Фитохимическое исследование и стандартизация тимолсодержащих растений семейства Яснотковых

Мащенко, Зинаида Евгеньевна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фитохимическое исследование и стандартизация тимолсодержащих растений семейства Яснотковых

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Мащенко, Зинаида Евгеньевна Пермь 2004 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фитохимическое исследование и стандартизация тимолсодержащих растений семейства Яснотковых

На правах рукописи

МАЩЕНКО ЗИНАИДА ЕВГЕНЬЕВНА

ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ТИМОЛСОДЕРЖАЩИХ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА ЯСНОТКОВЫХ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЕРМЬ - 2004

Работа выполнена в Самарском государственном медицинском университете

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор фармацевтических наук, профессор В.А. Куркин доктор биологических наук, профессор И.Ф. Шаталаев

доктор фармацевтических наук, профессор Н.С. Фурса доктор фармацевтических наук, профессор СЕ. Дмитрук

Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова

Защита диссертации состоится «23» марта 2004 г. в 13 часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.068.01. при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614000, г. Пермь, ул. Ленина, д. 48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии.

Автореферат разослан «_»_2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Метелева Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В научной медицине нашли широкое применение эфиромасличные растения. Среди них большой интерес представляют растения семейства Яснотковых и Сельдерейных: тимьян обыкновенный, тимьян ползучий, душица обыкновенная, ажгон душистый и другие.

Несмотря на богатство флоры Российской Федерации, ресурсы лекарственного растительного сырья (ЛРС) не безграничны, к тому же некоторые лекарственные растения имеют ограниченный ареал. В связи с этим возникает необходимость изыскания таких видов растений, которые обладают высокой биологической активностью и могут выращиваться в условиях, отличающихся от условий исторической родины.

До недавнего времени в нашей стране имелись промышленные запасы таких растений, как тимьян обыкновенный и ажгон душистый. Однако в настоящее время промышленные плантации тимьяна обыкновенного и ажгона душистого находятся в СНГ. В этой связи возникает необходимость расширения сырьевой базы в России, путем культивирования тимьяна обыкновенного или ажгона душистого, либо путем возделывания другого растения, обладающего таким же фармакологическим эффектом.

Таким требованиям удовлетворяет монарда дудчатая, имеющая ареал в Северной Америке. В условиях России этот вид культивируется в европейской части страны и в Сибири. Учеными Никитского ботанического сада была показана перспективность использования данного растения в медицинской практике в качестве антимикробного средства. Сотрудниками кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии экспериментально было доказано, что монарда может культивироваться в условиях Самарской области.

Этот вид дает высокий выход эфирного масла, которое обладает бактерицидной, антибиотической активностью, а также иммуномодулирующими свойствами. Эфирное масло монарды используется для ингаляций при заболеваниях

I библиотека / 1

Цель и задачи исследования: фотохимическое и биохимическое исследование травы монарды дудчатой (Monarda fistulosa L.), выращенной в условиях Самарской области; сравнительное изучение полученных параметров качественного состава биологически активных соединений травы монарды дудчатой и официнальных тимолсодержащих видов сырья семейства Яснотковых (трава душицы обыкновенной - Herba Origani vulgaris и трава чабреца - Herba Serpylli).

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие конкретные задачи:

1. Исследовать состав биологически активных соединений (БАС) эфирного масла травы монарды дудчатой.

2. Определить товароведческие показатели для сырья «Монарды дудчатой трава».

3. Составить пояснительную записку и проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) травы монарды дудчатой, выращенной в условиях Самарской области.

4. Научно обосновать целесообразность создания новых лекарственных средств на основе травы монарды дудчатой - настойка и эфирное масло.

5. Определить антимикробную активность эфирного масла, водных и водно-спиртовых извлечений травы монарды дудчатой.

6. Разработать методику качественного анализа тимола в траве душицы обыкновенной и траве чабреца.

7. Изучить динамику фракционного состава белков и возможность применения полученной информации для идентификации лекарственных растений в различные периоды развития.

