Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение зопника колючего и зопника клубненосного, произрастающих на Северном Кавказе

<? — оь

На правах рукописи ООЗ169431

Круглая Анна Александровна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЗОПИИКА КОЛЮЧЕГО И ЗОПИИКА КЛУБНЕНОСНОГО, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА СЕВЕРНОМ КАВКАЗЕ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 О ^

Пятигорск - 2008

003169431

На правах рукописи

Круглая Анна Александровна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЗОПНИКА КОЛЮЧЕГО И ЗОПНИКА КЛУБНЕНОСНОГО, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА СЕВЕРНОМ КАВКАЗЕ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 2008

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор фармацевтических наук, профессор Муравьева Дария Алексеевна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

профессор Оганесян Эдуард Тоникович

кандидат фармацевтических наук, доцент Кусова Раиса Дзиппоевна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

лл Г ^ Защита состоится «¿ЛЬ» _2008 года в д часов на заседании

Диссертационного совета Д 208 069 01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА

Росздрава» (357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава»

Автореферат разослан « 03» и^СОиЯ^_2008 г

Ученый секретарь Диссертационного совета ¿9/

доктор фармацевтических наук, профессор Е В Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Несмотря на постоянно растущий ассортимент синтетических лекарственных средств, по-прежнему актуальным является исследование малоизученных отечественных лекарственных растений, разработка л использование лекарственных препаратов на их основе Такая востребованность связана с рядом положительных свойств фитопрепаратов низкой токсичностью, широким спектром терапевтического действия и незначительным числом побочных эффектов Особый интерес представляют растения, хорошо зарекомендовавшие себя в народной медицине Часть из них находит широкое применение и в официальной медицине К таким растениям можно отнести некоторые виды рода зопник зопнкк колючий и зопник клубненосный Эти виды представляют наибольший интерес из всех видов зопников, произрастающих на Северном Кавказе

Трава зопника колючего включена в Государственный реестр лекарственных средств, как компонент сбора М Н Здренко, используемого при папиломатозе мочевого пузыря, анацидных гастритах В народной медицине используют траву и настой зопника клубненосного при пневмонии, бронхитах, лихорадках, острых респираторных заболеваниях, туберкулезе легких, местно - при гнойных ранах

Однако для широкого использования указанных видов необходимо иметь современную нормативную документацию, позволяющую проводить надежную стандартизацию сырья

Следует отметить, что для многих видов лекарственного растительного сырья продолжают действовать устаревшие государственные стандарты (ГОСТы) и фармакопейные статьи (ФС) [Арзамасцев А П, Багмрова В Л, 2006] Это же относится и к сырью зопника колючего и зопника клубненосного Ранее действовавшая фармакопейная статья на траву зопника колючего (ФС 42-1565-92) не отвечает новым требованиям, предъявляемым к ФС, поэтому в настоящий момент утратила свою юридическую силу, а на траву зопника клубненосного фармакопейная статья отсутствует

Учитывая возрастающий интерес к указанным видам очевидна необходимость в разработке современной нормативной документации (НД) Такая разработка

требует проведения комплекса фармакогностических исследований, который включает морфолого-анатомическое, фотохимическое и ресурсоведческое изучение зопника колючего и зопника клубненосного Поэтому решение поставленной дели является актуальной для фармацевтической науки и практики

Цель и задачи исследования

Цель исследования - фармакогностическое изучение травы зопника колючего и зопника клубненосного, произрастающих на Северном Кавказе и разработка нормативной документации на данное сырье

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи

1 Провести качественное и количественное определение биологически активных веществ травы зопника колючего и зопника клубненосного (фенольных соединений, тритерпеноидов, иридоидов и др ),

2 Изучить компонентный состав групп биологически активных веществ (фенольных соединений, полисахаридов, аминокислот и др),

3 Установить морфолого - анатомические и диагностические признаки сырья зопника колючего и зопника клубненосного

4 Определить запасы сырья зопника колючего и зопника клубненосного, произрастающих в разных районах Северного Кавказа

5 Провести фармакологический скрининг водных извлечений и сухих экстрактов из травы зопника колючего и зопника клубненосного

6 Разработать нормативную документацию на данные виды сырья

Научная новизна исследования

Проведено фотохимическое изучение зопника колючего и зопника клубненосного и выявлены основные группы биологически активных, веществ (БАВ) Установлены закономерности накопления БАВ по фазам вегетации Это позволило определить оптимальные сроки заготовки сырья фаза массового цветения - начало плодоношения Методом ВЭЖХ изучен состав отдельных групп БАВ В траве зопника колючего установлено наличие 6 фенольных соединений (хлорогеновая, кофейная, феруловая, коричная кислоты, лютеолин - 7 - гликозид) и впервые идентифицировано 4 фенольных соединения (галловая и цикориевая

кислоты, гесперидин, квердетин), в сырье зопника клубненосного установлено наличие 5 фенольных соединений (хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, лютеолин - 7 - гликозид) и впервые идентифицировано 5 фенольных соединений (коричная, галловая и цикориевая кислоты, гесперидин, квердетин)

Изучен полисахаридный состав травы зопника колючего и зопника клубненосного и установлено, что преобладающей полисахаридной фракцией являются водорастворимые полисахариды (ВРПС) Методом ВЭЖХ установлен сахаридный состав изучаемого сырья, в результате которого в траве зопника колючего установлено наличие 30 моносахаров, 7 из которых идентифицировали арабинозу, галактозу, глюкозу, ксилозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, в траве зопника клубненосного определено наличие 16 моносахаров, 5 из которых идентифицировали арабинозу, глюкозу, ксилозу, лактозу, мальтозу

В результате изучения анатомического строения установлены основные диагностические признаки сырья зопника колючего и зопника клубненосного

Для стандартизации сырья предложены критерии оденки качества и идентификации травы обоих видов по содержанию действующих веществ (суммы полифенольных соединений), общим числовым показателям, анатомическим признакам, микробиологической чистоте

Определены основные районы распространения зопника колючего и зопника клубненосного в некоторых районах Северного Кавказа и выявлен их сырьевой потенциал

Проведен фармакологический скрининг водных извлечений и сухих экстрактов из травы зопника колючего и зопника клубненосного и выявлена желчегонная активность

