Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние фенкарола на активность ферментов, участвующих в гидролизе белков, при сенсибилизации и анафилактическом шоке

Р Г Б ОД

Ь 0 СсП МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

ПЕРВЫЙ ТАШКЕНТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК 615.015:616.355

АЛИМУХАМЕДОВА ЗУЛХУМОР ТАХИРОВНА

ВЛИЯНИЕ ФЕНКАРОЛА НА АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ, УЧАСТВУЮЩИХ В ГИДРОЛИЗЕ БЕЛКОВ, ПРИ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ И АНАФИЛАКТИЧЕСКОМ ШОКЕ

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ташкент - 1997

Работа выполнена в первом Ташкентском государственно!

медицинском институте и НИИ медицинской реабилитации физиотерапии им. А.А.Семашко

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

Заслуженный деятель науки РУз, доктор медицинских наук,

прфессор У.Б.ЗАКИРОВ

Доктор медицинских наук Т.Д.ГУЛЯМОВ

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: Доктор медицинских наук,

профессор Х.У.АЛИЕВ Кандидат биологических наук,

старший научный сотрудник Р.Т.ТУЛЯГАНОВ

Ведущая организация - Второй Ташкентский государственны медицинский институт

Защита диссертации состоится"_"_1997 1

в_часов в Первом ТашГосМИ на заседании спецсовет

Д 087.01.01 по адресу: 700047, г.Ташкент, ул.Хамзы, 103.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке институт Первого ТашГосМИ.

Автореферат разослан "_"_1997 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук

М.Ш.КАРИМОВ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние годы в связи с ухудшением экологической обстановки в нашей планете, применением различных химикатов в сельском хозяйстве и промышленности, использованием синтетических пищевых продуктов.применением многочисленных химических препаратов в современной медицине и по, некоторым другим причинам почти во всех странах мира наблюдается постоянный рост числа больных, страдающих с аллергическими заболеваниями и с нарушениями в иммунной системе. По самым последним данным. 10-205 населения Земного шара имеет скрытую или явную аллергию (И.С.Гущин. А. С. Сараф, 1992).. В промышленных р\йонах нашей республики на каждый 1000 человек населения приходится 152 больных с аллергическими заболеваниями(В.И. Пыцкий и др. ,1991). Состояние сенсиС>;-лизации, которое не всегда проявляется ярко всаженными клиническими симптомами, встречается у большинства людей.

Известно, что местом постоянного контакта организма с аллергенами, которые приводят к развитию аллергических заболеваний, является пищеварительный тракт. Обладая своеобразными морфологическим и гистологическим строением, а также выполняемыми функциями,слизистая оболочка этой системы препятствует проникновению основной массы антигенов во внутреннюю среду организма (И. А.Алешин и др. ,1988; У.Б.Закиров и др.. 1993, 1996).

Как видно из выкеизлоясенного, изучение функциональных изменений пищеварительной системы при различных аллергических состояниях и фармакологическая коррекция возможных нарушений в ;/гой системе является одним из важнейших проблем.

Для профилактики обострения симптомов аллергических заболеваний, а -также для их лечения, наряду с другими лекарстгенными средствами широко используются и антигистамикные препараты (А. О.Кавеладзе, 1992; Т.Н.Нурпейсов и др., 1993; Д. А.Харкевкч, 1993; М.Д.Мааковский, 1995; У. Б. Закиров и др.. 1996; М.Ласе!. 1992; А. НаЪапаЬе, 1993; М. 1. ВгаШоп, 1955). но влияние их на функциональное состояние панкреатических и энтеральных ферментов. участвующих в гидролизе и усвоении основных компонентов пищи, . у здоровых и а-плергизированных организмах, изучено недостаточно. *

На основании вышеприведенных, в настоящей работе изучено в/к-

яние широко применяемого в практической медицине антигистаминно-го средства фенкарола на активность пищеварительных ферментов, участвующих в начальных и заключительных стадиях гидролиза бел-г.ов. у интактных и аллергизированных животных.

Цель работы. Изучение активности протеолитических ферментов у животных в норме,при сенсибилизации и анафилактическом шоке, научного обоснования использования эффективного и широко применяемого Н) - гистаминоблокатора Фенкарола для коррекции нарушений в ферментном спектре панкреа^оэнтеральной системы при аллергических состояниях и заболеваниях.

