Фитохимическое изучение корневища имбиря аптечного и разработка сухого экстракта на его основе

Харчилава, Иа Автандиловна

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фитохимическое изучение корневища имбиря аптечного и разработка сухого экстракта на его основе

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Харчилава, Иа Автандиловна Москва 2011 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Фитохимическое изучение корневища имбиря аптечного и разработка сухого экстракта на его основе

На правахрукописи

ХАРЧИЛАВА ИА АВТАНДИЛОВНА

ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КОРНЕВИЩА ИМБИРЯ АПТЕЧНОГО И РАЗРАБОТКА СУХОГО ЭКСТРАКТА НА ЕГО

ОСНОВЕ

14.04.02. - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 2 МАЙ 2011

МОСКВА-2011

4844970

Работа выполнена в ГОУ ВПО Первый Московский Государственный Медицинский Университет имени И.М. Сеченова Научный руководитель:

Доктор фармацевтических наук,

профессор Нестерова Ольга Владимировна

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор

Доктор химических наук, профессор

Казьмина Эма Максимовна Прокопов Алексей Александрович

Ведущая организация:

ФБГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения»

Защита состоится «фу> 2011 г в 14 часов на заседании

Диссертационного совета Д.208.040.09 при Первом Московском Государственном Медицинском Университете имени И.М. Сеченова по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной медицинской библиотеке Первого Московского Государственного Медицинского Университета имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, 49.

Автореферат разослан « ^ Л 2011 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д.208.040.09, доктор фармацевтических наук, профессор

Наталья Петровна Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Лекарственные средства растительного происхождения занимают важное место среди препаратов, применяющихся при различных заболеваниях человека. Актуальность использования таких препаратов значительно возросла в последние десятилетия, особенно в связи с ростом токсикоаллергических заболеваний, связанных с лечением синтетическими средствами. Исследования последних лет показывают, что своими целебными свойствами лекарственные растения обязаны оптимальному соотношению содержащихся в них биологически активных веществ, имеющих эволюционно и генетически большее сродство с организмом человека, чем синтетические средства. Лекарственные средства растительного происхождения, оказывающие терапевтическое и регуляторное действия, влияют на обменные процессы в организме, повышают его защитные свойства и фагоцитарную деятельность лейкоцитов.

Растительные препараты наиболее полно отвечают современным медико-биологическим требованиям, т.к. обладают высокой эффективностью, хорошей переносимостью в терапевтических дозах, большим диапазонам лечебных свойств, что позволяет использовать их для всех возрастных групп в качестве средства для симптоматического и профилактического лечения.

Преимуществом производства галеновых препаратов является также их относительная экологическая безопасность.

На основании вышеизложенного, актуальным остается вопрос фитохимического изучения лекарственного растительного сырья (ЛРС), получения из него комплекса биологически активных веществ для дальнейшего внедрения в фармацевтическую практику. Одним из интересных для изучения растений является имбирь аптечный - Zingiber officinale Roscoe, Zingiberaceae L., известный в народной медицине своими целительными свойствами.

По данным литературных источников имбирь расширяет кровеносные сосуды, уменьшает вязкость крови, снижает уровень холестерина, стимулирует

сердечную деятельность. Препараты корня имбиря оказывают противовоспалительное действие. Имбирь активизирует пищеварение, улучшает желчеотделение, снимает кишечные спазмы. Корневища имбиря содержат сложную смесь фармакологически активных веществ. Содержащиеся в имбире 6-гингерол и 6-шогаол имеют жаропонижающую, обезболивающую, противовоспалительную, противокашлевую и гипотензивную активность. Результаты исследования in vitro свидетельствуют о том, что активные вещества, входящие в состав имбиря, способны угнетать метаболизм арахидоновой кислоты как по циклооксигеназному, так и по липооксигеназному пути, т.е. действовать по принципу нестероидных противовоспалительных средств (НПВС). Исходя из вышесказанного, сырье -корневища имбиря аптечного представляют особый интерес для фитохимического и фармакологического исследования.

Цель исследования

Цель настоящей работы - фитохимический анализ корневища имбиря аптечного, разработка технологии получения экстракта сухого, стандартизация лекарственного растительного сырья и экстракта сухого, а также изучение возможности введения экстракта в мягкую лекарственную форму - гель.

Для достижения указанной цели необходимо решить следующие задачи:

• определить показатели качества лекарственного растительного сырья;

• предложить методики качественного и количественного определения биологически активных веществ корневища имбиря аптечного; разработать проект фармакопейной статьи (ФС);

• предложить оптимальные условия экстракции биологически активных веществ (БАВ) из корневища имбиря аптечного;

• разработать показатели качества для экстракта имбиря аптечного сухого; разработать проект фармакопейной статьи (ФС);

• изучить возможность введения экстракта сухого в мягкую лекарственную форму - гель.

Научная новизна работы

Информационно-аналитическими исследованиями доказана

необходимость получения стандартизованного фитопрепарата на основе корневища имбиря аптечного для противовоспалительного и антибактериального применения в лечебной практике.

На основании макро- и микроскопического анализа установлены значимые диагностические признаки сырья имбиря аптечного.

Физико-химическими методами охарактеризован качественный состав биологически активных веществ корневища имбиря аптечного и экстракта сухого. Дана количественная оценка содержания биологически активных веществ, в исходном сырье и экстракте сухом.

Установлены закономерности извлечения экстрактивных веществ из растительного сырья в зависимости от степени измельчения сырья, типа экстрагента, соотношения «сырье-экстрагент». Подобраны условия анализа БАВ по которым произведена стандартизация сырья и экстракта сухого.

Рассмотрена возможность введения сухого экстракта в мягкую лекарственную форму. Разработаны проекты отечественных нормативных документов (НД) на ЛРС и экстракт.

Практическая значимость работы

На основании проведенных исследований предложены:

• Современные методики стандартизации корневища имбиря аптечного и экстракта имбиря аптечного сухого',

• Проект ФС «Корневища имбиря аптечного» и «Экстракт корневища имбиря аптечного сухой»;

• Технология получения экстракта имбиря аптечного сухого;

• Мягкая лекарственная форма на основе экстракта имбиря аптечного сухого.

Основные положения, выносимые на защиту

• результаты исследований по качественной и количественной оценке БАВ имбиря аптечного и получаемого из него экстракта сухого;

• результаты исследований по разработке технологии получения экстракта сухого, включая установление закономерности выхода БАВ в зависимости от степени измельчения сырья, вида экстрагента, соотношения «сырье-экстрагент»;

• результаты исследований по установлению критериев качества и норм содержания БАВ в сырье имбиря аптечного и экстракте сухом, обеспечивающие стандартизацию ЛРС и экстракта.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на IV Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов» (Москва, 2007), XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006), региональной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2006), Учебно-методической конференции кафедры общей химии стоматологического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова 22.12.2010 г.

Связь задач исследований с проблемным планом НИР

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова по теме: «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические и экологические аспекты)», номер государственной регистрации 01.200.118796.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, из них 2 в рецензируемых журналах.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 151 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), четырех глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 181 источник, в том числе 21 иностранных, приложения. Работа содержит 24 рисунка и 38 таблиц.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и задачи исследования, представлены научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основании обзора данных литературы дана краткая характеристика номенклатуры лекарственных средств растительного происхождения и биологически активных добавок к пище (БАД). Обоснована рациональность использования имбиря аптечного в качестве основы для создания противовоспалительного лекарственного средства. Отражены особенности современного производства сухих экстрактов из растительного сырья.

В разделе «Объекты и методы исследования» приведены сведения об объектах изучения, о методах и приборах, используемых в экспериментах.

Третья глава посвящена фармакогностическому и фитохимическому исследованию корневища имбиря аптечного, установлению показателей, позволяющих идентифицировать данное сырье и контролировать его качество. Представлены данные анализа состава биологически активных веществ корневища имбиря аптечного с использованием современных физико-химических методов. В четвертой главе изложены результаты по подбору оптимальных условий и разработке рациональной технологии получения экстракта имбиря аптечного сухого.

Пятая глава содержит сведения по изучению химического состава и установлению показателей качества экстракта имбиря аптечного сухого.

В шестой главе изложена технология получения геля на основе экстракта имбиря аптечного сухого.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты исследования Объектами исследования служили пробы от опытных партий корневища имбиря аптечного - Zingiber officinale Roscoe, Zingiberaceae L..

Экстракт имбиря аптечного сухой - представляет собой аморфный порошок желтого цвета со специфическим запахом.

Стандартные образцы При разработке методик и проведении аналитических исследований в качестве стандартных образцов использовались коммерчески доступные индивидуальные вещества (производства «Sigma-Aldrich Со»).

Оборудование

Микроскопический анализ цельного сырья производили согласно статье «Техника микроскопического анализа» ГФ XI изд., вып.1. Поперечные срезы корневищ имбиря аптечного сделаны на салазочном микротоме, микрофотографии - камерой «Axiocam HRc» на микроскопе «Axiolmager Ml» (объективы 2,5 х - «ЕС Plann-Neofluar»).

