Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Совершенствование методов анализа лекарственных средств, обладающих противовоспалительной активностью

На правах рукописи

003482850

Артасюк Евгения Михайловна

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ОБЛАДАЮЩИХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Улан-Удэ -2009

003482850

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России

Научный руководитель:

доктор химических наук, профессор Илларионова Елена Анатольевна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Николаева Галина Григорьевна доктор химических наук, профессор Корчевин Николай Алексеевич

Ведущая организация: ГОУ ДПО «Иркутский государственный институт усовершенствования врачей» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ

Защита состоится « 3 » декабря 2009 г. в 16 00 час, на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук у-с Хобракова В.В.

Ж.;-

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из важных проблем фармацевтической науки и практики является разработка новых и совершенствование существующих методов контроля качества лекарственных средств.

Воспалительные и дегенеративные заболевания суставов и позвоночника, артриты, артрозы и переартриты различных локализаций находятся на четвертом месте по распространенности после болезней кровообращения, дыхания и пищеварения. В Российской Федерации, согласно официальным статистическим данным, ежегодно в лечебно-профилактические учреждения обращается около 11 млн. человек с заболеваниями опорно-двигательного аппарата.

Объектами настоящего исследования выбраны нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, производные фенилуксусной и фенилпропионовой кислоты (натрия диклофенак, ибупрофен, кетопрофен), нитробензола (нимесулид), а также двухкомпонентные сочетания, содержащие ибупрофен, парацетамол и кодеин.

Критический анализ данных литературы и нормативной документации показал, что методы количественного анализа исследуемой группы препаратов несовершенны и не позволяют объективно оценить их качество. Так, количественное определение лекарственных веществ проводится титриметрическими методами: кислотно-основное титрование в среде ледяной уксусной кислоты, алкалиметрия в среде этанола и ацетона. Эти методы являются длительными, трудоемкими, токсичными, в некоторых случаях определение ведется по фармакологически неактивной части молекулы. Анализ лекарственных форм ряда препаратов исследуемой группы проводится спектрофотометрическим методом, отличающимся доступностью, простотой методик анализа, экспрессностью, высокой чувствительностью, воспроизводимостью, низкой токсичностью. Более широкому использованию данного метода для анализа субстанций препятствует отсутствие образцов сравнения. В связи с этим оптимизация спектрофотометрического определения объектов исследования с использованием внешних образцов сравнения является актуальной проблемой.

Важное место в фармацевтическом анализе занимает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Особенно актуально применение этого метода в анализе двухкомпонентных лекарственных форм ибупрофен-парацетамол, ибупрофен-кодеин. Методики, предложенные нормативными документами, требуют импортного дорогостоящего оборудования, недоступного для многих лабораторий, и большой ассортимент сорбентов, растворителей, элюентов. Поэтому исследования в этом направлении в настоящее время являются перспективными.

Целью настоящего исследования явилось совершенствование методов анализа нестероидных противовоспалительных лекарственных средств, производных фенилуксусной, фенилпропионовой кислоты и нитробензола, а также создание унифицированной методики анализа двухкомпонентных лекарственных форм «Ибуклин» и «Нурофен плюс».

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести изучение спектральных характеристик лекарственных средств исследуемой группы препаратов для оптимизации их спектрофотометрического определения с использованием внешних образцов сравнения.

2. Методами оптической спектроскопии исследовать спектральные характеристики внешних образцов сравнения; разработать унифицированные методики анализа исследуемой группы препаратов в субстанциях и лекарственных формах методом УФ-спектроскопии с использованием внешних образцов сравнения.

3. Разработать методики определения теста «растворение» и однородности дозирования твердых дозированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов методом одноволновой спектрофотометрии с использованием внешних образцов сравнения.

4. Оптимизировать условия и разработать методики количественного определения исследуемой группы препаратов в однокомпонентных лекарственных формах (таблетки, капсулы, раствор для инъекций) методом ВЭЖХ.

5. Провести сравнительную оценку методик количественного определения исследуемой группы препаратов в лекарственных формах методом ВЭЖХ и спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения.

6. Оптимизировать условия и разработать унифицированные методики количественного определения многокомпонентных таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» методами спектрофотометрии и ВЭЖХ.

Научная новизна и теоретическая значимость работы:

На основании исследования УФ - спектров поглощения и физико-химических свойств нестероидных противовоспалительных лекарственных веществ установлены оптимальные условия спектрофотометрического анализа (оптимальные значения рН, оптимальный растворитель, аналитическая длина волны, уравнение градуировочного графика) натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида, обеспечивающие максимальную правильность и воспроизводимость получаемых результатов.

Обоснован выбор внешних образцов сравнения калия феррицианида, никеля хлорида, калия хромата, калия дихромата для спектрофотометрического анализа исследуемых лекарственных средств.

Впервые разработаны унифицированные методики

спектрофотометрического определения нестероидных

противовоспалительных лекарственных средств с использованием внешних

образцов сравнения. В результате проведенной валидационной оценки методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.

Оптимизированы условия ВЭЖХ анализа натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в лекарственных формах.

Обоснована методика спектрофотометрического определения парацетамола в таблетках «Ибуклин» модифицированным методом Фирордта.

Оптимизированы условия разделения компонентов таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» методом ВЭЖХ.

Практическая значимость работы:

Разработаны методики количественного определения натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в субстанциях и лекарственных формах, методики определения однородности дозирования капсул кетопрофена, теста растворения таблеток ибупрофена, нимесулида, натрия диклофенака, кетопрофена и капсул кетопрофена спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения; разработаны методики количественного определения таблеток натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида, раствора для инъекций натрия диклофенака, капсул и раствора для инъекций кетопрофена методом ВЭЖХ, методика количественного спектрофотометрического определения парацетамола модифицированным методом Фирордта, методики количественного определения ибупрофена, парацетамола, кодеина в таблетках «Ибуклин», «Нурофен плюс» методом ВЭЖХ. Разработанные методики апробированы и внедрены в ОКК ОАО «Усолье - Сибирский химфармкомбинат» (г. Усолье-Сибирское), ОАО «Фармасинтез» (г. Иркутск), Центре сертификации и контроля качества лекарственных средств МЗ Республики Бурятия (г. Улан-Удэ), судебно-химическом отделении Иркутского областного бюро судебно-медицинской экспертизы (г. Иркутск), учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии ИГМУ. Получен 31 акт о внедрении и использовании результатов данной работы. Разработанные методики защищены патентно-лицензионными документами: получено 4 Патента РФ на изобретение № 2333490, № 2333483, № 2333488, № 2333489.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждались на VIII Международной школе-семинаре «Люминесценция и лазерная физика» (Иркутск, 2003 г.); 58-й, 60-й, 61-й, 62-й, 63-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2003, 2005, 2006, 2007, 2008 г.г.); научной конференции «Естествознание и гуманизм» (2004, 2005, 2007, 2008 г.г.); межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы фармации» (Рязань, 2006 г.); международной конференции «Прикладная оптика-2006» (Санкт - Петербург,

2006 г.); международной конференции «0птика-2007» (Санкт - Петербург,

2007 г.); научно-практической конференции (Ярославль, 2007 г.); юбилейной

научно-практической конференции «Фармацевтической службе Республики Бурятия - 80 лет» (Улан-Удэ, 2004 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 24 работы, в том числе 5 статей в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, и 4 патента РФ на изобретение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ИГМУ по проблеме «Контроль качества лекарственных средств с использованием современных методов анализа» (номер Госрегистрации 01.91.0008620) и соответствует направлению проблемной комиссии по фармации и фармакологии.

