Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка комплексного гепатотропного средства растительного происхождения

СЮ34886Ь5

ТЕПЛЯКОВА ЕЛЕНА МУСАЖАНОВНА

РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСНОГО ГЕПАТОТРОПНОГО СРЕДСТВА РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Специальность 15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 2009

- з ДЕК 2009

003488655

Работа выполнена на кафедре фармацевтической технологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук Чучалин Владимир Сергеевич Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Алексеев Константин Викторович, заведующий лабораторией готовых лекарственных форм НИИ фармакологии им. В.В. Закусова

кандидат фармацевтических наук, доцент Семкина Ольга Александровна, доцент кафедры общей фармацевтической и биомедицинской технологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов»

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Омская медицинская академия»

Защита состоится 25 декабря 2009 г. в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д 212.203.19 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» (117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8, кор.1)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» (117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.б)

Автореферат разослан «19» ноября 2009 г.

Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций

доктор фармацевтических наук, профессор ^ И.В.Косова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Патологии гепатобилиарной системы сопровождаются нарушениями секреторной и метаболической функций печени. Терапия подобных болезней должна носить комплексный характер. Наиболее полно соответствуют такому критерию препараты растительного происхождения, сочетающие гепатопротекторную и желчегонную активность. За последние 15 лет в РФ в качестве средств патогенетической терапии гепатобилиарной системы зарегистрировано лишь 10 препаратов, 8 из которых являются импортными. Отечественные фитопрепараты характеризуются устойчиво высоким спросом у потребителей, что подтверждается как литературными данными, так и результатами собственных исследований.

Поэтому актуальным является разработка отечественных гепатотропных средств на основе доступного растительного сырья. Перспективным объектом в этом плане является солянка холмовая, надземная часть которой служит источником оригинального гепатопротектора «Лохеин». По способности препятствовать структурно-метаболическим нарушениям печени он не уступает импортным силимарин-содержащим препаратам. Вместе с тем, лохеин не оказывает выраженного действия на желчевыделительную функцию печени.

Цель исследования. Разработка комплексного гепатотропного средства на основе суммарного экстрактивного комплекса из травы солянки, травы чистотела и цветков пижмы.

Задачи исследования:

1. Обосновать и предложить оптимальный состав комплекса на основе комбинации экстрактов травы солянки, травы чистотела и цветков пижмы.

2. Предложить и валидировать методы определения основных действующих веществ экстрактивного комплекса (ЭК) из травы солянки, травы чистотела и цветков пижмы и лекарственных форм на его основе.

3. Разработать технологию получения и параметры качества ЭК и гранулированной формы на его основе.

4. Изучить гепатопротективные и желчегонные свойства ЭК на модели экспериментальной гепатопатии, индуцированной тетрахлорметаном.

5. Изучить влияние ЭК на физико-химические свойства желчи, на модели экспериментальной гиперхолестеролхолии вызванной литогенной диетой.

6. Разработать состав и технологию получения гранулированной формы на основе ЭК.

7. Разработать проекты НД на гепатотропное средство на основе ЭК.

Научная новизна работы. Впервые предложен, теоретически и экспериментально обоснован рациональный состав сырья для получения ЭК, включающий траву солянки, траву чистотела и цветки пижмы. Разработана оптимальная технология оригинального гепатотропного средства в виде густого экстракта и гранул на его основе. Предложены и валидированы методики стандартизации, разработаны нормы качества разработанного средства, проведена его биофармацевтическая оценка. Доказана низкая токсичность ЭК, способность препятствовать нарушениям функций печени при экспериментальном ССЦ-генатите, повышать коллоидную стабильность желчи при экспериментальной гиперхолестеролхолии.

Практическая значимость работы. На основании комплексных исследований разработано оригинальное гепатотропное средство растительного происхождения. Разработаны и апробированы технология, методики стандартизации, нормы качества ЭК и его гранулированной формы. Показана целесообразность внедрения предложенного средства в качестве корректора дисфункций гепатобилиарной системы. Подготовлены лабораторный регламент и проекты ФС на разработанное средство. Созданы предпосылки повышения эффективности фармакотерапии острых и хронических заболеваний печени с нарушениями ее секреторной функции.

Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической технологии ГОУ ВПО Сибирского гос. мед. университета (Акт о внедрении № 3 от 15.05.08 г.), кафедры фармацевтической технологии ГОУ ВПО Новосибирского гос. мед. университета (Акт о внедрении № 1 от 11.03.09 г.), кафедры фармацевтической технологии ГОУ ВПО Кемеровской гос. мед. академии (Акт о внедрении № 5 от 26.06.09 г.) в раздел программы «Экстракционные фитопрепараты». Методики количественного определения флавоноидов, алкалоидов и бетаина внедрены

в работу «центра сертификации по контролю качества лекарственных средств Томской области» (Акт о внедрении № 12 от 20.09.09г.). Технология экстрагирования ЛРС внедрена в работу экстракционного цеха ООО «Биолит» ( Акт о внедрении № 10 от 6.05.08г).

Основные положения, выносимые на защиту:

- состав, технология ЭК и его гранулированной формы;

- методики стандартизации и нормы качества ЭК и его гранулированной формы;

- результаты экспериментальных исследований гепатопротективной активности ЭК при остром гепатите, вызванном тетрахлорметаном;

- результаты оценки холеретической активности ЭК при острой интоксикации тетрахлорметаном и нормализующего влияния на коллоидную стабильность желчи при экспериментальной гиперхолестеролхолии.

Личный вклад автора в проведенное исследование заключается в анализе литературных и патентных источников, самостоятельном выполнении всех экспериментальных работ и расчетов, интерпретации, обобщении и обсуждении полученных результатов.

Связь задач исследования с проблемным планом науки. Работа выполнена в соответствии с научно-исследовательским планом кафедры фармацевтической технологии ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава и в рамках комплексной целевой программы СО РАМН «Здоровье человека в Сибири» (№ государственной регистрации 01.9.1002479).

Апробации и публикации. Основные результаты исследования доложены на: межкафедральной конференции специальных кафедр Российского университета дружбы народов (Москва, 2009 г.); Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005); VI конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2005); 64-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» (Екатеринбург, 2009). По теме диссертации опубликовано 9 работ, включая 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК. Приоритет разработанного средства подтвержден 2 патентами на изобретение.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, глав отражающих результаты собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы и приложений. Работа изложена на 160 страницах, иллюстрирована 43 таблицами и 19 рисунками. Библиографические ссылки включают 186 источника, из них 48 в иностранных изданиях.

Материалы и методы исследования.

Объектами исследования являлось стандартизированное измельченное сырье: цветков пижмы (ГФ XI, вып. 2, c.l 1), травы чистотела (ГФ XI, вып. 2, с. 47), травы солянки холмовой (ТУ № 000945.Р.643.06.99).

