянов Л. В. Ботаника для учителя. Ч. 2.- М.: Просвещение: АО «Учеб. лит.», 1996. - С. 55-66.
142. Ainsworth J.B. Homoeopathy and the community pharmacist (part two)// Homoeopathy. 1991. - № 41 (1). - p. 5.7.
143. Akada Y., Tanase Y. High-speed Liquid Chromatographic Analysis of Drugs. II. Rapid Estimation of Berberine in Crude Drugs. // J. pharm. Soc. Jap. -1977. Vol. 97. - N 8. - P. 940-943.
144. Amirghofran Z., Azadbakht M. Evaluation of the immunomodulatory effects of five herbal plants // J. Ethnopharmacology.- 2000. Vol. 72, N 1-2. -P. 167-172.
145. Assessment of peak homogenity in HPLC by computer-aided photodiode-array detection. / J.G.D. Marr, P. Horvath, В J. Clark et al. // Anal. Proceed. -1986,-Vol. 23.-P. 254-257.
146. Banerjee D. D. Text Book of Homoeopathic Pharmacy. New Delhi, India: B. Jain Pablishers Pvt. Ltd., 1993.-Vol. 1 - 360 p., Vol. 2.-117p.
147. Barthel P. Hahnemannian legacy, quality standards for homoeopathic medicines// Homeopathic Links. 1993. - № 6(3). - P. 30-33.
148. Bauer R., Wagner H. / Cucurbitacinlialtige Drogen/ Analyse und Standardisierang von Arzneidrogen und Phytopraparaten durch
149. Hochleistungsfussigchromatographie (HPLC) und andere chromatographische Verfahren (II) // Deutsche Apotheker Zeitung. 1983. -Bd. 123, N27. -S. 13131321.
150. Bentley R. A gas chromatographic method analysis of anomeric carbohydrates and for determination of mutation coefficients / R. Bentley, N. Botlock // Anal. Biochem. 1967. - № 20. - P. 312-320.
151. Beutler E. Red cell metabolism. Ed. E.Beutler. Churchill. Livingson. -1986.- P.60-79.
152. Böhme W., Liekmeier W., Steinwand M. Spectral library search in UV/Vis spectroscopy and liquid chromatography with the UV detection. // GIT. 1988, may. -P. 505-509.
153. Bowler Ch., Montagu M., Inze D. Superoxide dismutase and stress tolerance. // Annu. Rev. Plant. Physiol. Plant. Mol. Biol. 1992. - V. 43. - P. 83-116.
154. Breitmaier E., Voelter W. 13CNMP Spektroscopy Methods and Applications in organic chemistry 2nd Edition Verlag Chemie Weinheim. New Yore. 1978. C. 131-177.
155. British Homoeopathic pharmacopoeia (B.Hom.P.) Published by the British Association of Homoeopathic Manufacturers (BAHM), 1993. Vol. 1.150 p.
156. Bryodin, a ribosome-inactivating protein from the roots of Bryonia dioica L. (white bryony) / F. Stirpe, L. Barbieri, M.G. Battelli et al. // Biochem. J. -1986. Vol. 240, N 3. - P. 659-665.
157. Chemometric methods for the validation of peak homogenity in HPLC / G.G. Seaton, J.G.D. Marr, B.J. Clark et al. // Anal. Proceed. 1986. - Vol. 23.-P. 424-427.
158. Cimpan G., Gocan S. Analysis of medicinal plants by HPLC: recent approaches // J. Log. Chromatogr. and Ralat. Technol.- 2002.- Vol. 25, N 13-15.-P. 2225-2292.
159. Clinical and biochemical analysis. Vol. 1. Colorimetric and fluorimet-ric analysis of organic compounds and drugs. M. Pesez, J. Bartos, M. Dekker, Inc., New York.
160. Cotariu D., Evans S., Lahat T., Theitler J., Bistritzer T. Zaidman J.L. Inhibition of human red blood cell glutathion reductase by valproic asid. //Biochemical Pharmacology. 1992. - V. 43. - №3. - P. 425-429.
161. Dishez M., Shettes Z.B., Osnos M. New specific colour reactions of hexosuc and spectrophotometric micromethods for their determination // Arch. Biochem. 1949. Vol. 22. №2. P. 169-184.
162. Dreywood R. Qualitative test for carbohydrate materials / R. Drey wood // Ind. Eng. Chem. 1946. - Vol.18. - P.499.
163. Dubois M., Gilles K. A., Hamilton J. K., Rebers P. A., Smith F. Colorimetric method for determination of sugas and related substances // Anal. Chem. 1956. Vol. 28. № 3. P. 350-356.
164. Ebel S., Muck W. Implementation and efficiency of an automatic peak purity control procedure in HPLC-UV/Vis coupling based on principal component analysis // Chromatographia. 1989. - Vol. 25. - P. 1075-1086.
165. Evaluation of peak-recognition techniques in liquid chromatography with photodiode-array detection. / J.K. Strasters, H.A. Billiet, L. de Galan et al. // J. Chromatogr. 1987. - Vol. 385. - P. 181-200.