Основные положения, выносимые на защиту

- выбор внешних образцов сравнения для спектрофотометрического анализа натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида;

- результаты оптимизации условий и методики спектрофотометрического анализа с использованием внешних образцов сравнения натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в субстанциях и лекарственных формах, их валидационная оценка;

- оптимизация условий и методики ВЭЖХ натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в готовых однокомпонентных и многокомпонентных лекарственных формах, их валидационная оценка;

- сравнительная оценка методик количественного определения исследуемой группы препаратов в лекарственных формах методом ВЭЖХ и спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 190 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, 82 таблиц, 50 рисунков, списка литературы, включающего 223 источника, из них 74 на иностранных языках. В приложении представлены материалы по апробации и внедрению разработанных методик.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, определена научная и практическая значимость данной работы.

Первая глава представляет собой обзор отечественной и зарубежной литературы, нормативных документов, касающихся использования хроматографических, химических и физико-химических методов для контроля чистоты и количественного определения в субстанциях и лекарственных формах, производных фенилуксусной и фенилпропионовой кислоты и нитробензола, обладающих противовоспалительной активностью.

Во второй главе описаны объекты и методы исследований, используемые в диссертационной работе.

В третьей главе обоснованы условия спектрофотометрического определения ибупрофена и кетопрофена, выбраны наиболее оптимальные внешние образцы сравнения и разработаны методики количественного

определения этих препаратов в субстанциях и лекарственных формах, а также методики определения однородности дозирования и теста «растворение» их твердых лекарственных форм. Представлена валидационная оценка разработанных методик. Обоснована возможность использования модифицированного метода Фирордта для количественного определения таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс». Разработана методика количественного спектрофотометрического определения парацетамола в таблетках «Ибуклин» модифицированным методом Фирордта. Обоснованы условия хроматографического разделения и количественного определения парацетамола, ибупрофена и кодеина в таблетках «Ибуклин» и «Нурофен плюс» методом ВЭЖХ, разработаны методики анализа и приведена их сравнительная оценка с методиками спектрофотометрического и титриметрического анализа.

Четвертая глава посвящена обоснованию условий спектрофотометрического определения нимесулида, выбраны наиболее оптимальные внешние образцы сравнения (никеля хлорид и калия феррицианид) и разработаны методики количественного определения в субстанции и лекарственных формах, а также методики определения теста «растворение» таблеток. Представлена валидационная оценка разработанных методик.

В пятой главе обоснованы условия спектрофотометрического определения натрия диклофенака, выбора калия хромата в качестве оптимального внешнего образца сравнения и разработаны методики количественного определения натрия диклофенака в субстанции и лекарственных формах, а также методика определения теста «растворение» таблеток. Представлена валидационная оценка разработанных методик.

Шестая глава посвящена разработке методик количественного определения нимесулида, натрия диклофенака, ибупрофена и кетопрофена в лекарственных формах методом ВЭЖХ. Оптимизированы условия хроматографического анализа: выбор колонки, сорбента, условий градиентного элюирования, подбор подвижной фазы, температуры, объема пробы. Проведена сравнительная валидационная оценка методик анализа методом ВЭЖХ и спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Объекты и методы исследования

В работе использовали следующие методы: спектроскопия в УФ- и видимой области, электрохимические (рН-метрия), хроматографические (высокоэффективная жидкостная хроматография), математические и статистические. Спектральные исследования проводили на спектрофотометрах СФ-26, СФ-46, СФ-56 (РФ), «8ресогс1 М-40» (Германия) в кварцевых кюветах с длиной рабочего слоя 10 мм. рН растворов создавали растворами 0,1 М натрия гидроксида и 0,1 М кислоты хлороводородной в пределах рН от 1,1 до 13,0. Значение рН контролировали с помощью

иономера ЭВ-74 (РФ) со стеклянным индикаторным электродом. Электродом сравнения служил стандартный хлорсеребряный электрод. Растворимость таблеток определяли в приборе «Эрвека» (ФРГ) типа «вращающаяся корзинка». Хроматографические (ВЭЖХ) исследования проводили с использованием микроколоночного жидкостного хроматографа «Милихром А-02» (ЗАО «ЭкоНова», Новосибирск, РФ) с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором, снабженным стальной колонкой (75x2 мм), заполненной сорбентом Silasorb SPH С18 с размером частиц 5 мкм. Эффективность колонки - 4500 т.т. Температура колонки 35°С. Также использовали центрифугу «Eppendorf» (Германия), рН метр «Анион 4100» (РФ), ультразвуковую баню RK 100 «Bandelin electronic» (Германия).

Исследуемые образцы сравнения, а также используемые органические растворители, неорганические кислоты и щелочи отвечали требованиям ГОСТов и при необходимости подвергались дополнительной очистке по известным методикам.

Субстанции: натрия диклофенак, кетопрофен, ибупрофен, кодеин, парацетамол, нимесулид; лекарственные формы: 2,50% раствор для инъекций натрия диклофенака, таблетки натрия диклофенака по 0,025 г; 0,05 г и 0,1 г, таблетки ибупрофена по 0,20 г, таблетки нимесулида по 0,10 г, таблетки кетопрофена по 0,05 г; 0,10 г, 0,15 г, раствор кетопрофена, для внутримышечного введения 50 мг/мл, двухкомпонентные лекарственные формы, содержащие ибупрофен и парацетамол («Ибуклин») и ибупрофен и кодеин («Нурофен Плюс») отвечали требованиям НД.

2. Спектрофотометрический анализ лекарственных средств, производных фенилуксусной, фенилпропиоиовой кислот и нитробензола

Изучены спектры поглощения растворов натрия диклофенака, кетопрофена, ибупрофена, нимесулида в интервале рН 1,1 - 13,0 в области длин волн 220 - 400 нм, их стабильность при хранении и обоснован выбор оптимальных условий спектрофотометрического определения лекарственных средств, производных фенилуксусной, фенилпропионовой кислот и нитробензола (табл. 1).

В качестве внешних образцов сравнения нами использованы вещества неорганической и органической природы: калия дихромат, калия хромат, калия феррицианид, никеля хлорид, гуанин. Данные вещества широко применяются в аналитической практике в качестве реактивов, выпускаются химической промышленностью квалификации хч и чда, доступны, дешевы, на них имеются ГОСТы, регламентирующие их качество, содержание в них основного вещества определяется химическими методами и составляет не менее 99,9%.

