Исследование кетотифена в применении к его химико-токсикологическому анализу

Говорова, Елена Геннадьевна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследование кетотифена в применении к его химико-токсикологическому анализу

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Говорова, Елена Геннадьевна Пермь 2004 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Исследование кетотифена в применении к его химико-токсикологическому анализу

На правах рукописи

Говорова Влена Геннадьевна

ИССЛЕДОВАНИЕ КЕТОТИФЕНА В ПРИМЕНЕНИИ К ЕГО ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМУ АНАЛИЗУ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь - 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук

профессор Хомов Ю.А.

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук профессор Ярыгина Т.И.

кандидат фармацевтических наук доцент Захарова Л. А.

Ведущая организация:

Пятигорская государственная фармацевтическая академия.

Защита состоится 23 марта в 12 часов на заседании диссертационного совета D 208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614990, г. Пермь, ГСП-277, ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии.

Автореферат разослан « _» февраля 2004г Ученый секретарь диссертационного совета

Метелева Е.В.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. В большинстве развитых стран мира в последние десятилетия отмечено резкое увеличение количества аллергических заболеваний. Проведенные в различных регионах Российской Федерации эпидемиологические исследования показали прямую зависимость уровня аллергических заболеваний от состояния окружающей среды. По данным медиков аллергические заболевания в среднем охватывают 10% населения земного шара, но эта величина колеблется от 1 до 50% и более в разных странах, особенно в отдельных регионах и среди отдельных групп.

На сегодняшний день фармакотерапия аллергических состояний является основным способом борьбы с распространенным недугом, что приводит к появлению на лекарственном рынке все новых и новых средств отечественного и импортного производства. В связи с побочным действием при определённых условиях некоторые из них могут быть причиной фатальных осложнений, интоксикаций различной степени тяжести, острых и хронических отравлений.

С увеличением рынка лекарственных средств, расширяется круг судебно -химических и токсикологически значимых соединений, что требует разработки методик изолирования, идентификации, количественного определения в биологических объектах и включения их в скрининг токсических веществ.

Кетотифен, обладающий антианафилактической активностью, широко применяется в медицинской практике в качестве антигистаминного средства. В связи с побочными явлениями (потенцирование действия снотворных, седативных, других антиаллергических средств, алкоголя) кетотифен используется в немедицинских целях, а при передозировке имеет токсикологическое значение. Критический обзор доступной нам литературы показал, что фармакологическому и клиническому изучению кетотифена посвящено значительное количество работ. Однако информация о его химико-токсикологическом анализе крайне недостаточна. Способы изолирования и доказательства в биосубстратах не разработаны.

Для современной диагностики отравлений, учитывая нехарактерность клинической картины, особое значение и актуальность приобретают результаты анализа кетотифена в биологических объектах, что подтверждает необходимость разработки методик его химико-токсикологического исследования.

Цели и задачи исследования. Целью диссертационной работы является исследование по разработке и оптимизации методик изолирования, обнаружения и количественного определения кетотифена в применении к его химико-токсикологическому анализу.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие

| РОС., НАЦИОНАЛЬНАЯ I I БИБЛИОТЕКА 1

• Теоретически прогнозировать и экспериментально подтвердить оптимальные условия изолирования кетотифена и применить полученные результаты для разработки методик выделения его из биологических объектов;

• Предложить эффективные способы очистки кетотифена, выделенного из биологического материала;

• Провести изучение хроматографического поведения кетотифена на различных сорбентах и в различных системах растворителей ВЭТСХ с целью введения в ХТС скрининг;

• Исследовать возможности идентификации кетотифена в извлечениях из биосубстратов с помощью химических и современных инструментальных методов;

• Разработать чувствительные методики количественного определения кетотифена на основе УФ — спектрофотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии;

• Изучить пригодность разработанных методик обнаружения и количественного определения для химико-токсикологического анализа кетотифена.

Научная новизна. Впервые разработана научно обоснованная методология химико-токсикологического анализа биологических объектов при отравлениях кетотифеном.

Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена возможность прогнозирования оптимальных условий экстрагирования кетотифена в зависимости от рКа, рН среды и природы органического растворителя.

Изучены хроматографические параметры на пластинках ВЭТСХ, Сорбфил, Merck, Силуфол и разработаны условия его обнаружения на основе поэтапного комбинированного детектирования.

Установлено, что кетотифен укладывается в условия ХТС скрининга токсикологически значимых лекарственных средств.

Разработаны методики идентификации кетотифена на основе реакций окрашивания и методов ВЭТСХ, ВЭЖХ, ГХ, ГХ/МС, ИК - и УФ -спектроскопии. Предложена микрокристаллоскопическая реакция на кетотифен с кислотой золотохлористоводородной..

Изучены спектральные характеристики кетотифена в различных растворителях и разработаны методики его количественного определения на основе методов УФ - спектроскопии и ВЭЖХ.

Разработаны схемы химико-токсикологического анализа биологических объектов при диагностике-дтравлений кетотифеном.

Показано влияние процессов биодеградации на определение кетотифсна в крови, моче, печени при сроках их хранения 1 и 3 месяца.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования.

Исследование выполнено по запросу Бюро СМЭ Республики Бурятия. Разработанные методики пробоподготовки, изолирования, очистки извлечений, обнаружения и количественного определения кетотифена рекомендованы для использования в химико-токсикологических лабораториях для аналитической диагностики отравлений, а так же в учебном процессе на кафедрах токсикологической и фармацевтической химии фармацевтических вузов.

По результатам работы оформлено информационное письмо «Об определении кетотифена при химико-токсикологическом исследовании».

Методики химико-токсикологического анализа кетотифена внедрены в практику работы Центра экстракорпоральных методов детоксикации Управления здравоохранения г. Нижний Тагил Свердловской области, судебно - химического отделения ГУЗОТ Областного Бюро судебно - медицинской экспертизы, г. Пермь, СХО Бюро судебно - медицинской экспертизы Минздрава Республики Бурятия, г. Улан - Удэ, СХО ГУ Бюро судебно -медицинской экспертизы Минздрава Республики Марий — Эл, г. Йошкар-Ола, а также в учебный процесс на занятиях интернов - аналитиков на кафедре фармацевтической ФДПО и ФЗО и токсикологической химии Пермской государственной фармацевтической академии.

Разработанные методики включены в практику судебно - медицинских и химико-токсикологических лабораторий через постоянно действующие курсы специализации и усовершенствования врачей - лаборантов и врачей судебно -медицинских экспертов в региональном учебно-методическом центре аналитической диагностики наличия наркотических средств, психотропных и других токсических веществ Пермской государственной фармацевтической академии (1999 - 2003 гг.).

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены с опубликованием на Международной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции» (Санкт - Петербург, 1999г.); на Международном конгрессе «Научная молодежь на пороге XXI века (Томск, 2000г.); на VIII и IX Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва 2001, 2002гг.); на 111 и IV Международном конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о человеке" (Томск, 2002, 2003гг.); на юбилейной научной конференции "Молодые ученые Волго - Уральского региона на рубеже веков" (Уфа, 2001г.); на межвузовской научно - практической конференции "Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы" (Пермь, 2000г.); на юбилейной межвузовской научно -практической конференции профессорско - преподавательского состава "Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы", посвященной 85-летию высшего образования на Урале (Пермь

2001г.); на юбилейной научной конференции молодых ученых, студентов и аспирантов "Молодежная наука Прикамья - 2002" (Пермь, 2002г.).

В полном объеме результаты диссертационного исследования доложены на межкафедральной конференции Пермской фармацевтической академии, 2004г.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 133 страницах машинописного текста, содержит 22 таблицы и 29 рисунков. Работа состоит из введения, 5 глав, выводов, списка литературы, включающего 160 источников, из них 41 на иностранных языках и приложения (24 стр.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом исследований Пермской государственной фармацевтической академии в комплексной целевой программе РФ №224 (номер государственной регистрации 01910018878).

На защиту диссертации выносятся следующие результаты теоретических и экспериментальных исследований:

• Теоретическое обоснование и экспериментальное подтверждение оптимальных условий изолирования кетотифена из биологических объектов в зависимости от показателя ионизации, рН среды и природы органического растворителя;

• Результаты экспериментальных исследований по разработке хромогенных и микрокристаллоскопической реакций, ВЭТСХ, ВЭЖХ, ИК - , УФ - , ГХ/МС спектроскопии кетотифена;

• УФ - спектрофотометрические и ВЭЖХ методики количественного определения кетотифена, разработанные применительно к анализу биологических сред;

• Результаты по выяснению влияния процессов биодеградации на определение кетотифена в крови, моче, ткани печени при сроках хранения 1 и 3 месяца;

• Схема и общий методологический подход к химико-токсикологическому исследованию биологических объектов при интоксикациях кетотифеном.

Основное содержание работы.

1. Способы обнаружения кетотифена

Для обнаружения кетотифена избрано направление комплексного исследования перспективных физико-химических методов, обладающих экспрессностыо, высокими разрешающими возможностями с традиционными химическими исследованиями.

Микрокристаллоскопические реакции и реакции окрашивания В поисках надежных и доказательных микрокристаллоскопических реакций было изучено отношение кетотифена к 24 осадительным реактивам. Со

многими реактивами кстотифен дает обильные, но чаще всего аморфные осадки. Наиболее чувствительной является реакция с раствором висмута йодида в калия йодиде. Открываемый минимум 0,8 мкг вещества в пробе. Из микрокристаллоскопических наиболее чувствительной и специфичной по форме кристаллов является реакция с кислотой золотохлористоводородной. Кетотифен с 5% раствором кислоты золотохлористоводородной образует тонкие шестигранные пластинки. Открываемый минимум 2 мкг.

Изучалась возможность применения для обнаружения кетотифена реакций окрашивания.

Наиболее чувствительными реактивами являются:

• Кислота серная концентрированная, содержащая формальдегид (реактив Марки) - сиреневато - фиолетовое окрашивание. Открываемый минимум

2 мкг;

• Кислота серная концентрированная, содержащая кислоту ванадиевую (реактив Манделина) - розовое, переходящее в фиолетовое окрашивание. Открываемый минимум 4 мкг;

• Кислота серная концентрированная — зеленовато — желтое окрашивание, при стоянии исчезающее. Открываемый минимум 10 мкг;

Из предлагаемых реакций наиболее наглядной и чувствительной является реакция кетотифена с кислотой серной концентрированной, содержащей формальдегид. Реактив Марки был использован и для обнаружения зон локализации кетотифена при хроматографическом исследовании (способ пипетирования).

Предел обнаружения кетотифена предлагаемыми реакциями в хлороформных извлечениях, полученных при изолировании из биологического материала составляет 0,16 мг в моче и 0,25 мг в печени.

Хроматография в тонких слоях сорбента

При отсутствии в доступной литературе данных по ХТС - идентификации кетотифена нами проведено исследование хроматографического поведения кетотифена в нормально - фазном варианте (НФ - ) на пластинках ВЭТСХ (стеклянная подложка, Эстония), Сорбфил, Силуфол, Merck. В обращенно -фазовом (ОФ -) варианте на пластинках Сорбтон - 2 с привитой фазой С - 2, Плазмахром с привитой фазой С - 3 и варианте круговой хроматографии (КХ) на пластинах Сорбфил, Силуфол, Merck.

Была исследована хроматографическая подвижность кетотифена в индивидуальных растворителях и различных комбинированных системах растворителей, применяемых в клинических и химико-токсикологических анализах лекарственных веществ. Время насыщения камеры парами растворителя при НФ — варианте 25 мин. Индивидуальные растворители, системы ОФ - варианта и варианте круговой хроматографии использовали без насыщения камеры.

