Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Глазные лекарственные формы нестероидного противовоспалительного средства ортофена

На правах рукописи

Для служебного пользования УДК 615.457.261.1

Экз. № 000038

ИНОЗЕМЦЕВА НАТАЛЬЯ ВЯЧЕСЛАВОВНА

ГЛАЗНЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ НЕСТЕРОИДНОГО ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА ОРТОФЕНА

(15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела)

Автореферат диссертации па соискание ученой степеип кандидата фармацевтических наук

Москва - 1998 г.

Работа выполнена в Московской Медицинской Академии им. И.М.Сеченова

Научный руководитель - доктор фармацевтических наук,

профессор Т.С.Кондратьева

Официальные оппоненты: - доктор фармацевтических наук

Э.З.Каган

- кандидат фармацевтических наук,

доцент Н.И.Никульшина

Ведущая организация: НИИ-Фармации Минздрава РФ

Защита диссертации состоится « » 1998 г. в

часов

на заседании Диссертационного Совета (Д 074.05.06) при Московской Медицинской Академии имени И.М.Сеченова по адресу: г.Москва, Никитский бульвар, 13

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Московской Медицинской Академии имени И.М.Сеченова (Москва, Зубовская площадь, 1)

Автореферат разослан «

» иШХ/ЗгГТМК 1998 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д 074.05.06., кандидат фармацевтических наук, доцент

Н.П.Садчикова.

Актуальность. Среди патологических процессов глаза наибольшее распространение имеют воспалительные заболевания как экзо-, так и эндогенного происхождения. С целью их лечения широкое применение в терапии воспалительных заболеваний находят нестероидные противовоспалительные средства (НПВС), которые в структуре потребления фармакологических средств прочно занимают третье место после антибиотиков и сердечно-сосудистых препаратов. Это обусловлено не только выраженным противовоспалительным действием, но и быстрым наступление анальгезирующего и жаропонижающего эффектов при сравнительно небольшой токсичности. Несмотря на многочисленный арсенал НПВС проблема изыскания новых высокоэффективных остается актуальной, поскольку хронический характер многих воспалительных процессов часто обуславливает длительную терапию. Многочисленные клинические исследования свидетельствуют о том, что НПВС достоверно снижают частоту и степень послеоперационных осложнений. Местное применение их создает более высокие концентрации лекарственного вещества в тканях глаза и, следовательно, более выраженный противовоспалительный эффект. Из группы высокоэффективных НПВС следует выделить ортофен (диклофенак-натрий, вольтарен, фелоран, наклофен), сочетающий высокую противовоспалительную активность с хорошей переносимостью. Впервые разработанный фирмой Циба-Гейги, ортофен с успехом применяется в виде различных лекарственных форм в ревматологии, хирургии, травматологи, педиатрии и других областях медицины. В то же время он еще не нашел широкого применение в офтальмологии. Поэтому с целью местного воздействия на очаг воспаления возникла необходимость в разработке глазных капель отечественного НПВС, которые бы оказывали продолжительное противовоспалительное , раноза-живляющее и регенерирующее действие на ткани поврежденного глаза.

Отсюда актуальным является создание глазных капель ортофена, использование которых обеспечит более высокий противовоспалительных эффект и значительно расширит ассортимент отечественных глазных лекарственных форм глазные капли отечественного НПВС ортофена ранее разработаны не были.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось теоретическое обоснование и экспериментальная разработка составов и технологии эффективных, безопасных и стабильных в условиях длительного хранения глазных капель ортофена, в том числе и пролонгированного действия и используемых в офтальмохирургии и детской практике.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- научно обосновать и разработать оптимальные составы и технологию глазных капель ортофена различной концентрации;

- апробировать имеющиеся методики физико-химического, микробиологического и биологического методов исследования ортофена в предложенных лекарственных формах и при необходимости разработать новые или модифицировать существующие;

- изучить возможность пролонгирования действия ортофена в глазных каплях;

- исследовать физико-химическую и микробиологическую стабильность глазных капель ортофена в различной упаковке в процессе длительного хранения;

- изучить специфическую активность и установить отсутствие ме-стнораздражающего и токсического действия разработанных глазных капель;

- на основании полученных результатов составить нормативную документацию на глазные капли ортофена для Фармакологического комитета Минздрава РФ.

Методы исследования. В работе использованы физико-химические, технологические, микробиологические и биологические методы изучения исследуемых объектов.

