Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Исследование и создание ректальных суппозиториев с веществами антиоксидантного действия

; || й

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ им. И. Л\. СЕЧЕНОВА

На правах рукописи

УДК 615.454.2.678.048

ПРЕФЕРАНСКЛЯ Нина Германовна

ИССЛЕДОВАНИЕ И СОЗДАНИЕ РЕКТАЛЬНЫХ СУППОЗИТОРИЕВ С ВЕЩЕСТВАМИ А Н Т И О КС И ДА И ГИ О ГО ДЕЙСТВИЯ (А-7, ФОСФОТИАМИН)

15.00.01 — технология лекарств и организация фармацевтического дела

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва 1991

Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова.

Научные руководители:

доктор фармацевтических наук, профессор

Т. С. Кондратьева,

кандидат медицинских наук, доцент О. Н. Давыдова.

Официальные оппоненты:

член-корреспондент АМН СССР, доктор фармацевтических наук, профессор А. И. Тенцова,

кандидат фармацевтических наук, СНС С. П. Гладких.

Ведущее учреждение — Пятигорский фармацевтический институт.

Защита состоится « . . . »......1991 г.

в «... » часов на заседании специализированного Совета

Д-074.05.06 при Московской медицинской академии имени И. М. Сеченова (Москва, Суворовский бульвар, д. 13).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке академии (Зубовский бульвар, 37/1).

Автореферат разослан « . . . ».....1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Д-074.05.06, кандидат фармацевтических

наук, доцент Н. П. Садчикова

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМИ. В лоследнво времй серьезной внимание дёлязтся изучении воспалительных заболеваний ккязчника таких, ак: проктит, неспецифнческий язвенный колит, геморроидальная олезнь, анальные и послелучевие тран.тн, новообразования, онсерватизное лечение воспалительных заболеваний кияки иачинашт. прихенониа болеутоллвцих, нестноанестезируищих.антигистаяйш^ нтикоагулянтикх и хиниотерапевтичэских лекарственных средств основнкии из которых являптся свечи с гепариноа, левошгцетинок, юэоканноа, свечи "йнузбл"). Лечение в основной сводятся к :ийптойатичесиой терапии, не устранаацей- ссяознах причин 1аболеваиня, таких как: наруазнив реларатнаннх процессоз, :труктурв и функция слизистых оболочек; воспаления» которые :вяза1ш с биохимическини нарушениями в мембранах, наиболее ;ильннм из которых является саыорегулация пероксидного окнсля.чия шпкдов(ПОЛ). При лвбон. воспалительной процессе, гипоксии, »блучении, стрессе» некрозе, иаеаии и т.п. возникает усиление :вободно-радикального окисления иеабраннах лкпидов, Збрйзоваваиося при зтон продукты пероксидного окисления липидоз жазававт систанноа повревдаищее действие на клетку; нарузапт ее мление, вызывавт набухание клетки, изменят структуру « функции неточных и субклеточных аембран, а такзе наруяаыт связанные с мембранами биохимичвскиа и физиологические процессы. Поз включение в терапии выше перечисленных заболеваний антиоксидантных (АО) средств, способных проводить коррекции эт..-х нарушений, позволит устранить ведучие факторы в патогенезе их развития и тек самим улучяить проводиицв фаркакотерапив. Однако, современный арсенал АО, используемых в клинической практике, крайне ограничен и насчитывает- всего несколько препаратов. Б настояцее ,время их эталонами считаится витамин с и, из синтетических соединений, дибунол (ионол).

Поэтому, перспективный направление» в терапии- откечешш заболеваний является поиск, разработка и создание новы* высокоэффективных АО средств. Внедрение их в медицинскую практике позволит повысить эффективность фармакотерапии при выиеуказанных заболеваниях, пополнит даннуо группу препаратов, а такие позволит расвирить спектр их применения.

ЦЕЛЬ И ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования явилось создание эффективная н стабильных в условиях длительного хранения ректальных суппозиториев с ведестваии антиоксидантного доГгств;"

Для достияения поставленной цели необходимо Скяо рееить следущие задачи:

- изучить фармакологические свойства А-7 и антиоксидантнув активность .фосфотиамина;

- разработать оптимальные составы и технологии ректальных суппозиториев с Й-7 и фосфотиаминоы;

- исследовать стабильность созданных лекарственных препаратов в процессе длительного хранения;

-апробировать имеющиеся методики исследования, при необходимости разработать новые или модифицировать суцествувцие;

-изучить биологическую доступность, эффективность и переносимость ректальных суппозиториев:

НЙУЧНЙЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЙ

Установлена острая токсичность и специфичекая активность нового соединения А-7. Установлена антиоксидантная активность фосфотиамина. Впервые у этих соединений выявлены гепатопротекторное и антигипоксическое действия. Экспериментально обоснованы состав и технология ректальных суппозиториев с А-7 и фосфотиамином для проктологии и установлен срок их годности. Показана их биологическая доступность, в ' сравнении с другими