166. Fasmanade A. A., Fell A. F., Scott H. P. Three dimensional derivatove spectrocliromatograms in high-performance liquid chromatography and their implications for peak homogenity validation // Anal. Chim. Acta. 1986. -Vol.187.-P. 233-240.
167. Flon L. Glutathion peroxidase. // Oxigen radicals in biology and medicine. Ed. Simic M. G., Taulor K. A., Ward J. F.,Sonntag C. Basic life science. -NY-L. - 1988. - № 49. - P. 663 - 668.
168. Fromenty B., Pessayre D., Pharmac. Ther. 1995, v. 67, № 1, p.p. 101-154.
169. German Homoeopathic Pharmacopoeia 5th Supplement tobl978 editon., Berlin. 1998.-P. 219.
170. Gopalan P., Hirumm S., Loticar P. D., Cancer Lett. 1994. - V. 76, P. 25
171. Grant A., Bhattacharyya P. K. Application of derivative spectroscopy to the determination of chromatographic peak purity // J. Chromatogr. 1985. -Vol. 347. P. 219-235.
172. Hiroe Nagaxawa, Chokoh Genka, Minako Fujishima. Patological aspects of active oxygens/free radicals. //Japanese J. of Physiol. 1996. - V. 46. - № l.-P. 15-32.
173. Homeopatic Pharmacopoeia of the Unated States. (Pharmacopoia of the American institute of homoeopathy/ Copyright 1988 by the Homeopatic Pharmacopoeia Convention of the unation States.)
174. Homoeopathic pharmacopoeia of India (H.P.I.)- vol.1, 1971; vol.2, 1974; vol.3, 1978; vol.4, 1984; vol.5, 1987; vol.6, 1990.
175. Homoeopathic Repetitorium / Meteria Medica in Tabular Form. Publihed by Dr. Willmar Schwabe, Karlsruhe. 1994 Edition. - 165 p.
176. Hoppe H. A., Levring T. Marine Algae in Pharmaceutical Science. -Tokio. — 1994. -432 p.
177. Huber L., Fiedler H. P. Computerized HPLC diode-array detection in pharmaceutical research analysis // HPLC in Pharmaceutical Analysis, Mar-cel-Dekker Inc., New York. 1989.
178. J.van Bladeren, Chemico-Biological Interactions, 2000, v. 129, p. 129
179. Joliffe G. H. Thin layer chromatographic examination of mother tinctures// British Homoeopathic Journal. 1977. - Vol. 66. - P. 197-202.
180. Krämer P. Rational approach to fractionation, isolation and characterization of polysaccharides from the lichen Cetraria islandica / P. Kramer, et. al. // Drag. Res. 1995.45(1). - №6. - P.726-731.
181. Nassan H. M., Fridovich I. Superoxide dismutases: detoxication of a free radicals. In: Ensimatic basis of detocsication. Ed. W. B. Jakoby. 1980. -Acad. Press. -P. 311 -332.
182. Ordinatio antihomotoxica et material medica. Под общей редакцией научного отдела Фирмы Биологише Хайльмитель Хеель Гмбх. Biologische Heilmittel Heel GmbH, Baden-Baden ,1995.476 с.
183. Pharmacopee Française. 10 edition, 6 supplement: Monogra-phies de souches pour preparations homéopathiques. - Paris: Lue-gebe, 1989. 439-686 p.
184. Roe J. H. The determination of dextran in blood and urine with anthrone reagent // J. Biol. Chemistry. 1954. Vol. 208. N. 2. P. 889-896.
185. Samsel E. P., De Zap К. A. Colorimetric determination of methylcellulose with anthrone//Anal. Chem. 1951. Vol. 23.-P. 1792-1797.
186. Sinner M. The chromatographic behavior of polysaccharides / M. Sinner, J. J. Puis // J. Chromatogr. 1978. - Vol.156. - №1. - P. 194-204.
187. Sundberg К., Seidel A., Mannervik В., Jernstrom В., FEBS Lett., 1998, V.438. №3. - P. 206.
188. Sweely С. C. Gas-liquid chromatography of trimethylsilyl derivatives of sugar and related substances / C.C. Sweely, R. Bently, M. Makita, W.W. Wells //J. An. Chem. Soc. 1963. - Vol. 85. - № 16. - P. 2497-2507.
189. Testa B. Metabolism of Drugs and Other Xenobiotics, Biochemistry of Redox Reactions, Ed. B.Testa, J. Caldwell, London, San Diego, N.Y., Boston, Sydney, Tokyo, Toronto, Academic Press, 1995 471 p.
190. Testa В., Mayer J. M., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich, Switzerland, 2003 780 p.
191. Urs A. Boelsterli, Mechanistic Toxicology. The Molecular Basis of How Chemicals Disrupt Biologic Targets, 2007, CRC Press Taylor and Francis Group.
192. Usov A. I. Polysaccharides of algae. 48. Polysaccharide composition of several calcareous red algae: isolation of alginate from Corallina pilulitara / A. I. Usov, M. I Bilan, N. G. Klochkova // Bot. Marina. 1995. - Vol. 38. - №3. - P. 43-51.
193. Viles J. F. Determination of starch and cellulose with anthrone / J. F. Viles, L. Silverman // Anal. Chem. 1949. - Vol.21. - P. 950-953.