Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава, технологические исследования и определение норм качества для композитных суппозиториев с кислотой ацетилсалициловой и дипиридамолом

На правах рукописи

005046959

Глижова Тамара Николаевна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА, ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ НОРМ КАЧЕСТВА ДЛЯ КОМПОЗИТНЫХ СУППОЗИТОРИЕВ С КИСЛОТОЙ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ И ДИПИРИДАМОЛОМ

14.04.01 — технология получения лекарств

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 з СЕН 2012

Пятигорск - 2012

005046959

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор Степанова Элеонора Федоровна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук Шиков Александр Николаевич доктор фармацевтических наук Петров Александр Юрьевич

Ведущая организация: ГБОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России

Защита состоится « 16 » октября 2012 года в «14.00 » часов на заседании диссертационного совета Д 208.069.01 при ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России» (197376, Санкт-Петербург, ул. Проф. Попова, д.14 лит. А)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России» (197227, Санкт-Петербург, пр-т Испытателей, д.14)

Автореферат разослан «_»

2012 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 208.088.01

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Значительный рост количества сердечно сосудистых заболеваний в мире, поражение ими наиболее экономически значимой, трудоспособной части населения, делает все более актуальным поиск новых эффективных лекарственных препаратов для лечения этих патологий.

Кислота ацетилсалициловая (КАС) является на протяжении многих лет общеизвестным антиагрегантом. Механизм её действия в этом направлении достаточно изучен, её антиагрегантный эффект не относится к дозозависимым и наблюдается в диапазоне 30-1500 мг. Абсорбция КАС и ее метаболита кислоты салициловой из ЖКТ, происходит быстро и полностью после приёма внутрь и зависит от используемой лекарственной формы. Лекарственное средство эффективно при первичной профилактике заболеваний сердечно - сосудистой системы и при вторичной профилактике инфаркта миокарда, т. е. эффективность и диапазон действия КАС очевиден.

Однако длительное применение этого лекарственного средства вызывает ряд серьёзных побочных явлений — и, прежде всего, ульцерогенный эффект. Поэтому, при проведении терапии КАС, приходится исключать пациентов с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки, а также уделять пристальное внимание больным с нарушением функции печени или почек. Кроме того, при продолжительном приёме КАС, необходим регулярный гематологический контроль.

Такие ощутимые ограничения для лекарственного средства столь значимой направленности действия, и такого распространённого и востребованного, привели к поискам возможности совершенствования его использования. Эти поиски касались, прежде всего, комбинации КАС с другими лекарственными средствами разнонаправленного действия, которые будут способствовать уменьшению нежелательных побочных реакций, и потенцировать действие друг друга. В этом отношении интересен дипиридамол или курантил (производное пиридина), который улучшает микроциркуляцию за счёт угнетения адгезии и агрегации тромбоцитов, улучшает коронарный и мозговой кровоток, понижает АД, является индуктором интерферона, способствует развитию неспецифической противовирусной резистентности к вирусным инфекциям.

В настоящее время эти лекарственные средства существуют в виде таблеток покрытых оболочкой, в т.ч. аспирин кардио - энтеросолюбильная форма оболочки, курантил - драже и таблетки, покрытые оболочкой. Данные лекарственные формы достаточно стабильны, имеют отработанную технологию. Однако, сочетание этих лекарственных средств, уже исследованное фармакологами, оказалось эффективным и перспективным при длительном использовании такой композиции для профилактической терапии тромбозов, эмболий, наблюдаемых при ишемической болезни сердца и инсультах. Поэтому сочетанное использование этих компонентов представляется нам целесообразным.

Одной из распространённых и современных лекарственных форм являются ректальные суппозитории, имеющие многочисленные неоспоримые достоинства. Нами была использована эта лекарственная форма, как наиболее рациональная для композиции — КАС и дипиридамол.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является: разработка состава, технологии, фармакотехнологические исследования и определение норм качества для суппозиториев, содержащих КАС и дипиридамол.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

• Разработать состав ректальных суппозиториев, содержащих КАС и дипиридамол;

• провести биофармацевтические исследования in vitro по выбору оптимальной суппозиторной основы;

• предложить технологию производства суппозиториев с КАС и дипирида-молом;

• предложить методику качественного и количественного определения КАС и дипиридамола в суппозиториях при их совместном присутствии;

• провести фармакологические исследования разработанного лекарственного препарата, оценив его специфическое действие и безопасность;

• провести стандартизацию и определить сроки хранения разработанных суппозиториев;

• предложить состав многослойных суппозиториев с КАС и дипиридамо-лом, провести биофармацевтические и технологические исследования;

• составить проект ФСП и лабораторный регламент на суппозитории ректальные с КАС и дипиридамолом.

Научная новизна исследований

Научная новизна исследований заключается, прежде всего, в создании ректальной лекарственной формы для оригинального комплексного состава действующих веществ - КАС и дипиридамола.

Впервые проведен выбор оптимальной композиции вспомогательных веществ для суппозиториев с КАС и дипиридамолом, а также разработана и вали-дирована методика количественного определения действующих компонентов в суппозиториях спектрофотометрически.

Выполнены сравнительные фармакологические исследования предложенных суппозиториев.

Для дальнейшего совершенствования разработанной лекарственной формы предложена ее инновационная модификация — двухслойные суппозитории, которые способны обеспечить регулируемое высвобождение действующих компонентов.

Научно обоснована и экспериментально разработана технология ректальных суппозиториев, содержащих композицию — КАС и дипиридамола.

Разработан состав суппозиториев и определены основные их качества; для подтверждения новизны разработанного состава был оформлен соответствующий патент.

Практическая значимость результатов исследования

Проведены фармакотехнологические исследования по созданию ректальной лекарственной формы с КАС и дипиридамолом, что предполагает расширение ассортимента отечественных лекарственных форм антиагрегантного действия. Установлены необходимые технологические характеристики для производства суппозиториев методом выливания

Определены сроки годности суппозиториев при хранении.