Установлено родство химического состава и фармакологической активности травы обоих видов, что позволяет рекомендовать зопник клубненосный как в качестве самостоятельного лекарственного растительного сырья, так и дополнительного сырьевого источника зопника колючего для приготовления сбора М Н Здренко

Практическая значимость работы и внедрение результатов в практику

В результате проведенных исследований двух видов рода зопник расширена сырьевая база лекарственных растений для научной медицины

Разработаны методики идентификации и количественного определения основных групп биологически активных веществ травы зопника колючего и зопника клубненосного с использованием современных физико-химических методов анализа

Изучены запасы сырья и определен объем возможных ежегодных заготовок в некоторых регионах Южного Федерального округа (Ставропольском, Краснодарском краях, Ростовской области, Кабардино-Балкарской и Карачаево-Черкесской Республике), позволяющие планомерно заготавливать сырье с учетом охраны природных ресурсов

Обоснована целесообразность и перспективы применения травы зопника колючего и зопника клубненосного в медицинской практике в качестве сырья для получения лекарственных препаратов, обладающих желчегонным действием

На основании проведенных исследований разработаны проекты ФС «Зопника колючею трава» и «Зопника клубненосного трава», которые приняты к рассмотрению в Институте стандартизации лекарственных средств ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора (письмо № 2653 от 17.10 2007 г) Приняты к рассмотрению «Инструкция по заготовке и сушке травы зопника колючего» и «Инструкция по заготовке и сушке травы зопника клубненосного» в ГУ ВИЛАР (письмо № 1218 от 25 09 07 г)

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (Лг° госрегистрации 01 200.11264)

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Результаты определения химического состава травы зопника колючего и зопника клубненосного установленные методами ТСХ-анализа, ВЭЖХ, УФ-спекроскопии

2 Обоснование предложенных методик количественного определения фенольных соединений в траве зопника колючего и зопника клубненосного

3 Характерные морфолого-анатомические и диагностические признаки травы зопника колючего и зопника клубненосного

4 Результаты ресурсоведческих исследований зопника колючего и зопника клубненосного, произрастающих на территории Северного Кавказа

5 Результаты стандартизации травы зопника колючего и зопника клубненосного

6 Результаты фармакологического скрининга сухих экстрактов из травы зопника колючего и зопника клубненосного

Апробация и публикация результатов исследования

Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на 62-й и 63-й региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск 2007, 2008) По материалам диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 3 статьи - в журналах, рекомендованных ВАК

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 167 страницах компьютерного набора, состоит из «Введения», «Обзора литературы», 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 167 источников, в том числе 23 иностранных авторов, и приложения Диссертация содержит 46 таблиц и 36 рисунков

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объектами исследования явилось лекарственное растительное сырье - трава зопника колючего и зопника клубненосного, заготовленная на территории Северного Кавказа

1. Качественное и количественное определение основных групп БАВ в траве зопника колючего и зопника клубненосного

Анализ литературных данных показал недостаточность изученности химического состава травы зопника колючего и зопника клубненосного, а так же

отсутствие стандартизации сырья по содержанию БАВ В связи с этим представляло интерес провести фитохимическое изучение зопника колючего и зопника клубненосного с целью выявления основных групп БАВ Изучение качественного и количественного состава БАВ травы зопника колючего и зопника клубненосного проводили, используя общепринятые методы анализа, в том числе и фармакопейные

С использованием качественных реакций и хроматографического анализа в траве зопника колючего и зопника клубненосного предварительно идентифицировали фенольные соединения (кверцетин, лютеолин, кофейную кислоту, хлорогеновую кислоту), иридоиды (гарпагид, гарпагидацетат), сахара (глюкозу, лактозу, мальтозу, арабинозу, ксилозу), органические кислоты (аскорбиновую, винную, яблочную, лимонную, янтарную), аминокислоты (лейцин, валин, треонин, серии, аспарагиновую кислоту)

Установлено (табл 1), что основными группами БАВ травы зопника колючего и зопника клубненосного являются флавоноиды (1,79% в зопнике колючем, 1,86% в зопнике клубненосном), фенолокислоты (2,15%, 2,43%), дубильные вещества (4,85%, 5,14%), полисахариды (5,38%, 5,47%)

Таблица 1 - Количественное содержание БАВ в траве зопника колючего и зопника клубненосного___

БАВ Метод определения Котичественное содержание*, %

зопник колючий зопник клубненосный

флавоноады в пересчете на кверцетин УФ - спектрофотометрия 1,69-1,89 1,83 -1,91

феночокислоты в пересчете на хлорогеновую кислоту УФ - спектрофотометрия 2,06-2,35 2,29-2,56

тритерпеновые соединения в пересчете на урсоловую кислоту УФ - спектрофотометрия 0,94-1,03 0,85-0,99

иридоиды в пересчете на гарпагида ацетат УФ - спектрофотометрия 0,45-0,50 0,34-0,43

дубильные вещества Перманганатометрия 4,09-5,61 4,85-5,29

полисахариды Гравиметрия 5,27 - 5,50 5,22-5,72

аскорбиновая кисчота Алкалиметрия 0,032 -0,034 0,046 - 0,049

органические кислоты Алкалиметрия 2,06-2,10 2,14-2,16

* содержание БАВ в зависимости от района произрастания

2. Выделение и установление наличия индивидуальных БАВ травы зопника колючего изопника клубненосного

С целью изучения химического состава травы зопника колючего и зопника клубненосного и для препаративного выделения индивидуальных веществ использовался метод адсорбционной хроматографии Предварительно, учитывая физико-химические свойства БАВ, было получено спиртоводное извлечение травы зопника колючего и зопника клубненосного, петролейно-эфирная, хлороформная, этилацетатная и бутанодьная фракции

При разделении летролейно-эфирной фракции использовали сухой способ заполнения колонки (сорбент - оксид алюминия II степени активности + силикагель марки 40/100) Элюирование проводили летролейным эфиром (х ч ) с возрастающей концентрацией хлороформа (от 5% до 85%) Анализ каждой фракции проводили методом тонкослойной хроматографии (хлороформ-метанол 8 2) по окраске зон адсорбции после обработки 10% фосфорномолибденовой кислотой (реагент для тритерпеновых соединений)

Таблица 2 - Результаты обнаружения БАВ летролейно-эфирных фракций методом

№ фракции Элюент Окраска зоны адсорбции и значение И/ Кол-во элюата Количество пятен