Научная повнзна исследований. Состоит в разработке отечественных глазных капель ортофена 8-ми составов, в том числе и пролонгированного действия для лечения воспалительных заболеваний глаза различной этиологии. Глазные капли без консервантов могут быть использованы в детской практике и при хирургических вмешательствах в ткани глаза. Установлена стабильность глазных капель в процессе длительного хранения в различных видах упаковки. Разработана хро-матоспектрофотометрическая методика количественного определение ортофена и консервантов в глазных каплях. Результаты экспериментальных исследований в опытах in vivo свидетельствуют о выраженной противовоспалительной, ранозаживляющей эффективности глазных капель, и об отсутствии местнораздражагощего, аллергизирующего и общетоксического действий.

Практическая значимость работы. Предложены глазные капли отечественного нестероидного противовоспалительного средства ортофена 8-ми составов. Составлены проекты 4-х ВФС для фармакологического комитета Минздрава РФ.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на конференции, посвященной 50-летию НИИ-Фармации (сентябрь, 1994 г.); на Всероссийской конференции молодых ученных Минздрава РФ (апрель 1993 и 1994 гг.); на научных конференциях кафедры технологии лекарственных форм ММА им.И.М.Сеченова (1994 - 1997 гг.); научной межка-

федральной конференции кафедр технологии лекарственных форм, и фармацевтической химии фармацевтического факультета ММА им.И.М.Сеченова (сентябрь, 1997 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 работы и одна принята к печати в журнал «Фармация».

Положения, выдвигаемые на защиту . Результаты исследований по научному обоснованию и разработке составов, технологии глазных калель ортофена, в том числе и пролонгированного действия. Материалы по установлению сроков годности капель в различных видах упаковки-Результаты испытаний эффективности и биологической безвредности глазных капель на животных.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения , обзора литературы, экспериментальных исследований, общих выводов, списка использованной литературы и приложений. Содержит Ж страниц машинописного текста, 23 таблиц, 11 рисунков. Библиографический указатель включает 205 источников литературы, из которых 52 на иностранных языках.

Во введении сформулированы актуальность темы, научная новизна исследований и практическая значимость работы, положения , выдвигаемые на защиту, даны объем и структура диссертации.

В обзоре литературы (гл. 1-ая) «Воспаление, как важнейший патологический процесс. Лекарственные препараты для терапии воспалительных процессов в офтальмологии» раскрыты основные направления терапии воспалительных заболевании в офтальмологии. Подчеркнута перспектива использования отечественного НПВС - ортофена. Дана его фармакологическая и фармацевтическая характеристики. Обоснована необходимость создания глазных капель эффективного отечественного

НПВС. Уделено внимание современным требованиям, предъявляемым к глазным каплям ведущими фармакопеями мира и НД РФ.

В главе 2-ой «Объекты и методы исследования» приведена характеристика объектов (лекарственные и вспомогательные вещества, реактивы, упаковочный материал) и методов исследования. Описаны разработанные и модифицированные методики количественного определения ортофена и консервантов в глазных каплях. Представлены методики характеризующие стабильность, разработанных глазных капель.

В главе 3-й «Технология и изучение глазных капель ортофена в стеклянных флаконах» изложены результаты исследований по научному обоснованию составов и технологии глазных капель ортофена кратковременного и пролонгированного действия. Приведены результаты экспериментов, подтверждающие необходимость стабилизации раствора ортофена добавлением антиоксидантов и консервантов. Представлены результаты изучения физико-химической и микробиологической стабильности глазных капель в процессе длительного хранения, изучения кинетики высвобождения ортофена и вязкости пролонгированных капель.

В главе 4-й «Технология и изучение глазных капель ортофена в полиэтиленовых тюбик-капельницах» изложены результаты исследований и обоснование подбора вспомогательных веществ для глазных капель ортофена в этой упаковке. Представлены результаты изучения стабильности глазных капель в процессе длительного хранения.

В главе 5-ой «Специфическая активность и переносимость глазных капель ортофена» представлены результаты изучения противовоспалительного и ранозаживляющего действия глазных капель ортофена на животных. Также результаты изучения биологической безвредности, отсутствия аллергизирующего , место-раздражающего и общетоксического действий.

Структура диссертационной работы основана на логической последовательности решения цели и изложения полученных результатов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования. В работе использован ортофен (ФС-42-2824-92) 3-х серий и вспомогательные вещества: сорастворитель пропиленгликоль (ВФС 42-1594-86), антиоксиданты: натрия тиосульфат (ГФ X ФС 324 с.317), трилон Б (ГОСТ 10652-73). В качестве консервантов в работе использованы эфиры парагидроксибензойной кислоты - ни-пагин (ФС 42-1460-89) и нипазол (ТУ 6-09-4727-79). Пролонгирующим компонентом выбран полиглюкин (ФС 42-2023-83). Для упаковки глазных капель использованы флаконы из дрота для лекарственных средств вместимостью 5 мл (ТУ 64-2-10-87) и 10 мл (ТУ 64-2-10-87), укупоренные резиновыми пробками (ТУ 38-106-618-95) под обкатку металлическими колпачками (ОСТ 64-009-86), и полиэтиленовые тюбик-капельницы (ТУ 38-106-618-95). Все вспомогательные вещества и упаковочные материалы отвечали требованиям нормативной документации.