Внедрение результатов исследования в практику

Разработан проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на лекарственный препарат, «Кислота ацетилсалициловая и дипиридамол суппозитории

ректальные 35мг и 25 мг». Составлен лабораторный регламент на данный лекарственный препарат и получен соответствующий акт внедрения от 17 ноября 2011 г. Проведена опытная наработка суппозиториев по данному регламенту, производство суппозиториев включено в перспективный план работы Тюменского химико-фармацевтического завода.

Основные положения, выноснмые на защиту:

- обоснование состава и технологии суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- технология композитных ректальных суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- результаты биофармацевтического исследования композитных суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- результаты фармакологических исследований суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- обоснование состава и биофармацевтические исследования двухслойных суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- результаты оценки качества и стабильности разработанных суппозиториев Апробация и публикация результатов исследования.

Основные результаты диссертационной работы доложены на:

- Международной научно-практической конференции «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (Белгород, 20-21 ноября 2008 г.).

- VII Конференции ревматологов Южного Федерального Округа (Ессентуки, 2009 г.).

- Международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства» (Южно-Казахстанская государственная медицинская академия 2009 г.)

- 64-67-й региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, январь 2009 — 2012 гг.).

- II Всероссийской научной конференции «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург 2012 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 4 работы в изданиях, рекомендованных ВАК.

6

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО Пятигорской ГФА Минздравсоцразвития России

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 132 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы, 11 рисунков, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), 1 главы, посвященной материалам и методам исследований, 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы и приложений. Список литературы включает 147 источников, в том числе 23 иностранных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Выбор основных компонентов для суппозиториев с КАС и днпири-

дамолом

На первоначальном этапе исследований был осуществлен выбор основы для суппозиториев с помощью биофармацевтических методов in vitro.

Для проведения эксперимента использовали основы гидрофильного характера - сплав ПЭГ 1500 и ПЭГ 400 (8:2), а так же липофильные комбинированные составы: масла какао 50%, пальмоядровое масло 39%, твёрдый жир 10% и аэросил 1%; масло какао 50%, пальмоядровое масло 39%, парафин 10%, аэросил 1%. Также использовали основу suppocire cs2x, которая является аналогом витепсола и широко применяется для изготовления суппозиториев. Суппозитории массой 3,0г готовили методом выливания на всех перечисленных основах. КАС в исследуемые образцы вводили в количестве 35 мг, а дипиридамол - 25мг: указанная доза является средне терапевтической для пероральных лекарственных форм. Составы различных композиций суппозиториев с КАС и дипиридамолом приведены в таблице 1. Биофармацевтические исследования проводили в два этапа. На первом этапе, для выбора оптимальной суппозиторной основы использовали метод диализа в желатиновый гель с индикатором хлоридом железа 1%.

Таблица 1 - Составы экспериментальных модельных прописей суппозиториев с КАС и дипиридамолом __

Компоненты Номер состава и содержание в г

1 2 3 4

КАС 0,035 0,035 0,035 0,035

Дипиридамол 0,025 0,025 0,025 0,025

Полиэтиленгликоль 1500 2,325

Полиэтиленгликоль 400 0.58

Масло какао 1,47 1,47

Твердый жир 0,29

Эирросц- сэ2х 2.94

Пальмоядровое масло 1,15 1.15

Парафин 0,29

Аэросил 0,03 0,03

Итого: 3,0 3,0 3,0 3,0

После контакта действующих веществ с желатиновой массой наблюдали окра-

шенные зоны, диаметр которых представлен на рисунке 1.

При этом был изучен процесс высвобождения лекарственных веществ из модельных суппозиториев, приготовленных на основах: состав №1 ПЭГ 1500 80% и ПЭГ 400 20%; состав №2: вирроске сб2х; состав №3: масла какао 50%, пальмовое масло 39%, твёрдый жир 10% и аэросил 1%; состав № 4: масло какао 50%, пальмовое масло 39%, парафин 10%, аэросил 1%.

состзв 1 состав 2 составЗ состав4

Ж КАС □ дипиридамол

Рисунок 1 - Диаграмма степени высвобождения действующих веществ из суппозиториев на различных основах Из рисунка 1 видно, что все исследуемые основы не препятствуют высвобождению лекарственных веществ. Однако динамика этого процесса различна: максимальную степень высвобождения обеспечивает основа состава №1: ПЭГ

1500 и ПЭГ 400, для КАС диаметр окрашенной зоны составил 48,9 мм. Основа Бирроаге сб2х также показала хорошие результаты, диаметр окрашенной зоны составил 45мм. В то же время из основы состава №3 и №4 диаметр составил 35мм и 33мм соответственно. Для дипиридамола также хорошие результаты показала основа состава №1 и №2.

Вторым этапом исследований явилось изучение процесса высвобождения КАС и дипиридамола из суппозиториев методом диализа через полупроницаемую мембрану.

В качестве модельной диализной среды был выбран спирт этиловый 95%. Мембраной служила целлофановая пленка со стандартными толщиной и размерами пор, которая позволяет максимально моделировать процессы высвобождения при изучении фармацевтической доступности лекарственных веществ.

На основании полученных данных был построен график зависимости степени высвобождения КАС из исследуемых основ от времени диализа (рисунок 2). Установлено, что оптимальной основой для КАС в суппозиториях является состав №1, при этом за полчаса высвободилось 42,13% действующего вещества, а за 2 часа — 60,57%.

Наилучшее высвобождение дипиридамола также обеспечивал состав №1 (58,97%) и основа зирроЫге сб2х (53,79%), что подтверждается данными представленными на рисунке 3.