Таблица 1

Условия спектрофотометрического определения лекарственных средств, производных фенилуксусной, фенилпропионовой кислот и нитробензола_

Лекарственное вещество рНопт Растворитель ^max» HM Образец сравнения ^-шах нм Растворитель Оптимальная область поглощения, нм

Ибупрофен 10,55 0,1М NaOH 259 264 Калия феррицианид 261±1 O.lMNaOH 255-267

Кетопрофен 1,13 12,50 ОДМ HCl 0,1М NaOH 259 261 Калия дихромат Калия феррицианид 257±1 350±1 261±1 0,IM HCl 0,IM NaOH 247-267 255-267

Нимесулид 6,20 95% спирт этиловый 297 Калия феррицианид 303±1 спирт этиловый 95% 290-316

7,50 вода очищенная 395 Никеля хлорид 393±1 вода очищенная 382-404

Натрия диклофенак 12,5 0,1М NaOH 276 Калия хромат 275±1 373±1 0,IM NaOH 264-286

Изучение спектров поглощения и стабильности растворов указанных соединений при варьировании значений рН от 1,0 до 13,0 позволило установить оптимальные области рН для использования данных соединений в качестве внешних образцов сравнения в спектрофотометрическом определении лекарственных средств. В табл. 1 представлены основные оптические характеристики образцов сравнения при оптимальных значениях рН. Для исследуемых соединений рассчитаны оптимальные области поглощения, в которых они могут быть использованы в качестве внешних образцов сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств (табл. 1). Выбор внешних образцов сравнения осуществляли, исходя из аналитической длины волны лекарственного вещества, подбора оптимального растворителя и оптимальной области поглощения образца сравнения. На основании определенных оптимальных условий спектрофотометрического определения исследуемой группы препаратов были разработаны унифицированные методики количественного определения действующих веществ с применением внешних образцов сравнения в субстанциях и готовых лекарственных формах.

Результаты спектрофотометрического определения исследуемых лекарственных веществ и их готовых лекарственных форм с применением внешних образцов сравнения и РСО, а также их сравнительная оценка представлены в таблицах 2, 3.

Результаты, полученные по разным внешним образцам сравнения и по РСО, являются сопоставимыми. Относительная погрешность определений не превышает 0,74% для субстанций и 1,78% для готовых лекарственных форм.

Таблица 2

Метрологические характеристики методик спектрофотометрического определения натрия диклофенака, кетопрофена, ибупрофена, нимесулида

Лекарственное средство Образец сравнения Метрологические характеристики (п=7,Р=95%)

Х,% S2 S SJ ДХ,% Е,% S,

Ибупрофен Калия феррицианид PCO 99,63 99,83 0,3273 0,0061 0,5721 0,0783 0,2162 0,0296 0,5298 0,0725 0,53 0,07 0,006 0,001

Кетопрофен Калия дихромат Калия феррицианид ОДМ NaOH Калия феррицианид 0,IM HCl PCO 100,47 100,55 100,28 99,93 0,5644 0,6434 0,3090 0,2435 0,7513 0,8021 0,5561 0,4935 0,2840 0,3032 0,2100 0,1865 0,6957 0,7428 0,5100 0,4600 0,70 0,74 0,51 0,46 0,008 0,008 0,006 0,005

Нимесулид Калия феррицианид Никеля хлорид PCO 99,67 99,77 99,89 0,2672 0,4071 0,6220 0,5169 0,6381 0,7887 0,1954 0,2412 0,2981 0,4787 0,5909 0,7303 0,48 0,59 0,73 0,005 0,006 0,008

Натрия диклофенак Калия хромат PCO 100,29 99,68 0,2340 0,3003 0,4838 0,5480 0,1828 0,2071 0,4480 0,5074 0,45 0,51 0,005 0,005

Таблица 3

Спектрофотометрическое определение некоторых противовоспалительных лекарственных веществ в лекарственных формах

Лекарственная форма, № серии Образцы сравнения Метрологические характеристики (п=7, Р=95%)

х,% S2 S S3t ДХ,% Е,% sr

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Таблетки ибупрофена по 0,2т, 2СТ Калия феррицианид 99,71 1,2748 1,1290 0,4267 1,0455 1,05 0,011

PCO ибупрофена 99,17 2,8157 1,6780 0,6342 1,5539 1,57 0,017

Капсулы кетопрофена по 0,05г, 470937 Калия феррицианид 99,92 3,7009 1,9238 0,7271 1,7814 1,78 0,019

PCO кетопрофена 99,79 2,9014 1,7033 0,6438 1,5773 1,58 0,017

Таблетки кетопрофена по 0,10т, 160106 Калия феррицианид 99,91 1,3072 1,1433 0,4321 1,0587 1,06 0,011

PCO кетопрофена 99,84 2,2931 1,5143 0,5724 1,4023 1,40 0,015

Таблетки кетопрофена по 0,15г, 11384031 Калия феррицианид 99,01 0,5763 0,7592 0,2869 0,7030 0,71 0,008

PCO кетопрофена 99,61 0,4415 0,6644 0,2511 0,6153 0,62 0,007

Раствор кетопрофена для инъекций 50мг/мл, 550807 Калия феррицианид 100,13 1,0613 1,0302 0,3894 0,9540 0,95 0,010

PCO кетопрофена 100,24 1,0154 1,0077 0,3809 0,9331 0,93 0,010

Таблетки нимесулида по 0,100т, В51208 калия феррицианид 98,64 0,5013 0,7080 0,2676 0,6557 0,66 0,007

Никеля хлорид 98,56 0,2168 0,4656 0,1760 0,4311 0,44 0,005

PCO нимесулида 9&,54 0,2529 0,5029 0,1901 0,4657 0,47 0,005

1 2 3 4 5 6 7 8 .9

Таблетки диклофенака натрия по 0,025г, 30105 Калия хромат 100,00 1,5467 1,2437 0,4700 1,1516 1,15 0,012

PCO натрия диклофенака 99,89 1,5200 1,2329 0,4660 1Д417 1,15 0,012

Таблетки диклофенака натрия по 0,05г, 461005 Калия хромат 100,00 2,6667 1,6330 0,6172 1,5122 1,51 0,016

PCO натрия диклофенака 100,57 1,8691 1,3671 0,5167 1,2660 1,26 0,014

Таблетки натрия диклофенака по 0,1г, 7780802 Калия хромат 100,43 1,5591 1,2486 0,4719 1,1562 1,15 0,012

PCO натрия диклофенака 100,98 1,2338 0,4198 1,0286 1,0286 1,02 0,011

2,5% раствор натрия диклофенака для инъекций, ОДУ 002 Калия хромат 101,49 1,4781 1,2158 0,4595 1,1258 1,11 0,012

PCO натрия диклофенака 100,80 1,0161 1,0080 0,3810 0,93 0,93 0,010

Следует отметить, что результаты количественного определения одного лекарственного вещества по разным внешним образцам сравнения практически не отличаются, поэтому в условиях заводских лабораторий и Центров контроля качества лекарственных средств можно применять наиболее доступный внешний образец сравнения.

Результаты сравнительной оценки разработанных и рекомендованных методик количественного определения лекарственных веществ представлены в табл. 4 (на примере ибупрофена и кетопрофена).

Таблица 4

Сравнительная оценка методик количественного определения ибупрофена и кетопрофена

(п = 7, t (P.fu, = 2,45, Р = 95%; F = (Р, f, f2 )га5„ = 8,47, Р = 99%)

Лекарственное вещество Наименование метода И X % s2 s Е.% F,u, t,bm Продолжительность анализа Число операций

Ибупрофен Спектрофото-

метрня по калия ферри-цианиду 100 99,63 0,3273 0,5721 0,53 1,24 1,71 17 6

Алкалиметрия 100 99,75 0,2645 0,5143 0,48 1,29 12 4

Кетопрофен Спектрофото-

метрия по калия ферри- 100 100,3 0,3090 0,5561 0,51 1,33 17 6

цианиду в 0,1 М HCl 1,24

Ацидиметрия 100 99,90 0,2496 0,4996 0,46 0,53 30 4

Приведенные результаты показывают, что методики спектрофотометрического определения и методики, рекомендованные нормативной документацией, дают правильные результаты (^„с^б,,) и не различаются по воспроизводимости (Рвыч<Ргабл). Разработанные методики можно предложить в качестве альтернативных к таковым нормативной документации. Преимуществом разработанных методик является возможность унификации количественного определения ибупрофена и кетопрофена в субстанциях и лекарственных формах.

