Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармацевтический анализ и стандартизация нового местного анестетика из группы ариламидов карбоновых кислот и его лекарственной формы

Б ОД

ПЕН 199';

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ имени И.М.Сеченова

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО МЕСТНОГО АНЕСТЕТИКА ИЗ ГРУППЫ АРИЛАМИДОВ КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ И ЕГО ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ

15.00.02. - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

На правах рукописи

ЩЕПОЧКИНА ОЛЬГА ЮРЬЕВНА

МОСКВА - 1994

Работа выполнена в Московской медицинской академии имени И Сеченова и Научно-исследовательском институте фармаколо: Российской академии медицинских наук.

Научные руководители: доктор фармацевтических наук,

профессор В.И.ПРОКОФЬЕВА кандидат химических наук Б.М.ПЯТИН

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук Н.Н.Дементьева кандидат фармацевтических наук Н.В.Триус

Ведущая организация:

Центр по химии лекарственных средств - ВНИХФИ им. С.Орджс

в часов на заседании специализированного совета Д-074.05.06. Московской медицинской академии им.И.М.Сеченова по адресу: Мое Суворовский бульвар, д. 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской дицинской академии им.И.М.Сеченова (Москва, Зубовская площе

кидзе

Защита диссертации состоится

д.1).

Автореферат разослан

г.

Ученый секретарь Специализированного совета Д-074.05.06. кандидат фармацевтических наук, доцент

Н.П.Садчин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Современная медицина располагает широким спектром лекарственных средств, обладающих местноанестезирующей активностью, самого разнообразного химического строения. Вместе с тем, в настоящее время сохранятеся потребность в расширении ассортимента применяемых препаратов с целью получения более эффективных лекарственных средств, что связано с их широким применением в терапевтической и хирургической практике.

Одним из важнейших направлений современной фармацевтической науки является изучение группы лекарственных средств - местных анестетиков, производных ариламидов карбоновых кислот.

В настоящее время в НИИ фармакологии РАМН разработан оригинальный метод синтеза и изучены фармакологические свойства нового местного анестетика - иминокаина.

Проведенные в НИИ фармакологии РАМН фармакологические исследования показали, что по началу наступления, глубине и продолжительности действия при поверхностной, проводниковой и инфильтра-ционной анестезии иминокаин превосходит тримекаин и новокаин в несколько раз. Кроме того, иминокаин менее токсичен, чем эти препараты.

Постоянное расширение номенклатуры и непрерывно возрастающие требования к качеству лекарственных средств обуславливают необходимость систематического совершенствования методов их анализа.

Разработке методов анализа предшествовало изучение химических и физико-химических свойств оригинального отечественного местного анестетика. Актуальность теш обусловлена необходимостью разработки надежных методов анализа иминокаина на основе его

- г -

свойств с применением современных физико-химических методов, с ладаюпдах высокой избирательностью и эффективностью для субстан1 и лекарственной формы.

Для внедрения препарата в медицинскую практику необход* наряду с фармакологическими испытаниями разработать методы ко* роля его качества и стандартизации и на их основе - норматив! документацию на субстанцию и лекарственную форму.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы явилось изучение химических и фи: ко-химических свойств нового отечественного местного анестетика иминокаина, разработка методик контроля качества субстанции и . карственной формы, стандартизация показателей качества иминою на, разработка проектов Временных фармакопейных статей на су< танцию и лекарственную форму.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить < дующие задачи:

- изучить химические и физико-химические свойства иминокаи; разработать методики их анализа и установить нормы качества;

- изучить спектральные характеристики иминокаина с пома УФ-, ИК-, ЯМР'н-спектроскопии и возможность их использования , подтверждения структуры иминокаина и его ближайших структур аналогов, для идентификации препаратов;

- изучить хроматографическое поведение иминокаина, полуп дуктов его синтеза и возможных продуктов разложения с помощью и ВЭЖХ, разработать методики унифицированного хроматографическ анализа иминокаина по показателям "подлинность" и "посторон примеси" методом ТСХ;

- разработать методики количественного определения иминока в субстанции и лекарственной форме;

/Г >1

»

- з -

- изучить стабильность субстанции и лекарственной формы ими-нокаина в процессе хранения в естественных условиях и установить сроки годности;,

- изучить стабильность лекарственной формы иминокаина в процессе хранения при повышенных температурах и при влиянии различных значений рН, качества натрия хлорида, используемого для создания изотоничности лекарственной формы иминокаина.

