Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Химико-токсикологическое исследование фенкарола

РГ6 од

1 ;» МЛЛ №

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН АЛМАТИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ им. С. Д. АСФЕНДИЯРОВЛ

на правах рукописи

КАБДЕНОВА АКМАРАЛ ТАЛАПОВНА

УДК 615.9:615.21

ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ

ИССЛЕДОВАНИЕ ФЕНКАРОЛА

15.00.02 — фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Алматы — 1995

Работа выполнена на кафедре токсикологической и аналитической химии Шымкентского Государственного медицинского института Министерства здравоохранения Республики Казахстан

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук,

профессор Нпбаев К.Я.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

профессор Бисенбаев З.И.

кандидат фармацевтических наук, доцент Байзолданов Т.Б.

Ведущая организация: Ташкентский государственный фармацевтический институт

Запита диссертации состоится ____ 1995 г

Л 00

в —31.------часов на заседании специализированного Совета

Д 09.01.03 в йлматинском государственном медицинском институ те им. С.Д.Йсфендиярова (480012.йлматы, ул.Толеби,88).

С диссертацией можно познакомиться в библиотеке института по адресу:

Автореферат разослан "/В"_______ 1995 г.

Ученый секретарь специализированного Совета

Абдуллин К.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. К числа препаратов, . в последнее время наяедиих жирокое применение в медицине, относится фенкарол. Он используется как противогистаминное средство. Фенкарол применяетса в медицинской практике для лечениа аллергических заболеваний различной этиологии. Однако фенкарол обладает и токсическими свойствами: при передозировке мохет вызывать отравления. Фенкарол относится к препаратам списка 5. Несмотря на жрокое применение в медицине и токсичность фенкарола, в химико-токсикологическом отношении этот препарат изучен недостаточно.

До настоящего времени не изучена возможность применения некоторых современных физико-химических методов для идентификации и количественного определения фенкарола, выделенного из биологического материала. В литературе имеются некоторые данные об экстракции фенкарола органическими растворителями Не приводятся сведения о связывании фенкарола с биологическим материалом и разложения образупцихся при этом соединений. Методы выделения фенкарола из объектов биологического происхождения описаны недостаточно. Недостаточно изучено распределение фенкарола в органах и биологических жидкостях отравленных животных. Не изучена сохраняемость фенкарола в биологическом материале при его гниении, с использованием консервации биологического материала.

В связи с указанным выие, разработка методов исследования фенкарола в биологическом материале является одной из актуальных задач современного химико-токсикологического анализа.

- г -

Цель и задачи исследований. Целы навих исследований является разработка методов химико-токсикологического анализа фенкарола, изучение влияния различных факторов на результаты отдельных этапов химико-токсикологического исследования этого препарата.. , Для ревения указанной выле цели мы поставили следующие задачи:

- разработать физико-химические методы идентификации фенкарола, пригодные для целей химико-токсикологического анализа;

- изучить возможность применения фотоколориметрического и спектрофотометрического методов и высокоэффективной жидкостной хроматографии для количественного определения фенкарола. выделенного из биологического материала;

- изучить влияние различных факторов на экстракцию фенкарола органическими растворителями;

- изучить условия.связывания фенкарола с белковыми веществами и разложения образующихся при этом соединений;

- изучить методы очистки вытяжек из биологического материала, содержащих фенкарол.от примесей белковых веществ и продуктов их гнилостного разложения;

- разработать оптимальный метод выделения фенкарола из объектов биологического происхождения;

- изучить распределение фенкарола в органах животных, отравленных исследуемым препаратом;

- изучить сохраняемость фенкарола в трупном материале при гнилостном разложении его при отсутствии консервантов и с использованием консервации.

Научная новизна работы. Разработаны методики выделения фенкарола из объектов биологического происхождения (внутренние органы трупов, кровь и моча).

Для идентификации фенкарола предложены методы: хроматографии в тонком слое сорбента, НФ - спектрофотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Для количественного определения фенкарола, выделенного из биологического, материала, разработаны методики фотоколориметрического и спектрофотометрического определений (в ультрафиолетовой и видимой областях).

Обоснованы условия проведения количественного определения фенкарола из объектов биологического происхождения мэто-дом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Изучено влияние природы органических растворителей, рН среды, природы электролитов и т.д. на экстракции фенкарола органическими растворителями.

