Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Основы разработки и технологии получения суппозиториев с использованием отечественных субстанций

На правах рукописи

Абрамович Римма Александровна

ОСНОВЫ РАЗРАБОТКИ И ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ СУППОЗИТОРИЕВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ

СУБСТАНЦИЙ

14.04.01 - Технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

4 АПР 2013

Москва, 2013

005051189

Диссертационная работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российском университете дружбы народов» Министерства

образования и науки Российской федерации. Научный консультант:

Быков Валерий Алексеевич - академик Российской академии сельскохозяйственных наук, академик Российской академии медицинских наук, доктор технических наук, профессор

Официальные оппоненты:

Саканян Елена Ивановна - доктор фармацевтических наук, профессор — директор центра фармакопеи и международного сотрудничества ФГБУ НЦСМ МЗ РФ

Сливкин Алексей Иванович - доктор фармацевтических наук, профессор — заведующий кафедрой фармацевтической химии и фармацевтической технологии Воронежского государственного университета Демина Наталия Борисовна - доктор фармацевтических наук, профессор -профессор кафедры фармацевтической технологи ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М.Сеченова», г. Москва

Ведущая организация:

Пятигорский филиал государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения России (Пятигорский филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России)

Защита состоится в Государственном научном учреждении Всероссийском институте лекарственных и ароматических растений Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии) « г. в 14 часов на заседании диссертационного совета

Д 006.070.01 (117216, г. Москва, ул. Грина, 7) по адресу: 123056, г. Москва, ул. Красина, д. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина, 7.

Автореферат разослан « /з » ¿Л-Л^&^р'/ <3/ 2013 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 006.070.01

доктор фармацевтических наук А.И. Громакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Задачей отечественной фармацевтической науки и промышленности, сформулированной руководителем Российской Федерации, является увеличение доли российских препаратов в развивающемся рынке до 50 % для обеспечения населения доступными и эффективными лекарственными средствами и снижения бюджетных затрат при государственных закупках. Исследования по этому направлению, проводимые в России, необходимо осуществлять на самом современном оборудовании, используя как наиболее активные фармацевтические субстанции, так и вспомогательные вещества, способные обеспечить эффективность действия и максимальную безопасность с позиций побочных эффектов лекарственных препаратов. Появление и широкое распространение новых инфекционных заболеваний, а также развитие тяжелых осложнений у иммунодефицитных больных с различной патологией диктуют настоятельную необходимость создания новых эффективных лекарственных средств, обладающих противовирусным действием и иммунорегулирующим эффектом. Не менее актуальным остается разработка препаратов для лечения воспалительных заболеваний опорно-двигательного аппарата и болевого синдрома различной этиологии.

Определенный интерес для лечения такого рода заболеваний представляют отечественные биотехнологические субстанции иммунокорректоров такие как, интерферон альфа-2Ь, имунофан, полиоксидоний, противовирусный препарат арбидол, алоэ и нестероидный противовоспалительный препарат ибупрофен.

По рекомендации врачей-клиницистов, наряду с инъекционными формами, для этих препаратов необходим выпуск рациональной лекарственной формы в виде суппозиториев, в которых выгодно сочетаются достоинства пероральных и инъекционных средств с отсутствием проблемы боли и вкуса, снижением уровня аллергических и токсических реакций, повышением биодоступности и эффективности.

Среди вспомогательных веществ для лекарственных препаратов обозначилась тенденция использования веществ природного происхождения. Этерефицированный твердый жир на основе пальмоядрового масла является натуральным вспомогательным веществом, широко используемым в качестве основы для суппозиториев в фармацевтическом производстве.

Поэтому создание суппозиториев с иммуномодуляторами и НПВС отечественного производства на основе твердого жира является актуальной задачей.

Цель н задачи исследования. Целью настоящей работы явилось обоснование составов и технологии получения суппозиториев с

использованием отечественных биотехнологических, синтетических и растительных субстанций на основе этерефицированного жира.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие

задачи:

1) разработать нормативную документацию для твердого жира, обосновать использование пальмоядрового масла в качестве основы для его производства;

2) разработать методику спектрометрии ЯМР 'Н для определения состава и свойств твердого жира с целью ее использования при экспресс -анализе липофильных основ для суппозиториев;

3) установить зависимость между физико-химическими свойствами основы и стабильностью субстанций в суппозиториях;

4) изучить влияние фармацевтических факторов, таких как растворимость, дисперсность, полиморфизм и строение кристаллической решетки субстанций, на физико-химические и медико-биологические свойства суппозиториев;

5) исследовать зависимость влияния поверхностно-активных веществ, наполнителей, активаторов всасывания, антиоксидантов на стабильность суппозиториев и высвобождение лекарственных веществ;

6) обосновать составы суппозиториев с иммуномодуляторами и ибупрофеном, а также состав полифункционального комбинированного препарата, обладающего синергидным эффектом с повышенной специфической активностью;

7) разработать технологию получения суппозиториев и методы оценки их качества с применением новейших прецизионных методов анализа, установить алгоритм формования суппозиториев на твердом жире;

8) разработать методику спектрометрии ЯМР 'Н для идентификации имунофана и определения его количественного содержания в суппозиториях;

9) разработать необходимую нормативную документацию для предложенных препаратов и провести работу по их внедрению;

10) выявить факторы, влияющие на стабильность суппозиториев в различных видах упаковки, обосновать необходимость создания и разработать нормативную документацию на контурную ячейковую упаковку для суппозиториев и установку для ее получения с целью их использования в научно-исследовательских лабораториях и на фармацевтических предприятиях, выпускающих суппозитории в небольших объемах.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена на базе Центра коллективного пользования Российского университета дружбы народов при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ в рамках госконтракта №16.552.7002, соответствует постановлению правительства РФ «Развитие науки и технологии».

Научная новнзна и теоретическая значимость работы. Обоснована необходимость разработки технологии получения суппозиториев на основе твердого жира с отечественными субстанциями (интерферон альфа -2Ь, имунофан, полиоксидоний, арбидол, ибупрофен и экстракт алоэ сухой)

Показана целесообразность использования твердого жира, получаемого переэтерификацией пальмоядрового масла, в качестве экономичной и технологичной основы. С использованием прецизионных методов исследования установлен качественный и количественный состав твердого жира и предложены гармонизированные с требованиями зарубежных фармакопей методики оценки его качества (Проект ОФС ГФ XII, ТУ 9369-001-28910991-10).

В результате практически выявленной зависимости между физико-химическими свойствами фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ, показана возможность создания стабильных в процессе хранения суппозиториев, способных максимально высвобождать лекарственное вещество и обеспечивать достижение терапевтических концентраций в крови.

Впервые исследованы взаимодействия между вспомогательными веществами и активными субстанциями в процессе хранения разработанных суппозиториев с использованием методов спектроскопии ЯМР и масс-спектрометрии DART, подтверждено отсутствие влияния вспомогательных веществ и используемого упаковочного материала на стабильность лекарственного вещества в процессе хранения.

Изучено влияние кристалличности субстанций на качество суппозиториев с ибупрофеном и имунофаном (твердость, ломкость, стабильность при хранении) с использованием методов рентгеновской дифракции и дифференциальной сканирующей калориметрии. Установлена целесообразность и значимость соблюдения температурного режима и продолжительности технологического процесса нагревания и охлаждения при формовании суппозиториев, в результате чего рекомендован алгоритм формования суппозиториев.

Всесторонне изучено влияние физико-химических свойств современных упаковочных материалов на стабильность суппозиториев в процессе хранения, что позволило разработать для них первичную упаковку и внедрить ее в производство.

Создан новый стабильный комбинированный препарат «Алоэферон» обладающий противовоспалительным, иммуномодулирующим и противовирусным действием. Показано увеличение его специфической активности по сравнению с монопрепаратами.

Подана заявка на выдачу патента на изобретение «Полифункциональное комбинированное лекарственное средство для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний» (заявка №2012127244/15(042401).

Практическая значимость работы и внедрение результатов исследования. На основании проведенных исследований внедрены:

- нормативная документация (ТУ 9369-001-28910991-10) на вспомогательное вещество для производства суппозиториев «Твердый жир» (Hard fat) Loders Croklaan B.V.;

- ТУ 9467-001-52385883-00 на контурную ячейковую упаковку суппозиториев для фармацевтических предприятий страны;

состав и технология производства и стандартизация противовирусного лекарственного средства в форме суппозиториев на основе отечественной субстанции арбидола для детей (Проект ФСП);

состав, технология производства и стандартизация иммуномодулирующего лекарственного средства на основе отечественной субстанции «Полиоксидоний суппозитории ректальные» (ФСП 42-8853-07). Разработан и внедрен на ООО "НПО Петровакс Фарм" промышленный регламент на производство суппозиториев с полиоксидонием;

состав и технология производства и стандартизация иммуномодулирующего лекарственного средства на основе отечественной субстанции «Имунофан суппозитории ректальные 0,1 мг» (ФСП 42-00274879-03). Разработан и внедрен на ООО научно-производственном предприятии "БИОНОКС" промышленный регламент на производство суппозиториев с имунофаном;

- методика ВЭЖХ для определения алоэ-эмодина в субстанции и суппозиториях;

- методика масс-спектрометрии DART для идентификации глицина в суппозиториях с имунофаном;

- методика спектрометрии ЯМР 'Н для идентификации имунофана и определения его количественного содержания в суппозиториях;

- состав и технология изготовления суппозиториев на основе микронизированной субстанции ибупрофена. Разработаны условия микронизации ибупрофена на распылительной сушилке;

состав и технология изготовления полифункционального комбинированного лекарственного средства «Алоэферон» для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний в форме суппозиториев (Проект ФСП);

Положения, выносимые на защиту:

- результаты теоретических и экспериментальных исследований по выбору наиболее перспективных отечественных субстанций, обладающих низкой токсичностью и высокой специфической активностью, эффективных для лечения иммунодефицитных состояний и заболеваний опорно-двигательного аппарата;

- результаты исследований по выбору растительного сырья для получения твердого жира методом переэтерефикации и нормативной документации на него, а также методов оценки его качества с использованием прецизионных методов анализа;

- методические подходы по разработке технологии суппозиториев с лабильными биотехнологическими субстанциями в форме суппозиториев, алгоритм формовки суппозиториев;

- результаты экспериментальных исследований по подбору вспомогательных веществ, входящих в состав суппозиториев, разработке технологического процесса и методов идентификации и количественного определения действующих и вспомогательных веществ;

- исследования фармакокинетики, токсичности и специфической активности суппозиториев с иммуномодуляторами и ибупрофеном;

- итоги внедрения результатов исследований по разработке составов и технологии получения суппозиториев в фармацевтическую практику.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на международном конгрессе «Традиционная медицина, симпозиум фитотерапия» (г. Москва 1994), Российском национальном конгрессе «Формирование приоритетов лекарственной политики» (г. Москва 1995), на конференции молодых ученых ВНИИФ «Современные проблемы фармации» (г. Москва 1997), на 4-й конференции молодых ученых, посвященной памяти М.Т. Алюшина НИИФ «Современные проблемы фармации» (г. Москва 2000), на I международном форуме «Здравоохранение, фармация и мединдустрия» (г. Москва 2002), на международной конференции «Новые лекарства» (г. Дагомыс 2003), на У1-ой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (г. Москва 2004), на специализированном форуме Фармтехпром «Современной России -современные лекарства» (г. Москва 2006), на специализированной выставке «Аптека-2008» на секции «Современные технологии лекарственных средств» (г. Москва 2008), на международном семинаре «Производство и валидация мягких лекарственных форм» (г. Москва 2012).

Личное участие автора. Основная часть исследования (90%) выполнена лично автором диссертационной работы. Во всех работах, выполненных с соавторами, автору принадлежит постановка задачи, концепция методов исследования, анализ полученных результатов, непосредственное участие автора в проведенных исследованиях.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 61 печатная работа в виде научных статей и тезисов, из них 21 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.01 - технология получения лекарств. Результаты проведенного

7

исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 1, 2, 3, 4 и 7 паспорта специальности - технология получения лекарств.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальных исследований, списка использованной литературы, приложений.