Научная новизна.

Впервые проведено комплексное изучение физико-химических свойств оригинального отечественного местного анестетика - иминокаина.

Определены спектральные характеристики иминокаина с использованием методов УФ-, ИК-, ЯМР^Н-спектроскопии. Установлена возможность использования этих методов для определения подлинности иминокаина и его ближайшего структурного аналога - азакаина.

Изучено хроматографическое' поведение иминокаина и его возможных примесных соединений методом ТСХ. Выбраны оптимальные условия разделения и идентификации иминокаина и возможных примесных соединений, оценки чистоты препарата. Показана возможность использования ВЭЖХ для разделения группы местных анестетиков, производных ариламидов карбоновых кислот в одной пробе, а также использование этого метода для идентификации изучаемых препаратов.

На основании изучения спектральных характеристик иминокаина разработана методика количественного определения иминокаина в лекарственной форме с помощью метода УФ-спектрофотометрии.

Результаты оптимизации • условий хроматографического анализа иминокаина методом ВЭЖХ легли в основу разработки методики количественного определения препарата в лекарственной форме.

Изучена стабильность субстанции и лекарственной формы имино-

каина в процессе хранения в естественных условиях, при повышен» температуре и различных значениях рН, а также влияние тяжелых м< таллов, содержащихся в натрия хлориде, используемом для пригото] ления лекарственной формы иминокаина.

На основании проведенных исследований разработаны методш контроля и установлены нормы качества иминокаина и его лекар< твенной формы.

Практическая значимость. Разработаны методики аналитическо) контроля и установлены показатели качества нового местного ане( тетика - иминокаина и его лекарственной формы - 1% раствора д. инъекций.

Практические результаты исследований реализованы в подгото] ленных проектах ВФС на субстанцию и лекарственную форму иминока! на.

Апробация работы. Основные результаты выполненной работы Д( ложены на межлабораторных конференциях НИИ фармакологии РА1 (1992-1994 гг.), конференции молодых ученых, посвященной 50-лет; НИИ фармации (1994 г.), межкафедральной научно-практической ш ференции фармацевтического факультета ММА им.И.М.Сеченова.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтиче! ких наук. Диссертационная работа выполнена в рамках НИР "Ком: лексная оценка лекарственных средств физико-химическими методам: Фармацевтический анализ. Фармакокинетика" по планам научного о вета ММА им. И.М.Сеченова. Номер гос.регистрации 0190040015.

Публикации результатов исследования. По теме диссертаци: опубликованы 4 печатных работы и 1 сдана в печать.

На защиту выносятся:

- результаты изучения химических и физико-химических свойс иминокаина;

- разработанные методики идентификации иминокаина в субстанции и лекарственной форме с помощью различных физико-химических методов (УФ-, ИК-, ЯМР-спектроскопия, ТСХ, ВЭЖХ);

- разработанные методики определения количественного содержания иминокаина в субстанции и лекарственной форме;

- результаты изучения стабильности субстанции и лекарственной формы иминокаина при хранении в естественных условиях и при воздействии различных факторов (температуры,рН, примесей тяжелых металлов).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, четырех глав экспериментальных исследований и списка литературы, приложений. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста, содержит 38 рисунков и 36 таблиц. Список литературы включает 195 источников, из которых 130 - отечественной литературы и 65 - на иностранных языках. Л ■

Во введении раскрыта актуальность теш, определены цели и>\: задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы. !

В первой главе на основании литературных данных критически^, рассмотрены основные направления и особенности исследования лекарственных средств, обладающих местноанестезирующей активностью, обобщены методы контроля качества. Показано, что для их анализа широко применяются спектральные и хроматографические методы анализа.

Вторая глава посвящена разработке методик определения подлинности, изучения химических" и физико-химических свойств иминокаина, спектроскопических характеристик и хроматографического поведения иминокаина и его ближайшего структурного аналога - азака-

ина, а также разработке методик количественного определения иминокаина в субстанции.