Для оценки качественного состава корневищ имбиря аптечного и экстракта сухого использовали методы ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ.

При тонкослойной хроматографии в качестве неподвижной фазы использовали хроматографические пластины Kieselgel 40 F254 (фирма Merck, Германия), в качестве подвижной фазы смесь растворителей: гексан -этилацетат в соотношении 85:15 и этилацетат - уксусная кислота - вода (25:5:5) (условия 1).

При ГЖХ применяли газовый хроматограф «КРИСТАЛЮКС 4000», Россия с использованием капиллярной колонки «Supelcowax» размером 0,25 х 30 мм с температурой колонки 130°С, и детектора 230°С, испарителя 200°С с расходом газа-носителя (азота) - 30 мл/мин, воздуха - 550 мл/мин, водорода -75 мл/мин. Компьютерная обработка результатов исследование проводилось с помощью программы «NetChrom VI,5» (условия 2).

ВЭЖХ анализ для фенольных соединений проводили на хроматографе фирмы «GILSTON», модель 305, Франция; инжектор ручной, модель «RHEODYNE 7125» USA. Использована металлическая колонка размером 4,6 х 150 мм Luna С 18(2), размер частиц 5 микрон. В качестве подвижной фазы метанол - вода - фосфорная кислота - тетрагидрофуран (ТГФ), в соотношении 370:570:5:60. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 1 мл/мин. Продолжительность анализа 60 мин. Детектирование проводили с помощью УФ-детектора «GILSTON» UV/VIS модель 151, при длине волны 254 нм (условия 3).

Исследования методом ВЭЖХ Сахаров и органических кислот проводили на хроматографе: «GILSTON», Франция с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром» для «Windows». Колонка: металлическая колонка «ALTECH OA-1000» Organic Acids размером 6,5 х 300 мм; подвижная фаза: 0,01М раствор серной кислоты; скорость подачи элюента 0,5 мл/мин; температура колонки 65°С; продолжительность анализа 42 минут; детектирование: REFRACTOMETR, модель 131 «GILSTON» (условия 4).

Спектрофотометрическое исследование проводили с использованием водно-спиртового извлечения. Спектр поглощения испытуемого раствора снимали в диапазоне длин волн 210-400 нм на саморегистрирующем спектрофотометре «GELIOS» в кювете с толщиной слоя жидкости 10 мм.

Экстрагирование сырья производили в реакторе из нержавеющей стали, вместимостью 100 л. Для упаривания извлечений применяли циркуляционный вакуум-выпарной аппарат «Simax» (Чехия). Очищенный экстракт сушили с помощью распылительной установки фирмы «Автомайзер-Нирс» (Дания).

Изучение антимикробной активности экстракта имбиря аптечного сухого проводили в соответствии с ГФ XI изд., вып.2, раздел «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» на международных тест-штаммах: Staphylococcus aureus (АТСС 6538-Р),

Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Escherichia coli (ATCC 25922), Candida albicans (ATCC 885-653), Bacillus cereus (ATCC 10702).

Статистическая обработка результатов анализа проводилась при - п повторных анализов однородного материала, где:

f — число степеней свободы;

п — число измерений;

t (p,f) — критерий Стъюдента;

X — среднее значение из п определний;

Р — доверительная вероятность;

S - выборочное стандартное отклонение;

Sx — стандартное отклонение среднего результата;

ДХ — абсолютная ошибка среднего арифметического;

Е0тн — относительная ошибка.

1. Фармакогностическое изучение и стандартизация J1PC сырья имбиря аптечного.

Исследование морфологических и микроскопических признаков сырья имбиря аптечного.

Морфолого-анатомическое изучение JIPC проводили в соответствии со статьей ГФ XI «Методы анализа лекарственного растительного сырья», раздел «Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы».

На основании изучения морфологических характеристик сырья 5 опытных партий нами составлено описание внешних признаков цельного сырья имбиря аптечного.

Корневища имбиря аптечного имеют вид кругловатых, расположенных преимущественно в одной плоскости, пальчаторазделенных кусочков. Форма корневищ цилиндрическая, слегка приплюснутая, длиной 5-7 см, диаметр 2-4 см, наружная поверхность ровная, излом - слегка зернистый, цвет наружной поверхности - бурый, излома - желтоватый, запах пряный, ароматный, вкус -острый, жгучий.

При микроскопическом исследовании изучены диагностические признаки: запасная паренхима с крахмальными зёрнами, секреторные клетки с эфирным маслом, закрытые коллатеральные проводящие пучки, склеренхимная обкладка.

>фщшое масло

Рис.1. Паренхимные клетки на поперечном срезе корневища Zingiber officinale Roscoe (Ye. 7 x 40).

ксилема

Рис.2. Коллатеральный сосудисто-волокнистый пучек корневища Zingiber officinale Roscoe

(Те. 7 х 40).

Наличие эфиромасличных вместилищ было подтверждено гистохимически, реакцией с Суданом III.

Также была проведена разработка норм числовых показателей для изучаемого сырья (влажность, зола общая, зола, не растворимая в 10% HCl, органические примеси, минеральные примеси).

Фитохимическое изучение J1PC имбиря аптечного.

На основании данных литературы и проведенных качественных реакций на основные группы БАВ определено наличие фенольных соединений, полисахаридов, терпеноидов. Для оценки компонентного состава данной группы соединений были использованы методы ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ.

Для предварительной оценки компонентного состава фенольных соединений использован метод ТСХ. При хроматографировании извлечений корневища имбиря аптечного в разработанных условиях (условия 1) при просмотре пластинки в УФ-свете при длине волны 255 нм, обнаружена зона желтого цвета с Rf около 0,48 на уровне зоны стандартного раствора лютеолин-7-гликозида и при 267 нм зона синего цвета с Rf около 0,93 на уровне зоны стандартного раствора галловой кислоты. Рутин и кверцетин, нанесенные на пластинку в качестве растворов свидетелей обнаружены не были.

Наличие фенольных соединений в JIPC было подтверждено методом ВЭЖХ.

При анализе методом ВЭЖХ по 20 мкл извлечения из сырья имбиря аптечного и растворов сравнения: рутина, кверцетина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, галловой кислоты, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, гиперозида, геспередина, апигенина, феруловой кислоты, витексина, робинина, 6-гингерола вводили в хроматограф «Gilston 305» и анализировали в разработанных условиях (условия 3). Детектирование проводили на УФ детекторе при длине волны 254 нм (рис. 3).

Методом внутренней нормализации определено доминирующее вещество, идентифицированное как 6-гингерол (около 48,20%) (таблица 1).

_J Vj ulj

0 3 ' " 10 15 nun

Рис.3. ВЭЖХ фенольных соединений спиртового извлечения из ЛРС имбиря аптечного (условия 3): 1-гингерол, 2-галловая кислота, 3-хлорогеновая кислота, 4-кофейная кислота, 5-лютеолин -7- гликозид, 6-феруловая кислота, 7-гиперозид

Таблица 1

Вещества фенольноы природы, идентифицированные в сырье имбиря аптечного методом ВЭЖХ.

Название вещества Время удерживания, мин. Содержание в выделенной смеси, % (метод внутренней нормализации)

Гингерол (С17Н26О4) О ОН 1,5 48,20

HO'V OCH,

Галловая кислота (С7Н6О5) £ 2,0 21,50

он

Хлорогеновая кислота (СщНщОя) мо- C^Xq äh он 2,8 14,20

Окончание таблицы 1

Кофейная кислота (С9Н804) О 4,0 14,20

но

Лютеолин-7-гликозид (С21Н20О11) ОН он Т нг^Я ГТ он || 8,7 Следовые количества

он 0

Феруловая кислота (С10Н10О4) О 9,0 Следовые количества

нет"

Гиперозид (С21Н20О12) он 10,0 Следовые количества

но он _/он о Ьнон

Именно 6-гингерол является наиболее фармакологически значимым активным компонентом корневища имбиря аптечного. С целью гармонизации разрабатываемой документации на сырье и экстракт с требованиями ведущих фармакопеи и Директив стран Европейского союза предложен метод качественной оценки 6-гингерола, подробно описанный в Европейской Фармакопее.

Для оценки терпеноидного состава ЛРС проводили ТСХ в системе гексан - этилацетат (85:15), неподвижная фаза: «Сорбфил УФ254»- После обработки

раствором анисового альдегида идентифицированы: гераниол, а- пинен, В-пинен, борнилацетат (таблица 2).

Таблица 2

Результаты исследования терпеноидов методом ТСХ

Значения Иг

Извлечения корневища имбиря и экстракта сухого РСО

Гераниол а-шшен Р-пинен Борнилацетат

0,25 +

0,33 +

0,45 +

0,73 +

Для более точного установления компонентного состава терпеноидов использовали метод ГЖХ (условия 2). Около 4,0 г (точная навеска) корневища, помещали в колбу объёмом 20 мл, прибавляли гексан до 20 мл и нагревали на водяной бане в течение 1 часа при температуре 40°С. После охлаждения смесь фильтровали (исследуемый раствор). В качестве растворов сравнения использовали 0,02% растворы а- и р-пинена, цинеола, гераниола, цитраля, борнеола в гексане (рис.4).