Для решения поставленных задач использованы физико-химические, технологические, микробиологические и биологические методы исследования. Для обеспечения селективности определения орто-фена в присутствии консервантов (нипагина и нипазола) разработана хроматоспектрофотометрическая методика при консультации с канд. фармац. наук. И.В.Волковой. С этой целью определено влияние компонентов глазных капель на характер поглощения ортофена. Для этого в одинаковых условиях снимали УФ-спектры модельных смесей ортофена и раствора плацебо (без консервантов) с одинаковым содержанием вспомогательных веществ (рис. 1). В УФ-спектре максимум абсорбции раствора ортофена наблюдается при длине волны 276+2 нм, в то время, как плацебо в данных условия не поглощает. Исследованы УФ-спектры мо-

дельных смесей растворов консервантов и ортофена с консервантами. Максимум поглощения приходится на нипагин и нипазол при длине волны 258+2 нм. Спектр ортофена и консервантов при совместном нахождении в глазных каплях имел полосу поглощения с максимумом 265+2 нм. Для подтверждения отсутствия образования в растворе нового вещества использовали метод ТСХ. Хроматографированию подвергали свежеприготовленные и растворы в процессе длительного хранения. В результате проявления хроматограмм установлено, что пятна ортофена и консервантов совпадают с пятнами свидетелей, что показывает об отсутствии взаимодействия компонентов и возможности их количественного определения. Методика хорошо воспроизводима, относительная ошибка результата отдельного определения ортофена не превышает +1,57 % и консервантов - +1.69 %. Для количественного определения ортофена в глазных каплях без консервантов модифицирована фармакопейная спектро-фотометрическая методика путем подбором необходимых объемов (относительная ошибка не превышает ±2,63 %). Для идентификации и установления возможного взаимодействия между компонентами глазных капель и изучения их стабильности в процессе термической стерилизации

0.8

4 - плацебо с эквивалентным содержании вспомогательных веществ.

3 - ортофена;

1 - ортофена и консервантов;

2 - консервантов;

Рис. 1. УФ-спектры поглощения модельных растворов:

225

245

269

Длина волны, ни

289

и длительного хранения модифицирована методика ТСХ на пластинах Силуфол-254. В виду большой токсичности метанол заменен на этиловый спирт, исключена ледяная уксусная кислота из-за ее высокой химической агрессивности, изменены объемы наносимых проб. Для подтверждения отсутствия продуктов разложения или взаимодействия между компонентами глазных капель в процессе хранения использовали дополнительно 4-и системы растворителей. Предел обнаружения составил 0.05 мкг.

При установлении сроков годности глазных капель ортофсна кроме количественного содержания лекарственного вещества и консервантов, определяли значение рН, внешний вид, отсутствие механических включений и вязкость для пролонгированных капель. Микробная контаминация глазных капель ортофена проверялась методом высева на питательные среды после нейтрализации консервантов (ГФ XI).

Статистическую обработку результатов исследований проводили по общепринятому методу вычисления средних величин и стандартных ошибок.

Разработка составов и технологии глазных капель ортофена. На

основании результатов предварительных исследований в опытах in vivo, клинических наблюдений, данных литературы и рекомендаций офтальмологов для глазных капель выбрана концентрация ортофена, равная 0.1 и 0.2%.

Ортофен - натриевая соль о-[(2.6-дихлорфенил)-амино]-фенил-уксусной кислоты представляет собой кристаллический порошок белого цвета, растворим в 95 % этаноле, практически нерастворим в хлороформе, легко гидролизуется и окисляется с образованием продуктов, окрашенных в розовый или желтый цвет. Поскольку ортофен малорастворим в воде, для получения раствора из исследованных композиций не-