Для обнаружения зон локализации кетотифена на хроматограммах использовали поэтапную обработку:

• Экспозиция (визуальное наблюдение) пластинки в УФ-свете при светофильтре Л =254 нм. наблюдались темно-фиолетовые пятна. Предел обнаружения 1,3-1,5 мкг.

• Обработка реактивом общегруппового назначения (реактив Драгендорфа в модификации по Мунье и по Бергофф - Дельвичу). Красновато - оранжевые пятна. Предел обнаружения 0,8 и 0,3 мкг соответственно.

• Обработка пластинки парами йода - коричневые пятна. Предел обнаружения 1 мкг.

В сочетании с применением более специфических реагентов (капельно):

• Реактив Марки - сиреневато - фиолетовые пятна. Предел обнаружения 1,2 мкг;

• Реактив Манделина - розовато - фиолетовые пятна. Предел обнаружения 3 мкг.

Наиболее чувствительными следует считать из общегрупповых реактив Драгендорфа по Бергофф - Дельвичу - 0,3 мкг; из более специфических реактив Марки - 1,2 мкг.

Установлено, что в НФ - варианте в индивидуальных растворителях кетотифен не обладает достаточной хроматографической подвижностью, оставаясь в близи стартовой линии. При исследовании же в 11 комбинированных системах растворителей кетотифен проявляется в интервалах

R/ от 0,28 до 0,85. Наиболее надежное и достаточное отделение кетотифена от его метаболитов и сопутствующих балластных веществ наблюдалось в скрининговых системах диоксан — хлороформ — ацетон — 25% раствор аммиака 47,5:45:5:2,5; хлороформ - 25% раствор аммиака 25:15; толуол - ацетон -этанол - 25% раствор аммиака 45:45:7,5:2,5, которые и были избраны нами для исследования кетотифена в биосубстратах ^/кетотифена в интервале 0,48 — 0,58). В ОФ - варианте использовались водно-спиртовые смеси. В общей системе растворителей этанол - вода - 25% раствор аммиака 6:5,5:0,5

R/кетотифена 0,42 - 0,57. Как показали исследования, соэкстрактивные вещества из биосубстратов (при ХТС исследовании экстрактов, полученных при изолировании контрольных проб) не оказывали заметного влияния на воспроизводимость результатов хроматографического анализа. В круговой хроматографии исследованы два варианта с подачей элюента снизу и сверху.

Использование различных вариантов ВЭТСХ позволяет увеличить надежность идентификации кетотифена при химико-токсикологическом анализе.

И К -. УФ - спектроскопия

Нами были сняты И К - спектры кетотифена на 1Ж - 71 (I срмания) в диске калия бромида и в пленке хлороформа (рис 1, 2)

Рис 1 ИК-спектр кетотифена в пленке хлороформа

зо го го 19 о г

Рис 2 ИК-спектр кетотифена в таблетке КВг

При интерпретации спектров можно предположить, что полоса поглощения 3310 см 1 принадлежит пиперидиновому циклу; 3050 СМ ' (в пленке хлороформа) - полоса валентных колебаний СН бензола в ненасыщенных системах; 2950-2900 СМ ' - полоса валентных колебаний СН в насыщенной системе. 1720 см 1 - принадлежит семичленному циклическому кетону. 1660, 1590, 1480 СМ ' - валентные колебания С=С бензольного кольца. 1410 см ' метальная группа. 1220-1290 СМ ' - валентные колебания C-N связи. 750-760 см"' - самая сильная из полос тиофеиа, сдвигается в сторону высоких частот при наличии электроно-акцепторных групп (720 и 770 см"1 в КВг и 740 см"1 в пленке хлороформа). 3125-3050 см 1 полосы валентных колебаний СН в тиофене (пленка хлороформа).

Для доказательства кетотифена как соединения, имеющего в своей структуре хромофорные группы был использован метод УФ-спектроскопии. УФ-спектры поглощения 0,0016% растворов кетотифена снимались на Specord-40-М в 1 см кюветах в интервале длин волн 220-400 им относительно чистого растворителя. Анализ электронных спектров в различных полярных и аполярных растворителях показал, что кетотифен имеет УФ-спектры, характеризующиеся одной полосой поглощения с одним максимумом и одним минимумом (см табл. I и рис. 3).

Таблица 1

Максимумы и минимумы абсорбции кетотифена в различных растворителях

№ п/п Растворитель ^mWmin >НМ

1 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной 301/260

2 0,1 М раствор натрия гидроксида 299/257

3 95% этанол 299/259

4 Хлороформ 300/260

5 Бензол 299/259

6 Диоксан 298/257

7 Этил ацетат 297/270

8 Гексан 295/270

9 Гептан 295/255

1>1 - "УФ-спектр в этаноле

Ю2 - "УФ-спектр в 0.1М растворе 1^аОН

153 - УФ-спектр в 0.1М растворе НС1

Рис. 3 Спектры поглощения кетотифена в этаноле и 0,1М растворах натрия гидроксида и кислоты хлористоводородной.

При выяснении влияния балластных веществ на результаты анализа показали, что фон, создаваемый соэкстрактивными веществами, не оказывал заметного влияния на характер спектральных кривых кетотифена, чго дает возможность проводить спектрофотометрическое исследование кетотифена после его изолирования и очистки.

ГХ/МС исследование проведено на хроматографе НР-5890 серии 11 с MCD НР-5972. Колонка капиллярная HP-5MS, внутренний диаметр 0,25мм, длина 20 см. Газ носитель - гелий, скорость 1,0 мл/мин. Температура инжектора и интерфейса 250 и 280°С, температура колонки - градиент 70°С (2 мин) - 270°С, скорость программирования 20° С в минуту. Включение MCD с задержкой на 3 мин. Метод ионизации электронным ударом с энергией ионизирующих электронов 70 эВ. Регистрация масс-спектров в режиме полного сканирования ионов с интенсивностью 45 - 450 щ/г. Ввод пробы ручной, без деления потока газа-носителя. Объем введенной пробы 1 мкл в 95% этаноле при концентрации в растворе 10 мкг/мл. Получена хроматограмма (время удерживания кетотифена 12,95 мин), проведена регистрация масс-спектров в режиме полного сканирования. Характеристические ионы для кетотифена при выделении фрагментограммы со временем удерживания 12,95 мин - 309, 96, 208, 221 приведены в порядке уменьшения интенсивности.

Ах-и-."- -л

«.за 4о

Рис. 4 Хроматограмма исследования спиртового раствора кетотифена (концентрация 10мкг/мл.)

к» 1Э.за 13 4« I» яо «авц 1э.га 1 ».во

Е.во 12.АО 1Д.ОО

Рис. 5 Экстракционная хроматограмма по ионам характерным для кетотифена

ве»п «ю« (1а »6« ши), К_Л о

еооо

4000

эооо

т «в Т т м> I

■ 4» ■ ..п.,

....... 1 ■ ■ ■ I ■ I ...................... |1ич . , А.. Г* ■ .,]..,, |

оо 120 140 1 во ■» «о аоо аао з«о а во а во зоо

Рис. 6 Сравнение масс-спектра пика с временем удерживания 12,95 мин. с библиотечным

ВЭЖХ анализ кетотифена проводили на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром - 4» с УФ-детектором, колонкой длиной 64 мм и внутренним диаметром 2 мм, заполненной сорбентом Lichrosorb RP - 18 с зернением 5 мкм. При экспериментальной проверке в качестве подвижной фазы выбрана смесь состава ацетонитрил-раствор 0,05 М кислоты хлористоводородной 1:1 рН 3. Скорость подачи элюента 100 мкл/мин. Скорость диаграмной ленты 10 мм/мин. Для выбора длины волны детектирования был снят спектр кетотифена (в режиме работы прибора "Спектр") в интервале длин волн 210-360 нм через 2 нм. В УФ-спектре кетотифена (см рис 7) в избранном элюенте наблюдается ярковыраженный максимум при 300 нм и один минимум при 262 нм. Для определения параметров удерживания при 300 нм произведена запись хроматограммы кетотифена (см рис 8). Объем вводимой пробы на анализ 5 мкл. Время удерживания 5,00 ±0,3 мин. Чувствительность обнаружения кетотифена 0,05мкг.

2. Количественное определение кетотифена УФ-спектрофотометрический метод

Наибольшей простотой аналитических операций обладает метод УФ -спектрофотометрии непосредственно по определяемому веществу, без проведения дополнительных реакций.

Наличие ярко выраженного максимума абсорбции кетотифена в 0,1М растворе кислоты хлористоводородной в доступной области измерений позволило нам использовать собственное поглощение вещества в разработке спектрофотометрической методики его количественного определения.

Подчинение основному закону светопоглощения при ^=300 нм в интервалах концентраций кетотифена 5 — 32 мкг/мл. Коэффициент корреляции. (при обработке данных на ПК методом наименьших квадратов) составил 0,999982. Удельный показатель поглощения 333,5. Чувствительность определения кетотифена 0,30 мкг/мл.

Методика УФ-спектрофотометрического анализа использована для определения рКа кетотифена, изучения степени экстрагируемости его органическими растворителями в зависимости от рН среды и для количественного определения кетотифена, выделенного из биологических объектов при различных сроках хранения.

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

Для разработкийспособа ВЭЖХ количественного определения кетотифена использовали метод абсолютной калибровки. Условия хроматографирования приведены ранее при описании способа идентификации кетотифена.

Установлено, что линейная зависимость площади хроматографичсского пика от концентрации кетотифена наблюдается в интервале концентраций 0,1 -0,5 мкг/мл при взятии 5 мкл на анализ. Чувствительность определения 0,05мкг.

3 Изолирование кетотифена из биологических объектов

Способ изолирования анализируемого вещества из объектов исследования имеет решающее значение для результатов химико-токсикологического анализа.

Для решения вопроса максимального выделения соединения очень важен процесс прогнозирования оптимальных условий его экстракции, среди которых первостепенное значение имеет константа ионизации. В связи с отсутствием в литературе нами проведено определение константы ионизации кетотифена спектрофотометрическим методом. Найдено, что рКа кетотифена равен 8,58 характеризует ионизацию аминогруппы и подтверждает основные свойства соединения. Кетотифен был включен в программу для ПК (Хомов Ю.А 1995г) для расчета степени ионизации кетотифена в процентах при рН 1-14 (см. табл. 2).

Таблица 2

Степень ионизации кетотифена при заданных значениях рН.

рКа кетотифена 8,58

рН РН-рКа Концентрация катионной формы, %

1 -7,58 В области рН 1 - 4 кетотифен полностью ионизирован

2 -6,58

3 -5,58

4 458

5 -3,58 99,97

6 -2,58 99,74

7 -1,58 97,44

8 -0,58 79,17

9 0,42 27,55

10 1,42 3,66

И 2,42 0,38

12 3,42 0,04

13 4,42 В области рН 13-14 кетотифен полностью неионизирован

14 5,42

Как видно из данных таблицы, при рН 1-4 исследуемое соединение полностью ионизировано. Начиная с рН 5 появляется его молекулярная форма,

которая достигает 100% при рН 12. Сделано предположение, что максимальная экстракция кетотифена органическими растворителями из водных растворов должна достигаться при рН 10-11. Степень ионизации кетотифена при данных рН минимальна.