В третьей главе описаны результаты разработки методик ВЭЖХ для анализа месгноанестезирующих препаратов, производных арилами-дов карбоновых кислот (пиромекаин, тримекаин, азакаин, иминокаин, лидокаин) и методики количественного определения иминокаина в лекарственной форме.

В четвертой и пятой главах представлены результаты анализа качества лекарственной формы иминокаина и изучения ее стабильности в процессе хранения в естественных условиях, при повышенной температуре, различных значениях рН.

1. Изучение физико-химических свойств иминокаина. Разработка

В настоящее время в НИИ фармакологии РАМН разработан ориги-налый способ синтеза иминокаина - нового отечественного оригинального местного анестетика и изучена его фармакологическая активность. По химическому строению иминокаин представляет собой мезидид „С -гексаметилениминопропионовой кислоты гидрохлорид:

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

методик анализа.

Фармакологические исследования показали, что иминокаин при проводниковой анестезии в экспериментах на мышах превосходит по началу наступления, глубине и продолжительности действия тримека-ин и новокаин более, чем в 2,5-7 раз, а в экспериментах на кроликах вызывает в 1,7 раза более глубокую и почти в 7 раз более длительную анестезию по сравнению с новокаинои и действует длительнее тримекаина в 2,5 раза. Иминокаин высокоактивен при инфильтра-ционной и проводниковой анестезии. Помимо этого, он имеет относительно низкую токсичность - в 1,2-1,5 раза менее токсичен, чем тримекаин и новокаин.

Строение иминокаина подтверждено данными элементного анализа и физико-химическими характеристиками (УФ-, ИК-, ЯМР*Н-спектрос-копии), показана хроматографическая однородность иминокаина с помощью метода хроматографии в тонком слое. С помощью ИК- и ЯМР-спектроскопии показана возможность различать иминокаин и его ближайший структурный аналог - азакаин. Данные представлены в т.1.

Таблица 1

Основные спектральные характеристики иминокаина и азакаина

Иминокаин Азакаин УФ-спектр 0,004% раствора - крутонис- 0,003% раствора в области падающая кривая, имеющая от 240 до 400 нм имеет неперегиб в области 260-264 большое плечо при длинах нм волн от 257 до 264 нм

Функциональная группа (у) -ЫН- амидная

ИК-спектр наблюдаемая частота, см'

3120-3140

3110-3150

8 - Продолжение таблицы 1

Функциональная —1 Наблюдаемая частота, см

группа иминокаин азакаин

третичный атом азота 2940 2959

гетероциклического 2942 2958

цикла амидный карбонил 1680 1672

- N - С -1 и Н 0 1679 1671

( У ) - сн = сн - 1535 1532

ароматическая 1540 1535

ЯМР1Н-спекр Хим. сдвиг, м.д. ¿Г-шкала

Протоны иминокаин азакаин

- Ш-НС1 10,25 уширенный сигнал 10,46

ароматические протоны 6,89 синглет 6,91

- Л-СН- гетероцикла 4,41-4,48 мультиллет 4,19-4,29

- м-сн2 3,36 мультиплет 2,85-3,59

ърф*- ^СНз 2,23 синглет 2,23

СН3 2,12 синглет 2,12

- СН2- СН2 - 1,77-2,03 остатка пиперидина

мультиллет бутильного радикалг 1,12-1,99 мультипле

- СН2- СНз - J = 6,7 Гц бутильного радикале

1,65 дублет Л=6,9 Гц 0,90 триш

Рис. 3. ЯМР'Н - спе::тр азахаина

Рис. ЛМР1?! -спектр иминокаина

- И -

Анализированные образцы субстанции иминокаина по внешнему виду представляют собой белые мелкокристаллические порошки, растворимые в воде, легко растворимые в спирте этиловом 95%, нерастворимые в эфире и ацетоне. Температура плавления от 219°до 225° С (интервал не более 1°С).

