Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Химическое исследование солянки холмовой

'i з рев . •

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ЩЕРАШИ БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи Экз. В Ф

ЗАЙКОВ КОНСТАНТИН ЛЕОНАРДОВИЧ

УДК 547.219:547.296:547.466: 547.917:547.926:547.972

ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СОЛЯНКИ Х0ЖЮ30Й

15.00;С2 - фармацеатичасаая хкхвя а фаркакогвозня

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой стзпвкя кандидата фаркацевгячзсаих nays

Уфа - IS95

Работа выполнена в Иркутском институте органической химии СО РАН

Научные руководители - доктор химических наук

А.А.Семенов,

кандидат химических наук

A.И.Сырчина.

Научный консультант - кандидат биологических наук

B.С.Чучалин.

Официальные оппоненты - доктор фармацевтических наук,

профессор В.В.Строкик, доктор фармацевтических наук, профессор С.Е.Дыитрук.

Ведуцее учреждение - Пермский фармацевтический

институт.

Защита состоится "_ _" 1995 года

в ____ часов на заседании диссертационного совете Е 034.35.02 при Баакирскои государственно*; иедицинском институте по адресу: 450025, Уфа, уд. Ленина, 3.

С диссертацией мокно ознакомиться в библиотеке Базиирского государственного иедицинского института

Азгореферат разослан 1955 года

Учений секретарь диссерта-циошмго совета, докгор медицинских наук

Э.Г.Давлегов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В современной медицине для лечения поражений печени используются различные группы лекарственных препаратов и среди них заслуженной популярностьп пользуются гепатозацитние средства растительного происхождения. Учитывая выраженную тенденцип к росту заболеваемости токсическим гепатитом, а такие зозрастащув т.таесть его течения, преимуществами фитопрепаратов язлявтся низкая токсичность, хорошая переносимость и мягкость действия.

Ассортимент гепатозацитных лекарств представлен препаратами, получаемыми из таких растений как расторопиа пятнистая: С"Дегадон", "Карст", "Силибор"), бессмертник песчаный (окстракт бессмертника сухой, "Ъамин"), календула лекарственная С"Калефлон"), зверобой продырявленный (настой травы), скумпия кожевенная ("Злакумин"), солодка голая ("Глицирам"), ландыш дальневосточный ("Конзафлавин").

Из приведенного перечня видно, что официальная медицииа а настсччее время не располагает достаточным выбором эффективных гепатопротекторов растителыюго происхождения. В связи о этим актуальным является изучение перспективных растений отечественной флора и разработка на их основе эффективных гепатозацитных препаратов.

Одним из растений, перспективных для использования з медицинской практике является солянка холмовая Salsola colllra ?aLl., сем. chenopodlaceae ■ . На ее основе з Сибирском государственном медицинском университете разработан препарат салсо-коллин, аффективный при токсическом поражении печени. По ряду показателей он превосходит такой широко применяемый в медицинской практике гепатопротег.тор, как силибшпга.

Положительным моментом использования соляккн холмозой, как сырья для производства гепатозшцитйнх прераратоз, является то, что она уне заедена в культуру. Такие исследования проведена в Центральном сибирском ботаническом саду СО РАН (г. Новосибирск).

Исследования химического состава солянки холмозой проводятся в Иркутском институте органической химии СО РАН. Данная

диссертационная работа охватывает лишь часть этих исследований и является их продолгением.

Цель работы: установление качественного химического состава основных биологически активных веществ травы солянки холмовой, как сырья для получения препаратов с гепатозащитной активность г.

Задачи исследования.

1. Анализ химического состава фракциП фенольных соединений из водно-этанолькых экстрактов травы солянки холмовой.

2. Выделение и идентификация основных компонентов фракций фенольных соединений.• .

3. Установление структуры веществ, впервые выделенных в индивидуально« виде.

Выделение и идентификация основных биологически активных веществ семян солянки холмовой.

5. Сравнительная оценка качественного распределения выделенных биологически активных вецеств по органам надземной части солянки холмовой периода плодоношения.

6. Разработка химических негодов оценки качества сырья.

Научная новизна. Определен состав основных биологически активных веществ надземной части растения периода плодоносе пня.