8. Исследовать активность полифенолоксидазы (ПФО) ЛРС по фазам вегетации.

9. Определить, состав и динамику активности молекулярных форм (МФ) малатдегидрогеназы (МДГ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) исследуемого ЛРС по фазам вегетации.

Научная новизна. Впервые разработан проект ФСП на новый вид ЛРС «Монарды дудчатой трава» (НегЬа МопаМаА$ш1а$ав).

Впервые выделено эфирное масло из травы монарды дудчатой, культивированной в Самарской области.

Впервые проведена газожидкостная хроматография (ГЖХ) фракций и эфирного масла травы монарды дудчатой.

В сравнительном плане определена антимикробная активность эфирного масла, водных и водно-спиртовых извлечений травы монарды дудчатой.

Впервые выделен и идентифицирован тимол из травы монарды дудчатой, культивированной в Самарской области.

Разработана методика качественного анализа для доказательства подлинности травы душицы обыкновенной и травы чабреца по содержанию тимола в ЛРС с использованием рабочего стандартного образца (РСО) тимола.

Для установления периода вегетации предлагается использовать определение активности ПФО йодометрическим методом.

Для изучения динамики фракционного состава белков и активности МФ лактат- и малатдегидрогеназы в сырье душицы обыкновенной, чабреца, монарды дудчатой в целях определения периодов вегетации предлагается использовать метод электрофореза в полиакриламидном геле.

Практическая значимость. В результате проведенных исследований разработаны:

- проект ФСП на лекарственное растительное сырье «Монарды дудчатой трава»

- методика качественного анализа травы душицы обыкновенной с использованием РСО тимола.

- методика качественного анализа травы чабреца с использованием РСО тимола.

- методика определения периодов вегетации высушенного ЛРС по динамике фракционного состава белков и активности ПФО, МФ ЛДГ и МДГ душицы обыкновенной, чабреца, монарды дудчатой.

На защиту выносятся:

- результаты исследования по разработке проекта ФСП на ЛРС «Монарды дудчатой трава».

- результаты исследования химического состава эфирного масла травы монарды дудчатой, выращенной в условиях Самарской области.

- данные исследований по разработке методик качественного анализа БАС травы душицы обыкновенной, чабреца.

- результаты исследований по разработке методики определения сроков вегетации высушенного ЛРС.

Апробация диссертации. Основные положения работы докладывались в течение 2000-2003 г.г. на 8 научных конференциях, в частности, научной конференции молодых исследователей «Аспирантские чтения» (Самара, 2001,

2002); 68-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск, 2002); 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск,

2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в Самарском государственном медицинском университете в соответствии с планом научно-исследовательских работ (№ государственной регистрации 01200109135 и договор № 10/02 от 28 мая 2002 г. - заказчик ЗАО «Самарская фармацевтическая фабрика») и соответствует тематике Проблемной комиссии по фармации № 36.08 РАМН, МЗРФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах, содержит 23 таблицы, 15 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение,

общих выводов и списка литературы, включающего 210 источников, из которых 12 на иностранных языках.

Глава 1 содержит литературный обзор, в котором обобщены сведения по изучению химического состава и стандартизации тимолсодержащих растений, фармакологических свойств и применению в медицинской практике, а также дан ряд биохимических характеристик растений.

В главе 2 представлена характеристика объектов исследования - травы душицы обыкновенной, чабреца и монарды дудчатой. Приведены методики фотохимического и биохимического изучения данных лекарственных растений.

В главах 3- 7 экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований химического состава травы и эфирного масла монарды дудчатой, культивируемой в условиях Самарской области, данные исследований по разработке методик качественного анализа тимола в эфирном масле травы душицы обыкновенной, чабреца и монарды дудчатой, результаты исследований товароведческих показателей сырья «Монарды дудчатой трава», данные исследований по разработке методики определения сроков вегетации высушенного ЛРС.

В приложении вынесены нормативные документы, акты внедрения результатов в учебный процесс вуза.

Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистически в соответствии с ГФ XI издания, отражены в тексте диссертации, представлены в 23 таблицах и на 15 рисунках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В качестве растительного сырья использовали траву душицы обыкновенной {ЫвгЬа Origani vulgahs), траву чабреца (НвгЬа 8вгруШ) и траву монарды дудчатой {НвгЬа Мопагйав А^1о5ае), выращенной в климатических условиях Самарской области.

Изучение компонентного состава травы монарды дудчатой, культивируемой в Самарской области Вначале был изучен качественный состав различных частей растений травы монарды дудчатой. Для этого применяли в качестве экстрагента спирт этиловый различной концентрации (40 % и 70 %) и воду очищенную. Исследование проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках «Силуфол УФ - 254» в хроматографической камере в системе хлороформ : метанол : вода (26:14:3) с использованием раствора РСО чистого тимола (ТУ 6-09-3736-79).

Обнаружено, что в водно--спиртовых извлечениях листьев и цветков содержится тимол (при действии раствора диазобензолсульфокислоты проявляется в виде пятна ярко оранжевого цвета с Я, = 0,94), а также присутствуют флавоноиды (при действии раствора диазобензолсульфокислоты и алюминия хлорида окрашиваются в виде пятен различного цвета) (рис. 1).

Исходя из полученных результатов, нами было отмечено, что оптимальным экстрагентом является 70 % спирт этиловый, причем наибольшее количество БАС выявляется в цветках и листьях монарды. В этой связи в дальнейших исследованиях в качестве сырья использовали траву монарды дудчатой.

о б о

с о оооо

о о о о о о

о о

оо о о

1 » 1 4 3 в 7 $

Рис. 1.ТСХ водно-спиртовых извлечений из травы монарды дудчатой

1 - извлечение из листьев, 40 % спирт;

2 - извлечение из листьев, 70 % спирт;

3 - извлечение из листьев, вода очищенная;

4 - извлечение из стеблей, 40 % спирт;

5 - извлечение из стеблей, 70 % спирт;

6 - извлечение из цветков, 40 % спирт;

7 - извлечение из цветков, 70 % спирт;

8 - 0,5 % раствор РСО тимола.

Учитывая, что спирт этиловый 70 % концентрации извлекает наибольшее количество БАС из травы монарды, нами была получена настойка данного растения в соотношении 1:5.

Для выбора оптимального метода получения настойки использовали два метода - мацерацию и перколяцию. Для исследования химического состава настоек использовали метод ТСХ с раствором РСО тимола.

Исходя из полученных результатов, представленных на рис. 2, видно, что при использовании метода перколяции действующих веществ извлекается больше. Преобладающим компонентом в настойке является тимол, а также присутствуют флавоноиды.

Рис. 2. ТСХ образцов настоек монарды дудчатой

1 - настойка, полученная методом перколяции;

2 - настойка, полученная методом мацерации;

3 - 0,5 % раствор РСО тимола.

Примечание. Пластинки «Силуфол УФ-254». Подвижная фаза хлороформ : метанол :

вода-26:14.3.

Полученные данные свидетельствуют о том, что для получения настойки монарды дудчатой целесообразно использовать метод перколяции как наиболее экономичный и продуктивный.

Изучение компонентного состава и антимикробной активности эфирного масла травы монарды дудчатой, культивируемую в Самарской

области

Эфирное масло получали методом 1 (ГФ XI, Т. 1, с. 290-292). Средний выход эфирного масла составил 2,84 ±0,15% от массы абсолютно сухого сырья.

Высокое содержание эфирного масла в траве монарды дудчатой делает вид перспективным для дальнейшего изучения и применения в медицинской практике. В качестве новой лекарственной формы возможно использование эфирного масла травы монарды дудчатой.

Разделение компонентов эфирного масла монарды дудчатой проводили с помощью метода жидкостной адсорбционной колоночной хроматографии. Элюирование проводили гексаном, хлороформом, а также смесями данных растворителей (хлороформ : гексан - 1:9; 1:4).