1* 2* 1* 2*

- - Петролгйныл эфир - хлороформ (90 10) - 100мл - -

9 11 Петролейный эфир - хлороформ (50 50) синяя (0,83) 100мл 2 -

15,16 14,15 Петролейный эфир - хлороформ (40 60) синяя (0,74) 500мл 3 2

- 18 Петролейный эфир - хлороформ (25 75) синяя (0,67) 100мл - 2

* 1 - зопник колючий, 2 - зопник клубненосный

Как следует из таблицы 2 наибольшее количество БАВ содержалось в 15, 16 фракциях зопника колючего, в которых было установлено наличие трех пятен, и 14,15 фракциях зопника клубненосного, в которых было установлено наличие двух пятен Сравнивая значения Rr и окраску зон адсорбции исследуемых фракций и PCO имеющихся свидетелей, идентифицировали содержание в изучаемых объектах урсоловой кислоты Два других соединения в случае фракции зопника колючего и одно соединение в случае фракции зопника клубненосного идентифицировать не

9

удалось Таким образом, в летролейно-эфирной фракции нами было установлено наличие 3 соединений в траве зопника колючего и 2 - в траве зопника клубненосного, которые явились соединениями тритерпеноидной природы

Достаточно небольшая масса хлороформной фракции не представляла интерес для выделения основных БАВ исследуемого объекта Но, учитывая обнаруженное в ранее соединение в петролейно-эфирной фракции, значение ЯГ которого соответствовало КГ урсоловой кислоты мы провели разделение веществ хлороформной фракции с целью наработки тритерпенового соединения Для этого так же использовали колоночную хроматографию

Согласно предварительно проведенным хроматографическим исследованиям зтилацетатная фракция содержит соединения фенольной структуры Выделение основных БАВ этилацетатной фракции также проводили методом колоночной хроматографии (сорбент - силикагель марки 40/100) Элюировали систему хлороформом (х ч) с возрастающей концентрацией метанола (от 2 до 20%)

Таблица 3 - Результаты обнаружения БАВ этилацетатной фракции методом колоночной хроматографии и ТСХ-анализа_

№ фракции Элюент окраска зон адсорбции в УФ-свете Предполагаемое соединение

1* 2* 1* 2*

7 6 хлороформ - метанол (92 8) 0,87 0,86 голубая -

8,9 7 хлороформ - метанол (92 8) 0,83 0,82 коричневая лютеолин

10 8-11 хлороформ - метанол (92 8) 0,71 0,72 коричневая кверцетин

11-14 12-15 хлороформ - метанол (92 8) 0,68 0,68 желто-коричневая -

15-17 16,17 хлороформ - метанол (92 8) 0,61 0,63 голубая хлорогеновая кислота

18 18-21 хлороформ - метанол (90 10) 0,60 0,59 желтая -

19-21 22-25 хлороформ - метанол (90 10) 0,58 0,57 голубая -

22,:23 26,27 хлороформ - метанол (88 12) 0,52 0,53 голубая -

24-28 28-32 хлороформ - метанол (86 14) 0,56 0,57 коричневая лютеолик-7-гликозид

29-32 - хлороформ - метанол (82 18) 0,43 0,42 коричневая -

33,34 - хлороформ - метанол (80 20) 0,15 0,18 голубая

*1 - зопник колючий, 2 - зопник клубненосный

Из данных таблицы 3 следует, что этилацетатная фракция зопника колючего содержит 11 соединений, а зопника клубненосного - 9 Сравнивая значения Rf и окраску зон адсорбции исследуемых фракций и стандартных образцов фяавоноидов можно предположить содержание в изучаемых объектах агликонов флавоноидов кверцетина и лют ео л и на, и также их гликозидов Среди оксикоричных кислот предварительно идентифицировали хлорогеновую кислоту

Учитывая тот факт, что полученная бутанольная фракция содержала лишь недостаточное полно перешедшие в этилацетатную фракцию гликозиды флавоноидов, а не новые представляющие интерес соединения, было принято решение о нецелесообразности колоночной хроматографии бутанольной фракции

Изучение качественного состава фенольных соединений травы зопника колючего и зопника клубненосного проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы "GILSTON", модель 305, ФРАНЦИЯ, инжектор ручной, модель RHEODYNE 7125 USA с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для "Windows"

Таблица 4 - Содержание фенольных соединений методом ВЭЖХ

Время удерживания, мин Содержание веществ в полифенольном комплексе, % Идентифицировано

зопник ко почий

1 967 5,77 галловая кислота*

2 26 5 60 хлорогеновая кислота

2816 451 кофейная кислота

3 679 5 15 феруловая кислота

4 876 9,08 цикориевая кислота*

7 682 9,52 геслередни*

8 818 1,88 коричная кислота

11 75 11,29 лютеолин 7-гликознд

15 36 1,90 кверцетин*

21 84 1 59 апигенин

зопник клубненосный

1 967 5,87 галловая кислота*

2 26 6,30 хлорогеновая кислота

2 816 4,41 кофейная кислота

3 679 5,25 феруловая кислота

4 876 7,08 цикориевая кислота*

7 682 8,16 геспередин*

8818 2,88 коричная кислота*

11 75 5 35 лютеолин 7-тлиьозид

15 36 2 87 кверцетин*

2! 84 1 09 апигенин

* - идентифицированы впервые в данном виде растения

В результате было установлено наличие в траве зопника колючего 20 соединений, а в траве зопника клубненосного - 16 соединений фенольной природы, из которых методом ВЖЭХ идентифировали 10 соединений' галловую, хлорогеновую, кофейную, феруловую, цикориевую, коричную, лютеолин-7-гликозид, кверцетин, апигенин

Выделение и определение количественного содержания лолисахаридных фракций в исследуемых видах зопника проводили по методу М Sinner и НJC Кочеткова в результате были получены четыре фракции полисахаридов (ВРПС, ПВ, ГЦА, ГЦВ) Преобладающей фракцией у обоих видов зопника являются водорастворимые полисахариды (ВРПС) В зависимости от района заготовки содержание ВРПС составило от 5,18 до 6,21 % для зопника колючего и от 5,15 до 7,69 % - зопника клубненосного в пересчете на абсолютно сухое сырье Полученные данные послужили основанием для дальнейшего изучения моносахаридного состава ВРПС изучаемых видов сырья Качественный анализ углеводов проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе "GILSTON" (Франция) с рефрактометрическим детектором Разделение углеводов проводили на колонке ALTECH OA-1000 Organic Acids размером 6,5x300 мм Полученные результаты исследования обрабатывали с помощью программы «Мультихром» для Windows