В соответствии с этим были определены следующие задачи:

- изучение активности ферментов, участвующих в гидролизе белков, при однократном введении Hj - гистаминоблокатора фенкарола интактным живо гнын;

- изучение активности -ротеолитических ферментов при длитель- . ном введении этого препарата у интактных крыс;

- определение активности ферментов, участвующих в гидролизе белков, при сенсибилизация и анафилактическом токе;

- определение активности вышеназванных ферментов в условиях сенсибилизации и анафилактического шока при профилактическом введении фенкарола;

- исследование' активности протеолитических ферментов в условиях анафилактического шока при лечебном введении фенкарола;

- определение активности Mg2*- АТФазы в норме, при-сенсибилизации и анафилактическом шоке, а также изучение влияния фенкарола на возможные при этом сдвиги в активности этого фермента; •

- изучение некоторых сторон механизма действия фенкарола на ачтивноеть протеолитических ферментоь в опытах. In vitro.

Научная новизна. Впервые с использованием современных биохимических методов исследования изучена активность протеолитических ферментов в нор!.е, в условиях сенсибилизации и анафилактического шока при одкократном и длительном введении фенкарола. В период исследований выяснены некоторые стороны механизма действия фенкарола на активность пищеварительных ферментов.

При этом-выявлено.'что применении фенкарола оказывает протек-тивкое влияние на активность протеолитических ферментов поджелудочной железы и тонкой кишки при различных аллергических состояниях и в "значительной степени'нивелирует нарушения в активности этих, ферментов, происходящие в этих условиях.

- з -

Научно-теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные результаты позволили:

- оценить функциональное состояние пищеварительных ферментов, участвующих в начальной и заключительной стадиях гидролиза белков, при' однократном и длительном введении фенкарола интактным животным;

- выявить нарушения в спектре протеолитических ферментов в условиях сенсибилизации и анафилактического иока:

- экспериментально обосновать возможности применения фенкарола для предотвращения и устранения нарушений усвоения белков при сенсибилизации и анафилактическом шоке;

- оценить состояние М^-АТФазной активности б период сенсибилизации и при анафилактическом шоке;

- выяснить некоторые стороны механизма влияния фенкарола на активность протеолитических ферментов у интактных и аллергизиро-ванных животных;

Основные положения, выносимые на защиту:

- Фенкарол при однократном и длительном введении интактным животным вызывает разнонаправленныэ изменения в активности протеолитических ферментов.

- При сенсибилизации и особенно анафилактическом шоке наблюдаются существенные сдвиги в спектре протеолитических ферментов, что отрицательно отражается в гидролизе белков.

- Фенкарол при профилактическом длительном введении в значительной степени коррелирует нарушения в активности протеолитических ферментов, наблюдаемые в условиях сенсибилизации и анафилактического шока.

- Одноразовое применение фенкарола после развития картины анафилактического шока не оказывает выраженного протективного влияния на сдвиги в активности протеолитических ферментов.

- При различных аллергических состояниях, особенно в условиях анафилактического шока наблюдается повышение активности Мя2*-АТФазы, которое в значительной степени нивелируется при многократном профилактическом введении фенкарола.

- Фенкарол в концентрациях, применяемых в практической медицине, не оказывает влияния на белковые молекулы прсхааытнческнх ферментов.

Апробация работы. Основные материалы диссертации.доложены на I Конгрессе по внутренней медицине стран Центральной.

Азии (1994); итоговой научной конференции 1т'ТашГосМИ(1995); межкафедральной конференции ЬТаиГосШ (1996). .

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ. '

Объем и структурадиссертации. Диссертационная работа написана на государственном языке. Она состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения и выводов. Материал диссертации изложен на 110 страницах машинописи, иллюстрирован 11 рисунками и 15 таблицами. Библиографический указатель'состоит из 146 источников (114 из республик бывшего СССР .и 32 иностранных).

МАТЕРИАЛ Н МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 400 белых крысах смешанной популяции обоего пола массой 145-180 г, которые содержались на обычном пищевом рационе и в одинаковых условиях вивария.