Далее было проведено экспериментальное подтверждение предположений экстрагируемости кетотифена различными органическими растворителями в зависимости от рН среды: хлороформ, бензол, гексан. Растворители, имеющие величину диэлектрической проницаемости большую, чем у хлороформа не исследовались в связи с их значительной смешиваемостью с водой. Установлено, что кетотифен экстрагируется органическими растворителями, достигая при рН 10 максимума экстракции хлороформом 99,85%. В этих же условиях процент экстракции кетотифена бензолом составляет 95,65%, гексаном - 87,26%. Как показали экспериментальные данные, именно хлороформ следует считать оптимальным экстрагентом для изолирования кетотифена из биологических объектов при химико-токсикологических анализах.

При отсутствии в доступной литературе данных по изолированию кетотифена, нами использованы приёмы экстракции водой, подкисленной кислотой щавелевой при изолировании трупного материала. Из крови изолирование сводилось к прямой дробной экстракции хлороформом гемолизата при рН 10, из мочи использовали экстракцию хлороформом после кислотного гидролиза.

4 Очистка и определение кетотифена при химико-токсикологических

исследованиях

Вопросы очистки кетотифена от соэкстрактивных балластных веществ решались использованием приемов центрифугирования, высаливания электролитом (в схему изолирования ввели этап очистки - коагуляцию белков при насыщении водного извлечения кристаллическим аммония сульфатом и хроматографического исследования в тонких фиксированных слоях сорбента). Хроматографический прием позволяет сочетать очистку с предварительной идентификацией и делает последующее обнаружение и количественное определение кетотифена специфичным.

При решении вопроса о возможности использования разработанных методик определения кетотифена в практике химико-токсикологических анализов доказано, что балластные вещества не оказывают заметного влияния на результаты определения (в печени), а оптическая плотность экстрактов,

полученных из биологических жидкостей, не содержащих кетотифен, практически равна нулю.

Разработанные методики УФ-спектрофотометрического определения кетотифена применены при анализе биологического материала. Исследованию подвергались аликвоты хлороформного экстракта из щелочного раствора: 1/10 часть при исследовании свежего объекта (срок хранения 1-3 дня), 1/5 часть при исследовании объекта, подвергшегося биодеградации при затравке 2 и 10 мг на 50 г печени. Результаты определения представлены в таблице 3.

При исследовании биологических жидкостей УФ-спектрофотометрическое определение проводилось в аликвоте 1/2 часть извлечения при затравке 1 мг на 25 мл мочи или 5-10 мл плазмы (см табл. 4).

Таблица 3

Результаты количественного определения кетотифена в печени при различных сроках хранения

Время исследования Добавлено к 50 г печени Найдено % Метрологические характеристики

1-3 дня (свежая) 2 10 53,00 54,44 55,87 54,08 58,02 60,17 56.16 58.17 59,60 57,30 г =55,08; 8=2,01; 5.г =0,90; Лх=4,27; А*=1,90; £=3,46%. л=58,28; 5=1,64; 5 3" =0,73; Дх=3,49; Л*=1,56; г =2,67%.

1 месяц 2 10 42,46 46,49 47,13 48,59 44,20 39,62 41,44 44,01 42,55 47,68 г =45,77; 5=2,53; Б Зс =1,13; Дх=5,39; .7=43,06; Б =3,04; 5г=1,36; Дх=6,47;

Дх=2,4; ? =5,24% Дг=2,89; £ =6,7%

3 месяца 2 10 23,38 23,28 23,10 22,46 21,46 22,30 21,64 21,27 20,26 20,81 X=22,74; 5=0,63; Б г =0,28; дх=1,34; Л* =0,6; г =2,64% х =21,22; 5=1,59; 5^=0,71; Дх=3,39; Дх-1,51; £=7,1%

Таблица 4

Результаты количественного определения кетотифена в моче и крови при различных сроках хранения

Время Моча Кровь

исследо- Добавлено Найдено Метрологи- Добавлено Найдено Метрологи-

вания к 20 мл % ческие к 10 мл % ческие

МОЧИ характеристики крови характеристики

1-3 дня 1,0 93,85 * =93,50; 1,0 67,16; *=68,00,

(свежая) 95,16 8=1,62; 67,69; 8=0,81;

93,96 Б* =0,72; 68,05; 8* =0,36,

94,26 Лх=4,5; 68,23; Лх=3,04;

90,25 <^=2,01; « =2,15%. 68,95. Л*=1,36: «=2,00%.

1 месяц 1,0 61,25 * =63,67; 1,0 50,25 * =52,30;

66,38 8=2,62; 52,45 8=1,34;

64,73 60,52 65,47 Б;?=1,17; Дх=5,58; Д^=2,5; ё=3,93% 52,08 52,81 53,91 8* =0,60; ¿х=3,71; А*=1,66; ? =3,17%

3 месяца 54,66 * =50,84; 41,80 * =36,50;

51,90 Б=2,48; 39,98 8=1,43;

1.0 47,86 50,25 49,51 Sx-l.ll; Дх=5,28; Дх=2,36; £=4,6% 1,0 38,51 37,96 39,24 8* =0,64; Дх=3,05; А*=1,36; ё =3,4%

При исследовании мочи методом ВЭЖХ удавалось определить до 94% кетотифена из 2 мкг добавленных к 1-2 мл мочи.

На основании проведенных экспериментов нами предлагаются схемы анализа кетотифена, применимые для целей химико-токсикологического исследования (схемы I и 2).

Схема химико-токсикологического анализа трупного материала на кетотнфен Объект исследования, 50г

Центрифугирование 2,5 тыс. об/мин., 25 минут.

Водное извлечение

Насыщение 20 минут

Центрифугирование 2,5 тыс. об/мин., 25 минут.

Очищенное водное извлечение 25% раствор ЫНлОН , рН 10 хлороформ 25 мл 2 раза, по 10 минут.

Хлороформный экстракт Безводный Ма2ЯОА

Настаивание с водой (1:2), 2 часа

РН2(ягед)

Чг ча(

'Л часть

Обнаружение

Количественное определение

ХТС

Реакции окрашивания Реакция с НАиС/4

УФ-спектрофотометрия

ИК-, УФ-спектр ВЭЖХ ГХ, ГХ/МС

Схема химико-токсикологического анализа на кетотифсн в биологических жидкостях

Моча (25 - 30мл) Кровь (5 - 10мл)

у/ 5 мл конц. НС1

Гидролиз (на кипящей водяной Трехкратное разбавление

бане 15 минут) водой

^Насыщение (ЫН 4) 2 50 4

Центрифугирование 2,5 тыс. об/мин. 15 минут 25% раствор Ш4 ОН

Экстракция хлороформом рН 10

Органическая фаза

Обезвоживание N3,50.,

'/2 часть 'Л часть •4-►

Обнаружение Количественное определение

Реакции окрашивания Х'ГС, УФ-спектр,

ВЭЖХ, ГХ/МС ВЭЖХ УФ-СФ

(моча) (моча, кровь)

Общие выводы

1 Исследовано отношение кетотифена к реактивам осаждения и окрашивания. Предложена новая микрокристалпоскопическая реакция с кислотой

золотохлористоводородной; реакции окрашивания с реактивами Марки, Манделина, кислотой серной концентрированной. Показана возможность их использования для химико-токсикологического анализа.

2 Проведено углубленное изучение хроматографического поведения кетотифена методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии в вариантах НФ - ,ОФ - и круговой хроматографии. Предложена схема ТСХ обнаружения кетотифена, включающая определенную последовательность использования детектирующих реагентов. Определена чувстви гельность каждого реагента.

3 Показана возможность использования методов ИК - , УФ - ,ВЭЖХ, гх, ГХ/МС спектроскопии для идентификации кетотифена при химико-токсиколопгческих анализах.

4 Изучена возможность использования и разработаны методики количественного определения кетотифена с помощью методов УФ-спектрофотометрии и ВЭЖХ.

5 Теоретически прогнозированы оптимальные условия изолирования кетотифена с учетом рКа и рН среды. При изучении степени экстрагируемости кетотифена из водных растворов в зависимости от рН среды и природы органического растворителя показано, что оптимальным экстрагентом для кетотифена является хлороформ при рН 10-11.

6 Разработаны условия пробоподготовки объекта и очистки кетотифена от продуктов биотрансформации и соэкстрактивных балластных веществ при химико-токсикологических анализах.

7 Показана возможность применения разработанных методик для определения кетотифена при химико-токсикологических исследованиях.

8 Установлено, что предложенные методики анализа биологических объектов на наличие кетотифена, применимы при исследовании субстратов, подвергшихся биодеградации (со сроком хранения 1 и 3 месяца).

9 Надежность идентификации и определения при химико-токсикологических анализах обеспечивается комплексным использованием современных инструментальных методов с традиционными химическими реакциями.

10 Разработан методологический подход и предложены схеуы химико-токсикологического анализа биологических объектов цри /диагностике

отравлений кетотифепом.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Говорова. Е.Г. Аналитическое изучение кетотифена с применением методов ВЭЖХ, ИК- и УФ-спектроскопии. / Е.Г.Говорова. Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова // Актуальные проблемы медицины и фармации. -Курск: КГМУ, 1999. - С. 289 - 291.

2. Хомов, Ю.А. К анализу кетотифена / Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова, Е.Г.Говорова // Фармация в XXI веке. Инновации и традиции. Тез. докл. конгр. - С.-Петербург. - 1999. - С. 252.

3. Говорова. Е.Г. Хроматографическое обнаружение кетотифена в моче / Е.Г.Говорова. Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова // Науки о человеке. Матер. 1 конгресса молодых ученых и специалистов. Томск, 2000. - С. 135.

4. К исследованию возможности изолирования кетотифена // Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова, Е.Г.Говорова. М.А.Мокрушнна // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы юбилейной- межвуз. науч.-практ. конф., посвящ. 40-ому выпуску провизоров заочного обучения Пермской гос. фарм. акамедии: [Тез. докл.]. - Пермь, 2000. - С. 139.

5. Хомов, Ю.А. Исследования по обнаружению кетотифена при химико-токсикологических анализах / Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова, Е.Г.Говорова // Актуальные вопросы подготовки фармацевтических кадров: Материалы межвуз. науч.-практ. конф. - Томск, 2000. - С. 96101,

6. Хомов, Ю.А. Обнаружение кетотифена в моче / Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова, Е.Г.Говорова // Актуальные проблемы теории и практики фармации. Сб. науч. статей. - Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2000. - С. 53-55.

7. Изучение степени экстракции кетотифена в зависимости от рН среды и природы органического растворителя // Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова. Н.В.Кокшарова, Ф.Бенкиб // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. науч.-практ. конф., посвящ. 85-летию, высш. образования на Урале: [Тез. докл.]. - Пермь, 2001. - С. 85-86.

8. Хомов, Ю.А. Количественное определение кетотифена в моче / Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова. Н.В.Кокшарова // Человек и лекарство: Тез. докл. VIII Рос. нац. конгр. Москва, 2001. - М., 2001. - С. 499.

9. Хомов, Ю.А. Определение константы ионизации кетотифена спектрофотометрическим методом- / Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова. Н.В.Кокшарова // Лабораторное дело. Организация и методы исследований. Материалы Всерос. науч.-практ. конф. Пенза, 2001. С. 15-16.'

10. Хомов, Ю.А. УФ-спектрофотометрический метод анализа кетотифеяа в биологических субстратах / Ю.А.Хомов, Ё.Г.Говорова. Н.В.Кокшарова // Молодые ученые Волго-Уральского региона на рубеже веков. - Уфа, 2001 .-Т. 1.-С. 219-220.