водных растворителей , таких как проиилснгликоль (ПГ), поливинилпир-ролидон (ПВП), полиэтиленоксид (ПЭГ) в количествах от 5 до 30 % от объема раствора, выбран 1ТГ} который позволяет получить прозрачные 0.1 - 0.2 % растворы. С целью обеспечения оптимального терапевтического эффекта использовали буферные системы, разрешенные к медицинскому применению: фосфатную, боратную, боратно-ацетатную со специально подобранным рН от 6.5 до 8.5, т.к. при этом значении рН ор-тофен наиболее эффективен. В результате исследований установлено, что стабильность раствора ортофсна повышается при использовании борат-ной буферной системы со значением рН 8,2. Для предотвращения деструкции ортофена в водных растворах при использовании антиоксидантов (натрия сульфит и тиосульфат; трилон Б, кислота аскорбиновая и анальгин) методом «ускоренного старения» установлена наибольшая эффективность натрия тиосульфата в тятесг&ях рйьшх ортофену. . Учитывая, что из стекла флаконов в водные растворы при длительном хранении могут выделяются микроколичества ионов металлов, являющиеся катализаторами окислительно-восстановительных процессов, добавлен трилон Б, который, образуя комплексы с ионами металлов, выводит их из окислительно-восстановительных процессов. Кроме того, учтено, что трилон Б усиливает активность консервантов, которые необходимы для глазных капель в многодозовых упаковках. В результате исследований разработан комплексный стабилизатор для непролонгиро-ванных глазных капель ортофена, включающий натрия тиосульфат и трилон Б.

Недостатком многих лекарственных препаратов, применяемых в офтальмологии, является короткий период терапевтического действия. В связи с этим разработаны составы глазных капель ортофена пролонгированного действия и в качестве дополнительного компонента введен поли-глюкин. Ввиду того, что вязкость глазных капель на полиглюкине пре-

пятствует высвобождению микроколичеств металлов из стекла и окислительно-восстановительные процессы проходят значительно медленнее, из комплекса антиоксидантов исключен трилон Б, предложенный для глазных капель непролонгированного действия. Для определения высвобождения ортофена из глазных капель, что позволяет судить о его биологической доступности и о влиянии на этот процесс вспомогательных веществ использовали метод равновесного диализа через полупроницаемую мембрану германской фирмы Бегтарог из регенерированной целлюлозы.

Максимальная концентрация ортофена достигалАсь. на 5 - 6-той ч от начала эксперимента и поддерживалась до 8-ми часов на высоком уровне (рис 2). Таким образом, установлено, что глазные капли ортофена, изготовленные на полиглюкине, обладают значительным пролонгирующем действием, этому способствует вязкость рйстворя.

60,

Кинетика высвобождения ортофена из глазных капель

8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Время, ч

Рис. 2:1 - на полиглюкине;

2 - на боратной буферной системе;

3 - водный раствор

В связи с тем , что глазные капли в процессе использования должны сохранять стерильность ,в результате исследований на 7-ти тест-культурах (Staphylococcous aureus, E.coli, Bac.subtilis, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Candida utilis, Pénicillium notatum) выбраны эф-

фективные, нетоксичные и экономически доступные консерванты. Установлена их оптимальная концентрация, которая соответствует 0.02 % нипазола и 0.06 % нипагина. Для определения антимикробной активности консервантов использовали микробиологический метод, предложенный Т.С.Кондратьевой, который заключается в определении минимального стерилизующего времени при искусственной контаминации тест-культурами микроорганизмов глазных капель.

В качестве упаковки для капель глазных ортофена наряду со стеклянными флаконами использованы полиэтиленовые тюбик-капельницы. Небольшой объем и особое дозирующее устройство обеспечивают удобство применения капель, позволяют сохранить стерильность в течение всего времени использования без добавления консерванта. Последнее дает возможность применения капель в педиатрии, особенно для новорожденных и детей до 1 года, в связи с повышенными требованиями к этой группе лекарственных форм, также и при различных хирургических вмешательствах в офтальмологии. Это важно еще и потому, что консерванты могут вызывать различные отрицательные реакции. При разработке составов глазных капель ортофена для полиэтиленовых тюбик-капельниц за основу взяты ранее предложенные составы 1-4. В связи с тем, что в материале тюбик-капельниц не содержаться ионы тяжелых металлов, трилон Б исключен из состава глазных капель.

Таким образом, составы глазных капель ортофена для тюбик-капельниц (5-8) отличаются от состав 1-4 отсутствием консервантов и трилона Б.

ортофен (ФС 42-2824-92) пропиленгликоль (ВФС 42-1594-86) натрия тиосульфат (ФС 324, с.317) трилон Б (ГОСТ 10652-73)

Состав 1

0.1 г 20.0 г (18.4 мл) 0.05 г

Состав 2 0.2 г

20.0 г( 18.4 мл) 0.1 г

0.05 г

0.1 г

нипагин(ФС 42-14-60-89) нипазол(ТУ 6-09-4727-79) боратная буферная система

ортофен (ФС 42-2824-92) пропиленгликоль (ВФС 42-1594-86) натрия тиосульфат (ФС 324, с.317) нипагин(ФС 42-14-60-89) нипазол(ТУ 6-09-4727-79) полиглюкин (ФС 42-2023-83)

ортофен (ФС 42-2824-92) пропиленгликоль (ВФС 42-1594-86) натрия тиосульфат (ФС 324, с.317) боратная буферная система