80

о мин 15 мин 30 мин 60 мин 90 мин 120 мин

—*— Состав№1 —Я—Состав N9 2 —А— Соста в № 3 —»-Состав№4

Рисунок 2 - Зависимость высвобождения КАС из исследуемых основ от продолжительности процесса

Полученные результаты свидетельствуют о влиянии основообразующего материала на процесс высвобождения лекарственного вещества из суппозиториев. Однако динамика этого процесса разноплановая. Наиболее полное высвобождение КАС и дипиридамола в диализат происходит из суппозиториев, приготовленных на гидрофильной полиэтиленглнколевой основе состава №1: ПЭГ 1500 и ПЭГ 400 (8:2). Через 120 мин высвободилось 72,15% КАС и 58,99% дипиридамола. Близкие результаты наблюдались при использовании основы яирроаг сб2х; за то же время высвободилось 60,57% КАС и 53,79% дипиридамола. Из других основ высвобождение составило менее 50% количества действующих компонентов.

Состав № 1 —»—Состав N° 2 —Состав N2 3 —»—Состав №4

Рисунок 3 - Зависимость высвобождения дипиридамола из исследуемых основ от продолжительности процесса Таким образом, на основании полученных результатов, установлено, что

наиболее полное высвобождение лекарственного вещества происходит из суппозиториев на основе сплава полиэтиленгликолей и основе Бирроаг сз2х.

По результатам комплексного исследования, предложены следующие со-

ставы для суппозиториев с КАС и дипиридамолом:

Состав № 1 Состав №2

Кислоты ацетилсалициловой - 35мг Дипиридамола -25мг Полиэтиленглнколевой основы состава: Полиэтиленгликоль 1500 - 80% Полиэтиленгликоль 400 - 20% достаточное количество до получения суппозитория массой 2,85-3,15г Кислоты ацетилсалициловой - 35мг Дипиридамола - 25мг Основы эирроаг сэ2х достаточное количество до получения суппозитория массой 2,85-3,15г

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ, ОЦЕНКА КАЧЕСТВА СУППОЗИТОРИЕВ II ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Далее была разработана технологическая схема производства суппозиториев с КАС и дипиридамолом, представленная на рисунке 4.

Основные этапы технологии суппозиториев заключаются в подготовке смеси лекарственных и вспомогательных веществ, приготовления основы и суппозиторной массы, дозирования суппозиторной массы и формования суппозиториев.

Рисунок 4 - Технологическая схема производства суппозиториев с КАС и дипиридамолом на гидрофильной основе

Аналогично была разработана технологическая схема для суппозиториев с КАС и дипиридамолом на основе вирроск сб2х. Схема отличается лишь этапом ТП.4, т.к. в этом случае задействована операция расплавления основы и введения в нее действующих компонентов, а также двухэтапная гомогенизация с использованием дополнительных перемешивающих устройств в связи с высокой вязкостью суппозиторной массы. Далее были определены структурно-механические свойства суппозиториев (таблица 2).

Таблица 2 - Структурно-механические показатели суппозиториев с КАС и ди-пиридамолом _____

Вид суппозиторной основы Растворимость в мин Температура °С Время полной деформации, мин Твердость Вязкость, М-Па-с

плавления затвердевания

ПЭГ1500 ПЭГ400 14'35"— 15'10" ±32,0 6-7 ±1050 ±38,6

Бирросне ся2х ±35,6 ±30,9 7-8 ±980 ±38,0

На основании полученных данных, можно сделать вывод, что структурно-механические свойства основ с введением КАС и дипиридамола практически не изменяются.

Испытание на подлинность суппозиториев проводили методом хроматографии в тонком слое сорбента. На хроматограмме было обнаружено два пятна, соответствующие пятнам стандартных образцов КАС и дипиридамола.

Затем проводили количественное определение. Предварительно методика анализа была апробирована на модельной смеси, содержащей: Кислоты ацетилсалициловой 35мг Дипиридамола 25мг

Определение дипиридамола Измеряли оптическую плотность при длине волны 410 нм. Раствор сравнения - спирт этиловый 95%.(таблица 3) Таблица 3 — Результаты анализа дипиридамола в модельной смеси_

АГ А6 Навеска модельной смеси, г Содержание действующего вещества, г Метрологические характеристики

0,398 0,395 0,0610 0,0248 X = 0,0248 5 - 0,00029 = 0,00012 АЛ'= 0,00031 е = +1,24%

0,388 0,0599 0,0246

0,381 0,0591 0,0245

0,407 0,0611 0,0253

0,401 0,0609 0,0250

0,399 0,0609 0,0249

При этом относительная погрешность определения дипиридамола в модельной смеси не превышает ±1,24 %.

Анализ КАС проводили при длине волны 274 нм. Для расчета величины светопоглощения в этой области предварительно был построен градуировоч-ный график и рассчитано значение удельного показателя.

Установлено, что относительная погрешность анализа КАС в модельной смеси не превышает ±1,09 %. Результаты представлены в таблице 4

Таблица 4 - Результаты анализа КАС в модельной смеси

Л274 АКЛС со Навеска модельной смесн г. Содержание действующего вещества, г Метрологические характеристики

0,514 0,490 0,0610 0,0343 X = 0,0346 5 - 0,000358 - 0,000146 ДА' = 0,000375 Е = ±1,09%

0.503 0,0599 0,0342

0,501 0.0591 0,0345

0,517 0,0611 0,0344

0,521 0,0609 0,0349

0,525 0,0609 0,0351

Разработанная методика анализа дипиридамола и КАС позволяет проводить анализ двух ингредиентов в одной навеске, что доказывает её экономичность и отличается небольшой затратой времени на выполнение анализа.