Рис.4. ГЖХ терпеноидных соединений, экстрагируемых гексаном из ЛРС имбиря аптечного (условия 2): 1- пинены, 2-цинеоя, З-гераниол, 4-цитраль, 5-борнеол.

При идентификации органических кислот и углеводов использовали метод ВЭЖХ (условия 4). По 20 мкл испытуемого раствора и растворов PCO лимонной, щавелевой, яблочной, янтарной, виннокаменной кислот, рамнозы, ксилозы, мальтозы, глюкозы, лактозы, арабинозы, сахарозы, фруктозы, галактозы последовательно вводили в хроматограф «Gilston» и анализировали в разработанных условиях (рис. 5).

Рис.5. ВЭЖХ углеводов и органических соединений (условия 4). 1-щавелевая кислота, 2-лактоза, 3-глюкоза, 4-галактоза, 5-янтарная кислота.

Таблица 3

Органические кислоты и углеводы, идентифицированные в сырье имбиря аптечного методом ВЭЖХ.

Название вещества Время удерживания, MIHI Содержание в выделенной смеси, % (метод внутренней нормализации)

Щавелевая кислота 6,2 22,0

Лактоза 8,0 28,5

Глюкоза 8,5 18,8

Галактоза 9,2 30,5

Янтарная кислота 11,0 Следовые количества

Известно, что противовоспалительный и антибактериальный эффект корневища имбиря аптечного обусловлен содержанием фенольных соединений. Нами предложена методика количественного определения фенольных соединений в корневище имбиря аптечного в пересчете на 6-гингерол. В ходе исследования подобраны оптимальные условия экстракции этих БАВ: аналитическую пробу сырья измельчали до частиц, размером не более 5 мм, экстрагировали при нагревании на водяной бане с обратным холодильником в течении 1 ч при температуре 50°С, в качестве экстрагента использовали 50% спирт при соотношении «сырье - экстрагент» 1:10 по объему. Интенсивный максимум поглощения исследуемого раствора и стандартного раствора 6-гингерола наблюдается при длине волны 280±2 нм, что позволяет использовать эту длину волны и проводить количественное определение суммы фенольных соединений в пересчете на 6-гингерол (рис.6).

№ауе1епд№(пт)

Рис.6. УФ спектр 50% спиртового извлечения из корневшца имбиря аптечного.

Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на 6-гингерол составляет не менее 2,0% от массы сырья.

Таблица 4

Результаты количественного определения фенольных соединений в корневище имбиря спектрофотометрическим методом

№ Содержание фенольных

опыта соединений, %

1 2,3

2 2,4

3 2,5

4 2,4

5 2,1

Х=2,3

Таблица 5

Метрологические характеристики результатов количественного определения суммы фенольных соединений в корневище имбиря аптечного методом спектрофотометрии

п Г Р % Х% в5 в в. АХ Е%

5 4 95 2,78 2,3 0,003 0,062 0,031 0,086 ±3,7

Для проверки отсутствия систематической ошибки методики были поставлены эксперименты с добавлением 6-гингерола непосредственно в навеску сырья. Полученные результаты приведены в таблице 6.

Относительная ошибка результатов опытов с добавками не превышает относительную ошибку единичного определения и имеет отклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки в предлагаемой методике анализа.

Таблица 6

Результаты количественного определения суммы фенольных соединений в корневище имбиря с добавками 6-гингерола

Содержание фенольных соединений в навеске, г Добавлено 6-гннгерола, г Должно быть, г Найдено суммы фенольных соединений, г Ошибка

Абсолютная г Относитель ная %

0,001 0,0001 0,0011 0,00107 -0,00003 -2,73

0,001 0,0002 0,0012 0,00123 +0,00003 +2,50

0,001 0,0003 0,0013 0,00134 +0,00004 +3,08

На основании проведенных экспериментальных данных предложен проект ФС «Корневища имбиря аптечного».

2. Разработка способа получения имбиря аптечного экстракта сухого

Разработка способа получения экстракта сухого При разработке лекарственного средства на основе имбиря аптечного предложено получение экстракта сухого, поскольку данный способ переработки ЛРС является наиболее рациональным, обеспечивающим максимальное извлечение действующих веществ и возможность создания стандартизованного фитопрепарата.

Технологическая схема получения экстракта имбиря аптечного сухого предусматривает стадии экстракции, упаривания полученного извлечения, очистку и сушку концентрированного экстракта (рис. 7).

Для определения оптимальных условий стадии экстракции нами изучено влияние экстрагента, температурного режима, соотношение «сырье -экстрагент», времени и кратности экстракции на выход биологически активных веществ. Экспериментально установлено, что оптимальным является проведение трехкратной экстракции сырья с размером частиц не более 5 мм, в соотношении 1:10 при использовании в качестве экстрагента 50% спирта и нагревания до (50±5)°С. Практически дальнейшее увеличение объема

экстрагента нецелесообразно, т.к. не достигается большей эффективности экстракции.

СПИРТ

этиловый

ВОДА

ТП.6.1 ПРИГОТОВЛЕНИЕ 50 И СПИРТА ЭТИЛОВОГО

И ЭКСТРАКЦИЯ ИЗМЕЛЬЧЕННОГО СЫРЬЯ

ТГШ

ФИЛЬТРАЦИЯ ЭКСТРАКТА

тгш

КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ЭКСТРАКТА

пш

СЕПАРИРОВАНИЕ КОНЦЕНТРИРОВАННОГО ЭКСТРАКТА

•пыл

СУШКА ОЧИЩЕННОГО ЭКСТРАКТА

ЦЦ.<

ИЗМЕЛЬЧЕНИЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА

ВР.1-ВР.4 ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ РАБОТЫ

СЫРЬЕ

TILS ПРОСМОТРИ ЮМЕЛЬЧЕНИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

ТП.8 ПОЛУЧЕНИЕ ГОТОВОГО ПРОДУКТА -

СУХОГО ЭКСТРАКТА

ПОТЕРЯ

В СБОРНИК

- ШРОТ

ОТГОН СПИРТА

ВСБОРНИК

ОСАДОК БАЛЛАСТНЫХ ВЕЩЕСТВ

В СБОРНИК

УМО.1 ФАСОВКА, УПАКОВКА, МАРКИРОВКА СУХОГО ЭКСТРАКТА

ПОТЕРИ

Рис. 7. Технологическая схема производства экстракта имбиря аптечного сухого.

Изучение физических свойств экстракта сухого С целью характеристики экстракта имбиря аптечного сухого как технологической субстанции изучены его технологические свойства: насыпная масса при свободном падении 0,58 г/см3, насыпная масса при уплотнении 0,87 г/см3, сыпучесть - 1,95 г/с. Угол естественного откоса 36°.

3. Разработка показателей качества экстракта сухого.

Определение внешнего вида экстракта сухого проводилось органолептически. Готовый продукт - экстракт имбиря аптечного сухой представляет собой аморфный порошок светло-желтого цвета со специфическим запахом.

Изучение качественного состава экстракта сухого.

В ходе исследования качественного состава БАВ в экстракте сухом с применением качественных реакций, ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ установлено наличие фенольных соединений, терпеноидов, полисахаридов, органических кислот и углеводов. Состав терпеноидных соединений аналогичен таковому в сырье. Методом ВЭЖХ подтверждено наличие 6-гингерола (рис. 8).

Методом внутренней нормализации определено содержание 6-гингерола -около 45% от суммы фенольных соединений.

Химическое изучение экстракта сухого показало, что состав БАВ экстракта аналогичен таковому в нативном сырье.

О 5 10 13 пи1

Рис. 8. ВЭЖХ фенольных соединений спиртового извлечения из ЛРС гшбиря аптечного (условия 3): 1-гингерол, 2-галловая кислота, 3-хлорогеновая кислота, 4-кофейная кислота, 5-лютеолин -7- гликозид, 6-феруловая кислота, 7-гиперозид

В ходе исследования предложена методика количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на 6-гингерол. Относительная ошибка метода не превышает ±3,0% (таблица 8). Достоверность предложенной методики определения содержания суммы фенольных соединений, в пересчете на 6-гингерол, проверялась опытами с добавлением 6-гингерола (таблица 9).

Относительная ошибка опытов с добавками находится в пределах случайной ошибки предложенной методики, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки.

На основании проведенных экспериментальных данных предложен проект ФС «Экстракт имбиря аптечного сухой», который включает следующие разделы: описание, подлинность, потеря в массе при высушивании, тяжелые металлы, микробиологическая чистота, количественное определение суммы фенольных соединений в пересчете на б-гингерол, упаковка, хранение, срок годности (2 года).