Таблица 5 - Содержание углеводов, установленное методом ВЭЖХ

Зопник колючий Зопник клубненосный

Идентифицировано Относительное содержание, % Идентифицировано Относительное содержание, %

Свободные сахара

арабиноза 97,74 арабиноза 55,19

галактоза 1,76 глюкоза 11,40

глюкоза 0,01 ксилоза 11,43

ксилоза 0,43 лактоза 14,04

лактоза 0,05 мальтоза 7,94

мальтоза 0,01

сахароза 0,01

Сахара после гидролиза

арабиноза 24,40 арабиноза 13,19

глюкоза 6,28 глюкоза 22,63

ксилоза 1,67

Установлено, что в обоих видах зопника преобладающим углеводом является арабиноза Трава зопника колючего содержит свободной арабинозы почти 98%, а трава зопника клубненосного 55%

Аминокислотный состав определяли на аминокислотном анализаторе Biotronic LC 5001 с использованием внутреннего стандарта Данные эксперимента показывают, что в траве золника колючего и зопника клубненосного содержатся 15 аминокислот, 7 из которых являются незаменимыми (треонин, валин, метионин, изолейдин, лейцин, фенилаланин, лизин)

3. Ресурсоведческие исследования травы зопника колючего и зопника

клубненосного

Ресурсоведческие исследования проводили согласно методическим указаниям Шретера А И и Крыловой И Л в течение 2003 - 2007 гг Зопник колючий и зопник клубненосный многолетние травянистые растения, наиболее часто встречающееся в виде зарослей, урожайность сырья определяли на конкретных зарослях методом учетных площадок в фазу цветения - начало плодоношения Ресурсоведческие исследования проводили в Ставропольском крае (Предгорный, Минераловодский, Андроповский, Шпаковский районы), Краснодарском крае (Кавказский, Гулькевический, Тихорецкий районы), Ростовская область (Неклиновский, Мамаев-курганинский районы), Кабардино-Балкарская республика (Баксанский, Советский районы), Карачаево-Черкесская республика (Малокарачаевский район)

Таблица 6 - Ежегодные рекомендуемые заготовки травы зопника колючего на Северном Кавказе_

Районы Северного Кавказа Площадь зарослей, га Запасы, т

Биологический запас, т Эксплуатационный запас, т Ежегодно рекомендуемые заготовки, т

Ставропольский край 1,95 8,400 7,351 1,470

Краснодарский край 2,11 8,832 7,949 1,589

Ростовская область 0,63 2,499 2,194 0,438

Кабардино-Балкарская республика 0,72 2,692 2,370 0,474

Карачаево-Черкесская республика 0,40 1,626 1,469 0,294

ИТОГО 5,71 24,049 21,333 4,266

Анализ результатов ресурсоведческих исследований, приведенный в таблице 6, показывает, что общая площадь зарослей травы зопника колючего на обследованной территории Северного Кавказа составляет около 6 га, а рекомендуемый объем заготовок изучаемого сырья составляет около 4 т

Таблица 7 - Ежегодно рекомендуемые заготовки травы зопника клубненосного на Северном Кавказе_

Районы Северного Кавказа Площадь зарослей, га Запасы, т Ежегодно рекомендуемые заготовки, т

Биологический Эксплуатационный

Ставропольский край 3,22 9,784 8,601 1,720

Краснодарский край 1,71 5,459 4,827 0,695

Ростовская область 1,00 3,377 2,988 0,597

Кабардино-Балкарская республика 0,66 1,896 1,670 0,334

Карачаево-Черкесская республика 0,62 1,867 1,688 0,337

ИТОГО. 7,21 22,383 19,774 3,953

Результаты ресурсоведческих исследований, приведенные в таблице 7 показывают, что общая площадь зарослей травы зопника клубненосного на обследованной территории Северного Кавказа составляет 7 га, а рекомендуемый объем заготовок изучаемого сырья составляет около 4 т

Исходя из полученных результатов, можно сделать заключение, что территорию Северного Кавказа можно рассматривать как перспективную для промышленной заготовки травы зопника колючего и зопника клубненосного.

4. Стандартизация и разработка нормативной документации на траву зопника колючего и зопника клубненосного

Стандартизацию травы зопника колючего и зопника клубненосного

проводили согласно современным требованиям, предъявляемым к качеству

лекарственного растительного сырья [Самылина И А, 1996, Багирова В Л, 2001]

Товароведческие показатели определяли, используя фармакопейные методы

анализа В результате были установлены следующие нормы качества для каждого

вида сырья (табл 8)

Таблица 8 - Товароведческие показатели для травы золника колючего и зопника клубненосного__

Показатечь Норма

зошшк колючий зопник клубненосный

влажность не более 11 % не более 12 %

содержание золы общей не более 7 % не более 8 %

содержание золы, нерастворимой в 10 % растворе хлористоводородной кислоты не ботее 2 % не более 2,5 %

содержание органической примеси не более 2,5 % не более 2,5 %

содержание минеральной примеси не ботее 1 % не более 1,5 %

содержание пожелтевших, побуревших и почерневших частей растения не бочее 7 % не более 6 %

для измельченного сырья

частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7мм не более 9 % не более 7 % не более 6 %

частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,5 мм не ботее 7% не более 6 %

Стандартизацию травы зопника колючего и зопника клубненосного мы рекомендуем проводить по сумме полифенольных соединений в пересчете на хлорогеновую кислоту Выбор именно этой группы БАВ обусловлен достаточно высоким их содержание в данном сырье (более 2%), широким спектром их фармакологической активности, присущей также и данному объекту исследования; высокой чувствительностью и воспроизводимостью методик их количественного определения в растительном сырье

Доя разработки методики количественного определения в объекте исследования изучали влияние концентрации этилового спирта, способа и времени экстракции Установлено, что максимальный выход суммы фенольных соединений из травы зопника колючего и зопника клубненосного достигается при трехкратной экстракции 70 % этиловым спиртом, а оптимальным временем для каждой стадии экстракции является 30 мин.