Во введении сформулирована актуальность темы, цель и задачи исследования, научная новизна работы, отражены выдвигаемые на защиту положения.

Первая глава содержит аналитический обзор литературы о наиболее часто используемых суппозиторных основах, способах получения твердого жира. Представлен также анализ и показана целесообразность использования отечественных биотехнологических, синтетических и растительных субстанций с иммуномодулирующим, противовоспалительным, обезболивающим, противовирусным действием. Изучены современные упаковочные материалы для суппозиториев.

В главе 2 экспериментальной части изложена характеристика материалов и методов исследования. Приведены физико-химические и биофармацевтические методы оценки иммуномодуляторов, вспомогательных веществ, а также методики качественного и количественного определения фармацевтических субстанций и методики идентификации и определения химических показателей твердого жира с помощью спектроскопии ЯМР.

В главе 3 представлены исследования влияния фармацевтических факторов на качество разработанных суппозиториев. Проведено исследование по выбору оптимальной основы. Изучено влияние ПАВ, наполнителей, степени дисперсности фармацевтических субстанций на физико-химические показатели суппозиториев и их биодоступность. Приведены результаты исследований по разработке состава суппозиториев с полиоксидонием, ибупрофеном и арбидолом. Исследован полиморфизм субстанций, твердого жира и суппозиториев на его основе. Предложены алгоритм и режимы формования суппозиториев.

Глава 4 посвящена экспериментально - теоретическому обоснованию состава и технологии лекарственной формы «Имунофан, суппозитории ректальные 0,1 мг». Приведены результаты исследований по выбору вспомогательных веществ и способов введения фармацевтических субстанций. Изучена сравнительная фармакокинетика суппозиториев и инъекционной формы имунофана. Представлены результаты по разработке количественного содержания имунофана методом ЯМР-спектрометрии.

В главе 5 изложены сведения по разработке многокомпонентных суппозиториев «Алоэферон» иммуномодулирующего действия с интерфероном альфа - 2Ь и алоэ экстрактом и оценке их токсичности. Исследован синергизм действия фармацевтической субстанции. Представлены результаты разработки методики количественного

8

определения алоэ-эмодина в субстанции и в суппозиториях, а также валидация этой методики.

Глава 6 включает результаты разработки контурной ячейковой упаковки для суппозиториев и установки для ее получения. Исследована стабильность разработанных лекарственных препаратов в различных видах упаковочных материалов. Методом спектроскопии ЯМР Н показано отсутствие взаимодействия фармацевтических субстанций со вспомогательными веществами и материалами упаковки.

Диссертация изложена на 290 страницах печатного текста, содержит 44 таблицы и 73 рисунка. Список использованной литературы включает 366 литературных источников, из которых 136 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использованы действующие и вспомогательные вещества, удовлетворяющие требованиям НД: иммуномодуляторы - полиоксидоний (ФСП 42-0501-5259-04), имунофан (ФСП 42-0027-0034-00), интерферон альфа-2Ь (ИФН) (ФСП 42-0501-5259-04), противовирусный препарат арбидол (ГФ XII) и нестероидный противовоспалительный препарат ибупрофен (USP, Ph.Eur.), экстракт алоэ сухой (ФС 42-3468-98), глицин (НД 42-11253-00), тизоль (ФС 42-3414-97).

Концентрация фармацевтических субстанций в разрабатываемых суппозиториях выбрана на основании анализа клинических данных отечественной и зарубежной литературы, что составляло в одном суппозитории для арбидола 50 мг, для полиоксидония 6 мг и 12 мг, для имунофана 0,1 мг, для интерферона 500000 ME и для ибупрофена 400 мг.

В качестве вспомогательных веществ применяли: супнозиторные основы, такие как масло какао (ГФ XII), массупол (Ph.Eur.), суппосир (Ph.Eur.), витепсол W35 (Ph.Eur.), твердый жир (ТУ 9369-001-28910991-10), эмульгаторы - твин-80 (ФС 42-2540-88), эмульгатор твердый Т-2(ФС 422689-96), эмульгатор №1 (ФС 42-1596-81), полиоксиэтилированный цетеариловый спирт - цетеарет-25 (Ph.Eur.), полигликозированные глицериды гелусир 44/14 (Gelucire 44/14 (ПЭГ-32 глицерил лаурат, Ph.Eur.), ланетте (Ph.Eur.) - смесь цетеарилового спирта, лаурилсульфата натрия, натрия цетеарил сульфата (Lanette SX,), лецитин (ТУ У 02070758.001-99), наполнитель - аэросил (USP, BP).

Кроме анализа по показателям НД, определяли физико-химические свойства фармацевтических субстанций, которые могут повлиять на биодоступность суппозиториев: кристалличность и фракционный состав, размер частиц порошков и твердой фазы в готовой лекарственной форме. Микроскопическое исследование порошков (форма и размер кристаллов) проводили с помощью конфокального микроскопа Nikon "Eclipse 90i" и электронного сканирующего микроскопа Jeol «JSM-6490LV», используя

9

методику, описанную в инструкции к прибору, и модифицированную методику ОФС "Мази" (ГФ XI изд., 1990, вып. 2).

Фракционный состав каждого вещества устанавливали методом ситового анализа (на аналитической просеивающей машине с набором сит {^сИ «АБ 200»),

Для определения количественного содержания имунофана, ибупрофена, интерферона и экстракта алоэ разработаны условия экстракции, обеспечивающие максимальное высвобождение фармацевтических субстанций из суппозиторной основы.

Изучение структурно-механических свойств суппозиториев проводили на приборе Реотест-2. Температуру плавления суппозиторных основ и готовых суппозиториев, время полной деформации и твердость определяли на тестере Егаека. Определение однородности дозирования проводили по методике ОФС 42-0129-09. Определение времени полной деформации суппозиториев проводили в соответствии с требованиями ОФС 42-0131-09. Распадаемость суппозиториев изучали по методике ОФС 42-013309. Испытание микробиологической чистоты проводили в соответствии с требованиями ГФ XII, часть 1 (ОФС 42-0067-07 стр.160). Изучение растворения субстанций из суппозиториев проводили по методике ОФС42-0135-09

Разработаны методики идентификации и количественного определения субстанций и вспомогательных веществ, основанные на спектроскопии ЯМР (спектрометр ЯМР ЖМ-ЕСХ 400 (ШОЬ, Япония). Типичный спектр ЯМР 'Н для образца твердого жира представлен далее на рисунке 1.

н2с-к '-НС-И' Н2С-К"

к.^.к'^оссс^снзснзсснг^снз

Ж"

п

Г Г "

I I.

ь!

•Ж

'•Д'ЯГЖ*" Г" Г "1" " " " ••"1 !ШНШ! & 1 !

Химнесиш сдвиг, м.д.

Рисунок 1 - ЯМР 'Н-спектр твердого жира 10

Таблица 1 - Показатели качества твердого жира, измеренные методом ЯМР 'Н спектроскопии и химическими методами._

Показатели Результаты анализа

Метод ЯМР 'Н спектроскопии Химические методы

400 МГц 600 МГц

Кислотное число - - 0,038

Йодное число 0,58 0,58 0,60

Число омыления 241,4 241,2 239,4

Средняя длина цепи 13,3 13,3 -

Гидроксильное число 3,42 3,46 3,61

Из спектров ЯМР'Н твердого жира, анализируя основные и минорные сигналы, устанавливали его жирнокислотный состав и рассчитывали число омыления и йодное число. В сводной таблице 1 представлены результаты определения качества твердого жира, определяемые химическими методами и спектроскопией-ЯМР.

Как видно из представленных данных, значения показателей незначительно отличаются друг от друга. При этом установлены преимущества метода ЯМР-спектроскопии, заключающиеся в минимальном времени на проведение методики (20 мин), что в 30 раз меньше по сравнению с химическими методами. Кроме того, не требуется предварительной экстракции фармацевтической субстанции и применения стандарта. Показано, что разработанную нами методику ЯМР - спектроскопии можно использовать в качестве альтернативного метода при определении показателей качества твердого жира.

Изучение структуры субстанций, готовых суппозиториев и характера взаимодействия субстанций с суппозиторной основой и ингредиентами суппозитория проводили также методом ЯМР 'Н спектроскопии, методом масс-спектрометрии DART (времяпролетный масс-спектрометр "AccuTOF" (JEOL, Япония) и на высоко точном и чувствительном рентгеновском дифрактометре Rigaku "Ultima IV."

Для оценки полноты высвобождения иммуномодуляторов и других субстанций из суппозиториев использовали метод диализа по методу Крувчинского, используя в качестве полупроницаемой мембраны нелакированный целлофан (ГОСТ 7783), а в качестве диализной среды -раствор гидрокарбоната натрия (15 г/л).

При проведении доклинических испытаний разработанных суппозиториев в опытах на животных исследовали кинетику всасывания фармацевтических субстанций, токсические свойства в соответствии с Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (Приказ

11

Министерства здравоохранения Российской Федерации №708 от 23.09.2010) и ГОСТ Р 53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики».

ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ ПРИ РАЗРАБОТКЕ СУППОЗИТОРИЕВ Современные биофармацевтические исследования направлены на установление зависимости между биодоступностью препаратов и физико-химическими параметрами вспомогательных веществ.

Всестороннее изучение новых вспомогательных веществ

Рисунок 2 - Факторы, влияющие на эффективность разрабатываемой лекарственной формы.

При выборе наиболее рациональной основы для лекарственного вещества, исходили из несомненных преимуществ липофильных основ. Проведенный нами анализ 218 составов суппозиториев отечественного и зарубежного производства, зарегистрированных в РФ, выявил преимущественное использование твердого жира в качестве суппозиторной основы. Однако в нашей стране отсутствовал нормативный, документ на твердый жир. В соответствии с требованиями ведущих фармакопей мира нами были разработаны ТУ 9369-001-28910991-10 на вспомогательное вещество для производства суппозиториев «Твердый жир» (Hard fat) Loders Croklaan B.V. Был введен показатель определения гидроксильного числа, который не предусмотрен в ГФ XI изд. В дальнейшем мы оценивали качество твердого жира, полученного от компании Loders Croklaan (Нидерланды) и отечественных производителей. Результаты сравнительного анализа показателей качества твердого жира, полученного на предприятиях России и в компании Loders Croklaan представлены в таблице 2. Как видно из таблицы 2, твердый жир компании Loders Croklaan удовлетворял требованиям ТУ.

Таблица 2 -Показатели качества Твердого жира

Наименование Нормируемые Твердый жир Твердый жир

показателя показатели Loders Croklaan (отечественные

(Нидерланды) производители)

Вкус и запах Чистый вкус без То же Вкус с посторонним

постороннего привкусом и

привкуса и запаха сильным запахом

Цвет Белый То же Светло-коричневый

Прозрачность Прозрачный в То же Мутный в

расплавленном расплавленном

состоянии состоянии

Массовая доля влаги и Не более 0,3 0,1 0,4

летучих веществ, %

Кислотное число, мг Не более 0,3 0,15 0,35

КОН

Температура 33-35 °С 34,0 35,0

плавления, °С

Температура Не менее 30 31,2 32,0

застывания, °С

Твердость по Не менее 850 900 750

Каминскому г/см при

20 °С

Перекисное число, Не более 10 0,15 0,15

моль/кг

Жирнокислотный

состав, %

С6:0 - 0,4 0,8

С8:0 3-4 3,4 5,0

С10:0 3-4 3,1 7,0

С12:0 35-50 41,5 33,0

СИЮ 13-16 13,8 12,8

С16:0 7-15 11,5 7,5

С18:0 15-25 18,7 14,0

С18:1 1-10 6,4 1,9

С20:0 - 0,2 "

Компания Loders Croklaan производит твердый жир на основе переэтерифицированного пальмоядрового масла (рис.3).