Изучены условия связывания фенкарола с биологическим материалом и влияние рН среды на разложение образующихся при этом соединений.

Изучено влияние природы кислот на . выделение фенкарола из биологического материала.

На основании данных , полученных при изучении распределения фенкарола в органах, тканях и биологических жидкостях отравленных животных, даны рекомендации для правильного выбора объектов биологического происхождения, подлежащих химико-токсикологическому анализу.

Изучена сохраняемость фенкарола в биологическом материале в зависимости от времени гниения его при отсутствии кон-

- 4 -

сервантов и с использованием консервации.

Практическое значение работы. Разработанные нами методики идентификации и количественного определения фенкарола пригодны для целей химико-токсикологического и фармацевтического анализов. Предложенные методики выделения фенкарола из биологического материала, могут быть использованы в практике судебно - химических лабораторий для решения вопроса об отравлении фенкаролом. С помощью предложенных нами методик выделения фенкарола из объектов биологического происхокдения можно выделять большие количества фенкарола, чем с помощью других методов, описанных в литературе. Некоторые из разработанных методик могут быть использованы для оценки качества фенкарола в контрольно-аналитических лабораториях.

Результаты химико-токсикологического исследования фенкарола оформлены в виде методических рекомендаций " Определение фенкарола в трупном материале" и приняты для апробации и внедрения в судебно-химическув практику НИС Министерства Здравоохранения Республики Казахстан.

Приведенные в диссертации методики внедрены в судебно-химических лабораториях Республиканского бвро судебно-медицинской экспертизы КЗ Республики Узбекистан, Еыикентского областного бвро судебно - медицинской экспертизы и в учебный процесс Вымкентского Государственного медицинского института.

По материалам диссертации опубликовано 2 печатных работы, депонировано - 3.

Апробация работы. Основные результаты исследований, выполненные по теме диссертации, доложены:

- на конференции "Актуальные проблемы фармации и медицины" 1ымкентского Государственного медицинского института (Иымкент, 1992);

- на заседании кафедры фармацевтической и токсикологической химии Вымкентского Госддарственного медицинского института (Иымкент, 1995);

- на расширенном заседании Проблемной комиссии 1ымкент-ского Государственного медицинского института (Яымкент, 1995).

- на заседании Ученого Совета фармацевтического факультета Алматинского Государственного медицинского института (Алматы, 1995).

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, пяти глав, общих выводов, списка литературы, вклвчаищего 180 источников литературы, из них 45 на иностранных языках. Работа изложена на 192 страницах мавинописного текста, содержит 34 таблицы, 13 рисунков и приложение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертация выполнена в соответствии с планом научных исследований Шымкентского Государственного медицинского института по соизной проблеме 48.03 "Фармацевтическая химия" (N государственной регистрации 01827022869).

На защит'у диссертации -выносятся результаты экспериментальных исследований и их теоретическое обоснование:

- способы обнаружения фенкарола в химико-токсикологическом анализе;

- методики количественного определения фенкарола;

- влияние рН среды, природы органических растворителей и наличия электролитов в водной фазе и др. на экстракцию фенкарола;

- методы выделения фенкарола из органов и биологических жидкостей трупов;

- распределение в органах животных (собак), отравленных этим препаратом;

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Идентификация фенкарола Фенкарол (хинуклидил -3- дифенил карбинола гидрохлорид) применяется в медицинской практике как противоаллергическое средство. Состав и строение фенкарола выражается следуюней Формулой:

С.ЛН0ЛО * НСЬ

',2023

Мол. масса 329,67

Синоним: 1ШГепа(11пе, 11и1Гепа(11шм.

Ми изучили возможность применения физико-химических методов для идентификации фенкарола в химико-токсикологическом анализе.

Нами разработан метод хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках ^ПиШ ДО -254" и "ЗогЬИГ, а также на пластинках, покрытых тонким слоем силикагеля ЛСЛ 5/40 Н с добавлением 5X люминофора в системах растворителей: диоксан-хлороформ-25Х-ный раствор аммиака (22:2:1) и бензол-диоксан-25%-ннй раствор аммиака (2:20:1) для обнаружения фенкарола.