Методы исследования. Качественный анализ действующих веществ выполнялся с использованием химических, хроматографических, спектральных методов согласно действующим нормативным документам. Технологические исследования проводили по методическим рекомендациям Пятигорской фармацевтической академии (Муравьев И.А., Пшуков Ю.Г., 1985). Технологические параметры экстрагирования подбирали с использованием метода математического моделирования - четырехфакторного дробного плана на основе греко-латинского квадрата (В.Н. Дружинин, 1997). Прописи гранул разрабатывались с использованием критерия желательности Харрингтона по методическим рекомендациям МГУИЭ (В .Д. Секерина с соавт., 2009).

Гепатопротективную, желчегонную активность ЭК, а так же его влияние на биохимический состав желчи оценивали на моделях острого гепатита, вызванного терахлорметаном и искусственной гиперхолестеролхолии, вызванной литогенной диетой. В качестве препарата сравнения использовали Гепатофальк планта (EAN:4032717004008; № П N013200/01-2001, Германия).

Статистическая обработка результатов. Результаты исследований обрабатывали с использованием i-критерия Стьюдента, /^-критерия Фишера и критерия Крускала-Уоллиса. Определяли среднюю арифметическую (М) и ее стандартную ошибку (ш). Вероятность ошибочного вывода не превышала 5% (р<0,05). Расчеты проводили с использованием пакета статистических программ «Statistica for Windows 6.0».

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Предварительная оценка потребности населения в гепатотропных препаратах показала, что более 70% реализуемых средств представлено комплексными фармпродуктами. Выбор потребителей в пользу препаратов отечественного производства доминирует над спросом на импортные лекарства этой группы, а коэффициент спроса растительных гепатотропных средств, превышает аналогичный показатель синтетических препаратов.

Более трети аптечного ассортимента гепатотропов составляют биологически активные добавки (БАД). Популярность парафармацевтиков свидетельствует о недостаточной удовлетворенности спроса лекарственными препаратами соответствующей группы. Немаловажно и то, что большинство БАД не располагают серьезной доказательной базой их эффективности и безопасности, характеризуются слабыми фармакоэкономическими показателями. Это побудило нас к созданию эффективного средства на основе растительного сырья, способного обеспечить комплексное действие на гепатобилиарную систему.

Гепатопротективный эффект солянки холмовой планировалось дополнить холеретическим и холекинетическим свойствами пижмы и чистотела. Для выявления наиболее рационального сочетания компонентов растительного комплекса, обеспечивающих максимальную терапевтическую активность, были составлены композиции, включающие различные соотношения экстрактов солянки, пижмы и чистотела. Критерием оценки предложенных составов (одно, двух-и трех компонентных смесей) служили результаты испытаний их гепатопротек-тивной активности в экспериментах на мышах с острым гепатитом, вызванным тетрахлорметаном.

Оценка эффектов различных комбинаций экстрактов позволила подобрать оптимальный состав, включающий 100 частей травы солянки, 30 частей цветков пижмы, 10 частей травы чистотела, а так же определить эффективную дозу изучаемого средства и дозу препарата сравнения гепатофалька (140 мг/кг).

Учитывая многокомпонентный состав предлагаемого средства, разработка его эффективной технологии и стандартизации требовала адаптации имеющихся методов количественного определения флавоноидов, алкалоидов и бе-

тайна, отвечающих за основные фармакологические эффекты растительного комплекса.

Хроматографическое и спектрофотометрическое исследование флавоно-идного состава выявило, что в данной группе соединений преобладают рутин, кверцетин и гомологи дигидрокверцетина. Использование реакции комплексо-образования с алюминием хлоридом в кислой среде исключило влияние других полифенолов ЭК и позволило достаточно избирательно измерять содержание флавоноидов с пересчетом на рутин. Для количественного определения алкалоидов спектрофотометрическим методом выбрали аналитическую волну поглощения коптизина с максимумом 460 нм и использовали значение удельного показателя поглощения этого вещества в расчетной формуле. Это позволило избежать ошибки за счет наложения максимумов поглощения флавоноидов и других соединений, имеющее место в других частях спектра. При оценке содержания бетаина предварительно выявили степень влияния алкалоидов чистотела, входящего в состав ЭК, на получаемый результат. Мы полагали, что некоторые алкалоиды этого растения, являясь четвертичными азотистыми основаниями, способны вступать в реакцию комплексообразования с реактивом Рей-неке. В ходе работы установлено, что рейнекатов в моноэкстракте чистотела в пересчете на абсолютно сухое сырье определяется не более 0,02% их общего количества в ЭК, что входит в предел ошибки измерения и позволяет пренебречь этой поправкой в расчетной формуле.

Для оценки степени линейности методик были рассчитаны основные параметры и коэффициенты уравнения линейной парной регрессии (табл.1).

Таблица 1 - Данные регрессионного анализа при оценке правильности и линейности методик количественного определения БАВ в ЭК

Параметр Флавоноиды Алкалоиды Бетаин

Оценка правильности

Коэффициент регенерации % 98,98 98,68 100,3

Оценка линейности

Коэффициент корреляции (Кк) 0,9946 0,9903 0,9922

Коэффициент регрессии (Кс) 0,013 0,042 0,009

Коэффициент детерминации (К/) 0,9890 0,9710 0,985

Пересечение с осью У 0,208 0,089 0,303

Остаточная сумма отклонений (ББ) 0,6541 0,0006 0,3044

Обоснованность выбора методик количественного определения подтверждалось изучением их основных валидационных характеристик. Специфичность и тождественность методов анализа доказывали характерные для определяемых веществ электронные максимумы поглощения и их совпадение с соответствующими стандартными образцами. О правильности методики судили по найденному проценту регенерации. Для определения точности исследовали метрологические характеристики применяемых методик (табл.2).

Таблица 2 - Метрологические характеристики методики количественного определения алкалоидов, бетаина и флавоноидов в ЭК (при Г = 7)

я Хср тш/тах в2 Б Яг % ДХ 0-5; р-95; 1-2,57 с, %

Количественное определение флавоноидов

0.03 4,71 0.04/0,6 0,0022 0.015 0,0067 0,3 0,017 0,4

Количественное определение алкалоидов

0.002 0,1 0,03/0.5 0,00001 0.0008 0,00035 0.8 0,002 1,2

Количественное определение бетаина

0,05 5,5 0,08/0,4 0,00045 0,021 0,0094 0,4 0,024 0,44

Данные, полученные при статистической обработке выборки приближены по значению, достоверны при доверительной вероятности 95%, так как вычисленные значения контрольных критериев не превышают табличное значение 0=0,64, а величины относительных стандартных отклонений не превышают 2%. Таким образом, результаты валидирования показали, что разработанные методики количественного определения флавоноидов, алкалоидов и бетаина в ЭК, являются специфичными, характеризуются линейной зависимостью в исследуемой аналитической области, корректной точностью и тождественностью. Это позволяет рекомендовать их использование для контроля качества гепато-тропного средства.