Таблица 7

№ опыта Содержание фенольных

соединений, %

1 3,5

2 3,6

3 3,5

4 3,6

5 3,4

Х=3,52

Таблица 8

Метрологические характеристики результатов спектрофотометрического количественного определения фенольных соединений в экстракте сухом

п Г Р% 1(Р,0 Х% в» в в, АХ Е,%

5 4 95 2,78 3,52 0,006 0,08 0,04 0,10 ±2,84

Таблица 9

Результаты количественного определения суммы фенолытх соединений в экстракте сухом с добавками 6-гингерола

Содержание фенольных соединений в навеске, г Добавлено 6- гингерола, г Должно быть, г Найдено суммы фенольных соединений г Ошибка

Абсолютная, г Относительная, %

0,002 0,0001 0,0021 0,00206 -0,00004 -1,91

0,002 0,0002 0,0022 0,00224 +0,00004 +1,82

0,002 0,0003 0,0023 0,00232 +0,00002 +0,87

Таблица 10

Количественное содержание БАБ в корневище имбиря аптечного и в экстракте сухом.

Объект исследования Содержание, %

Фенольные соединения в пересчете на 6-гингерол Органические кислоты Полисахариды Дубильные вещества Эфирные масла

Корневища имбиря аптечного 2,0 0,70 17,0 1,90 2,0

Экстракт имбиря аптечного сухой 3,5 1,0 43,0 3,0

4. Изучение антимикробной активности экстракта имбиря аптечного

сухого.

Антибактериальная активность изучена для экстракта имбиря аптечного сухого на международных тест-штаммах: Staphylococcus aureus (АТСС 6538-Р), Pseudomonas aeruginosa (АТСС 9027), Escherichia coli (АТСС 25922), Candida albicans (АТСС 885-653), Bacillus cereus (АТСС 10702). По экспериментальным

данным экстракт имбиря аптечного сухой проявляет умеренную антимикробную активность к грамположительным и грамотрицательным микроорганизмам.

Диаграмма 1. Антимикробная активность экстракта сухого

St.aureus Ps.Aeruginosa Вас.Aureus E.colí Can.Albicans

5. Разработка состава мягкой лекарственной формы на основе экстракта имбиря аптечного сухого.

Экстракт имбиря аптечного сухой может быть использован для разработки противовоспалительных и антисептических средств.

На сегодняшнее время выявлена тенденция к росту ассортимента и объема выпуска мягких лекарственных форм (мази, кремы, гели). Нами предложено введение экстракта сухого в мягкую лекарственную форму. На основании опытных данных выбран оптимальный состав геля:

Экстракт имбиря аптечного сухой 1,00

МАРС-06 ' 1,50

Триэтаноламин до рН 5,5 6,50

ПЭГ-400 23,00

ПЭГ 1500 7,00

Глицерин 10,00

Аспаркам 0,12

Нипагин 0,10

Масло эвкалиптовое 0,14

Вода очищенная до 100,00 г

При дальнейшем изучении предложенного состава, оценке его физико-химических и фармакологических свойств, представляется возможным расширить лекарственный ассортимент стоматологических препаратов противовоспалительного и антибактериального действия.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

1. На основании фармакогностического исследования корневища имбиря аптечного установлены морфолого-диагностические (макро- и микроскопические) признаки сырья, определены числовые показатели для ЛРС - имбирь аптечный.

2. Современными физико-химическими методами установлен состав БАВ корневища имбиря аптечного.

3. Определено количественное содержание полисахаридов, органических кислот, Сахаров, эфирных масел, дубильных веществ в ЛРС корневища имбиря аптечного.

4. С учетом современных требований предложена оптимальная технология получения экстракта сухого из корневища имбиря аптечного, обеспечивающая максимальный выход экстрактивных веществ и комплекса БАВ.

5. Проведен фармакопейный анализ экстракта сухого: внешний вид, влажность, содержание тяжелых металлов, растворимость, срок годности.

6. Современными физико-химическими методами установлен состав БАВ экстракта сухого; изучен качественный состав фенольных соединений, терпеноидов, органических кислот и углеводов. Изучена антибактериальная активность экстракта сухого.

7. Определено количественное содержание полисахаридов, органических кислот, Сахаров, эфирных масел, дубильных веществ в экстракте сухом.

8. Подобраны условия анализа фенольных соединений, на основании чего разработана методика количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на 6-гингерол для ЛРС и экстракта сухого.

9. Впервые разработаны проекты отечественных нормативных документов для контроля качества сырья и экстракта имбиря аптечного сухого: проект ФС «Корневища имбиря аптечного» и проект ФС «Экстракт имбиря аптечного сухой».

10. Установлена возможность введения экстракта сухого в мягкую лекарственную форму.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Харчилава И.А., Нестерова О.В., Матюшина Г.П., Барабанов Е.И. Корневище имбиря аптечного (Zingiber officinale Roscoe, Zingiberaceae L.) - новый источник соединений для профилактики и лечения заболеваний ротовой полости / Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2004, - С. 846.

2.Харчилава И.А., Нестерова О.В., Маркарян A.A. Разработка геля с комплексом эфирных масел для лечения воспалительных заболеваний пародонта // Сборник научных трудов «Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты». - М., 2007, С. 157.

3.Харчилава И.А., Нестерова О.В. Разработка способа получения сухого экстракта из корневища имбиря аптечного // Естественные и технические науки. - М., 2010. - № 6. -С. 242 - 245.

4.Харчилава И.А., Нестерова О.В., Кузьменко А.Н. Определение биологически активных веществ в корневище имбиря аптечного хроматографическими методами // Естественные и технические науки. М., 2010.-№ 6. - С. 246-251.

Отпечатано в типографии "Класс-М" г. Москва, ул. Новороссийская, д. 21 Заказ № 46, Тираж 100 экз., 11.04.2011 г.

Оглавление диссертации Харчилава, Иа Автандиловна :: 2011 :: Москва

Введение.

ГЛАВА1 .ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1.Имбирь аптечный (Zingiber officinale, сем. Zingiberaceae) перспективный источник для разработки фитопрепаратов.

1.1.1 .Ботаническая характеристика, химический состав, применения в народной медицине имбиря аптечного.

1.2.Препараты содержащие корневище имбиря.

1.3. Стандартизация лекарственного растительного сырья.

1.4. Технология переработки лекарственного растительного сырья в экстракт.

1.5. Фенольные соединения лекарственных растений, методы их выделения, идентификации и анализа.

1.5.1. Общие сведения.

1.5.2.Методы выделения.

1.5.3.Идентификация фенолъных соединений.

1.6. Характеристика, современные подходы к контролю качества сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья.

1.7. Гели. Современный взгляд на лекарственную форму.

1.7.1. Вспомогательные веъцества, используемые для производства гелей.

8.Выводы к главе 1.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1.0бъекты исследования и вспомогательные материалы.

2.2.Методы исследования.

2.2.1. Микроскопический анализ сырья.

2.2.2. ТСХ, ГЖХ.ВЭЖХ.

2.2.3. Спектрофотометрия.

2.2.4. Определение эфирных масел.

2.2.5. Определение влажности.

2.2.6.Испытание радиоактивности.

2.2.7.Получение сухого экстракта.

2.2.8. Числовые показатели.

2.2.9. Определение микробиологической активности.

2.2.10.Методика определения осмотической активности геля методом диализа через полупроницаемую мембрану.

ГЛАВА 3. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ И

ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЫРЬЯ ИМБИРЯ

АПТЕЧНОГО.

3.1.Макроскопический анализ сырья.

3.2.Микроскопические признаки сырья.

3.3.Номенклатуры и нормы числовых показателей.

3.4.Идентификация биологически активных веществ в корневище имбиря.

3.4.1.Качественные химические реакции

3.4.2.Идентификация биофлавоноидов.

3.4.2.1.Спектрофотометри я.

3.4.2.2.Хроматография в тонком слое сорбента.

3.4.2.3.ВЭЖХфенолъных соединений корневища имбиря.

4.3.4. Хроматография в тонком слое сорбента (по ЕФ).

3.4.3.Идентификация терпеноидов.

3.4.3.1. Идентификация веществ, экстрагируемых гексаном методом ТСХ.

3.4.3.2. Идентификация веществ, экстрагируемых гексаном методом ГЖХ.

3.4.4.Идентификация углеводов и органических кислот методом ВЭЖХ.

3.5. Количественное определение биологически активных веществ в корневище имбиря.

3.5.1. Определение суммы органических кислот.

3.5.2. Определение дубильных веществ.

3.5.3. Определение полисахаридов.

3.5.4. Определение суммы фенолъных соединений.

3.5.5. Определение эфирных масел.

3.6.Выводы к главе 3.

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ КОРНЕВИЩА ИМБИРЯ АПТЕЧНОГО И ГЕЛЯ

НА ЕГО ОСНОВЕ.

4.1. Оптимизация условий экстракций биологически активных веществ из сырья.

4.1.1. Влияние экстрагента на выход биологически активных веществ.

4.1.2. Влияние степени измелъченности на выход биологически веществ.