При анализе способов получения твердого жира было выявлено преимущество переэтерификации для получения липофильной основы. Переэтерификация позволяет получать липофильные основы с заданными для фармацевтической технологии физико-химическими свойствами без изменения их жирнокислотного состава, поэтому исследовали возможность получения твердого жира указанным способом из пальмоядрового масла. В

отличие от жидких растительных масел (например, хлопкового масла), используемых при производстве жиров отечественными производителями, пальмоядровое масло содержит большое количество твердых фракций, образованных триглицеридами предельных жирных кислот, устойчивых к окислению. Производство твердого жира из пальмоядрового масла экономичнее, так как не требует дополнительных затрат на стадию гидрогенезации. Таким образом, твердый жир, полученный компанией Loders Croklaan, был рекомендован в качестве суппозиторной основы для дальнейших исследований. С целью получения эффективного и стабильного препарата наряду с твердым жиром использовали другие современные липофильные основы.

I Упаковка/ Отгрузка j

Рисунок 3 - Технологическая схема получения твердого жира в компании Loders Croklaan (Нидерланды)

Оптимальную основу выбирали по ее способности высвобождать фармацевтическую субстанцию путем диализа через полупроницаемую мембрану. В эксперименте были использованы модельные суппозитории имунофана, полиоксидония, арбидола, ибупрофена и комбинации интерферона альфа-2Ь (ИФН) с экстрактом алоэ (алоэ). Данные исследования представлены в таблицеЗ.

В результате исследований выявлено, что основа твердый жир является оптимальной для суппозиториев с иммуномодуляторами и ибупрофеном. Установлено, что наиболее близкие и оптимальные значения по твердости, температуре плавления и по содержанию полиоксидония имеют суппозитории на основах масло какао и твердом жире.

Таблица 3 - Показатели качества суппозиториев полиоксидония на различных основах в момент изготовления и через 24 месяца хранения при температуре от 8 °С до 15 °С _

Показатели Вид основы

качества Твердый жир Масло какао Витепсол \У35 Суппоцир АМ Масс упол

В момент изго-товлени я Через 24 мес. В момент из готов л. через 24 мес. В момент изго-товл. через 24 мес. В момент изго-товл. Через 24 мес. В момент изгот овл Через 24 мес.

Внешний вид Суппозитории торпедообразной формы

Цвет Белый Белы й Светло-желтый Светло-желтый Белый с желтова т. Светло-желт ый Белый с желт оват. Свет ло-желт ый Белый с желт оват Свет ло-желтый

Твердость, кг 2,6±0,3 2,6± 0,2 2,7±0,4 2,2±0 ,4 3,6±0,3 5,6±0 ,4 5,6±0 ,5 5,7± 0,3 5,8±0 ,5 5,9± 0,5

Температура плавления, °С 35,1±1, 2 35,7± 1,0 35,5± 0,8 35,9± 0,9 34,5± 1,0 35,1± 0,6 35,1± 0,4 35,7± 0,1 36,2± 0,9 36,7± 1Д

Время полной деформации не более 15 мин (мин'сек") 5'5"± 0'15" 4'4"± 0'9" 6'3"± 0'51" 6'4"± 0'55" 5'2"± 0'37" 18'35 "±1'1 2" 4'2"± 0'47" 6'2"± 0'35" 5'3"± О'ЗЗ" 16*25 "±1'1 3"

Распадае-мость, мин (мин'сек") 15'45"± 0'18" 17'4" ±1'2" 16'3"± Г51" 26'1" ± 1'5" 15'2"± 1'7" 18'35 "±1'0 24'2" ± Г 34" 26'2" ±1'35 25'3" ± Г42" 26'25 "±1'1 0"

Кислотное число 0,27± 0,07 0,39± 0,10 1,81± 0,09 2,19± 0,13 0,64± 0,14 0,84± 0,05 0,23± 0,03 0,32± 0,01 0,8± 0,12 0,9± 0,08

Перекисное число 0,002± 0,001 0,005 ± 0,001 0,003± 0,001 0,005 ± 0,001 0,005± 0,001 0,009 ± 0,001 0,068 ± 0,003 0,068 ± 0,001 0,008 ± 0,003 0,009 ±0,00 2

Йодное число 5,38± 0,07 7,92± 0,07 28,36± 1,0 36.59 ± 1,03 0,58± 0,08 1,83± 0,05 53,12 ± 1,05 64,59 ± 1,17 5,25± 0,17 8,14± 0,11

Количественное содержание, мг 5,8±0,0 3 5,4±0 ,02 6,2±0,0 7 5,9± 0,08 5,2± 0,07 5,1± 0,04 5,5± 0,17 5,2± 0,09 5,4± • 0,10 5,1± 0,05

11,7± 0,09 11,1± 0,37 11,9± 0,44 11,4± 0,13 10,7± 0,18 10,3± 0,65 10,4± 0,98 10,1± 1,07 10,3± 0,97 10,0± 1,0

На остальных основах содержание полиоксидония находилось на нижнем пределе, а суппозитории полиоксидония на витепсоле и массуполе быстро деформировались, и их значения показателя твердости уменьшались по сравнению с исходной основой. Однако через 24 месяца хранения время деформации суппозиториев с полиоксидонием на этих основах превышало допустимые значения и не соответствовало требованиям нормативной документации (18,35 мин и 16,25 мин, соответственно). Кроме того, увеличивались значения перекисных и кислотных чисел, что свидетельствовало о процессах окисления липофильных основ. Наиболее стабильными оставались показатели суппозиториев полиоксидония на основах масло какао и твердый жир (таблица 3).

Таким образом, для полиоксидоиия наиболее предпочтительной основой является масло какао или твердый жир.

При разработке суппозиториев на основании результатов оценки высвобождения арбидола в диализат было показано, что оптимальной основой также является твердый жир. Установлено, что наиболее быстрое высвобождение арбидола в диализат обеспечивают суппозитории, приготовленные на твердом жире. В диализную среду высвободилось 93 % арбидола, 92 % фармацевтической субстанции из комбинации ИФН и алоэ. Близкие результаты наблюдались при использовании витепсола \V-35, массупола и суппосира.

Аналогичная зависимость выявлена при диализе ибупрофена из суппозиториев (рисунок 4). Концентрацию ибупрофена в диализате определяли методом ВЭЖХ и ЯМР - спектрометрии по разработанной нами методике.

Название основы

Рисунок 17 - Высвобождение ибупрофена из различных основ. Примечание :Цифрой 1 обозначены данные полученные методом ВЭЖХ; цифрой 2 данные ЯМР.

Как видно из данных диаграммы, концентрации ибупрофена в диализате, определенные двумя методами, незначительно отличаются друг от друга, что позволяет рекомендовать без использования стандарта метод спектроскопии ЯМР 'Н для количественной оценки высвобождения ибупрофена из различных модельных смесей. Было показано, что суппозитории на основе масло какао медленнее высвобождают ибупрофен, и при этом его концентрация в диализате наименьшая. Твердый жир

обеспечивает почти в 1,5 раза более высокий уровень ибупрофена в диализате, чем масло какао. Из основы витепсол 35 высвобождается ибупрофен приблизительно с такой же динамикой, как из твердого жира. Основы суппоцир и массупол высвобождают ибупрофен чуть меньше, чем витепсол \У-35.

При фармакокинетических исследованиях разработанных суппозиториев для детей с арбидолом на твердом жире в опытах на кроликах породы «шиншилла», установлено, что арбидол достаточно быстро всасывается в кровь. Максимальные концентрации арбидола при применении суппозиториев фиксируются, в среднем, через 30-50 минут. В период 6-48 часов происходит относительно медленная элиминация препарата из кровотока (таблица 4).

Таблица 4 - Концентрации арбидола в плазме (нг/мл) при применении

Время [час] 0.25 0.5 1 2 4 6 24 48

№ живот ного Концентрации арбидола [нг/мл]

1 98 147 123 60 36 26 25 15

2 46 48 29 22 15 33 24 9

3 48 72 69 74 62 37 37 12

4 104 56 39 14 55 30 11 8

5 95 123 41 16 20 52 20 9

6 68 30 95 44 37 23 22 15

Среднее 76,5 79,3 66,0 38,3 37,5 33,5 23,2 11,3

Ст. ош. 10,6 18,7 15,1 10,2 7,5 4,2 3,4 1,3

95% довер. ИНТ. 20,7 36,6 29,5 20,0 14,8 8,2 6,7 2,5

изучены физико-химические свойства суппозиториев, а также высвобождение фармацевтической субстанции в зависимости от вида ПАВ методом диализа через полупроницаемую мембрану (таблица 5).

Данные таблицы 5 свидетельствуют о том, что все используемые в эксперименте ПАВ обеспечивают соответствие требований ГФ XI по показателю температуры плавления (за исключением эмульгаторов №1 и Т-2, где наблюдается незначительное превышение) и показателю времени полной

деформации. Все без исключения ПАВ обеспечивают полную деформацию суппозиториев в течение времени, указанного в ГФ XI изд. (не более 15 мин).

Таблица 5 - Оценка влияния ПАВ на качество суппозиториев с имунофаном, ибупрофеном и комплексных суппозиториев ИФН с алоэ_

Наименование Показатели качества

ПАВ Температура плавления, °С Время полной деформации, мин Твердость, кг/суппозит. % высвобождения через 3 часа (in vitro)

Суппозитории: №1-ибупрофен, №2-суппозиториии комплексные, №3- имунофан

1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3

Эмульгатор №1 37,1 ±0,5 37,2 ±1,1 37,0 ±1,2 11 ±1 12± 1 10±2 4,5 ±0,2 4,2 ±0,2 4,6 ±0,4 33±1 35±2 33±1

Эмульгатор Т-2 37,0 ±1,1 37,1 ±0,9 37,0 ±0,8 12 ±1 13± 2 10±1 4,3 ±0,1 4,2 ±0,1 4,3 ±0,2 32±2 33±1 35±2

Твин-80 36,5 ±1,4 36,2 ±1,0 36,0 ±1,6 4 ±1 4±1 3±1 3,0 ±0,6 3,2 ±0,2 2,7 ±0,2 19±2 15±1 18±2

Цетеарет-25 36,7 ±0,8 36,6 ±1,0 36,5 ±0,8 7 ±1 6±1 7±2 3,9 ±1,0 4,0 ±0,7 4,2 ±0,5 23±2 28±2 25±1

Gelucire 44/14 36,2 ±1,5 36,7 ±1,5 36,2 ±0,9 5 ±1 5±1 4±1 3,0 ±0,2 3,5 ±0,1 3,2 ±0,4 19±1 21±1 24±2

Lanette SX 36,4 ±1,9 36,8 ±2,1 36,5 ±1,7 4 ±1 4±1 4±1 3,6 ±0,4 3,7 ±0,3 3,0 ±0,3 22±2 25±1 26±2

Лецитин 36,8 ±1,1 36,2 ±0,8 36,6 ±0,6 3 ±1 3±1 4±1 2,8 ±0,1 2,9 ±0,3 2,7 ±0,1 21±1 18±2 19±2

Без эмульгат. 36,9 ±1,4 36,9 ±1,8 36,8 ±1,0 9 ±1 9±2 9± 2 2,6 ±0,1 2,9 ±0,1 2,5 ±0,2 25±2 29±2 30±2

Наименьшим значением времени полной деформации от 3 до 4 мин обладают суппозитории, содержащие лецитин и твин-80. Наибольшее время отмечено для суппозиториев с эмульгаторами №1 и Т-2, для которых были отмечены повышенные значения твердости (от 4,2 до 4,6 кг) и температуры плавления (от 37,0 °С до 37,2 °С) и пониженное высвобождение действующих веществ в диализат (от 49,4 % до 54,6 %). Наилучшее высвобождение отмечено для лецитина в случае комплексных суппозиториев (75 %). Для ибупрофена наиболее оптимальным оказался эмульгатор гелусир 44/14 (ПЭГ-32 глицерил лаурат) (Gelucire 44/14, Ph.Eur.) , концентрация ибупрофена в диализате составила 75, 6 % от заданной дозы. На высвобождение имунофана наибольшее влияние оказывает твин-80 (70,9 %).