Был;; пооведены 9 серий экспериментов. При этом изучали:

- активность прстеазы поджелудочной железы и дипептидгидрола-зы тонкой кишки у интактных животных;

- активность протеолитических ферментов у этих животных при однократном введении фенкарола;

- активность про"-эолитических ферментов при длительном введении препарата интактным крысам,"

- влияние сенсибилизации на активность протеолитических ферментов;

- влияние многократного.введения Фенкарола на активность изучаемых ферментов у сенсибилизированных животных;

- функциональное- состояние протеолитических ферментов при анафилактическом шоке;

- спектр протеолитических ферментов панкреатоэнтеральной системы в условиях анафилактического шока на фоне длительного профилактического введени? фенкарола; -

- активность протеолитических ферментов под влиянием фенкарола. введенного после развития анафилактического шока;

- некоторые стороны механизма влияния фенкарола на протеолитическуо актеюность. у интактных и аллергизированных ор-ганизмах(опыты в условиях In vitro и определение -активности 1>5ёг*-АТФазы в слизистой оболочке-топкой кишки).

Фенкарол вводили через рот в утренные часы до кормления животных. Во всех сериях исследований препарат использовали в дозе 50 мг/кг (эта доза является средней терапевтической дозой фенка-рола для крыс). Животные контрольных групп получали дистиллированную воду в эквивалентном объеме.

Через 6,24,48 и 72 ч' после одноразового применения и на-3,7,14.21.28-дни многоразового введения фенкарола и через 3 дня после его отмены крыс, предварительно голодавших в течение 20 ч. забивали декапитацией ( по 7 из опытных и контрольных групп).

Сенсибилизация у крыс вызывалась путем.трехкратного подкожного введения(через день) 0,5-1 мл/кг раствора белка куриного яйца (БКЯ),разведенного на физиологическом растворе натрия хлорида в соотношении 1:5 с одновременным введением вазелиного масла в объеме 0,1 мл(А.Д.Адо,1978). На протяжении сенсибилизации животных декапитаровали на 7,14,21.28 и 31-дни после инъекции последней сенсибилизирующей дозы раствора БКЯ и в эти же сроки изучали активность протеолитических ферментов. В серии опытов с сенсибилизацией на фоне многоразового ежедневного введения фенкарола активность изучаемых ферментов определялась в те же сроки, что и при сенсибилизации, а также на 3-й день после- его отмены.

Анафилактический шок был воспроизведен путем внутрибрюшинного введения ■ 1-2 мл/кг нативного белка куриного яйца через 21 день • посла завершающей сенсибилизирующей инъекции антигена (А-Д. Адо, 1978).

С профилактической целью фенкарол вводили ежедневно, начиная . с первого дня введения раствора БКЯ, т. е. в течение 26 дней. Крыс забивали и определяли у них активность протеолитических ферментов сразу после возникновения анафилактического шока и через 6.24,48 и 72 ч после иньекции разрешающей дозы.

Для выяснения роли введения фенкарола с лечебной целью послэ развития анафилактического шока препарат вводили однократно после этой аллергической реакции и изучали состояние протеолитических ферментов через 6.24,48 и 72 ч после этого состояния.

с целью подтверждения действительного воспроизведения у крыс состояний сенсибилизации и анафилактического шока проследили за изменениями общего количества лейкоцитов и лейкоцитарнс., формулы б периферической крови. Для этого микропрепараты из мазков крови осматривали под световым микроскопом.

Для выявления возможного влияния фенкарола на уке1синтезиро-\

ванные белковые молекулы изучаемых протеолитических ферментов были проведены опыты in уitro. в которых обеспечивался непосредственный контакт препарата с исследуемыми пищеварительными ферментами. В инкубационные смеси (гомогенаты из тканей поджелудочной железы или тонкой -кишки с необходимыми субстратами) добавляли 0,2 мл фенкарола в концентрациях 1x1О"3,5x10"3.1x10"*, 5x10"4 г/мл и определяли протеолитические активности.

Идентичная серия экспериментов была проведена у сенсибилизированных животных на 21-деко этого процесса.