екарстренными формами (раствор,таблетки). На основании армакокинетичвских исследований установлено, что рэктадьннй пособ введения по достивенив максимальной концентрации этия овяинвний в плазме крови адекзатен парентеральному введении. Для витальных суппозиториев разработана методики количественного пределения фосфотиакина - методой высокоэффективной видкостной роматографией, и й-7 - хеыилюминисцентныи и пектрофотометрическим методами.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Разработана нормативно-техническая документация на ректальные уппозитории с Д-? и фосфотиакином для Фармакологического омитета КЗ СССР с целью получения разрешения на клинические спытания. Отчеты об изучении фармакологической активности Й-? кличены НТД. Метод ВЗВХ на фосфотиакин апробирован и внедрен в осНЙИ стандартизации и контроля лекарственннх эецестз и НПО Витамины".

ПОЛОВЕШ. &ШСШЕ НА ЗЙРТУ

На защиту выносятся результаты исследований по;

материалам доклинического фармакологического, оксикологического, биофармацевтического исследований испытуемых ецеств и их ректальных суппозиториев;

- разработке состава и технологии ректальных суппозиториев с -7 и фосфотиамином;

- разработанным материалам контроля качества и установлен-^ роков годности предлагаемых суппозиториев.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты исследований доложены на конференции молодых ченых ХНА им.И.Н.Сеченова, посвященной 223-летии института декабрь 1390 г.), на научно-практической конференнции ВНОФ Резервы соверяанствования лекарственного обеспечеи'.-й населения

РСФСР Сыарт 1931 г.), на научных конференциях кафердр технологи лекарственных ©opsi i 1990,1S91) и фармакологии Сварт- 1991 г.) ыеккафедралъкой конференции ©арнацавткчвского. факультета (ивн 1991 г.).

ПУБЛИКАЦИЙ

По теме дисеартацйоннной работы опубликовано S работ.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЙ С ПРОБЛЕШШ ПЛАНОК ©АР51АЦЕБТИЧЕШ

НАУК

Диссертационвая работа выполнена в соответствии с плано научных исследований ЙМА ик.й.Е,Сеченова, союзной проблено "Фариация" научного совета Й10 АНН СССР >аакология фармация", частной проблемой "Фарнацевтичеггая. -сянология биофармация". Государственный регистрационный .¡омер 01.86.00489С

ОБЪЕМ И СТРИКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационная работа состоит из введения, обзо$ литературы, и четырех глав, описиваодих результат эксперииентальных исследований, обсуядения результатов, общ> выводов и списка использованной литературы. Диссертация coflepsv 111 страниц машинописного теиста, 15 "таблиц, 17 рисунков, схемы. Библиографический указатель включает 167 источнике литературы отечественных и зарубеяннх авторов.

. Во введении сформулированы актуальность тепы, цель и зада» исследования, научная новизна и практическая значимость работ! приведены объем и структура диссертации.

В обзоре литературы содернаться краткие сведения свободнорадикалъных реакциях в организме, о механизме действ] АО, их классификация и характеристика лекарственных препарато! Приведены сведения о биохимической роли тиамина и его фосфорн: зфиров организме и о спектре применения его препаратов.

Глава 2 представляет характеристику материалов и метод|

исследования: фосфотиамина и Й-7, вспоногатальквк вецеств» «паковочного материала. Содервит описание .мзтодоо исследования (апробированных, разработанных и модифицированных).

Глава 3 включает результаты фармакологических исследований по выявлении острой токсичности и специфической аяткэности А-7 и аитиоксидантных свойств фосфотиамина.

Глава 4 содержит результата экспериментальная исследований по разработке состава и технологии ректальнах суппозиториев А-7, фосфотиамина, а такие даяние ф&рнакокшетикм я результате стабильности разработанных суппозиториев» а всловяяя клктайького хранения.

Глава 3 зыклвчает з себя рззультата дохлкничвсяого йзучениз фараахотерапевтичэской эффективности разработанная суппозитор1!ээ, их переносимость. данные па издчекиа адяергизмруязнх■ свойств а мастнораздранаичего действие.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ* КАТЕРШ8 И ЫЕТ0Д13 ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использована ®осфотяамив < ВФС 42-2334-83 > и Й~? {3 серий) »] и вспомогательные . вецастза: основа вироаая Горьковского аимико-фармацевтического завода ( ГХОЗ ), аир твердый ( тип А ), пасла какао, вктвпсол Н-13 и Н-15, масло гидрированное хлопковое с 52 полияврйзованного. глицерш'-> и

стеариновой кислоты С ГХМ 5Т ); эмульгатора: Т-2, Н 1,

й

)

*] Образцы 3-х серий соединения А-7. данные по хронической токсичности и биохимическим исследованиям антиоксидантной активности были получены лабораторией патологической химии обмена вецеств МНЙ им.И.М.Сеченова.зав.доктор медицинских наук А,П.Хохлов. Образцы 3-х серий и таблетки фосфотиамина были получены из НПО "Витамины".