Определение содержания суммы фенольных соединений проводили спектрофотометрическим методом при длине волны 325 - 327 нм При этой длине волны находятся максимум поглощения как флавоноидов, фенолокислот, так и самой хлорогеновой кислоты Из рис 1 следует, что максимум поглощения УФ-спектры 70% этанольных экстрактов изучаемых объектов и спиртового раствора хлорогеновой кислоты совпадают, что дает возможность предложить хлорогеновую

кислоту в качестве стандартного образца, по которому производится перерасчет при количественном определении суммы фенольных соединений

0,8

0,7 -I-

о 6 -

3

05-

а о,4

0,3 -у 02-

0 1

О

225 250 275 300 325 350 375 400 425 500

нм

Рисунок 1 - УФ - спектр фенольных соединений 1 - спиртовой раствор хлорогеновой кислоты, 2 - извлечение из травы зопника колючего, 3 - извлечение из травы зопника клубненосного

Методика определения Аналитическую пробу измельченного сырья около 1г (точная навеска) помещали в колбу для кипячения вместимостью 100 мл, прибавляли экстрагент После охлаждения объединенное извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл, объем извлечения доводили экстрагентом до метки 1 мл извлечения переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем раствора спиртом этиловым 95 % до метки В качестве раствора сравнения используют спирт этиловый 95 %

Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на хлорогеновую кислоту и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где Б - оптическая плотность испытуемого раствора;

К'!, ~ удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты, равный 507, т - масса сырья в граммах,

- потеря в массе при высушивании сырья в процентах

Х =

В 25 100 100 100 Р 250000

1 ЮО-т-ООО-И') ££ т (100-Ж)

Таблица 9 - Содержание суммы фенольных соединений в траве зопника колючего

№ опыта Масса навссхи сырья, г Оптическая плотность, Изг* ,нм Сумма фенольных соединений, X, % Метрологические характеристики

Ставропольский край

1 0,99345 0,635 3,49 Х= 3,48 Б = 0,0802 5Т= 0,0359 АХ = 0,0997 £=±2,87%

2 0,98965 0,609 3,36

3 1,01015 0,652 3,52

4 1,00645 0,658 3,57

5 0,99035 0,624 3,44

Краснодарский край

1 0,99700 0,575 3,14 Х=3,17 5 = 0,0239 5^ = 0,0107 АХ = 0,0297 £=±0,94%

2 0,99855 0,583 3,18

3 0,99635 0,576 3,15

4 1,01005 0,593 3,20

5 0,99830 0,581 3,17

Ростовская область

1 1,00615 0,600 3,25 Х= 3,24 Э = 0,0597 ■У- = 0,0267 АХ =0,0743 с = ±2,29%

2 0,99435 0,584 3,20

3 1,01525 0,622 3,34

4 0,98755 0,578 3,19

5 0,99610 0,591 3,23

Волгоградская область

1 1,00205 0,569108 3,12 х=з,и 8 = 0,0230 5Т= 0,0103 АХ =0,0286 £ = ±0,92%

2 0,99510 0,559727 3,09

3 1,00245 0,574810 3,15

4 0,99705 0,562638 3,10

5 0,99945 0,565812 3,11

По данным таблицы видно, что содержание фенольных соединений в траве зопника колючего находится в пределах 3,11 - 3,48%, относительная погрешность не превышает 5%

Таблица 10 - Содержание суммы фенольных соединений в траве зопника

клубненосного спектрофотометричеким методом

№ п/п Масса навески, г Оптическая плотность, 1>325 ,нм Сумма фенольных соединений, Х,% Метрологические характеристики

Ставропольский край

1 0,99545 0,663 3,65 Х = 3,70 8 = 0,0451 £-= 0,0201 АХ =0,0560 Е = ± 1,51%

2 1,00015 0,679 3,72

3 0,99855 0,687 3,77

4 0,99865 0,674 3,70

5 0,98950 0,664 3,68

Продолжение таблицы 10

Ростовская область

1 0,99245 0,647 3,58 1 = 3,62 8 = 0,0335 5—= 0,0150 ДХ -0,0416 £ = ±1,15%

2 1,01505 0,673 3,64

3 0,99X20 0,652 3,59

4 1,01025 0,666 3,62

5 1,01005 0,673 3,66

Алтайский край

1 0,99915 0,691 3,79 К — 3,79 8 = 0.0602 5-= 0,0269 АХ -0,0749 е = ± 1,98%

2 0,98645 0,664 3,69

3 0,99755 0,688 3,78

4 1,01825 0,715 3,85

5 1,00710 0,702 3,82

Иркутская область

1 0,99655 0,669311 3,69 1 = 3,77 8 = 0,0536 0,0240 АХ -0,0666 Б = ± 1,77%

2 0,99815 0,679469 3,74

3 1,01825 0,707979 3,82

4 1,00115 0,6888 3,78

5 1,00935 0,699953 3,81

По данным таблицы видно, что содержание фенольных соединений в траве зопника клубненосного находится в пределах 3,62 - 3,79%, относительная погрешность не превышает 5%.

Используя предложенную методику, мы изучили динамику накопления фенольных соединений в траве зопника колючего и зопника клубненосного в зависимости от фазы вегетации. Установлено, что наибольшее содержание суммы полифенольных соединений — более 3,0 % наблюдается в фазу цветения - начало плодоношения.

Важным этапом стандартизации лекарственного растительного сырья является

определение подлинности с помощью макро- и микроскопических исследований

А Б

Рисунок 4 - Верхний эпидермис листа (х1500) А- зопник колючий; Б - зопник клубненосный I - кроющие простые волоски; 2 — многоклеточные волоски; 3 - железки;

Рисунок 5 - Нижний эпидермис листа (х1500) А- зопник колючий; Б - зопник клубненосный 1 - многоклеточные кроющие волоски

Щ

Рисунок й - Поперечный срез стебля (х1500) А- зопник колючий; Б - зопник клубненосный

Таблица 9 - Характерные диагностические признаки травы зопника колючего и золника клубненосного __

Части растения Зопник колючий Зопник клубненосный

верхний эпидермис листа стенки извилистые стенки прямые

трихомы (волоски) простые, многоклеточные

эфирномасличная железка четырехклеточная двуклеточная

устьичный аппарат отсутствуют аномоцитный

нижний эпидермис листа стенки извилистые

устьичный аппарат диацитный аномоцитный и диацитный

трихомы (волоски) звездчатого типа

поперечный срез листа один проводящий пучок четыре проводящих пучка

поперечный срез черешка четыре проводящих пучка шестнадцать проводящих пучков

проводящая система стебля непучковая пучковая

Таким образом, выявлены характерные микроскопические диагностические

признаки травы зопника колючего и зопника клубненосного.