Пятна этого препарата на хроматограммах проявляли путем облучения их в 9Ф-свете, с помощью реактива Драгендорфа, модифицированного по Кунье, к которому прибавляли аскорбиновую кислоту и выдерживанием в атмосфере, насыщенной парами йода.

Предел обнаружения: 7 мкг фенкарола в 0,05 мл пробы (при проявлении в парах йода), 2 мкг фенкарола в 0,05 мл пробы (при облучении пластинок УФ-светом) и 15 мкг препарата в 0,05 мл пробы (при проявлении реактивом Драгендорфа, модифицированным по Мунье).

Нами изучены ЗФ - спектры поглощения фенкарола в воде, 0,02 н. растворе серной кислоты, 0,1 н. растворах соляной кислоты и гидроксида натрия, хлороформе. При этом установлено, что исследуемый препарат во всех применяемых растворителях имеет по одной полосе светопоглощения. В воде и 0,1 н. растворе соляной кислоты спектр светопоглощения фенкарола характеризуется максимумом при 258 нм, в растворах 0,02 н. серной кислоты и 0,1 н. растворе гидроксида натрия - при 257 нм, в хлороформе фенкарол имеет полосу поглощения с максимумом при 259 нм. Наиболее интенсивными являются максимумы

светопоглощения зтого препарата в воде и 0,02 н. растворе серной кислоты. В дальнейших напих исследованиях при исполь-зовайии метода ЯФ-спектрофотометрии в качестве растворителей мы применяли водд и 0.02 н. раствор серной кислоты.

Наин установлено, что метод НФ - спектрофотометрии при-.годен для обнаружения фенкарола, выделенного из объектов биологического происхождения, после дополнительной очистки вытяжек методом хроматографии в тонком слое силикагеля ЛСЛ 5/40 К или вакуум-фильтрации с помощью титанового фильтра.

Нами изучены условия обнаружения фенкарола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. На основании результатов исследований нами выбраны следующие условия идентификации фенкарола: в качестве подвижной фазы была выбрана система метанол-хлороформ-252-ный раствор аммиака (8:4:0,2). Детектирование производили по поглощению света при длине волны равной 25? нм, со скоростью протекания злюента Г.5 мл/мин, при температуре 1В*С. В работе использовали хроматограф " Hewlett Packard 1050", с колонкой "Spherisorb".

Идентификацию производили по времени удерживания, составляющего 10,8 минуты.

Предел обнаружения: 5 нг фенкарола в пробе.

Проведенные нами исследования показали, что для обнаружения фенкарола в вытяжках из биологического материала пригодны методы хроматографии в тонком слое сорбента, высокоэффективной жидкостной хроматографии. Для использования метода НФ-спектрофотометрии с целью идентификации фенкарола, полученные вытяжки необходимо очистить методом хроматографии в тонком слое сорбента или вакуум-фильтрации с помощью тита-

нового фильтра.

Количественное определение ф е н к а р о л а. Для количественного определения фенкарола в растворах и вытяжках из биологического материала нами разработаны методы ЭФ - спектрофотометрии, спектрофотометрии в видимой области, фотоколориметрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Разработанный нами ЭФ -спектрофотометрический метод количественного определения фенкарола основан на измерении светопоглочения водных растворов этого препарата при длине волны 258 нм, а растворов препарата в 0,02 н. растворе серной кислоты при - 257 ны (с помощью спектрофотометра СФ-26). Расчет концентраций фенкарола производили при помощи удельного и молярного коэффициентов светопоглоцения и по калибровочному графику.

Результаты расчета удельных и молярных коэффициентов светопоглощения подвергали статистической обработке.

Светопоглоцение растворов фенкарола в воде и 0,02н. растворе серной кислоты подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бе-ра в пределах от 20 до 200 мкг указанного препарата в I мл раствора.

Нами установлено, что определению фенкарола, выделенного из объектов биологического происхождения методом НФ-спек-трофотометрии, мешают примеси, переходящие в вытяжки совместно с исследуемым препаратом. Этот метод пригоден для целей химико-токсикологического анализа после дополнительной очистки этих вытяжек методом вакуумной фильтрации через титановый фильтр.