При разработке технологии экстрагирования сырья с помощью метода математического планирования эксперимента (греко-латинский квадрат) выявлены наиболее значимые факторы, определяющие процесс извлечения биологически активных веществ (БАВ). Изучались: размер частиц сырья (А); время экстракции (В), коэффициент съема готовой продукции (С), экстрагент (О). Критериями оптимизации являлись истощаемость сырья по экстрактивным веществам (У^, флавоноидам (У2), глицинбетаину (У3), алкалоидам (У4). Выбор

значимо влияющих факторов осуществлялся по критерию Фишера с использо-

9

ванием соответствующих графиков. Сравнение средних значений значимо влияющих факторов проводили по критерию LSD (Least significant difference). Достоверными признавались различия при уровне значимости р<0,05 и критерия Фишера 3-4. Величина степени влияния факторов на конкретный параметр - критерий LSD (К), а так же критерии Фишера (F) представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Критерий LSD и критерий Фишера при оценке влияния факторов А, В, С, D на параметры Yt Y2 Y3 Y4.

Параметр Фактор A Фактор В Фактор С Фактор D

Ka% Fa Кв% Fb Кс% Fe Kd% Fd

yb 20,27 7,7 1,29 0,49 54,54 20,8 21,32 8,14

y2<„ 0,95 0,2 4,37 0,85 4,47 0,87 85,05 16,54

y3l 24,96 2,3 9,45 0,87 10,09 0,93 44,7 4,13

y46 9,28 1,2 2,04 0,26 12,02 5,6 68,93 8,9

Установлено, что экстрагент оказывает значимое влияние на истощае-мость всех исследуемых групп БАВ. Выход алкалоидов и экстрактивных веществ (ЭВ) в значительной степени зависит от коэффициента съема готовой продукции. Время контакта фаз оказалось не значимым ни для одного из вышеназванных параметров. Варьирование размером частиц сырья, достоверно значимо повлияло только на истощение по ЭВ.

Определение оптимальных значений значимо влияющих факторов проводили опытным путем в ходе полнофакторного эксперимента. Выбор экстраген-та предполагал необходимость исчерпывающей и доброкачественной экстракции всех групп БАВ, содержащихся в растениях сбора. При экстрагировании смеси сырья 20% этанолом, что характерно для технологии препаратов солянки холмовой, при достаточно полном извлечении общей массы ЭВ степень истощения сырья по флавоноидам составила лишь 37%. Получение препарата с помощью 70% этанола, который рационален для технологии монопрепаратов пижмы, не позволяет эффективно экстрагировать водорастворимые вещества солянки и чистотела. Варьирование параметрами экстракционного процесса не приводило к существенному увеличению выхода продукта без снижения его доброкачественности.

Нами предложена технология получения ЭК путем последовательной обработки сырья 70% этанолом и водой очищенной методом противоточного ступенчатого экстрагирования. Предлагаемый способ экстрагирования растительной смеси обеспечивает истощение сырья по ЭВ, глицинбетаину, флавоноидам

и алкалоидам не менее чем на 76, 84, 69 и 84% соответственно. Аналогичные показатели при использовании моноэкстрагентов в адекватном режиме экстракции были в ! ,3-1,4 раза меньше (рис. 1).

20% этанол вода 70% этанол 70% этанол-»«ода

Рисунок 1 - Влияние экстрагента на истощение растительной смеси по БАВ Фармакогностический анализ показал, что компоненты растительной смеси характеризуются различной структурой, размерами частиц и степенью жесткости. Поэтому равноэффективная экстракция ингредиентов сбора может быть обеспечена регулированием их дисперсности. Используя метод нелинейного регрессионного анализа Гаусса-Ньютона в пакете 51а(лз1юа 6.0. были выведены коэффициенты и составлено уравнение, для расчета размеров частиц отдельных компонентов сырья при которых, истощение по флавоноидам будет наступать за одинаковое время. Достоверность способов расчета проверялась экспериментально.

5,9470 40„;°-'800 = 22,9938 <1ПИЖ. "°'3289 = 5,3945 Г0'"49 с1чис °'4034 Изучение технологических свойств сырья проводили с целью обоснованности выбора емкости оборудования, выбора загрузочных средств, расчета расходных норм экстрагента и сырья. Рассчитанные технологические коэффициенты свидетельствуют, что растительная смесь характеризуется малой насыпной массой (0,15 г/см3), высокой пористостью (4,6 г/см3) и поглощаемостью (2,67 г/см3), большим объемом внутреннего сока (2,9 г/см3).

Увеличение числа ступеней экстракции, как способ повышения истощения сырья, показал, что достоверно значимое увеличение истощаемости по ЭВ и алкалоидам наступает после 5-ой ступени, а по флавоноидам - после 6-ой. Увеличение числа ступеней экстракции на истощение по бетаинам значительно не сказывалось (рис. 2).

экстрактивные вещества ■ алкалоиды 3 фпаво.чонды Я бетаин

3 4 5 6 7

число ступеней экстракции

Рисунок 2 - Влияние числа ступеней экстракции на истощаемость сырья по экстрактивным веществам и БАВ

Коэффициент съема готовой продукции для экстракции определяли теоретическим расчетом с экспериментальным подтверждением результатов. По полученным данным значение у=3 соответствует максимальному выходу ЭВ. Однако при использовании коэффициента съема готовой продукции 2,5 истощение по ведущим БАВ снижается не значительно (рис.3).

39,2

О экстрактивные вещества ■ апкаяжды □ флавоноиды _ 13 бетаин

1;1 1,15 1,2 1:2.6

коэффциентсъема готовой продукции

Рисунок 3 - Влияние коэффициента съема готовой продукции на истощаемость сырья по экстрактивным и БАВ

Используя установленные параметры экстракции, разработана технология получения ЭК в виде густого экстракта. Высушенное до остаточной влажности 10% сырье измельчают до размеров для травы солянки - 1,1 мм, цветки пижмы - 3 мм, трава чистотела —1,6 мм. Подготовленные компоненты смешивают в соотношении 100: 30:10. Сырье экстрагируют 70% этанолом и, последовательно, водой очищенной методом 6-ступенчатой противоточной экстракции с передвижкой извлечения о через 6 ч. Первичное и вторичное извлечения объединяют, отстаивают, фильтруют и упаривают до остаточной влажности 25%.

Оценку эффективности предлагаемой технологии экстрагирования растительной смеси проводили в сравнении с выходом продукта, получаемого по запатентованной для жидкого экстракта солянки технологии. Результаты подтверждают, что предлагаемый способ производства ЭК позволяет не только обеспечить достаточно высокий выход общей массы товарного продукта, но и способствует повышению уровня его доброкачественности по флавоноидам и алкалоидам на 36 и 29% соответственно.