Из растения выделено 3 ранее неизвестных фгшдьных соединения и установлено их строение как:

трео-5.7-дигидрокси-2- [4- [2-гидрокси-1-(гидрокгииегил)-2-( '»-гкдроЕси, 3-кетоксифенил)' этокси}-Э,5-дииетоксифетиЗ-!»Н-I -бензопираы-^-он;

эригро-5,7-Д"гидрькси-2-[^-[2-гидрогси-1-^гидроксикетил)-2-С*~гидрокси, ^-нетоксифенил) зтокси]-3,5-дшетоксифечил,]-^Н- . Х-бензопиран-4-он;

-Ъ -апиофуранозил)-окси-Э,5-диметоксифенил]-5,7-дигидрокси-4Н-1-бенэопиран-4-ок.

Установлено, что растение содержит комплекс соединений, отзечаодих за гепатозациткув активность, из которых подходит для целей стандартизации глицинбетаин. Он содержится X сырье 8 довольно большой количестве (более 0,5 %) и срввнитзльнс легко определяется.

Практическая значимость работ«. На основе количественного и качественного определения глицинбетаина разработаны метода установления качества сирья, экстракта солянки холкозой густого'' и препарата салсоколлин, которые включени в проекты временных фармакопея них статей.

На защиту выносятся; 1. Доказательство структуры трех ранее неизвестных для растений соединений - д:syx изомерных флавокслигнаков, яолучивпнх названия салходин А и салколин Б, и флавоноидиого гликозида - трицин-апнозида. 2. Доказательство состава основных биологически активных веществ ЬракциЯ флаво-ноидов трави солянки холмовой. 3. доказательство состава основных биологически активных соединений семян солянки холновоЛ.

Апробация работн. Материалы диссертации долояеиы и обсуждены на заседании проблемной комиссии. Сибирского государственного медицинского университета "Изыскание и изучение фармакологических средств. Вопросы фармйции"(199'0.

Публикации. По теме диссертации опубликовано б работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, двух глав собстзеннах исследований, выводов, списка использованной литературно: приложений.

Работа ?:гд>гепа па стратщах машинописного текста,

вклвчает'14 таблиц, 20 рисунков. Список лнгаратури содерксит 145 источников, в том числе 54 зарубеяннх. В приложениях представлен проект 32С на траву солянки холмовой и спектрu ЯМР ряда зыбленных соединения. ,

Так как о с коз ним свойством препаратов из солянки холио-воГ; является гепатопротекция, то в обзоре литературы представлена сводка работ по структуре и биологическим свойствам растительных гепатопротекторов, обнаружению до 1994 .лода. В раздел также шатче« ботаническая характеристика объекта исследования, характеристика химического состава рода Saisola, область применения в народной медицину коротко излохгнч основные результат» ¡армакологических исследований,,

В глаз-г "Экспериментальная часть"® приводятся материал!! и методы исследования, в том числе приборы и реактиви. Дана опн-г-йкия выделенных веществ, их Ьизические константа, приводятся

данные хроиатогрсфических методов исследования. Масс (ЗУ и РАВ)-спеатронегрви, , и ЯМР-спектроскопии.

В главе "Обсуждение результатов исследования" приводятся анализ полученных результатов, доказательства структур выделенных соединений и состава отдельных фракций веществ.

В разделе "Анализ- состава биологически активных веществ солянки холмовой и выбор показателя качества сырья" дано обсуждение химического состава солянки холмовой с точки зрения содержания лецеств, отвечавших за гепатозащигнув активность растения и целесообразности выбора конкретного соединения для стандартизации сырья.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТУ

Объект и методы исследования

Объектом исследования служила дшеуиенная и измельченная до 5 им надземная часть культивированного, в Новосибирской области (Централь кий сибирский ботанический сад СО РАН, совхоз "Дружба", мехлесхоз "Карасук") растения солянке холмовая, собранная в период полного созревания плодов - период, когда растение обладает наибольшей фармакологической активностьв.

Для разделения смесей веществ и:выделения индивидуальных соединений использовали методы колоночной хроматографии (КХ), препаративной гонкослой ¡га Я хроматографии ( ПТСХ), высокоэффективной иидкостной хроматографии ГВЭ2Х), гель-фильтрации (Г£).

Контроль за ходом разделения, а также предварительнуо идентификации соединений осуществляли методами ВЭЖХ, тонкослойной СТСХ), бумажной хроматографией.

Установление структуры соединений проводили методами Т'и-, 114

Н и С йМР-спектроскопии, масс (ЗУ и ГАЗ)- и хрокаго-масс-снектрометрии.

Исследования фракций фенолькых соединений

надземной части солянки холмовой периода плодоношения

¿ракции фенольных соединений извлекали из 80 % этаноль-ного экстракта, полученного методом реперколяции. Извлечение фенолькых соединений проводили и.бутаколом после предваритель-

ной обработки экстракта гексаном и хлороформом.