Сравнительное изучение биодоступности в опытах in vitro разрабатываемых суппозиториев ибупрофена и готовых суппозиториев «Долормин» показало преимущество разработанного нами препарата, что объясняется введением в его состав Gelucire 44/14. Полнота высвобождения ибупрофена при использовании Gelucire 44/14 составила 101,3 %, в то время как для суппозиториев «Долормин» она составила 93,6 %.

К биофармацевтическим факторам, влияющим на терапевтическую эффективность лекарственного средства, относится дисперсность фармацевтической субстанции. Поскольку арбидол, ибупрофен и алоэ вводили в основу по типу суспензии, определен фракционный состав данных субстанций. Арбидол, алоэ и ибупрофен имеют характер полидисперсных порошков, в которых фракции до 100 мкм составляют 8,8; 9,5 и 90,5 %, соответственно, от 100 до 250 мкм - 82; 25 и 10 %, соответственно. Микроскопическим исследованием установили форму и размер частиц данных субстанций. Изучали влияние размера частиц на однородность дозирования и биологическую доступность суппозиториев. Результаты представлены в таблице 6.

Таблица 6 - Зависимость однородности дозирования фармацевтических субстанций в суппозиториях от степени их измельчения

№ опыта Количество лекарственного вещества в суппозитории, мг

Арбидол Ибупрофен Алоэ экстракт сухой

Неиз-мельч. 50100 мкм 100150 мкм >100 мкм Микро-низиров. Неиз-мельч. 100150 мкм 150250 мкм

1 45,4 48,3 49,5 438,0 449,7 42,9 49,8 43,0

2 36,8 48,9 49,8 436,7 449,2 44,1 49,2 45,8

5 72,1 39,5 49,9 437,0 452,8 62,6 49,4 47,1

8 39,5 50,3 49,1 414,3 450,9 58,5 50,4 52.9

9 62,1 53,2 50,2 432,7 449,2 35,3 51,6 59,8

12 36,3 35,4 49,8 442,4 449,5 41,7 50,8 55,9

15 35,7 57,5 51,1 399,5 479,4 29,4 50,8 43,9

20 48,1 66,8 50,2 442,8 458,9 38,9 51,4 52,2.

22 57,5 44,7 51,1 490,7 465,7 49.8 49,1 66,3

23 68.4 39,5 50,0 475,6 453,6 67,5 51,5 50,5

30 75,5 64,5 49,1 487,6 455,4 73,5 50,8 51,8

Как видно из данных таблицы 6, измельчение и размер частиц оказывают существенное влияние не только на равномерность распределения порошка субстанций в суппозитории, но и на высвобождение действующих веществ из основы. Равномерность распределения арбидола в основе

обеспечивает фракция с размером частиц от 100 мкм до 150 мкм, что подтверждается однородностью дозирования. Аналогичная зависимость выявлена и для алоэ. Оптимальная однородность дозирования отмечена для микронизированного ибупрофена. Так же показано, что степень высвобождения измельченной субстанции в диализат за 6 часов достигает в среднем 90 %, тогда как неизмельченная субстанция высвобождается из суппозитория приблизительно на 70 %.

Микронизированный ибупрофен с размером частиц менее 10 мкм (рис.5) был получен нами на распылительной сушилке, с целью снижения его гастротоксичности. В опытах на животных было показано, что его биодоступность в 2,5 раза выше биодоступности исходной субстанции.

а - до измельчения б - после микронизации

Рисунок 5- Микрофотографии ибупрофена до измельчения и после микронизации на распылительной сушилке

С целью определения структуры и чистоты микронизированного ибупрофена было проведено рентгенофазовое исследование в сравнении с исходными субстанциями производства Китай и компании BASF (Германия).

Сравнительный анализ экспериментальных рентгенодифракционных спектров показал, что разработанные методы и режимы микронизации ибупрофена позволяют получить более чистый препарат по содержанию примесей Racemic- ибупрофена из субстанции (рисунок 6). Соотношение интенсивностей, форма профилей микронизированного образца хорошо согласуются с рассчитанным эталонным спектром Racemic- ибупрофена с незначительным отличием параметров кристаллической решетки.

Учитывая значение текучих свойств суппозиторной массы для предотвращения седиментации фармацевтической субстанции, было изучено влияние аэросила на физико-химические и структурно - механические свойства модельных суппозиториев с арбидолом на твердом жире. В состав модельных смесей вводили аэросил 200 в количестве 0,015 г и 0,0375 г и аэросил 380 в количестве 0,015 г и 0,0365 г на суппозиторий. При этом

20

Рисунок 6 - Экспериментальные рентгендифракционные спектры микронизированной и исходной субстанции ибупрофена (Китай) и эталонный

спектр для форм Яасегшс- ибупрофена выявлено, что аэросил 200 в количестве 0, 0375 г увеличивал температуры плавления и затвердевания суппозиториев и время полной деформации, т.е. суппозитории становились более плотными, о чем свидетельствовал характер реограмм течения этих суппозиториев, а также увеличение значений предела текучести и пластической вязкости. Оптимальные показатели отмечены при введении аэросила 380 в количестве 0,0365 г.

С целью обоснования параметров технологического режима, изучали влияние температуры и времени нагревания и охлаждения на физико-химические свойства твердого жира и суппозиториев, используя рентгеноструктурный анализ и метод дифференциальной сканирующей калориметрии. Из полученных дифрактограмм установлено, что субстанция имунофана представляет собой аморфный порошок (нет четко обозначенной кристаллической структуры), в то время как на дифрактограммах твердого жира и суппозиториев с имунофаном были отчетливо видны пики, что свидетельствовало о наличии кристаллической структуры. Поскольку характер плавления суппозиториев влияет на высвобождение фармацевтической субстанции в естественных условиях, на основании различий дифрактограмм твердого жира в твердом состоянии и в расплавленном, выявлена необходимость соблюдения температурного режима в процессе изготовления суппозиториев. Анализ ДСК- кривых плавления твердого жира и его смеси с имунофаном показал, что введение имунофана в основу увеличивает ее температуру плавления 35,6 °С до 42,3 °С, но не влияет на ее процессы застывания. Экзотермический эффект

проявляется при температуре 30 °С. При дальнейшем понижении температуры наблюдаются размытые экзотермические эффекты, связанные с переходом образующейся при затвердевании метастабильной а-формы твердого жира в ß-форму при - 24 °С и, далее, при ~ 14°С с переходом, также метастабильной, ß-модификации в устойчивую ß'-модификацию.

Аналогичная зависимость была выявлена при исследовании ДСК-кривых застывания модельных суппозиториев с различным содержанием ибупрофена 10 %, 30 % и 50 % (рисунок 7)

24

- Ibuprofen 10-0% (w/w)

- Ibuprofen 30.0% (w/w) Replicate 1

22

— Ibuprofen 50.0% (w/w)

Q.

3 — No Active

12

-30 -25 -20 -15 -10 -5 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Temperature С'С)

Рисунок 7 - Кривые ДСК смесей с ибупрофеном, полученные при

охлаждении

На основании исследования тепловых процессов установлен алгоритм получения суппозиториев: нагревание твердого жира следует производить в интервале температур от 55 °С до 60 °С в течение 10 минут; добавление фармацевтической субстанции и процесс формования суппозиториев при температуре 40 °С; охлаждение суппозиториев - при температуре около 30 °С, избегая быстрого охлаждения путем резкого снижения температуры и применения механических усилий до момента полного отвердевания, с целью предотвращения образования хрупких, ломких суппозиториев.

Таким образом, показана необходимость комплексного изучения возможности создания суппозиториев с использованием отечественных субстанций на основе твердого жира и разработан алгоритм их производства.

РАЗРАБОТКА И ИССЛЕДОВАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ «ИМУНОФАН, СУППОЗИТОРИИ РЕКТАЛЬНЫЕ 0,1 мг» В предварительных опытах было установлено, что имунофан из суппозиториев, приготовленных на всех используемых нами основах, высвобождается постепенно. Менее всего за три часа выделилось имунофана из масла какао и составило 73 %. Концентрация имунофана в диализате из других основ (твердый жир, витепсол \¥35, массупол, суппоцир) отличалась незначительно (95 %, 93 %, 90 %, 88 %, соответственно). Результаты представлены графически на рисунке 8.

по вертикали - % высвобождения имунофана Рисунок 8 - Динамика высвобождения имунофана из модельных суппозиториев Для создания полифункционального препарата, с улучшенной терапевтической активностью, использовали сочетанную комбинацию имунофана с глицином. Поскольку глицин обладает не только антиоксидантным, антитоксическим действием, но также применяется для стабилизации белковых субстанции. Экспериментально было подтверждено стабилизирующее действие глицина на ИФН в процессе хранения. В то же время глицин не оказывает существенного влияния на такие показатели суппозиториев при хранении, как твердость, время полной деформации и температура плавления.

При разработке состава суппозиториев с имунофаном была также выявлена зависимость влияния концентрации твина-80 и способа введения фармацевтической субстанции на физико-химические показатели суппозиториев, в особенности на равномерность распределения имунофана и глицина в основе. Показано, что их введение в твердый жир по типу суспензии в виде измельченного лиофилизированного порошка, давало достаточно равномерное распределение. Однако из основы определялось значительно меньшее количество фармацевтической субстанции. Потери составляли более 30 % от исходного. Неравномерность распределения наблюдалась также и при использовании твина-80 в концентрации 0,5 % и

23

О, 75 %. Оптимальные результаты были получены для суппозиториев, где концентрация твина-80 составляла 1 %, и фармацевтические субстанции были введены по типу раствора.

Установление температурных режимов технологического процесса проводилось с учетом лабильности имунофана и физико-химических свойств твердого жира, при этом особое внимание уделялось времени и температуре формования суппозиториев. Учитывая результаты проведенных нами исследований, позволивших разработать алгоритм технологического режима формования суппозиториев, исследовали зависимость показателей качества суппозиториев от температурного режима (таблица 7).

Таблица 7 - Влияние температуры на качество суппозиториев.

Наименова- Температурный режим, °С

ние Процесс формования Процесс охлаждения

показателей 35 40 45 25 30 35

Описание Плот- Умерен- Порис- Плот- Умерен- Порис-

ный, без но твердый, без тыи неплот- ный, без но твердый, тый неплот-

воз- воздуш- ный. С воздуш без воз- ный, с

душ- ных воздуш- ных душных воздуш-

ных полос- ными полос- полос-тей ными

полос- тей полос- тей полос-

тей тями тями

Масса 2,11 1,51 1,20 2,02 1,48 1,12

суппози- ±0,02 ±0,04 ±0,01 ±0,02 ±0,01 ±0,06

тория, должна быть

1,5 г

Время 16±2 6,50±1,0 2,37 17±1 6.67 2.15

полной деформации, ±0,87 ±0,45 ±0,48

мин.сек.

Распадае- 22,37 19,51 11.28 22,42 19,45±1.01 11,52

мость, ±1,08 ±1,14 ±0.44 ±1,01 ±0,18

мин.сек.

Примечание: *- Плотный, без воздушных полостей; **- умеренно плотный, без воздушных полостей; ***- пористый, неплотный, с воздушными полостями.

Таким образом, твердый жир нагревали до 55 °С, фармацевтическую субстанцию вводили в основу при 40 °С, процесс формования суппозиториев имунофана осуществляли при температуре 40 °С, охлаждение при температуре 30 °С.

Разработана технологическая схема производства суппозиториев имунофана, представленная на рисунке 9.

Для оценки качества разработанных суппозиториев изучали возможность применения спектроскопии - ЯМР, поскольку молекула имунофана содержит четыре ионогенные группы, способные изменять зарядовое состояние в диапазоне значений рН от 1 до 12. Субстанция имунофана, как и лекарственные средства его содержащие, методом ЯМР-спектрометрии ранее не были охарактеризованы. Нами была разработана методика идентификации субстанции имунофана, что особенно важно для создания его стандартного образца. Также разработана методика количественного определения имунофана в суппозиториях методом спектроскопии-ЯМР.