11. Говорова. Е.Г, ВЭЖХ-метод определения кетотифеяа / Е Г Говорова. Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова // Науки о человеке. Матер. III конгресса молодых ученых и специалистов. Томск, 2002. - С. 212.

12. Говорова. Е.Г. К химико-токсикологическому исследованию кетотифена / Е.Г.Говорова. Н.В.Кокшарова // Молодежная наука Прикамья - 2002: Тез. докл. обл. науч. конф: молодых ученых, студентов и аспирантов, Россия, Пермь, 2002 г. - Пермь, 2002. - С. 157-158.

13. Хомов, Ю.А. Определение кетотифена в крови / Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова. Н.В.Кокшарова // Человек и лекарство: IX Рос. нац. конгр. Москва, 2002. - М., 2002. - С. 716.

14. Говорова. Е.Г. Влияние процессов биодеградации на определение кетотифена в биосубстрате / Е.Г.Говорова. Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова // Науки о человеке. Сб. статей IV Междунар. конгресса молодых ученых и специалистов, Томск, 2003. - Томск, 2003. - С. 149.

15. Химико-токсикологический анализ на наличие кетотифена // Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова. В.П.Гаранин, Н.В.Кокшарова // Проблемы экспертизы в медицине. - 2003. - №1. - С. 16-18.

16 Хомов Ю.А. Кетотифен в химико-токсикологическом отношении

/Ю.А. Хомов, Е.Г. Говорова. Н.В. Кокшарова //Ден. в ВИНИТИ № 1949 - В 2003-9 с.

* -3296

Отпечатано в ОАО • Новокузнецкий полиграфкомбинат», зак. 872, тир. 100 экз. Объем 1,5 п.л. Формат 60x84/16. Сдано в печать 3.02.03 г.

Оглавление диссертации Говорова, Елена Геннадьевна :: 2004 :: Пермь

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ КЕТОТИФЕНА И

ВОЗМОЖНОСТЬ ЕГО ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

1.1. Общие сведения о кетотифене Показания к медицинскому применению.

Побочное де й ствие гПротив опоказания,токсичность.:.vr. ~

1.2. Поведение в организме.

1.3. Способы доказательства кетотифена и других азотсодержащих веществ основного характера, выделенных из биологических объектов.

1.4. Количественное определение кетотифена и аналогичных лекарственных веществ основного характера.

1.5. Выделение кетотифена из биологических объектов, исходя из возможностей методов изолирования химико - токсикологического анализа лекарственных веществ.

Глава П. РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ ОБНАРУЖЕНИЯ КЕТОТИФЕНА

2.1. Исследование отношения кетотифена к реактивам осаждения и окрашивания.

2.2. Хроматография в тонких слоях сорбента.

2.3. ИК — и УФ - спектроскопическое исследование кетотифена.

2.4. ГХ и ГХ/МС спектроскопия в анализе кетотифена.

2.5. Идентификация кетотифена методом ВЭЖХ.

Выводы к Главе 2.

Глава Ш. РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЕТОТИФЕНА

3.1. УФ - спектрофотометрия.

3.1.1. Разработка методики определения.

3.1.2. Чувствительность УФ - спектрофотометрического определения кетотифена.

3.2. ВЭЖХ метод количественного определения кетотифена.

3.2.1. Разработка методики определения.

3.2.2. Чувствительность ВЭЖХ определения кетотифена.

Выводы к Главе 3.

Глава IV. ИЗОЛИРОВАНИЕ, ОБНАРУЖЕНИЕ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЕТОТИФЕНА В ТРУПНОМ МАТЕРИАЛЕ

4.1. Теоретические предпосылки к прогнозированию оптимальных условий выделения кетотифена.

4.1.1. Определение константы ионизации кетотифена.

4.1.2. Изучение влияния рН и природы органического растворителя на степень изолирования кетотифена.

4.2. Методика исследования модельных смесей биологического субстрата с кетотифеном.

4.2.1. Изолирование кетотифена.

4.2.2. Выбор элюирующего растворителя.

4.2.3. Влияние балластных веществ на определение кетотифена.

4.2.4. Количественное определение кетотифена, выделенного из биосубстрата.

4.3. Схема химико-токсикологического анализа трупного материала на кетотифен.

Выводы к Главе 4.

Глава V. ИЗОЛИРОВАНИЕ, ОБНАРУЖЕНИЕ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ

КЕТОТИФЕНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

5.1 Выделение кетотифена из биологических жидкостей.

5.2. Определение кетотифена в моче.

5.3. Определение кетотифена в крови.

5.4. Влияние процессов гнилостного разложения на определение кетотифена в биологических жидкостях.

5.5 Схема химико-токсикологического анализа на кетотифен в биологических жидкостях.

Выводы к Главе 5.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Говорова, Елена Геннадьевна, автореферат

В большинстве развитых стран мира в последние десятилетия отмечено резкое увеличение количества аллергических заболеваний [37;74]. Проведенные в различных регионах Российской Федерации эпидемиологические исследования показали прямую зависимость уровня аллергических заболеваний от состояния окружающей среды [83]. По данным медиков аллергические заболевания в среднем охватывают 10% населения земного шара, но эта величина колеблется от 1 до 50% и более в разных странах, особенно в отдельных регионах и среди отдельных групп [37].

На сегодняшний день фармакотерапия аллергических состояний является основным способом борьбы с распространенным недугом, что приводит к появлению на лекарственном рынке все новых и новых средств отечественного и импортного производства. [90]. В связи с побочным действием при определенных условиях некоторые из них могут быть причиной фатальных осложнений, интоксикаций различной степени тяжести, острых и хронических отравлений.

Кетотифен, обладающий антианафилактической активностью, широко применяется в медицинской практике в качестве антигистаминного средства [4; 6; 7; 42; 56; 67; 90]. В связи с побочными явлениями (потенцирование действия снотворных, седативных, других антиаллергических средств, алкоголя) кетотифен используется в немедицинских целях, а при передозировке имеет токсикологическое значение [8; 67; 90; 119; 125]. Критический обзор доступной нам литературы показал, что фармакологическому и клиническому изучению кетотифена посвящено значительное количество работ [19; 86; 87; 117; 198]. Однако информация о его химико-токсикологическом анализе крайне недостаточна. Способы изолирования и доказательства в биосубстратах не разработаны.

Цели и задачи. Целью диссертационной работы является исследование по разработке и оптимизации методик изолирования, обнаружения и количественного определения кетотифена в применении к его химико-токсикологическому анализу.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• Предложить эффективные способы очистки кетотифена, выделенного из биологического материала;

• Провести изучение хроматографического поведения кетотифена на различных сорбентах и в различных системах растворителей ВЭТСХ с целью введения в ХТС афининг;

• Разработать чувствительные методики количественного определения кетотифена на основе УФ - спектрофотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии;

Разработаны методики идентификации кетотифена на основе реакций окрашивания и методов ВЭТСХ, ВЭЖХ, ГХ, ГХ/МС, Ж - и УФ -спектроскопии. Предложена микрокристаллоскопическая реакция на кетотифен с кислотой золотохлористоводородной.

Разработаны схемы химико-токсикологического анализа биологических объектов при диагностике отравлений кетотифеном.

Показано влияние процессов биодеградации на определение кетотифена в крови, моче, печени при сроках их хранения 1 и 3 месяца.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования.

Исследование проведено по запросу Бюро СМЭ Республики Бурятия (г. Улан - Удэ). Разработанные методики пробоподготовки, изолирования, очистки извлечений, обнаружения и количественного определения кетотифена рекомендованы для использования в химико-токсикологических лабораториях для аналитической диагностики отравлений, а так же в учебном процессе на кафедрах токсикологической и фармацевтической химии фармацевтических вузов.

Методики химико-токсикологического анализа кетотифена внедрены в практику работы Центра экстракорпоральных методов детоксикации Управления здравоохранения г. Нижний Тагил Свердловской области, судебно - химического отделения ГУЗОТ Областного Бюро судебно -медицинской экспертизы, г. Пермь, СХО Бюро судебно - медицинской экспертизы Минздрава Республики Бурятия, г. Улан — Удэ, СХО ГУ Бюро судебно - медицинской экспертизы Минздрава Республики Марий — Эл, г. Йошкар-Ола, а также в учебный процесс на занятиях интернов — аналитиков на кафедре фармацевтической ФДПО и ФЗО и токсикологической химии Пермской государственной фармацевтической академии.

Разработанные методики включены в практику судебно - медицинских и химико-токсикологических лабораторий через постоянно действующие курсы специализации и усовершенствования врачей - лаборантов и врачей судебно - медицинских экспертов в региональном учебно-методическом центре аналитической диагностики наличия наркотических средств, психотропных и других токсических веществ Пермской государственной фармацевтической академии (1999 - 2003 гг.).

По теме диссертации опубликовано 16 работ.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены с опубликованием на Международной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции» (Санкт - Петербург, 1999г.); на Международном конгрессе «Научная молодежь на пороге XXI века» (Томск, 2000г.); на VIII и IX Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва 2001, 2002гг.); на Ш и IV Международном конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о человеке" (Томск, 2002, 2003гг.); на юбилейной научной конференции "Молодые ученые Волго - Уральского региона на рубеже веков" (Уфа, 2001г.); на межвузовской научно -практической конференции "Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы" (Пермь, 2000г.); на юбилейной межвузовской научно - практической конференции профессорско -преподавательского состава "Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы", посвященной 85-летию высшего образования на Урале (Пермь 2001г.); на юбилейной научной конференции молодых ученых, студентов и аспирантов "Молодежная наука Прикамья-2002" (Пермь, 2002г.).

Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование кетотифена в применении к его химико-токсикологическому анализу"

Общие выводы

1 Исследовано отношение кетотифена к реактивам осаждения и окрашивания. Предложена новая микрокристаллоскопическая реакция с кислотой золотохлористоводородной; реакции окрашивания с реактивами Марки, Манделина, кислотой серной концентрированной. Показана возможность их использования для химико-токсикологического анализа.

3 Показана возможность использования методов ИК - , УФ - ,ВЭЖХ, ГХ, ГХ/МС спектроскопии для идентификации кетотифена при химико-токсикологических анализах.

5 Теоретически прогнозированы оптимальные условия изолирования кетотифена с учетом рКа и рН среды. При изучении степени экстрагируемости кетотифена из водных растворов в зависимости от рН среды и природы органического растворителя показано, что оптимальным экстр агентом для кетотифена является хлороформ при рН 10-11.

9 Надежность идентификации и определения при химико-токсикологческих анализах обеспечивается комплексным использованием современных инструментальных методов с традиционными химическими реакциями.

10 Разработан методологический подход и предложены схемы химико-токсикологического анализа биологических объектов при диагностике отравлений кетотифеном.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2004 года, Говорова, Елена Геннадьевна

1. Алехина, Е.К. Иммунотропная активность Hi антигистаминных препаратов / Е.К.Алехина, И.А.Красикова // Эксперим. и клин, фармакология.-199 8.-№ 2.-С.79-84.

2. Альберт, А. Константы ионизации кислот и оснований /

3. A.Альберт, Е.Сержент М.: Химия, 1964. - 179 с.

4. Аналитическая хроматография / К.И.Сакодынский,

5. B.В.Бражников, С.А.Волков и др. М.: Химия, 1993. - 464 с.

6. Арзамасцев, А.П. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе лекарственных препаратов / А.П.Арзамасцев, Д.Б.Никуличев, Д.М.Попов // Химико-фармацевтический журнал. 1989. - Т. 23, № 4. - С.486 - 491.

