Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Плауны флоры Западной Сибири-сырьевые источники наркологических лекарственных средств

На правах рукописи

ИХТИМАНЛИЙСКА Людмила Леонидовна

ПЛАУНЫ ФЛОРЫ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ — СЫРЬЕВЫЕ ИСТОЧНИКИ НАРКОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

15.00.02 — Фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск — 1995

Работа выполнена в Пятигорской Государственной фармацевтической академии.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация —

Доктор фармацевтических наук,

профессор Муравьева Д. Л.

Доктор фармацевтических наук,

профессор Бубенчикова В. Н.

Доктор медицинских наук, профессор Гаеоый М. Д.

Пермский государственный фармацевтический институт.

Защита состоится ..........................1995 г.

в............часов на заседании диссертационного совета Д 084.45.01

по защитам диссертаций при Пятигорской Государственной фармацевтической академии по адресу: 357533, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской Государственной фармацевтической академии.

.....

Автореферат разослан «..^..г...».....г.

Ученый секретарь диссертационного совета

КОМПАНЦЕВА Е. В.

ВВЕДЕНИЕ

Изыскание наиболее эффективных и безвредных средств для лечения больных алкоголизмом продолжает оставаться актуальной задачей современности.

Одним из перспективных направлений современной фитотерапии является изучение лекарственных растений, обладающих специфическим действием на организм человека, в том числе и антиалкогольным.

К сожалению, практическая медицина располагает сегодня очень ограниченным ассортиментом лекарственных средств. Синтетические препараты отличаются малым спектром действия, быстро наступающей адаптацией организма к ним, высокой токсичностью, индивидуальной непереносимостью, значительным количеством противопоказаний. Существующие современные средства (тетурам, циамид, апоморфин и др.) и методы лечения ими дают высокий процент побочных явлений и, самое главное, не вызывают стойкого отвращения к алкоголю.

К числу малоизученных растений флоры СССР можно отнести представителей класса плауновые /Ьусорос1юр51с1а/, насчитывающих 18 видов, 10 из которых - встречаются также в Западной Сибири. Одни виды плаунов широко применяются в народной медицине Сибири при воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, печени, как мочегонные средства, другие - обладают рвотным действием, что обусловило их применение в условно-рефлекторной терапии алкоголизма.

В клинической практике для лечения алкоголизма применяется 5% водный отвар травы баранца обыкновенного. Отмечено его преимущество в методике лечения алкоголизма, заключающегося в том, что при употреблении отвара больной получает целый комп-

лекс биологически активных веществ и родственных соединений, которые действуют гораздо мягче, чем синтетические препараты.

Учитывая возрастающую потребность в сырье баранца обыкновенного наркологических учреждений страны и в виду значительного истощения его зарослей в Европейской части страны, встает закономерный вопрос о перемещении заготовок этого ценного вида сырья в малоизученные и практически не используемые для этих целей обширные территории Сибири и Дальнего Востока.

Кроме того, спрос на сырье баранца обыкновенного можно решить за счет близких видов плауновых: плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного, которые имеют не только широкое применение в народной медицине Сибири и близость химического состава, но и обширную географическую распространенность.

Цель н задачи исследования. Основной целью нашей работы явилось теоретическое и практическое обоснование возможности использования в наркологической практике наряду с баранцем обыкновенным близких видов плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

• провести сравнительное изучение баранца обыкновенного, плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного на содержание биологически активных веществ;

• выявить и выделить основные биологически активные вещества, провести идентификацию на основе изучения их физико-химических свойств и спектральных характеристик;

• изучить динамику накопления действующих веществ в зависимости от фазы развития растения и места произрастания;

• провести ресурсные обследования баранца обыкновенного в отдельных районах Западной Сибири. Выявить и закартировать промышленные заросли;

• определить ресурсно-сырьевой потенциал плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного в данном регионе;

• провести товароведческие исследования баранца обыкновенного флоры Западной Сибири, разработать проект изменения фармакопейной статьи "Трава баранца обыкновенного";

• обосновать показатели норм качества, разработать характеристики подлинности на сырье плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного;

• провести сравнительное фармакологическое исследование исследуемых видов плаунов на специфическую антиалкогольную активность.