С целью улучшения потребительских свойства полученного средства густой экстракт был переведен в более рациональную лекарственную форму - гранулы. Подбор вспомогательных веществ осуществлялся с использованием обобщенной функции желательности Харрингтона. Из исследуемых прописей были выбраны 5 удовлетворительных и определенны их технологические параметры.

Результаты свидетельствуют, что применение водного раствора поливи-нилпирролидона в прописях II и IV приводит к недопустимому увеличению мелких фракций. Значение сыпучести за счет введения в состав гранул прописей I, III, V растворов метилцеллюлозы были значительно выше. Определение гигроскопичности, прочности и распадаемости отобранных гранул ЭК показало, что пропись № III, при удовлетворительном значении времени распадаемости не выдерживает испытание по тесту «Прочность на истирание» и характеризуется более высокой гигроскопичностью.

Гранулы, изготовленные по прописи № I и № V, удовлетворяют требования ГФ по вышеперечисленным показателям, однако пропись, имеющая в своем составе лактозу, характеризуется гигроскопичностью втрое меньшей, чем соответствующий показатель прописи, где функцию наполнителя выполняла сахарная пудра.

По результатам комплексной оценки лучшими технологическими свойствами обладает пропись V, включающая густого экстракта 43,3; пектина яблочного 6,67; лактозы 20,0; крахмала картофельного 15,0; микрокристаллической целлюлозы 6,67; метилцеллюлозы 7,36; кальция стеарата 1,0 г.

Таблица 4 - Технологические характеристики гранул ЭК

Параметр № прописи

I II III IV V

Фракций < 0,2 мм > 3 мм, % 1,4 ±0,3 16,7±0,2 5,0±0,09 27,7±0,4 3,2±0,02

Сыпучесть, г/см3 14,8±0,3 6,2±0,1 10,9±0,1 5,7±0,2 12,4±0,3

Угол естественного откоса,0 42±0,1 17±0,09 28±0,05 19±0,05 32±0,09

Объемная плотность, г/см3 0,65 ± 0,05 0,67 ± 0,06 0,84 ± 0,06 0,75 =ь 0,07 0,71 ±0,02

Влажность, % 3,8±0,05 5,9±0,1 6,4±0,02 1,6±0,1 3,8±0,1

Гигроскопичность, % 15,14±0,2 - 15,37±0,3 - 2,41±0,1

Прочность на истирание, % 98,9±0,3 - 92,36±0,1 - 97,45±0,3

Распадаемость, мин 11±0,1 - 2±0,3 - 5 ±0,2

Гранулы изготавливали методом влажной грануляции и стандартизировали. Результаты испытаний свидетельствуют о соответствии качества полу-

ченных гранул требованиям ГФ и планируемым параметрам (табл.5). Таблица 5 - Спецификация гранул ЭК

Показатели Метод Нормы

Описание Органолептический Гранулы светло-коричневого цвета, однородны по окраске, округлой формы, слабого своеобразного запаха, горького вкуса.

Подлинность Реакция на бетаин с солью Рейнске УФ-спектр тех Розовый осадок, малорастворимый в воде, растворимый в ацетоне. Максимумы поглощения растворов испытуемого препарата и PCO коптизина при (460±4) нм На хроматограмме испытуемого препарата пятна на уровне стандартных образцов свидетелей рутина, кверцетина, коптизина.

Гранулометрический состав ГФ XI Гранул размером >3мм и <0,2мм не более 5%

Влажность ГФ XI Не более 5,5 %

Распадаемость ГФ XI Не более 15мин

Тяжелые металлы ГФ XI Не более 0,01%

Микробиологическая чистота ГФ XI Изменение №3 Категория 3 Б

Количественное определение Спектрофотометрич еский Бетаинов не менее 5,5% Флавоноидов не менее 4,7% Алкалоидов не менее 0,1%

Изучение острой токсичности ЭК показало, что густой экстракт и гранулы на его основе не вызывают гибели лабораторных животных в дозе 10.000 мг/кг. Курсовое введение ЭК животным с СС14-гепатитом ослабляло цитолитический

и холестатический синдромы, способствовало восстановлению белково-

синтетической функции печени, ослабляла негативное воздействие гепатоток-сина на показатели липидного, углеводного и пигментного обменов (табл.6).

Таблица 6 - Влияние ЭК на биохимические показатели сыворотки крови крыс с СС14-гепатитом (М±ш средние из 8-10 наблюдений)

Показатели Контроль ССЦ.гепатит ЭК+ССЦ Гепатофальк +СС14

АлАТ, мккат/ л 0,52+0,03 2,24±0,02' 0,88±0,031,2 1,09±0,131,2,3

АсАТ, мккат/л 0,62+0,01 2,4±0,0б' 1,09±0,091,2 1,2±0,051,2'3

ЛДГ, МЕ/л 541,7±2,22 1272,1±2,49' 661,8± X, 11,2 702,2±5,61,2,3

у-ГТП, мккат/л 0,25±0,01 1,17±0,02' 0,49±0,041,2 0,43±0,061,2,3

ЩФ, Е/л 290,0±3,13 949,58±2,85' 641,55±2,791,2 786,2±3,б1,2,3

Билирубин общий, мкмоль/л 17,8±0,51 25,76±0,951 21,5±0,0,811,2 21,3±0,41,2,3

Билирубин непрямой, мкмоль/л 8,7±0,69 19,25±0,79 1 12,76±1,57 1,2 10,5±0,68 1,2,3

Коэфф. глкжуронировамия, % 51 25' 4112 5

Холестерол, ммоль/л 5,61±0,33 10,23 ±0,46' 8,41±0,54 1,2 8,14±0,341,2,3

Липиды, г/л 1,79±0,05 4,82±0,09 1 2,05+0,04 1,2 2,45±0,02 1,2,3

Белок, г/л 56,0±1,1 25,0+1,11 41,5±1,7 1,2 37,1±1,4 1,2,3

Глюкоза, ммоль/л б,2±0,1 3,3+0,2' 5,5±0,21,2 5,9+0,11,2,3

Примечание: р <0,05 по сравнению с группами: 1 - контроль; 2 - СС14-гепатит, 3 - ЭК+ССЦ ЭК проявил ярко выраженный желчегонный эффект. Препарат не только

нормализовал нарушенное гепатотоксином желчеотделение, явно превосходя по этому показателю гепатофальк, но и более выражено устранял билиарний дефицит желчных кислот (ЖК) на фоне приемлемых значений холестерола и билирубина. Кроме того, при использовании ЭК проявлялась более четкая тенденция к восстановлению реакций конъюгации ЖК, чем в опытах с применением импортного средства (табл 7).