Количественное определение КАС и дипиридамола в суппозиториях

Для выбора условий спектрофотометрического определения дипиридамола и КАС были изучены УФ-спектры поглощения 0,01% растворов лекарственных веществ в спирте этиловом. Максимумы светопоглощения дипиридамола расположены в области 290 и 409-412 нм. КАС имеет один максимум при длине волны 274 нм. Следовательно, в максимуме светопоглощения дипиридамола в видимой области спектра (409-412 нм) КАС не поглощает свет и не мешает его количественному определению при длине волны 410 нм, т.е. методика анализа дипиридамола является специфичной.

Анализ же КАС можно проводить в максимуме поглощения (274 нм), учитывая при этом величину светопоглощения дипиридамола в этой области спектра.

На основании полученных данных представленных в таблице 5 можно сделать вывод, что относительная погрешность анализа КАС в суппозиториях не превышает ±2,14%.

Таблица 5 - Результаты анализа КАС в суппозиториях

4 .КАС лсо Навеска суп-позиторной массы, г Р Найдено КАС, г Метрологические характеристики

0,522 0,490 3,0018 3,0034 0,0355 X = 0,0347 51 = 0,000707 = 0,000289 АХ = 0,000742 е = ±2,14%

0,502 2,9974 0,0342

0,521 2.9899 0,0357

0,503 2,9902 0,0343

0,499 2.9935 0,0340

0,518 2,9964 0,0353

Полученные результаты свидетельствуют о достаточно высокой точности разработанных методик анализа.

По результатам анализа представленного в таблице 6 следует, что относительная погрешность анализа дипиридамола в суппозиториях не превышает ±2,54%.

Таблица 6 - Результаты анализа дипиридамола в суппозиториях

А 4 Л Асо Навеска сутт-позиторной массы, г Р Найдено дипиридамола, г Метрологические характеристики

0,390 0,395 3,0018 3,0034 0,0247 X = 0,0248 5 = 0,00060 = 0,00045 ДХ = 0,00063 е = ±2,54%

0,381 2,9974 0,0242

0,378 2,9899 0,0241

0,393 2,9902 0,0251

0,398 2,9935 0.0254

0,395 2,9964 0,0251

Фармакологические исследования суппозиториев содержащих КАС

и дипирпдамол

Следующим этапом исследований явилось определение фармакологических свойств суппозиториев с КАС и дипиридамолом. Для его реализации мы исследовали влияние суппозиториев на время и длительность кровотечения, на количество тромбоцитов, а также раздражающее действие, влияние суппозиториев и их влияние на слизистую желудка и кишечника. Изучаемые суппозитории применяли в экспериментальной дозировке с учетом коэффициента межвидового переноса доз - 0,59. Были изготовлены лабораторные образцы суппозиториев с эквивалентным содержанием компонентов в разных дозах.

Первоначально мы изучали раздражающее действие суппозиториев на коньюктиву глаза морских свинок. Результаты эксперимента представлены в таблице 7. В результате проведенного эксперимента, было установлено, что комбинирование в одной лекарственной форме КАС и дипиридамола не усиливает раздражающее действие входящих в суппозитории компонентов на слизистую оболочку глаза млекопитающих, из этого можно сделать вывод об отсутствии выраженного отрицательного эффекта, а именно раздражающего действия по месту применения ректальной лекарственной формы.

Таблица 7 - Оценка раздражающего действия суппозиториев с КАС и дипири-дамолом_

Действие Отек Гиперемия

30 секунд 2 минуты 30 секунд 2 минуты

КАС+ дипиридамол 0 1 0 1

КАС 1 1 1 1

дилиридамол 0 1 0 1

placebo 0 1 0 0,67

Примечание: раздражающее действие 0-2 балла - слабое;

Наличие же в суппозиторной основе дипиридамола смягчает раздражающее действие кислоты ацетилсалициловой, что следует из полученных результатов.

Далее мы изучали гематологические показатели. В таблице 8 представлено определение времени кровотечения. Увеличение времени свертывания крови в группе животных, получивших суппозитории с КАС и дипиридамолом, объясняется влиянием КАС на свертывающую функцию крови и влиянием дипиридамола на спазм сосудов. Препаратом сравнения был Агренокс с содержанием КАС 25мг и дипиридамола 20мг.

Таблица 8 - Определение времени (длительности) кровотечения

Показатели Группы животных, п=6 Начало свертывания Конец свертывания

М±т Р % М±т Р %

placebo, (контроль) 3,7+0.2 100.0 13,0+1,3 100,0

КАС+ дипиридамол 10,3±0,7 <0,001 343,3* 35,0±3,1 <0,001 269,23*

КАС 10,2±1,1 <0,01 340* 40,7±4,1 <0.001 313,08*

дипиридамол 5,2x3,1 <0.001 ! 170* 20,9±1,6 <0,001 160,77*

Примечание: п - количество животных; Р - достоверность различий к контролю; * — значимость различий по сравнению с контролем

По результатам эксперимента можно сделать вывод, что суппозитории комбинированного состава обеспечивают выраженный противотромбозный эффект, что предполагает благоприятное действие в отношении профилактики ишемических инсультов или транзиторных ишемических атак.

В качестве дополнительного фармакологического теста мы проверили влияние суппозиториев на слизистую оболочку желудка и кишечника. Оказалось, что при этом слизистая желудка и кишечника не имеет никаких эрозивных поражений, что еще раз подтверждает правильность выбора данной лекарственной формы.

Затем проверяли качество изготовленных суппозиториев в процессе хранения с помощью химических и физико-химических методов исследования. Критериями качества служили следующие показатели: внешний вид, время полной деформации, средняя масса суппозиториев, подлинность, посторонние примеси, количественное содержание действующих веществ.

Результаты визуального контроля показали, что внешний вид суппозиториев не менялся в течение всего срока наблюдения, а суппозиторная масса оставалась однородной.