Результаты валидационной оценки методик спектрофотометрического определения ибупрофена, кетопрофена, нимесулида и натрия диклофенака в субстанции свидетельствуют о пригодности предложенных методик (табл. 5).

Разработанные методики спектрофотометрического определения с использованием внешних образцов сравнения позволили с достаточной точностью провести определения однородности дозирования и теста «растворение» таблетированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов.

Таблица 5

Результаты валидационной оценки методик спектрофотометрического определения ибупрофена, кетопрофена, нимесулида и натрия диклофенака в субстанциях

Параметры Критерии валидности Результаты испытания

ибупрофен кетопрофен нимесулид натрия дикпофенак

Специфичность Специфична Специфична Специфична Специфична

Правильность ^выч ^ ^табл и, = 1,71, (1^=2,45), п=7 »,„,= 1,33, (1„бл=2,45), п=7 1»„ч=1,69, 1„ч = 0,77 (и =2,45), п=7 1«ыч= 1,01, (и, =2,45), п=7

Воспроизводимость 1^0 <2% 0,53% 0,51% 0,48% 0,73% 0,45%

Аналитическая область методики 98,5%-101,5% 99% -100,5% 99% -100,5% 98,5%-101,5% 99%-101%

Линейность результатов г >0,999 г = 0,9990; у=324,94х; г = 0,9993; у=634,69х, г = 0,9990; у=597,52х1 г = 0,9997; у=210,72х/ у=453,62х1 г = 0,9990; у=324,94х,

Методики спектрофотометрического определения с использованием внешнего образца сравнения апробированы и внедрены в практику работы ОКК ряда химико-фармацевтических комбинатов, а также Центров контроля качества лекарственных средств. Их научная новизна подтверждена Патентами РФ на изобретение № 2333490, № 2333483, № 2333488, № 2333489.

3. Сравнительная валидационная оценка методик спектрофотометрического и хроматографического анализа некоторых противовоспалительных лекарственных средств

Проведена сравнительная оценка результатов количественного определения ибупрофена, кетопрофена, нимесулида и натрия диклофенака,

полученных спектрофотометрическнм методом с использованием внешних образцов сравнения и методом ВЭЖХ.

Для ВЭЖХ анализа был выбран обращенно-фазный вариант хроматографии. Исследования проводили на отечественном микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром А-02» (ЗАО «ЭкоНова», Новосибирск).

При выборе условий хроматографирования добивались полного разделения ибупрофена, кетопрофена, нимесулида и натрия диклофенака и продуктов их деструкции. Учитывая, что молекулы исследуемых сорбатов полярны и, согласно теории Хорвата, будут незначительно «прижиматься» к гидрофобной поверхности сорбента в виду способности образовывать водородные связи с неполярными компонентами подвижной фазы, для них целесообразно использовать в качестве подвижной фазы воду с небольшими добавками ацетонитрила. Выбранный нами сорбент Silasorb SPH Cis является неэндкеппированным. Экранирование остаточных силанольных групп достигается путем закисления подвижной фазы в сочетании с повышением ее ионной силы. В качестве нейтральных солей для повышения ионной силы подвижной фазы применяют натрия и лития перхлораты, натрия или аммония сульфаты. В данной работе был выбран лития перхлорат, так как он, в отличие от других солей, хорошо растворяется в органических растворителях, не поглощает в УФ - области спектра и не обладает буферной емкостью, т.е. может использоваться для подвижной фазы во всем диапазоне рН. Полярный характер анализируемых соединений позволил выбрать подвижную фазу 0,2 М лития перхлорат - кислота ортофосфорная с рН 3,0 -ацетонитрил с линейным увеличением доли органического компонента.

Оптимальные условия хроматографического разделения: обращенная фаза Silasorb SPH CI8, элюирование градиентное, подвижная фаза: 0,2 М лития перхлорат - кислота ортофосфорная (рН 3,0) - ацетонитрил, линейный градиент ацетонитрила 5 - 50% (1-4 мин) и от 50 - 85% (5-12 мин) для ибупрофена; 5 - 80%, для натрия диклофенака, и 20 - 60% для кетопрофена и нимесулида (13,5 мин.), Т=35°С. Скорость элюента -150 мкл/мин.

Пики ибупрофена, диклофенака натрия, кетопрофена и нимесулида в выбранном элюенте симметричны.

Методом остановки потока были записаны УФ - спектры изучаемых веществ и определены их максимумы поглощения. Для регистрации УФ-спектров готовили стандартные растворы определяемых соединений с концентрациями 0,1 - 0,5 мг/мл. В качестве растворителя для приготовления стандартных растворов использовали метанол. Спектры регистрировали во время хроматографического анализа после остановки потока вблизи максимума пика (интервал длин волн 190 - 360 нм, шаг 2 нм). В качестве базовой для ибупрофена, натрия диклофенака и нимесулида выбрана длина волны 220 нм, для кетопрофена - 260 нм.

Времена удерживания ибупрофена, натрия диклофенака, кетопрофена, нимесулида составили 9,6, 13, 10 и 11 мин соответственно.

«Количественное определение исследуемых таблетированных лекарственных форм проводили методом внешнего стандарта. В качестве образцов сравнения использовали фармацевтические субстанции натрия диклофенака, кетопрофена, нимесулида, перекристаллизованные из метанола» содержание основного вещества в которых составляло не менее 99,9%. Расчеты выполняли с использованием компьютерного программного обеспечения «МультиХром» (ЗАО «Амперсенд», РФ).

Валидационная оценка разработанных методик представлена на примере модельных смесей таблеток нимесулида и кетопрофена с тремя уровнями концентраций нимесулида и кетопрофена соответственно (от 90 до 110%) от заявленного количества 0,1 г (табл. 6).

Таблица 6

Результаты валидационной оценки методик идентификации и количественного

определения нимесулида (1) и кетопрофена в таблетках(2)_

Параметры

Критерии валидности

Результаты испытаний

Специфичность

А260

А25<) ^

______ _______ А240

■А230

А220

4 б 8 10 12 Времй, мин

_

' АЗёо ......^

- А250 ^ 1

. АЙ0 '----------1

1 , ,-г-,-[ —,——г-1

2 4 _6 8 10 12

Время, N001

Пригодность хромзто-графической системы:

Сходимость инжекций

Эффективность колонки

Коэффициент ассиметрии пика

Критерий разделения пиков

= 0,2%

N не менее 2000 т.т.

Н.> 1,5

ЯЗЭ = 0,3%

Я, "2,0

Воспроизводимость

ЯБЭ < 2,0%

Правильность

ич= 1,40,

=2,45), п=7

и, = 0,80,

(Ье, =2,45), п=7

Аналитическая область методики

0,90мг/мл - 1,10мг/мл

0,45мг/мл - 0, 55мг/мл

Линейность результатов

г >0,990

г =0,9996 у = 32.775Х;

г =0,9991 у = 46.537х,

Стабильность раствора_

индивидуально

Данные таблицы 6 свидетельствуют о пригодности предложенных методик хроматографического анализа нимесулида и кетопрофена в таблетках.