ортофен (ФС 42-2824-92) пропиленгликоль (ВФС 42-1594-86) натрия тиосульфат (ФС 324, с.317) полиглюкин (ФС 42-2023-83)

0.06 г 0.02 г до 100 мл Состав 3 0.1 г 20.0 (г 18.4 мл) 0.1 г 0.06 г 0.02 г до 100 мл Состав 5 0.1 г 20.0 г (18.4 мл) 0.1 г до 100 мл Состав 7 0.1 г 20.0 (18.4 мл) 0.1 г до 100 мл

0.06 г 0.02г до 100 мл Состав 4 0.2 г 20.0 г(18.4 мл) 0.2 г 0.06 г 0.02 г до 100 мл Состав 6 0.2 г 20.0 г (18.4 мл) 0.2 г до 100 мл Состав 8 0.2 г 20.0 г(18.4 мл) 0.2 г до 100 мл

В качестве упаковки для глазных капель ортофена составов 1-4 использованы флаконы из дрота для лекарственных средств, укупоренные резиновыми пробками и металлическими колпачками под обкатку;, для глазных капель составов 5-8 - полиэтиленовые тюбик-капельницы..

Стабильность глазных капель ортофена 0.Т и 0.2 % в процессе длительного хранения. Исследование стабильности глазных капель ортофена в 2-х видах упаковки проводили в условиях комнатной температуры (293 К) и методом «ускоренного старения» (303 К). Критериями стабильности служили: изменение внешнего вида раствора, отсутствие механических включений, концентрация ортофена и консервантов, изменение значения рН, вязкость для пролонгированных капель и стериль-

ность. Для обнаружения возможных продуктов деструкции ортофена использовали метод ТСХ (5 систем). Контроль глазных капель в стеклянных флаконах осуществляли в момент изготовления и далее через 1, 4, 16, 21 и 27 мес. Глазные капли ортофена в полиэтиленовых тюбик-капельницах анализировали в момент изготовления и далее через 4, 16 и 25 мес. Результаты исследований представлены в табл.1, 2 и 3.

Результаты исследования свидетельствуют о стабильности разработанных глазных капель в процессе длительного хранения в естественных условиях и методом «ускоренного старения». Глазные капли, хранившиеся во всех режимах, оставались бесцветными, прозрачными , стерильными. Изменение рН, количество ортофена и вязкость для пролонгированных капель не превышают допустимые нормы отклонений. Хроматогра-фическим анализом не обнаружено продуктов деструкции или взаимодействия компонентов глазных капель.

Таблица 1. Результаты изучения стабильности глазных капель ортофена в стеклянных флаконах в процессе длительного хранения.

Время Внешний Условия хранения Механические

анализа, мес ВИД Есте ственные 303 К включения,

раствора рН найдено ортофена, % РН найдено ортофена, % стерильность Вязкость (для пролонгир)

день изготовления бесцветный прозрачный 7.2 Еоратная 0.2042 (100 %) 7.2 буферная 0.1984(100%) система соответствует нд

1 7.2 100.02+0,36% 7.2 98.65+0,24 %

16 7.2 100.10 ±0,48% 7.2 100.10+0,29% II

27 7.2 99.62+0,39 % 7.2 101.46 ±0,34%

день изготовления бесцветный прозрачный 7.2 0.1067(100%) 7.2 0.0923(100%) соответствует нд

1 7.2 98.29+ 0,57% 7.2 100.06+0,29%

16 7.2 100.98+0,48 % 7.2 101.51+0,51%

27 и 7.2 100.09 +0,27% 7.2 101.45 ±0,18%

Полиглюкин

день изготовления бесцветный прозрачный 6.8 0.2046(100%) 6.8 0.1998(100%) соответствует нд

1 6.8 101.71+0,38% 6.8 102.70+0,37% м

16 6.8 103.15 ±0,29% 6.8 100.00 +0,24%

27 6.8 100.49 ±0,27% 6.8 98.74 ±0,28%

день изготовления бесцветный прозрачный 6.8 0.1164(100%) 6.8 0.1099(100%) соответствует нд

1 6.8 98.10 ±0,31% 6.8 102.63+0,34%

16 6.8 97.73 +0,51% 6.8 100.36 ±0,24%

27 6.8 98.18 ±0,41% 6.8 98.03 ±0,35%

Таблица 2. Содержание консервантов в глазных каплях ортофена

Внешний Условия хранения Механические

Вэсмл вид Есге ственные 303 К включения,

анализа, мес раствора рН найдено консервантов, % рн найдено консервантов, % стерильность

Боратная буферная система

день изгоговления бесцветный прозрачный 7,2 0.0834(100%) 7,2 0.0794 (100 %) соответствует нд