Активность комплекса протеаз (КФ 3.4.4) поджелудочной железы и глицил-Ь-валиндипептидгидролазы (КФ 3.4.13) слизистой оболочки тонкого кишечника определяли по методу A.M. Уголева и Н.М.Тимофеевой (1969). Содержание белка в этих тканях определяли по методу o.H.Lowry et al.(1951).Изучаемые протеолитические.активности выражали в мкмолях'образоваащдхся продуктов гидролиза за 1 мин инкубации в расчете на 1 г ^злка (мкмоль/мин/г, специфическая активность) и в расчете на обшее содержание белка в ткани поджелудочной железы или слизистой оболочки тонкой кишки (мкмоль/мин. общая активность).

Определение Mgz *-АТФазной активности (КФ 3.6.1.3) слизистой тонкой кишки проводили методом А.Т.Йващенко и соавт.(1980). Ее активность выражали в мкмолях отщепленного .от АТФ фосфора на 1 мг белка за 30 мин.

Статистическая обработка результатов исследований осуществлялась методом Стьюдента и Фишера.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние однократного введения Фенкарола на активность протеолитических Ферментов у интактных животных. Фенкарол при однократном введении вызывал разнонаправленные сдвиги в активности пищеварительных протеаз. Так, активность протеазы поджелудочной жзлезк через 6 и 24 ч угнеталась соответственно'на 14 и 20%. А активность дяпептидгидролазы слизистой оболочки тонкого кишечника через 6, 24 и 48 ч повышалась соответственно на 20,27 и 23%. К концу наблюдения активность изучаемых ферментов нормализовалась.

Фенкарол при хднопатном введении практически не влиял на массу поджелудочной железы и слизистой оболочки тонкого кишечника, а также на содержание белка в эгих тканях. Поэтому общая ак-

тивность ферментов изменялась аналогично с их специфической активностью.

Активность Ш^*-зависимой АТФ-азы в слизистой тонкой кишки не изменялась при однократном введений препарата.

Влияние многократного введения Фенкарола на активность проте-олитических Ферментов. При длительном введении фенкарола интакт-ным животным наблюдались разнонаправленные сдвиги в активности протеолитических ферментов, осуществляющих полостной и мембранный гидролиз белков. Так, специфическая активность протеазы поджелудочной железы на 3,7.14-дни снижалась соответственно на 16,19 и 24%. Дипептидгидролазная активность, -апротив.на 3,7,14 и 21-дни возрастала соответственно на 10,11,27 и 14%. В последующие сроки исследований изучаемые ферментативные активности почти не отличались от контрольных показателей.

Мзсса поджелудочной железы и слизистой оболочки тонкой кишки, а также содержание белка в этих тканях при длительном- введении фенкарола не- изменялась, в результате этого суммарный запас протеолитических ферментов изменялся аналогично их специфической активности.

■ Активность М^-АТФазы при длительном введении фенкарола не отличалась от контрольного уровня.

Влияние Фенкарола на активность протеолитических Ферментов при сенсибилизации. В процессе сенсибилизации на ее 7-день активность комплекса протеаз повышалась на 23%. На 21-день сенсибилизации активность этого фермента снижалась на 29% по сравнению с контролем (табл.1). Активность дипептидгидролазы на 7-дечь индуцировалась на 22%, а на 21 и 28-дни ферментативная "активность репрессировалась соответственно на 32 и 27%. В другие сроки в активности протеолитических ферментов изменения не наблюдались.

Масса поджелудочной железы не изменялась, а слизистой тонкого кишечника на 21-день повышалась на 11%.

В процессе сенсибилизации в течение 1-ой недели концентрация белка в исследуемых органах осталась не измененной, но в последующем отмечалось ее постепенное нарастание.причем максимальное увеличение приходилось на 21-день. На 28- и 31-дни сенсибилизации происходило постепенное возвращение концентрации белка к исходному уровню, но и к концу наблюдения она несколько превышала контроль.