Разработанное гепатотропное средство оказывало положительное воздействие на реологические свойства желчи животных, что подтверждалось нормализация баланса между ЖК и холестеролом и как следствие, ростом значений холато-холестеролового коэффициента (ХХК) при экспериментальной гинер-холестеролхолии (ГХХ) (табл.8).

Таблица 7 - Влияние ЭК на динамику желчеотделения и состав желчи крыс с ССЦ-гепатитом (М±т, средние из 8-10 наблюдений)

Показатели мл/кг/час контроль СС14-гепатит ЭК+ССЦ Гепатофальк +ССЦ

Общий объем желчи, мл/кг/час, 4,4±0,24 2,86±0,1б' 5,47±0,21,J 4,1±0,Зб''2'3

Средняя скорость секреции мл/кг/час 1,07±0,12 0,73±0,03' 1,4±0,131д 0,88±0,011,2,3

Сумма желчных кислот, г/л 9,39±0,49 3,56±0,41' 6,88±0331,2 7,99±0,511,2,3

Холестерол, моль/л 2,29±0,12 0,96±0,12' 1,62±0,04'"г 1,52±0,03',АЗ

Билирубин, ммоль/литр 21,53±2,3 8,46±0,57' 16,92±1,25и 13,38±0,57M'J

Коэффициент конъюгации ЖК 4,66±0,3 1,0*0,1' 2,72±0,3'д 1,4±0,1w

Примечание: р <0,05 по сравнению с группами: 1 - контроль; 2 - ССЦ-гепатит; 3 - ЭК+ССЦ

Таблица 8 - Влияние ЭК на реологические свойства желчи крыс при экспериментальной (ПХХ) М±ш средние 8 из 10 наблюдений)

Показатели Контроль ГХХ ЭК+ ГХХ Гепатофальк + ГХХ

Холестерол, г/л 0,89±0,05 1,70±0,1б' 1,22±0,13'^

Сумма ЖК, г/л 14,34±0,42 9,53±0,511 идио^' 12,74±0,421Л'

ХХК 16,11 ±0,12 5,60±0,06' 9,18±0,09и 8,71±0,09м-'

Примечание: р <0,05 по сравнению с группами: 1 - контроль; 2 - ГХХ; 3 - ЭК+ГХХ

Спектральные характеристики печеночного секрета животных с ГХХ получавших ЭК подтверждают увеличение транспортных единиц солюбилизации гидрофобных компонентов желчи. Повышение значений коэффициента литоге-низации (КЛ) в 3 раза, свидетельствует об улучшении коллоидной стабильности желчи на фоне экспериментальной гепатопатии.

0,8 т КЛ - 2,75 -Контроль

250 260 270 275 277 280 290 300 350 400 410 420 430 440 450 454 4S0

Рисунок 4 - Спектры желчи крыс на фоне экспериментальной гиперхоле-стеролхолии под влиянием ЭК

Используя вышеуказанные фармакологические тесты, также проведена сравнительная биофармацевтическая оценка субстанций и гранул ЭК. Установлено, что предложенная технология ЭК в сравнении с запатентованным спосо-

бом получения лохеина обеспечивает увеличение желчегонной активности на 39 %. Это связанно с обогащением растительного комплекса линофильными БАВ при сохранении водорастворимых соединений.

Также показано, что технологические процессы, используемые в производстве гепатотропного средства в виде экстракта и гранул, не ослабляют его фармакологической активности (рис.5).

6,9 6,9 6,82

■ жидкий экстракт □ густой экстракт

1,6 1,58 1,46

И |--1 _^ □гранулы

средняя скорость сумма ЖК, г/л холестерол, г/л

секреции желчи мл/кг/ч

Рисунок 5 - Биохимические показатели желчи при экспериментальном гепатите под воздействием жидкого, густого экстракта и гранул на основе ЭК

Таким образом, в результате выполненного исследования разработано комплексное гепатотропное средство в виде гранул ЭК на основе травы солянки, травы чистотела и цветков пижмы, обладающее высокой биологической активностью.

Выводы

1. Предложенная рациональная комбинация растительной смеси, обеспечивающая максимальный фармакологический эффект, включает 100 частей травы солянки, 30 частей цветков пижмы и 10 частей травы чистотела.

2. Разработанная технология ЭК обеспечивает эффективное использование основных групп БАВ растительного сырья (не менее 84%).

3. Предложенные адаптированные спектрофотометрические методики количественного определения флавоноидов, алкалоидов и бетаинов являются специфичными, характеризуются линейной зависимостью, корректной точностью и тождественностью, что позволяет использовать их для стандартизации предлагаемого средства.

4. Разработанное средство равноэффективно с гепатофальком препятствует биохимическим нарушениям печени при экспериментальной гепатопатии.

5. Разработанное средство эффективнее гепатофалька стимулирует желчеотделение и устраняет билиарную недостаточность при гепатодепресии, индуцированной тетрахлорметаном, оказывает нормализующее влияние на коллоидную стабильность желчи при гиперхолестеролемии.

6. Состав и технология гранулированной формы ЭК обеспечивают удовлетворительные биофармацевтические характеристики.

7. Разработаны проекты фармакопейных статей и лабораторного регламента на производство гепатотропного средства в виде гранул.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Теплякова, Е.М. Перспективы создания комплексного растительного средства для лечения заболеваний гепатобилиарной системы. /Науки о человеке: Материалы VI конгресс молодых ученых и специалистов, Томск, 2005. - С. 96

2. Теплякова, Е.М. Разработка технологии комплексного гепатотропного средства. / Современные проблемы фармакологии и фармации: Материалы всероссийской науч.-практ. конф.- Новосибирск, 2005. - С.488-490.

3. Теплякова, Е.М. Коррекция нарушений реологических свойств желчи комплексным растительным средством / Науки о человеке: Материалы VII конгресс молодых ученых и специалистов, Томск, 2006. - С. 137-139.

4. Теплякова, Е.М. Влияние комплексного растительного средства на конъюгацию желчных кислот при экспериментальном токсическом гепатите у крыс / Бюллетень сибирской медицины. 2006,- Приложение 2. - С. 133-134.

5. Теплякова, Е.М. Желчегонная активность комплексного гепатотропного средства / Создание новых лекарственных препаратов: Материалы всероссийской науч.-практ. конф. -Томск, 2007.-С. 104-105.

6. Теплякова, Е.М. Коррекция патологий гепатобилиарной системы комплексным растительным средством / Е.М.Теплякова, В С. Чучалин // Бюллетень сибирской медицины -2007,-№4.-С. 52-57.

7. Теплякова, Е.М. Влияние технологических факторов на экстракцию растительного комплекса с гепатотропным действием / Здоровье и образование в XXI веке: Материалы IX международного конгресса-Москва, 2008. - С. 505 - 506.