Злптюнелигнани салколин А и садкодин 3 видели л и в виде смеси друг с другом многократно;"! колоночной хроматографией на силикагеле и полиамиде. Их разделение проводили методом препаративной о6pftn¡e:iиоГ-азнон B3',sx с использованием в качестве неподвикноП фаза "Нуклеосил-5, C-I8" и в качестве пэдикной фаза смесн ацетонигрнл-вода (50:50).

Салколин А С трео—ч'-О-С^-гсаяцилглицерл^-трицин). C¿7fi26CII' *олтиГ: пороиок, MS-ЭУ, т/г, р. 508 ['"М-Н20)+, 0,1б] ; 490 [(M-2xII20)t 0,12]; 330 [(;<:-CIOHI20;i)+, loo]; 301 0,36); 302

(.2,21); 287 С5,33); 259 <-5,0); 244 (3,0); 243 CI.0); 229 (1,5); 216 (3,5); 2X3 (4,2); 196 ^Д); 167 (1,9); 181 (2,5); 180 (15,2); 179 (2,9); 178(11,0); 153(5,2); 161 (1,4); 153(12,8); 152 О,б); 151 (16,3); 138 (2,9); 137 С22.8); 135 (5,9); 124 (16,6); 123 (6,4); 120 (4,1); 119 (6,7); 118 (1,7); II.7 (1,9); 109 (4,3); IC8 (3,7); 105 (3,4); 103 (4,8); 91 (Ю,2); 89 (4,5); 79 (5,2); 77 (8,7); 69 (10,3); 65 (6,5); 63(7,3); 55 (9,9); 43 (7,3). У-S. Ама;(, им: 270, З'Ю; A2£0/A350=0'S36- ®Р 1¡í (ДМСО-^), о, м.д.: 6,20 - 7,35 (811, ароматические протоны), 4,78 (IH, д, J= 5 ГЦ, Н-с<), 4,32 (IH, м, Н-./3), 3,74 (ЗЯ, с, T'-OCH-j)/ 3,86 (611, с, 3',5'-0СН3), 12,84 (IH, с, 5-ОН). Данные ЯМР ХН в CZ)jCiV ;; спектров з таблицах I и 2 соответственно.

Салколин 3 (эрнгро-гваяцплглицерил^-трпцин), С27Н26°И' келтиЛ поросок. MS-ЭУ, т/г, %\ 508 [(М-Н20)+, 17,5]; 4S0 [С-!-гхН20)+. 14,б]; 331 (17,2); 330 (100); 329 ( 38,2); 302

(1,9); 301 (4,8); 287 ( 5,8); 259 (7,8); 244 (3,9); 241 (3,9); 229 Г3,6); 216 (4,2); 215 (3,6); 213 (6,2); 196 (1,0); 187 (3,9); 131 (2,3); 180(8,8); 179 (5,2); 178(14,2); 163(9,7); 161 (2,3); 153(17,5); 152 (2,9); 151 (13,3); 138 (3.2); 137 (20,5); 135 (10,7); 124(10,7); 123(7,1); 122(4,2); 120(6,2); 119 (4,2); 118 (4,9); 117 Г4,9); 109 (4,2); 108 (4,5); 107

(5.8); 106 (4,9); 105 (4,9); 103 (4,5); 91£7,8), 89 (7,1); 79

(7.9); 78 (6,5); 77 (12,7); 69 (28,8); 65 (7,8); 63 (10,0); 55 (18,5); 53(10,0); 43 (23,7). У5, Л , нн: 270, 340;

А26с/АЭ5Э=0>847' 1н СИСО-4). 6, м.д.: 6,20 - 7.35 (8Н, ароматические прогони), 4,03 (IH, д, J =4,5 Гц, Н-<*), , 4,20 (IH, м, Vt-J>), 3,84 (6Н. с, з'.З'-ОСН^, 3,72 (ЗН. с,

3"-0СН3), 12,8 (Iii, с, 5-0Н). Данные Д4Р *Н в Ci^Ctf и 13С спектров "з таблицах I и 2 соответственно.