- 10 -

Предлагаемый нами спектрофотометрический (видимая область) метод количественного определения фенкарола основан на способности этого препарата с бромфеноловым синим образовывать вишневого цвета ионный ассоциат,экстрагирующийся хлороформом:

ßr

Образоваввиеся ионные ассоциаты при взаимодействии -со целочьв разлагаются с выделением свободного красителя, количество которого эквивалентно количеству препарата. Оптичес-куи плотность растворов, окрашенных в фиолетовый цвет, измеряли с помоцьв спектрофотометра СС-26 при длине волны равной 590 нм, т.к.'при этой длине волны проявляется максимум све-топоглоцения окравенных растворов.

Нами установлено, что светопоглокение окравенных растворов подчиняется закону Бугера - Ламберта - Бера в пределах концентраций от 0,05 до 1,0 мг фенкарола в 25 мл конечного объема.

На основе реакции взаимодействия фенкарола с бромфеноловым синим нами разработан фотоколориметрический метод ко-

- 11 -

личественного определения этого препарата.

Методом изомолярных серий установили, что исследуемый препарат с красителем реагирует в соотношении 1:1.

Оптическую плотность окрашенных в фиолетовый цвет (в результате реэкстракции ионного ассоциата "препарат-краситель" 0,1 н. раствором гидроксида натрия) растворов мы измеряли с помощьв фотоэлектроколориметра КФК-2-УХЛ 42 (светофильтр N 7 (оранжевый),^ эфф. 5Э0±10 нм) в кввете с толщиной слоя жидкости 3 мм.

Светопоглощение окрашенных растворов подчиняется объединенному закону Бугера-Ламберта-Бера в пределах концентраций от 0,05 до 1,0 мг фенкарола в 25 мл конечного объема.

Предел определения: 50 мкг фенкарола в 25 мл конечного объема.

Разработанная нами методика применялась для определения Фенкарола в лекарственных формах и объектах биологического происхождения. Относительная ошибка определения фенкарола не превышает ± 0,80 X.

Предложена методика обращенно- фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии для количественного определения фенкарола в пробе. Условия хроматографирования приведены при описании способов идентификации препарата указанным методом (см. стр. 8 ). Детекция фенкарола по указанной методике осуществлялась по светопоглощении в НФ-области спектра при длине волны 257 нм. Установлено, что линейная зависимость высоты хроматографического пика от количества фенкарола имеет место от 5 до 30 мкг этого препарата в пробе.

Расчет содержания фенкарола в пробе проводили методом

абсолютной калибровки. По найденным результатам строили калибровочный график зависимости высоты пика от концентрации.

Нами использовалась также вторая возможность метода абсолютной калибровки, в соответствии с которой строили калибровочный график зависимости площади пика (Э = мкВ*с) от содержания фенкарола в пробе (в интервалах концентраций от 0.5 до 10 нкг/мкл). В указанных пределах зависимость имела линейный характер.

Нижний предел определения: 5 нг в пробе.

Экстракция фенкарола из водных растворов. Мы изучили влияние рН среды, природы органических растворителей и присутствия электролитов в водной фазе на экстракцию фенкарола из водных растворов.

Результаты наиих исследований показали, что степень экстракции фенкарола зависит от природы органических растворителей. Фенкарол экстрагируется испытанными нами органическими растворителями как из кислой, так и из щелочной среды. Наибольвие количества фенкарола экстрагируются изоамиловым ' спиртом (90-92%) и хлороформом (86 - 88 Л при рН 7,0-7,98, затем 1,2 - дихлорэтаном (82 - 84 2) , диэтиловым эфиром (78 - 82 2) и бензолом (79-81 X) при рН 7,98-8,96. Лучшими органическими растворителями для экстракции фенкарола из водных растворов являются изоамиловый спирт и хлороформ. Из-за высокой токсичности изоамилового спирта в навей дальнейпей экспериментальной работе мы использовали хлороформ,с помощью которого экстрагируется до 88 X препарата.

Нами установлено, что на степень экстракции фенкарола органическими растворителями влияет присутстие электролитов

(хлорида натрия и сульфата аммония) в водной фазе. При наличии указанных электролитов в водной фазе степень экстракции фенкарола повивается.