Таблица 1

Влияю» фенкарола на специфическую активное» комплекса протваз (иююль/мия/г) подшху^ЕОчшЯ яаавзи крыс при сеяспбкяизации. ( Ш«, №-7 )

1 Условия 1 змспери- :. 1, мента ДНИ сенсибилизации 1

7 1 14 1 21 1. 28 1 31 1

1 Контроль 564,5*24,9 1 869,8*21,5 1 850,7*24,8 1 ! 625,7*31.1 1 810,4115,9 . 1

Г : Сенсиби-1 лизация 1 Р1 ; 1062.7*64,2 <0,01 1 922;4±21.0 1 1 <0,05 1 614,1*15,3 1 1 <0,001 1 734,6±20,3 1 <0,05 1 786,0±21.8 1 >0,5. 1

Г Сенсиби-! диьация . 1 на фоне Г феикарола Г Р1 Д089.0±гг,5 , .<0.01 1 061.3±18,5 I I <0,01 1 в67,1±17,5 1 1 <0,001 ' 1 1 817,0±1Б,7 I >0,5 . 1 1 80г,0±2б,8 1 >0,5 1

1 Рг <0.02 1 >0.25 1 <0,05 1 <0,01 1 >0.5 , »

Примечание: Здесь и в следующей таблице -

Р1"показатель достоверности различий по отношению

к результатам у контрольных животных Р2-показатель достоверности различий по отношению к результатам у сенсибилизированных животных.

Эти сдвиги отразились на общем запасе изучаемых ферментов. Общая активность-,иротеазы на 7-день оставалась не измененной, на 14-день повышалась на 25%, на 21,28- и 31-дни снижалась соответственно на 23,19 и 11% Общая активность дипептидгидролазы на 14, 21- и 28-дни угеталась соответственно.на 17,20 и 12%, в другие сроки в- активности фермента сдвиги не были отмечены.

Итак, при сенсибилизации, которая часто встречается в обычней жизни и не всегда проявляется выраженными клиническими симптомами, происходят значительные отклонения от нормы в протеазном спектре панкреатоэнтеральной системы. Эти'сдвиги, в свою очередь, могут служить причиной нарушения гидролиза и усвоения белковых вешеств. которые являются необходимыми для существования живого организма.

Длительное профилактическое введение фенкарола естественно ослабляло.воздействие сенсибилизации на активность, вышеназванных, протеолитических энзимов. Так, в специфической активности протеазы в течение всего рериода сенсибилизации изменения почти не наблюдались. Специфическая активность дипептидгидролазы на 21,28 и 31-дни угнеталась соответственно на 15,12 и 10%. В другие сроки активность фермента не отличалась от контрольного показателя.

Введение фенкарола предотвращало также повышение массы ели-' зистой . оболочки■тонкой кишки и концентрации белка в исследуемых органах, наблюдаемые 8 условиях сенсибилизации. Оби'ая активность изучаемых ферментов на фоке профилактичекого многократного введения фенкарола изменялась идентично с их специфической активностью. _ ■ , ' ;*

Изучение морфологической картины периферической крови сенси-. билизированных крыс выявило, что в первые две недели этого процесса наблюдается лейко-.нейтро-,лимфо- и эозинопения. Начиная' с третьей недели отмечается;лейко-и лимфоцитоз, , эозино- и бззо-филия. Из литературных данных известно, что эти сдвиги являются типичными для сенсибилизации (Г. А.Базанов и соавт.. 1936; Т. Г. Каляева и соавт.. 1987). Профилактическое ежедневное введение фенкарола в 'значительной степени устраняло, происходящие при сенсибилизации изменения в картине крови.

Ь'а ¡4-дэнь сенсибилизации /осуществлялось определение акта-тости М^'-АГФазы. При этом выявлено, что ее активность у :енсибилизкрованных жиеотных, а также у животных, .сенсибилизиро-

ванных на фоне Фенкарола, не отличалась от нормы.

Влияние фенкаиола на активность протеолитических ферментов при анафилактическом шоке. В условиях анафилактического шока наблюдались более выраженные сдвиги в активности протеолитических ферментов по сравнению с сенсибилизацией. В частности, тотчас после развития анафилактического шока специфическая активность протеазы репрессировалась на 24% (табл.2). Через 6 и 24 ч после шока активность ферм'ента возрастала соответственно на 24. и Ш. К 48- и 72-му часам активность фермента угнеталась соответственно на 25 и 11%. Специфическая активность дипептидгидро-лазы через 6 и 24 ч повышалась соответственно на 27 и 17%. В другие сроки исследования в активности фермента изменения не отмечались.