Для идентификации препарата предлагаем применять методы ИК, УФ, ЯМР-спектроскопии, хроматографию в тонких слоях сорбента и высокоэффективную жидкостную хроматографию, а также проводить реакции на хлориды, осаждения общеалкалоидными осадительными реактивами и комплексообразования с кислотными индикаторами. Наибольшей селективностью в ряду аридамидов карбоновых кислот местноа-нестезирующего действия обладает реакция взаимодействия бромтимо-лового синего с водными растворами местных анестетиков (пиромека-ин, тримекаик, азакаин, иминокаин) после экстракции их в хлороформ. Предел обнаружения 1'105 г/мл.

Таблица 2

Результаты взаимодействия водных растворов анестетиков с раствором бромтимолового синего

Вещество рН водного цвет водного цвет органической

раствора слоя фазы

анестетика

Азакаин 5,62

Иминокаин 5,60

Пиромекаин 4,85

Тримекаин 5,30

серо-коричневый темно-зеленый желтый желтый

малиновый ж'елтый

желто-зеленый изумрудно-зелено-коричневый с зеленой флуоресцен.

Исследована хроматогра^ическая подвижность иминокаина методом хроматографии в тонких слоях сорбента в нескольких системах растворителей, которые достаточно хорошо разделяют основное вещество и возможные примеси - мезидин (2,4,6-триметиланилин) и ме-зидид^-бромпропионовой кислоты, являющиеся полупродуктами синтеза

или продуктами гидролитического разложения иминокаина.

В качестве подвижных фаз для наших исследований наиболее подходили следувдие три: 1) бензол-этилацетат-диоксан-конц. раствор аммиака (21:6:1:0,1); 2) толуол-ацетон-конц. раствор аммиа! (25:5:0,02); 3) хлороформ-конц. раствор аммиака (50:0,15). Разделение проводили на различных сорбентах - Силуфол УФ-254, Сорбфил Силидел и Кизельгель.

Таблица 3

Изучение хроматографической подвижности иминокаина и его возможных примесей на различных хроматографических пластинках

Вещество Сорбент Толуол-ацетон- хлороформ- бензол-зтил-

конц.р.аммиака конц.р-р ацетси-диок-

(25:5:0,02) аммиака сан-к.р.амм.

(50:0,15) (21:6:1:0,1)

Иминокаин Силуфол УФ-254 0,36 0,45 0,43

Сорбфил 0,50 0,47 0,50*

Силицел 0,66 0,47 0,65*

Кизельгель 0,54* 0,74* 0,42*

Примесь 1 Силуфол УФ-254 0,46 0,73 0,64

(проявл. Сорбфил 0,55 0,61 0,59

в парах Силицел 0,85 0,82 0,81

иода) Кизельгель 0,47 0,72* 0,60

Примесь 2 Силуфол УФ-254 0,41 0,53 0.70

(проявл. Сорбфил — — —

в УФ-све- Силицел — — —

те) Кизельгель 0,64 0,80 0,65

Примечание, а - наблюдается сильный "хвостовой эффект".

Исследования показали, что при нанесении раствора иминокаина в абсолютном спирте или метаноле, в количестве, эквивалентном 100 мкг иминокаина, 0,4и 4 мкг мезидина и мезидида ^.-бромпропионовой кислоты соответственно, наблюдается в ходе хроматографирования хорошее разделение в 1 системе растворителей на пластинках Силу-фол УФ-254 (рис.5). Таким образом, для определения подлинности и оценки чистоты иминокаина нами выбрана система состава бен-зол-зтилацетат-диоксан- конц. раствор аммиака (21:6:1:0,1) как наиболее оптимальная.

Для обнаружения пятен иминокаина и возможных примесных соединений использовались различные способы обнаружения. При этом показано, что самая высокая чувствительность обнаружения мезидида (¿-бромпропионовой кислоты достигается при детектировании УФ-светом при длине волны 254 нм,мезидина и иминокаина в парах иода (табл.4)

Таблица 4

Чувствительность обнаружения иминокаина и его возможных примесных соединений при различных способах детектирования (в мкг)

Вещество УФ-свет, 254 нм пары иода 0,1% раствор перман-

ганата калия в ацетоне (1:1)

• Иминокаин • 3 0,01 0,2

Мезидин не проявляется 0,07 0,04

Мезидид с1-бромпро-пионовой

кислоты 0,5 не проявляется

В результате проведенных исследований обнаружено, что в 1 мкг субстанции проанализированных серий не содержится указанн примесей. Разработанная методика включена в проект ВФС на суб танцию иминокаина в разделы "Подлинность" и "Посторонние примес Кроме того, в субстанции обнаруживается примесь неидентиф дарованного строения со значением ИГ около 0,51, количество к торой не превышает 0,1% при сравнении с СОВС иминокаина. Анал гично зарубежным НТД считаем возможны« нормировать в препарате разделу "Посторонние примеси" не более 0,1% примеси.