7. Байерман, К. Определение следовых количеств органических веществ / К. Байерман. М.: Мир, 1987.-429 с.

8. Балаболкин, И.И. Стратегия лечения и профилактика бронхиальной астмы у детей / И.И.Балаболкин // Педиатрия.-1998.-№ 4.-С. 92-96.

9. Балаболкин, И.И. Эффективность задитена при аллергических заболеваниях у детей / И.И.Балаболкин // Врач.-1996.-№ 6.-С. 13-14.

10. Балткайс, Я.Я. Взаимодействие лекарственных веществ / Я.Я.Балткайс, В.А.Фатеев. М.: Медицина, 1991.-304 с.

11. Барцев, А.И. Изолирование и определение различных наркотических и лекарственных веществ после кислотного гидролиза биологического материала. Сообщение 1. /А.И.Барцев // Судебно-медицинская экспертиза. 1998. - №6. - С. 26-27.

12. Беленький, Б.Г. Капиллярная жидкостная хроматография / Б.Г.Беленький, Э.С.Ганкина, В.Г.Мальцев. JL: Наука, 1987. -207 с.

13. Беляев, А.В. Исследование наркотических средств с предварительной пробоподготовкой методом твердофазной экстракции // А.В.Беляев, Т.В.Понкратов, В.И.Сорокин,

14. Е.П.Семкин // Новые лекарственные препараты. 2001. - №7. -С. 23-25.

15. Березенцева, О.М. Определение метадона методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии //

16. М.Березенцева, Ю.А.Клучко, С.И.Никуличева и др.// Судебно-медицинская экспертиза. 1995. № 4. - С. 24 - 26.

17. Бидлинмейер, Б.М. Препаративная жидкостная хроматография / Б.М. Бидлинмейер. М.: Мир, 1990. - 358 с.

18. Будников, Г.К. Современное состояние и перспективы развития вольтамперометрии / Г.К.Будников // Журнал аналитической химии. 1996. - Т.51, №4. - С. 374-383.

19. Вайнаускас, П.В. Оценка методов выделения некоторых противопаркинсонических препаратов из трупного материала / П.В.Вайнаускас // Судебно-медицинская экспертиза. 1990. - №1. С. 40 - 41.

20. Васильева, H.J1. Смертельное отравление эстималом / Н.Л.Васильева, В.А.Карташов // Судебно-медицинская экспертиза.-1990.-№2.-С. 5 5-5 6.

21. Васюкова, Н.И. Хромато-масс-спектроскопический анализ алкалоидов группы тропана / Н.И.Васюкова, И.А.Чичкова // Современные методы химико-токсикологического анализа.: Науч. тр. М„ 1986. - С. 119 - 125.

22. Веселовская, Н.В. Хроматографический анализ фенцеклидина, его метаболитов и аналогов в биологической жидкости / Н.В.Веселовская, С.А.Савчук, Б.Н.Изотов // Судебно-медицинская экспертиза. 1999. - №2. - С. 20-25.

23. Влияние кетотифена на систему эйкозаноидов, иммунологическую реактивность и бронхиальную проходимость у больных с обструктивными заболеваниями легких // В.В.Ефимов, В.И.Блажко, М.М.Ляшенко и др. //. Тер. архив. — 1991. Т.63, №3. - С. 70-73.

24. Выбор и построение факторных планов эксперимента при оптимизации анализа лекарственных и токсических веществ в биологических средах // В.З.Бродский, М.А.Векслер, Л.М.Власенко и др.// Фармация. 1986. - № 6. - С. 41 - 48.

25. Высокоэффективная тонкослойная хроматография. Пер. с англ. / Под ред. А.Златкиса, Р.Кайзера. М., 1979. - 348 с.

26. Вяселев, М.Р. Развитие аппаратурных методов вольтамперометрии / М.Р.Вяселев, Л.М.Урманчеев // Электрохимические методы анализа: ЭМА-99. М. - 1999. - С. 77-81.

27. Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии / Ф.Гейсс. -М.:Медицина, 1999. Т. 1 - 405 е., Т.2. - 348 с.

28. Георгиевский, В.П. 50 лет тонкослойной хроматографии / В.П.Георгиевский, Ю.В.Шестенко // Фармация. 1989. - № 3. - С. 86 - 87.

29. Говорова, Е.Г. Аналитическое изучение кетотифена с применением методов ВЭЖХ, ИК- и УФ-спектроскопии. / Е.Г.Говорова, Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова // Актуальные проблемы медицины и фармации. Курск: КГМУ, 1999. - С. 289 - 291.

30. Говорова, Е.Г. Влияние процессов биодеградации на определение кетотифена в биосубстрате / Е.Г.Говорова, Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова // Науки о человеке. Сб. статей IV Междунар. конгресса молодых ученых и специалистов, Томск, 2003. — Томск, 2003. С. 149.

31. Говорова, Е.Г. ВЭЖХ-метод определения кетотифена / Е.Г.Говорова, Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова // Науки о человеке. Матер. III конгресса молодых ученых и специалистов. Томск, 2002. С. 212.

32. Говорова, Е.Г. К химико-токсикологическому исследованию кетотифена / Е.Г.Говорова, Н.В.Кокшарова // Молодежная наука

33. Прикамья 2002: Тез. докл. обл. науч. конф. молодых ученых, студентов и аспирантов, Россия, Пермь, 2002 г. — Пермь, 2002. — С. 157-158.

34. Говорова, Е.Г. Хроматографическое обнаружение кетотифена в моче / Е.Г.Говорова, Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова // Науки о человеке. Матер. 1 конгресса молодых ученых и специалистов. Томск, 2000. С. 135.

35. Гущин, И.С. Особенности действия кетотифена на избирательное и неизбирательное высвобождение гистамина из базофиллов человека / И.С.Гущин, А.И.Зебрев // Бюллетень эсперим. биологии и медицины. 1984. - Т.97, №1. - С.60-63.

36. Дегтерев, Е.В. Применение количественной ТСХ в анализе лекарственных препаратов // Е.В.Дегтерев, Б.В.Тяглов, Е.А.Зенкова и др. // Количественная ВТСХ. Проблемы и их решение. 2-я школа семинар. С.-Петербург. - 2002. - С. 19-22.

37. Дегтерев, Е.В. Применение тонкослойной хроматографии в анализе наркотических и сильнодействующих веществ (обзор). / Е.В.Дегтерев, А.В.Гаевский, Е.А.Зенкова // Хим.-фарм. журнал. -1998. № 8. - С. 48-54.

38. Дедюева, Е.Ю. Смертельные отравления лекарственными средствами в Москве в 1988 г./ Е.Ю. Дедюева, И.М.Серебренников, Т.И.Яблочкина // Судебно-медицинская экспертиза. 1990. - № 4. - С. 22 - 24.

39. Диагностика смертельных отравлений некоторыми веществами, используемыми токсикоманами // Ю.И.Соседко, Д.В.Богомолов, Ю.А.Николкина, Ю.И.Пиголкин // Судебно-медицинская экспертиза. 2000. - №6. - С. 13-15.

40. Еремин, С.К. Анализ наркотических средств / С.К.Еремин, Б.Н.Изотов, Н.В.Веселовская М.: Мысль, 1993. - 272 с.

41. Еремин, С.К. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в химико-токсикологическом анализелекарственных соединений / С.К.Еремин, Б.Н.Изотов // Журнал аналитической химии. 1988. - T.XL1V. - С. 5-19.

42. Ермаков, Р. Аллергия: на рубеже тысячелетий / Р.Ермаков // Медиц. газета. 1999. - № 31. - С. 12.

43. Ершов, М.Б. Количественное определение кофеина в моче методом ТСХ с использованием «Денскан-4» / М.Б.Ершов, А.Н.Фомин // Количественная ВТСХ. Проблемы и их решение. 2-я школа семинар. С.-Петербург. - 2002. - С. 25.

44. Жуков, О.И. Метод определения аминазина в биологическом материале с помощью ВЭЖХ / О.И.Жуков, В.В.Купчиков // Химко-фармацевтический журнал. 1998. - №10. - С. 53-54.

45. Завражная, Т.А. Определение клофелина ГЖХ / Т.А.Завражная // Фармация. 1989. - № 2. - С. 33 - 34.

46. Задитен препарат для профилактики и лечения астмы и аллергии // Рус. мед. журнал. - 1995. - Т.1, №1. - С.34.

47. Задитен в лечении аллергических заболеваний у детей (обзор литературы) // И.И.Балаболкин, Н.В.Башилова, Б.В.Клюев, Ф.Ю.Мамедова // Педиатрия. 1984. - №7. - С. 95-97.

48. Зайцев, В.В. Метод радио ТСХ в разработке новых радиофармпрепаратов для ПЭТ / В.В.Зайцев, Р.Н.Красикова // Количественная ВТСХ. Проблемы и их решение. 2-я школа — семинар. С.-Петербург. 2002. - С. 94-97.

49. Залесова, В.А. К обнаружению трамадола в моче методом тонкослойной хроматографии / В.А.Залесова, С.С.Катаев, Л.Н.Курдина // Вопросы наркологии. 1998. - №2. - С. 53-56.

50. Ивановская, Е.А. Фармакокинетические исследования кардиопрепаратов методом инверсионной вольтамперометрии:

51. Автореф. дисдоктора фарм наук / Е.А.Ивановская. — Томск,2000. 38 с.

52. Изотов, Б.Н. Экстракция органических соединений в модельных системах ткань печени — водные растворы / Б.Н.Изотов, Э.Г.Николаева, И.А.Козлова // Судебно-медицинская экспертиза. 1996. - №4. - С. 35-38.

53. Казицына, JI.A. Применение УФ -, ИК и ЯМР - спектроскопии в органической химии / Л.А.Казицына, Н.Б.Куплетская - М.: Высшая школа, 1971. - 264 с.

54. Карасек, Ф. Введение в хромато масс - спектрометрию / Ф.Карасек, Р.Клемент - М.: Мир, 1993. - 236 с.

55. Карташов, В.А. Вариант ТСХ скрининга ядовитых и сильнодействующих органических оснований / В.А.Карташов, В.М.Овсянникова, Л.Е.Кудрикова // Судебно-медицинская экспертиза. - 1982. - № 3. - С. 39 - 41.

56. Карташов, В.А. Выбор экстрагента для изолирования из печени азотсодержащих органических оснований / В.А.Карташов,

57. B.А.Кнауб // Судебно-медицинская экспертиза. 1988. - № 3. - С. 40 - 41.

58. Карташов, В.А. Извлечение азотсодержащих органических оснований из ткани печени / В.А.Карташов, В.А.Кнауб, Л.В.Чернова // Судебно-медицинская экспертиза. 1988. - № 4.1. C. 31 33.

59. Карташов, В.А. Изолирование азотсодержащих основанией из ткани печени на примере модельного вещества./ В.А.Карташов,

60. B.А. Кнауб, Л.В.Чернова // Судебно-медицинская экспертиза. -1988. № 1. - С. 33 - 35.

61. Катаев, С.С. Химико-токсикологический анализ каннабиноидов в моче методом хромато-масс-спектроскопии // С.С.Катаев, И.Ю.Смирнова, В.А.Залесова, Л.Н.Курдина // Судебно-медицинская экспертиза. 2000. - №1. - С. 27-31.

62. Кетотифен Фармахим. Антиаллергический и антигистаминный эффект в экспериментальных условиях // Г.Генчева,

63. C.Михайлова, С.Маркова, М.Николова // Мед. биолог, инф. -1997. №3. С. 19-22.

64. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография / Ю.Кирхнер; Пер. с англ. М.: Мир, 1981. - Т. 2. - 616 с.