4.1.3. Влияние температурного режима на выход биологически веществ.

4.1.4. Оптимизация продолжительности и кратности экстракции.

4.2. Технологический процесс получения сухого экстракта из корневища имбиря аптечного.

4.2.1. Технологическая схема производства.

4.3. Выводы к главе 4.

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА СУХОГО ЭКСТРАКТА.

5.1.0пределение внешнего вида.

5.2.0пределение потери массы при высушивании.

5.3.Определение тяжелых металлов.

5.4.0пределение технологических свойств имбиря аптечного сухого экстракта.

5.5.Изуение растворимости экстракта имбиря сухого.

5.6. Идентификация биологически активных веществ в экстракте.

5.6.1. Качественные химические реакции.

5.6.2. Идентификация биофлавоноидов.

5.6.2.1.Спектрофотометри я.

5.6.2.2.Хроматография в тонком слое сорбента.

5.6.2.3.ВЭЖ Х.

5.6.2.4.Идентификация веществ сухого экстракта имбиря аптечного по методике изложенной в ЕФ.

5.6.3.Идентификация терпеноидов.

5.6.3.1. Идентификация веществ, экстрагируемых гексаном 102 методом ТСХ.

5.6.3.2. Идентификация веществ, экстрагируемых гексаном методом 104 ГЖХ.

5.6.4. Идентификация углеводов и органических кислот методом 105 ВЭЖХ.

5.7. Количественное определение биологически активных веществ 107 в сырье.

5.7.1. Определение суммы органических кислот.

5.7.2.Определение дубильных веществ.

5.7.3. Определение полисахаридов.

5.7.4. Определение суммы фенолъных соединений.

5.8.Определение срока годности сухого экстракта.

5.9. Изучение антимикробной активности имбиря аптечного сухого экстракта.

5.10.Выводы к главе.

ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕЛЯ НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТА ИМБИРЯ 120 СУХОГО.

6.1.Разработка состава геля на основе экстракта имбиря сухого.

6.2.Разработка технологической схемы производства геля имбиря аптечного экстракта сухого.

6.3. Выводы к главе 6.

ОБЩИЕ ВЫВОДБ1.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Харчилава, Иа Автандиловна, автореферат

Актуальность темы

Лекарственные средства растительного происхождения занимают важное место среди препаратов, применяющихся при различных заболеваниях человека. Актуальность использования таких препаратов значительно возросла в последние десятилетия, особенно в связи с ростом токсикоаллергических заболеваний, связанных с лечением синтетическими средствами. Исследования последних лет показывают, что своими целебными свойствами лекарственные растения обязаны оптимальному соотношению комплекса содержащихся в них биологически активных веществ, имеющих эволюционно и генетически большее сродство с организмом человека, чем синтетические средства. Лекарственные средства растительного происхождения, оказывающие терапевтическое и регуляторное действия, влияют на обменные процессы в организме, повышают его защитные свойства и фагоцитарную деятельность лейкоцитов [20,37,57,76].

Растительные препараты наиболее полно отвечают современным медико-биологическим требованиям, т. к. обладают высокой эффективностью, хорошей переносимостью в терапевтических дозах, большим диапазонам лечебных свойств, отсутствием побочных эффектов, что позволяет использовать их для всех возрастных групп в качестве симптоматического, профилактического и продолжительного лечения [14,21,29,41,77].

Преимуществом производства галеновых препаратов является также их относительная экологическая безопасность, связанная с достаточной легкостью утилизации отходов [39].

На основании вышеизложенного, актуальным остается вопрос фитохимического изучения ЛРС, получения из него комплекса биологически активных веществ для дальнейшего внедрения в фармацевтическую практику.

Одним из интересных для изучения растений является имбирь аптечный -Zingiber officinale Roscoe, Zingiberaceae L., известный в народной медицине своими целительными свойствами.

По данным литературных источников имбирь расширяет кровеносные сосуды, уменьшает вязкость крови, снижает уровень холестерина, стимулирует сердечную деятельность. Препараты корня имбиря оказывают противовоспалительное действие. Он активизирует пищеварение, улучшает желчеотделение, снимает кишечные спазмы. Корневища имбиря содержат сложную смесь фармакологически активных веществ. Содержащиеся в имбире 6-гингерол и 6-шогаол проявляют жаропонижающую, обезболивающую, противовоспалительную, противокашлевую и гипотензивную активность [170]. Результаты исследования in vitro свидетельствуют о том, что активные вещества, входящие в состав имбиря способны угнетать метаболизм арахидоновой кислоты как по циклооксигеназному, так и по липооксигеназному пути, т.е действовать по принципу HI ЛВС. Поэтому это сырье представляет особый интерес для фитохимического и фармакологического исследования [99,106,124,165,166,167].

Цель исследования

Цель настоящей работы фитохимический анализ корневища имбиря аптечного, разработка технологии получения сухого экстракта, их стандартизация и изучение возможности введения экстракта в мягкую лекарственную форму - гель.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

• определить показатели качества лекарственного растительного сырья (ЛРС);

• предложить методики качественного и количественного определения биологически активных веществ имбиря аптечного; разработать проект фармакопейной статьи (ФС);

• разработать показатели качества для имбиря аптечного сухого экстракта; разработать проект фармакопейной статьи (ФС);

• изучить возможность введения сухого экстракта в мягкую лекарственную форму - гель.

Научная новизна работы

Информационно-аналитическими исследованиями доказана необходимость получения стандартизованного фитопрепарата на основе корневища имбиря аптечного для противовоспалительного и антибактериального применения в лечебной практике.

Физико-химическими методами охарактеризован качественный состав биологически активных веществ корневища имбиря аптечного и сухого экстракта. Дана количественная оценка содержания биологически активных веществ, в исходном сырье и сухом экстракте.

Установлены закономерности извлечения экстрактивных веществ из растительного сырья в зависимости от степени измельчения сырья, типа экстрагента, соотношения: сырье-экстрагент. Подобраны условия анализа БАВ по которым произведена стандартизация сырья и сухого экстракта.

Рассмотрена возможность введения сухого экстракта в мягкую лекарственную форму. Разработаны проекты отечественных НД на ЛРС и экстракт.

Практическая значимость работы

На основании проведенных исследований предложены: • Современные методики ' стандартизации корневища имбиря аптечного и сухого экстракта корневища имбиря;

• Проект ФС «Корневища имбиря аптечного» и «Корневища имбиря аптечного сухого экстракта»;

• Технология получения имбиря аптечного сухого экстракта

• Мягкая лекарственная форма на основе имбиря аптечного сухого экстракта.

Основные положения, выносимые на защиту

• результаты исследований по качественной и количественной оценке БАВ имбиря аптечного и получаемого из него сухого экстракта;

• результаты исследований по разработке технологии получения сухого экстракта, включая установление закономерности выхода БАВ в зависимости от степени измельчения сырья, вида экстрагента, соотношения: сырье-экстрагент;

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на IV Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов» (Москва, 2007), XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006), региональной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической промышленности» (Пятигорск, 2006), Учебно-методической конференций кафедры общей химии стоматологического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова 22.12.2010г.

Связь задач исследований с проблемным планом НИР

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО МГМУ им. И.М. Сеченова по теме: «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические и экологические аспекты)», номер государственной регистрации 01.200.118796.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Объем и структура диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Фитохимическое изучение корневища имбиря аптечного и разработка сухого экстракта на его основе"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ.

2. Современными физико-химическими методами установлен состав БАВ корневища имбиря аптечного.

4. С учетом современных требований -предложена оптимальная технология получения экстракта сухого из корневища имбиря аптечного, обеспечивающая максимальный выход экстрактивных веществ и комплекса БАВ.

10. Установлена возможность введения экстракта сухого в мягкую лекарственную форму.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Харчилава, Иа Автандиловна

1. Алексеев К.В. Исследование возможности применения редкосшитого акрилового сополимера в качестве вспомогательного вещества в технологии мазей: автореф. дис. . канд. фарм. наук. М., 1984. - С. 20.

2. Алексеев К.В. Современные тенденции в создании, исследовании и применении вспомогательных веществ в фармацевтической технологии // Тенденции развития фармации за рубежом. М.: ВНИИМИ, 1985. - С. 49-57.

3. Алексеев К.В. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения редкосшитых акриловых полимеров в технологии мягких лекарственных форм (мазей и гелей) и биопрепаратов: автореф. дис. . докт. фарм. наук. -М., 1993.-С. 59.

4. Алюшин М.Т. Роль новых вспомогательных веществ в совершенствовании технологии мягких лекарственных форм // Фармация. 1980. - Т.29. - №1. -С. 51-52.

5. Алюшин М.Т., Алексеев К.В., Ли В.Н. Редкосшитые акриловые полимеры в фармации // Фармация. 1986. - №1. - С. 71-76.