Определяли спектр ЯМР 1Н имунофана в тяжелой воде (D20), в смеси растворителей (92% воды и 8% D20) и в трифторуксусной кислоте и спектр ЯМР 13С имунофана в D20. При ширине развертки 19 м.д., длительность импульса былаЮ ns, центр спектра равен 5 м.д., время регистрации ССИ составляло 2 с, релаксационной задержки - 30 с, число накоплений спектра 16.

Для повышения чувствительности и уменьшения погрешностей анализа нами был разработан способ пробоподготовки путем экстракции имунофана из суппозиториев смесью гептана и водным раствором натриевой соли 3-(триметилсилил)-тетрадейтеропропионовой кислоты (ТСП, химический сдвиг 0.015 м.д.) и введен внутренний стандарт, относительно которого следует определять содержание имунофана в суппозиториях. Обработка результатов эксперимента заключалась в интегрировании сигналов в области 6.7-7.3 м.д. (два дублета от четырех протонов имунофана) и 0.05 м.д. (синглет от девяти протонов ТСП). Сходимость трех параллельных измерений составила 2 %, воспроизводимость - 3 %.

Рисунок 9 - Технологическая схема производства суппозиториев Имунофан.

В таблице 8 представлены результаты сравнительного определения содержания имунофана двумя разными методами. Показана возможность применения ЯМР спектроскопии в качестве альтернативного метода.

Для определения количественного содержания имунофана в суппозиториях методом ВЭЖХ, нами был разработан способ пробоподготовки, заключающийся в экстракции хлороформом. При этом относительная ошибка опыта составила 4 %.

Таблица 8 - Сравнительные данные определения количественного

содержания имунофана в зависимости от метода определения.

Объект исследования Количественное содержание имунофана

Метод определения

ВЭЖХ ЯМР-спектроскопия

Субстанция (%) 99,55±0, 47 101,32±0,34

Суппозитории (мг) 0,095±0,012 0,101±0,009

Изучена также возможность использования масс- спектрометрии для оценки качества суппозиториев с имунофаном. Масс-спектры глицина были получены в течение 5 секунд без предварительной пробоподготовки. При этом высокомолекулярные компоненты суппозитория не ионизировались в

источнике DART и не мешали определению. M/z характеристичных интенсивных ионов имело значение 76,151, что указывало на наличие глицина в препарате.

Экспериментальное изучение стабильности суппозиториев имунофана показало, что суппозитории не изменяют первоначального содержания фармацевтической субстанции в течение 15 месяцев. Отмечены некоторые изменения твердости суппозиториев, что связано с продолжающимися процессами структурирования. Значения твердости увеличивались с 2,7 кг до 3, 2 кг. Температура плавления увеличилась на 1,4 °С.

Для подтверждения фармакологических свойств суппозиториев ректальных с Имунофаном были проведены исследования сравнительной биодоступности препаратов «Имунофан раствор для инъекций 0,005 %» и «Имунофан, суппозитории ректальные 0,1 мг» на кроликах-самцах породы «Шиншилла» с массой тела от 1,9 кг до 2,0 кг.

Количественное определение концентрации имунофана проводили с использованием радиоизотопной метки, для чего предварительно был осуществлен химический синтез имунофана, «меченого» углеродом С. Были разработаны условия и методика проведения эксперимента и определения имунофана в плазме. На рисунке 10 представлены фармакокинетические кривые имунофана при внутримышечном и ректальном путях введения.

А

20 40 60 ВО

160 180 200 220 240

О 20 4Q

100 120 A4Q 160

200 220 240 260

при внутримышечном введении при ректальном введении

Рисунок 10 - Фармакокинетика имунофана

При сравнении площадей под фармакокинетическими кривыми при одной и той же дозе установлено, что относительная биодоступность (100 %) имунофана при ректальном применении незначительно отличается от биодоступности (105%) при внутримышечном применении.

РАЗРАБОТКА КОМБИНИРОВАННЫХ СУППОЗИТОРИЕВ «АЛОЭФЕРОН» ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ

Так как альфа - интерфероны наиболее эффективны при лечении хронических вирусных заболеваний, считали необходимым создание лекарственной формы интерферона альфа- 2Ь с улучшенной специфической активностью путем введения фармацевтических субстанций, способных повышать защитные силы организма. С этой целью использовали натуральный биостимулятор - алоэ экстракт сухой. Поэтому создаваемые нами суппозитории комбинированного состава мы назвали «Алоэферон». В качестве основы был выбран твердый жир в комбинации с лецитином на основании предварительных исследований, описанных в главе 3. Установлено, что противовирусная активность образца «Алоэферон» почти на 40 % превышает противовирусную активность образца № 1, содержащего только интерферон альфа -2Ь (таблица 9).

Для получения комплексных суппозиторий «Алоэферон» с повышенной стабильностью, улучшенной биодоступностью и низкой токсичностью необходимо введение веществ, обладающих антимикробными свойствами, и способных увеличивать всасывание фармацевтической субстанции.

В качестве активатора всасывания ИФН использовали оригинальное отечественное лекарственное средство - тизоль (ФС 42-3414-97), который обладает вышеуказанными свойствами. Для предотвращения деструкции ИФН в состав суппозиториев вводили глицин, а для предотвращения процессов окисления твердого жира в состав «Алоэферона» вводили витамин

Таблица 9 - Противовирусная активность препаратов

№ образца Наименование ингредиентов Активность, МЕ

1 Интерферон альфа-2Ь, (буферный раствор), лецитин, твердый жир 606 ООО

2 «Алоэферон» Интерферон альфа-2Ь, (буферный раствор), алоэ экстракт сухой, тизоль, глицин, витамин Е, лецитин, твердый жир 849 333

В главе 3 показана целесообразность введения в состав суппозиториев «Алоэферон» натурального ПАВ - лецитина в количестве 1 % от массы суппозитория с целью получения стабильных и однородных суппозиториев с улучшенной биодоступностью. Составы модельных прописей «Алоэферон» представлены в таблице 10.

Таблица 10 - Составы модельных смесей комплексных суппозиториев __«Алоэферон»_

Наименование компонентов Количество, г

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

ИФН альфа-2Ь человеческий рекомбинанный 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ 500 тыс. МЕ

Алоэ экстракт сухой (в пересчете на алоэ-эмодин) 0,015 0,015 0,015 0,015 0,015 0,015 0,015 0,250 0,06 0,06

Глицин 0,005 0,01 0,015 0,005 0,005 0,01 0,015 0,015 0,015 0,015

Витамин Е 0,005 0,01 0,05 0,05 0,01 0,005 0,005 0,01 0,01 0,05

Тизоль 0 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05

Вода очищенная 0,012 0,012 0,012 0,012 0,012 0,012 0,012 0,012 0,012 0,012

Лецитин 0,014 0,014 0,014 0,014 0,014 0,014 0,014 0,014 0,014 0,014

Твердый жир 1,399 1,384 1,294 1,304 1,344 1,339 1,334 1,104 1,289 1,249

Суппозитории, изготовленные в соответствии с композиционным составом, приведенным в таблице 10, на продольном срезе не содержали видимых механических включений и воздушных полостей, имели однородную окраску. Все составы отличались достаточной твердостью при комнатной температуре и повышенной при температуре холодильника. Поверхность суппозитория была гладкой и однородной, за исключением состава № 8, поверхность которых была шероховатой, что объясняется, по-видимому, большим содержанием алоэ (250 мг). Однако, низкое содержание алоэ (0,015 г/суппозиторий), как было выявлено в дальнейших исследованиях, явилось недостаточным для количественного определения алоэ-эмодина в суппозиториях.

При изучении стабильности модельных суппозиториев «Алоэферон» показано, что через полгода хранения активность ИФН падает на 25 % в составе № 1, где содержатся минимальные количества глицина и витамина Е, и в их состав не входит тизоль. Наилучшую сохранность ИФН и антрагликозидов экстракта алоэ в пересчете на алоэ-эмодин обеспечивает комбинация глицина, тизоля и витамина Е в сочетании 0,015 г, 0,05 г и 0,05 г, соответственно. Так через 15 месяцев хранения в составах № 3 и № 10 содержание интерферона альфа -2Ь уменьшилось на 10 % от исходного. Аналогичная зависимость выявлена в составе №10 для алоэ-эмодина. Состав № 3 имел низкие значения содержания алоэ, которого было недостаточным для количественного определения алоэ-эмодина в суппозиториях.

Основываясь на результатах проведенных исследований, был выбран состав суппозиториев «Алоэферон».

Разработанная нами технология производства суппозиториев «Алоэферон» методом выливания с учетом разработанного алгоритма аналогична технологии производства суппозиториев с имунофаном и сводится к последовательному добавлению фармацевтических субстанций в основу, что значительно упрощает процесс производства и обеспечивает качество получаемого продукта, в виду снижения количества критических параметров процесса.

В предварительных исследованиях был определен способ введения ИФН по типу раствора и предварительно измельченного алоэ по типу суспензии. Водорастворимый глицин и аквакомплекс тизоля вводили в основу по типу раствора.

В твердый жир при температуре (40±1) °С последовательно вводили все ингредиенты, гомогенизировали на установке 1КА Ма§кЬаЬ. Формовка суппозиториев осуществлялась при температуре (40±1) °С, охлаждение - при температуре (30±1) °С.

С целью увеличения биодоступности препарата и оптимизации технологического процесса изучали технологический прием диспергирования на высокоскоростной мешалке типа ротор/статор. Микроскопическими исследованиями выявлена зависимость степени дисперсности частиц алоэ от времени и скорости диспергирования расплавленной суппозиторной массы, содержащей алоэ.

В дальнейших исследованиях для прогнозирования стабильности разработанного состава суппозиториев «Алоэферон» в процессе длительного хранения изучали степень взаимодействия ингредиентов суппозитория с твердым жиром и друг с другом методом спектроскопии ЯМР 'Н. Установлено наблюдаемое отсутствие смещений сигналов протонов компонентов в спектрах суппозиториев, что явилось доказательством отсутствия взаимодействия между всеми активными и вспомогательными компонентами суппозиториев (рисунок 11).

Рисунок 11 - Спектр ЯМР *Н: а- твердого жира, б- суппозиториев

«Алоэферон»

Было также проведено исследование образцов ИФН, тизоля, экстракта алоэ, а также их смесей методом спектроскопии ЯМР 'Н. Анализ полученных спектров показал, что тизоль не содержит посторонних примесей, в экстракте алоэ содержится много компонентов, имеющих большой молекулярный вес, ИФН содержит низкомолекулярные примеси и имеет специфическую конформацию, которая отсутствует у денатурированных белков. В смеси ИФН, экстракта алоэ, тизоля происходит межмолекулярное взаимодействие тизоля с интерфероном альфа-2Ъ. По-видимому, этим объясняется стабилизация интерферона тизолем.

Для оценки качества суппозиториев «Алоэферон» нами разработана методика определения количественного содержания алоэ с использованием в качестве стандарта определения алоэ-эмодина методом ВЭЖХ, поскольку в настоящее время отсутствует единый подход в анализе сырья, полупродуктов и готовых лекарственных форм препаратов алоэ. Проведена валидационная оценка метода определения алоэ-эмодина и установлено, что методика пригодна для анализа и обеспечивает получение достоверных результатов. Показано, что времена удерживания пиков алоэ-эмодина на хроматограммах испытуемого раствора и стандартного раствора совпадают с точностью более 99% и отсутствует влияние вспомогательных веществ на результат количественного определения алоэ-эмодина. Подтверждена линейность, так как значение коэффициента корреляции составляет 0,9993. Предел обнаружения лежит ниже контролируемых по методике содержаний алоэ-эмодина.

В процессе хранения суппозиториев «Алоэферон» показана их стабильность в течение двух лет при температуре от 8 °С до 15 °С (см. таблицу 11).

В результате доклинического изучения «Алоэферон» на лабораторных мышах массой от 19 г до 21 г и крысах установлено, что суппозитории являются нетоксичным лекарственным средством, не вызывают гибели животных и хорошо переносятся лабораторными животными.