Исследования до изучению сроков годности травы зопника колючего и зопника клубненосного и влияния их на качество сырья проводили с 2002 по 2007

годы Образцы представляли собой цельное и измельченное сырьё зопника колючего и зопника клубненосного, заготовленное в разных регионах Российской Федерации Содержание товароведческих показателей и действующих веществ при хранении в сухом помещении при 18-20°С, в течение 3-х лег практически не изменялось На 4-ом году хранения показатели качества сырья заметно стали ухудшатся, в связи, с чем мы рекомендовали срок годности сырья - в течение 3-х лет с момента его заготовки

5 Изучение фармакологической активности БАВ травы зопника колючего и

зопника клубненосного

Объектами исследования явились водные настои (1 10) и сухие экстракты травы зопника колючего и зопника клубненосного, полученные методом дробной мацерации, при этом в качестве экстрагента использовался 70% этиловый спирт Содержание фенольных соединений в полученных экстрактах составило не менее 8,5%

Экспериментально установлено, что LDjo экстрактов зопника колючего и зопника клубненосного для самцов и самок крыс составила >5000 мг/кг, что позволяет отнести их, согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм к неопасным (ГОСТ 121 007-76) - IV класс соединений

В опытах на животных сухой экстракт зопника колючего обладает желчегонной активностью и улучшает метаболическую функцию печени в меньшей степени по сравнению с фламином. Сухой экстракт зопника клубненосного обладает выраженной желчегонной активностью и улучшает метаболическую функцию печени аналогично фдамину

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1 Установлено, что в траве зопника колючего и зопника клубненосного накапливаются различные БАВ тритерпеновые соединения (0,94 - 1,03%; 0,85 -0,99%), флавоноиды (1,69 - 1,89%, 1,83 - 1,91%), фенолокислоты (2,06 - 2,35%; 2,29

- 2,56%), иридоиды (0,45 - 0,50%, 0,34 - 0,43%), полисахариды (5,27 - 5,50%, 5,22 -5,72%), дубильные вещества (4,09 - 5,61%; 4,85 - 5,29%), свободные органические кислоты (2,06 - 2,10%, 2,14 - 2,16%), комплекс аминокислот, макро- и микроэлементы

2 Разными методами физико-химического анализа установлено наличие 20 соединений (для зопника колючего) и 16 соединений (для зопника клубненосного) фенольной природы, из которых методом ВЖЭХ идентифицировали 10 соединений галловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая, дикориевая, коричная, лютеолин-7-гликозид, квердетин, апигенин, гесперидин

3 Методом ВЭЖХ установлено в траве зопника колючего наличие 30 Сахаров, 7 из которых идентифицировали арабинозу, галактозу, глюкозу, ксилозу, лактозу, мальтозу, сахарозу В траве зопника клубненосного содержится 16 Сахаров, 5 из которых идентифицировали арабинозу, глюкозу, ксилозу, лактозу, мальтозу

4 Установлены нормы товароведческих показателей травы зопника колючего и зопника клубненосного С помощью предложенной методики определили наличие фенольных соединений (в пересчете на хлорогеновую кислоту), содержание которых в траве зопника колючего составило 3,11 - 3,75%, в траве зопника клубненосного - 3,62 - 3,79% в зависимости от района произрастания

5 Определены запасы и рассчитаны объемы возможных заготовок травы зопника колючего и зопника клубненосного в различных регионах Северного Кавказа (Ставропольский, Краснодарский края, Ростовская область) Общая площадь зарослей травы зопника колючего и зопника клубненосного на исследованной территории занимает, соответственно около 6 га и 8 га, а рекомендуемый объем заготовок изучаемого сырья составляет более 4 т и 3,9 т

6 Выявлены характерные диагностические признаки травы зопника колючего наличие характерных трихом на верхнем и нижнем эпидермисе, наличие четырехклеточных эфирных железок, проводящая система стебля непучкового типа Дня травы зопника клубненосного выявлено наличие характерных трихом на верхнем и нижнем эпидермисе, наличие двуххклеточных эфирных железок, проводящая система стебля пучкового типа

7 Установлено, что сухие экстракты зопника колючего и зопника клубненосного согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм), относятся к IV классу соединений и обладают выраженной желчегонной активностью

8 На основании проведенных исследований (химических, ресурсоведческих, морфолого-анатомических) были разработаны проекты ФС «Зопника колючего трава» и «Зопника клубненосного трава», которые приняты к рассмотрению в Институте стандартизации лекарственных средств ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора (письмо № 2653 от 17 10 2007г ) Приняты к рассмотрению «Инструкция по заготовке и сушке травы зопника колючего» и «Инструкция по заготовке и сушке травы зопника клубненосного» в ГУ ВИЛАР (письмо № 1218 от 25 09 07г )

Список опубликованных работ:

1 Влияние окружающей среды на накопление дубильных веществ у некоторых представителей Северного Кавказа // Человек и лекарство- тез докл 11 Рос нац конгр 18 - 22 апр 2004 г - М, 2004 - С 873 (Соавторы Исаков АБ, Кравченко АС)

2 Изучение содержания фенолкарбоновых кислот у некоторых представителей лекарственных растений Ботсада Пятигорской ГФА // Человек и лекарство тез докл 12 Рос нац конгр 18-22 апр 2005 г - М, 2004 - С 766 -767 (Соавторы Войтенко И С , Пашаева А А, Пушкарский С Я )

3 Изучение условий экстрагирования флавоноидов у представителей семейств астровых и губоцветных // Молодежь XXI века - будущее Российской науки- тез докл 2-ой межрегион науч- пракг конф студентов, аспирантов и молодых ученых 21 - 22 мая 2004 г - Ростов-на-Дону, 2004 - С 137 - 139 (Соавтор Исаков А Б )

4 Изучение растений ботанического сада Пятигорской ГФА на накопление полисахаридов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр - Пятигорск, 2005 - Вьш 60 - С 40-41 (Соавторы Муравьева Д А, Пушкарский С H , Войтенко И С, Пашаева А А )

5. Изучение полисахаридных фракций зопника клубненосного и бархатцев мелкоцветных//Человек и лекарство'тез докл 13 Рос нац конгр 3-7апр 2006 г - M , 2006 - С 28 (Соавторы Муравьева Д А, Лагазидзе Д С )

6 Макро- и микроэлементный состав травы зопника колючего и зопника клубненосного, произрастающих на Северном Кавказе // Вест Воронеж гос ун-та. Серия Химия Биология Фармация - 2006 - №2 - С 294 - 296

7 Накопление фенольных соединений в золнике клубненосном, произрастающем на Северном Кавказе // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр - Пятигорск, 2006 -Выл 61 -С 30-31

8 Содержание иридоидов в зопнике клубненосном, произрастающем на Северном Кавказе И Актуальные проблемы фармации сб статей межрегион науч конф - Владикавказ, ФАОН СОГУ им К Л Хетагурова, 2007 - С 32.