65. Кислун, Ю.В. Обнаружение наркотических и других одурманивающих веществ в моче методом газо-жидкостной хроматографии.: Автореф. дисс. . канд. фарм. наук /Ю.В.Кислун -М., 1993. 19 с.

66. Кислун, Ю.В. Химико-токсикологический анализ лекарственных соединений. Системы аналитического "скрининга". ГЖ "Скрининг" /Ю.В. Кислун// Современные методы химико-токсикологического анализа.: Науч. тр. М., 1986. - С. 89 - 112.

67. Кокорина, Н.О. Опыт применения высокоэффективной микроколоночной жидкостной хроматографии в химическом отделении СМЭ г. Новосибирска / Н.О.Кокорина, Г.Г.Шамовский // Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики. 1999. - №4. - С. 138-143.

68. Количественный анализ хроматографическими методами./ Под ред. Э.Кэц. М.: Мир, 1990. - 319 с.

69. Комплексный химико-токсикологический анализ просидола // С.С.Катаев, Л.Н.Курдина, В.А.Залесова и др. // Судебно-медицинская экспертиза. 2001. - №4. - С. 34-37.

70. Коржикова, Е.Б. Высокоэффективная тонкослойная хроматография и ее применение в фармации / Е.Б.Коржикова // Фармация. 1986. - № 4. - С. 74-77.

71. Ландышев, Ю.С. Лечение бронхиальной астмы кетотифеном / Ю.С.Ландышев, Н.Д.Гоборов, А.Л.Югай // Сов. медицина. -1989. № 12. - С. 68-70.

72. Липец, М.Е. Применение задитена в комплексном лечении аллергических заболеваний кожи у детей / М.Е.Липец, В.Н.Лопатко // Вестн. дерматол. и венерологии. 1989. № 7 - С. 43-47.

73. Майстренко, В.Н. Вольтамперометрия с ультрамикроэлектродами новый этап развития метода / В.Н.Майстренко, И.А.Русаков, Г.К.Будников // Журнал аналитической химии. - 1992. - Т. 47, № 6. - С. 1003-1013.

74. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д.Машковский М: ООО «Издательство Новая Волна», 2000. -Т. 1. изд. 14. С. 289.

75. Мелентьев, А.Б. Определение клозепина в крови и моче методом ГХ/МС / А.Б.Мелентьев, И.В.Курочкина // Судебно-медицинская экспертиза. 1999. - №4. - С. 27-29.

76. Мелентьев, А.Б. Определение клофелина в крови методом газовой хроматографии масс-спектрометрии / А.Б.Мелентьев // Судебно-медицинская экспертиза. - 2001. - №4. - С. 28-31.

77. Мелентьев, А.Б. Скрининг лекарственных, наркотических веществ и их метаболитов методом газовой хроматографиии с масс-селективным детектором / А.Б.Мелентьев // Проблемы экспертизы в медицине. 2002. - №4. - С. 15-20.

78. Методические указания по химико-токсикологическому анализу веществ, вызывающих одурманивание. М.: МЗ СССР, - 1989. -122 с.

79. Наканиси, К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений: Пер. с анг. / К.Наканиси М.:Мир, 1965. - 640 с.

80. Николаев, В. Эпидемия .аллергии / В.Николаев // Фарм. вестник. 1998. - № 1. - С. 11.

81. Николаева, Э.Г. Изолирование амитриптилина из биологических жидкостей /Э.Г.Николаева // Судебно-медицинская экспертиза. -1980. № 4. - С. 39 - 41.

82. Николаева, Э.Г. Изолирование амитриптилина из трупного материала ацетонитрилом /Э.Г.Николаева // Судебно-медицинская экспертиза. 1990. - № 1. - С. 39 - 40.

83. Новые возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе лекарственных средств // Г.И.Барам, Д.В.Рейхарт, Е.Д.Гольдберг и др. // Фарматека. 2002. - №11. -С. 71-74

84. Обнаружение трамадола и его метаболитов в моче хроматографическими методами // Н.В.Веселовская, Ю.В.Кислун, С.В.Еремин и др. // Судебно-медицинская экспертиза. 1996. - №4. - С. 38-42.

85. Онегова, Н.С. Фармацевтический и химико-токсикологический анализ лекарственных смесей, содержащих пропифеназон:

86. Автореф. дис.канд. фарм. наук / Н.С.Онегова. Пятигорск, 2002. - 24 с.

87. Остроумов, А.И. Эффективность противоаллергических препаратов (фенкарола и кетотифена) при аллергии к пыльце амброзии / А.И.Остроумов, О.А.Чеканова // Иммунология. — 1981. №5. - С. 45-47.

88. Применение эуфиллина и задитена в лечении . обструктивного синдрома у детей с аллергическим диатезом в амбулаторно-поликлинических условиях //С.С.Брынцова, Н.Н.Гриднева, О.И.Сидоренко, А.Д.Цукетти // Педиатрия-1988.-№ 12.-С.74-76.

89. Родовниченко, М.С. Обнаружение и количественное определение лидокаина и новокаинамида в биологических жидкостях // М.С.Родовниченко, Т.Х.Вергейчик, М.Г.Цыбулина, С.В.Клочков // Судебно-медицинская экспертиза . 1998. - №1. - С. 24-27.

90. Садчикова, Р. Аллергия. Взгляд на проблему / Р.Садчикова // Фарм. вестник. 1997. - № 19. - С. 15.

91. Саломатин, Е.М. Судебно-химический анализ трупного материала на наличие лекарственных и наркотических соединений / Е.М.Саломатин, Э.Г.Николаева // Судебно-медицинская экспертиза 1999.- №3. - С. 21-22.

92. Свердлова, О.В. Электронные спектры в органической химии /О.В.Свердлова Л.: Химия, 1973. - 248 с.

93. Сергеев, Ю.В. Изучение клинической эффективности кетотифена (задитена) на показатели иммунного статуса у больных аллергическим дерматитом / Ю.В.Сергеев // Дерматол. и венерология. Киев, 1989. - Вып. 24 - С. 3-6.

94. Сергеев, Ю.В. Клиническая эффективность и перспективы применения задитена (кетотифена) в терапии аллергических дерматозов / Ю.В.Сергеев, Н.С.Потекаев // Вестн. дерматол. и венерологии. 1987. № 4. - С. 52-55.

95. Сильверстейн, Р. Спектрофотометрическая идентификация органических соединений / Р.Сильверстейн, Г.Басслер, Т.Моррил; Под ред. А.А.Мальцева. М.: Мир, 1977. - 590 с.

96. Симонов, Е.А. Наркотики: методы анализа на коже, в ее придатках и выделениях / Е.А.Симонов, Б.Н.Изотов, А.В.Фесенко. М.: Анахарсис, 2000. - 130 с.

97. Справочник. Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике в СССР. / Под ред. М.А.Клюева. М.: Медицина, 1989. 512 с.

98. Степанова, Е.Н. Анализ эглонила в трупном материале / Е.Н.Степанова, В.В.Бажанов // Судебно-медицинская экспертиза. 1997. - №2. - С. 28-30.

99. Степанова, Е.Н. Сравнительная оценка методов изолирования эглонила из биологического материала / Е.Н.Степанова, М.С.Алявдина, Л.П.Кирпичева // Матер. III Всерос. съезда судебных медиков. Саратов, 1992. - С. 359 - 360.

100. Стыскин, Е.Л. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография / ЕЛ.Стыскин, Л.Б.Ициксон, Е.В.Брауде. М.: Химия, 1986. - 288 с.

101. Судебно-медицинская экспертиза смертельных отравлений наркотическими веществами // О.В. Кригер, С.В. Могутов, Д.И. Бутовский и др. // Судебно-медицинская экспертиза.-2001.-№2.-С.9-14.

102. Схунмаркерс, П. Оптимизация селективности в хроматографии/ П.Схунмаркерс; Под ред. В.А.Даванкова. М.: Мир, 1989. - 339 с.

103. Титова, А.В. Изучение процесса экстракции лекарственных соединений из биологического материала.: Дисс. . канд. фармацевт, наук / А.В.Титова М., 1984. - 185 с.

104. Титова, А.В. Методы выделения токсических органических соединений из биологического материала, используемые всудебно-химическом анализе / А.В.Титова // Фармация. 1989. -№ 1. - С. 80 - 83.

105. Томилин, В.В. Современное состояние и перспективы развития химико-токсикологических (судебно-химических) исследований в Российской Федерации / В.В.Томилин, Е.М.Саломатин // Судебно-медицинская экспертиза.-2001.-№3.-С.28-33.

106. Томилин, В.В. Состояние и перспективы развития судебно-медицинской службы Российской Федерации / В.В.Томилин // Судебно-медицинская экспертиза.-2001.-№3.-С.7-14.

107. ФС 42-3630-98. Таблетки кетотифена 0,001 г.

108. Химико-токсикологический анализ на наличие кетотифена // Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова, В.П.Гаранин, Н.В.Кокшарова // Проблемы экспертизы в медицине. 2003. - №1. - С. 16-18.

109. ЮЗ.Хомов, Ю.А. Исследования в области химико-токсикологического анализа азотсодержащих соединений основного характера: Автореф. дис. . доктора фарм. наук / Ю.А.Хомов. Пермь, 1996. - 50 с.

110. Хомов, Ю.А. Исследования по обнаружению кетотифена при химико-токсикологических анализах / Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова, Е.Г.Говорова // Актуальные вопросы подготовки фармацевтических кадров: Материалы межвуз. науч.-практ. конф.- Томск, 2000. С. 96-101.

111. Хомов, Ю.А. К анализу кетотифена / Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова, Е.Г.Говорова // Фармация в XXI веке. Инновации и традиции. Тез. докл. конгр. С.-Петербург. - 1999.- С. 252.

112. Хомов, Ю.А. Количественное определение кетотифена в моче / Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова, Н.В.Кокшарова // Человек и лекарство: Тез. докл. VIII Рос. нац. конгр. Москва, 2001. — М., 2001. С. 499.

113. Хомов, Ю.А. Обнаружение кетотифена в моче / Ю.А.Хомов, Н.В.Кокшарова, Е.Г.Говорова // Актуальные проблемы теории и практики фармации. Сб. науч. статей. Барнаул: Изд-во Алт. унта, 2000. - С. 53 - 55.

114. Хомов, Ю.А. Определение кетотифена в крови / Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова, Н.В.Кокшарова // Человек й лекарство: IX Рос. нац. конгр. Москва, 2002. М., 2002. - С. 716.

115. Хомов, Ю.А. Определение константы ионизации кетотифена спектрофотометрическим методом / Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова, Н.В.Кокшарова // Лабораторное дело. Организация и методы исследований. Материалы Всерос. науч.-практ. конф. Пенза, 2001. С. 15-16.

116. Хомов, Ю.А. УФ-спектрофотометрический метод анализа кетотифена в биологических субстратах / Ю.А.Хомов, Е.Г.Говорова, Н.В.Кокшарова // Молодые ученые Волго-Уральского региона на рубеже веков. Уфа, 2001. - Т. 1. - С. 219-220.

117. Хроматография. Практическое приложение метода / Под ред. Э. Хефтмана.: Пер. с англ. М.: Мир, 1986. - Т. 2. - 422 с.

118. Хубер, Л. Применение диодно-матричного детектирования в ВЭЖХ / Л.Хубер М.: Мир, 1993. - 95 с.