6. Алексеев К.В., Суслина С.Н., Стародубова М.В., Слюсар О.И. Ареспол -новое вспомогательное вещество в технологии мазей. // Тезисы докладов VII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». М., 2000. - С. 598

7. Аркуша А. А. Исследование структурно-механических свойств мазей с целью определения оптимума консистенции: автореф. дис. .канд. фарм. наук. Харьков, 1982. - С. 23.

8. Ахметова Т.А., Егоровам С.Н. Обоснование оптимума реологических параметров глазных гелей // Фармация. 2008, - №4. - С. 43 - 45.

9. Багирова B.JT., Демина Н.Б., Кулинченко H.A. Мази. Современный взгляд на лекарственную форму // Фармация. 2002.- №2. - С. 24-26.

10. Ю.Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова думка, 1976. - С. 260.

11. П.Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Медицина, 1984.-С. 160.

12. Бекетов Е.В., Пахомов В.П., Нестерова О.В. Совершенствование процесса извлечения флавоноидов из плодов черемухи обыкновенной // Хим.-фарм. Журнал. 2005. - т. 39. - №6. - С. 33-35.

13. Беляков К.В. Методические подходы к определению биологически активных веществ в лекарственном растительном сырье спектрофотометрическим методом. М., 2004. - С. 186.

14. Белова А.Е., Сулейманов К.С. Применение лекарственных растений в дерматологической практике: Методические рекомендации. Ташкент, 1985. -С. 18.

15. Берёзкин В.Г., Бочков A.C. Количественная тонкослойная хроматография. (Инструментальные методы). М.: Наука, 1980.- С. 183.

16. Берштейн И .Я., Каминский Ю.Л. Спектрометрический анализ в органической химии. Издание второе, переработанное и дополненное. Ленинград: «Химия», Ленинградское отделение, 1986. С. 200.

17. Бёккер Ю. Спектроскопия. Перевод с немецкого. Серия «Мир химии». М.: ТЕХНОСФЕРА, 2009. - С. 528.

18. Бёккер Ю. Хроматография. Инструментальная аналитика: методы хроматографии и капиллярного электрофореза. М.: Техносфера. - 2009. — С.472 .

19. Биохимические методы анализа растений / под. Ред. М.Н. Запрометова.- М.: Иностранная литература, 1960. С. 592.

20. Блажей А., Шутый JI. Фенольные соединения растительного происхождения: Пер. со словацк. М.: Мир, 1977. - С. 236.

21. Большаков В.Н. Вспомогательные вещества в технологии лекарственных форм.-Л., 1991.- С. 48.

22. Бражников В.В. Детекторы для хроматографии. М.: Машиностроение, 1992.-С. 320.

23. Бурова А.Е., Коновалова O.A., Охотникова В.Ф. Методы стандартизации препарата «Виларин» // Химия, технология, медицина. Сб.трудов ВИЛАР. -М., 2000.-С. 119-123.

24. Браженко A.B. Выбор основы для мазей с маслом шиповника // Здравоохранение Башкортостана. 1992. - № 4. - С. 20.

25. Вилков Л.В., Пентин Ю.А. Физические методы исследования в химии. Структурные методы и оптическая спектроскопия. М.: Высшая школа, 1987.-С. 367.

26. Вичканова С А. Ингибиторы микроорганизмов среди природных веществ растительного происхождения: автореф. дис. . доктора биол. наук: (03.00.07.).-М, 1981.-С. 48.

27. Вичканова С.А. Клиническая эффективность анмарина антимикотического средства растительного происхождения // Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М.:, 2004 .-С. 435.

28. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Под ред. Сироткиной Е.Е. Томск.: Изд. Томского унивеситета, 1987. - С. 184.

29. Высокоэффективная тонкослойная хроматография. Под ред. А. Златкис, Р.Кайзер.- М.: Мир, 1979.- С. 245.

30. Гаврилин М.В. Применение полимеров и сополимеров производных акриловой кислоты и этиленоксида в фармации // Химико-фармацевтический журнал. 2001. - т. 35, - № 1. - С. 33.

31. Гаврилин М.В., Компанцева Е.В., Ушакова J1.C. Изучение возможности использования геля полиэтиленоксида в фармации // Фармация. 1998. - № 2.-С.20.

32. Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский A.A. Лекарственные растения (растения-целители). М., 1990. - С. 207.

33. Георгиевский В.П. Применение хроматографии в тонком слое для идентификации и количественного определения биологически активных веществ растительного происхождения. М.: Наука, 1978. - С. 68.

34. Герасимова И.М., Кунгуров Н.В., Кудовкова Т.В. Фитотерапия, лазеротерапия, бав. Черноголовка, 2000. - С. 19.

35. Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии (планарная хроматография). М., 1988. т. 1 - 405 е., т. 2 - С. 348.

36. Гизатулин А.Н., Гизатулина Ф.Т. Лекарственные растения в научной и народной медицине. Троицк, 1999. — С. 117.

37. Глызин В.И., Тареева Н.В., Давыдова В.Н., Толстых Л.П.,Янулис В.П., Степанова Л.И., Ратникова Г.В., Нагаслаева Л.А. // Тезисы докладов I Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М. -1992. -С. 198.

38. Глызин В.И., Толстых Л.П., Давыдова В.Н. Оптимизация процесса экстрагирования корней и корневищ элеутерококка. // Тезисы науч. докл. Всес.научно-технической конференции. -Харьков. 1990. - С. 15.

39. Государственная фармакопея XI издания. М.: Медицина, 1987, вып. 1, 1990, вып. 2.

40. Грецкий В.М., Цагарешвили Т.В. Носители лекарственных веществ в мазях.- Тбилиси, 1979. С. 22.

41. Грецкий В.М. Основы для медицинских мазей. М., 1975. — С. 46.

42. Давыдова В.Н. Получение сухих экстрактов из растений и создание на их основе препаратов и биологически активных добавок: автореферат дис. докт. . фарм.наук. Москва, 2002.

43. Давыдова В.Н. Современные технологии получения сухих экстрактов и их ассортимент // Новая аптека. Аптечный ассортимент. 2002. - № 4. - С. 67.

44. Давыдова В.Н. Получение сухих экстрактов из растений и создание на их основе препаратов и биологически активных добавок: автореф. дисс. . .докт.фарм.наук. М., 2002.

45. Долгих В.Т. Клиническая патофизиология для стоматологов. Н.Новгород, 2000.-С. 25.

46. Доценко Е.В., Дмитриева A.A. Использование ортофенсодержащей пасты в комплексном лечении заболевания пародонта. // Стоматология. 1990. - т. 69 - № 5 - С. 24.

47. Дзценко Б.М. Теория и практика местного лечения гнойных ран. Киев: Здоровье, 1995.-С. 384.

48. Доклиническая оценка безопасности фитопрепаратов / A.A. Белопашко, А.А.Шкаренков, Е.Ю. Енютина и др.// Тезисы докладов I Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М., 1992.- С. 382.

49. Дюкова В.В., Белова О.И. К вопросу об экстракции растительного сырья с подогревом // Сб. научн. тр. ВНИИФ, 1979. т. 17. - С. 163.

50. Избасаров У.К., Избасаров Ш.У. Новое лекарственное средство для лечения экземы // Реферативный журнал «Химия». 1995. - № 8. - С. 37.

51. Изучение возможности использования геля ПЭО в фармации / М.В. Тавришн, Е.В. Компанцева, JI.C. Ушакова, В.А. Макаров, Т.Ф. Маринина, М.И. Каршня, Г.В.Новикова // Фармация. 1998. - №2. - С. 20.

52. Изучение местноанестезирующего и ранозаживляющего действия мазей на гидрофильных основах / СВ. Чащина, В.Э. Колла, H.A. Горнова и др. // Фармация. 1992. - № 3. -С. 17.

53. Изучение осмотической активности некоторых мазевых основ / В.Г. Гунько, A.A., Гунько H.H., Мусиенко и др. // Хим. фарм. журнал. 1982, - т. 16. -№3.-С. 89.

54. Изучение экстракции биологически активных веществ из лекарственного сырья под действием ультразвука / Семагина Н.В., Скульман М.Г., Сульман Э.М., Анкудинова Т.В. // Хим.-фарм. журнал. 2000. - т. 34. - №2. - С.26-29.

55. Исследование процесса экстракции лекарственных веществ из растительного сырья / Гончаренко Г.К., Чернышов И.С., Орлова Е.И. и др. // Хим.-фарм журнал. 1979. - т. 29. - № 5. - С. 100.

56. Калмыкова Т.П., Керманиан Ф, Охотникова В.Ф. Разработка состава и технологии получения линимента алпизарина // Химико-фармацевтический журнал. 2003. - т. 37, № 5. - С. 48.

57. Каухова И.Е. Новая методика получения растительных препаратов // Фармация. 2006. - № 1. - С. 37.

58. Керманиан Ф. Разработка состава и технологии получения геля и линимента алпизарина: дис. . к.ф.н. М., 2003. - С. 134.

59. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. Москва: Мир, 1981.- т. 1. С. 616., Т.2-С. 523 .

60. Кордис М.С. Клиническая оценка хлоргексидиновой мази в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта // Стоматология. — 1988. — вып. 23.-С. 42.