При анафилактическом шоке не наблюдалось повышение массы поджелудочной железы. Масса слизистой тонкой кишки увеличивалась во все сроки наблюдения. В условиях шо^а наблюдалось возрастание содержания белка в исследуемых тканях. Это обстоятельство отражалось на обшем запасе протеолитических ферментов. Обшая активность протеазы тотчас после шока снижалась на 20%. Через 6 и 24 ч повышалась соответственно на 18 и 13%. К 48 и 72-му часам Ферментативная активность снижалась соответственно на 22 и 16.%. В общей активности дипептидгидролазы наблюдались более ощутимые сдвиги по сравнений с ее специфической активностью. - Введение фенкарола в течение 26 дней, начиная с первого дня взедения антигена, привело к сглаживанию сдзигов в специфической активности протеолитических ферментов, обусловленных анафилактическим шоком. Фенкарол во все сроки исследования нивелировал нарушенную активность протеазы от 17 до 20%, дипептидгидролазы -■ от 10 до 12%.

Фенкарол, введенный с профилактической целью в течение всего периода сенсибилизации., оказывал протективное влияние на сдвиги в массе•слизистой тонкой кишки, а также в содержании белка в исследуемых тканях, происходящие при шоке. В связи с этим, при шоке на Фоне профилактического введения фенкарола, изменения общей активности изучаемых ферментов происходили-аналогично с изменениями их .шецифической активности. .

Во все сроки,течения анафилактического шока наблюдали за из-меян-.-шяш картины периферической крови. При этом, сразу после шока отмечались все -те же, изменения, . которые наблюдались на

Таблица 2

Влнннкэ предварительного введения фенкарола на специфическую активность комплекса протезз (ь;«ои>/нии/г) поджелудочной железы крас при анафилактической шоке ( и±т, п«7 )

! Условия 1 Часы,проаедщке после анафилактического шока

1 мента 1 0 6 1 24 48 1 72 1 * 1

1 Контроль 1 1045,4*32,5 1047,8*35,0 1 1035,5±34,8 1071,1*31,1 1 1061,0*37,7 1

1 Анафилакти-1 1 ческий шок I 1 Р1 1 795,3*19,4 <0,001 1303,9±37.7 <0,001 1 1213,6*33,6 <0,001 805,4*29,8 1 <0,001 1 953,2*31,2 1 <0,001 1

1 Акафилалии 1 ческий шок 1 1 на фоне 1 1 фенкарола I 1 Рг 1 933,8*31,4 <0,02 1177,0*51,1 * 1 <0,05 1 1120,8*34,4 <0,02 957,6*33,4 1 <0,002 1 1029,2*39,5 1 >0,25 1

1 1 1 Ра 1 <0.Ш1 <0,02 1 <0,01 <0,001 1 <0,01 • 1

21-день сенсибилизации. В последующие сроки наблюдались резко выраженная лейке-.нейтро-.эозино- и лимфопения. а также базофи-лия. Ежедневное профилактическое введение фенкарола существенно нивелировало эти сдвиги картины периферической крови."

Активность Ма^-АТФазы была определена тотчас после шока. При этом этот вид активности повышался на-18% по сравнению с контрольным уровнем. Фенкаро^, вводимый с профилактической целью, устранял данное нарушение/ '. _

Фенкарол при однократном пероральном введении с лечебной целью после анафилактического шока оказывает менее выраженное протективное влияние на активность протеолитических ферментов, чем при профилактическом ежедневном введении.

К механизму влияния Фенкарола на активность протеолитических Ферментов у интактных и сенсибилизированных крыс. Исследования, проведенные в условиях In vitro, показали, что добавление фенкарола в инкубационную смесь поджелудочной железы интактных животных только в концентрации 1хЮ"3г/мл приводит к угнетению активности протеазы на 12%. При более низких концентрациях препарата активность фермента почти не изменялась. Фенкарол во всех примененных концентрациях не оказывал заметного влияния на активность дипептидгидролазы.' ' ■

Фенкарол при добавлении в ферментативноактивную инкубационную смесь поджелудочной железы сенсибилизированных крыс в концентрации 1хЮ"3г/мл привел к репрессированию активности протеазы на 16%. Остальные использованию концентрации фенкарола почти не оказали влияния на активность протеазы.

Исследованные нами' концентрации фенкарола при добавлении в инкубационную.смесь из тонкой кишки сенсибилизированных крыс не -привели к изменениям кишечной дипептидгидролазы.