8. Теплякова, Е.М. Влияние размера частиц при истощении БАВ при экстрагировании растительного комплекса // Е.М.Теплякова, А.В.Ратькин / Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Материалы Всероссийской научно-практической конференции - Екатеринбург, 2009. - С.477 - 478.

9. Роль дисперсности сырья в технологии комплексного гепатотропного средства / Е.М.Теплякова, В.И. Корюкин, В.С.Чучапин, А.В.Ратькин [ и др.] // Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства: Материалы международной научно-практической конференции Шымкент, Казахстан, 2009 - С. 110 - 112.

10. Патент 2296579 Российская Федерация, Средство обладающее гепатопротективным и желчегонным действием / А. В.Чучалин, Л.К.Михалева, Е.М.Теплякова, В Н. Буркова. -заявл. 21.09.2005, № 2005129448; зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ 10.04.2007.

11. Патент 2292897 Российская Федерация, Средство обладающее гепатопротективным и желчегонным действием / А. В.Чучалин, Л.К.Михалева, Е.М.Теплякова, В Н. Буркова. -заявл. 21.09.2005, № 2005129449; зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ 10.02.2007.

Теплякова Елена (Россия)

Разработка комплексного гспатотропного средства растительного происхождения.

Потребность в эффективных гепатотропных препаратах определила актуальность создания растительного средства на основе травы солянки, травы чистотела и цветков пижмы. Теоретически и экспериментально обоснован рациональный состав растительного комплекса. Разработана оптимальная технология его экстрагирования, валидированы методики стандартизации, разработаны нормы качества гепатотропного средства. Доказана низкая токсичность, высокая гепатопротективная, желчегонная и нормализующее влияние на коллоидную стабильность желчи при экспериментальных гепатопатиях. Предложены состав и технология гранулированной формы, соответствующая товароведческим и биофармацевтическим требованиям.

Tepljakova Elena (Russia)

Development of complex hepatotropic phytogenesis remedy. Requirement in effective hepatotropic preparations has determined a urgency of creation of phytogenesis remedy on the basis of a herba Solsola, herba Chelidonium and flores Tanacetum. Theoretically also the rational structure of a vegetative complex is experimentally proved. Optimum its technology extraction, validation techniques of standardization is developed, norms of quality hepatotropical remedy are developed. Low toxicity, high hepatotprotetion, choleretic and normalizing influence on physical and chemical stability of bile is proved at experimental defeats of a liver. The structure and the technology of the granulated form corresponding to normative and bio-pharmaceutical requirements are offered.

Подписано в печать 12 ноября 2009 г. Усл.печ.листов 0,65 Печать на ризографе. Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СибГМУ 634050, г. Томск, Московский тракт, 2, тел. 530408 Заказ № 280 Тираж 120 экземпляров

Актуальность темы

Заболевания печени и желчевыводящих путей выявляются у 50-60% взрослого населения России [14]. Большинство патологий гепатобилиарной системы сопровождаются нарушениями секреторной и метаболической функций печени. В процесс вовлекаются углеводный, липидный и белковый обмены, угнетается синтез и биотрансформация витаминов, ферментов, стероидных гормонов и пигментов. Нарушается детоксикация экзо- и эндотоксинов [94].

Терапия таких болезней должна носить комплексный характер и быть направлена на устранение основных патологических синдромов, общих для большинства заболеваний печени: цитолиза, внутри- и внепеченочного холе-стаза, токсического поражения гепатоцитов, недостаточности синтетических и метаболических процессов, воспаления, болевого синдрома. Наиболее адекватными в этом плане являются препараты растительного происхождения, сочетающие гепатопротекторную и желчегонную активность [133].

За последние 15 лет в России в качестве средств терапии патологий гепатобилиарной системы зарегистрировано лишь 10 препаратов, 8 из которых являются импортными [27]. При этом устойчиво высокий спрос регистрируется на отечественные фитопрепараты, что подтверждается как литературными данными, так и результатами собственных исследований. Проблема усугубляется необоснованно широким распространением биологически активных добавок, многие из которых не отвечают требованиям эффективности и безопасности и характеризуются слабыми фармакоэкономическими показателями [2, 15, 91].

Поэтому актуальным является разработка отечественных гепатотропных средств на основе доступного растительного сырья. Перспективным объектом для получения таких средств является солянка холмовая, надземная

часть которой служит источником получения оригинального гепатопротек4 тора «Лохеин». По способности препятствовать структурно-метаболическим нарушениям печени он не уступает импортным силимарин-содержащим препаратам. Вместе с тем, лохеин не оказывает выраженного действия на желче-выделительную функцию печени [57]. Это побудило нас расширить спектр биологической активности солянки за счет ее сочетания с пижмой и чистотелом, обладающими, соответственно, холеретическим и холекинетическим эффектами.

Цель исследования Разработка комплексного гепатотропного средства на основе суммарного экстрактивного комплекса из травы солянки, травы чистотела и цветков пижмы.

Задачи исследования:

1. Обосновать и предложить оптимальный состав комплекса на основе комбинации экстрактов травы солянки, травы чистотела и цветков пижмы.

2. Предложить и валидировать методы определения основных действующих веществ экстрактивного комплекса (ЭК) из травы солянки, травы чистотела и цветков пижмы и лекарственных форм на его основе.

3. Разработать технологию получения и параметры качества ЭК и гранулированной формы на его основе.

4. Изучить гепатопротективные и желчегонные свойства ЭК на модели экспериментальной гепатопатии, индуцированной тетрахлорметаном.

5. Изучить влияние ЭК на физико-химические свойства желчи, на модели экспериментальной гиперхолестеролхолии вызванной литогенной диетой.

6. Разработать состав и технологию получения гранулированной формы на основе ЭК.

7. Разработать проекты НД на гепатотропное средство на основе ЭК.

Научная новизна работы. Впервые предложен, теоретически и экспериментально обоснован рациональный состав сырья для получения ЭК, включающий траву солянки, траву чистотела и цветки пижмы. Разработана оптимальная технология оригинального гепатотропного средства в виде гус5 того экстракта и гранул на его основе. Предложены и валидированы методики стандартизации, разработаны нормы качества разработанного средства, проведена его биофармацевтическая оценка. Доказана низкая токсичность ЭК, его способность препятствовать нарушениям функций печени при экспериментальном СС14-гепатите, повышать коллоидную стабильность желчи при экспериментальной гиперхолестеролхолии.

Практическая значимость работы.

На основании комплексных исследований разработано оригинальное гепато-тропное средство растительного происхождения. Разработаны и апробированы технология, методики стандартизации, нормы качества ЭК и его гранулированной формы. Показана целесообразность внедрения предложенного средства в качестве корректора дисфункций гепатобилиарной системы. Подготовлены лабораторный регламент и проекты НД на разработанное средство. Созданы предпосылки повышения эффективности фармакотерапии острых и хронических заболеваний печени с нарушениями ее секреторной функции.