Научная новизна. Проведены комплексные фитохимические и фармакологические исследования баранца обыкновенного, плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного, произрастающих на территории Западной Сибири. На основании экспериментальных данных дано теоретическое обоснование возможности применения новых сырьевых источников в качестве равноценного заменителя баранца обыкновенного.

В сырье исследуемых видов плаунов выделены и идентифицированы 2 соединения флавоноидной природы - кверцетин и апиге-нин; 2 фенолкарбоновые кислоты - кофейная и хлорогеновая; 1 соединение основного характера - ликоподии.

Для изучаемых растений впервые доказано наличие в траве тритерпеновых соединений, смолистого остатка, 16 свободных аминокислот, из которых в наибольшем количестве присутствуют глутаминовая и аспарагиновая кислоты, а также 20 химических

элементов. По содержанию отдельных макро- и микроэлементов баранец обыкновенный и исследуемые виды имеют явное сходство.

Впервые изучена динамика накопления действующих веществ в траве плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного в условиях Западной Сибири, установлено влияние географического фактора на содержание алкалоидов.

Впервые проведены ресурсно-сырьевые исследования баранца обыкновенного в Тюменской области и Алтайском крае.

В связи с перспективностью использования других изучаемых видов плаунов дана их предварительная ресурсоведческая оценка.

Впервые установлены морфолого-анатомические диагностические признаки сырья для исследуемых растений, распространенных в западносибирском регионе. На основании товароведческих исследований. обоснованы показатели норм качества сырья баранца обыкновенного и исследуемых видов, регламентирующие оценку их доброкачественности.

Практическая значимость работы. Дана полная ботанико-фармакогностическая характеристика баранца обыкновенного, плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного, произрастающих в Западной Сибири. В результате исследований установлено сходство химического состава и антиалкогольной активности комплексных препаратов баранца обыкновенного и исследуемых видов плаунов. Показана возможность применения в наркологической практике плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного наравне с баранцем обыкновенным.

Предложена методика количественного определения суммы алкалоидов в траве баранца обыкновенного, позволяющая сократить время проведения анализа и повысить его точность.

В результате экспедиционных обследований отдельных регионов Тюменской области и Алтайского края определены ресурсно-сырьевые возможности баранца обыкновенного. Дана предварительная ресурсоведческая оценка сырья перспективных видов плаунов на территории Тюменской и Томской областей.

Результаты внедрения. По заказу отдела изучения качества растительного сырья и лекарственных препаратов НПО "ВИЛР" разработан проект изменения фармакопейной статьи на траву баранца обыкновенного и проект изменения на методику количественного определения действующих веществ, которые представлены на рассмотрение в комиссию по стандартизации вышеуказанного учреждения. Методика гравиметрического метода количественного определения алкалоидов в траве баранца обыкновенного апробирована в контрольно-аналитической лаборатории ПО "Фармация" Тюменской области.

По материалам исследования разработан проект инструкции по сбору и сушке травы плауна булавовидного, которая передана в отдел по заготовке лекарственного сырья ПО "Фармация" Тюменской области.

Результаты исследований изучаемых видов плаунов используются в научных исследованиях и учебном процессе кафедры фармакогнозии Тюменского медицинского института.

Положения, выдвигаемые на защиту:

• обоснование возможности использования в наркологической практике наравне с баранцем обыкновенным плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного;

• результаты химического исследования травы баранца обыкновенного и изучаемых видов плаунов;

• возможность продуктивного использования дикорастущих зарослей баранца обыкновенного в Западной Сибири;

• результаты предварительного изучения фармакологической активности рекомендуемых видов плаунов.