Рисунок 12 - а - Расположение клеток мозговой ткани, х 700; б - Гистосрез ткани сердца, х 200; в - Легочная ткань, х 700; г - Почечная ткань, х 700

Патоморфологическое исследование внутренних органов показало, что введение суппозиториев «Алоэферон» в дозах 0,036 мг и 0,144 мг не вызывает патологических морфологических изменений внутренних органов лабораторных крыс и не оказывает раздражающего действия на пищевод, желудок и кишечник и достоверных различий между исследованными образцами не выявлено (рисунок 12.)

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЕ УПАКОВОЧНЫХ МАТЕРИАЛОВ НА КАЧЕСТВО СУППОЗИТОРИЕВ

Для российских фармацевтических фабрик и научно-

исследовательских лабораторий, которым необходимо производить

суппозитории небольшими сериями, или нет возможности использовать

дорогостоящие автоматические суппозиторные машины, нами была

32

разработана контурная ячейковая упаковка и установка для упаковки совместно НПО «Прогресс». Контурная ячейковая упаковка для суппозиториев состояла из заготовки с жестко отформованными ячейками из ПВХ двух типоразмеров, которая герметизируется после заполнения ячеек суппозиториями ламинированной фольгой. Конструкция контурной ячейковой упаковки представлена на рисунке 13.

Рисунок 13 - Контурная ячейковая упаковка на 5 суппозиториев диаметром 9 мм и длиной 30 мм (массой до 1,5 г).

Аналогичную конструкцию имеет упаковка на 5 свечей диаметром 12,5 мм и длиной 32 мм (массой до 3 г).

Установка для упаковки состоит из трех узлов. Первый узел - это пресс-форма для формования 100 или 150 ячеек из ПВХ в форме суппозиториев. Глубина и форма ячейки рассчитана таким образом, чтобы при герметизации не происходило частичного оплавления суппозиториев. Второй узел состоит из термоплаты для запайки суппозиториев покровным материалом. Третий узел предназначен для вырубки упаковки по 5 суппозиториев с округленными концами двух типоразмеров. Нами разработаны ТУ 9467-001-52385883-00, включающие следующие показатели качества разработанной упаковки: внешний вид, линейные размеры (длина и диаметр), герметичность соединения покровного материала с пленкой ПВХ.

Было изучено влияние современных упаковочных материалов на качество суппозиториев с полиоксидонием, имунофаном, арбидолом, ибупрофеном и комплексных суппозиториев «Алоэферон» в процессе хранения. В качестве упаковочных материалов были использованы пленки ПВХ/ПЭ, ПВХ/ПВДХ, алюминиевая фольга и ПВХ с алюминиевой фольгой, из которых на установке была изготовлена контурная ячейковая упаковка и произведена упаковка разработанных суппозиториев. Испытание проводили параллельно в двух климатических камерах BINDER KBF 240 при различных условиях в течение 24 месяцев.

По истечении срока хранения суппозитории анализировали методом ЯМР 'Н и оценивали качественный и количественный состав испытуемых

образцов. Анализ спектров ЯМР выявил отсутствие изменения сигналов суппозиториев в процессе хранения, что свидетельствовало об отсутствии взаимодействия упаковочных материалов с компонентами суппозиториев. Показано, что все виды упаковочного материала обеспечивают стабильность суппозиториев.

Таблица 11 - Изучение стабильности разработанных нами суппозиториев в различных видах упаковки. (Условия хранения, соответствовали указанным в НД на конкретный препарат)

Вид упаковочного материала Наименование суппозитория С! рок ¿ранения Описание Подлинность Средняя масса и отклонение от средней массы Количественное определение Температура плавления Микробиологическая чистота

Фармацевтическая субстанция Фармацевта ческая субстанция Масса суппозитория Отклонение от средней массы Фармацевта ческая субстанция Фармацевта ческая субстанция

Требования проекта ФСП Интерферон альфа-2Ь Алоэ- ЭМОД55Н От 1,425 до 1,575 г. Не должно превышать ±5% для 18 суппозиториев и ±7,5% для 2-х В одном суппозитории должно быть 500000 (от 400000 до 675000) МЕ Интерферон альфа-2Ь В одном суппозитории должно быть от 50 мг до 70 мг Алоэ- эмодин Не более 37°С ГФ XI и Изменение 1 и 3, категория 3 А

1 2 6 7 8 9 10 11 12 13

пвх/пэ Алоэферон Исходи. соответствует соответствует соответствует 1,51 соответствует 634000 64,1 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответствует 1,52 соответствует 498000 64,2 соответствует соответствует

пвх/пвдх Алоэферон Исходи. соответствует соответствует соответствует 1,51 соответствует 513000 64,1 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответствует 1,48 соответствует 483000 64,0 соответствует соответствует

Ламинированная алюминиевая фольга Алоэферон Исходи. соответствует соответствует соответствует 1,52 соответствует 544000 64,2 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответствует 1,44 соответствует 434000 64,4 соответствует соответствует

ПВХс ламинированной алюминиевой фольгой (ТУ 9467- 001-52385883>00) Алоэферон Исходи. соответствует соответствует соответствует 1,47 соответствует 456000 64,1 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответствует 1,51 соответствует 413000 64,2 соответствует соответствует

Требования проекта ФСП Имунофан Глицин От 1,2 до 1,5 г. Не должно превышать ±5% для 18 суппозиториев и ±7,5% для 2-х В одном суппозитор ии должно быть от 0,080 мг до 0,120 мг Имунофана В одном суппозитории должно быть от 4,0 мг до 6,0 мг Глицина Не более 37°С ГФ XI и Изменение 1 и 3, категория 3 А

Продолжение таблицы 11

1 2 3 6 7 8 9 10 И 12 13

пвх/пэ Имунофан Исходя. соответствует соответствует соответствует 1,51 соответствует 0,090 5,6 соответствует соответствует

1 год соответствует соответствует соответствует 1,48 соответствует 0,093 5,2 соответствует соответствует

ПВХ/ПВДХ Имунофан Исходи. соответствует соответствует соответствует 1,52 соответствует 0,091 5,5 соответствует соответствует

1 год соответствует соответствует соответствует 1,44 соответствует 0,090 5,2 соответствует соответствует

Ламинированная алюминиевая фольга Имунофан Исходи. соответствует соответствует соответствует 1,47 соответствует 0,095 5,1 соответствует соответствует

1 год соответствует соответствует соответствует 1,51 соответствует 0,093 5,3 соответствует соответствует

ПВХ с ламинированной алюминиевой фольгой (ТУ 9467-001-52385883-00) Имунофан Исходи. соответствует соответствует соответствует 1,51 соответствует 0,091 5,7 соответствует соответствует

1 год соответствует соответствует соответствует 1,48 соответствует 0,090 5,5 соответствует соответствует

Требования проекта ФСП Арбидол От 1,34 до 1,47 г. Не должно превышать ±5% для 18 суппозиториев и ±7,5% для 2-х В одном суппозитор ИИ должно быть 50 мг (от 40 мг до 60 мг) арбидола Не более 37°С ГФХ1и Изменение 1 и 3, категория ЗА

Продолжение таблицы 11

1 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 13

ПВХ/ПЭ Арбидол Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,34 соответствует 53,4 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,47 соответствует 53,9 соответствует соответствует

ПВХ/ПВДХ Арбидол Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,42 соответствует 53,7 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,43 соответствует 52,9 соответствует соответствует

Ламинированная алюминиевая фольга Арбидол Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,45 соответствует 53,9 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,35 соответствует 53.6 соответствует соответствует

ПВХ с ламинированной алюминиевой фольгой (ТУ 9467- 001-52385883-00) Арбидол Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,42 соответствует 53,3 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,46 соответствует 52,8 соответствует соответствует

Требования проекта ФСП Ибупрофен От 1,425 до 1,575 г. Не должно превышать ±5% для 18 суппозиториев и ±7,5% для 2-х В одном суппозитор ии должно быть 452 мг (от 400 мг Не более 37°С ГФ XI и Изменение 1 и 3, категория 3 А

до 500 мг ) ибупрофена

Продолжение таблицы 11

1 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 13

ПВХ/ПЭ Ибупрофен Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,52 соответствует 459,9 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,51 соответствует 459,8 соответствует соответствует

ПВХ/ПВДХ Ибупрофен Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,48 соответствует 453,7 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,52 соответствует 459,9 соответствует соответствует

Ламинированная алюминиевая фольга Ибупрофен Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,44 соответствует 458,4 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,52 соответствует 459,6 соответствует соответствует

ПВХ с ламинированной алюминиевой фольгой (ТУ 9467-001-52385883-00) Ибупрофен Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,51 соответствует 453,4 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,48 соответствует 453,8 соответствует соответствует

Требования проекта ФСП Полиоксидоний От 1,425 до 1,575 г. Не должно превышать ±5% для 18 суппозиториев и ±7,5% для 2-х В одном суппозитор ии должно быть 6 мг (от 5,1 мг до 6,9 мг) Полиоксидо ния В одном суппозитор ии должно быть 12 мг (от 10,2 мг до 13,8 мг) Полиоксидо НИЯ Не более 37°С ГФХ1 и Изменение 1 и 3, категория 3 А

Продолжение таблицы 11

1 2 3 5 6 7 8 9 10 И 12 13

ПВХ/ПЭ Полиоксид0-ний Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,52 соответствует 6,3 12,4 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,51 соответствует 6,1 12,2 соответствует соответствует

ПВХ/ПВДХ Полиоксидо-ний Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,52 соответствует 6,3 12,6 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,51 соответствует 6,2 12,4 соответствует соответствует

Ламинированная алюминиевая фольга Полиоксид о-ний Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,48 соответствует 6,4 12,3 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,52 соответствует 6,5 12,2 соответствует соответствует

ГТВХ с ламинированной алюминиевой фольгой (ТУ 9467-001-52385883-00) Полиоксндо-ний Исходи соответствует соответствует соответству ет 1,52 соответствует 6,3 12,5 соответствует соответствует

2 года соответствует соответствует соответству ет 1,48 соответствует 6,2 12,4 соответствует соответствует

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании углубленного изучения и систематизации отечественных и зарубежных научных публикаций, а также анализа более 218 составов суппозиториев отечественного и зарубежного производства, зарегистрированных в РФ, выявлены тенденции развития производства суппозиториев. Установлена целесообразность выбора пальмоядрового масла для получения твердого жира и разработки нормативной документации на него, качество которого соответствует требованиям ведущих фармакопей мира и удовлетворяет требованиям производителей и потребителей. Выявлена целесообразность разработки суппозиториев с иммуномодуляторами и нестероидными противовоспалительными веществами. Показана необходимость разработки первичной контурной ячейковой упаковки для суппозиториев и документации на нее, а так же установки для ее получения.

2. Разработаны биофармацевтические основы технологии лекарственных форм для ректального применения на основе отечественных биотехнологических и синтетических субстанций таких как, иммуномодуляторы и нестероидные противовоспалительные препараты и установлена зависимость между физико-химическими свойствами субстанций, их липофильностью и способом введения в суппозиторную основу. Экспериментально доказана возможность создания стабильных лекарственных форм на основе лабильных субстанций иммуномодуляторов, используя липофильные суппозиторные основы. Показана возможность использования разработанной нами контурной ячейковой упаковки для проведения исследований стабильности создаваемых суппозиториев. Выявленные закономерности позволяют прогнозировать технологию вновь создаваемых суппозиториев с лабильными веществами в малых дозировках.

3. Изучены такие фармацевтических факторы, как дисперсность, кристалличность, полиморфизм субстанций и липофильной основы, что позволило научно обосновать и разработать составы и технологию суппозиториев с полиоксидонием, имунофаном, арбидолом, модифицированным ибупрофеном, интерфероном альфа-2Ь рекомбинантным человеческим в комбинации с эктрактом алоэ.

4. Разработаны метод и режим микронизации ибупрофена на распылительной сушилке, позволяющий получить более чистый по содержанию примесей препарат, что было установлено рентгендифракционным методом анализа. В опытах in vivo выявлена высокая биодоступность микронизированного ибупрофена, превосходящая в 2,5 раза биодоступность исходной субстанции. На примере ибупрофена показано, что для идентификации и стандартизации кристаллических лекарственных веществ необходимо использовать рентгендифракционные методы, с целью получения информации о кристаллическом строении субстанции, состоянии молекул в препарате, полиморфных формах, что позволит создать стабильный и эффективный препарат.