Выделение фенкарола из биологического материала. При проверке пригодности методов, применяемых в химико-токсикологическом анализе для выделения алкалоидов и их синтетических аналогов, установлено, что с помощью этих методов из биологического материла выделяются незначительные количества фенкарола. Согласно данным литературы, к числу потерь выделяемых препаратов из биологического материала мояно отнести: неправильный выбор извлекающих жидкостей, неправильный выбор кислот, применяемых для подкисления извлекающих жидкостей, неполное разложение исследуемого препарата с белковыми веществами биологического материала и т.д.

Нами было изучено влияние природы извлекавшей жидкости на изолирование Фенкарола из биологического материала. В результате проведенных исследований показано, что при подкис-лении биологического материала минеральными (серной и соляной) кислотами выделяется больнее количество фенкарола, чем при подкислении органическими кислотами (уксусной и щавелевой).

В связи с недостатками описанных ранее методов выделения фенкарола из биологического материала, мы разработали новый метод выделения фенкарола. основанный на изолировании его водой, подкисленной серной кислотой, с последующей очисткой вытязек методом вакуумной фильтрации при помощи титанового фильтра.

- 14 -

Связывание фенкарола с биологическими веществами. Нами изучено влияние рН среды на связывание фенкарола с белковыми веществами и на разложение образовавиихся соединений. Для этой цели мы применили метод равновесного диализа. С помощью этого .метода было установлено, что фенкарол с белковыми веществами связывается при рН выве 4,0 , а максимум связывания при рН 7,0. Образовавжиеся при этом соединения разлагаются при рН 1,81-2,21.

Методика выделения фенкарола из органов трупов. На основании экспериментальных данных нами предложена следующая методика выделения фенкарола из биологического материала: в колбу емкостью 500 мл вносили 100 г мелкоизмельченной печени трупа, прибавляли 20 мг фенкарола. Содержимое колбы смевивали и оставляли на сутки, периодически перемевивая. Параллельно ставили контрольный опыт (печень трупа без фенкарола). Через сутки пробы биологического материала заливали 0,02 н. раствором серной кислоты до покрытия твердых частиц жидкостью. Смесь подкисляли с помощью 20 7L -ного раствора серной кислоты до рН 2,0 по универсальному индикатору и смеси оставляли на 2 часа для настаивания при частом неремеживании и контроле рН среды. По истечении указанного времени кислые водные вытяжки сливали. Твердые частицы еще один раз заливали 0,02 н. раствором серной кислоты до рН 2,0 и дважды настаивали по 1 часу.

Объединенные кислые водные вытяжки процеживали и центрифугировали в течение 30 минут (3000 об/мин). Надосадочную жидкость (центрифугат) сливали, а остаток в центрифужном

стакане перемепивали стеклянной палочкой и заливали 20 мл 0,02 н. раствора серной кислоты. Содержимое центрифужного стакана настаивали в течение 30 минут и центрифугировали. Надосадочную жидкость присоединяли к ранее полученному цент-рифугату. Полученный объединенный центрифугат подвергали очистке методом вакуумной фильтрации с помочью титанового фильтра. Прозрачную жидкость, полученную после очистки 3 раза взбалтывали с хлороформом из кислого раствора (по 15 мл). Полученные хлороформные вытяжки объединяли и выпаривали досуха. Сухие остатки растворяли в 5 мл горячей воды. По 1 мл полученных растворов использовали для количественного определения фенкарола Фотоколориметрическим методом.

К оставвейся кислой водной Фазе прибавляли 252-ный раствор аммиака до рН 7,98. Затем жидкость вносили в делительную воронку, прибавляли 15 мл хлороформа и встряхивали в течение 3-х минут. После разделения фаз, т.е. через 5 минут слой органического растворителя сливали. Эту операцию повторяли еце дважды. Объединенные хлороформные вытяжки выпаривали досуха. Сухие остатки растворяли в 5 мл горячей воды и проводили количественное определение фенкарола фотоколориметрическим методом.

Сравнительная оценка результатов выделения фенкарола из биологического материала различными методами представлена в таблице.