1 7,2 99.61+0,49% 7,2 98.64 ±0,27%

16 7,2 100.64 ±0,57% 7,2 101.64 ±0,29%

27 _" _ 7,2 99.14 ±0,29% 7,2 98.49 ±0,83% _ " _

Полиглюкин

день изготовления бесцветный прозрачный 6.8 0.0864(100%) 6.8 0.0819(100%) соответствует нд

1 6.8 98.56 ±0,58% 6.8 100.76+0,39% II _

16 . _ 6.8 98.76+0,51% 6.8 99.72 ±0,67%

27 6.8 98.46 +0,48% 6.8 98.19 ±0,18% II _

Таблица №3. Результаты изучения стабильности глазных капель ортофе-на 0.1 и 0.2 % в тюбик-капельницах.

Время Внешний Условия хранения Механические

анализа, мес вид Есте ственные 303 К включения ,

раствора рН найдено орто-фена, % Р н найдено орто-фена, % стерильность вязкость (для пролонгир)

день | изготовления бесцветный прозрачный 7.2 Коратная 0.0984 (! 00%) 7.2 буферная 0.0984 (100 %) системе соответствует нд

; 4 7.2 99.69 ±0,37% 7.1 102.03+0,52%

16 7.2 101.42 ±0,49% 7.1 107.31 ±0,60%

25 7.2 104.49 ±0,27% 7.1 109.75 ±0,43%

день изготовления бесцветный прозрачный 7.2 0.1926(100%) 7.2 0.2067(100%) соответствует ВД

4 7.2 100.94 ±0,31% 7.1 101.94 ±0,61%

| 16 7.2 103.16 ±0,63% 7.1 105.91 +0,37%

25 7.2 103.94 ±0,27% 7.1 108.12 ±0,67%

день изготовления бесцветный прозрачный 6.8 Попигпюкин 0.1294(100%) 6.8 0.1173 (100%) соответствует НД

4 6.8 100.79 ±0,46% 6.7 102.73+0,41% »

16 6.8 102.76 ±0,72% 6.8 103.19 ±0,37%

25 6.8 103.94 ±0,41% 6.8 105.12 ±0,56%

день изготовления бесцветный прозрачный 6.8 0.2046(100%) 6.8 0.1973 (100%) соответствует ВД

4 6.8 101.26 ±0,46% 6.8 102.12 ±0,48%

16 6.8 103.15 ±0,49% 6.8 104.01 ±0,34%

25 6.8 103.79 +0,16% 6.8 105.11 +0,62% ...

При хранении тюбик-капельниц в естественных условиях и при повышенной температуре наблюдается уменьшение их массы (табл.4) с одновременным увеличением концентрации раствора ортофена. Это объясняется явлением проницаемости растворителя через полимерную упаковку, что не противоречит сведениям литературы. С повышением экспериментальной температуры проницаемость воды возрастает и наблюдается более значительное увеличении концентрации лекарственного вещества. Однако количественное содержание ортофена укладывается в допустимые нормы отклонений для растворов этих концентраций (табл.

3).

Таблица 4.Массы тюбик-капельниц, глазных капель ортофена 0.1 и 0.2 %, в процессе хранения

Время Масса тюбик- капельниц, г (М±ш)

анализа, Глазиые капли

мсс боратная буфер пая система поли ГЛЮК1Ш

естественные условия. 303 К естественные условия. 303 К

день изготовления. 2,2046 ±0,0193 2,1128_±0,0497 1,9914 ±0,0734 2,0559 ±0,0217

4 2,1472 ± 0,0547 1,9946 ±0,0185 1,9813 ±0,0719 2,0193 ±0,0731

16 2,1272 + 0,0435 1,9728 ±0,0371 1,9537 ±0,0192 1,9971 ±0,0378

25 2,1096 + 0,0323 1,9321 +0,0679 1,9438+0,0766 1,9713 ±0,0914

Из данных табл. 4, видно масса тюбик-капельниц в процессе хранения в естественных условиях уменьшилась в среднем на 4,30 %, масса же тюбик-капельниц при хранении при 303 К - в среднем на 8.55%. Масса тюбик-капельниц содержащих пролонгированные глазные капли ортофена в процессе хранения в естественных условиях снижается в среднем на 2,39 %, а при 303 К - в среднем на 4,11 %, что в обоих случаях не отразилось на качестве капель.