119. Шаршунова, Н. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии/ Н.Шаршунова, В.Шварц, Ч.Михалец. М.: Мир, 1980. Т.1. С. 91-103.

120. Шатц, В.Д. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии / В.Д.Шатц, О.В.Сахартова. Рига: Зинатне, 1998. - 390 с.

121. Шеховцева, Т.Н. Ферментативный метод определения пирацетама и кетотифена / Т.Н.Шеховцева, Е.И.Жмаева, И.А.Даньшина // Актуальные проблемы теории и практики фармации. Сб. науч. статей Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2000. -С. 56 - 58.

122. Пб.Шталь, Э. Хроматография в тонких слоях / Э.Шталь. М: Мир, 1965. - 508 с.

123. Щука, С.С. Терапевтическая эффективность кетотифена у детей с обструктивным рецидивирующим бронхитом / С.С.Щука // Педиатрия. 1999. - №4. - С. 73-75.

124. Экспериментальные исследования для оценки влияния кетотифена на иммунную систему // Г.Семкова, Г.Генчева, Г.Мирчева, М.Николова // Мед. биолог, инф. 1989. - №3. - С. 23-26.

125. Энциклопедия лекарств./Под ред. Ю.Ф.Крылова. М.: изд. «PJ1C - 2000». 2000. - изд. 7. - С. 426.

126. Badcock, N.R. The Liquid-liquid extraction in systematic toxicological analysis / N.R.Badcock, G.D.Zoanetti // Ann. Clin. Biochem. 1996. - Vol. 33. - P. 75 - 77.

127. Barth, H.C. Column liquid chromatography / H.C.Barth, W.E.Barber, C.H.Lochmuller // Analyt. Chem. 1986. - Vol. 58, № 5. - P. 211 -250.

128. Boguzs, M. UF-detections in the HPLC screening / M. Boguzs, E.Erkens // J. Anal. Toxicol. 1993. - Vol. 14. - P. 165 - 170.

129. Casas, M. Combination variety phases for extractions drugs / M.Casas, L.Berruetta, B.Gallo // J. Pharm. Biochem. Anal. 1993. -Vol. 11. - P. 277 - 284.

130. Clarke's isolation and identification of drugs in pharmaceuticals, body fluids and post mortem material. Second Edition./ Ed. A.C.Moffat. - London: The pharmaceutical prese. - 1986. - Vol. 1, 2. - 1173 p.

131. Combined use of normal and reversed phase thin layer chromatography in the screening for basic and quaternary drugs // I.Ojanpera, J.Vartiovaara, A.Ruohonen, E.Vuori // J. Liquid Chromatogr. 1991. - Vol. 14. - P. 1435 - 1446.

132. Craps, L. The prophylaxis of bronchial asthma with ketotifen: five years of clinical investigations / L.Craps // Acta Therapeutica. -1980. Vol. 6. - P. 213 -225.

133. Dawling, S. The use solid-phase extractions for analytical screening basic drugs / S. Dawling, N.Ward, E.Essex // Ann. Clin. Biochem. -1990. Vol. 27. - P. 472 - 477.

134. De Zeeuw, R. Potential and pitfalls of chromotographic techniques and detection modes in substance identification for systematic toxicological analysis / R.De Zeeuw, J.Hartstra, J.Franke // J. Chromotogr. 1994. -Vol. 674. - P. 3 - 13.

135. Effect of ketotifen and clenbutirol hydrochloride on the phagocytic capacity of mice peritoneal macrophages // J.Semkowa, B.Dragoulev, J.Mircheva, G.Guencheva // Докл. Болг. АН. 1989. - 42, № 2. С. 131-132.

136. Elliot, S.P. The extraction power the chloroform / S.P.Elliot, K.A.Hale // J. Anal. Toxicol. 1998. - Vol. 22. - P. 279 - 289.

137. Ethyl acetate for the extractions of the drugs // D.Lo, T.Chao, S.Ng-Ong, Y.Yao // J. Forensic science. 1997. - Vol. 90. - P. 205 - 214.

138. Fracqui, A. Systematic toxicological analisys using HPLC/DAD / A.Fracqui, P.Kintz, P.Mangin // J. of Forensic Sciences. JFSCA. -1995. Vol. 40. - № 2. - P. 254 - 262.

139. Graff-Lonnevig, V. The effect of ketotifen on bronchial hyperreactivity in childhood asthma / V. Graff-Lonnevig, G.Hedlin // J. Allergy Clin. Immunol. 1985. - Vol. 76. - P. 59 - 63.

140. Hendy, M. Effect of ketotifen on the bronchodilating action of aminophylline / M. Hendy, P.Burge, D.Stableforth // Respiration. -1986. Vol. 49. - P. 296 - 299.

141. Hill, D.W., HLPC photodiode-array UV detection for toxicological drug analysis / D.W.Hill, K.J.Langer // J. liq. Chromatogr. 1987. -Vol. 10. - P. 377 - 409.

142. Kelly, P. Interim report of a double-blind controlled study of ketotifen in childhood asthma / P.Kelly, M.Taylor // Res. Clin. Forums. 1982. - Vol. 4. - P. 35 - 43.

143. Kennedij, G.R. Comparison of the orally administered anti-allergy agent, ketotifen with sodium cromoglyrate in the prophylaxis of bronchial astma / G.R.Kennedij, J.Munzo Sherriff // Respiration. -1981. Vol. 41, № 4. - P.264-269.

144. Levsen, K. Mase spectrometry in envizonmental organic analysis / K.Levsen // Org. Mass. Spektrom. 1988. - Vol. 23, № 5. - P. 406 -415.

145. Loftus, B. Long-term placebo-controlled trial of ketotifen in the managment of preschool children with asthma / B. Loftus, J.Price // J. Allergy Clin. Immunol. 1987. - Vol. 79. - P. 350 - 355.

146. Martin, U. Dissocation between the antianaphilactic and the antihistamine actions of ketotifen /U. Martin, M.Baggiolini // Arch. Pharmacol. 1981. - Vol. 316. - P. 186 - 189.

147. Martin, U. The pharmacological properties of a new orally active antianaphylactic compound: ketotifen, a benzocycloheptathiophene / U.Martin, D.Romer // Arzneimittel-forsch. 1978. - Vol. 28. - P. 770 - 782.

148. Minder, E.I. Identification of drugs in human serum by high-perfomance liquid chromatography with photodiode-array detection and search algorithm for ultraviolet spectra / E.I.Minder, R.Schabhut,

149. C.E.Minder // J. Chromatogr. 1987. - Vol. 149. - P. 135 - 154.

150. Moeller, M.R. Drug detection in hair by cromotographic procedures / M.R. Moeller // J. Chromatogr. 1992. - Vol. 580. - P. 125 - 134.

151. Ojanpera, J. The Liquid-liquid extractions of the Ethyl acetate for the drugs / J.Ojanpera, l.Rasanen, E.Vuori // J. Anal. Toxicol. 1996. -Vol. 20. - P. 204 - 208.

152. Postmarketing surveillance: practical experience with ketotifen // W.McClay, D.Crowder, S.Spiro, P.Turner // Br. Med. J. 1984. -Vol. 288. - P. 911 - 914.

153. Quantitative analysis of methadone and two major metabolites in hair by positive chemical ionisation ion trap mass spectrometry //

154. D.G.Wilkins, P.R.Nagasawa, S.P.Gygi, R.L.Foltz // J. Anal. Toxicol. 1996. - Vol. 20. - P. 355 - 361.

155. Ren, M. Adsorbtive stripping voltamme of antiasthmatic drug/ M.Ren // Heyrovsky Centennial. Congr. Polagr. organ jointly 41-st. Meet. Int. Soc. Electrochem. Prague. Aug. 20 - 25. 1990. - Tu 122.

156. Sherma, J. Modern high-performance thin-layer chromatography / J.Sherma // J. Assoc. Off. Anal. Chem. 1994. - Vol. 77. - P. 297 -306.

157. Sieradzki, E. Oznaczame ketotyfenu w surowicy metoda chromatografii gazowej / E.Sieradzki, M.Grundkowska, H.Letmanska // Farm. Pol. 1989. Vol. 45, № 3. - C. 160 - 162.

158. Stratton, D. Double blind comparisons of slow - release thtophylline, ketotifen and placebo for prophylaxis of asthma in young children / D.Stratton, F.Carswell, A.Hughes // Br. J. Dis. Chest. - 1984. - Vol.78. - P. 163-167.

159. Tamura, G. Protective effects of ketotifen on allergen indused bronchoconstriction and skin wheal / G.Tamura // Clin. Allergy. -1986. - Vol.16. - P. 535-541.

160. Taylor, B. Ketotifen in childhood asthma a double-blind placebo-controlled trial / B.Taylor, R.Ford // Clin. Allergy. 1979. - Vol. 9.- P. 241 -243.

161. Traqui A. Sample preparations for HPLC screening / A. Traqui, P.Kintz, P.Mangin // J. Forensic Science. 1994. - Vol. 50. - P. 254- 262.

162. Turcant, F. The Liquid-liquid extractions for HPLC screening methods / F.Turcant, M.Bogusz, V.Wu // J. Anal. Toxicol. 1991. -Vol. 15. - P. 188 - 197.

163. Wang Shason, S. Suppsessive effect of oral ketotifen on skin 4 responses to histamine, codeine and allergen skin tests / S.Wang

164. Shason, R.Wang Soo, B.Chiang // Ann. allergy. 1985. - Vol. 55, № 2.-P. 57-61.

165. Weins, Ch. Advances and developments in thin-layer cromatography / Ch. Weins, H.Hauck // LC-GC. 1996. - Vol. 14. - P. 456 - 464.г

166. Министерство здравоохранения Республики Бурятия

167. Республиканское Бюро судебно-медицинской экспертизы670047, Улан-Удэ, Пирогова 3 тел. 33-56-85fyty №1. На№-Ф^Ь1341. Ректору ПГФАпроф.ОЛЕШКО Г.И.614000, г.Пермь ул.Ленина, 48

168. Просим рассмотреть розможность специалистами Академии методик определения кетотифена для целей химико токсикологического анализа.

169. Зая. CX0 Респ. Биро судебно-медицинской экспертизы Мз Р«Сиу«ли;;и Бурятия1. V\yl.М.Машу ко ва

170. Министерство здравоохранения Российской Федерации Пермская государственная фармацевтическая академия

171. Утверждаю» Пермской государственнойакадемиипроф. Г.И.Олешко1. Но Л2003 г.

172. ОБ ОПРЕДЕЛЕНИИ КЕТОТИФЕНА ПРИ ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ1. ИНФОРМАЦИОННОЕ ПИСЬМО

173. Министерство здравоохранения Российской Федерации Пермская государственная фармацевтическая академия

174. ОБ ОПРЕДЕЛЕНИИ КЕТОТИФЕНА ПРИ ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ1. ИНФОРМАЦИОННОЕ ПИСЬМО

175. Кетотифен (Задитен, Затифен) является синтетическим производным метилпиперидина ( 4,9-Дигидро-4-(1-метил-4-1шперидинилиден)-10Н-бензо4,5.циклогепта[1,2-Ь]-тиофен-10-он фумарат ).

176. Кетотифен, обладающий антианафилактической активностью, широко применяется в медицинской практике в качестве антигистаминного средства.

177. В связи с побочными явлениями (потенцирование действия алкоголя, снотворных, седативных, других антиаллергических средств) кетотифен используется в немедицинских целях, а при передозировке имеет токсикологическое значение.