- 16 -

Сравнительная оценка различных методов выделения фенкарола из биологического материала

Методы изолирования фенкарола ! Выделено фенкарола из биологического материала ! Ш

Этанолом, подкисленным

щавелевой кислотой 11,91 - 12,07

Водой, подкисленной

вавелевой кислотой 15,94 - 16,06

Водой, подкисленной

серной кислотой 32,04 - 32,16

Предложенным нами методом 49,94 - 50,06

Результаты навих исследований, приведенные в таблице, свидетельствует о том, что с помочью предложенного нами метода из биологического материала выделяется больвее количество фенкарола, чем с помочью других методов.

Выделение фенкарола из крови. В колбы вместимостью 50 мл вносили по 10 мл исследуемой крови, прибавляли по 20 мг исследуемого препарата,содержимое колб перемевивали и оставляли на 24 часа при комнатной тем-» пературе. По истечении указанного времени в каждую колбу прибавляли по 20 мл 0,02 н. раствора серной кислоты и доводили рН 20 %-ным раствором серной кислоты до рН 2 (по универсальному индикатору). Содержимое колб оставляли на 2 часа при периодическом перемевивании. По истечении указанного

- 17 -

времени содержимое колб центрифугировали 30 минут при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость отделяли, а осадок еде 2 раза обрабатывали 0,02 н. раствором серной кислоты и подвергали повторному центрифугировании. Центрифугаты объединяли, доводили объем до 100 мл 0,02 н. раствором серной кислоты, подвергали очистке методом вакуумной фильтрации. К очищенным центрифугатам прибавляли хлороформ (порциями по 25 мл) и 3 раза взбалтывали. Хлороформные вытяжки объединяли, хлороформ выпаривали досуха. Сухой остаток растворяли в 5 мл горячей воды. Этот раствор использовали для количественного определения фенкарола фотоколориметрическим методом.

Кислый центрифугат, оставнийся после взбалтывания с хлороформом подщелачивали 25 %-ным раствором аммиака до рН 7,98, а затем фенкарол трижды экстрагировали хлороформом (по 25 мл). Из объединенных хлороформных вытяжек отгоняли хлороформ досуха. Сухие остатки растворяли в 5 мл горячей воды. Количественное определение содержания фенкарола проводили фотоколориметрическим методом.

Остановлено, что с помощью предложенного нами метода из крови можно выделить от 56,89 до 57,11 X препарата.

Выделение фенкарола из мочи. В колбы емкостью 100 мл вносили 50 мл мочи, содержащей 20 иг фенкарола. Эти пробы взбалтывали, прибавляли 30 мл 0,02 н. раствора серной кислоты до рН 2,0 и доводили рН среды с помощью 20%-ного раствора серной кислоты до 2,0 и смеси оставляли на 2 часа при .периодическом перемеиивании. Затем жидкости переносили в делительные воронки, в каждую из которых прибавляли по 15 мл хлороформа. Содержимое делительных во-

ронок взбалтывали по 10 минут, переносили его с образовав-вейся эмульсией в центрифужные стаканы и центрифугировали в течение 10 минут (5000 об/мин). Двухфазную жидкость после центрифугирования переносили в делительные воронки и отделяли хлороформные фазы. Эти операции (взбалтывания с хлороформом и центрифугирования) повторяли еще 2 раза. Хлороформные фазы соединяли и выпаривали хлороформ досуха. Сухие остатки растворяли в 5 мл горячей воды и в полученных растворах определяли количественное содержание фенкарола.

Оставвиеся кислые водные центрифугаты подщелачивали 252-ным раствором аммиака до рН 7,98, переносили в делительные воронки, в которые прибавляли по 15 мл хлороформа. А затем поступали так. как указано выие.

Количественное определение проводили фотоколориметрическим методом.

9становлено, что с помощью предложенного нами метода из мочи можно выделить от 69,94 до 70,06 X препарата.

Разработанные нами методы мы использовали для выделения Фенкарола из органов и биологических жидкостей собак, отравленных этим препаратом. Выполненные нами исследования, посвященные изучению распределения фенкарола в органах и биологических жидкостях собак, отравленных фенкаролом, показали, что наибольжие количества данного препарата можно выделить из желудка с содержимым - 6,96 мг, печени - 4,78 мг, легких-4,31 мг, почек - 3,92 мг, крови - 3,86 мг и мочи - 3,81 мг (в пересчете на 100 г органа или 100 г биологической жидкости), Определенные количества фенкарола содержатся в тонком и толстом кивечниках, сердце и мозге.