Для разработки норм качества был проведен анализ различных серий суппозиториев. Результаты анализа свидетельствуют, что приготовленные суппозитории по всем показателям качества соответствуют требованиям, предъявляемым к данной лекарственной форме. Изучена стабильность суппозиториев в процессе хранения в условиях холодильника при температуре(4±1)°С. Установлено, что срок хранения суппозиториев составляет 2 года в соответствии с требованиями ГФХ1 (таблица 9).

Таблица 9 - Нормы качества суппозиториев с КАС и дипиридамолом

Показатели ¡Методы Нормы качества

Основа - сплав ПЭГ Основа - «Зирроске С82Х»

Описание Визуальный Суппозитории белого с желтоватым оттенком цвета, торпедообразной формы Суппозитории белого с желтоватым оттенком цвета, торпедообразной формы.

Подлинность тех Величина М основного пятна на хроматограмме испытуемого раствора должна соответствовать величине КГ основного пятна на хроматограмме контрольного раствора. На хроматограмме должны наблюдаться два пятна Величина ЯГ основного пятна на хроматограмме испытуемого раствора должна соответствовать величине ИХ основного пятна на хроматограмме контрольного раствора. На хроматограмме должны наблюдаться два пятна

Средняя масса суппозитория и однородность по массе ГФ XI 2,0 (±5%) 2,0 (±5%)

Температура плавления ГФ XI - 35,6°С

Время растворения ГФ XI Не более 60 мин. -

Посторонние примеси к дипнридамолу ФСП №42-0315998004 ± 0,5% ± 0,5%

Посторонние примеси к КАС тех Содержание салициловой кислоты не более 3,0% от содержания ацетилсалициловой кислоты Содержание салициловой кислоты не более 3,0% от содержания ацетилсалициловой кисло™

Микробиологическая чистота ГФ XII Категория ЗА Категория ЗА

Полная деформация суппозиториев ОФС 42-0131-09 6-7 мин. 7-8 мин.

Распадаемость ОФС 42-0133-09 14'35"-15'10" -

Количественное определение: дипиридамол, г; кислота ацетилсалициловая, г спектрофотометрия 0,024910,0002 0,03 5 6±0,0001 0,0249+0,0002 0,0356±0,0001

Упаковка По 5 суппозиториев в контурную ячейковую упаковку из пленки поливиншшюридной марки ЭП-73С.

Маркировка В соответствии с НД

Хранение В прохладном защищенном от света месте

Срок годности 2 года

Таким образом, оценку качества изготовленных суппозиториев осуществляли: по внешнему виду, средней массе суппозитория и отклонения от нее, времени растворения, температуре плавления, подлинности, отсутствии посторонних примесей, микробиологической чистоте, содержанию действующих компонентов.

Исследования по совершенствованию композитных суппозиториев с КАС и дипиридамолом

С целью совершенствования предложенных нами суппозиториев были разработаны двухслойные суппозитории, содержащие в наружном слое 35мг КАС, а во внутреннем - 25мг дипиридамола, что должно обеспечить последовательное фармакологическое действие этих веществ. Это предполагает возможность уменьшить суточную дозу, снизить побочные эффекты и в перспективе сократить кратность приема. В качестве основы для внутреннего слоя суппозиториев использовали основу эирроси сэ2х, для наружного - полиэти-ленгликолевую основу. КАС и дипиридамол вводили в основу по типу суспензии. Для расчета необходимого количества суппозиторной основы определяли среднюю массу оболочек и стержней.

Оказалось, что предложенные двухслойные суппозитории имеют правильную форму, однородную массу и достаточную твердость, обеспечивающую удобство применения. Однородность массы определяли визуально на срезе по отсутствию вкраплений, блесток, кусочков основы. Отклонения в массе суппозиториев составило ±5%. Среднюю массу определяли взвешиванием 20 суппозиториев. Биофармацевтическую оценку проводили методом диализа через полупроницаемую мембрану. Анализ полученных фракций выполняли спектрофотометрически. Отбор проб проводили через каждые 15мин. Результаты представлены на рисунке 10.

На диаграмме видно, что за 120 минут эксперимента последовательно высвободилось более 75% КАС и 65% дипиридамола, что повышает их антиа-грегационное и ангиопротективное действие.

Таким образом, результаты биофармацевтических исследований двух-

слойных суппозиториев, позволили установить возможность использования основ сплава ПЭГ и Бирроск сэ2х для их изготовления. Сконструированные двухслойные суппозитории предполагают пролонгированный эффект.

111

[^кислота ацетилсалициловая ЕЗ дипиридамол

■ III

15МИН ЗОмин 45МИН 60МИН 90мин 120МИН

Рисунок 10 - Высвобождение КАС и дипиридамола из двухслойных

суппозиториев Основные результаты и выводы

1. Разработан состав и технология ректальных суппозиториев содержащих композицию КАС в дозировке 35мг, и дипиридамол в дозировке 25мг на один суппозиторий.

2. Проведены биофармацевтические исследования in vitro для данных суппозиториев и установлено, что оптимальными суппозиторными основами являются: гидрофильная сплав ПЭГ 1500: ПЭГ 400 в соотношении 8:2 и гидрофобная - suppocire cs2x.

3. Разработана технология производства суппозиториев с КАС и дипиридамо-лом, основными стадиями которой являются приготовление основы и суппо-зиторной массы, дозирование суппозиторной массы и формование суппозиториев.

4. Предложена и валидирована методика определения КАС и дипиридамола в предлагаемой лекарственной форме, позволяющая с достаточной точностью и воспроизводимостью устанавливать содержание действующих веществ методом спектрофотометрии. Относительная погрешность определения КАС и дипиридамола не превышает ± 1%.

5. Изучена безопасность применения разработанных суппозиториев. Установлено, что суппозитории комбинированного состава КАС (35 мг) и дипирида-молом (25мг) безопасны для применения млекопитающим, не обладают выраженным гастротоксическим действием. Показан выраженный антиагре-гантный эффект суппозиториев по времени кровотечения и количеству тромбоцитов.