Следовательно, фенкарол в относительно высоких' концентрациях может изменять активность не.'.оторых ферментов. В обычных концентрациях, образующихся в содержимом тонкой кишки после его пе-рорального введения в терапевтических дозах, он не влияет ка активность протеолитических ферментов. Сдвиги в.спектре панкреатических ¡; гнтеральных протеолитических Ферментов, наблюдающиеся при введении фенкарола кктактным и сенсибилизированным крысам. вероятно, не обусловлены влиянием препарата непосредственно :• а уье синтезированную белковую молекулу фермента, а влиянием •2го Ki активность с более высоким уровнем регуляции ферментатив-

ных активностей, включая нейро-гуморальные звенья регуляторных систем. .

По данным литературы (В.У.Мелешко, 1982; Ю.Г.Чирко.1936,1993), возрастание активности•* М^*-АТФазы в условиях анафилактического шока служит причиной снижения содержания АТФ в слизистс! тонкой кишки, которое приводит к уменьшению содержания цАМФ. При снижении содержания последнего в слизистой тонкой кишки наблюдается усиление высвобождения медиаторов аллергии из мастоцитов. В проведенных нами исследованиях у здоровых и сенсибилизированных крыс не произошли сдвиги в функциональном состоянии фермента М^*-АТФазы. В условиях анафилактического шока отмечалась индукция активности Ь^2+-АТФазы, а при профилактическом длительном введении фенкарола в процессе вызызания шока в активности фермента нарушения не наблюдались.

Таким образом, на основании вышеизложенного можно предположить, что при ВЕедении фенкарола в период воспроизведения анафилактического шока в содержаниях АТФ и цАМФ изменения не наблюдаются. Это обстоятельство, в свою очередь, приводит к уменьшению высвобождения из мастоцитов гистамина, а также других медиаторов аллергических реакций немедленнего типа и ослаблению клинических проявлений анафилактического шока;'-

Подводя итоги результатов проведенных нами исследований следует отметить, .что фенкарол существенно коррегирует наблюдаемые в условиях сенсибилизациин и анафилактического шока сдвиги в функциональном состоянии протеолитических ферментов, что целесообразно учесть при лечении больных с заболеваниями аллергического характера.

ВЫВОДЫ

1. При однократном и длительном введении фенкарола. интактным животным наблюдаются разнонаправленные сдвиги в активности про-теолитаческих ферментов, которые характеризуются снижением активности протеаз и повышением активности дипептидгидролазы.

2. В условияу сенсибилизации активность протеаз возрастает в первые две недели, в последующе сроки заметно угнетается. Ди-пептидгид;>олазная активность индуцируется в течение первой недели и репрессируется в дальнейшие сроки. К 31-му дни активность обоих изучаемых Ферментов приближалась к норме.

3. Анафилактический шок приводит к выраженному ингибированию активности протеолитических ферментов.

4. Профилактическое длительное введение фенкарола в значительной степени нивелирует нарушения в спектре протеолитических ферментов, происходящие при сенсибилизации и анафилактическом шоке. '

5. Одноразовое введение фенкарола после возникновения анафилактического шока не оказЫйает существенного сглаживающего влияния на нарушения в функциональном состоянии протеолитических ферментов.

6. Сдвиги в протеазном спектре панкреатоэнтеральной системы как у интактных. так и у сенсибилизированных животных не связаны с непосредственным влиянием фенкарола на уже синтезированные белковые'.молекулы ферментов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ЛО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИЯ

. 1. Фенкаролнинг интакт ^айвонларда протеблитик ферментлар фа-оллигига таъсири. //Немедикаментозные методы лечения, профилактики и медицинской реабилитации: Сб. науч. труд. Ташкент, 1994,-С. 14-16.

2.Влияния фенкарола на активность протеолитических ферментов при сенсибилизации. // Немедикаментозные методы лечения, профилактики и медицинской реабилитации: Сб. науч. тр. Ташкент, 1994.-с.16-18. • ■ . *

3. Анафилактик шокда фенкаролнинг протеолитик ферментлар фаол-лигига таъсири. (соавт.Гуломов Т.Д, Тешабоев Д.Ё).// Фармакология физиологически активных веществ: Сб. науч. тр. Ташкент,1994.-С. 24-26.