Результаты количественного определения в лекарственных формах ибупрофена, натрия диклофенака, кетопрофена, нимесулида с применением метода ВЭЖХ приведены в таблице 7. Разработанные методики количественного определения лекарственных форм ибупрофена, натрия диклофенака, кетопрофена, нимесулида методом ВЭЖХ позволяют выполнять количественное определение ибупрофена, натрия диклофенака, кетопрофена, нимесулида в лекарственных формах одним методом в унифицированных условиях, что позволяет повысить воспроизводимость результатов определения, уменьшить трудоемкость и стоимость анализа. Результаты сравнительной оценки методик количественного определения действующих веществ в лекарственных формах спектрофотометрическим методом с применением внешних образцов сравнения, методом ВЭЖХ и по методике НД представлены в таблице 7.

Таблица 7

Результаты сравнительной оценки методов количественного определения действующих веществ в лекарственных формах спектрофотометрическим методом по внешним образцам сравнения, методом ВЭЖХ и по методике нормативного документа

Лекарственная форма, № серии метод количественного определения Метрологические характеристики (п=7, Р=95%)

Х.% S2 S s JC ДХ.% Е.% S,

2 3 4 5 6 7 8 9

Таблетки ибупрофена по 0,2г, 2УУ спектрофотометрия по катия феррицианиду 99,71 1,2748 1,1290 0,4267 1,0455 1,05 0,011

алкалиметрия 99,45 2,9751 1,7248 0,6519 1,5972 1,61 0,017

ВЭЖХ 99,30 1,2949 1,1380 0,4301 1,0538 1,06 0,011

Таблетки нимесулида по 0,1 ООг, В51208 спектрофотометрия по калия феррицианиду 98,64 0,5013 0,7080 0,2676 0,6557 0,66 0,007

спектрофотометрия по никеля хлориду 98,56 0,2168 0,4656 0,] 760 0,4311 0,44 0,005

спектрофотометрия по PCO нимесулида 98,54 0,2529 0,5029 0,1901 0,4657 0,47 0,005

ВЭЖХ 99,59 0,5989 0,7739 0,2925 0,7166 0,72 0,008

Таблетки натрия диклофенака по 0,025г, 30105 спектрофотометрия по катия хромату 100,00 1,5467 1,2437 0,4700 1,1516 1,15 0,012

спектрофотометрия по PCO натрия диклофенака 99,89 1,5200 1,2329 0,4660 1,1417 1,15 0,012

ВЭЖХ 100,17 1,8191 1,3487 0,5098 1,2489 1,25 0,013

2,5% раствор натрия диклофенака для инъекций, 002 спектрофотометрия по калия хромату 101,49 1,4781 1,2158 0,4595 1,1258 1,11 0,012

спектрофотометрия по PCO натрия диклофенака 100,80 1,0161 1,0080 0,3810 0,93 0,93 0,010

ВЭЖХ 101,06 3,1695 1,7803 0,6729 1,6486 1,63 0,017

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Капсулы кетопрофена по 0,05г, 470937 спектрофотометр!!* по калия феррицианиду 99,92 3,7009 1,9238 0,7271 1,7814 1,78 0,019

спектрофотометрия по PCO кетопрофена 99,79 2,9014 1,7033 0,6438 1,5773 1,58 0,017

ВЭЖХ 99,67 3,1224 1,7670 0,6679 1,6363 1,64 0,018

Раствор кетопрофена для инъекций 50мг/мл, 550807 спектрофотометрия по калия феррицианиду 100,13 1,0613 1,0302 0,3894 0,9540 0,95 0,010

спектрофотометрия по PCO кетопрофена 100,24 1,0154 1,0077 0,3809 0,9331 0,93 0,010

ВЭЖХ 100,59 1,2298 1,1090 0,4191 1,0269 1,02 0,011

Из представленных данных следует, что при спектрофотом етрич еском определении исследуемых веществ в лекарственных формах с применением внешних образцов сравнения, методом ВЭЖХ и по методике нормативного документа получены близкие результаты. Относительная ошибка определения ибупрофена, натрия диклофенака, кетопрофена, нимесулида в лекарственных формах не превышает 1,89%.

Сравнительную валидационную оценку разработанных методик проводили по критериям, представленным в табл. 8.

Таблица 8

Сравнительная валидационная оценка разработанных методик

Критерии Результаты

СФМ по внешним образцам сравнения ВЭЖХ

Специфичность методика специфична методика специфична

Правильность 1аыч = 0,21,(1табл=2,45),п=7 W = 0,8,(tTa6i =2,45),п=7

Прецизиозность не более 1,06% не более 1,71%

F = (Р, f, f2 )табл = 8,47, Р = 99%, F„bi4 = 0,62

Линейность результатов г = 0,9993; y=634,69xi г = 0,9991 у = 46,537х;

Сравниваемые методики оказались хорошо воспроизводимыми и правильными, так как рассчитанный критерий Фишера меньше табличного. Во всех случаях рассчитанный коэффициент Стьюдента меньше табличного, что свидетельствует о сходимости результатов. Методики анализа не различаются по воспроизводимости. Однако, в качестве оптимальной выбирается та методика, у которой Б2 имеет меньшее значение [32], т. е. в данном случае оптимальной является методика спектрофотометрического определения по внешним образцам сравнения. Кроме того, спектрофотометрический метод не требует сложного дорогостоящего оборудования, более прост в выполнении, не требует дорогостоящих реактивов. В НД методики спектрофотометрического и хроматографического (ВЭЖХ) анализа могут быть включены как альтернативные.

4. Разработка методик количественного определения двухкомпонентных лекарственных форм, содержащих ибупрофен

Несмотря на широкое внедрение современных физико-химических методов в практику работы аналитических лабораторий, анализ сложных лекарственных форм, содержащих два и более компонента, представляет собой трудную задачу.

В качестве объектов исследования были выбраны таблетированные двухкомпонентные лекарственные формы: «Ибуклин», содержащий 400 или 100 мг ибупрофена и 325 или 125 мг парацетамола соответственно, «Нурофен плюс», содержащий 200 мг ибупрофена и 10 мг кодеина.

Ибупрофен, кодеин и парацетамол обладают способностью избирательно поглощать в УФ - области спектра, в связи с этим была изучена возможность использования спектрофотометрии для их количественного определения.

Изучение спектров поглощения ибупрофена, парацетамола и кодеина при различных значениях рН позволило выбрать в качестве оптимального растворителя 0,1 М раствор натрия гидроксида. В выбранном растворителе спектры поглощения веществ перекрываются, что делает невозможным применение одноволнового анализа. Поэтому для разработки спектрофотометрических методик анализа компонентов таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» был применен метод наименьших квадратов, реализуемый в варианте модифицированного метода Фирордта.

Использование метода Фирордта для количественного определения таблеток «Нурофен Плюс» невозможно, так как содержание кодеина в лекарственной форме в 20 раз меньше по сравнению с ибупрофеном. Метод Фирордта в данном случае даст значительную ошибку и его применение не представляется возможным. Поэтому дальнейшие исследования таблеток «Нурофен Плюс» проводили с помощью ВЭЖХ. Определение ибупрофена в таблетках «Ибуклин» также оказалось невозможным, так как вклад ибупрофена в общую оптическую плотность составляет меньше 50%. Это связано с низким коэффициентом поглощения ибупрофена по сравнению с парацетамолом. В конечном разведении фоновое поглощение ибупрофена составляет менее 0,5% по сравнению с поглощением парацетамола. Однако его спектроаналитические данные были включены в расчетную формулу и ибупрофен был внесен в раствор стандартного образца.