5. Показана целесообразность использования твердого жира, получаемого переэтерификацией пальмоядрового масла, в качестве экономичной и технологичной основы. Проведена оценка его качества с использованием прецизионных, бездеструктивных и безстандартных методов спектрометрии - ЯМР *Н. Показатели его качества гармонизированы в соответствии с требованиями ведущих фармакопей мира и данные исследования вошли в проект ОФС на суппозитории к ГФ XII издания.

6. Методом дифференциальной сканирующей калориметрии выявлено влияние полиморфизма твердого жира на качество суппозиториев с ибупрофеном и имунофаном (твердость, ломкость, стабильность при хранении). Установлена целесообразность и значимость соблюдения температурного режима и продолжительности технологического процесса нагревания и охлаждения при формовании суппозиториев. Рекомендован алгоритм формовки суппозиториев с лабильными фармацевтическими субстанциями, предусматривающий нагревание твердого жира в интервале температур от 55 °С до 60 °С в течение 10 мин, добавление фармацевтических субстанций производить при температуре 40 °С, процесс формования - при температуре около 38 °С, охлаждение следует проводить при температуре около 30 °С, избегая быстрого охлаждения при резком снижении температуры, чтобы предотвратить образование хрупких и ломких суппозиториев.

7. На основании исследования влияния биофармацевтических факторов показана необходимость введения ПАВ и наполнителей в состав суппозиториев с целью повышения их биодоступности и улучшения физико-химических показателей готовых суппозиториев. Установлено в опытах in vitro, что введение натурального эмульгатора в состав «Алоэферона» повышает биодоступность действующих веществ на 25 %, а для ибупрофена показано введение Gelucire 44/14, который обеспечивает высвобождение ибупрофена более 70 % через 10 минут диализа.

8. Установлена возможность использования DART - методик и рентгенструктурных методов для идентификации и определения чистоты лекарственных веществ, что позволит прогнозировать терапевтическую эффективность и безопасность вновь создаваемых лекарственных форм. Рентгеноструктурным методом установлено, что подобранные условия микронизации субстанции ибупрофена позволили получить ибупрофен с меньшим содержанием примесей по сравнению с исходной.

9. Установлена прямая зависимость между диффузией действующих веществ в опытах in vitro и кинетикой всасывания in vivo из суппозиториев. Показано, что по фармакокинетическим параметрам всасывания на животных разработанные ректальные формы превосходят пероральные и соответствуют биодоступности парентеральных лекарственных форм. Доклинические испытания разработанных суппозиториев «Алоэферон» показали их

безопасность, что подтверждено патоморфологнческими и цитологическими исследованиями.

10. Методом спектроскопии - ЯМР 'Н доказано отсутствие взаимодействия лекарственных субстанций с твердым жиром. Выявлено отсутствие взаимодействия между алоэ экстрактом и интерфероном, а комбинация данных субстанций обладает синергидным эффектом. Установлено взаимодействие интерферона альфа -2Ь с тизолем на молекулярном уровне, которое позволило стабилизировать интерферон

альфа-2Ь. Это позволило создать нетоксичный, стабильный в течение двух лет хранения при температуре от 8 °С до 15 °С комплексный препарат «Алоэферон», специфическая активность которого на 40 % выше по сравнению с монопрепаратами. Подана заявка на выдачу патента на изобретение «Полифункциональное комбинированное лекарственное средство для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний» (заявка №

2012127244/15(042401).

11. Разработана и валидирована методика количественного определения алоэ-эмодина методом ВЭЖХ как в сухом экстракте алоэ, так и в суппозиториях на его основе с минимальной погрешностью. Показано, что времена удерживания пиков алоэ-эмодина на хроматограммах испытуемого раствора и стандартного раствора совпадают с точностью более 99 % и отсутствует влияние вспомогательных веществ на результат количественного определения алоэ-эмодина. Подтверждена линейность, так как значение коэффициента корреляции составляет 0,9993.

12. Впервые в стране создано пять лекарственных средств в рациональной форме из которых:

- Суппозитории с полиоксидонием внедрены на ООО «НПО Петровакс фарм». Разработана ФСП 42-8853-07;

- «Имунофан суппозитории ректальные 0,1 мг» внедрены на ООО НПП «Бионокс». Разработана ФСП 42-0027-4879-03;

- Суппозитории с арбвдолом для детей прошли доклинические испытания;

- Суппозитории с ибупрофеном проходят доклинические испытания;

- Суппозитории «Алоэферон» проходят доклинические испытания.

13. Разработана контурная ячейковая упаковка суппозиториев (ТУ 9467-001-52385883-00) и установка для ее получения, которые внедрены на фармацевтических фабриках, выпускающих суппозитории малыми сериями. Методом ЯМР-спектроскопии установлено отсутствие взаимодействия между материалами упаковки и ингредиентами лекарственного препарата. Сравнительное изучение стабильности суппозиториев при хранении показало, что контурная ячейковая упаковка обеспечивает стабильность суппозиториев наравне с современными упаковочными материалами.

Список опубликованных работ.

1. Абрамович, P.A. Разработка технологии и методов анализа ректальных лекарственных форм для детей на основе лекарственных средств из растительного сырья/ P.A. Абрамович, В.М. Щищенко, JI.B. Соллогуб // «Актуальные проблемы фармации» - Москва, 1990. - С. 145-180

2. Создание и исследование детских лекарственных форм / P.A. Абрамович [и др.] // «Актуальные проблемы фармации». - Москва, 1990. -№19770.-С.36-63.

3. Анализ индивидуальной рецептуры суппозиториев и выявление прописей для внутриаптечной заготовки / P.A. Абрамович, В.В. Журко, М.Т. Алюшин, Л.В. Соллогуб// Фармация. - 1993. - №5. - С.43-45.

4. Абрамович, P.A. Ректальные лекарственные формы с препаратами растительного происхождения и методы их анализа / P.A. Абрамович, Л.В. Соллогуб, М.В. Леквешивили // Тез. Конференции «Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств. - М., 1993. - С. 43.

5. Абрамович, P.A. Разработка технологии и методов анализа суппозиториев и ректальных капсул с глицирамом для детей / P.A. Абрамович, Л.В. Солло1уб //Сборник. Актуальные проблемы фармацевтической технологии. Научные труды. - Москва, 1994. - том XXXII.-С.107-112.

6. Абрамович, P.A. Использование методов in vitro для оценки высвобождения теофиллина из суппозиториев с эуфиллином для детей / P.A. Абрамович, Л.В. Соллогуб //Сборник. Актуальные проблемы фармацевтической технологии. Научные труды - Москва, 1994. - том XXXII. -С. 131.

7. Абрамович, P.A. Разработка технологии и методов анализа ректальных лекарственных форм с глицирамом для детей / P.A. Абрамович, Л.В. Соллогуб // Тез. конф. Молодых ученых, посвященной 50-летию НИИФ. -М., 1994.-С. 58.

8. Абрамович, P.A. Создание ректальных лекарственных форм с фитопрепаратами для детей / P.A. Абрамович, Л.В. Соллогуб // Тез. докл. Международного конгресса «Традиционная медицина». Симпозиум фитотерапия. - М., 1994. - С. 96.

9. Абрамович, P.A. Создание и исследование детских лекарственных форм / P.A. Абрамович, Л.В. Соллогуб, Г.С. Киселева // Тез. докл. Росс. Нац. Конгресса. Формирование приоритетов лекарственной политики. - М., 1995. - С.77-78.

10. Абрамович, P.A. Сравнительные биофармацевтические и фармакокинетические исследования суппозиториев с глицирамом в опытах in vivo/ P.A. Абрамович, Л.В. Соллогуб // Сб.ст. Фармацевтическая наука и практика в новых социально-экономических условиях - Москва. - 1997. -С.179-182.

11. Абрамович, P.A. Биофармацевтические исследования вагинальных противогерпесных суппозиториев с алпизарином / P.A. Абрамович, Е.В. Ларионова // Тез. докл. 4-ого Российского нац. Конгресса «Человек и лекарство»,- М., 1997.-С.563.

12. Абрамович, P.A. Детские слабительные суппозитории с антраценпроизводными / P.A. Абрамович, Л.В. Соллогуб // Тез. докл. 4-ого Российского нац. Конгресса «Человек и лекарство». - М., 1997. - С.241.

13. Абрамович, P.A. Технологические и биофармацевтические исследования суппозиториев с рибоксином на основе «Суппорин-М» / P.A. Абрамович, Л.В.Соллогуб, Г.С. Киселева //Современные проблемы фарм. науки и практики: научн. тр. ВНИИФ. - М. 1999. - Т.38,4.1. - С.125-129

14. Сологуб Л.В. Ректальные формы фитопрепаратов /Сологуб Л.В., Абрамович Р. А.// Фармац. вестник, - 1999,- №17. - С. 13.

15. Абрамович, P.A. Разработка технологии и методов анализа вагинальных противогерпесных суппозиториев с алпизарином/ P.A. Абрамович, Е.В.Ларионова// Фармация на современном этапе проблемы и достижения, - 2000, - 4.1 - С.233 - 237.

16. Абрамович, P.A. Биофармацевтическое исследование вагинальных противогерпесных суппозиториев с алпизарином / P.A. Абрамович, Е.В. Ларионова //Тез. докл. 7-го Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» - М.:РЦ «Фармединфо». - 2000. - С.598.

17. Абрамович, P.A. Разработка новых противогрибковых гидрогелей с кетоконазолом и клотримазолом / P.A. Абрамович, H.A. Папазова // Фармация. - М., 2002. - С.23-25.

18. Абрамович, P.A. Перспективы технологий получения новых лекарственных форм с регулируемым высвобождением действующего вещества / Тез. докл. I Международного форума «Здравоохранение, фармация и мединдустрия», - 2002. - С. 159.

19. Абрамович, P.A. Доклиническое изучение безопасности гидрогелей с кетоконазолом и клотримазолом / P.A. Абрамович, H.A. Папазова, И.А. Елагина //«Клинические исследования лекарственных средств». 3-я Международная конференция - М., 2003.- С. 174.

20. Абрамович, P.A. Комбинированные препараты для лечения герпес-вирусных инфекций/ P.A. Абрамович, И.А. Елагина, Н.Д. Львов. //Тезисы международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств». 3-я Международная конференция. - М., 2003.- С.218.

21. Абрамович, P.A. Определение биологической активности гидрогелевых препаратов на основе кетоконазола и клотримазола / P.A. Абрамович, H.A. Папазова // «Антибиотики и фармакотерапия». - М.,2003. -С.183.

22. Абрамович, P.A. Новые подходы в технологии лекарственных препаратов / P.A. Абрамович, И.А. Елагина // Тез. докл. Международной конференции «Новые лекарства». - 2003. - С.85.

23. Абрамович, P.A. Исследование аллергенного действия препаратов «Клотримазол гель для наружного применения 1%» и «Кетоконазол гель для наружного применения 2%»/ P.A. Абрамович, H.A. Папазова // Тезисы 4-й международная конференция «Клинические исследования лекарственных средств». - М., 2004. -С.43.

24. Абрамович, P.A. Разработка новой лекарственной формы с преднизолоном - суппозитории ректальные / P.A. Абрамович, O.A. Ваганова, Е.А. Суворова, Т.Н. Самсонова Т.Н. // Вестник Российского университета Дружбы народов, серия Медицина, специальность Фармация - 2004. - № 4 (28).-С. 188-191.

25. Абрамович, P.A. Исследования по созданию суппозиториев с иммуномодулирующим действием. Вестник Российского университета Дружбы народов, серия «Медицина», специальность «Фармация». -2004. - № 4 (28).-С. 184- 188.

26. Абрамович, P.A. Методические указания по теме: «Разработка технологии и методик контроля качества суппозиториев на основе твердого жира (пархип 250) методом выливания» / P.A. Абрамович, O.A. Ваганова, И.А. Елагина // - М., 2004. - 30 с.