Основные положения, выносимые на защиту:

- состав, технология получения ЭК;

- методики стандартизации и нормы качества ЭК и его гранулированной формы;

- результаты экспериментальных исследований гепатопротективной активности ЭК при остром гепатите, вызванном тетрахлорметаном;

- результаты оценки холеретической активности ЭК при острой интоксикации тетрахлорметаном и нормализующего влияния на литоген-ность желчи при экспериментальной гиперхолестеролемии;

Апробация и публикации.

Материалы настоящего исследования докладывались и обсуждались на

Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005 г.),VI конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», (Томск, 2005 г.). Данные от6 дельных исследований представлены на 64-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» (Екатеринбург, 2009 г.). Предложенная технология экстракции экстрактивного растительного комплекса апробирована в экстракционном цехе ООО «Биолит». По теме диссертации опубликовано 9 работ. Приоритет разработанного средства подтвержден патентами на изобретение №2296579 «Средство, обладающее гепатопротективной и желчегонной активностью» и патентом № 2292897 «Способ получения средства обладающего гепатопротективной и желчегонной активностью».

Объем и структура работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, глав, отражающих результаты собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы и приложений. Работа изложена на 160 страницах, иллюстрирована 43 таблицами и 19 рисунками. Библиографические ссылки включают 186 источников, из них 48 на иностранных языках.

ВЫВОДЫ

1. Предложенная рациональная комбинация растительной смеси, обеспечивающая максимальный фармакологический эффект, включает 100 частей травы солянки, 30 частей цветков пижмы и 10 частей травы чистотела.

2. Разработанная технология ЭК обеспечивает эффективное использование основных групп БАВ растительного сырья (не менее 84%).

3. Предложенные адаптированные спектрофотометрические методики количественного определения флавоноидов, алкалоидов и бетаинов являются специфичными, характеризуются линейной зависимостью, корректной точностью и тождественностью, что позволяет использовать их для стандартизации предлагаемого средства.

4. Разработанное средство равноэффективно с гепатофальком препятствует биохимическим и морфологическим нарушениям печени при экспериментальной гепатопатии.

5. Разработанное средство эффективнее гепатофалька стимулирует желчеотделение и устраняет билиарную недостаточность при гепатодепресии, индуцированной тетрахлорметаном, оказывает нормализующее влияние на коллоидную стабильность желчи при гиперхолестеролемии.

6. Состав и технология гранулированной формы ЭК обеспечивают удовлетворительные биофармацевтические характеристики.

7. Разработаны проекты фармакопейных статей и лабораторного регламента на производство гепатотропного средства в виде гранул.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Распространенность нарушений гепатобилиарной системы определяет целесообразность терапии патлогия печени и желчевыводящих путей гепато-тропными препаратами растительного происхождения [4, 39, 55, 63,162, 182].

Группа препаратов для лечения печени и желчевыводящих путей является одним из самых активных сегментов фармацевтического рынка России, однако, в основном это рынок импортных препаратов, большая часть из которых, дженерики. В то же время прослеживается тенденция увеличения потребления отечественных фармпродуктов, в частности комплексных фитопрепаратов, что напрямую связанно с их более низкой стоимостью, ростом фальсификации, а так же высокой эффективностью отечественных средств.

Перспективным по фармако-экономическим характеристикам, является растительное средство на основе экстрактивных комплексов пижмы, чистотела и солянки холмовой. Входящие в него БАВ позволяют воздействовать на ведущие патологические синдромы гепатобилиарных патологий: цитолиз, холестаз, печеночно-клеточную недостаточность, воспалительный синдром, тем самым оказывать комплексный гепатотропный эффект [5, 27, 131, 137].

В результате экспериментальных исследований устанановлено оптимальное соотношение активных компонентов комплекса, включающее 100 частей травы солянки холмовой, 30 частей цветков пижмы и 10 частей травы чистотела.

Многокомпонентный состав гепатотропного средства, определил необходимость адаптации имеющихся методов количественного определения флавоноидов, бетаинов и алкалоидов, отвечающих за основные фармакологические эффекты разработанного комплекса.

В ходе работы разработаны и валидированны методы дифференциальной спектрофотометрии:

• продуктов комплексообразованния флавоноидов ЭК с алюминием хлоридом в кислой среде при 410 нм, в пересчете на рутин.

• алкалоидов ЭК при 460 нм, в пересчете на коптизин.

• продуктов комплексообразования бетаина ЭК с аммоний тетратиоциа-нодиаминхроматом (солью Рейнеке) при 520 нм, в пресчете на бетаин. При создании гепатотропного средства определили значимые факторы экстракции растительного комплекса. В ходе работы удалось установить, что наибольшее влияние на истощаемость сырья по основным БАВ оказывает экстрагент. Для извлечения флавоноидов комплекса, требуется этанол высоких концентраций, бетаины легко извлекаются 25% растворами этилового спирта, а присутствие алкалоидов в растительном комплексе и в виде солей и в виде оснований предполагает использовать экстрагент с высокой экстрагирующей способностью. С этий позиции использование 70% этанола и последовательно воды очищенной позволило обеспечить высокую степень истощения сырья и желаемые показатели качества готового продукта

Различная гистологическая структура и степень жесткости компонентов растительного комплекса повлекла необходимость регулирования его дисперсности с целью обеспечения равноэффективной экстракции. Разрабо-таный способ расчета соотношения между размерами частиц исследуемого растительного комплекса позволил определилить размеры частиц всех входящих в него компонентов, при которых истощение по флавоноидам будет наступать за одинаковое время .

Использованые приемы математического моделирования и полнофакторного эксперимента позволили установить рациональные значения коэффициента съема готовой продукции и оптимальное количество ступеней экстракции.

Суммируя полученные данные, была предложена технология производства ЭК. Сущность способа заключается в шестикратной экстракции сырья измельченного до: 3 мм солянки холмовой, 1,1 мм пижмы обыкновенной и 1,6 мм чистотела большого комплексным экстрагентом (70% спиртом этиловым и водой очищенной) при коэффициенте съема готовой продукции, равном 2,5, и передвижке извлечений через 6 ч.

Сравнительный анализ экстрактов, полученных с помощью комплексного экстрагента и 25% спирта этилового, показал, что при равнозначном количестве сырья разработанный способ экстрагирования растительного комплекса, позволяет повысить выход экстрактивных веществ на 18,3%, а выход бетаинов в 1,1 раза. Вместе с тем, доброкачественность экстракта по флавоноидам и алкалоидам увеличивается на 36% и 29% соответственно, в сравнении с тем же показателем. Кроме того, обогащение полиэкстракта липофиль-ными БАВ, при сохранении его водорастворимого комплекса сопровождается достоверным увеличением желчегонной активности по сравнению с соответствующим показателем экстракта, полученным на 25% этаноле.