Выделенные фракции анализировали методом ТСХ на пластинках «Силуфол УФ - 254» в хроматографической камере в системе хлороформ : метанол : вода (26:14:3) с 0,5 % раствором РСО тимола. Проявляли хроматограммы в УФ-свете при 254 и 360 им и раствором диазобензолсульфокислоты. Во всех фракциях содержится тимол, проявляющийся под действием диазобензолсульфокислоты в виде ярко оранжевого пятна с Rf=0,63.

Полученные фракции подвергали также ГЖХ.

Хроматограмма ГЖХ анализа эфирного масла травы монарды дудчатой представлена на рис. 3. Было найдено 11 компонентов, из которых идентифицировано два соединения, отвечающие за проявляемый фармакологический эффект: 2-изопропил-5-метилфенол (тимол) и 5-изопропил-2-метилфенол (карвакрол).

Методом ГЖХ проводили анализ фракций эфирного масла, полученных адсорбционной жидкостной колоночной хроматографией.

Результаты, представленные на рис. 4, свидетельствуют, что во фракции № 1, полученной элюированием гексаном, доминирует тимол, а карвакрол практически не обнаруживается, во фракции № 2 и 3, элюированных смесями данных растворителей (хлороформ : гексан - 1:9; 1:4 соответственно) резко уменьшается количество тимола и возрастает содержание карвакрола. Фракция № 4 содержит практически только карвакрол.

Рис. 3. ГЖХ - анализ эфирного масла монарды дудчатой.

1 - тимол;

2 - карвакрол;

3 - нефенольная фракция; I - время удерживания

ж ж

Рис. 4. ГЖХ - анализ отдельных фракций эфирного масла монарды,

1 - тимол;

2 - карвакрол;

I - время удерживания

Выделенное вещество (тимол) из эфирного масла травы монарды дудчатой анализировали методом ЯМР-спектроскопии. Спектр выделенного

тимола представлен на рис. 5. Полученные результаты внесены в табл. 1.

Таблица 1

Сигналы протонов в спектрах ЯМР 'Н тимола

Соединение Химический сдвиг, 5 м.д.; константа спин-спинового взаимодействия, (Л), Гц

Тимол 7,09 (д, 8 Гц— 1 Н, Н - 5) 6,73 (дд, 2 и 8 Гц- 1 Н, Н-6) 6,58 (д, 2 Гц -1 Н, Н - 2) 4,7 (с, 3-ОН) 3,17 (кв., 6 Гц, 1 Н, СНз-СН-СНз) 2,30 (с, 3 Н, СНз-Аг) 1,25 (д, 6 Гц, 6 Н, 2 СН3)

Рис, 5. ЯМР спектр выделенного тимола в дейтрохлороформе

На кафедре микробиологии Самарского государственного медицинского университета была изучена антимикробная активность фракций эфирного масла монарды, полученных адсорбционной колоночной хроматографией, и тимола в отношении золотистого стафилококка и кишечной палочки методом бумажных дисков. Данные показали, что наименьшей активностью обладает фракция 1, где тимол доминирует. При увеличении содержания карвакрола (фракция №2 и 3) антибактериальная активность увеличивается и превышает активность тимола как жидкого, так и кристаллического (табл.2).

Таблица 2

Сравнительная антимикробная активность фракций эфирного масла монарды и тимола

Диаметр зоны задержки роста, мм

Фракция №1 Фракция №2 Фракция №3 Тимол жидкий Тимол кристаллический

Золотистый стафилококк >100 >100 >100 50 55

Кишечная палочка 23 25 35 35 20

Было проведено исследование антимикробной активности эфирного масла, водного и водно-спиртового извлечений травы монарды дудчатой методом серийных разведений. Результаты показали, что наибольшей активностью обладает эфирное масло и настойка на 70 % спирте травы монарды дудчатой (табл. 3).