© О

© ф

О

12 3 4 5

Рис 5. Хроматограмма субстанции иминокаина и возможных примесей к разделу "Посторонние примеси"

1 - свидетель (СОВС) иминокаина (0,1 мкг);

2 - иминокалн (испытуемый раствор). (100 мкг);

3 - модельная смесь иминокаина и возможных при-

месных соединений;

4 - мезидин (0,4 мкг);

5 - мезидид сА.-бромпропионовой кислоты (4 мкг).

Сочетание эффективности разделения с высокой чувствительностью метода ВЭЖХ позволяет применять его для решения ряда задач в области фармацевтического анализа. Нами метод ВЭЖХ был использован для разделения ариламидов местноанестезирующего действия (иминокаин, азакаин, пиромекаин, тримекаин, лидокаин) с целью их идентификации.

Исследования проводили на жидкостном хроматографе Beckman System Gold модель 166, оснащенном УФ-детектором с переменной длиной волны. Аналитическая длина волны 240 нм.

Результаты исследования показали, что при использовании готовой стальной колонки размером 250 х 4,6 мм, упакованной сорбентом Ultrasphere Сд,с размером частиц 5 мкм, оптимальное разделение исследуемых веществ наблюдается в подвижной фазе состава: ацето-нитрил - фосфатный буфер (65:35) (рН 6,8). Скорость потока - 1 мл/мин, объем пробы - 2 мкл. Хроматограмма модельной смеси представлена на рис.6. Методика может быть использована для идентификации иминокаина по времени удерж.<ивания (около 10 мин).

Рис.6. Хроматограмма модельной смеси пяти местных анестетиков

9 Й

I

О

в системе растворителей ацетонитрил - фосфатный буфер. (65:35) (рН 6,8) 1,21 мин ¡

1-лидокаин = 3,43 мин);2-азакаин 5,24 мин);

3 - тримекаин (^3= 8,84 мин); 4 - иминокаин 10,22 мин); 5 - пиромекаин (1к5= 11,21 мин).

Количественное определение иминокаина как соли органическое основания проводили методом кислотно-основного титрования в дву. вариантах - в среде уксусного ангидрида и муравьиной кислот (30:2) и кислоты уксусной ледяной и 5% раствора ртути окисно ацетата (25:5). Конец титрования определяли с помощью индикатор - кристаллического фиолетового и потенциометрически.

При количственном определении в среде кислоты муравьиной уксусного ангидрида наблюдается более четкий переход окраски ин дикатора от фиолетового к желтому, так как кислота муравьиная яв ляе^-тся ассоциирующим реагентом и исключается использование раст вора ртути окисной ацетата. Методика включена в проект В$С.

Изучены физико-химические и химические свойства иминокак на.Такие показатели, как "растворимость", "прозрачность раствс ра", "цветность раствора", "рН", "сульфатная зола", "тяжелые ые таллы", "потеря в массе при высушивании" определяли в соответс твии с требованиями ГФ XI издания.

Таблица 5

Нормы качества иминокаина гидрохлорида (субстанции)

Показатели качества Нормы качества

Внешний вид Белый мелкокристаллический порошоь

Потеря в массе при высушив. не более 0,5%

Посторонние примеси, ТСХ не более 0,1%

Температура плавления от 219°до 225°С (интервал не более

Iе С)

Количественное содержание не менее 99,0% в пересчете на сухс

вещество

Изучена стабильность иминокаина в процессе хранения в естественных условиях. Оценку качества препарата проводили по всем показателям качества проекта ВФС. Исследования показали, что препарат стабилен в течение 3 лет.

2. Аналитический контроль качества лекарственной формы

иминокаина.