6. Определены нормы качества разработанных композитных суппозиториев: внешний вид, время растворения, температура плавления, средняя масса суппозитория, подлинность, посторонние примеси, количественное содержание действующего вещества. Приготовленные суппозитории соответствуют требованиям, предъявляемым к данной лекарственной форме. Определены сроки хранения разработанных суппозиториев при температуре не выше (4±1)°С: не менее 2 лет.

7. Разработаны двухслойные суппозитории с кислотой ацетилсалициловой и дипиридамолом. Проведены их биофармацевтические исследования in vitro. Установлены основные технологические показатели качества: однородность, твердость, отклонение в массе.

8. На предложенные суппозитории составлен проект ФСП «КАС и дипирида-мол суппозитории ректальные по 35мг и 25мг» и разработан лабораторный регламент производства.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ДИССЕРТАЦИИ

1. Степанова Э.Ф. Исследования по выбору основы для ректальной лекарственной формы, содержащей ацетилсалициловую кислоту и дипиридамол / Э.Ф. Степанова, Т.Н. Глижова // Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании: материалы Междунар. науч.-практ. конф. Бел ГУ. - 2008 - С.208-209.

2. Глижова Т.Н Фармакологическое обоснование применения суппозиториев аспирина с дипиридамолом как средства реабилитации при цереброваску-лярной патологии / Т.Н. Глижова, Е.Е. Зацепина, A.B. Сергиенко, Э.Ф. Степанова //. VII съезд аллергологов и иммунологов СНГ Аллергология и им-

мунология: тез.докл. Санкт-Петербург 26-28 апреля 2009. - Т. 10, №1. - С. 108.

3. Глнжова Т.Н Исследование фармакологической активности суппозиториев с ацетилсалициловой кислотой и дипиридамолом / Т.Н. Глижова, Е.Е. Зацепина, A.B. Сергиенко, Э.Ф. Степанова // XIV международный конгресс по реабилитации в медицине и иммунореабилитации. Аллергология и иммунология: тез. докл. Дубай, ОАЭ,- 6-9 февраля 2009. - Т.10, №2. - С 301.

4. Степанова Э.Ф. Зависимость терапевтической эффективности суппозиториев с аспирином кардио и курантилом от выбора основ / Э.Ф. Степанова, Т.Н. Глижова // Фундаментальные исследования. - 2009. - № 4. - С. 89-93.

5. Глижова Т.Н. Разработка технологии и биофармацевтическое исследование суппозиториев, содержащих ацетилсалициловую кислоту и дипиридамол / Т.Н. Глижова, Э.Ф. Степанова // Науч. Ведомости Бел ГУ. сер: Медицина, фармация. - 2010. - Вып.12/2, № 22(93). - С. 65-67.

6. Глижова Т.Н Оптимизация технологии и биофармацевтическое изучение суппозиториев содержащих АСК и дипиридамол / Т.Н. Глижова, Э.Ф. Степанова // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 11. - С.141-144.

7. Глижова Т.Н Разработка технологии и стандартизация суппозиториев с дипиридамолом и кислотой ацетилсалициловой // Т.Н. Глижова, Э.Ф. Степанова, И.Я. Куль, А.Ю. Саенко // Фундаментальные исследования -2012,-№2(2)-С.412-414.

8. Исследования по созданию ректальной лекарственной формы антиагрегант-ного действия комбинированного состава / Т.Н. Глижова // Экология и здоровье: сб. науч. тр. - Ессентуки, 2008. - С.178-186.

9. Степанова Э.Ф. Зависимость терапевтической эффективности суппозиториев с аспирином кардио и курантилом / Э.Ф. Степанова, Т.Н. Глижова // Современные наукоемкие технологии. - М., 2008. - № 9. - С. 28-32.

Ю.Степанова Э.Ф. Использование метода хроматографии в тонком слое сорбента для идентификации ингредиентов суппозиториев, содержащих кисло-

ту ацетилсалициловую и дипиридамол / Э.Ф. Степанова, И. Я.Куль, Т.Н. Глижова, А.Ю. Саенко // Научное обозрение. - 2009. - №1. - С. 13-15.

11.Обоснование применения суппозиториев, содержащих кислоту ацетилсалициловую и дипиридамол / Т.Н. Глижова // Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства: материалы междунар. науч.-практ. конф. - 2009. —Т.2 - С.18-21.

12.Фармакотехнологические исследования по созданию комбинированных суппозиториев антиагрегантного действия / Т.Н. Глижова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. -Пятигорск, 2011. Вып. 66. - С.246-247.

13.Разработка состава и фармакотехнологические исследования суппозиториев антиагрегантного действия / Т.Н. Глижова // Молодая фармация - потенциал будущего: материалы П-ой Всероссийская науч. конф. - Санкт-Петербург, 2012. 4.1 - С.29-30.

Глижова Тамара Николаевна

Разработка состава, технологические исследования и определение норм качества для композитных суппозиториев с кислотой ацетилсалициловой и дипиридамолом

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 24.08.2012 г. Формат бумаги 60x84 1/16. Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 4567. Отпечатано в типографии издательства ООО «РИА-КМВ». 357500, г. Пятигорск, ул. Февральская, 54 тел. (8793) 33-36-56, факс (8793) 39-09-03.