Таблица 3

Сравнительная антимикробная активность эфирного масла, водного и водно-спиртовых извлечений травы монарды дудчатой

Концентрация, мкг/мл

Эфирное масло Настой Настойка на 70 % этиловом спирте

Золотистый стафилококк 250 600 400

Кишечная палочка 200 600 400

Разработка методик качественного анализа тимолсодержащих растений семейства Яснотковых

С целью определения подлинности травы душицы обыкновенной, тимьяна ползучего и монарды дудчатой разработана методика ТСХ-анализа данных видов растений.

В качестве экстрагента использовали спирт этиловый 70% и воду очищенную. В водном и водно-спиртовом извлечениях травы монарды обнаружили тимол (под действием реактива пятно окрашивается в ярко-оранжевый цвет), в извлечениях травы душицы и травы чабреца тимол не обнаружен. Для идентификации тимола в траве душице обыкновенной и траве чабреца в водно-спиртовые извлечения (около 5 мл) добавляли 1 мл хлороформа, что позволило сконцентрировать анализируемое вещество.

В ходе разработки методики были проведены исследования по выбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющих эффективно идентифицировать основной компонент сырья - тимол. В результате проведенных опытов с различными хроматографическими системами (хлороформ - этанол в различных соотношениях, хлороформ - метанол - вода 26:14:3) было установлено, что наиболее четкое разделение удается достичь в системе растворителей хлороформ - этанол в соотношении 6:1.

Для идентификации тимола в качестве свидетеля был использован 0,5% раствор РСО тимол. При облучении УФ-светом (254 нм) указанные соединения в экстракте обнаруживаются в виде фиолетовых пятен на светлом флуоресцирующем фоне. Величина Я, тимола в данных условиях составляет около 0,9 (рис.6).

о О О о

сь а о

ö а.

а, а es

1 2 J 4

Рис. б. ТСХ извлечений из лекарственного растительного сырья

1 - водно-спиртовое извлечение из травы монарды

2 - хлороформное извлечение из водно-спиртовой вытяжки травы душицы

обыкновенной

3 - хлороформное извлечение из водно-спиртовой вытяжки травы чабреца

4 - 0,5 % раствор PCO тимола

Примечание. Пластинки «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ». Подвижная фаза состава

хлороформ: этанол 6 1.

Товароведческое изучение травы монарды дудчатой

Изучение внешних признаков и микроскопическое исследование проводили по общепринятым методикам. При этом выявили ряд диагностических признаков, позволяющих установить подлинность сырья, а именно: эфиромасличные железки, характерные для растений семейства Яснотковых (Lamiaceae); волоски двух типов - простые и головчатые. Простые волоски многочисленные - одно- и многоклеточные от двух до пяти клеток. Головчатые волоски имеют ножку из одной клетки и головку из 7-8 клеток. Лист - дорзовенрального типа. Нижний эпидермис имеет клетки с более извилистыми стенками, устьица с двумя клетками (диацитный тип). Стебель на поперечном срезе имеет квадратное сечение, характерное для семейства Яснотковых.

Анализ товароведческих показателей травы монарды дудчатой (влажность, зольность, содержание органической и неорганической примеси и др.) проводили в соответствии с ГФ СССР XI издания. Полученные результаты положены в основу проекта ФСП «Монарды дудчатой трава» (внешние

признаки, микроскопия, содержание эфирного масла не менее 1 %, влажность не более 13 %, золы общей не более 10 %, золы нерастворимой в 10 % растворе хлористоводородной кислоты не более 1 %, органической примеси - не более 1 %, минеральной примеси не более 1 %).

Определение активности ПФО тимолсодержащих растений по фазам

вегетации

Определение активности ПФО проводили йодометрическим методом. Эфирное масло травы монарды дудчатой и травы чабреца получали методом 1, эфирное масло травы душицы обыкновенной — методом 2 (ГФ XI, Т. 1, с. 290292).

Нами обнаружено, что в период до цветения активность ПФО у растений значительно выше по сравнению с другими фазами. Данные свидетельствуют об интенсивных процессах окисления-восстановления фенольных соединений в исследуемую фазу. В этот период отмечено заметное увеличение количества эфирного масла по сравнению с другими фазами (табл. 4).