Фармакологические исследования показали высокую активность иминокаина в 1% водном растворе. В связи с этим в опытно-технологическом отделе НИИ фармакологии РАМН разработан состав лекарственной формы иминокаина.

Качество лекарственных форм определяли по фармакопейным методикам. Растворы должны быть прозрачны, бесцветны, рН 4,5-6,0 (потенциометрически).

Для проведения оценки чистоты разработана методика хроматографии в тонких слоях сорбента. Хроматографический анализ изотонических растворов проводили после упаривания на роторном испарителе досуха. Сухой остаток растворяли в абсолютном спирте или метаноле и фильтровали. На линию старта пластинки Силуфол УФ-254 наносили спиртовые извлечения в объеме, эквивалентном 100 мкг иминокаина. Далее поступали по методике оценки чистоты субстанции.

Результаты хроматографирования показали наличие дополнитель-.ного пятна примеси неиденгифицированного строения с И* около 0,51 из субстанции. Количество ее не должно превышать 0,1% при сравнении с СОВС иминокаина. Количество всех примесей в сумме должно/ быть не более 1%.

Количественное определение проводили методом спектрофотометр рического анализа при длине волны 262 нм. Несмотря на то, что УФ-спектр иминокаина нехарактерен, представляет собой крутониспа-дающую кривую с небольшим перегибом в области 260-264 нм, этот, метод позволяет определять количественное содержание препарата .-в

лекарственной форме достаточно точно. Ошибка определения не более ±1,5%. Отмечена высокая воспроизводимость результатов. Методике включена в проект ВФС.

3. Разработка методик высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа местноанестезирующих препаратов, производных ариламидов карбоновых кислот.

Изучены закономерности изменения основных хроматографически параметров - коэффициентов емкости и эффективности - местны анестетиков в зависимости от состава и соотношения компоненте подвижных фаз.

Установлены оптимальные условия хроматографирования местноа нестезирующих препаратов из группы ариламидов карбоновых кислот разработана методика количественного определения иминокаина в ле карственной форме с использованием внешнего стандарта, в качестЕ которого использовался образец субстанции, отвечающий всем норме качества проекта ВЯС.

С целью построения калибровочных графиков нами был устано! лен интервал линейной зависимости высот пиков изучаемого соедин« ния от его концентрации, который составил 0.1 - 1,0 мг/мл.В вы( ранном интервале концентраций строили калибровочнй график иминс каина.

Разработка методики ВЭЖХ-анализа проводилась нами на обра; цах инъекционных растворов 17. иминокаина, изготовленных опы: но-технологическим отделом НИИ фармакологии РАМН и выполнена лаборатории Государственного комитета РСФСР санитарно-эпидемиол гического надзора Российского республиканского информационно-ан литического центра.

Для решения поставленной задачи использовалась методика ВЗЖХ в режиме обращенных фаз на жидкостном хроматографе Beckinan System Gold (модель-166) и стальной колонке с сорбентом Ultrasphere Су (250 х 4,6), 5 мкм; элюент - ацетонитрил - фосфатный буфер (65:35)(pH 6,8); скорость потока элюента - 1,0 мл/мин; объем пробы - 2 мкл; аналитическая длина волны УФ-детектора 240 нм.

Для оптимального извлечения иминокаина из лекарственной формы нами использовался хлороформ после подщелачивания концентрированным раствором аммиака водных растворов иминокаина.

Наличие вспомогательных веществ в лекарственной форме не мешает определению иминокаина в выбранных условиях анализа. Об этом свидетельствует отсутствие дополнительных пиков на хроматограммах модельной смеси "плацебо".

Относительная ошибка определения по разработанной методике не превышает ± 2%.

о S 10

Рис. 7. Хроматограмма серийного образца инъекционного

раствора иминокаина.

4. Изучение стабильности лекарственной 4юрмы иминокаина.