Специфическая активность и переносимость глазных капель ортофена. Изучение специфической активности глазных капель ортофе-на 0.1 и 0.2 % проводили в ГНИИ по стандартизации и контроля качества лекарственных средств Минздрава РФ в лаборатории фармакологии при консультации с зав. лабораторией канд. биол. наук Н.П. Неугодовой, используя кроликов массой 3.000 ± 0.2 кг породы Шиншилла - животных наиболее адекватных задачам исследования. Эксперименты проводили на 30-ти кроликах по методики Mauro Campos и др. на модели острой воспалительной реакции, вызванной путем снятия многоклеточного эпителия глаза под анестезией без соблюдения условий асептики. Аналогом при исследовании глазных капель ортофена были глазные капли Наклоф 0.1 % фирмы CIBA Vision, Франция (1-я группа кроликов), 2-я группа получала капли ортофена 0,1 % на боратной буферной системе, 3-я - капли ортофена 0,1 % на полиглюкине, 4-я - капли 0,2 % на боратной буферной системе и 5-я - капли ортофена 0.2 % на полиглюкине. Ин-тактным контролем служила 6-я группа: кроликам инсталлировали изотонический раствор натрия хлорида. Признаки воспаления контролировали визуально при интенсивном боковом освещении сфокусированным пучком света. Кроликов осматривали ежедневно, фиксировали состояние дефекта роговицы, ее прозрачность, состояние склеры и слизистой поверхности полости конъюнктивы, реакцию зрачков на свет, измеряли массу животных и отмечали их поведение во время эксперимента.

Результаты исследований позволили заключить, что инсталляция глазных капель ортофена 0.2 % на боратной буферной системе у кроликов приводила к четкому сокращению всех признаков воспалительного процесса, реэпитализация поврежденной роговицы наступала в среднем на 3-4-е сут (визуальный контроль). Капли ортофена 0.2 % на полиглюкине снимали основные показатели воспалительного процесса на 2-е сут

после начала лечения. Реэпитализация поврежденной роговицы наступала в 2 раза скорее по сравнению с ^пролонгированными каплями. Иные результаты получены у кроликов контрольной группы. Признаки воспаления отмечались на 3-4-е сут. Инъекция склер, наличие экссудата и небольшой отек оставались в течение 6-ти сут. Реэпитализация раневого дефекта наступала в среднем только на 7-е сут. Результаты использования глазных капель ортофена 0.1 % выявило четкое сокращение всех признаков воспаления, но на 1,5 сут позднее, по сравнению с 0.2 % каплями. При использовании глазных капель Наклоф 0.1% основные показатели воспаления исчезли на только 4-5 сут. от начала лечения.

8

ь

и

Е 5

Ч

I 4

Рис. 3. Время полного исчезновения симптомов воспалительного процесса глаза

¿1

1*1

гЬ

гЬ

2 3 4 5

Группы животных

Группы кроликов, получавши глазные капли ортофена:

1 - Наклоф 0.1% (аналог);

2 - на боратной буферной систеи (0.1 %);

3 - на полиглюкине (0.1 %);

4 - на боратной буферной систел (0.2 %);

5 - на полиглюкине (0.2 %);

6 - изотонический раствор натр! хлорида (интактный контроль)

Для количественной оценки активности капель использован кумулятивный альтернативный показатель: время, необходимое для полного исчезновения симптомов воспалительного процесса глаза. Специфическая активность глазных капель ортофена 0.1 и 0.2 % , также и пролонгированных оценивалась в сравнении с аналогом (рис. 3). Эффектов-

ность глазных капель ортофена 0.1 % короткого действия практически не отличалась от аналога, эффективность же капель 0.2 % на боратной буферной системе в 1.2 раза превышала его. Глазные капли 0.1 % на поли-глюкине были активнее аналога в 1.3 раза, а капли 0.2% - в 1.6 раза.

Результаты свидетельствуют об эффективности глазных капель ортофена при лечении экспериментального травматического воспалительного повреждения роговицы. Активность пролонгированных глазных капель выше, чем капель на боратной буферной системе, при дозе в 2 раза меньше. Это - по-видимому, объясняется наличием полиглюкина, который обеспечивает более длительное нахождение ортофена в зоне повреждения, его регенерирующим действием и вязкостью раствора. Аналогичные результаты получены и при исследовании глазных капель в полиэтиленовых тюбик-капельницах.

При определении биологической безвредности (отсутствие местно-раздражающего, алл ер тезирующего и общетоксического действий) использована методика Международной фармакопеей. В результате не установлено патологических отклонений со стороны век, радужки по сравнению с контрольной группой кроликов. Ежедневный визуальный контроль не выявил каких-либо изменений тканей глаза опытной и контрольной групп. Массы тела и поведение всех животных оставались в норме, что свидетельствовало об отсутствии общетоксического действия глазных капель ортофена.

ВЫВОДЫ

1. Теоретически обоснована технология 4-х составов глазных капель ортофена 0.1 и 0.2 % концентрации на боратном буферном растворителе и полиглюкине. В качестве антиоксидантов использованы натрия тиосульфат (0,05 - 0,2 %) и трилон Б (0,05 - 0,1 %), консерванты - нипагин (0,06 %) и нипазол (0,02 %), сорастворитель пропиленгликоль.