9 Полисахаридный состав растений рода зопник // Фармация - 2007 -№6 - С 10 - 11 (Соавторы Муравьева Д А, Борисенко И А )

10 Микроскопическое изучение зопника колючего // Фармация - 2007 -№8 -С 14-16 (Соавторы Муравьева Д А, Жемчугова И В )

Круглая Анна Александровна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЗОПНИКА КОЛЮЧЕГО И ЗОПНИКА КЛУБНЕНОСНОГО, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА СЕВЕРНОМ КАВКАЗЕ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 11 04 2008 г. Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага офсетная Печать ризограф Уел печ л 1,0

Отпечатано в ОАО «Издательство «Кавказская здравница», г Минеральные Воды, ул 50 лет Октября, 67 Тираж 100 экз Заказ № 08 0489

Актуальность темы.

Несмотря на постоянно растущий ассортимент синтетических лекарственных средств, по-прежнему актуальным является исследование малоизученных отечественных лекарственных растений, разработка и использование лекарственных препаратов на их основе. Такая востребованность связана с рядом положительных свойств фитопрепаратов: низкой токсичностью, широким спектром терапевтического действия и незначительным числом побочных эффектов. Особый интерес представляют растения, хорошо зарекомендовавшие' себя в народной медицине. Часть из них находит широкое применение и в официальной медицине. К таким растениям можно отнести некоторые виды рода зопник: зопник колючий и зопник клубненосный. Эти виды представляют наибольший интерес из всех видов зопников, произрастающих на-Северном Кавказе.

Трава зопника колючего включена в Государственный реестр лекарственных средств, как компонент сбора М. Н. Здренко, используемого при папиломатозе мочевого пузыря, анацидных гастритах [30]. В народной медицине используют траву и настой зопника клубненосного при пневмонии, бронхитах, лихорадках, острых респираторных заболеваниях, туберкулезе легких; местно - при гнойных ранах [12,108].

Однако для широкого использования указанных видов необходимо иметь современную нормативную документацию, позволяющую проводить надежную стандартизацию сырья.

Следует отметить, что для многих видов лекарственного растительного сырья продолжают действовать устаревшие государственные стандарты (ГОСТы) и фармакопейные статьи (ФС) [4,6,19]. Это же относится и к сырью зопника колючего и зопника клубненосного. Ранее действовавшая фармакопейная статья на траву зопника колючего (ФС 42-1565-92) не отвечает новым требованиям, предъявляемым к ФС, поэтому в настоящий момент утратила свою юридическую силу, а на траву зопника клубненосного фармакопейная статья отсутствует.

Учитывая возрастающий интерес к указанным видам очевидна необходимость в разработке современной нормативной документации (НД). Такая разработка требует проведения комплекса фармакогностических исследований, который включает морфолого-анатомическое, фотохимическое и ресурсоведческое изучение зопника колючего и зопника клубненосного. Поэтому решение поставленной цели является актуальной для фармацевтической науки и практики.

Цель и задачи исследования.

Цель исследования - фармакогностическое изучение травы зопника колючего и зопника клубненосного, произрастающих на Северном Кавказе и разработка нормативной документации на данное сырье.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Провести качественное и количественное определение биологически активных веществ травы зопника колючего и зопника клубненосного (фенольных соединений, тритерпеноидов, иридоидов и др.);

2. Изучить компонентный состав групп биологически активных веществ (фенольных соединений, полисахаридов, аминокислот и др.);

3. Установить морфолого — анатомические и диагностические признаки сырья зопника колючего и зопника клубненосного.

4. Определить запасы сырья зопника колючего и зопника клубненосного, произрастающих в разных районах Северного Кавказа.

5. Провести фармакологический скрининг водных извлечений и сухих экстрактов из травы зопника колючего и зопника клубненосного.

6. Разработать нормативную документацию на данные виды сырья.

Научная новизна исследования.

Проведено фитохимическое изучение зопника колючего и зопника клубненосного и выявлены основные группы биологически активных веществ (БАВ). Установлены закономерности накопления БАВ по фазам вегетации. Это позволило определить оптимальные сроки заготовки сырья: фаза массового цветения - начало плодоношения. Методом ВЭЖХ изучен состав отдельных групп БАВ. В траве зопника колючего установлено наличие 6 фенольных соединений (хлорогеновая, кофейная, феруловая, коричная кислоты, лютеолин — 7 - гликозид) и впервые идентифицировано-4 фенольных соединения (галловая и цикориевая кислоты, гесперидин, кверцетин); в сырье зопника клубненосного установлено наличие 5' фенольных соединений (хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, лютеолин - 7 - гликозид) и впервые идентифицировано 5 фенольных соединений (коричная, галловая и цикориевая кислоты, гесперидин, кверцетин).

Изучен- полисахаридный состав травы зопника колючего и зопника клубненосного и установлено, что преобладающей полисахаридной фракцией являются водорастворимые полисахариды (ВРПС). Методом ВЭЖХ установлен сахаридный состав изучаемого сырья, в результате которого в траве зопника колючего установлено наличие 30 моносахаров, 7 из которых идентифицировали: арабинозу, галактозу, глюкозу, ксилозу, лактозу, мальтозу, сахарозу; в траве зопника клубненосного определено наличие 16 моносахаров, 5 из которых идентифицировали: арабинозу, глюкозу, ксилозу, лактозу, мальтозу.

В результате изучения анатомического строения установлены основные диагностические признаки сырья зопника колючего и зопника клубненосного.

Для стандартизации сырья предложены критерии оценки качества и идентификации травы обоих видов по содержанию действующих веществ суммы полифенольных соединений), общим числовым показателям, анатомическим признакам, микробиологической чистоте.