27. Абрамович, P.A. Изучение фармакокинетических параметров имунофана в составе новой лекарственной формы «суппозитории» в сравнении с внутривенным и внутримышечным введением / P.A. Абрамович, О.Г. Степанов, O.A. Ваганова // Тез. докл. «Клинические исследования лекарственных средств» IV-й Международной конференции. - М., 2004,-С.247.

28. Абрамович, P.A. Методические указания по теме: «Биоэквивалентность лекарственных препаратов. Методы изучения и влияния технологических параметров» / P.A. Абрамович, O.A. Ваганова, И.А. Елагина И - М., 2004. - 37 с.

29. Ваганова, O.A. Биоэквивалентность лекарственных препаратов. Методы изучения и влияния технологических параметров / O.A. Ваганова, И.А. Елагина, P.A. Абрамович // Методические указания - Москва, 2004. -37 с.

30. Папазова, H.A. Стандартизация новых противогрибковых гидрогелей / H.A. Папазова, В.Ф. Габитов, P.A. Абрамович // Фармация. 2004. - № 4. - С. 32-34.

31. Создание и исследование в опытах in vivo суппозиториев с метронидазолом / P.A. Абрамович [и др.] // Тез. докл. «Клинические исследования лекарственных средств» IV-й Международной конференции, -М., 2004. С. 159.

32. Папазова, Н. А. Определение биологической активности гидрогелевых препаратов на основе кетоконазола и клотримазола [Текст] / Н. А. Папазова, Н. А. Горбунова, Р. А. Абрамович II Антибиотики и

химиотерапия : Ежемесячный научно-практический журнал. - 2004. - Том 49, N2.-С. 8-10.

33. Абрамович, P.A. Доклинические исследования препаратов с метронидазолом «Дентамет-гель для десен» и «Метровагин-суппозитории вагинальные» / P.A. Абрамович, И.А. Елагина, Ю.А. Кошелев // Тез. докл. Пятой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств», Москва, 13-14 октября 2005. - М., 2005. - С.105.

34. Абрамович, P.A. Гиаферон - новый противовирусный и иммуномодулирующий препарат в суппозиториях / P.A. Абрамович // Тез. докл. Пятой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств», Москва, 13-14 октября 2005. - М., 2005. - С.98

35. Абрамович, P.A. К вопросу изучения безопасности ректальных суппозиториев с тамеритом / P.A. Абрамович, К.А. Дрожжина, М.Т. Абидов // Тез. докл. Пятой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств», Москва, 13-14 октября 2005. - М., 2005. - С.139.

36. Абрамович, P.A. Характеристика и требования к качеству суппозиторных основ / P.A. Абрамович // Депонированная рукопись, «Современные требования к обеспечению качества мягких лекарственных форм», Москва, 20-21 октября 2005. - М., 2005. - С. 158.

37. Доклинические исследования и стандартизация мягких лекарственных форм с метронидазолом / Р. А. Абрамович [и др.] // Антибиотики и химиотерапия : ежемесячный научно-практический журнал. -2005. - Том 50, № 8/9. - С. 27-31.

38. Абрамович, Р. А. Разработка и исследование новой лекарственной формы «Имунофан, суппозитории ректальные, 0,1 мг» [Текст] / Р. А. Абрамович // Российский медико-биологический вестник им. акад. И. П. Павлова. - 2007. - №3. - С. 28-37 .

39. Валидация процессов производства и процессов очистки при производстве мягких лекарственных форм / P.A. Абрамович [и др.] Учебное пособие. М.:изд. РУДН. -2007. -48 с.

40. Изучение биоэквивалентности лекарственных препаратов. Влияние технологических параметров и методический подход при выборе условий определения в биологических объектах / P.A. Абрамович [и др.] // Учебное пособие. -М.:изд. РУДН.- 2007. - 72 с

41. Мягкие лекарственные формы классификация основ. Структурно-реологические характеристики мазей / P.A. Абрамович [и др.] // Учебное пособие. M..-изд. РУДН - 2007. - 39 с.

42. Производство мягких лекарственных форм в условиях GMP / P.A. Абрамович [и др.] Учебное пособие. М.:изд. РУДН. -2007.-60 с.

43. Суппозитории понятие. Суппозиторные основы / P.A. Абрамович [и др.] // Учебное пособие - М.:изд. РУДН - 2007. - 39 с.

44. DART mass spectrometry: a fast screening of solid pharmaceuticals for the presence of an active ingredient, as an alternative for IR spectroscopy / E.S.Chernetsova, P.O.Bochkov, M.V. Ovcharov, S.S. Zhokhov, R.A. Abramovich // Drug Testing and Analysis. - 2010. - V. 2, N 6. -P. 292-294.

45. Чернецова E.C. Масс-спектрометрия DART: быстрый скрининг таблетированных лекарственных препаратов на наличие действующего вещества / Е.С. Чернецова, Р.А. Абрамович // Вестник Росздравнадзора. -2010.-№2.-С. 51-54

46. Chernetsova, E.S. Capabilities of direct analysis in real time mass spectrometry and gas chromatography-mass spectrometry in the mint oil test / E.S. Chernetsova., Yu.Yu. Khomyakov., S.V. Goryainov, M.V. Ovcharov, P.O. Bochkov, G.V. Zatonsky, S.S. Zhokhov, R.A. Abramovich // Mendeleev Communications. - 2010. - V. 20, N 5. - P. 299-300.

47. Чернецова, E.C. Масс-спектрометрия DART: новый подход к установлению состава органических соединений / Е.С. Чернецова, М.В. Овчаров, П.О. Бочков, IO.IO. Хомяков, А.В. Варламов, Р.А. Абрамович // Вестник КазНУ. Серия химическая. -2010. -Т. 60, №4. - С. 286-291.

48. Чернецова, Е.С. Уточнение состава ионов [М+18]+ в масс-спектрах DART полиэтиленгликоля при использовании масс-спектрометрии высокого разрешения / Е.С. Чернецова, М.В. Овчаров, Г.В. Затонский, Р.А. Абрамович, И.А. Ревельский // Масс-спектрометрия. - 2010. - Т. 7, №4. - С. 299-302.

49. Чернецова, Е.С. Сверхбыстрая идентификация низкомолекулярных компонентов лекарственных препаратов методом масс-спектрометрии DART / Е.С. Чернецова, П.О. Бочков, М.В. Овчаров, Г.В. Затонский, Р.А. Абрамович // Масс-спектрометрия - 2010. - Т. 7, №2. - С. 147-149.

50. Чернецова, Е.С. Новый способ скрининга таблетированных лекарственных препаратов на фальсификаты с использованием масс-спектрометрии DART / Е.С. Чернецова, П.О. Бочков, Г.В. Затонский, Р.А. Абрамович // Химико-фармацевтический журнал. -2011.Т.45. №5. - С.50-52.

51. Чернецова, Е.С. Масс-спектрометрия DART: быстрый анализ мягких лекарственных форм / Е.С. Чернецова, Р.А. Абрамович, И.А. Ревельский // Химико-фармацевтический журнал. - 2011. Т.45. №11.- С.49-51.

52. Чернецова, Е.С., Хомяков Ю.Ю., Затонский Г.В., Абрамович Р.А.. О возможностях использования ГХ-МС и масс-спектрометрии DART для обучающих практических занятий по масс-спектрометрии / Е.С. Чернецова, Ю.Ю. Хомяков, Г.В. Затонский, Р.А. Абрамович // Масс-спектрометрия. -2011. - Т.8, №1. - С. 61-62.

53. Абрамович, Р.А. Возможности спектроскопии ЯМР 1Н в определении показателей качества твердых жиров - основы суппозиториев /

Абрамович P.A., C.B. Горяинов, A.H. Воробьев, Г.А. Калабин. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2012 - №9 -С. 13-17.

54. Абрамович, P.A. Изучение влияния эмульгатора на высвобождение глицина и ибупрофена из суппозиториев /P.A. Абрамович, А.Н. Воробьев, И.А. Елагина, Н.И. Синицына // Научные ведомости Белгородского государственного университета серии Медицина. Фармация. - 2012 - №10 (129) Выпуск 18/3. - С.101-104.

55. Воробьев, А.Н. Разработка и фармакокинетические исследования детской лекарственной формы - суппозиториев с арбидолом / А.Н. Воробьев, М.В. Овчаров, О.Г. Потанина, P.A. Абрамович // Российский медико-биологический вестник им. И.П. Павлова. - 2012. -№3. - С. 48-52.

56. Горяинов C.B. Жирнокислотный состав семян Púnica granatum L. из отходов от получения гранатового сока / C.B. Горяинов, Хомик A.C., Калабин Г.А., Вандышев В.В., Абрамович P.A. // Вестник РУДН. Серия Экология и безопасность жизнедеятельности. - 2012.~ № 1.- С. 10-16.

57. Научные подходы к разработке комбинированной лекарственной формы на основе биотехнологической субстанции / P.A. Абрамович, В.А.Быков, И.А. Елагина, H.A. Папазова, А.Н. Воробьев // Антибиотики и химиотерапия. -2012. - Том 57, №1/2. - С. 13-16.

58. Ковалева, С.А. Возможности метода спектроскопии ЯМР в идентификации и контроле качества лекарственных препаратов /С.А. Ковалева, P.A. Абрамович, Г.А. Калабин // Сборник тезисов, Всероссийская молодежная научная конференция «Актуальные вопросы органической химии». - 2012. - С.72.

59. Лобанов, H.H. Исследование структурных особенностей исходных субстанций ибупрофена и влияния микронизации / H.H. Лобанов, Н.С. Хучуа, Ю.А. Обидченко, P.A. Абрамович // Антибиотики и химиотерапия. - 2012 -№ 3-4. - С.3-8.

60. Сапожкова, М.Б. Разработка состава капсул с экстрактом листьев винограда и аскорбиновой кислотой / М.Б. Сапожкова, С.Н. Суслииа, P.A. Абрамович //Естественные и технические науки. - 2012. - №2. - с. 193-195.

61. Экспресс-анализ суппозиториев методом количественной спектроскопии ЯМР 'Н / P.A. Абрамович [и др.] Антибиотики и химиотерапия. - 2012. - № 5-6. - С. 3-6.

Абрамович Римма Александровна (Россия)

Abramovich Rimma Aleksandrovna (Russia)

For the first time for five domestic biotech and synthetic substances (interferon alfa-2b, Imunofan, polioksidony, arbidol and ibuprofen) on the basis of physico-chemical and biopharmaceutical research a technology of suppositories with solid fat was developed. The study of the influence of suppository base, and various other auxiliary substances (surfactants, fillers), route of administration of substances, their physical and chemical properties (including the degree of decomposition) on the kinetics of their release from suppositories. It is shown theoretically and experimentally proved that the optimal basis is solid fat prepared by technological scheme of palm kernel oil and meeting the requirements of regulatory documents developed. The optimal physical and chemical properties and processing characteristics and scientifically based and algorithm of forming suppositories based on studies of the differential scanning calorimetry. The techniques of quantification imunofan and physico-chemical properties of the solid fat by standardless method NMR - spectroscopy. Showed increased specific activity of interferon combined suppositories with aloe and prove their non-toxicity and stability. The absence of interaction between the above mentioned pharmaceutical substances with suppository base was proved. Blisters providing stability developed suppositories and meeting the requirements developed TU 9467-001-52385883-00 was developed.

АБРАМОВИЧ РИММА АЛЕКСАНДРОВНА

ОСНОВЫ РАЗРАБОТКИ И ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ СУППОЗИТОРИЕВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ

СУБСТАНЦИЙ

14.04.01-технология получения лекарств

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Подписано в печать « 21 » декабря 2012 г. Формат 60x84/16 Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная.

Усл. п. л. 3,0. Тираж 100 экз. Заказ № 220

Оригинал-макет подготовлен и тиражирован в издательстве

Типография РУДН

117923,ГСП-1, г. Москва, ул. Орджоникидзе, д.З