Таким образом, разработанный способ экстрагирования позволил достичь высокой степени истощения растительного сырья по различным группам БАВ и получить готовый продукт с желаемыми свойствами, что соответствует принципам ресурсосбережения.

С целью улучшить потребительские свойства полученного продукта густой экстракт был переведен в более стабильную лекарственную форму -гранулы (капсулы). Выбор вспомогательных веществ при разработке гранул, был обусловлен необходимыми технологическими свойствами данной лекарственной форме, при высокой биодоступности. Используя критерий желательности Харрингтона, разработана пропись гранул ЭК, которая имела наилучшие технологические биофармацевтические свойства.

Пропись имеет состав: густого экстракта 43,3; пектина яблочного 6,67; лактозы 20,0; крахмала картофельного 15,0; микрокристаллической целлюлозы 6,67; метилцеллюлозы 7,36; кальция стеарата 1,0 г.

Технология производства гранул основанна на методе влажной грануляции густого экстракта и вспомогательных веществ с последующей регрануляцией и опудриванием.

С позиции биофармацевтической в оценки свойств полученных продуктов установлено, что технологические процессы, имеющие место при производстве гепатотропного средства, не изменяют его фармакологической активности от жидкого экстракта до гранул. Проведенные исследования in vivo, доказывают равнозначную холеретическую активность растительног средства во всех трех формах.

Создание новых лекарственных средств наряду с технологическими и потребительскими свойствами фармацевтического продукта предусматривает обеспечение его безопасностью и высокой фармакологической активностью. Изучение острой токсичности показало, что густой экстракт и гранулы полиэкстракта выдерживают испытание на острую токсичность в опытных группах не зарегистрировано ни одного случая гибели животных.

Гепатопротективную, желчегонную активность гепатотропного средства, а так же его влияние на биохимический состав печеночного секрета оценивали на моделях острого гепатита вызванного терахлорметаном и модели искусственной гиперхолестеролхолии.

Терапия ЭК ослабляла цитолитический и холестатический синдромы, способствовала восстановлению белково-синтетической функции печени, сдерживала негативное воздействие гепатотоксина на показатели липидно-го, углеводного и пигментного обменов.

ЭК нормализовал нарушенное гепатотоксином желчеотделение, явно превосходя по этому показателю «Гепатофальк», устранял билиарний дефицит ЖК на фоне приемлемых значений холестерола и билирубина. При использовании ЭК проявлялась более четкая тенденция к восстановлению реакций конъюгации ЖК, чем в опытах с применением импортного средства

Разработанное гепатотропное средство оказывало положительное воздействие на реологические свойства желчи животных, что подтверждалось нормализация баланса между ЖК и холестеролом и как следствие, ростом значений холато-холестеролового коэффициента при экспериментальной ги-перхолестеролхолии

Высокая фармакотерапевтическая активность растительного средства обусловлена технологией его получения, позволяющей ввести в готовый продукт высокоэффективные БАВ растительного комплекса.

Положительный гепатопротективный эффект, обусловлен антиокси-дантным действием флавоноидов: препятствуя образованию и накоплению в печени продуктов ПОЛ и активируя функцию естественной антиокислительной защиты, они стабилизируют цитолемму и мембраны митохондрий, эндо-плазматического ретикулума, лизосом в гепатоцитах[23, 36, 41, 42, 161].

Липотропный эффект ЭК в значительной степени обусловлен наличием бетаина — донатора метальных групп, необходимых для образования фосфа-тидилхолина — компонента клеточных мембран и обязательного ингредиента липопротеидов очень низкой плотности, участвующих в удалении жира из гепатоцитов. Весьма существенным является наличие в растительном средстве высших жирных кислот, в том числе полиеновой у-линоленовой кислоты, входящей в состав фосфолипидов мембран животных клеток. Ее производные являются энергетическим субстратом в процессе внутриклеточного дыхания, а также предшественниками простагландинов [13, 107, 145].

Благоприятное влияние экстрактивного комплекса на белковый обмен обусловлено присутствием в них комплекса незаменимых аминокислот, поддерживающих образование мочевины в печени (аспартат, цитруллин, орни-тин) [24, 110].

Желчегонное действие растительного средства обусловлено наличием в его составе фенольных соединений [ 39, 178]. Полифенолы стимулируют обменные и синтетические процессы печеночных клеток, ускоряют синтез желчных кислот, холестерина, пигментов и других органических составных частей желчи. Установлена зависимость между желчегонной активностью и структурой флавоноидов. Так, О-гликозиды эффективнее С-гликозидов стимулируют холеретическую функцию печени. Вероятно, это связано с прочностью связей. Более прочные С-гликозиды подвергаются длительному метаболизму в печени, тогда как менее прочные О-гликозиды легко освобождаются от сахарного остатка и в большей степени стимулируют процессы желчеотделения [52, 80, 114, 176]. Значительный вклад в холекинетический эффект средства вносят производные кофейной кислоты — кофеиловые эфи-ры и кофеилхинные кислоты [167].

Помимо полифенолов, присутствующие в растительном средстве алкалоиды берберин, коптизин и др. вносят весомый вклад в стимуляцию холе-кинеза. За счет независимой от желчных кислот фракции, эти соединения активизируют продукцию холецистокинина и секретина что, в свою очередь, увеличивает секрецию воды и бикарбонатов эпителием желчных протоков, приводит к сокращению желчного пузыря, снижению тонуса сфинктера Одди и беспрепятственному поступлению желчи в кишечник. Алкалоида чистотела, обладая мощным бактерицидным действием, способствуют восстановлению стерильности желчи, нарушенной при билиарной недостаточности 159].

Желчегонная активность полиэкстракта обусловлена также действием широкого спектра минеральных соединений, в том числе калия, натрия, фосфора, магния, железа, кальция, меди и кремния. Минеральные ингредиенты, всасываясь в желудочно-кишечном тракте, выделяются в первичную желчь печеночными клетками, создавая повышенное осмотическое давление в желчных капиллярах и способствуя увеличению водной фазы. Следует отметить, что наряду с увеличением водной фазы желчи, минеральные соли способствуют повышению коллоидной устойчивости ее компонентов [128, 132, 139].

Таким образом, предлагаемое растительное средство проявило значительную терапевтическую активность при остром экспериментальном поражении печени, вызванном тетрахлорметаном и гипрехолестеролхолией. Эффективнее гепатофалька, восстанавливало нарушенное при гепатопатиях желчеотделение, нормализовало биохимический состав печеночного секрета, улучшало коллоидное состояние желчи.

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о гепато-тропной активности полученного растительного средства, не уступающей импортному аналогу, что позволяет рекомендовать его клинические исследования при токсических поражениях печени, а также при хронических заболеваниях печени токсической этиологии в сочетании с нарушением желчевы-делительной функции.