Определены основные районы распространения зопника колючего и зопника клубненосного в некоторых районах Северного Кавказа и выявлен их сырьевой потенциал.

Проведен фармакологический скрининг водных извлечений и сухих экстрактов из травы зопника колючего и зопника клубненосного и выявлена желчегонная активность.

Установлено родство химического состава и фармакологической, активности травы обоих видов, что позволяет рекомендовать зопник клубненосный как в качестве самостоятельного лекарственного растительного сырья, так и дополнительного сырьевого источника зопника колючего для приготовления сбора М.Н.Здренко.

Практическая значимость работы и внедрение результатов в практику.

В результате проведенных исследований двух видов рода зопник расширена сырьевая база лекарственных растений для научной медицины.

Разработаны методики идентификации и количественного определения основных групп биологически активных веществ травы зопника колючего и зопника клубненосного с использованием современных физико-химических методов анализа.

Изучены запасы сырья и определен объем возможных ежегодных заготовок в некоторых регионах Южного Федерального округа (Ставропольском, Краснодарском краях, Ростовской области, Кабардино-Балкарской и Карачаево-Черкесской Республике), позволяющие планомерно заготавливать сырье с учетом охраны природных ресурсов.

Обоснована целесообразность и перспективы применения травы зопника колючего и зопника клубненосного в медицинской практике в качестве сырья для получения лекарственных препаратов, обладающих желчегонным действием.

На основании проведенных исследований разработаны проекты ФС «Зопника колючего трава» и «Зопника клубненосного трава», которые приняты к рассмотрению в Институте стандартизации лекарственных средств ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора (письмо № 2653 от 17.10:2007г.). Приняты к рассмотрению «Инструкция по заготовке и сушке травы зопника колючего» и «Инструкция по заготовке и сушке травы зопника клубненосного» в ГУ ВИЛАР (письмо № 1218 от 25.09.07 г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ госрегистрации 01.200.11264).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты химического исследования состава травы зопника колючего и зопника клубненосного с использованием методов ТСХ-анализа, ВЭЖХ, УФ- спектроскопии.

2. Экспериментальные данные по качественному и количественному определению фенольных соединений в траве зопника колючего и зопника клубненосного.

3. Характерные морфолого-анатомические и диагностические признаки травы зопника колючего и зопника клубненосного.

4. Ресурсоведческие исследования по определению запасов зопника колючего и зопника клубненосного, произрастающих на территории Северного Кавказа.

5. Методика стандартизации травы зопника колючего и зопника клубненосного.

6. Результаты фармакологического скрининга сухих экстрактов из травы зопника колючего и зопника клубненосного.

Апробация и публикация результатов исследования

Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на 62-й и 63-й региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск 2007; 2008). По материалам диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 3 статьи - в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 167 страницах компьютерного набора, состоит из «Введения», «Обзора литературы», 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 167 источников, в том числе 23 иностранных авторов, и приложения. Диссертация содержит 50 таблиц и 37 рисунков.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Установлено, что в траве зопника колючего и зопника клубненосного накапливаются- различные БАВ: тритерпеновые соединения (0,94 - 1,03%; 0,85 — 0,99%); флавоноиды (1,69 - 1,89%; 1,83 - 1,91%); фенолокислоты (2,06 - 2,35%; 2,29 - 2,56%), иридоиды (0,45 - 0,50%; 0,34 - 0,43%); полисахариды-(5,27 - 5,50%; 5,22 -5,72%); дубильные вещества. (4,09 - 5,61%; 4,85 — 5,29%); свободные органические кислоты (2,06 — 2,10%; 2,14 — 2,16%), комплекс аминокислот, макро- и микроэлементы.

2. Разными методами физико-химического- анализа установлено наличие 20- соединений (для зопника колючего) и- 16 соединений (для. зопника клубненосного) фенольной природы, из которых методом« ВЖЭХ идентифицировали' 10 соединений: галловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая, цикориевая; коричная, лютеолин 7-гликозид, кверцетин, апигенин, гесперидин.

3. Методом ВЭЖХ установлено в траве зопника колючего наличие 30 Сахаров, 7 из которых идентифицировали: арабинозу, галактозу, глюкозу, ксилозу, лактозу, мальтозу, сахарозу. В'траве зопника клубненосного содержится 16 Сахаров, 5 изкоторых идентифицировали: арабинозу, глюкозу, ксилозу, лактозу, мальтозу.

4. Установлены! нормы товароведческих показателей травы зопника колючего и зопника клубненосного. С помощью предложенной методики определили наличие фенольных соединений (в пересчете на хлорогеновую кислоту), содержание которых в траве зопника колючего составило 3,11 — 3,75%, в траве зопника клубненосного - 3,62 - 3,79% в зависимости от района произрастания.

5. Определены запасы и рассчитаны объемы возможных заготовок травы зопника колючего и зопника клубненосного в различных регионах Северного Кавказа (Ставропольский, Краснодарский края, Ростовская область): Общая площадь зарослей травы зопника колючего и зопника клубненосного на исследованной территории занимает, соответственно около 6 га и 8 га, а рекомендуемый объём заготовок изучаемого сырья составляет более 4 т и 3;9 т.

6. Выявлены характерные диагностические признаки травы зопника колючего: наличие характерных трихом на верхнем и нижнем эпидермисе, наличие четырехклеточных эфирных железок, проводящая система стебля непучкового типа. Для травы зопника клубненосного выявлено наличие характерных трихом на верхнем и нижнем эпидермисе, наличие двуххклеточных эфирных железок, проводящая система стебля пучкового типа.

7. Установлено, что сухие экстракты зопника колючего и зопника клубненосного согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм), относятся к IV классу соединений и обладают выраженной желчегонной активностью.

8. На основании проведённых исследований (химических, ресурсоведческих, морфолого-анатомических) были разработаны проекты ФС «Зопника колючего трава» и «Зопника клубненосного трава», которые приняты к рассмотрению в Институте стандартизации лекарственных средств ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора (письмо № 2653 от 17.10.2007г.). Приняты к рассмотрению «Инструкция по заготовке и сушке травы зопника колючего» и «Инструкция по заготовке и сушке травы зопника клубненосного» в ГУ ВИЛАР (письмо № 1218 от 25.09.07 г.).