Актуальность темы

Кислота ацетилсалициловая (КАС) является на протяжении многих лет общеизвестным антиа1регантом. Механизм её действия в этом направлении достаточно изучен, её антиагрегантный эффект не является дозозависимым и наблюдается в диапазоне 30-1500 мг. После приёма внутрь КАС метаболизируется с образованием основного активного метаболита - салициловой кислоты. Абсорбция КАС и кислоты салициловой из ЖКТ, происходит быстро и полностью после приёма внутрь и зависит от лекарственной формы. Благодаря кислотоустойчивой кишечнораствори-мой оболочке КАС активная субстанция высвобождается не в желудке, а в щелочной среде тонкого кишечника. Поэтому всасывание КАС в кишечнорастворимой оболочке происходит на 3-6 часов позже по сравнению с приёмом обычной формы КАС. Степень связывания с белками плазмы крови зависит от концентрации и составляет в среднем для КАС 49-70 %, для кислоты салициловой - 66-98%. КАС на 50% метаболизируется при первом прохождении через печень. Снижает летальность и риск развития инфаркта миокарда при нестабильной стенокардии. Эффективна при первичной профилактике заболеваний сердечнососудистой системы, особенно инфаркта миокарда у мужчин старше 40 лет, и при вторичной профилактике инфаркта миокарда. Начиная с 80-х годов XX века, КАС активно вошла в клиническую практику при лечении острого коронарного синдрома (ОКС) с целью предупреждения развития инфаркта миокарда (ИМ), как антиагрегант с полностью доказанным действием в профилактике смертности при сердечнососудистых и церебро-васкулярных заболеваниях. В 1989 году? в исследовании Physicians' Health Study (США), в которое было включено 22000 врачей-мужчин в возрасте 40-84 года, в группе здоровых лиц, принимавших КАС (325 мг/сут.), в среднем через 5 лет отмечено уменьшение риска развития ИМ на 44% по сравнению с аналогичной группой обследуемых без приема КАС. В 2002 году в журнале «Antithrombotic Trialists' Collaboration» были опубликованы результаты метанализа 287 рандомизированных клинических исследований у 135000 пациентов, в которых было показано, что при назначении К АС как антиагреганта отмечено снижение на 25% риска развития сердечнососудистых осложнений: нефатальный инфаркт миокарда, нефатальный мозговой инсульт. [145, 147, 139].

В суточной дозе до 100мг подавляется синтез протромбина в печени и увеличивает протромбиновое время. Повышает фибринолитическую активность плазмы и снижает концентрацию витамин К-зависимых факторов свёртывания. Таким образом, эффективность и диапазон действия КАС в этом качестве очевиден [4,52].

Однако длительное применение этого лекарственного средства вызывает ряд серьёзных побочных явлений - в частности и, прежде всего, ульцерогенный эффект.

Поэтому, при проведении терапии КАС, следует исключить группу пациентов с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки, а также уделять пристальное внимание больным с жалобами на болезненность в области желудка, а также с нарушением функции печени или почек. Во время продолжительного приёма препарата необходим регулярный гематологический контроль [60, 81,84].

Такие ощутимые ограничения для лекарственного средства столь значимой направленности, и такого распространённого и востребованного, конечно, не могли не вызвать необходимости в поисках возможности по совершенствованию данного препарата. Эти поиски касались комбинации КАС с другими лекарственными средствами иной направленности действия, которые будут способствовать уменьшению нежелательных побочных реакций и потенцировать действие друг друга. [38, 20].

В этом отношении интересен дипиридамол или курантил (производное пиридина), который улучшает микроциркуляцию за счёт угнетения адгезии и агрегации тромбоцитов, улучшает коронарный и мозговой кровоток, понижает АД, является индуктором интерферона, способствует развитию неспецифической противовирусной резистентности к вирусным инфекциям.

Так что это весьма разносторонний и эффективный лекарственный препарат [84,50,41].

В настоящее время оба этих лекарственных препарата существуют в достаточно оправдавших себя лекарственных формах - таблетках, покрытых оболочкой, в т.ч. аспирин-кардио - энтеросолюбильная форма оболочки, курантил в виде драже и таблеток, покрытых оболочкой. Настоящие лекарственные формы достаточно стабильны, имеют отработанную технологию. Предложенное сочетание, исследованное на уровне комбинации субстанций фармакологами, оказалось эффективным и перспективным при длительном использовании композиции для профилактической терапии тромбозов, эмболий, наблюдаемых при ишемической болезни сердца (ИБС) и инсультах. Поэтому сочетанное использование этих компонентов представляется нам целесообразным.

Сохраняющиеся при этом побочные эффекты, связанные с ухудшением состояния желудочно-кишечного тракта, могу быть снижены за счёт выбора оптимальной лекарственной формы.

Одной из распространённых лекарственных форм сегодняшнего дня являются ректальные суппозитории [44, 67, 68].

Для рассматриваемой нами композиции - это возможность всасывания в толстом кишечнике минуя печень, возможность снижения одноразовой дозы, так как суппозитории - лекарственная форма дозированная. Отсутствие воздействия ферментов и благоприятное состояние желудочно-кишечного тракта, а так же назначение в виде суппозиториев различных лекарственных средств, в том числе сильнодействующих. В настоящее время ассортимент суппозиториев достаточно широк: они используются для лечения урогенитальных инфекций, при грибковых заболеваниях, поскольку и в том и в другом случаях, обеспечиваются минимальные побочные эффекты, как используемых для этих целей антибиотиков и пробиотиков, так и антимикотических средств [70, 71, 96].

В отношении КАС попытки введения её в суппозитории уже были известны, в т.ч. они касались суппозиториев аптечного изготовления, т.е. вопрос этот ставился, но не решался.

В качестве основ для суппозиториев используют масло какао, гидрогенизиро-ванные жиры и их сплавы, сплавы полиэтиленгликолей с различными молекулярными массами и другие основы, разрешённые к медицинскому применению.