4.Фенкаролнинг оксилларни парчаловчи ферментлар фаоллигига таъсири. (соавт. Руломов Т.Д, Тешабоев Д. Ё.).//Фармакология физиологически активных веществ: Сб.науч.тр.Ташкеит.1Э94.-С.26-28.

5. Овн;ат х;азм к,илш ферментлари фаолликларининг сенсибилизация пайтидаги бузилишларини антигистамин воситалар билан тугри-лаш. (соавт. Зокиров У.Б, Гуломов Т.Д, Тешабоев Д. Е, Узок;ова Г.Х, Иемондов С. Р.).//Мат.I Конгресса по внутренней медицине стран Центральной Азии. Ташкент.1994.-С. 263.

3.Т. Алиму^амедованинг "Фенкаролнинг сенсибилизация ва анафилактик шок ^олатида о^силлар гидролизида к,атнгшув-чи ферментлар фаоллятига таъсири" номли диссертациясига

X У Л О С А

Утказилган тадкдотлардан кузланган ма^сад фенкаролнинг од-силлар гидролизини таъминловчи ферментлар фаолликларига таъсири-hh'cofjíom х;айвонларда ^фганиш; шунингдек. сенсибилизация ва анафилактик шок пайтида панкреатоэнтерал система ферментларининг функционал зфлатида руй берадиган силжишларникг олдини олиш учун фенкаролни цуллаш самарадорлигини экспериментлар йули' билан асослашдир.

Тад^щотлар огирлиги 145-180 г булган х,ар хил жинсдаги 400 та ок; каламушларда утказилди. Препарат 50 мг/кг дозада каламушларга 0FH3 ордали юборилди. Тавдослов гур:да ^айвонларига мук^обил х,ажмда дистилланган сув юборилди.

Натижаларнинг гуво^лик беришяча, фенкарол интакт. ^айвонларга бир марта ва узоц мудцат давомида куп марта юборилганида о^сил-лар гидролизида иштирок этувчи ферментлар фаоллигида айрим сил-жишларга сабабчи булади. Шу билан биргаликда, у шу ферментлар спектрининг сенсибилизация ва анафилактик шок ¡аароитидаги бузи-лишларини анчагйна камайтиради.

Бажарилган изланишларнинг натижалари фенкаролни аллергик ре-акцияларнинг сенсибилизация ва анафилактик шок каби хилларида протеолитик ферментлар >;олатида руй берувчи узгаришларни меъерга ярнлаитиркш мак;садвда ¡^уллаш мумкинлиги тугрисида уйлашга имкон беради ьл ушбу ^олни аллергик 'хасталикларни даволашда зътиборга олиш мацсадга мувофи^лигини курсатади.

SUMMARY

Alimukhamedova Z.T. "Effect of fencarol on protein-degrating enzymes in sensibilization and anaphylactic shocks".

The activity of proteolytic enzymes was studied under normal conditions, sensibilization and anaphylactic shock with,single ■ and continuous administration of fencarol cby application of modem explorative biochemical methods. Some mechanisms of fencarol effect on activity of digestive enzymes have been determined.

It rfas found that fencarol has a protective effect on actlvity'of proteolytic en2ymes of pancreas and small Intestine during various allergic conditions and decreases, significantly disorders Jn activity of these, enzymes, occurring due to these conditions.

The work was performed in 400 white rats population of both sex. with mass of 145-180 g, which had common dietary and similar conditions in vivarium.

Totally there were 9 series of experiments. ' In all thqre series fencarol was used in a doze of 50 ag/kg ( this doze is a mean therapeutic do?e of fencarol for rats). Rats In control group received distilled water of egual volume.

Under the effect of single and continuous^ . fencarol administration the various • changes in the activity of proteolytic enzymes were hoted, taking part in the tissue and membrane protein hydrolysis.

There were significant changes in the spectrum of proteolytic enzyinoo during sensitization and anaphylactic shock, leading to the negative effect on protein hydrolysis.

On the basis of fesults of. this investigation it may be concluded that fencarol corrects significantly changes of proteolytic enzymes functional state, that should be taken into consideration during the treatment of petients with allergic diseases. *