Связь задач исследования с проблемными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (шифр темы 3500, номер государственной регистрации 81099932), тематикой научных исследований "Фармация" секции "Изучение лекарственной флоры России" научного совета № 10 "Фармакология и фармация" АМН Российской Федерации (номер государственной регистрации 01900016745).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены:

- на научных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии, Тюменского, Томского и Читинскогс медицинских институтов 1985-1988 гг.;

- на 4-м Всесоюзном съезде фармацевтов, Казань, 1986 г.;

- на 5-м Всероссийском съезде фармацевтов, Ярославль, 1987 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, в ко

торых отражено ее основное содержание.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа из ложена на страницах и состоит из введения, обзора литературь (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списк; литературы и приложения. В тексте содержится 25 таблиц, 52 схемь и рисунка. Список цитируемой литературы содержит 165 источни ков, из них 50 иностранных. В приложение вынесены проект изм? нения фармакопейной статьи "Трава баранца обыкновенного", и: менение к методике количественного определения алкалоидов траве баранца обыкновенного, инструкция по сбору и сушке трав] плауна булавовидного, ресурсная справка, а также документы, пс дтверждающие внедрение результатов исследований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность диссертационной работы, определены цель и задачи исследований, показана научная новизна и практическая значимость.

Обзор литературы представлен в первой главе и включает общие сведения о систематике растений класса плауновые, распространении его представителей во флоре нашей страны, степени химической изученности, ресурсно-сырьевых исследованиях и опыте лечения больных алкоголизмом.

Объектами исследования служили надземная часть баранца обыкновенного, плауна булавовидного, плауна годичного и дифа-зиаструма уплощенного, заготовленная в различных районах Западной Сибири с учетом сроков вегетации.

Ботаническую идентификацию видов проводили на базе Центрального Сибирского ботанического сада СО РАН и кафедре фармакогнозии Сибирского медицинского университета под руководством кандидата биологических наук Э.М.Гонтарь и доктора биологических наук, профессора Т.П.Березовской.

Для подтверждения медицинской значимости плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного изучение химического состава и фармакологических свойств проводили в сравнении с официнальным видом баранцом обыкновенным.

Выделение и химическое изучение биологически активных веществ проводили методами хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента. При установлении структуры веществ использовали физико-инструментальные методы: УФ- и ИК-спектроскопию.

Сравнительная оценка баранца обыкновенного и исследуемых видов на содержание биологически активных веществ

Для обнаружения в траве биологически активных веществ готовили водные, водно-спиртовые и хлороформные извлечения.

С помощью качественных реакций, хроматографии на бумаге и тонком слое сорбента в надземной части исследуемых видов плаунов обнаружены алкалоиды, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, тритерпеновые сапонины, кумарины, свободные аминокислоты и смолистый остаток.

Предварительные исследования показали, что в траве изучаемых видов плаунов содержатся макро- и микроэлементы.

Анализ элементного состава проводили по методике ГФ XI, применяя метод атомно-адсорбционной плазменной спектроскопии. В результате исследований установлено, что в изучаемых образцах сырья содержится не менее 20 химических элементов, в том числе незаменимые - медь, железо, марганец, кобальт и цинк. Анализ сырья баранца обыкновенного, плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного на содержание алкалоидов

Предварительные химические и хроматографические исследования показали наличие в траве исследуемых видов алкалоидов.

Для количественного определения содержания суммы алкалоидов в изучаемом сырье использовали гравиметрический метод. Определение содержания алкалоидов в траве баранца обыкновенного проводили по методике ФС 42-528-72 "Трава плауна-баранца" и по методике, разработанной нами. По предлагаемой нами методике в качестве экстрагента применяется 70% этанол, подкисленный 1% винной кислотой.

Проведенный анализ методом хроматографии в тонком слое сорбента и газожидкостной показал, что предлагаемый нами экс-трагент не оказывает влияние на качественный состав алкалоидов баранца обыкновенного.

Модифицированная нами методика позволяет сократить время получения первичной вытяжки из травы баранца с 24 часов до 3,5

часов, сократить время проведения анализа и повысить точность его выполнения.