Таблица I

Спектра ffi.JP салкояина А и салколина В ( CD3C//, ТМС-О, 6, м.д., J, Гц)

Протоки Салколин А + салколин В (200 МГц"> Салколин А (500 МГц) Салколин В (500 МГц)

Н-2',б' К-2" Н-б" 7.30 <2Н, с) 7.Ö4 (IH,y~cü с) 6,79 - 6,90 (ЗН, и) 7,32 С2Й, с) 7,05 (1!!,д;1,7) 6,es (IH, дд, 1,7 и 6) 7,32 (211. с) 7,04 (Iii,д; 1.7) 6,91 (III. дд, 1,7 и 8)

Н-5" 6,84 (1И,д, 8) 6,82 (1,'i, д, 8)

Н-3 б.БО ан, с) 6,81 (IK, с)

Н-8 К-б 6,62 (1К,Д,2) 6,30 (1Н,д,2) 6,63 Ш.д; 2.2) "6,31 (1Н.д; 2,2) "~ б,бз ан,-д; 2.2) 6,31 '(1Н',д;2,2)

3',5'-ССН. 3,98 (ЗН, с) 4,00 (ЗН. с) 4,00 СбН, с) 4.07 (6Н, с)

з"-осн3 3,88(1,511, с) 3.90 (1,5Н, с) 3.90 (ЗЯ, с) { 4,02 (ЗН, с)

5-ОН__ й-ос. 12,86 (IH, с) 5,0 (1Н,уш.д) 12,8 (IH, с) 5,0 (1Н,д; 4,9) 12,8 (IH, с) 5.0 (1Н,д,7)

____ 4,37 С0,5Н, м) 4,20 (0,511, м) 3,34 - 3.80 <2Н, м5 4,36 (III, к) 3,55 (11!. дд, 3,3 и 12,3) 3,85 (IH, дд, 5,3 и 12,3) 4.23 (IH, и) ■ 3,70 «Н.лд, 3,5 и 12,4) 3,38 ПН. дд, 3.0 л 12.4)

Таблица 2

Щ Я34Р спектр смеси флавонэлигнаноз салколин А + салколин В (Л.!СО- 6, м.-д;, ТНС-0)

Атом б, м.д. Атом 1----- 5, м.д. Атом 5, и.д.

С-2 16*1,35 С-3* 153,04 С-1" 133, II £ £ А) 133,32

С-3 103,?6 139,64х (A) (B)

С-4 "181,97 139,99х С-2" III ,11

С-5 161, ад С-5' 153,04 104,39 С-3" ¡147,06

С-6 С-7 99,03 ^ 163,17

С-4" ¡145,46 "С-5" '114,79

С-8 9ч. иг С-с»: 71.73 С А) С-б" 119,45

С-9 157,43 72,21 (ъ)

0СН3х2 56,50

С-Ю 104,93 С-^з 87,06 (А) 86,57 (В)

С-1* 125,« ОСЙ^ 55,64

С-2'- 104,39 ч 60,57 (А) 60,24 (В)

Отнесете неоднозначно; А - солколн:-! А, В - салг.олик В.

^ ОСй-1

Салкол:::! А (трео-)

Салколин В (эрктро-)

Салколин А и салколин В различается только стереохимией алифатической части. Сигиали соотэегствуодих др/г другу прогонов алифатической части гваяцилглицерина в оМР спектрах имеет различные константы спни-спкнового взаимодействия (КССЗ), что в данном случае свидетельствует о различной величине двугранных углов иеаду связями Са -Н и С/, -К салколина А и салколина В. Это вызвано различным порядке!! расположения заместителей асскмегричесхнх центров О-сХ и С^З, как следствие имеется различные конформации, из которых наиболее устойчивая для трео-нзохера - почти заслоненная, а для эригро-кзонера - ско-

х

•и - СНрОН "а 2

Трео-изомер

Лг

Эригро-кзомер

шенная. В этих кон^ормаципх объемные заместители максимально удалены друг от друга к имеет место дополнительная стабилизация за счет водородных связей. Наблсдаемке КССЗ соответствуют существующим при этом двугранным углам.

Соединения являются неизвестными ранее .

Трнцут-1>'-0-/й-'Х>-аг.у.офуракозчд (2- ['¡-(у^-.г'-ап1:о1урано-зид)-окси-3,5-диметоксирек11л'|-5,7-Д«гидрокси-'Ш-1-бс1»зопиран-

и) выделили многократкой колоночной хроматографией на енли-кагеле и полиамиде с окончательной очисткой методом ГГГСХ на * пластинках "Силуфол" в системе растворителей хлорогорн-метанол (87:13) и последующим пропусканием через колонку с молсслекгом Г-15 в системе вода-метанол (1:1').

Соединение состава КСЛ1,и^ пороиок с т.пл. ,166 -

" 168° ССН3010- ГАВ-НЬ, :ч/г: 153 (М+пУ, Зл ГМ+И - пентоза). п, СН3ОН -гчгсце 4,05), 310 пл., 328 <&)£ 4,00);

+ //аОСН3 - 277, 300 пл., 367;- + А1С13 - 261, 300. 346, 384;

+ Я&з+НС!