ионоглкдерид дистиллированный ( МГД ), воск эвульсжжный . При проведении биофармацевтических исследований в качестве образцов сравнения использовали отечественные таблетки фосфотиамина.

оосоотт

Монофосфорный зфир 4-метил-5-^-оксиэтия-Н(2-иетил-4амино -5метилпирикидил )-тиазолия фосфат

СИ,.

%-СНгО-

0

0"

с1^ОН408РЙ5 м*и> 442,4

белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок, со слабым характерным запахом. Гигроскопичен. Легко1 растворим в воде, практически не растворим в 95 X этаноле и хлороформе.

Вещество из класса фталгидразидов с условных названием "й-?и СвНбИзО^Иа м.и. 199.19

Представляет собой мелкокристаллический порошок белого или слегка бледно-желтого цвета. Растворим в воде, этаноле, ацетоне и кислотах. Температура плавления 332-333"С.

Для идентификации А-7 и фосфотяакхна использовали известные качественные реакции на функциональные группы, спектрсфотометрический № хроматографические методы анализа.

Для выбора оптимального носителя в ректальных суппозиториях необходимо было количественно установить высвобождение й-7 м фосфотиамина в модельные среди: фосфатный буфер /рН 7,8/ и раствор Тироде, через иежбраны. Содержание соединений » диализатах определяли еавктрофотометричесх*» методом.

становлено, что раствор вещества А-7 имеет а модельных средах юлосу поглощения с максимумом' при длине волн» <2212:2 ни). юдчинение объединенном« закона светопоглочения наблюдается в юнцентрациях от 1 до 8 миг/мл. Раствс») фосфотиамииа имеет в ;анинх растворителях полосу поглощения с максимумом при длине юлны С 234±2 нм) и подчинение закону иаблмдается а концентрации tr 4 до 32 икг/мл.

Результаты фармакокинвткческогА исследования фосфотиаиина в iHOMHAKOctflx количественно оценивали флуорнметрическим методой; 1-7 хемилиминесцентным методом.

Дисперсность вецеств определяли 2 методами: с использованием штической микроскопии на световом микроскопе "Виолам С-П", :набаенном микрофотонасадкой ИОН-3 и на приборе ЙДЛ (анализатор дисперсности порошков).

Время полной деформации, температуру плавления, кислотные ц Годные числа, pH водной вмтмки определяли по методикам Г© XI «здания, пероксиднм0 числа по ГОСТ 8285-72,

Для количественного определения фосфотиамииа в суппозиториях 9 процессе изготовления и 6 условиях длительного хранения разработана методика количественного определения метолом B3SX. с УФ детектированием (относительная оаибка ±1,71 Z). Для количественного определения А-7 в ректальных суппозиториях были

апробированы хемилвминасцентнмй и спвктрофотометрический методы

*

анализа. Установлено, что при изготовлении рабочих растворов Jj ректальных суппозиториев полнота эляирования фосфотиамииа и А-7 достигается трехкратной экстракцией aqua dest. по 2S мл.

Фармакологические и биофармацевтические методы испытаний для удобства изложения материала представлены в соответствуя^« главах. Все фармакологические исследования были наполнены на: 267 белых беспородных крысах-/, массой 190 - 210 грй*м . 830 белых

баспор днях визах- » , кассой 18-20 грани; 30 серых • кроликах-if, кассой 2800-3100 граад; 40 ворских свинках /альбииосаа/. кассой 250-300 граии й 44 собаках, кассой 10-15 кг.

Математичвскуа обработку данных экспериментальных исследований проводили с пошзцьв ЗБИ IBM PC/AT с использование* пакетов прикладных программ "STflTERAF" и "BOEIHCCRAF",

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ »

СВОЙСТВ Й-? И ЙНТИОКСЙДЙНТНОЯ АКТИВНОСТИ ©ОСФОТНАМШШ • '

Определение острой токсичности проводили при вивтрибрвнкниои, внутримнвзчнои к пэроральнок введении fl-7 нрысак и мываы диапоэоне доз от 400 до 3100 мг/кг вассн ¿квотного, чдая группа формировалась из 10 пивотных. Контрольной груп:: ; вводил» раствор натрий хлорида изотонический в соответствця?вн овгеме. За иивотньши наблюдали две недели. Результаты обрабатывали по ветоду LltchfUd З.Т., Hilcoxon F.3.(1949). Установлено, что LD-50 при внутрииывечнов введении у крыс составила 2SS0 иг/кг, у aaseft 940 иг/кг; при внутрибриииинои введении 1600 мг/кг у крыс и У мыяей 8S0 мг/кг массы животного. При пероральном введении А-7 оказался не токсичен.