Сравнительная характеристика предлагаемой методики и включенной в ФС 42-528-72 представлена в табл. 1.

Таблица 1

Результаты сравнительного определения суммы алкалоидов в траве баранца обыкновенного гравиметрическим методом

Методика

найдено алкалоидов X, %

Метрологическая характеристика

S2 S р t(P,0 Дх

ФС 42-528-72 По предлагаемой методике

0,41

6 0,0028 0,053 95 2,57 0,02 5,8

0,48 6 0,0032 0,056 95 2,57 0,02 5,0 Приведенные результаты показывают, что погрешность предлагаемой методики находится в пределах ±5%.

По предложенной методике нами проведена оценка количественного содержания суммы алкалоидов в исследуемых видах плаунов. Результаты анализа представлены в табл. 2.

Таблица 2

Содержание суммы алкалоидов в надземной части исследуемых видов плаунов Западной Сибири

Название вида Содержание алкалоидов Х,% Метрологическая ха рактеристика

п—6 Р=95 t(P,0=2,57

S2 S S

Плаун булавови- 0,30 0,034 0,015 5,0

дный

Плаун 0,54 0,061 0,26 4,9

годичный

Дифазиаструм 0,28 0,033 0,014 5,0

уплощенный

Как видно из таблицы, по количеству алкалоидов плаун годичный удовлетворяет требованиям ФС 42-528-72, которая регламентирует содержание суммы алкалоидов в пересчете на абсолютно сухое сырье не менее 0,4%.

Плаун булавовидный и дифазиаструм уплощенный уступают официнальному виду по содержанию алкалоидов.

Методами бумажной и тонкослойной хроматографии в различных системах растворителей в сумме алкалоидов баранца обыкновенного обнаружено 7 соединений основного характера, плауне булавовидном - 6, плауне годичном - 9 и дифазиаструме уплощенном - 6, из них два соединения присутствуют во всех исследуемых видах.

В результате проведенных исследований нами было установлено, что в сумме алкалоидов исследуемых видов преобладают соединения, близкие по химической природе. В тоже время качественный состав и количественное соотношение алкалоидов для каждого вида плауна имеет свою специфическую особенность.

На основании результатов хроматографического анализа с достоверными образцами в сумме оснований всех исследуемых видов идентифицирован алкалоид ликоподин.

Учитывая перспективность использования ликоподина в медицинской практике в качестве антиалкогольного средства необходимо было решить вопрос об источниках его получения. В данной работе мы ограничились выделением ликоподина из суммы оснований.

Выделение суммы алкалоидов и ликоподина из травы исследуемых

видов плаунов

Для получения суммы алкалоидов мы использовали способ, близкий к предложенному В.С.Хоменок, основанный на многократной мацерации сырья хлороформом.

Схема выделения оснований представлена на рис. 1.

Остаток суммы алкалоидов представлял собой некристаллизу-ющуюся массу темно-коричневого цвета с характерным запахом.

сырье

| 10% раствор аммиака, хлороформ

хлороформный экстракт

__сгущение под вакуумом при температуре 40-45°С

сгущенный хлороформ_нын экстракт_

обрабатывали 5%-ным раствором серной кисло__ты, днэтиловым эфиром, отгон эфира

очищенное сернокислое извлечение

1 25% аммиак до рН 9-10 щелочно-аммиачный рас_твор_

1 хлороформ

хлороформное извлечение

| Ыа?304 безводный,отгон хлороформа остаток (неочищенная сумма алкалоидов)

Рис. 1 Схема выделения суммы алкалоидов из исследуемых видов плаунов.

Выделение ликоподина из полученной суммы алкалоидов проводили методом дробной кристаллизации. Указанным методом из ацетона и затем диэтилового эфира удалось выделить,основание в форме прозрачных четырехугольных блестящих пластин.

Выход основания из суммы алкалоидов исследуемых видов плаунов представлен в табл. 3.