Результаты спектрофотометрического анализа парацетамола в таблетках «Ибуклин» модифицированным методом Фирордта представлены в таблице 9. Из представленных данных видно, что относительная погрешность определения парацетамола в таблетках «Ибуклин» ММФ составляет 1,79 %. Следовательно, разработанная методика дает хорошо воспроизводимые результаты, кроме этого она проста в выполнении, не требует дорогостоящего оборудования и реактивов.

Таблица 9

Результаты спектрофотометрического анализа парацетамола в таблетках «Ибуклин» (сер. А50191) модифицированным методом Фирордта

Содержание в таблетках парацетамола, г Найдено, г Метрологические характеристики ' (п=7, Р=95%)

S2 S Sx ДХ Е% S,

0,12500 0,12110 96,88 3,5088 1,8732 0,7080 1,7346 1,79 0,019

Определение ибупрофена проводили алкалиметрическим методом, после экстрагирования его из таблеток эфиром. Результаты представлены в таблице 10. Из таблицы видно, что содержание ибупрофена в таблетках «Ибуклин» соответствует НД, относительная ошибка не превышает 1,63%.

Таблица 10

Результаты алкалиметрического определения ибупрофена _в таблетках «Ибуклин» (сер. А50191)_

Содержание в таблетках ибупрофена, г Найдено, г Метрологические характеристики (п=7, Р=95%)

S2 S S3? ДХ Е% Sr

0,10000 0,10034 100,34 2,4695 1,5715 0,5940 1,4552 1,45 0,016

В связи с тем, что спектрофотометрическим методом удалось определить только парацетамол в таблетках «Ибуклин», нами была исследована возможность количественного определения таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс», содержащих ибупрофен, парацетамол и кодеин, с помощью унифицированных методик методом ВЭЖХ. Для анализа был выбран обращено-фазный вариант хроматографии. Условия хроматографирования, найденные экспериментально, представлены в таблице 11.

Таблица 11

Условия хроматографирования ибупрофена, парацетамола и кодеина _в таблетках «Ибуклин» и «Нурофен плюс»_

Прибор «Милихром А-02»

Колонка 75x2 мм, Силасорб С;« (о5 мкм)

Подвижная фаза элюент А -0,2 М лития перхлорат - кислота ортофосфорная (рН 3,0), элюент Б - ацетонитрил

X, нм 220, 230, 240,250

Скорость потока 150 мкл/мин

Объем пробы 2 мкл

Время анализа, мин. 12

Температура термостата колонки 35 °С

Градиент А:Б 95:5->50:50 (1-4 мин.),50:50-> 15:85% (5-12 мин) в выбранных условиях

Времена удерживания парацетамола, кодеина и ибупрофена составляют 4,6, 5,2 и 9,6 мин, соответственно. Количественное определение исследуемых двухкомпонентных лекарственных форм проводили методом внешнего стандарта. Результаты количественного определения парацетамола,

кодеина и ибупрофена в готовых лекарственных формах, найденные по разработанной методике, приведены в таблице 12.

Разработанные унифицированные методики количественного определения таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» методом ВЭЖХ позволяют выполнять количественное определение данных лекарственных форм одним и тем же методом в сходных условиях, повысить воспроизводимость результатов определения, уменьшить трудоемкость, стоимость и погрешность анализа.

Сравнительная оценка результатов анализа таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» спектрофотометрическим методом и методом ВЭЖХ показала, что оба метода дают хорошо воспроизводимые результаты, погрешность определения спектрофотометрическим методом составляет 2,33%, а методом ВЭЖХ - 2,85%.

Однако, методика анализа методом ВЭЖХ позволяет провести анализ в одной навеске, что повышает объективность анализа. Методики же анализа спектрофотометрическим и титриметрическим методом менее дорогостоящие и токсичные.

Таблица 12

Результаты количественного определения ибупрофена, парацетамола и кодеина в таблетках «Ибуклин» и «Нурофен Плюс» методом ВЭЖХ

Лекарственная форма, № серии Содержание в лекарственной форме, г Найдено, г Метрологические характеристики (п>7, Р=95%)

X,% в2 Б вЗс ДХ,% Е,% Б,

Таблетки «Ибуклин» А50191 Ибупрофен 0,10000 0,10012 100,12 4,1332 2,0330 0,7684 1,8826 1,88 0,020

Парацетамол 0,12500 0,12086 96,69 2,8470 1,6873 0,6377 1,5625 1,62 0,017

«Нурофен Плюс» 062123 Ибупрофен 0,20000 0,19962 99,81 8,7304 2,9547 1,1168 2,74 2,74 0,030

Кодеин 0,01000 0,010040 100,40 9,6033 3,0983 1,1710 2,87 2,85 0,031

Следовательно, обе методики анализа могут быть включены в НД в качестве альтернативных. В зависимости от оснащения аналитической лаборатории и экономических возможностей выбираются наиболее доступные методики анализа.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны оптимальные условия спектрофотометрического определения (оптимальные значения рН, оптимальный растворитель, аналитическая длина волны, уравнение градуировочного графика, выбор внешних образцов сравнения) натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида. Установлено, что для количественного определения данных препаратов методом одноволновой спектрофотометрии существует несколько внешних образцов сравнения, что позволяет аналитическим лабораториям осуществлять выбор образцов сравнения.

2. Разработаны методики спектрофотометрического количественного определения натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в субстанциях и лекарственных формах с использованием внешних образцов сравнения. Погрешность определения для субстанции не превышает 0,74 %, для лекарственных форм - 1,78 %.

3. Определены оптимальные условия хроматографического анализа натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида и разработаны унифицированные методики их количественного определения в лекарственных формах методом ВЭЖХ.

4. Проведена сравнительная оценка методик количественного определения натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида, рекомендуемых НД, методом ВЭЖХ и спектрофотометрическим методом по внешним образцам сравнения. Показано, что методики спектрофотометрического определения по внешним образцам сравнения не уступают по точности и воспроизводимости, отличаются доступностью, экспрессностью и отсутствием высокотоксичных реактивов.

5. Разработаны методики определения теста «растворение» и однородности дозирования твердых дозированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов методом одноволновой спектрофотометрии с использованием внешних образцов сравнения.

6. Разработана методика спектрофотометрического определения парацетамола в таблетках «Ибуклин» модифицированным методом Фирордта. Погрешность определения не превышает 2,33 %.

7. Разработаны унифицированные методики количественного определения компонентов таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» методом ВЭЖХ. Погрешность определения не превышает 2,85 %.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Илларионова Е.А. Оптические характеристики внешних образцов сравнения для спектрофотометрии / Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский, Е.М. Артасюк // Труды VIII Международной школы-семинара «Люминесценция и лазерная физика». - Иркутск: ИГУ, 2003. -С. 87-93.

2. Илларионова Е.А. Внешние образцы сравнения лекарственных средств в спектрофотометрическом анализе / Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский, Е.М. Артасюк // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: материалы 58-й межрегион, конф. по фармации и фармакологии. — Пятигорск, 2003. - С. 206-208.

3. Артасюк Е.М. Разработка методики однородности дозирования таблеток пиразидола по 0,025 г / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова // Фармацевтической службе Республики Бурятия - 80 лет: материалы юбилейной науч.-практ. конф. - Улан-Удэ, 2004. - С. 77-79.