61. Колесникова А.Г. Бактерицидные и иммунокорригирующие свойства некоторых растительных экстрактов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1986. - № 3. - С. 75.

62. Кордис М.С. Применение пролонгированных л.ф. хлоргексидина глюконата в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта: (клинико-лабораторные исследования): автореф. дис. .канд. наук. Львов. 1986. - С. 21.

63. Крутикова Н.М. Эвкалиптиновые растительные препараты антибактериального действия. М., 1997.- С. 28.

64. Крылов Ю.Ф., Зорян Е.В., Новикова И.В. Особенности противовоспалительного действия препаратов используемых в стоматологии // Стоматология. 1998. - т. 74. - № 6. - С. 58.

65. Кудрякова Э.А., Молдавер Б.Л., Марченко Л.Г., Цветкова Ю.А. Исследование возможности получения гелей нового отечественного редкосшитого акрилового полимера «Ареспол» // Фармация на современном этапе проблемы и достижения. - 2000, С. 207.

66. Лаймбек Р.Т. Микробиологическое качество мазей и кремов .методы контроля. - М., 1996. - С. 45.

67. Лечение кожных болезней: Руководство для врачей / Под ред. Машкил-лейсона А. Л. М.: Медицина, 1990. - С. 560.

68. Лотоцкая М.Е.Применение акмида в качестве вспомогательного вещества в технологии гормональных мазей: Дис. канд. фарм. наук. М., 1992. — С. 281.

69. Ляпунов H.A., Воловик Н.В. Создание мягких лекарственных форм на различных основах. Сообщение 2. Исследование реологических свойств гелей, образованных карбомерами // Фармаком. -2001. № 2. - С. 1.

70. Манджиголадзе Т.Ю. Разработка технологии и изучение гидрофильной мазиглицерама: дис.к.ф.н. (5.00.01) / Т.Ю. Манджиголадзе. Пятигорск, 1995.-С. 183.

71. Майорова A.B., Суслина С.Н. Разработка состава и технология геля противовоспалительного действия // Сборник научных трудов: «Современные проблемы фармации». 1999 г. -депонирована в ГЦНМБ за № Д-26485 от 2000 г. - С. 209.

72. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник / Л.Б. Борисова, Л.М.Смирновой и др.; Под ред. Л.Б. Борисова, А.М.Смирновой -М.: Медицина, 1994. С. 528.

73. Минина С.А., Каухова И.Е. Химия и технология фитопрепаратов. М.: Гэотар-мед., 2004. - С. 560.

74. Михайлова Г.В. Медицинские и лечебно-косметические мази. Учебно-методическое пособие. М., 1999. - С. 22.

75. Мичник О.Ю. Методы получения сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья // Сб. научн. трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». Вып.59. Пятигорск, 2004. -С. 101.

76. Мошкова Л.В., Садоян В.А. Ассортимент биологически активных добавок к пище // Новая Аптека. Приложение. 2005. - № 5. - С. 33.

77. Музычкина P.A. Основы химии природных соединений. Алматы, 2010. — С. 564.

78. Павлова H.H., Веселов В.Б. Михнина Е.А. Применение препарата «Фитостимулин» в дерматологической и гинекологической практике // Тезисы докладов VIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». -М., 2001. С. 359.

79. Патент РФ 2076697 А 61 К 9/06, 38/47.Мазь «Лингезин» / Когян Э.З., Синицина Н.И., Траховская Л.К., Фомина И. П., Позднякова В.П., Долгова Г. В.

80. Пентин Ю.А., Вилков Л.В. Физические методы исследования в химии. Серия «Методы в химии». Москва: Мир, 2003. - С. 683.

81. Перспективы использования современных лекарственных форм в стоматологической практике / М.С.' Хмелевская, Ф.А. Могю, О.М. Михайлык, С.М. Бибик, С.С. Павличко, Л.Т. Фациц, О.Л. Матвитчук // Фармация. 1989. - № 1. - С. 14.

82. Перцев И.М., Даценко Б.М., Гунько В.Г. Многокомпонентные мази на гидрофильной основе // Фармация. 1990. - № 5. - С. 73.

83. Петушенко Л.В., Лесновская Е.Е. Фармакотерапия с основами фототерапии. -СПб.: СПХФИ, 1995. С. 250.

84. Плеханова Т.И., Хасанова С.Р., Галиахметова Э.Х. Поиск рациональных лекарственных форм на основе растительного сырья // Сб. научн. трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». Пятигорск, 2004. - С. 110.

85. Поздеев O.K. Медицинская микробиология. / Под редакцией акад. РАМН В.И. Покровского. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. - С. 768.

86. Получение и исследование ректальных мазей с тыквеолом / A.C. Цепков, Т.Н. Чеботарёва, В.Ю. Михалёв и др. // Тезисы докладов VIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». -М., 2001.

87. Пономарев В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья. М.: Медицина, 1976.-С. 203.

88. Полюдек-Фабини Р., Бейрих Т. Органический анализ. Руководство по анализу органических соединений, в том числе лекарственных веществ. Перевод с немецкого канд. хим. наук А.Б. Томчина. Ленинград: Химия, 1981.-С. 624.

89. Потанина О.Г., Самылина И.А. Оценка доброкачественности лекарственного растительного сырья с учетом диагностически значимых признаков // Фармация. 2003. - № 4. - С. 12.

90. Почему растения лечат / Ловкова М.Я., Рабинович A.M., Пономарева С.М. и др. М.: Наука, 1989. - С. 66.

91. Преч Э., Бюльманн Ф., Аффольтер К. Определение строения органических соединений. Таблицы спектральных данных. Перевод с английского Б.Н.Тарасевича. Серия «Методы в химии». М.: Мир, 2006. - С. 438.

92. Проблемы создания осмотически активных лекарственных систем для наружного применения / В.Г. Гунько, Б.М Даценко, И.М. Перцев, С.Г. Белов // Фарм. журн. 1991. - № 3. - С. 62.

93. Рабинович И.М., Банченко Г.В., Рабинович О.Ф. Клиническое изучение солко серил дентальной адгезивной пасты и мундизал геля при лечении хронического рецидивирующего афтозного и герпетического стоматита // Стоматология. 1999.- том 77.- № 3. - С. 22.

94. Редченкова В.Н., Химова О.М. Анализ требований некоторых фармакопей, предъявляемых к экстрактам // Хим.-фарм. журнал. 2006. - т. 40.-№ 1.-С. 37.

95. Робинович И.М., Банченко Г.В., Рабинович О.Ф., Безрукова И.В. Применение препарата "Тантум Верде" при заболевании слизистой оболочки полости рта // Стоматология. 1999. - т. 78. - № 6. - С. 20.

96. Рощин Н.И. Псевдоожижение в производстве лекарств. М., 1981. — С. 181.

97. Рощина П.И., Максимова Л.М. Лекарственные средства в стоматологии. Справочник. 2 изд., перераб. И доп. - М. Медицина, 2000.- С. 240.

98. Рылина Е.В. / Определение индофенольных соединений неорганической природы в лекарственном и пищевом растительном сырье методом ВЭЖХ: автореф. дис. . канд. фарм. наук. — Москва, 2011.

99. Рудаков О.Б., Востров И.А., Федоров С.В., Филлипов A.A., Селеменев В.Ф., Приданцев A.A. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. Воронеж: «Водолей», 2004. - С. 528.

100. Руденко Б.А., Руденко Г.И. Высокоэффективные хроматографическиеIпроцессы. Москва: Наука, 2003. - Т. 1. - С. 425. -Т.2. - С. 287.

101. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава РФ, 2004. - С. 132.

102. Садек П. Растворители для ВЭЖХ. Серия «Методы в химии». Перевод с английского A.A. Горбатенко и Е.И. Ревиной. Москва: БИНОМ, Лаборатория знаний. 2006. - С. 704.

103. Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А., Зельвенский В.Ю., Ганкина Э.С., Шатц В.Д. Аналитическая хроматография. Москва: Химия, 1993.-С. 464.

104. Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А., Зельвенский В.Ю. Приборы для хроматографии. Изд. 2-е. Москва: Машиностроение, 1987. С. 264.

105. Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А., Зельвенский В.Ю., Ганкина Э.С., Шатц В.Д. Аналитическая хроматография. Москва: Химия, 1993.-С. 464.

106. Самылина И.А., Баландина И.А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизации // Фармация. 2004. - № 2. — С. 39.

107. Сахатов Э. Исследования в области разработки новых лекарственных препаратов растительного происхождения (технологические и химико-биологические аспекты): автореф. .дисс. докт. фарм. наук. М., 1995.

108. Сечко О.Н., Зорян Е.В., Цветкова М.С., Шарагин Н.В. Сравнительная эффективность нестероидных противовоспалительных средств в комплексном лечении заболеваний пародонта // Стоматология. 1998. - т. 77.-№3.-С. 22-24.