Нами изучена стабильность инъекционных растворов иминокаина в процессе хранения в естественных условиях и методом "ускоренного старения" при температурах 40' 60? 80"С и различных значени-.^ ях рН, а также изучено влияние тяжелых металлов, содержащихся в

натрия хлориде, используемом для приготовления лекарственной фор

На стабильность химических структур оказывают влияние тяже лые металлы. Среди возможных примесных элементов лекарственна средств условно выделяют токсичные элементы (кадмий, свиней ртуть) и элементы, активно катализирующие разложение действующи веществ (медь, цинк, железо). Они должны подвергаться контролю первую очередь. Метод атомно-абсорбционной спектроскопии являете универсальным и характеризуется достаточной точностью для опреде ления ионов металлов, встречающихся в фармацевтических препарг тах, поэтому он был использован в наших исследованиях.

Оптимальную высоту просвечиваемой зоны над основанием горе; ки определяли по эталонам, содержащим максимальное количеси элементов. Определение проводили распылением растворов в воздуп но-ацетиленовое пламя. Учитывая тип пламени, концентрацию эталон ных растворов, а также оптимальную высоту просвечиваемой зош подобрали оптимальные условия анализа для каждого из определяем элементов. Условия атомно-абсорбционного определения примесей тяжелых металлов представлены в табл. 6.

Таблица 6

Условия атомно-абсорбционного определения примесей тяжелых металлов

Элемент Длина волны, Ширина щели Ток лампы, Позиция лампы нм мА

Медь 324,8 0,5 4 1

Цинк 213,9 1,0 5 4

Железо 248,3 0,2 5 3

Свинец 283,3 0,5 5 4

Кадмий 228,8 0,5 4 2

Время измерения - 1 сек

В оптимальных условиях выполнили анализ двух образцов натрия хлорида квалификации осч и хч и воды дистиллированной методом градуировочного графика, используя в качестве эталонов растворы, содержащие только определяемые элементы (цинк, медь, свинец, железо, кадмий).

Для проведения проверки мешающего определению влияния других ионов, присутствующих в воде, те же образцы проанализировали с добавлением модификатора. Результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7

Концентрация изучаемых элементов (мкг/мл) в образцах натрия хлорида различной квалификации и воде дистиллированной

Образец Си 7п Ре РЬ Сй

без мод. с модиф.без мод.с модиф.без мод. без мод.с модиф.

Вода 0,132 0,107 1,939 0,115 0,000 0,021 0,032 дистил.

Натрия 0,042 0,040 2,501 0,605 4,000 0,961 0,074 хл. осч

Натрия 0,026 0,006 3,035 0,374 3,588 0,343 0,541 хл. хч'

Ранее разработанные методики ТСХ использовались для анализа чистоты изучаемых образцов 1% водных растворов, приготовленных на натрия хлориде квалификации осч и хч. Установлено, что количество примесеей на хроматограммах зависит от качества используемого натрия хлорида. Показано, что наименьшее количество примесей образуется при приготовлении лекарственной формы на натрия хлориде квалификации осч, который содержит меньшее количество примесей тяжелых металлов (особенно свинца и цинка), которые катализируют процессы разложения в лекарственной форме иминокаина.

В дальнейшем изучалось влияние повышенной температуры и рН на стабильность инъекционных растворов иминокаина. Исследуемые растворы приготовлены из субстанции анестетика, не содержащей продуктов окисления (хроматографический анализ) на свежеперегнан-ной дистиллированной воде, с использованием натрия хлорида квалификации осч для создания изотоничности. Образцы помещали в климатические камеры и хранили при 40, 60, 80°С в течение 6 недель.Через каждые 2 недели определяли количественное содержание препарата методом УФ-спектрофотометрии и наличие посторонних примесей по методике ТСХ.

В процессе хранения растворов методом "ускоренного старения" происходит уменьшение количественного содержания препарата и накопление продуктов разложения. Разложение иминокаина возрастает с увеличением температуры, однако, разложение происходит медленнее в интервале значений рН 3,0-3,5.

Уменьшение содержания анестетика происходит медленно. Через 864 ч хранения растворов анестетика при 80сС уменьшение его концентрации происходит на 2,04% от исходного содержания препарата в растворе без натрия хлорида и на 7,16% в растворе с натрия хлоридом. При 60°С за этот же период концентрация уменьшается на 0,25% и 0,29% соответственно. При 40°С - на 0,16% и 0,27% соответствен

Кинетические параметры реакции разложения мезидида^гексаме-тилениминопропионовой кислоты гидрохлорида рассчитывали по уменьшению его концентрации к исходному. Исследования зависимости логарифма текущей концентрации и обратной величины текущей концентрации иминокаина от времени показало, что они носят линейный характер, следовательно, реакция разложения препарата характеризуется нарушенным порядком реакции, поэтому константа скорости реакции рассчитана по уравнениям скорости химической реакции 1 и I порядка, которые увеличиваются с повышением температуры хранения, причем в изотонических растворах скорость протекания реакции выше, что может свидетельствовать о катализирующем влиянии примесе) тяжелых металлов на разложение иминокаина.