В фазу цветения растений активность ПФО значительно ниже периода до цветения, причем, активность фермента практически одинакова у всех исследуемых объектов. Полученные данные свидетельствуют о стабилизации процессов окисления-восстановления фенолов. Происходит дальнейшее накопление эфирного масла и фенольных соединений (табл. 4).

После цветения наблюдается незначительное снижение активности ПФО травы душицы обыкновенной и чабреца по сравнению с фазой массового цветения, происходит достижение динамического равновесия в процессах окисления-восстановления фенольных соединений. Выход эфирного масла незначительно уменьшается по сравнению с периодом цветения. Содержание масла в траве монарды дудчатой резко уменьшается по сравнению с фазой до цветения и с фазой массового цветения, активность же ПФО почти в два раза превышает таковую периода до цветения и почти в три раза больше чем в

период массового цветения. Полученные данные требуют дальнейшего экспериментального изучения и теоретического обоснования (табл. 4).

Таблица 4

Активность ПФО и содержание эфирного масла лекарственных растений в различные фазы вегетации

Фаза вегетации Монарда дудчатая Душица обыкновенная Чабрец

Активность ПФО, г/экв*10"6 0,01 N раствора 12 Содержание эфирного масла, % Активность ПФО, г/экв*10'6 0,01 N раствора ^ Содержание эфирного масла, % Активность ПФО, г/экв*10'6 0,01 N раствора 12 Содержание эфирного масла, %

До цветения 4,30 ± 5,44 % 1,64 ±4,55% 5,82 ±4,00% 0,26 ±4,62% 3,23 ±4,92% 0,15 ±4,41%

Во время цветения 2,30 ±4,84% 2,73 ±4,96% 2,29 ±4,47% 0,79 ±4,54% 2,29 ±4,93% 0,40 ±4,48%

После цветения 7,60 ±4,78% 0,40 ±4,93 % 2,03 ±4,61 % 0,40 ±4,85% 1.81 ±4,70% 0,31 ±4,84%

Изучение фракционного состава белков и МФ дегидрогеназ в различные фазы вегетации тимолсодержащих растений семейства Ясногковых

Для изучения динамики фракционного состава белков и активности МФ лактат- и малатдегидрогеназы в сырье душицы обыкновенной, чабреца, монарды дудчатой использовали метод электрофореза в 7,5 % полиакриламидном геле. Для установления фракционного состава неферментных белков клеток растений гелевые пластинки окрашивали раствором амидочерного В. Выявление МФ ферментов проводили феназинметасульфаттетразолиевой реакцией. Количественный анализ электрофореграмм проводили на денситометре АФ-1 ("Львовприбор") в проходящем луче с фильтром 560 нм.

Спектр фракций белка по фазам развития представлен в таблице 5. По относительной электрофоретической подвижности (ОЭП) в градиенте

концентрации геля это белки с молекулярной массой от 30 до 80 Д. В процессе развития растений число фракций увеличивается, что указывает на интенсификацию процессов биосинтеза белка и накопление биологически активных соединений.

Таблица 5

Фракционный состав белков лекарственных растений в различные фазы

вегетации

Фаза Вегетации Монарда дудчатая (ОЭП) Душица обыкновенная (ОЭП) Чабрец (ОЭП)

До цветения 0,55 0,82 0,60 0,72 0,91

Во время Цветения 0,42 0,58 0,67 0,38 0,54 0,42" 0,5

После Цветения 0,35 0,65 0,33 0,67 0,36 0,69

Как следует из данных таблицы, фракционный состав белка в процессе вегетации различается по значениям ОЭП. Такая динамика может быть использована для разработки методов идентификации ЛРС по фазам вегетации (рис.7).

В составе МФ МДГ и ЛДГ лекарственных растений в разные периоды развития также установлены различия.

Определен следующий спектр МФ МДГ: до цветения у всех исследуемых растений выявлено по одной МФ, причем, по ОЭП они соответствуют МДГ-1 (табл. 6). Литературные данные о структурной организации и активности МФ МДГ свидетельствуют о том, что активизация МДГ-1 указывает на усиление анаэробных процессов обмена по сравнению с аэробными процессами. Логично предположить, что до цветения в растениях более выражен биосинтез и накопление БАС чем процессами энергетического обмена.