Как видно из таблицы, минимальное содержание выделенного основания присутствует в сумме алкалоидов плауна годичного.

Идентификацию выделенного основания проводили на основании хроматографических исследований, физико-химических свойств, данных УФ- и ИК-спектров. В УФ-свете исследуемого соединения отмечен максимум поглощения при >.=284 нм. В ИК-спек-тре вещества отсутствуют полосы поглощения, характерные для гидроксильной группы, а полоса поглощения при 1700 см-1 относится к валентным колебаниям карбонильной группы.

Таблица 3

Выход основания из сырья исследуемых видов плаунов (абсолютно

сухое сырье)

Название вида Масса Масса очи- Выход основа- В % от об-

сырья, щенной сум- ния щей суммы

кг мы алкало- алкалоидов

идов, г г %

Баранец 1 3,16 2,21 0,22 69,9

обыкновенный

Плаун 3,16 4,10 2,48 0,078 60,5

булавовидный

Плаун 0,5 2,0 0,16 0,032 8,0

годичный

Дифазиаструм 1 2,06 1,32 0,13 64,1

уплощенный

По результатам хроматографического поведения в различных

системах растворителей, температуре плавления и температуре плавления производных, отсутствию депрессии температуры плавления при смешении с достоверными образцами, данных УФ- и ИК-спектров, а также сравнения физико-химических констант с описанными в литературе, полученное основание можно охарактеризовать как ликоподин.

Полученные результаты позволяют рекомендовать плаун булавовидный и дифазиаструм уплощенный в качестве источников получения ликоподина наравне с баранцом обыкновенным.

Изучение динюшки накопления алкалоидов в траве исследуемых видов плаунов

Выполненные химические исследования сравнительного характера подтверждают перспективность использования в медицинской практике плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиа-струма уплощенного.

С целью оптимизации сроков заготовки сырья исследуемых видов и рациональной эксплуатации зарослей нами проводились фенологические наблюдения в течение одного вегетационного периода в подзоне южной тайги Тюменской области. Для изучаемых

видов выделили 6 фенофаз развития: начало вегетации, рост спороносных колосков, созревание спороносных колосков, массовое спороношение, окончание спороношения и отмирание спороносных колосков (их деформация).

При изучении динамики накопления алкалоидов в траве исследуемых видов максимальное содержание алкалоидов приходится на фенофазы развития массового спороношения и окончания

спороношения. Результаты исследований представлены на рис. 2. 0,55

0,5 Содержание алкалоидов, % 0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1

Фаза развития растения

2 - июнь-июль 4 - август-сентябрь б - сентябрь-октябрь

1 - май 3 - июль-август 5 - сентябрь

Плаун годичный Плаун булавовидный Днфазиаструм уплощенный

-а- -е- -к-

Рис. 2 Динамика накопления содержания алкалоидов в траве исследуемых видов плаунов в различные фенологические фазы.

Кроме того, подмечена закономерность уменьшения содержания алкалоидов в подзоне средней тайги и их увеличение к подзоне южной тайги.

С целью максимального сохранения алкалоидов в траве исследуемых видов нами изучались различные виды сушки сырья. Использовали естественную и искусственную сушку с различными температурными режимами. Сравнительный анализ показал, что наиболее приемлема искусственная сушка в интервале температур 50-

60°С, которая позволяет максимально сохранить содержание алкалоидов, товарный вид сырья, а также сократить срок сушки сырья от 10 дней до 4 часов.

Ресурсно-сырьевые исследования В период с 1985 по 1988 года нами проводились ресурсные обследования баранца обыкновенного в отдельных районах Западной Сибири. Обследование районов осуществляли методом ключевых участков. Работа на ключевых участках включала геоботанические описания мест обитания баранца, проверку "верности" встречаемости баранца в однородных, но территориально разобщенных растительных сообществах, определение запасов. Запасы сырья баранца обыкновенного определяли по общепринятой методике (Методика определения запасов лекарственных растений, 1986). Определение урожайности проводили методом проективного покрытия. Площадь интересующих нас угодий определяли с помощью землеустроительных карт и на основании собственных данных, полученных в процессе обследования района. Выявленный запас рассчитывали на район и область.