- 19 -

Поэтому при ревении вопроса об отравлении фенкаролом на химико-токсикологическое исследование необходимо направлять желудок с содержимым, печень, легкие, почки, кровь и мочу.

Ны также изучили влияние сроков хранения биологического материала на сохраняемость в нем фенкарола. При отсутствии консервантов фенкарол можно обнаружить в трупном материале в течение 20-ти суток, а при консервации биологического материала этиловым спиртом фенкарол можно определить по истечении 12-ти месяцев.

' ОБЩ ВЫВОДЫ

1. Для обнаружения фенкарола, выделенного из биологического материала могут быть использованы метод хроматографии в тонком слое сорбента и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Рекомендована методика ЭФ - спектрофотометрии для обнаружения фенкарола в вытяжках из объектов биологического происхождения, после дополнительной очистки вытяжек от примесей методом хроматографии в тонком слое силикагеля ЛСЛ 5/40 М или вакуум-фильтрации через титановый фильтр.

3. Для количественного определения фенкарола, выделенного из биологического материала, пригодны спектрофотометри-ческий СНФ- и видимая область) и фотоколориметрический методы.

4. Разработана методика количественного определения Фенкарола, выделенного из биологического материала, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Расчет содержания может быть проведен с помощью абсолютной калибровки (по высоте и площади пика).

- 20 -

5. Фенкарол экстрагируется органическими растворителями как из кислой, так и из щелочной средн. Экстрагирование кзо-амиловым спиртом при рН 7,0 -7.98 дает наилучиие результаты, но вследствие токсичности этого растворителя, для наших опытов мы применяли хлороформ.

6. На степень экстракции фенкарола органическими растворителями влияет присутствие электролитов (хлорида натрия и сульфата аммония) в водной фазе. В присутствии указанных электролитов степень экстракции фенкарола органическими растворителями повыоается.

7. Фенкарол связывается с белковыми веществами при рН вше 4,0. Образовавшиеся при зтом продукты взаимодействия фенкарола с белками разлагаются при рН 1,81-2,21.

8. Разработан метод изолирования фенкарола из объектов биологического происхождения с использованием в качестве изолирующей жидкости воды, подкисленной до рН 2. Метод позволяет выделить из ,100 г биологического материала от 49,94 до 50,06 г, из крови 56,89 - 57,11 X. мочи 69,94 - 70,06 г фенкарола.

9. Разработан способ очистки извлечений из биологического материала от белковых веществ, продуктов их разложения и других примесей с помощью метода вакуум-фильтрации через титановые фильтры с размерами пор 10 нм.

10. Изучено распределение фенкарола в органах собак. На основании полученных данных, для проведения химико-токсикологического исследования рекомендуется брать желудок с содержимым, печень, легкие, почки, кровь и мочу.

11. Изучена сохраняемость фенкарола в биологическом ма-

териале при его гнилостном разложении при отсутствии консервантов по истечении 20 суток можно определить 9,34 7. препарата, а в подвергнутом консервации, через 12 мес. удается выделить 1,40 X фенкарола.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Кабденова fl.T. Нвбаев К.Н., Бралинова К.И. Фотоколориметрический метод количественного определения фенкарола: Сб. науч. тр.:"Актуальные проблемы фармации и медицины". -Бымкент, 1992.- С. 205-206.

2. Кабденова fl.T., Нвбаев H.H., Бралинова К.И., Ремизова М.Г. Спектрофотометрический метод определения фенкарола // Деп. в КазгосИНТИ 02.06.94. Н5010-Ка94. Алматы, 1994.- б с.

3. Кабденова fl.T., Ннбаев К.Н., Бралинова К.И., Кутуба-ева Г.Б. Идентификация фенкарола методом хроматографии в тонких слоях сорбентов // Деп. в КазгосИНТИ 02.06,94. N 5009 -Ка94. Алматы, 1994.- 6 с.

4. Кабденова fl.T. Экстракционно-фотометрическое определение фенкарола // Деп. в КазгосИНТИ 26.10.94. N 5425-Ка94. Алматы,1994.- 4 с.

5. Кабденова А.Т. Изучение распределения фенкарола в органах и биологических жидкостях, отравленных животных // Здравоохранение Казахстана,- 1995.- N 1.- С. 64.