йнтиоксидантная активность й-7 и фосфотиакщна изучалась на общепринятых моделях: поравение печени четыреххлористым углеродом С СС14 Э с последующей оценкой продолжительности гексеналового наркоза (Кудрин Й.Н.Леввин Б.И. 1976) и на модели острой гиаоксической гипоксии С Каллан Э.,1970) На модели повреадения печени СС14 было проведено 15 серий экспериментов. Группы создавали из 10 яивотных, Чвтвреххлористый углерод (прооксидант.) вводили подкожно ввиде 50 X масляного раствора из рассчета 0,15 мл и 0,2 мл на,20 грамм массы мыяи. Повревдащее действие печени СС14 оценивали на четвертые сутки по "гексеналовой пробе". Доза гексенала во всех опытах составила 80

мг/кг масс* «квотного. А-7 издчался з интервала доз <з? 3 до 30 иг/кг, т.к. предварительные биохимические зсперия2и?а,;ь.чиа данные •} показали, что в указанном диапозоие доэ си обладает антиоксидантной активность». По данном литаратурн, доз:; фосфотидмина от 10 до 30 мг/кг активно вневнваясь з обман вещвста И нервно-рефленторкув регуляции, оказквашт половитздьннй эффект при различных патологических процессах.

Результате эксперимента показали, что продолжительность гвксеналового наркоза в минутах составила: у интактиня мнвэй 42'37" С35'22"~т- 30*32"1: а группе иипей отразлэкнкл четыреххлористыи углеродом 276'28"[г26'27"-~323'13"]5 тогда как при введении А-7 в дозе 10 иг/кг за 30 ияи до поражая ССИ вродолвительяость гвксеналового наркоза составила 33*22" 88'30"1, при введении фосфотиазгша в доз» яг/яг с» сдтэт дэ пораавния СС14 - 3444" Л23»б?:*43'01" 1. При агвдеинм 5-7 а догэ 10 и 30 мг/кг нет сичестзенноя цазагщз? э зеличикз антиоксядантного ' эффекта. Полученные гксявр^з.чтагьнае данные свидетельствует о том, что соединении 6-7 :: йос^зтмакки з изучаемых дозах оказывает внрааенноа пологт!пзд->г.оз гератв?ропмоз действие. реализуа*ееся за счет улучаемая процесса натчбол-гзаа -з гвпатоцитах, мембраностабилизируацего и аятиоксндаитног'о воздействия, приводящих к улучиенив функциональных и структ рннх свойств гепатоцмтов.

В последувяих сериях экспериментов А-7 х фосфотиа». -»а изучались в качестве средств профилактики от повреядазцаго действие СС14 печени и средств, способных умекьвить или устремить повреадаваее действие гепат'оцитов ССЬ4. Предварительное недельное введение А-7 в дозах 10:30 мг/кг массв мним и фосфотиааина з дозах 18; 30 мг/кг /до отравления СС14/ оказывало защитное антиоксидактное действие, препатствувщеа развитии тлксических

эффектов от продуктов ПОЛ при введении ССН /на &-« сутки/ из расчета 0,2 ил / 20 г мыаи. Продолжительность гексеналового наркоза /на 12-е сутки/ при предварительном вв.едении А-7 в дозе 10 мг/кг составила - 49*11" С32*04"«»-6в*1В"1» при введении фосфотиакина в дозе 30 иг/кг - 48,25"131'47^84*23"3. в контроле, при введении 0.9 X NaCL - 271ЧВ" 1214'23"^346'10"3 Введение й-7 и фосфотиаиина в тех ае дозах, . но »а фоне развиввегося повреждения печени СС14-(0.2ил/20г) значительно укорачивало продолжительность гексоналового наркоза на четвертке сутки и составила в контроле: отравленные - 279'25" t221'33"^.331*27"]. при дозе А-7 10 мг/кг - 60'28" 149'01"ч-72Т' ]; при дозе фосфотиамина 30 мг/кг - SS'tl" 131*09ч79*13"3. На li-e сутки при еведневном введении А-7 продолжительность геисенаяовогр наркозе составила 80'00"Е47'04,^-73*35"3. в то время как, фосфотнахин <30 мг/кг) при той se схеме введения укорачивал продолжительность гексеналового сна до 43*00ri23'49".i-t>3'20"l, при контроле -интактные мыви 42*57" С33'22"4.50*32"1. Проведенные эксперименты, позволяет судить о высокой аитиоксидантной активности исследуемых соединений.

Данные исследований на модели острой гипоисической гипоксии представлен« на рис, 1 сяидетвлкстяугт о том, что fl-7 (Юмг/кг) и фчсфотиаиин (30мг/кг) достоверно удлиняли время переносимости гипоксии животными по сравнения с контролем, оказывая тем самим выраженный антигкпоксмчесинй эффект.