Биологический, эксплуатационный объем возможных ежегодных заготовок рассчитан по нижнему пределу. Данные запасов сырья баранца представлены в табл. 4.

На основании карт растительности и ключевых исследований составлена для территории Тюменской области и Горно-Алтайской АО Алтайского края обзорная мелкомасштабная карта ареалов выявленных фитоценозов с баранцом обыкновенным.

Учитывая перспективность использования в медицинской практике плауна булавовидного и дифазиаструма уплощенного проведена оценка ресурсно-сырьевых возможностей этих видов. Данные о запасах травы исследуемых видов плаунов представлены в таблице 5.

Таблица 4

Запасы баранца обыкновенного в отдельных районах Западной

Сибири

Область, район Запас, т

Эксплуатационный Объем возможных ежегодных заготовок

Тюменская область:

Шурышкарский 4,3 0,300

Советский 4,1 0,339

Сургутский 6,7 0,600

Юргинский 1,4 0,135

Итого: 16,5 1,414

Горно-Алтайская

автономная область:

Шебалинский 0,7 0,071

Онгудайский 3,3 0,300

Курайский 4,2 0,380

Итого: 8,2 0,751

Таблица 5

Запасы травы исследуемых видов плаунов в отдельных районах Западной Сибири

Область, Запас сырья, т

район Плаун Дифазиаструм

булавовидный уплощенный

экспл. объем экспл. объем

запас ЕВЗ запас ЕВЗ

Тюменская:

Советский 651,6 59,2 3889,8 353,6

Сургутский 1476,8 134,2 163,7 14,8

.Ярковский 247,7 22,5 216,7 19,7

Тюменский 231,3 21,0 43,7 3,9

Юргинский 106,0 9,6 134,5 12,2

Итого: 2713,4 246,5 4448,4 404,2

Томская:

Асиновский 1104 100,4 162,3 14,7

Молчановский 372,7 33,8 96,0 8,7

Кривошеинский 64,1 5,8 67,6 6,1

Итого: 1540,8 140,0 325,9 29,5

Исходя из того, что исследуемые виды имеют обширный ареал на территории Западной Сибири, можно говорить о достаточной

сырьевой базе этих растений.

не-

параллельно ресурсным обследованиям западносибирских видов плаунов нами выполнялась работа по изучению процессов восстановления зарослей после эксплуатации в условиях данного региона.

Стационарные исследования проводили на базе заповедника "Малая Сосьва", расположенного на территории Ханты-Мансийского автономного округа.

На опытных площадях, соблюдая сезонность (осень) и периодичность (годы) производили замеры ежегодного прироста плагио-тропных и ортотропных побегов, подсчитывали их численность и количество стробил.

Как показали результаты исследования, при полном сборе сырья с опытных площадок, заросль не восстанавливается в течение всего периода наблюдения.

Наиболее оптимальным вариантом сбора сырья следует считать заготовку ортотропных побегов со стробилами 6-7-летнего возраста. К этому периоду ортотропные побеги достигают максимальной фитомассы, а после окончания спороношения они отмирают.

Разработка показателей качества сырья исследуемых видов таупов

В данном разделе работы приведены результаты изучения диагностических признаков, характеризующих подлинность и доброкачественность сырья.

При этом установлены отличительные макро- и микроскопические диагностические признаки, позволяющие отличить каждый вид и установить его подлинность. В анатомическом строении надземных органов плаунов проявляются общие закономерности. Среди анатомических признаков наибольший интерес представляют характер эпидермы листа, присутствие бесцветных клеток мезофилла по краю листа и особенность расположения проводящих

элементов. При анатомическом исследовании стебля отмечали строение коры и характер расположения участков ксилемы в центральном осевом цилиндре.