4. Илларионова Е.А. Спектрофотометрическое определение пиразидола / Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский, Е.М. Артасюк // Журн. аналит. химии. - 2004. - № 6. - С. 3-6.

5. Артасюк Е.М. Совершенствование спектрофотометрического определения инъекционных форм диклофенака натрия / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский // Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ. - Томск, 2005. - Т. 2, № 5. - С. 57.

6. Артасюк Е.М. Спектрофотометрическое определение нимесулида / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский, Н.М. Пантелеева // Сибирский медицинский журнал. - 2006. - Т. 63, № 5. — С. 33-36.

7. Артасюк Е.М. Спектрофотометрический анализ вещества по оптическому эталону / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, А.И. Илларионов, О.Л. Никонович // Прикладная оптика-2006: сб. тр. Междунар. конф. - СПб., 2006. - С. 54-58.

8. Артасюк Е.М. Спектрофотометрическое определение диклофенака натрия / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. - 2006. - Т. 72, № 4. -С. 15-18.

9. Илларионова Е.А. Разработка методики количественного определения нимесулида / Е.А. Илларионова, Е.М. Артасюк, И.П. Сыроватский // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2006. - Вып. 61. - С. 206-209.

10. Артасюк Е.М. Биофармацевтические исследования нимесулида / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский // Актуальные проблемы фармации: Межрегион, сб. науч. тр. - Рязань: РязГМУ, 2006. - С. 46^18.

11. Артасюк Е.М. Способ определения ибупрофена / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский // Медицинский вестник Башкортостана. - 2006. - № 1. - С. 187-189.

12. Артасюк Е.М. Оптимизация условий спектрофотометрического определения кетопрофена / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова // Сб. матерериалов науч.-практ. конф. - Ярославль, 2007. - С. 36-38.

13. Артасюк Е.М. Спектрофотометрическое определение кетопрофена в субстанции / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова // Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ. - Томск, 2007. - Т. 4, № 3. - С. 18-19.

14. Артасюк Е.М. Оптические характеристики внешнего образца сравнения нитрата натрия / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, Н.М. Пантелеева // Сборник трудов Международной конференции «0птика-2007». - СПб., 2007.-С. 138-139.

15. Артасюк Е.М. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе нимесулида / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский // Сибирский медицинский журнал. — 2008. - Т. 81, № 6. - С. 32-34.

16. Артасюк Е.М. Использование высокоэффективной жидкостной хроматографии для количественного определения некоторых нестероидных противовоспалительных лекарственных средств / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, Г.А. Федорова // Разработка, исследование

и маркетинг новой • фармацевтической продукции: сб. науч. тр. -Пятигорск, 2008. ~ Вып. 63. - С:206-207.

17. Илларионова Е.А. Разработка методики количественного определения кодеина и ибупрофена / Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский, Е.М. Артасюк // Фармация из века в век: сб. науч. трудов. Ч. III. Анализ и стандартизация лекарственных средств. - СПб.: Изд-во СПХФА, 2008. -С. 45-47.

18. Артасюк Е.М. Разработка унифицированных методик анализа двухкомпонентных лекарственных форм, содержащих ибупрофен методом ВЭЖХ / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, Г.А. Федорова, И.П. Сыроватский // Изв. вузов. Сер. Химия и хим. технология. - 2008. - Т. 51, вып. 5-С. 23-25.

19. Илларионова Е.А. Хроматографический анализ диклофенака натрия / Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский, Е.М. Артасюк // Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ. - Томск, 2008. - Т. 5, № 13. - С. 106-107.

20. Пат. № 2333489, Российская Федерация МПК А61К 31/196. Способ количественного определения диклофенака натрия / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский; Заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России. - № 2006131643/15; заявл. 01.09.2006; опубл. 10.09.2008, Бюл. № 25. - 6 с.

21. Пат. № 2333490, Российская Федерация МПК А61К 31/192. Способ количественного определения ибупрофена / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский; Заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России. - № 2006131641/15; заявл. 01.09.2006; опубл. 10.09.2008, Бюл. № 25. - 5 с.

22. Пат. № 2333489, Российская Федерация МПК А61К 31/18. Способ количественного определения нимесулида / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский; Заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России. - № 2006131640/15; заявл. 01.09.2006; опубл. 10.09.2008, Бюл. № 25. - 5 с.

23. Пат. № 2334983, Российская Федерация МПК А61К 31/498. Способ определения пиразидола / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский; Заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России. - № 2006131642/15; заявл. 01.09.2006; опубл. 27.09.2008, Бюл. № 27. - 6 с.

24. Артасюк Е. М. Оптимизация условий спектрофотометрического анализа производных фенилпропионовой кислоты / Е.М. Артасюк, Е.А. Илларионова // Сб. материалов Международной науч.-практ. конф. -Шимкент, 2009. - Т. 1. - С. 80-83.

Подписано в печать 29.10.2009 г. Формат 60x90. 1/16. Усл. печ. л. 1,1. Тираж 100 экз. Заказ 86.

Издательство Иркутского государственного университета 664003, Иркутск, бульвар Гагарина, 36; тел (3952) 24-14-36

Актуальность темы. Одной из важных проблем фармацевтической науки и практики является разработка новых и совершенствование существующих методов контроля качества лекарственных средств.

Воспалительные и дегенеративные заболевания суставов и позвоночника, артриты, артрозы и переартриты различных локализаций, находятся на четвертом месте по распространенности после болезней кровообращения, дыхания и пищеварения. В Российской Федерации, согласно официальным статистическим данным ежегодно в лечебно-профилактические учреждения обращается около 11 млн. человек с заболеваниями опорно-двигательного аппарата.

Объектами настоящего исследования выбраны нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, производные фенилуксусной и фенилпропионовой кислоты (натрия диклофенак, ибупрофен, кетопрофен), нитробензола (нимесулид), а также двухкомпонентные сочетания, содержащие ибупрофен, парацетамол и кодеин.

Критический анализ данных литературы и нормативной документации показал, что методы количественного анализа исследуемой группы препаратов несовершенны и не позволяют объективно оценить их качество. Так, количественное определение лекарственных веществ проводится титриметрическими методами: кислотно-основное титрование в среде ледяной уксусной кислоты, алкалиметрия в среде этанола и ацетона. Эти методы являются длительными, трудоемкими, токсичными, в некоторых случаях определение ведется по фармакологически неактивной части молекулы. Анализ лекарственных форм ряда препаратов исследуемой группы проводится спектрофотометрическим методом, отличающимся доступностью, простотой методик анализа, экспрессностью, высокой чувствительностью, воспроизводимостью, низкой токсичностью. Более широкому использованию данного метода для анализа субстанций препятствует отсутствие образцов сравнения. В связи с этим оптимизация спектрофотометрического определения объектов исследования с использованием внешних образцов сравнения- является актуальной проблемой.

Важное место в фармацевтическом анализе занимает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Особенно актуально применение этого метода в анализе двухкомпонентных лекарственных форм ибупрофен-парацетамол, ибупрофен-кодеин. Методики, предложенные нормативными документами, требуют импортного дорогостоящего оборудования, недоступного для многих лабораторий, и большой ассортимент сорбентов, растворителей, элюентов. Поэтому исследования в этом направлении в настоящее время являются перспективными.

Целью настоящего исследования явилось совершенствование методов анализа нестероидных противовоспалительных лекарственных» средств, производных фенилуксусной, фенилпропионовой кислоты и нитробензола, а также создание унифицированной методики- анализа двухкомпонентных лекарственных форм «Ибуклин» и «Нурофен плюс».