1 у е ы р ы а

ЙЕНКАРОЗДШ ХШКЩ-УШЩ ЗьАШЬЛН ЗПТГЕЛП

Дабденова Ак?.;арал Талап-н^гы

Кедицика теЕ1ркбес1нде фенкэрол эткологиясы эртурл1 аллергиялыц ауруларын емдеу ушн колдакылады.

¿енкарол тек цака емдхк дэр1 ретгнде емес, 6ezrini ,6ip улылыгы бар зат ретхнде кбцгл аудартады. Eipan ол хшшялыц улылыгына цагыеты то лык зерттелмеген.

Ссыган байланысты 613Д1Ц зерттеуыягдщ мацсаты, препаратпен адам уланып елген жагдаЕда,'оны мей1т ыушеле-рхнен ббЛ1Г1Н 'алып,сапалы жене сандыц ывлшерде аньщтау. Оенкаролдыц хшлияльщ-улклык жагдайын зерттеу кез1нде ' пайдалацуга болатын темендегхдей зерттеу кэтижелерхн, 6ist алгаш рет усынкп отнрмыз: сапалыц талдау кэне идентификациям YmxH - УК - спектрофо тометрия; жука кабатты хроматография; жогары ти1мд1Л1ктх суйыкткн хроматография эдхстерх; сандыц ыелшерхн аныцтау yeih фотоколорнметрия-лык, спектрофотоыетриялш? /УК - жэне спектрдщ керхнетхн жагына/ жене когары тивдд1лгкт1 суйьщтьщ хромотограЗия ед1стер1 усынылады.

фенкаролдщ судагы ер1т1нд1схнщ эртурлх жагдайдагы pH /сутегх к&рсеткшгне байланысты/, органикалыч ерхткхш-термен epirimTiK ^атынасыj фенкарол epirimTiriHiii органи-калыч ер1ткштер табигатына байланыст&шгы жене фенкарол-дыц белоктармен цосылыстыц берхктхлхгх зерттелдх; фенка-ролдщ осы препараттан жасанды жагдайда уланган жануарлар елхгх органдарша белхнух фенкаролдьщ ыэПхт денесхкщ niipy кез1ндег1 сацталу немесе ыдьграу мерз1мх зерттелдх.

Е1зд1ц усынган эд1стер1М1з фенкаролмен уланган кез1н-дег1 сот-химиялык зерттеулерге пайдалану yeih кажет. Еул эд1ст1ц бхр бел1Г1 дерххана баск;ар;асындагы бакылау-талдау, халывда сатклатын фенкаролдьщ сапасын тексертуге пайдага асадц.

- 23 -SUMMARY PHENCAROL CHEMICO-TOXICOLOGICAL INUESTISATION

Akhaaral T. Kabdenova

Phencarol Is used for the treataent of allergic diseases of different etiology. Phencarol is of great interest not only as a reaedy but as a substance of definite toxicity. Though phencarol is widely used in ledicine and is toxic but it hasn't yet been studied practically in cheaico -toxicolo-dical aspect. In this connection the ala of our research was working out of phencarol discharge aethod froa the objects of biological origin and the developaent of identification's aethods and quantitative definition of the preparation discharged froa biolodical Material.

For the first tiae during phencarol investigation in cheaico-toxicological aspect the following results have been received:the possibility of use of chroaatographical aethods In thin levels of sorbents has been shown; UU - spectroscopy and high-effective liquid chroaatography for phencarol identification. For quantitative definition has been suggested such Methods as : photocolouraetric and spectrophotoaetric (UU- and visible field) and high-effective liquid chroaatography. The following has been studied: extraction of phencarol by organic solutions.phencarol binding with protein substances according to pH -aediua and conditions of decoaposi-tion of foraed coapounds, conservation of phencarol in corpse aaterial according to tiae of rotting distribution of phencarol in organs and biological liquids poisoned aniaals (dogs). The aethod of phencarol extraction froa corpses' organs and biological liquids has been suggested.

The aethods worked out by us are useful for cheaicole-gal Investigation of poisoning by phencarol. Part of these aethods is suitable for their use in test - analytical laboratories for quality control of phenc?""1