280 , 300 , 343, 3-32; +СН3С00;/а - 2оО, 300, 339; +СНаС00^а*Н3В03 - 272, 315 пл., 330 нм. Латке 1И и 13С ЙМР спектров в таблицах 3 и 4. Соединение выделено впервые. О

•Тркцин-'« -¿?-АЭ-аппо-пуранозид

Рутии (кверцетин-З-О-^-й-глюкопиранозил- (6—>-1)- о:- L-рамкопиранозид) выделили колоночной хроматографией на еилика-геле, используя в качестве эляента смесь растворителей хлоро-форм-метакол-вода (63:23:7) с постепенным нарастанием градиента метанола и воды до соотнопеиия 60:35:8. Очистку от сопутствующих углеводов проводили методом КХ на полиамида, элаируя последовательно растворителями: вода, метанол-года (1:1), метанол. Хороший результат получили такке при использовании метода ПТСХ на силикагеле, где пронзителен служила вода. Последующую) за отим очистку от сопутствующих флавоноидных гликозидов проводили методом КХ на молселекте, используя з качестве элюента систему нетанол-зода (1:1), при контроле за ходом разделения обрадеинофазкой ВЯНУ с подвижной фазо.". мета-кол-вода (34:66).

Выделенное соединение состава CgyH^QO^g, зелгий пороаок, т.пл. 186-188° (СН3ОН). FAB-MS, mjz'. 611 ГМ+Н)+. 465 СМ+Н -ргмноза) + , 303 (М+Н - рамноза - глякоза)*, У$, Лнах (СН30Н): 260, ЪЭ нм.

Углеводы. Из углеводов, сопутстзупщих рутину, идентифицировали ^-глюкозу, ^3-фруктозу, сахарозу, а такно многоатомные спирты: »-машшт, миоипозит а зфнры углеводов: 1-этил-ß-Ъ-глвкозу и 2-зтил-./3-Е>-фруктозу

^-Глюкозу, ^-фруктозу, сахарозу, "Э-маннит и миоинозит идентифицировали методом ВЭЯХ, используя в качестве неподвижной фазы сульфополистирольный_ кат ко пит С9ДП4 в Ca"14" форме и в качестве подвижной фазы дегазированнуз зоду. Анализируемые фракции сравнивали с известными образцами веществ.

/>-Маинит такие выделили в чистом виде. Соединение состава СбН^Об, т.пл. 164-166°, Fi3-MS, m/z: 183 (М+Н)+. ЯМР 13С (Ö20), S, ".Д.: 64,50(0-1, 0-6) ,< 70,72 СС-2, С-5), 72,13 (С-3, С-4).

1-Зтил-^-75-глюкопиранозид !! 2-этнл-уЗ-О-фруктофуранозид

выделили э виде смеси друг с другом в соотнесении 4:1 соответственно. Смесь представляет собой прозрачнуо стеклообразнуэ

Таблица 3

Спектр ЯМР тр',:ц;1н-ч'-0-_/ - о-апиофуранозида

СДМС0-с(б, 5, и.д., ТМС-0)

Протоки & , м.д. Протоны §, М.Д.

Н-3 Н-б Н-8 Н-2*,б' 7,06 (1Н. с) 6,22 (1К, д. 2 Гц) 6,58 (1Н, д, 2 ГЦ) 7,32 (2Н, с) 0СН3-3',5' 5-ОН Н-1" протоки углевода 3,50 (6Н, с) 12,86 ПН, с) 5.5В С5Й)

Таблица 4

Спектр ЯМР "С трицин-4'-О-уЗ-Г>-апиоранозида

С^мсо-¿6. 5, к.д., тас-о)

Атом $, М.д. Атом 5, м.д. Атом 5, м.д.

С-2 162,83 С-9 157,69 С-б' 104,05

С-3 юз, ад С-Ю 105,09 С-1" 109,25

С-4 161,65 С-1' 126,68 С-2" 76,73

С-5 161,53 С-2 104,05 С-3" 79,59

С-б 99.35 С-3* 153,73 С-4" 75,43

С-7 162,63 С-4* 136,24 С-5" 64,12

с-е 94, еа С-5' 153,73 0СН3х2 56,44

Таблица 5

Спектры ЯМР 1-этилглекози (I) и '2-этилрруктози (П)

\Агом

Сое^\ С-1 С-2 С-3 С-4

динение\

I 102,3 73.56 76,26* 70,10

П 60,57 104,22 76,94 75,49

Атом

Сое-\ С-5 С-б -сн2- -сн3

диаенне\

I 76,34* 61,22 66,57 14,72

1 П 81.54 63,23 57,66 15,15

к Отнесение сигналов неоднозначно

кассу. ГАВ-MS, n/z: «7 (2М-Н)"\ 325 |(М-С2Нб0)х2+н]+, 209 СМ+Н)+, 163 fM-C2h*60)+. Данные ЯМР 13С спектра представлена в таблице 5.