109. Слюсар О.И Разработка составов и технологии мягких лекарственных форм ранозаживляющего действия с левомицетином и метилуацилом: Дис. .к.ф.н. (5.00.01)/О.И. Слюсар.-Москва, 2001.-191

110. Скунмакерс П. Оптимизация селективности в хроматографии. Пер. с англ. Москва: Мир, 1989.- С. 399.

111. Создание нового лекарственного препарата для профилактики и лечения герпеса/ И.А. Девяткина, И.А. Баландина, Т.П. Зюбр и др. // Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М., 2004 . - С. 435.

112. Создание мягких лекарственных средств на различных основах. Сообщение 2. Исследование реологических свойств мазей на водорастворимых основах / H.A. Ляпунов, Е.П. Безуглая, А.Г. Фадейкина, A.A. Лысокобылка // Фармаком. 1999. - № 6. - С. 10.

113. Старокожко Л.Е. Исследование иммуномодулирующих и мембраноактивных свойств препаратов из корня солодки // Вестник дерматологии и венерологии. 1996. - № 6. - С. 22.

114. Старокожко Л.Е. Новые лекарственные препараты из корня солодки для наружного применения // Вестник дерматологии и венерологии. -1995. № 5.- С. 14.

115. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов (моносахариды). — М.: Высшая школа, 1977. С. 224.

116. Сто лет хроматографии. Москва: Наука. 2003. - 739 с. тир. 750 экз.

117. Стыскин E.JL, Ицексон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. Москва: Химия, 1986. С. 288.

118. Сухие экстракты из лекарственного растительного сырья / Степанова Л.И., Янулис В.П., Нагаслаева Л.А. и др. // Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М., 1992. — С. 198.

119. Сухие экстракты из растений основа создания современных лекарственных форм / Глызин В.И., Лубсандоржиева П.Б., Даргаева Т.Д. и др. // Сб. тр. «Физ.-биол. аспекты изучения лек. растений». - Улан-Удэ, 1998. -С. 142.

120. Суслина С.Н. Разработка составов и технологии мазей и геля с маслом Витон для лечения воспалительных и аллергических заболеваний кожи: дис. . .к.ф.н. (5.00.01)/С.Н. Суслина. Москва, 2000.-С. 186.

121. Сычев С.Н., Гаврилина В.А., Музалевская P.C. Высокоэффективная жидкостная хроматография как метод определения фальсификации и безопасности продукции. Москва: ДеЛи принт. 2005. - С. 148.

122. Сычёв К.С. Практическое руководство по жидкостной хроматографии. Москва: Техносфера. 2010. - С. 272.

123. Федеральный реестр биологически активных добавок к пище / Под. Ред. Т.Д. Пилат. М.: Когелет, 2001. - С. 431.

124. Фещенко П.И. Целебные свойства природы. Киев: Урожай, 1990. - С. 168.

125. Фитотерапия с основами клинической фармакологии / Под ред. В.Г. Кукеса.-М., 1999.-С. 125.

126. Фроули Д. Аюрведческая терапия. М.: САТТВА, 2001. - С. 445.

127. Химический анализ лекарственных растений / Под ред. Н.И.Гринкевич. -М.: Высшая школа, 1983. С. 43.

128. Хроматография. Практическое приложение метода. Ред. Э. Хефтман. -Москва: Мир, 1986.- т.1. С. 336.

129. Хроматография в тонких слоях / Под ред. Э. Шталя. М.: Мир, 1965. - С. 508.

130. Хубер JI. Применение диодно-матричного детектирования в ВЭЖХ. Пер. с англ. Москва: Мир, 1993. С. 95.

131. Цагарейшвили Г.В., Головкин В. А, Грошовый Т. А. Биофармацевтические, фармакокинетические и технологические аспекты создания мягких лекарственных форм. // Тбилиси: Мецниереба, 1987. С. 263.

132. Чижова С.Т., Михайлова Г.В. Лечебные и медико-профилактичекие мази М., 1999.

133. Шаповалова E.H., Пирогов A.B. Хроматографические методы анализа. -Москва: МГУ. 2007. - С. 109.

134. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Рига: Зинатне, 1988. С. 390.

135. Шварц Т.Я. Современные нестероидные противовоспалительные средства. М.: Реафарм, 2002. - С. 40.

136. Шретер А.И., Валентинов Б.Г., Наумова Э.М. Природное сырье китайской медцины. М., 2004. - т. 1. - С. 59.

137. Штерн Э., Тиммонс К. Электронная абсорбционная спектроскопия в органической химии. Перевод с английского Т.М. Ивановой. Под редакцией Ю.А.Пентина. Москва: Мир, 1974. С. 296.

138. Braithwaite A., Smith FJ. Chromatographic Methods. Fifth Edition. Dordrecht- Boston London: Kluwer Academic Publisher. - 1999. - 559 p.

139. Broom N.D., Oloyede A. The importance of physicochemical swelling in cartilage illustrated with a model hydrogel system. // Department of Mechanical Engineering, University of Auckland, New Zealand. / Biomaterials 1998 Jul., V.19, № 13.-P.1179-1188.

140. Ebdon L., Evans E.H., Fisher A., Hill S.J. An Introduction to Analytical Atomic Spectrometry. Chichester New York - Weinheim - Brisbane -Singapore - Toronto: John Wiley&Sons. - 1998. - 225 p.

141. European pharmacopoeia 6th edition, 2008.

142. Ethnopharmacolgic investigation of ginger (Zingiber officinale) / Mascolo N., Jain R., Jain S.C., Capasso F. // Ethnopharmacol. 1989. - 27(1). - 40 p.

143. Gastroprotective activity of ginger zingiber officinale rocs., in albino rats / Rafatullah S., Mossa J.S., Ageel A.M., Parmar N.S. // Chin Med, 1989. 17(1). -51 p.

144. Ginger treatment of hyperemesis gravidarum / Fischer-Rasmussen W., Kjaer S., Dahl C., Asping. // Obsten Gynecol Reprod Biol. 1991. - 38(1). 19 p.

145. Ginger root — a new antiemetic. The effect of ginger root on postoperative nausea and vomiting after major gynaecological surgery / Bone M.E., Wilkinson D.J., Young J.R., McNeil J. // Anaesthasia. 1990. - 49(8). - 71 p.Kakac

146. Bohumil, Vejdélek J. Zdenék, Hachová E. Handbuch der Kolorimetrie. Band 1. Kolorimetrie in der Pharmazie. WEB Gustav Fischer Verlag. Jena. 1962. - 11391. P

147. Kazakevich Yuri, Lobrutto Rosario. HPLC for Pharmaceutical Scientists.

148. Kowalska Teresa, Sherma Joseph. Thin Layer Chromatography in Chiral Separations and Analysis. Boca Raton, London, New York: CRC Press.- 2007. -420 p.

149. New Jersey: Wiley-Interscience. 2007. - 1104 p.

150. Pharmacological studies on ginger /Suekawa M., Ishige A., Yuasa K, Sudo K. II Pharmacobiolodyn. 1984. - 7(11). - 48 p.

151. Pry de A. and Gilbert M.T. Applications of High Performance Liquid Chromatography. London: Chapman and Hall. 1979. - 255 p.

152. Quattrocchi Oscar Alberto, de Andrizzi Sara Albelaira, Laba Raúl Felipe. Introducción a la HPLC. Aplicación y Práctica. Argentina. 1992. - 407 p.

153. Scott Raymond P.W. Chromatographie Detectors. Design, Function and Operation. Chromatographie Science Series. Volume 73. New York Basel -Hong Kong: Marcel Dekker Inc. - 1996. -517 p.

154. Sethi P.D. High Performance Thin Layer Chromatography Quantitative Analysis of Pharmaceutical Formulations. Satish Kumar Jain for CBS Publishers and Distributors New Delhi (India).

155. Sherma Joseph, Fried Bernard. Handbook of Thin-layer Chromatography. New York, Bazel: Marcel Dekker.-1996. 1104 p.

156. Snyder Lloyd R., Kirkland Joseph J., Glajch Joseph L. Practical HPLC method development. Second edition. New York Chichester - Weinheim - Brisbane -Singapore - Toronto: Jonh Wiley & Sons, Inc. 1997. - 765 p.

157. Standards in Absorption Spectrometry. Techniques in visible and Ultraviolet Spectrometry. UV Spectrometry Group. Edited by C. Burgess and A. Knowles. London, New York: Chapman and Hall. 1981. - 142 p.

158. The United States pharmacopeia 29, 2006.150 f

159. Wagner H., Bladt S. Plant Drug Analysis. A Thin Layers Chromatographk-v^ Atlas. Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Verlag. 2001. - 384 p.

160. Waksmundzka-Hajnos Monika, Sherma Joseph, Kowalska Teresa. Thin Lay^^. Chromatography in Phytochemistry. Boca Raton, London, New York:1. Press.- 2008. 874 p.

161. Wall Peter E. Thin-layer Chromatography. A Modern Practical Appro ac^j^ Cambridge: Royal Society of Chemistry. 2005. - 184 p.