9 нового соединения 6*7 в диапазоне доз от 10 до 30 мг/кг нами было изучено влияние на ЦНС, ССС и дыхание. В изучаеммх дозах й-? не влиял на показатели функций указанных систем.

При фармакологическом изучении А-7 и фосфотиамина било выявлено их антиоксидантное действие, однако терапевтический индекс у А-7 составил 85, у фосфотиамина 17. что свидетельствует

Пролол»«вяъность аизки аивотикх С в *> иа иоцади острой гипоксяческой гипоксии

%

240

-Т1

lü.Uii |! ¡V,*"- ■

. вдш

I :

¡ilüii - 8 - ■ SI - S -

ш-а- m-r-

■4-

|:.1влиякие A-7 и ФосФо тиамИна на вцхиваеность кышей при острой гипоксяческой гипоксии.

1 - контроль <0,9 у- раствор натрия хвор^да). [нократное виутрибрюшинное введение А-7 в-яозан: г - ю иг/кг.

3-30 мг/кг.

июкратное внутрибркшинное введение ♦осФотиакмт в дозах:

4-18 нг/кг.

5-30 нг/кг, «епараты сравнения:

6 i дибунол (30 нг/кг); T - пирацетам (500 нг/кг). )се препарат» вводились за 40 нин до начала эксперимент. :

о большей сцрсгг герапевтическогб gsScpHS н ывньвей • токсичности соаддазккс fi-f. . - ■ ,

ШЙОЛОГЙ? Й B3S4EHUE .* РЦКШШХ С1ШОЗКТОР1ШЗ ФВСФОШШй В Й-?

С цзльс suss-saiiM ontHusibsibre состава носйтеяй ыслодьэсвй-

дк: касяо какао, оснсви .sapöags Г263, вкр тзгрдвй. зитепсод H-iS

и 'n'-iS. rxti 5Т: а качества ЯЙВ:'' ssyj!5>ra?o? Н 1, Т-2, ЕГЛ.воек

к

экульсиоккей. ■

Дсзг., встааабденавй 28 асновеная еа*>яа:>ояогич«ский зкспвргатт&вьюа: клзкаа, ййст4шяа для фрефскзаж&'а 33 кг, для й-7 SC иг. При пыйорз игюда аведений яака^твешгиа caqscva s основу рукагодствогышеь: _ ©нэщде-дайчеашш сеоАстеози выбранных соедккеккй, прейзйЬйй технологе* ;; дакшнш яяторатщш, Лекарствокнко eossctbü сзодил:: в освови по тшщ суспекзин. Дисперсность локарстсгЕ^за веществ bsoähsss в суппозитория соответствовала стагш;:; nz£:;vr,s Еэаглъчацка (73 ») к ш^одидесь с пределах ov 10 до ётз. В дайоргторвпзз вс^оаиях с^ЩЕДЗВТсрия готовили иетодри Еаюзсаззш а шисгеассезгш Оорвд» Ъжса суппозитория составила 1.4 s*. Содарзалв» ¿¡«аармэвкная ве®гс?в й суппозиториях 'иек&е 5 '¿, m$ta&& ®аг$тср «skh т

учитывался.

Зкспериыенгелько вабор рационального eocsjtcjs дав суппозиториев проводш® w mmsisxe (сиоросгв в ааxaors) висвобовдвиия лекарствешшя вазеств aä коснтеяя кэтсйои равновесного диализа через целофановуэ азяулроагяцаейЁЗ «esöpasg' Ср;;с. 2). В качестве кодеяьной среда использовали фос«а?ка2 буферный раствор, со гяачениеы pH 7,8, Как вкдно из рас. 2, основа в значительной степени влияет на ломоту и интенсивность высвобождения й-7 и фосфотиаыина. Оптимальными основах» по кинетике высвобождения оказались - вир твердый тип й и витепсол Н-15.

-'13 -

Высаовоядвние ft.? и фссфотиаяйка In vitro KSîojoH равновесного диализа через цвллбфЬноадэ мвмАраяв.

. о

' 1вия» tjíiiítijfjn fit f fitfmmt dits [¡шип;»! шщщгт » ti * штсп ff mm: l-мш nur. 2-itn» npns rsfuirtfm* »Mi?; I-:ittttti ■ M5; HII ST; Je» mw»t, m í: t-нтш í-!5.

Применив Пав для нзиеЯёШ реологических характеристик ямре твердого било признано нецелесообразна, из-за незначительного влияния на высвобождение испытуемых веществ.

На основании результатов экспериментальных исследований предложен следувщий состав и технология ректальнмх суппозиториев, с учетом дальнейшего их внедрения в промышленное производство на Хабаровском химико-фармацевтическом заводе.