С целью установления доброкачественности сырья баранца обыкновенного сибирского региона были определены числовые показатели, включенные в проект фармакопейной статьи "Трава баранца обыкновенного". Определены критерии доброкачественности сырья для перспективных видов плаунов.

Полученные данные включены в проект инструкции по сбору и сушке травы плауна булавовидного.

Сравнительная оценка фармакологической активности рекомендуемых видов плаунов

Фармакологические исследования перспективных видов в сравнении с официнальным видом - баранцом обыкновенным выполнены в лаборатории по изысканию средств для лечения и профилактики наркомании и алкоголизма НИИ фармакологии АМН РФ и на кафедрах фармакологии и фармакогнозии Тюменского медицинского института.

Для изучения фармакологических свойств исследуемых видов плаунов из надземной части растений были получены 5% водный отвар, сумма алкалоидов и жидкий экстракт на 70% этаноле. Жидкий экстракт получали по описанной методике (Хоменок, 1972).

Изучение острой токсичности суммы алкалоидов, выполненной по общепринятой методике на белых половозрелых мышах-самцах, показали, что дозы препарата от 80 до 126 мг/кг не вызывают гибели животных, изменений в поведенческих реакциях и нарушений основных рефлексов.

Антиалкогольную активность комплексных препаратов оценивали с помощью тестов, выявляющих их влияние на потенцирова-

ние и пролонгирование эффекта 25% этанола. Опыты выполнены на белых половозрелых мышах-самцах массой 18-24 г.

Препараты вводили внутрибрюшинно в дозах 5, 12,5 и 25 мг/кг (сумма алкалоидов и экстракт) и от 0,4 мл до 1,0 мл (5% водный отвар). Статистическую обработку результатов проводили с учетом критерия Стьюдента при Р=0,05.

В условиях методики "потенцирования эффекта этанола" изучали антиалкогольную активность препаратов по времени нахождения животных в боковом положении под влиянием 25% этанола, введенного в дозе 3,7 г/кг. Наблюдения в эксперименте вели в течение 1 мин после однократного введения препаратов. В результате исследований отмечено, что 5% водный отвар и сумма алкалоидов плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного увеличивают время продолжительности сна животных в сравнении с контролем, где вводился алкоголь.

В условиях методики "пролонгирование эффекта этанола" определяли влияние препаратов на пролонгирование 25% этанола, вводимого в дозе 5,0 г/кг.

Опыты наблюдали через 30 мин после однократного введения препаратов. Как показали результаты исследований, под влиянием 5% водного отвара в исследуемых дозах происходит увеличение алкогольного наркоза (продолжительности сна) в два раза по отношению к контролю.

Сумма алкалоидов плауна булавовидного и плауна годичного с увеличением доз укорачивала, а дифазиаструма уплощенного удлиняла алкогольный наркоз. Экстракт в экспериментальных дозах/¿б оказывал влияние на продолжительность этанолового наркоза.

Изучено терапевтическое действие 5% водного отвара и суммы алкалоидов в условиях моделированного абстинентного синдрома

при однократном введении, а также в течение двух недель при ежедневном введении.

Было отмечено, что под влиянием препаратов менялось поведение животных. Терапевтическое действие проявлялось в снятии беспокойства, агрессивности и подавленности. Восстанавливалась ориентировочная реакция, поисковое поведение, сон и другие факторы.

ВЫВОДЫ

1. Проведено широкое фармакогностическое исследование западносибирских видов плауна: баранца обыкновенного, плауна булавовидного, плауна годичного и дифазиаструма уплощенного.

2. Установлено, что в надземной части исследуемых видов плаунов содержание алкалоидов колеблется от 0,28 до 0,55%. Преобладающим алкалоидом в сумме оснований баранца обыкновенного, плауна булавовидного и дифазиаструма уплощенного является ликоподин. Содержание ликоподина в баранце обыкновенном составляет 69,9%, плауна булавовидного - 60,5% и дифазиаструма уплощенного - 64,1%.