Зная кинетические параметры реакции, можно определить изменение количественного содержания препарата в процессе хранения при любых температурах и сроках годности.

Параллельно проводили изучение стабильности иминокаина в естественных условиях по следующим показателям: внешний вид, прозрачность , цветность, рН (потенциометрически), посторонние примеси (методика ТСХ), количественное определение (спектрофотометричес-ки). Показано соответствие качества по всем показателям в течение 3 лет хранения. Наблюдения за стабильностью препарата продолжаются. Разработанные методики включены в проект В$С на 1% изотонический раствор иминокаина для инъекций.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучены химические и физико-химические свойства иминокаина, спектральные характеристики методами УФ-, ИК-, ЯМР-спектрос-копии, подтверждена структура иминокаина и ближайшего структурного аналога - азакаина, показана возможность их идентификации этими методами.

2. Разработаны методики идентификации и оценки чистоты с применением метода хроматографии в тонком слое.

3. Предложены методики количественного определения методом кислотно-основного титрования в среде неводных растворителей иминокаина с индикаторным и потенциометрическим установлением конца титрования.'

4. Разработаны методики внутригруппового разделения местноа-нестезирующих препаратов, производных ариламидов карбоновых кислот и количественного определения иминокаина в лекарственной форме в режиме обращенных фаз методом ВЭЖХ.

5. Разработаны методики аналитического контроля качества 17. раствора иминокаина для инъекций. Показано, что предложенная методика ТСХ позволяет адекватно оценивать качество иминокаина и азакаина и опредедлять продукты деструкции иминокаина; изучена

стабильность 1% раствора иминокаина в процессе хранения в естественных условиях, определен срок годности.

6. Изучена стабильность инъекционных растворов иминокаина в процессе хранения при повышенных температурах и при воздействии примесей тяжелых металлов, содержащихся в натрия хлориде и воде дистиллированной, используемых для приготовления лекарственной формы иминокаина, а также при различных значениях pH.

7. На основе результатов экспериментальных исследований разработаны проекты ВФС на субстанцию иминокаина и 1% раствор иминокаина для инъекций.

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЩИЕ РАБОТЫ:

1. Хроматографическое изучение нового местного анестетика иг группы арилалкиламинов карбоновых кислот/ О.Ю.Щепочкина, О.А.Михайлова, О.Б.Степаненко, Б.М.Пятин, В.И.Прокофьева// Проблем! фармации, подготовки и использования провизорских кадров: Тез, докл. респ. научн. конференции по фармации и фармакологии.-Пятигорск, 1993.- С. 193-194.

2. Щепочкина О.Ю., Черепанова Е.А., Михайлова O.A. Хроматог рафическое изучение стабильности нового местного анестегика//Кли нические и экспериментальные исследования в медицине: Тез. докл 90-ой конференции СНО ММА и итоговой конференции Российского кон курса студенческих научных работ.- Суздаль, 1993.- С. 143.

3. Анализ инъекционных растворов нового местного анестетю методом ВЗЗКХ/ Х.Баджали, О.Ю.Щепочкина, А.Б.Белов, Т.В.Чернике ва//Актуальные вопросы медицины: Тез. докл. Всерос. студенческс конф., поев. 50-летию АМН.- Москва, 1994.- 4.1.- С. 21.

4. Изучение стабильности инъекционных растворов нового мее ного анестетика/Л.В.Симакова,О.Ю.Щепочкина,O.A.Михайлова,В.И.Пр кофьева, Ю.Г.Ивасько//Актуальные вопросы медицины: Тез. докл.Вс рос. студ. конф.,поев. 50-летию АМН.- Москва,1994.-Ч.П.- С.118-