Таким образом, исследования в отношении суппозиториев и предполагаемых моделей действующих компонентов КАС и дипиридамола проводятся, находятся в динамике, и в то же время такой ректальной лекарственной формы, которая содержала бы данную композицию, пока нет.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы является: разработка состава, технологии, фармако-технологические исследования и определение норм качества для суппозиториев содержащих КАС и дипиридамол.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

• Разработать состав ректальных суппозиториев, содержащих КАС и дипиридамол;

• провести биофармацевтические исследования in vitro по выбору оптимальной суппозиторной основы;

• предложить технологию производства суппозиториев с КАС и дипиридамо-лом;

• предложить методику качественного и количественного определения КАС и дипиридамола в суппозиториях при их совместном присутствии; провести фармакологические исследования разработанного лекарственного препарата, оценив его специфическое действие и безопасность;

• провести стандартизацию и определить сроки хранения разработанных суппозиториев;

• предложить состав многослойных суппозиториев с КАС и дипиридамолом, провести биофармацевтические и технологические исследования;

• составить проект ФСП и лабораторный регламент на суппозитории ректальные с КАС и дипиридамолом.

Научная новизна исследований

Научная новизна исследований заключается, прежде всего, в создании ректальной лекарственной формы для оригинального комплексного состава действующих веществ - КАС и дипиридамола.

Впервые проведен выбор оптимальной композиции вспомогательных веществ для суппозиториев с КАС и дипиридамолом, а также разработана и валидирована методика количественного определения действующих компонентов в суппозиториях спектрофотометрически.

Выполнены сравнительные фармакологические исследования предложенных суппозиториев.

Для дальнейшего совершенствования разработанной лекарственной формы предложена ее инновационная модификация - двухслойные суппозитории, которые способны обеспечить регулируемое высвобождение действующих компонентов.

Научно обоснована и экспериментально разработана технология ректальных суппозиториев, содержащих композицию - КАС и дипиридамола.

Разработан состав суппозиториев и определены основные их качества; для подтверждения новизны разработанного состава был оформлен соответствующий патент.

Практическая значимость результатов исследования

Проведены фармакотехнологические исследования по созданию ректальной лекарственной формы с КАС и дипиридамолом, что предполагает расширение ассортимента отечественных лекарственных форм антиагрегантного действия. Установлены необходимые технологические характеристики для производства суппозиториев методом выливания

Определены сроки годности суппозиториев при хранении.

Внедрение результатов исследования в практику

Разработан проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на лекарственный препарат, «Кислота ацетилсалициловая и дипиридамол суппозитории ректальные 35мг и 25мг». Составлен лабораторный регламент на данный лекарственный препарат и получен соответствующий акт внедрения от 17 ноября 2011 г. Проведена опытная наработка суппозиториев по данрому регламенту, производство суппозиториев включено в перспективный план работы Тюменского химико-фармацевтического завода.

Основные положения, выносимые на защиту:

- обоснование состава и технологии суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- технология композитных ректальных суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- результаты биофармацевтического исследования композитных суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- результаты фармакологических исследований суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- обоснование состава и биофармацевтические исследования двухслойных суппозиториев с КАС и дипиридамолом;

- результаты оценки качества и стабильности разработанных суппозиториев

Апробация и публикация результатов исследования

Основные результаты диссертационной работы доложены на:

- Международной научно - практической конференции «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (Белгород, 20-21 ноября 2008г.).

- VII Конференции ревматологов Южного Федерального Округа (Ессентуки, 2009г.).

- Международной научно - практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства» (Южно - Казахстанская государственная медицинская академия 2009г.)

- 64 - 67-ой региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, январь 2009 - 2012гг.).

- П-ой Всероссийской научной конференции «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург 2012г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 4 работы в изданиях, рекомендованных ВАК.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО Пятигорской ГФА Минздравсоцразвития России

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 132 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы, 11 рисунков, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), 1 главы, посвященной материалам и методам исследований, 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы и приложений. Список литературы включает 147 источников, в том числе 23 иностранных.

Основные результаты и выводы

1. Разработан состав и технология ректальных суппозиториев содержащих композицию КАС в дозировке 35мг, и дипиридамол в дозировке 25мг на один суппозиторий.

2. Проведены биофармацевтические исследования in vitro для данных суппозиториев и установлено, что оптимальными суппозиторными основами являются: гидрофильная - сплав ПЭГ 1500: ПЭГ 400 в соотношении 8:2 и гидрофобная - sup-pocire cs2x.

3. Разработана технология производства суппозиториев с КАС и дипиридамолом, основными стадиями которой являются приготовление основы и суппозиторной массы, дозирование суппозиторной массы и формование суппозиториев.

4. Предложена и валидирована методика определения КАС и дипиридамола в предлагаемой лекарственной форме, позволяющая с достаточной точностью и воспроизводимостью устанавливать содёржание действующих веществ методом спектрофотометрии. Относительная погрешность определения КАС и дипиридамола не превышает ± 1 %.

5. Изучена безопасность применения разработанных суппозиториев. Установлено, что суппозитории комбинированного состава КАС (35мг) и дипиридамолом (25мг) безопасны для применения млекопитающим, не обладают выраженным гастротоксическим действием. Показан выраженный антиагрегантный эффект суппозиториев по времени кровотечения и количеству тромбоцитов.

6. Определены нормы качества разработанных композитных суппозиториев: внешний вид, время растворения, температура плавления, средняя масса суппозитория, подлинность, посторонние примеси, количественное содержание действующего вещества. Приготовленные суппозитории соответствуют требованиям, предъявляемым к данной лекарственной форме. Определены сроки хранения разработанных суппозиториев при температуре не выше (4±1)°С: не менее 2 лет.

7. Разработаны двухслойные суппозитории с кислотой ацетилсалициловой и дипиридамолом. Проведены их биофармацевтические исследования in vitro. Установлены основные технологические показатели качества: однородность, твердость, отклонение в массе.

8. На предложенные суппозитории составлен проект ФСП «КАС и дипиридамол суппозитории ректальные по 35мг и 25мг» и разработан лабораторный регламент производства.