3. Выявлена закономерность в накоплении содержания алкалоидов в изучаемых видах в зависимости от географического фактора и ареала произрастания. Содержание алкалоидов в траве баранца обыкновенного в северо-западных районах страны в среднем составляет 0,48%, а ликоподина - 70%; в западносибирском регионе - 0,41% и ликоподина - 69,9%.

4. Разработана методика количественного определения алкалоидов с использованием гравиметрического метода в баранце обыкновенном, которая позволяет сократить время выполнения анализа и повысить точность его проведения.

5. В исследуемых видах плаунов обнаружены соединения фла-воноидной природы - кверцитин и апигенин; фенолкарбоновые ки-

слоты - кофейная и хлорогеновая; до 16 свободных аминокислот; до 20 химических элементов, в том числе незаменимые - Мп, Мд, Ъъ, Со, Си и др.

6. Проведены ресурсные обследования и определены возможности сырьевого потенциала баранца обыкновенного на примере 7 районов Западной Сибири, где объем возможных ежегодных заготовок составляет свыше 2 т.

7. Проведено морфолого-анатомическое исследование надземной части изучаемых видов плаунов, установлены диагностические признаки сырья, которые представлены в НТД.

8. Фармакологические исследования изучаемых видов плаунов в условиях моделированного абстинентного синдрома показали, что сумма алкалоидов в определенных дозах вызывает у животных ослабление тяги к употреблению алкоголя, улучшает физическое и психическое состояние, которое выражается в снятии эмоционального напряжения, восстановлении поведенческих реакций. Плаун булавовидный и дифазиаструм уплощенный можно рекомендовать к применению в наркологической практике как источники ликопо-дина наравне с официнальным видом - баранцом обыкновенным.

9. На основании всех проведенных исследований составлена ресурсная справка, инструкция по сбору и сушке травы плауна булавовидного, проект фармакопейной статьи "Трава баранца обыкновенного".

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Фетисова Л. Л. Распространение растений рода плаун в пойме реки Емъеган Западной Сибири // Наука — здравоохранению: Тез. докл. IX науч. кснф. молодых ученых и специалистов: 3—5 февраля 1985 г. Пятигорск, 1985. С. 54—55.

2. Муравьева Д. А., Фетисова Л. Л. Изучслие некоторых западносибирских видов плаунов на содержа ¡п с л.то ио", // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Всес. конф. Томск, 1986. С. 107.

3. Фетисова Л. Л., Тукманова Н. Г., Санаров Е. М., Ермолин Ю. И. Ресурсные исследования некоторых лекарственных растений Западной Сибири и Алтайского края /' IV Всесоюзный съезд фармацевтов: Тез. докл. Казань, 1986. С. 397—398.

4. Ермолин 10. И., Санаров Е. М., Тукманова II. Г., Фетисова Л. Л., Муравьева Д. А. Химическое исследование некоторых лек арственных растений флоры Западной Сибири И Материалы V Всероссийского съезда фармацевтов. Ярославль, 1987. С. 411.

5. Фетисова Л. Л. Химическое изучение плауна сплюснутого флоры Западной Сибири // Научные исследования в области фармации и медицины: Тез. докл. X науч. конф. молодых ученых. Пятигорск, 1987. С. 39.

6. Фетисова Л. Л. Макро- и микроэлементный состав надземной части растений семейства плауновые// Актуальные вопросы теоретической и клинической медицины: Тез. докл. облает, конф. молодых ученых-медиков и специалистов практического здравоохранения. Тюмень, 1988. С. 158.

7. Муравьева Д. А., Тукманова Н. Г., Щербинина Е. Ф., Фетисова Л. Л. Накопление фармакологически активных веществ .некоторых растений Сибири // Геохимическое окружение и проблемы здоровья в зонах нового экономического освоения: Тез. докл. I Всесоюз. конф. Чита, 1988. С. 29—31.

Подписано к печати 23.2.1995 г. Объем 1,0 печ. л.

Тираж 100 Типография АО «НИНПЛЕСДРЕВ» Заказ № 802.