2. Разработаны составы и технология глазных капель ортофена 0.1 и 0.2 % для полиэтиленовых тюбик-капелышц, в том числе и пролонгированных. Из составов непролонгированных глазных капель исключены консерванты, что дает возможность использования их при хирургических вмешательствах на тканях глаза и в детской практике.

3. Разработана хроматоспектрофотометричсская методика количественного определения ортофена и консервантов (нипагин, нипазол) в глазных каплях. Относительная ошибка определения ортофена составляет ±1,58 % и консервантов ±1,69 %. Модифицирована фармакопейная ТСХ методика определения посторонних примесей, путем замены метанола Fia этиловый спирт, исключением ледяной кислоты уксусной и изменением количеств наносимых проб. Предел обнаружения составляет 0.05 мкг.

4. Глазные капли ортофена, изготовленные на полиглюкине, обладают выраженным пролонгирующим действием. Максимальное высвобождение ортофена в диализат достигается на 5-6 ч от начала эксперимента. Высвобождение вещества происходит более плавно и продолжительнее, чем из глазных капель на боратной буферной системе и до 8-ми часов поддерживается на высоком уровне.

5. Глазные капли ортофена 0.1 и 0.2 % концентрации стабильны по всем показателям,соответствующим НД в течение 27 мес (время наблюдения). Количество ортофена (0.0900 - 0.1100; 0.1900 - 0.2100) и консервантов (0.0720 - 0.0880), значение рН, вязкость пролонгированных глазных капель укладываются в допустимые нормы отклонений. Капли остаются бесцветными, прозрачными и стерильными, и соответствуют требованиям ГФ XI и ряда зарубежных фармакопей. Время безопасного использования глазных капель после вскрытия флаконов при моделировании их использования составляет в 30 сут.

6. Капли ортофеиа 0.1 и 0.2% в полиэтиленовых тюбик-капелышцах стабильны в течение 25 мес при хранении в естественных условиях (время наблюдения) и методом "ускоренного старения". Глазные капли остаются прозрачными, бесцветными и стерильными, в них отсутствуют механические включения. Количественное содержание ортофена (0.0900 - 0.1100; 0.1900 - 0.2100) и вязкость для пролонгированных составов укладывается в допустимые нормы отклонений. Время безопасного использования глазных капель (моделирование использования) при хранении в естественных условиях составляет 3 сут, в условиях холодильника - 7 сут.

7. Установлено уменьшение массы тюбик-капельницы с одновременным увеличением концентрации ортофена при хранении в естественных условиях и в условиях повышенной температуры. Увеличение концентрации ортофена в непролонгированных глазных каплях составило в среднем 4.49 %, при 303 К - 9,8 %. Увеличение концентрации ортофена для глазных капель на полиглюкине при естественных условиях составил среднем 3.94 %, а для повышенной температуры (303 К) - 5.12 %. Но во всех случаях не превышало допустимых пределов отклонения для этих концентраций.

8. Глазные капли ортофена 0.1 и 0.2 % обладают выраженным противовоспалительным и регенерирующим действиями при травматическом воспалительном повреждении роговицы. Эффективность разработанных глазных капель 0.1 % на боратной буферной системе не отличалась от глазных капель французской фирмы CIBA Vision «Наклоф 0.1 %» (аналог). Капли 0.2 % на том же растворителе 1,2 раза эффективнее аналога. Глазные капли ортофена 0.1 % на полиглюкине превышают эффективность аналога в 1,3 раза, а глазные капли 0.2 % на том же растворителе - в 1,6 раза. Капли при длительной инсталляции не обладают местно-

раздражающим , аллергизирующим действием. Общетоксического действия не установлено.

9. Подготовлены проекты ВФС на глазные капли ортофена 0.1 и 0.2 % короткого и длительного действия.

По теме диссертации опубликованы следующие работы.

1 Иноземцева Н.В., Т.С. Кондратьева, С.Ю. Вергазова, Т.В. Денисова Разработка технологии глазных капель ортофена 0.1 и 0.2%. // Фармация- 1998 - №6 - С.19-21

2. Иноземцева Н.В., Вергазова С.Ю., Денисова Т.В. Стабильность растворов ортофена 0.1 и 0.2 % концентрации.// Клинические и экспериментальные исследования в медицине: матер, конф. молодых ученых - Суздаль. -1993. - С.49-50.

3. Иноземцева Н.В., Вергазова С.Ю., Денисова Т.В. Высвобождение ортофена из глазных капель в опытах in vitro. // Клинические и экспериментальные исследования в медицине: матер, конф. - Москва. - 1994. - т.2. -С. 34-35.