QCHjCHJ ^

Н0Н2С' Q çR2QH

) JJ—y

CH3CH20

OH OH

Х-Этил-^-Э-глскопиранозид 2-Зтил-^-Э-фруктофуранозид

Из п.бутаиольной фракции 80 %-го зтанольиого экстракта травы солянки ходмовоЯ были такке выделены ванилиновый cmtpr и ванилиновая кислота. Предварительная идентификация данных соединений проведена методами ТСХ ка силчкагеле и обрааенко- . фазной ВЭЖХ при сравнении хромагографической подвижности анализируемых вецеств с известными образцами ванилинового спирта к ванилиновой кислоты.

Ванилиновый спирт (4-гидрокснме?ил-2-метоксифзнол) ~ соединение ссстага Cgh'jQO-j, белый кристаллический порошок с т.пл.

115° (хлорофирм-гсксаи, 2:1). Н5-ЗГ, пг/г: 154 ГН) + , 137, 125, 122, III, 93, 77, 65. ßMP ХН (ДМСО- О, н.д.: 6,87 (IH,

уа. с, ¡1-3), 6,70 С2К, с, Н-5, Н-5). 4,25(2.4, с, ~СН2~),

3,74 СЗН, с, -ОСН3).

Ваь газовая кислота (4-гидрзкси-3-нетоссифек-.:л г.арбоновая кислота) - соединение состава CgH^O^, белиЯ кристаллический

поросов с г.пл. 198-200° (CHjOK). HS-ЭГ, m/zi 163 (M)*, 153,

151, 125 , 97. УЗ, Лнвх, (СН30Н-П20, 1:1): 212, ^4, 283 к;.

Исследование химического состава семян солякки ходовой

Наиболее зирахеикая гепагозацнткая активность у солянки холковой наблодается в фазе полного созревания семяп. Семена мелкие, легко осыпавгся, что иохет привести к их потере при уборке к переработке сырья. По силе ко фариакогогического действия семена не уступает траэе. îaraa положение дкктуег

необходимость дать оценку химического состава семян с точки зрения вклада их биологически активных вецеств в гепатоза-д ит ну в активность растения.

Экстракции семян проводили 96 % этанолом и смесьи этакол-вода с уменьшением градиента этанола. Полученный на 96 % этаноле экстракт, в котором содержались основные биологически активные вецесгва, фракционировали органическими растворителями по схеме, представленной на рисунке I.

Рисунок I. Схема фракционирования 96 % отанолького экстракта семян солянки ходновой

Из фракция , растворимой в н.бутаноле, методом колоночной хроматографии на полиамиде, злпируя последовательно водой, смесью метанол-вода (1:1), метанолом, получили фракции флаво-ноидов. Выделение их основных компонентов проводили методом многократной КХ на полиакиде и нолеелекте Г-15 с использованием в качестве элаентов смесей хлороформ-неганол й вода-метанол с нарастанием градиента ¡.¡этанола от О до 100 %. Выделенные соединения идентифицировали методами УЗ-споктроскопии, масс-спектрометрии, ВЭНХ, по температуре плавления. Помимо блаво-ноидое ие н.буганольной выгязки выделяли глицкнбетаин.

Из суммарных фракций агцестз, растворимых в гексаае и хлороформе, методом колоночной хроматографии на силнкагеле, олсируя смесьо геасан-адсток с увеличением градиента ацетона от 0 до 100 %с выделили ё.ракшн: углеводородов, кирных кислот,

стериков и гликозкдов стеринов, которые анализировали методом ' хронато-масс-спектроиетрии.

Фракция углеводородов представлена н.парафинами с числом углеродных атоноз от 23 до 31 (преимуцественно с нечетким числом). Преобладавшим среди них является нонакозан (С^)-

фракция мирных кислот составляв? преимуцественно ненасыщенное неразветвлешше кислоты с четным число» углеродных атомов от до 24 с преобладанием пальмитиновой кислоты. Здесь же обнаружены олеиновая, линолевая и линодгновая кислоты. Анализ проводили после предварительного метилирования фракции.