178. Определение кетотифена в биосубстрате

179. В условиях общего хроматографического скрининга в системе диоксан-хлороформ-ацетон-25% раствор аммония гидроксида 47,5:45:5:2,5 Rf кетотифена 0,50-0,53; а в системе толуол-ацетон-этанол-25% раствор аммония гидроксида 45:45:7,5:2,5 Rf 0,46-0,48.

180. Образование окрашенных пятен при детектировании тремя реактивами в испытуемых зонах, соответствие по величине Rf внешнему метчику позволяет предварительно идентифицировать кетотифен, что затем уточняется подтверждающим исследованием.

181. Обнаружение и количественное определение

182. Количество вещества в пробе рассчитывали по формуле:1. D * У, * Уг •1000•1000ее.moo. v, 'где

183. X количество вещества в пробе, мкг D - значение оптической плотности Е1см " удельный показатель поглощения I - толщина поглощающего слоя, смобъем 0,1 моль/л кислоты хлористоводородной, взятый для количественного определения, мл

184. V2 общий объем хлороформного извлечения, мл V3 - объем хлороформного извлечения, взятого для количественного определения, мл

185. Определение кетотифена в моче

186. Кетотифен из мочи экстрагировали хлороформом после кислотного гидролиза.

187. Определение кетотифена в крови

188. Сочетание способов обнаружения делает методику доказательства кетотифена специфичной по отношению к веществам., экстрагируемым хлороформом из щелочного раствора (см. приказ МЗ СССР за №1021).1. МЗрЁ^спублики Бурятия2004 г.1. Т.Л. Гиря1. АКТ ВНЕДРЕНИЯ

189. Наименование: Определение кетотифена при химнко токсикологическом исследовании

190. Предложение внесено по результатам научно-исследова

191. Кокшаровой Н.В. (ПГФА) и оформленной в виде Информационного письма (Пермь, 2003 г.).

192. Апробация и внедрение проведено в судебно-химическом отделении Бюро СМЭ Республики Бурятии (г. Улан-Удэ).

193. Заключение: методика признана пригодной для химико-токсикологического анализа кетотифена в биологических объектах.тельской работы, выполненной Хомовым Ю.А., Говоровой Е.Г1. РФ

194. ГУЗОТ ПЕРМСКОЕ ОБЛАСТНОЕ БЮРО судебно-медицинской

195. Утверждаю» ав. СХО Бюро СМЭ г. Пермиэкспертизы

196. СУДЕБНО-ХИМИЧЕСКОК ОТДЕЛЕНИЕ1. В.П.Гаранин2003 г.200Г.г. П*рмь Телефон : 16-40-401. АКТ ВНЕДРЕНИЯ

197. Наименование: Химико-токсикологический анализ кетотифена в трупном материале

198. Предложение внесено по результатам научно-исследовательской работы, выполненной Хомовым Ю.А., Говоровой Е.Г., Кокшаровой Н.В. (ПГФА), Гараниным В.Г1. (Пермское областное бюро СМЭ).

199. Апробация и внедрение проведено в судебно-химическом отделении Бюро СМЭ г. Перми.

200. Заключение: методика признана пригодной для химико-токсикологического анализа кетотифена в трупном материале.1. Судебно-медицинскийэксперт СХО высшей кате!1. Т.Р.Зеленина

201. Утверждаю» Зав. СХО Бюро СМЭ МЗ Республики Марий Эл, г. Йошкар-Оласуд.-мед. эксперт высшей категории В.А.Степанов « ^ » /MjzSfa- 2000 г.1. АКТ ВНЕДРЕНИЯ

202. Наименование: Доказательство кетотифена в биообъектах.

203. Предложение внесено по результатам научно-исследовательской работы, выполненной в Пермской фармацевтической академии Хомовым Ю.А., Кокшаровой Н.В., Говоровой Е.Г.

204. Апробация и внедрение проведено в судебно-химическом отделении Бюро СМЭ МЗ Республики Марий Эл, г. Йошкар-Ола.

205. Заключение: методика признана пригодной для химико-токсикологических анализов на кетотифен.гУ

206. Утверждаю» ХО Бюро СМЭ г. Пермиlyfjs*/^^*- В.П.Гаранин1. О1/ 200JJт.14.40-401. АКТ ВНЕДРЕНИЯ

207. Наименование: Химико-токсикологический анализ кетотифена

208. Предложение внесено по результатам научно-исследовательской работы, выполненной в Пермской фармацевтической академии Хомовым Ю.А., Говоровой Е.Г., Кокшаровой Н.В.

209. Апробация и внедрение проведено в судебно-химическом отделении Бюро СМЭ г. Перми.

210. Заключение: методика признана пригодной для химико-токсикологических анализов на кетотифен.

211. Центра Л г.трк о р г, п р в л>. и м ч Мктидп'* (ujjrm.nsj^M ГСХ -гкрнмипга крнведены в рапочкэт журиплг Tti,;rsr,n-\ииип;;uust л 6i>paTupm»1.J ИЛ /1

212. Зи и;л;«1Ч('»1К1-: п\ !• rs>,^!»«ii HpStjimJn» :< р v; t идмпй дл>; a. ?!i>.* it t.'w ■ us.i »f Mil K'iri'iiuX dktUAii.-iiHi «it i:t"H' l sn'i fi.7 -J r)^ >>Ua< ''Hi itl Л УЛ «« l

213. Jkfrjt \f\ /MiJJjt.JI //li'iVt^/.l'*химической л-joopuniopucu1'.'!>. i* :i!M;!X(,>o(lщ 9

214. Бюро судмедэкспертизы Минздоэва РвСП5/6яики Бурятиясход. № -Vdf1. Л.В.Машукова1. АКТ ВНЕДРЕНИЯ

215. Предложение внесено по результатам научно-исследоиатель-ской работы, выполненной в Пермской фармацевтической академии Хомовым Ю.А., Кокшаровой Н.В., Говоровой Е.Г.

216. Апробация и внедрение проведено в судебно-химическом отделении Республиканского Бюро СМЭ г. Улан-Удэ.

217. Заключение: методика признана пригодной для химико-токсикологических анализов на кетотифен.

218. Судебно-медицинский эксперт СХО1. РСФСг1. ПЕРМСКОЕ областное Бю1. VTRPnilt ПЯМ^»1.^Jlгvft1. Лаборатории3ав. СХО Бюро СМЭ г. Перми1. В.П.Гаранинг. Пермь. Телефон М ■1. АКТ ВНЕДРЕНИЯ

219. Предложение внесено по результатам научно-исследовательской работы, выполненной в Пермской фармацевтической академии Хомовым Ю.А., Кокшаровой Н.В., Говоровой Е.Г.

220. Предлагается методика доказательства кетотифена, на основе использования ХТС-скрининга в варианте ВЭТСХ, реакций с общеалколоидными осадительными реактивами, реактивами Марки, Манделина, концентрированной серной кислотой, а также УФ-, ИК-спектроскопии.

221. Апробация и внедрение проведено в судебно-хъмическом отделении Бюро СМЭ г. Перми.

222. Наименование: Изучение влияния процессов биодеградации на

223. Разработано: проф. Хомовым Ю.А., доц. Кокшаровой Н.В., асп. Говорова Е.Г. и студ. 5 курса Заххар Хаддуж

224. Заключение: предлагаемая методика позволяет определять кетотифен в биожндкостях, подвертщвхся процессам бнодеградацни (1-3 месяца).обнаружение и определение кетотифена в биологических жидкостях.1. Декан ФДПО

225. Зав. каф. токсикологической xi1. Малкова Т.Л.1. ASZ

226. Утверждаю» Проректор по учебной работе Пермской государственнойгосударственнойармацевтической академииг?/ . «и . м. о\Ч ^---проф. Потемкин К.Д.1. АКТ ВНЕДРЕНИЯв учебный процесс результатов научных исследований

227. Наименование: ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КЕТОТИФЕНА. Разработано: проф Хомовым Ю.А., асп. Говоровой Е.Г , доц. Кокшаровой Н.В.

228. Заключение: разработанная методика применима для определения кетотифена в биосубстратах и может быть использована при клинических и химико-токсикологических анализах.

229. Зав. каф. токсикологической химии1. Декан ФДПО1. Н.Ф.Арефина1. A5Zой государственной академиипроф. Потемкин К. Д.ектор по учебной работефевраля 2002 г.1. АКТ ВНЕДРЕНИЯв учебный процесс результатов научных исследований

230. Наименование; КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЕТОТИФЕНА В КРОВИ.

231. Разработано: проф. Хомовым Ю.А., доц. Кокшаровой Н.В., асп. Говоровой Е.Г. и студ. 5 курса Бенкиб Ф.

232. Заключение: предлагаемая методика позволяет надежно определятькетотифен в крови, и может быть использована при химико-токсикологических анализах.

233. Зав. каф. токсикологической химии1. Малкова Т.Л.1. Декан очного факультета1. Калина М. А.

234. Проректор по учебной работе Пермской государственной '^ЖР^&Ц е в т и ческой академиипроф. Потемкин К. Д.1. АКТ ВНЕДРЕНИЯв учебный процесс результатов научных исследований

235. Наименование: КОЛИЧЕСТВЕЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЕТОТИФЕНА В МОЧЕ.

236. Предлагается методика количественного определения кетотифена с использованием варианта прямой спектрофотометрии. Фоновые вещества мочи (после очистки электролитом) не влияют на результаты анализа. Расчет ведется по удельному показателю поглощения.

237. Методика определения кетотифена в моче апробирована на занятиях интернов-аналитиков.

238. Заключение: разработанная методика применима для количественного определения кетотифена в моче и может быть использована при клинических и химико-токсикологических анализах.1. П 11 V* -г» ГГ УЧ

239. Разработано: проф. ХомовымЮ.А., ас п. Говоровой Е.Г.1. Л. А.Чекрышкина1. Н.Ф. Арефина

240. Утверждаю» директор по учебной работекой государственнойертической академиипроф. Потемкин К.Д.25 октября 2001 г.

241. АКТ ВНЕДРЕНИЯ в учебный процесс результатов научных исследований

242. Наименование: ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КЕТОТИФЕНА В

243. Разработано. проф. Хомовым Ю.А , асп. Говоровой Е.Г., доц. Кокшаровой Н.В.

244. Заключение: разработанная методика применима для определения кетотифена в биосубстратах и может быть использована при клинических и химико-токсикологических анализах.1. БИОСУБСТРАТАХ

245. Зав. каф. токсикологической химии1. Т.Л.Малкова1. Декан ФДПО1. Н.Ф. Арефина4Г6

246. Утверждаю» Проректор по учебно?, работетическои академиипроф. Потемкин К.Д.государственной1. АКТ ВНЕДРЕНИЯв учебный процесс результатов научных исследований

247. Наименование: ОБНАРУЖЕНИЕ КЕТОТИФЕНА В МОЧЕ.

248. Разработано: проф. Хомовым Ю.А., доц. Кокшаровой Н.В.,

249. Доц. каф. токсикологической химии1. Малкова Т.Л.1. Декан ФДПО1. Арефина Н.Ф.454

250. Утверждаю» Проректор по учебной работе ской государственной евтической академиипроф. Потемкин К.Д.апреля 1999 г.1. АКТ ВНЕДРЕНИЯв учебный процесс

251. Заключение: Методика может быть признана пригодной для химико-токсикологического анализа кетотифена в моче.

252. Коньшина Л.О. Арефина Н.Ф.

253. Зав. йаф. токсикологической химии71. Декан ФУП