Состав: 1. Оосфотиамин

(5ФС 42-2334-85) - 0.03 г 1ир твердый

(тип-А, БОС 42-1117-86) - достаточное количество, ^ для получения суппозиториев массой 1,4 г

2. Вещество А-7

СВФС 42- ) - 0.05 г '

... 'Пир твердый

(тип-А, ВФС 42-1117-86) - достаточное количество, для получения суппозиториев массой 1.4 г Технология изготовления суппозиториев А-7 и фосфотиамином методом выливания: •

в форфоровой ча«ке при температуре 40 С расплавляли мир твёрдый (тип-А), при необходимости процеяевая через двойной слой марли. Расплавленнуп основу постепенно порциями смемивали с измельченным лекарственным веществом до полученияч однородной массы. Суппозиторную массу выливали, в предварительно смазанные мыльным спиртом, формы или ячейки из поливинилхлорида (ПВХ). Формы помещали в морозильнуя камеру на 15-20 минут. Упаковывали согласно ГОСТ 252-50-82 в соответствии с ОСТ 64-7-219-77.

Ректальные суппозитории торпедовидной формы, йелого цвета со Слегка хелтоватым оттенком, в . разрезе допускается воздувный

стеряеиь, колебания в массе в предела?; ь % (1,33-1.47), температура плавления - 35,0 £0.5'С, эргм шдао/S дсфорвщии от. 2 до 3 минут, значение рН 4,0 и 8,0 соответствонко, '

Дальнейшими исследованиями было покагано игееиеки» интенсивности всасывания лекарственных вецеств в алиг-5й i я vitro,' з зависимости от «риродм используемой мембрана С^лрс-е-овая пленка, изолированная кивка крысы) , ыегодоа равяозос$?его диализа. В условиях двухчасовой инкубации мир твердый/ткя 5/ змсвобоядает . через изолированная кивку крысы 88,6:10,17 % fl-7 и 78,30^0,52 X фосфотиамина, з то время как, через целлофановой пленку амсаобовдается 42,52*0,09 X и 19,1210,34 %, соответственно. Более предпочтительной модель» оказалась модель с #з«шррванноа кивкой краем, в качестве полупроницаемой »емОрдк* lpns,3).

Фармаиокинетическия и£сд»девзияя in vivo, разработанных ректальных суппозиториев, лроводилл m кроликах (по б аивотнух в группе). На рисунках 4 и S яредставленм данные биодоступности й-7-и. фосфотиамина из различных лекарственных форм {таблетки, раствор, суппозитории), при разных путях введения.

На основании данных биологической доступности, выявлено, что ректальный путь введения Й-7 и фосфотиамина позволяет максимально приблизиться и парентеральному пути введения и создает . терапевтическую концентрацию веществ а крови через 10 минут. Данные, полученные на модели изолированной кивки крысы достоверно коррелирует с данными, полученными в опыте In vivo, коэффициент корреляции составил 0,97 для й-7 и 9.94 для фосфотиамина.

Лабораторнме образцы суппозиториев изучались на стабильность в условиях длительного хранения (два года), при 277 и 293 К, с

помощьв физико-химических. химических и микробиологических

*

методов исследования в день приготовления и далее через б, 12, 18. 24 месяцев. Установлен)}, что в процессе длительного хранения

- 15 -

Висвобоядвние А-7 и фосфотиамина на модели изолированной кивки крксн в зависимости от носителя

Рис^З Высвобождение А-7 ( 2,4,6 ) м фосфотиамина ( 1,3,5 ) на модели изолированно* кишки крысы в зависимости от носителя .1,2 - масло какао; 3,4 - витепсол НЛ5; 5,6 - вир твердый,тип А.

' - 17 -Биологическая доступность А-? при а/и, а/в введении растворов (1,2) . и ректальных суппозиториев (3).

Рис.4 Концентрация А-7 в сыворотке хрони после однократного внутривенного (I), внутримышечного (2) и ректального (3) введения препарата в дозе 50 мг.

- 18 -

Биологическая доступность Фос®отиаиина из растворов (1), таблеток (3) и ректальных суппозиториев (2).

Рис.5 Концентрация фосфотиамина в сыворотке крови посж однократного внутривенного (I), ректального (2) и перора. ного (3) введения препарате в дозе 30 мг.

' - 19 -

суппозиториев Я-7 и фосфотиамина на основа сирк твердого (тип-й) все Физико-химические показатели остаптея практически без изменений и сооответствувт пределам нориа Г® XI в течение двух лет (табл.1,2). Кроме этого установлено, что разработанные суппозитории в условиях длительного хранения <а лодарякваэ* рост микроорганизмов и не содермат патогенной микроядор».