В фракции стеринов идентифицировали ,^-сигостерин, кампе-стерик, стигмасторин, 2'1-этилхолестаи-З-ол.

В фракции гликозпдов стеринов обиаруанли глюкозиды вще-перечислен-.шх стеринов.

Содержащиеся в семенах глицинбетаин, стерини и их глвко-зидц, а танке ряд флазоноидоз (таблица 6) били взделены из трави солянки холмоюй (Сырчина А.И. и др., 1989).

Исследования отдельных фракций соединений, выделенных из трави солянки холмовой, показали гепатозе-цитнуз активность глиаинбетаина, фракция гликозидоз стеринов и алкалоидов (Сзратикоз A.C. и др., 1990).

йроведешпаш исследованиями установлено наличие в растении и других соединений, для которых,согласно литературным данным, установлена гепятозодитная активность - это кзерцетин, изо-рампетпч, изорамистин-3-O-jó -/Э-глюколиранозид, рутин, лгачю-цериноззая кислота, холи». Зти соединения находятся в растении з минорных количествах, тем но менее нельзя отрицать, что они такяе вносят свой вклад в активность солянки холновой, так как у комплексного препарата активность вило, чем у отдельных исследованных фракций (Чучалшг B.C., 1983).

Исходя из полученных данных о' содержанки з семенах тех se соединений, обладавших гепатозачитиым действием, что и непосредственно з сырье, а такле пз того, что активность эганольиого экстракта семян не гаке, чей у экстракта, полученного из травы, моз:;о сделать вывод - отсутствие семян в сырье зедет к ухудпенип его качества.

Таблица 6 Флазоноидный состав солянки холмовой

Листья и стебли Семена

Флавоны и их п Трицин Трицин-7-О-^-Э -глокопиранозид Трицин-4'-0-/-£-апиофуранозид Триции-4*-0-^- ' гваяцилглицерил (эритро- и трео-изонери) »лавонолы и кх Изораинетнн Изорамнегин-3-0-,5 - Г>-глскопиранозид Кверцегин-5-0-^-0-гликопиранозид Кверцетин- 3-0-„4>- Э -рутивозид (рутин) Изора14!1етик-3-0-^6-2>-рутинозид роизводнке Не обнаружены производные Кверцетин Изорамисгиц Кемпфорол Кзерцетвй-З-О-^-Э-глвкопиранозкд Кверцетин-3-0-^5-Э-руткнозид (рутин) Изорамнепш-З-О-^-Э -рутинозид

Анализируя флавоновдниП состав растения, нельзя не отметить того факта, что в семенах нами не обиарузени -^лавоки, в частности тркцин и его производные (таблица 6).

Химическая стандартизация трави солянки холисвой

За показатель химической стандартизации трави солянки холмозой из всех выделенных соединений и групп ведеств выбрали количественное содержание глицпибетаина. Глицинбетаин обладает вырагенной гепатозадиткоЯ активностью к содержится в сырье в довольно большом количестве (от 0,5 до 2 й. Кроме того количество данного соединения сравнительно легко определяется в растительных объектах.

Нами предложено два метода количественного определения глкцинбетаина в траве солянки холмоеой - метод фотометрии рейнекатов и' метод ЗЗЛХ.

Метод -фотометрии рзйнекатоз основан на определении оптической плотности комплексных солсП бгтапкэв с сольв Рекнеке.

Метод ВЭЛ основан на количественном определен::!! п-бромфена-циломго эфира глкиинбегаика.

Из-за слабого УЗ-поглоценкт бетакноз применение ЗЗНХ с фотометрической детекцией для их прямого анализа в получаемом для стой цел:: 70 5-см зга;:зль;:см экстракте травы с6л:::ц:;: хол-ногсЯ практически повоз: ¡окно. В езяза с о?!« ззодигся стадия предколэночнэЯ дергаттаедяи. 3?о позволяет избегать яредтарк-гедькуз очистг.у ог.страпгс о? ссзутсгзута» глгщинбегаяцу г:!дест2, что сэкрэдаст зргмя гк&лвза. ПзлучсппыЯ дериват (п-бромЬснацилозый эфир глганнбзтаипа.) легко анализируется ион-пархроматографией.

Метод ЗЭ2Х обладает бо'лызей селгкт.чвкосгьо по срагнгнио с методом фотометрии ргйнекатоз, тек как позволяет определить голпчество непосредственно глицинбетаинз, а не гукиу четвертичных азогисгих оснований. Тс:! не менее результаты этих двух методов г.асьма близки (таблица 7). Зто свидетельствует о преобладавшем относительном содержании глгашнбегаика в суммарной Фракции четвертичных азотистых оснований анализируемого сырья.