Для достижения поставленной цели необходимо было решить* следующие задачи:

1. Провести изучение спектральных характеристик лекарственных средств исследуемой группы препаратов для оптимизации их спектрофотометрического определения с использованием внешних образцов сравнения.

2. Методами оптической спектроскопии исследовать спектральные характеристики внешних образцов сравнения. Разработать унифицированные методики анализа исследуемой группы препаратов в субстанциях и лекарственных формах методом УФ-спектроскопии с использованием внешних образцов сравнения.

3. Разработать методики определения ■ теста «растворение» и однородности дозирования твердых дозированных лекарственных форм исследуемой группы, препаратов методом одноволновой спектрофотометрии с использованием внешних образцов сравнения.

4. Оптимизировать условия и разработать методики количественного определения? исследуемой группы препаратов . в однокомпонентных лекарственных формах (таблетки, капсулы, раствор для? инъекций) методом ВЭЖХ.

5. Провести сравнительную оценку методик; количественного определения ' исследуемой; группы, препаратов в лекарственных формах методом ВЭЖХ и спектрофотометрическим; методом; с; использованием' внешних образцов сравнения;

6. Оптимизировать условия- и разработать унифицированные методики количественного определения компонентов таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» методами спектрофотометрии и ВЭЖХ.

Научная новизна и теоретическая значимость работы:

На основании исследования УФ - . спектров поглощения: и, физико-химических свойств, нестероидных противовоспалительных; лекарственных веществ; установлены оптимальные условия спектрофотометрического анализа (оптимальные значения рН; оптимальный: растворитель, аналитическая; длина волны, уравнение градуировочного графика) натрия диклофенака, . ибупрофена, кетопрофена, нимесулида, обеспечивающие максимальную правильность и воспроизводимость получаемых результатов.

Обоснован; выбор- внешних; образцов сравнения калия феррицианида, никеля хлорида, калия хромата,. калия дихромата для спектрофотометрического анализа исследуемых лекарственных средств.

Впервые разработаны, унифицированные : методики спектрофотометрического определения нестероидных противовоспалительных лекарственных средств с использованием-внешних образцов сравнения. В результате проведенной валидационной оценки методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.

Оптимизированы условия ВЭЖХ анализа натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в лекарственных формах.

Обоснована методика спектрофотометрического определения парацетамола в таблетках «Ибуклин» модифицированным методом Фирордта.

Оптимизированы условия разделения компонентов таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» методом ВЭЖХ. Практическая значимость работы:

Разработаны методики количественного определения натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в субстанциях и лекарственных формах, методики определения однородности дозирования капсул кетопрофена, теста растворения таблеток ибупрофена, нимесулида, натрия диклофенака, кетопрофена и капсул кетопрофена спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения; разработаны методики количественного определения таблеток натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида, раствора для инъекций натрия диклофенака, капсул и раствора для инъекций кетопрофена методом ВЭЖХ, методика количественного спектрофотометрического определения парацетамола модифицированным методом Фирордта, методики количественного определения ибупрофена, парацетамола, кодеина в таблетках «Ибуклин», «Нурофен плюс» методом ВЭЖХ. Разработанные методики апробированы и внедрены в ОКК ОАО «Усолье - Сибирский химфармкомбинат» (г. Усолье-Сибирское), ОАО «Фармасинтез» (г. Иркутск), Центре сертификации и контроля качества лекарственных средств МЗ Республики Бурятия (г. Улан-Удэ), судебно-химическом отделении Иркутского областного бюро судебно-медицинской экспертизы (г. Иркутск), учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии ИГМУ. Получен 31 акт о внедрении и использовании результатов данной работы. Разработанные методики защищены патентно-лицензионными документами: получено 4 Патента РФ на изобретение № 2333490, № 2333483, № 2333488, № 2333489.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждались на VIII Международной школе-семинаре «Люминесценция и лазерная физика» (Иркутск, 2003 г.); 58-й, 60-й, 61-й, 62-й, 63-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2003, 2005, 2006, 2007, 2008 г.г.); научной конференции Естествознание и гуманизм (2004, 2005, 2007, 2008 г.г.); межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы фармации» (Рязань, 2006 г.); международной конференции «Прикладная оптика-2006» (Санкт - Петербург,

2006 г.); международной конференции «0птика-2007» (Санкт - Петербург,

2007 г.); научно-практической конференции (Ярославль, 2007 г.); юбилейной научно-практической конференции «Фармацевтической службе республики Бурятия-80 лет» (Улан - Уде, 2004 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 24 работы, в том числе 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК России, и 4 патента РФ' на изобретение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ИГМУ по проблеме «Контроль качества, лекарственных средств с использованием современных методов, анализа» (номер Госрегистрации 01.91.0008620) и соответствует направлению проблемной комиссии по фармации и фармакологии. Основные положения, выносимые на защиту

- выбор внешних образцов сравнения для* спектрофотометрического анализа натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида;

- результаты оптимизации условий и методики спектрофотометрического анализа с использованием внешних образцов сравнения натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в субстанциях и лекарственных формах, их валидационная оценка;

- оптимизация условий и методики ВЭЖХ натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в готовых однокомпонентных и многокомпонентных лекарственных формах, их валидационная оценка;

- сравнительная оценка методик количественного определения исследуемой группы препаратов в лекарственных формах методом ВЭЖХ и спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 190 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, 82 таблиц, 50 рисунков, списка литературы, включающего 223 источника, из них 74 на иностранных языках. В приложении представлены материалы по апробации и внедрению разработанных методик.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработаны оптимальные условия спектрофотометрического определения (оптимальные значения рН, оптимальный растворитель, аналитическая длина волны, уравнение градуировочного графика, выбор внешних образцов сравнения) натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида. Установлено, что для количественного определения данных препаратов методом одноволновой спектрофотометрии существует несколько внешних образцов сравнения, что позволяет аналитическим лабораториям осуществлять выбор образцов сравнения.

2. Впервые разработаны методики спектрофотометрического количественного определения натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в субстанциях и лекарственных формах с использованием внешних образцов сравнения. Погрешность определения для субстанции не превышает 0,74' %, для лекарственных форм - 1,78 %.

3. Найдены оптимальные условия хроматографического анализа натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида методом ВЭЖХ.

4. Впервые разработаны унифицированные методики, количественного определения диклофенака натрия, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида в лекарственных формах методом ВЭЖХ.

5. Проведена сравнительная оценка методик количественного определения натрия диклофенака, ибупрофена, кетопрофена, нимесулида, рекомендуемых НД, методом ВЭЖХ и спектрофотометрическим методом по внешним образцам сравнения. Показано, что методики спектрофотометрического определения по внешним образцам сравнения не уступают по точности и воспроизводимости', отличаются доступностью, экспрессностью и отсутствием высокотоксичных реактивов.

6. Впервые разработаны методики определения теста «растворение» и однородности дозирования твердых дозированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов методом одноволновой спектрофотометрии с использованием внешних образцов сравнения.

7. Впервые разработана методика спектрофотометрического определения парацетамола в таблетках «Ибуклин» модифицированным методом Фирордта.

8. Впервые разработаны унифицированные методики количественного определения компонентов таблеток «Ибуклин» и «Нурофен плюс» методом ВЭЖХ.