ОАРКАКОТЕРАПЕВТИЧЕСХАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ Н ■ ПЕРЕНОСИМОСТЬ

РЕКТАЛЬНЫХ СУППОЗИТОРИЕВ А-7 И «ОС0ОТИАША Переносимость готовой лекарственной форма проводили на собаках при однократном и двухнедельном введении различная • доз А-7 (90,100,300 иг) и фосфотиамина (30,30,300 иг) 8 суппозиториях.

Введение ректальных суппозиториев А-7 (0,1 г) и фосфотиамина (О.Овг) ив оказывало токсического и местнораздраяавцего действия на слизистые оболочки прямой кивки, не вмэмвало изменений в поведении, соматических и вегетативных реакциях, что позволяет судить о хорошей переносимости разработанная ректальных суппозиториев .

Выявление аллергсгенной активности разработанных суппозиториев изучали по методу Алексеевой и др. (1974) на морских свинках (альбиносах). Опыты показали, что нанесение раэреэащих доз (!.7:1? мг/кг А-7, 1;10 хг/н? фосфотадмин) не вызывает таких проявлений как почесывание, чихание, заметного беспокойства аивотнмх , как при одноразовом. так и при двухнедельном введении разработанных ректальных суппозиториев, что свидетельствует об отсутствии аллергизирувмих свойств у изучаемых соединений в указанных дозах .

фармакотерапевтическуя эффективность разработанных

суппозиториев проводили на собаках в эотеринарной клиники при НИИП. Проведенные эксперименты показали, что предлагаемые суппозитории оказывавт полохительное влияние на течоние

Результаты анализа суппозиториев А-7 по 0,05г » процессе длительного хранят» Тлвл-Я 1

ПОКАЗАТЕЛИ КАЧЕСТВА

.Напер Дата анализа

серим Срок хранения Количественное Температура Вреия полной ЧИСЛА Значение РН

/ в несяцах/ Описание Средняя содержание плавления. деформации йодное ки^отное перокемдносз водной

пасса пл /пик./ вытявх*

**

У? в одно*

спектр свеч*

110169 -0- 17.02*69 Свечи 1,33-1,47 309 0,049 не л 1 7 3'50" В, ВО 0,24 0 8,30

6- 17.07.89 светло- 314 0,051 36,0 3'55" в,90 0,27 0 8,36

12- 13.02.90 желтого 308 ' 0,049 36,0 3-53" в, 82 0,23 0 6,32

18- 16.07.90 цвета 310 0,030 36,2 3'47" 0,77 0,25 0 В, 26

24- 11.02.41 -"- —"— 306 0,043 36,3 З'ЗТ" в,92 0,27 0 9,30

170189 0- 17.02.B9 Свечи 1,33-1,47 зоа 0,049 36,0 4'00м В,83 0,25 0 В, 30

6- 17.07-В9 ■ светла- 306 0,04В 36,0 З'М" В, 89 0,26 0 В,34

12- 13.02.90 селтого 302 0,047 36,0 3'55" 0.86 0,23 0 8,30

1В- 16.07.90 цвета 313 0,05! 36.1 В,79 0,26 0 8.28

24- 11.02.91 —"— 310 0,050 36,2 3-57- в,90 0,28 0 8,32

250189 0- 17.02.89 Свечи 1,33-1,47 310 0,050 33,9 ■3' 56" 8,84 0,24 0 В,26

6-,17.07.89 сэетло- 306 0,048 36,1 3'5?" 8,89 0,26 0 8,30

12- 13.02.90 велтого збе 0,049 36,0 3'55" 8,85 0,22 0 8,32

18- 16.07.90 цвета 315 0,051 36,2 3*47" в,77 0,26 0 8,28

24- 11.02.91 306 0,04В 36,3 3'39" 8,89 0,27 0 8,30

Примечание: средние результаты 6 определен*»

Реоуллаты анализа суппозиториев фосчотиапииа па О.ОЗг в процесс» длительного хрвнеияя Тавд.Н 2

0 0 К А 3 А Т ЕЛИ КАЧЕСТВА

ЦЭТа вНйЛЙЗЗ

серки Срок хранения Количестврннов Тенператэра Вреня полной ЧИСЛА Значение рН

/ в песяцаж/ Опясвуяе Средняя содержание плавление. ДВфОРЙ&ЦИН ЙОДНОЕ кислотное перокемднемг йодной