разработанные методы количественного определения глицин-бзтйина предложены з качестве фармакопейных п во зли з проект В К ка тразу солянки холмовой.

Таблица 7

Содержание бетаинов в граве солянки холмовой (в пересчете на абсолотно сухое сырье)

Место сбора сырья, вид сырья, вид уборки, год сбора Глицин-бетаин (ВЭЕХ) Сумма четвертичных азотистых основания (фотометрия реп некатов)

Читинская обл., дикорастущее, ручная уборка, 1987 1,0 1,2

Иркутская обл., дикорастущее, ручная уборка, 1968 1Д 1.1

Якутия, дикорастуыее, ручная уборка, 1988 0,9 1.0

Центральный сибирский ботани- . ческий сад, культивированное, ручная уборка, 1989 1,8 1.9

Центральный сибирский ботанический сад, культивированное механизированная уборка, 1909 1.0 1.2

Совхоз "Дружба" С Новосибирская обл.), культивированное, меха-визированная уборка, 1985 0,5 0.7

Мех лесхоз "Карасук" (Новосибирская обл.), культивированное, механизированная уборка, 1988 0,7 0,7

Мехлосхоз "Карасук" ("Новосибирская обл.). культивированное, механизированная уборка, 1989 0,7 0,8

Примечание: воспроизводимость результатов - ¿7,0 %, включая отбор средней пробы и экстракции.

ВЫВ01Ы

1. Изучен химическиЯ со стаз надзечноЯ части солянки холновой периода плодонопения.

2. Идентифицировано 39 вещестз, относящихся к классам фенолышх соединений,■четвертичных азотистых оснований, стеринов, многоатомных спиртов, углеводов, офиров углеводов, алифатических углеводородов, яирных кислот.

3. Методами колоночной, гыеокоэффективной жидкостной хроматографии впервые выделены три новых производных трицина, для которых на основании данных ыасс-слекгромегрии, и ÜMP-спектросяопии предложены структуры:'

трео-4 -ОЧ-тЗ-гваяцилглицерил)-трицин ( салколин А); эрктро-4'~0Ч_/9-гваяцилглицерил)-трищш С салколин В); трицин-4'-O-ß-Xi -апиофуранозид.

4. Разработаны методы спектрофотометрический- и высокоэффектив-ноЯ жидкостной хроматографии количественного определения глицинбетаина, одного из компонентов, определяющих бкзяоги-ческув активность солянки холновоЯ.

5. На основании полученных результатов разработана проекта временных фармакопейных статей на траву солянки холмоеой, экстракт солянки холмовой густой, таблетки садсоколлия, представлении; в 5армакопейныЯ копите?.

По теме диссертации ¿публикованы следу к; не работы

1. Трофимов В.Н., ЗаЯков K.JI. Четвертичные аммониевые соединения Salsola collina ( со.-янка холмовая) // Всесоюзная конференция молодых ученых "Современные проблемы органического синтеза: Тез. докл. - Иркутск, 1963. - С. 244.

2. Углеводы, офирн углеводов и спирты Salsola collina

/ Сырчина. А.Й., Черных Е.А., РафеПчикова И.В., ЗаПяов К.Л., Верещагин А.Л., Семенов A.A. // Химия природных соединений» - 1991. - й 3. - С. 420-421.

3. Флавонолигианы Salsola collina / А.И.Сырчина, А.Г.Горшсов, В.В.Цербаков, С.В.Зинчешсо, А.I.Верещагин, К.Л.Зайков, А.А.Семенов // Химия природных соединений. -1992. - 6 2. - С. 182 - 186.

4. Трицин-апиозид Salsola collina / А.И.Сырчина, А.В.Черно-усова, КЛ.Зайков, А.А.Семенов // Химия природных соединений. - 1992. - » 3-4. - С. 439 - 440.

5. Исследование химического состава семян Saleóla collina / К.Л.Зайков, А.И.Сырчина, А.Л.Верещагин, А.В.Черно/сова,

A.А.Семенов // Хиыня природных соединений. - 1992. - & б. -С. 723 - 721.

6. Количественное определение глицикбетаина в надземной части Salsola collina Pall. / Н.Н.Погодаева,

B.Н.Тро$йков, А.Г.Горшков, Г.И.Барем, К.Л.Зайков, А.И.Сирчкна, А.А.Сеиеков // Хы.»ге.о-фарнацевтичсс№й rjриал. - -1992. - К 9-10. - С. 94 - 96.