г • /пак./ оытя*хЯ

пасся С

0 одной

.... сзече

07038В 0- 17.02.89 Свечи 1,33-1,47 0,1 0,030 35,В 3'55" 8,79 0,23 0 3,70

6- 17.07.8? Светло- 8,05 0,029 36,1 . 3*54" 0,91 0,23 0 4,06

12- 13.02.90 ве Л ТОГ о _ И __ В,15 0,031 36.1 3*36" а,вз 0,27 0 3,92

18- 16.07.90 иоета 7,93 0,028 36,3 ' 3'40" В,78 0,24 0 4,03

24- 11.02.91 —** — В.1 0,030 36,0 з*зз" 8,90 0,26 0 з,ео

о?озвв 0- 17.02.89 Сое««. 1,33-1,47 В,05 0,029 36,1 4'23" В. 04 0,26 0 3,30

6- 17.07.69 сввтда- В|05 0,029 36,1 3' 44" 8,87 0,23 0 3,70

12- 13.02.90 келтого ал 0,030 35,2 3'52" В, 83 0,23 0 4,10

1В- 16.07.90 цвета 8,05 0,029 36,0 3*49" 0,73 0,23 0 3,53

24- 11.02.91 -" - - " - а,15 0,031 36,0 3*52" 8,39 0,27 0 3,72

12озва 0- 17.02.89 Свече 1,33-1,47 7,95 0,023 33,в 3'51" В,82 0,23 0 4,08

6- 17.С".89 светло- „ч • 8,1 0,030 36.2 3*59" 9.В7 0.37 0 4,00

12- 13.02.90 «елтага 0,05 0,029 36,1 3*54" 8.88 0.24 0 4,12

16.07.90 ■шета 7,93 0,02В 36,3 3'«" 8,79 0,23 0 3,78

24- 11.02.91 е,1 0,030 36,0 3*55" е.вб 0,26 0 3,90

парапроктита, трещин и других воспалительных заболеваний дистального отдела кииечника, в 2 раза ускоряя сроки лечения, по сравнении с традиционными методами. При ректальном исследовании отмечалось уменьвение отечности и гиперимии слизистой на 5-ый день при использовании суппозиториев А-7 и фосфотиаиина. • На основании результатов фармакологических, биофарыацевтических и технологических исследований подготовлена НТД на субстанцив и ректальные суппозитории А-7 и на ректальные суппозитории фосфотиамина на мире твердом тип А с цельв получения разреввния на клинические испытания. ВЫВОДЫ:

1. Созданы эффективные и стабильные в условиях длительного хранения ректальные суппозитории с веществами антиоксидантного действия: А-7 и фосфотиамином.

2. Выявлена антиоксидантная и антигипоксическая активность нового соединения А-7 и фосфотиамина с терапевтическими индексами 85 и 17, соответственно.

3. Разработаны состав и технология ректальных суппозиториев с использованием аира твердого (тип. А). Установлена эффективная доза А-7 - 0,05 г и фосфотиамина - 0,03 г в единице лекарственной ■ формы.

'4. Разработанные ректальные суппозитории А-7 и фосфотиамина стабильны в течение двух лет (время наблюдения) при температурах 277 и 293 К. Все показатели качества суппозиториев укладываются в допустимые пределы ГФ XI изд.

5. Разработана унифицированная методика количественого определения . фосфотиамина в ректальных суппозиториях с использованием высокоэффективной аидкостной хроматографии с УФ детектированием на микроколонке с обращенной фазой типа "Силасорб С-1В". Оиибка методики составляет ±1,71%. Метод апробирован и

внедрен в ГосНУИ стандартизации и контроля лекарственных веществ и НПО "Витбмицк".

6. Выявлена высокая биологическая доступность разработанных ректальных суппозиторив In vitro (88,6±0,17 'Á fl-7 и 78,56+0,52 X фо.сфотиамина) и In vivo Сб.44-10" 5 моль/лиг,! f " и 6,72-КГ 6 моль/литр фосфотиахин), с коэффициентом корреляции ,,ля й-7 0,97 и для фосфотиаиина 0,94 и установлена идентичность величины эффектов при ректальном и парантеральных путях введения.

7. Показана фармакотерапевтическая эффективность разработанных суппозиториев А-7 и фосфотиамин 'при следувщих патологических состояниях: парапроктит, трецины прямой киики, диарреа, послеоперационный период(экстирпация Катки.проыеяностнсй грызи,ректопиксии) и дерматиты. При этом сроки лечения укорачивались в 2 раза по сравнение с традиционными.

8. Подготовлена нормативно-техническая документация на ректальные суппозитория А-7 и фосфотиамина для Фармакологического' комитета ИЗ СССР с цель® получения разревения на клинические испытания.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, 0ЛШЯШШШХ ПО ТЕНЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Витамины и ксфераеят« 8 детской практике //Медицинская сестра - 1989. -N 12. -С,43-47,

2. Биофарыацевтические исследования детских суппозиториев с фосфотиамином //Фармация -1990, -Т.39, -Н 3. -С.14-17. Соавт. Т.С.Кондратьева, Г.Л.Яатвиива, Кондратьева.

3. Влияние ПАВ на дииаимнд высвобовдания кз суппозиториев фосфотиамина //тезисы докладов молодых ученых на конференции посвященной 225-летии ИМА ил.Я,И.Сеченова -1990. -С.38. Соавт. БоСкова Е.П.

4. Изучение устойчивости и установление сроков хранения суппозиториев с фосфотиамином //тезисы докладов