Во время цветения МДГ представлена уже тремя МФ МДГ- 1, МДГ- 2 и МДГ- 3. При этом активными в равной степени становятся все МФ, что указывает на стабилизацию процессов обмена и выравнивание скорости реакции окисления-восстановления малата (рис. 8).

После цветения и вплоть до отмирания МДГ исследуемых растений представлена преимущественно высокомолекулярной МДГ-3. По ОЭП МДГ-3 монарды дудчатой несколько отличается от МДГ-3 чабреца и душицы обыкновенной, что свидетельствует о незначительной разности в молекулярных массах МФ. Полученные данные указывают на преобладание процессов окисления малата и в целом на мобилизацию цикла трикарбоновых кислот (табл.6).

Таблица 6

Молекулярные формы малатдегидрогеназы лекарственных растений в различные фазы вегетации

Фаза Монарда дудчатая Душица обыкновенная Чабрец

вегетации ОЭП МФ ОЭП МФ ОЭП МФ.

До цветения 0,65 МДГ 1 0,72 МДГ 1 0,69 МДГ 1

Во время цветения 0,38 0,54 0,78 МДГЗ МДГ 2 МДГ 1 0,31 0,46 0,62 МДГЗ МДГ 2 МДГ I 0,36 0,55 МДГЗ МДГ 2

После цветения 0,25 МДГЗ 0,33 МДГЗ 0,33 МДГЗ

А. до цветения Б. во время цветения В. после цветения

Рис. 8. Электрофореграммы МДГ лекарственных растений.

Для характеристики ЛДГ в процессе развития растения существенное значение имеет изучение ее МФ.

Установлено, что в процессе вегетации ЛДГ представлена четырьмя МФ, причем до цветения выявлена только ЛДГ -1 и ЛДГ- 5. По активности ЛДГ -5 превосходит ЛДГ -1, что характеризует лимитирование процессов обмена кислородом (рис. 9).

Во время цветения обнаруживается две МФ формы фермента, причем по локализации на электрофореграммах и ОЭП они соответствуют ЛДГ - 2 и ЛДГ - 3. Ни в одной серии экспериментов не выявлена ЛДГ — 4, возможно она замаскирована в области ЛДГ - 3. После цветения активность фермента локализуются в области ЛДГ- 1 (рис. 10).

Таблица 7

Молекулярные формы лактатдегидрогеназы лекарственных растений в различные фазы вегетации

Фаза вегетации Монарда дудчатая Душица обыкновенная Чабрец

ОЭП МФ ОЭП МФ ОЭП МФ

До цветения 0,18 0,74 ЛДГ 1 ЛДГ 5 0,18 0,72 ЛДГ 1 ЛДГ 5 0,18 0,75 ЛДГ 1 ЛДГ 5

Во время цветения 0,42 0,58 ЛДГ 2 ЛДГЗ 0,4 0,6 ЛДГ 2 ЛДГЗ 0,45 0,63 ЛДГ 2 ЛДГЗ

После цветения 0,31 ЛДГ 1 0,33 ЛДГ 1 0,36 ЛДГ 1

1. Методами ТСХ, ГЖХ и ЯМР-спектроскопии исследован компонентный состав травы и эфирного масла монарды дудчатой, культивируемой в Самарской области. Выявлены и идентифицированы ароматические монотерпены (тимол и карвакрол), отвечающие за фармакологический эффект.

2. Определены товароведческие показатели для травы монарды дудчатой, разработана методика качественного анализа тимола в траве монарды дудчатой.

3. Предложен новый вид ЛРС - трава монарды дудчатой. Разработан проект ФСП на траву монарды дудчатой, выращенной в условиях Самарской области, составлена пояснительная записка к ФСП «Монарды дудчатой трава».

4. Обоснована целесообразность использования ТСХ для идентификации сырья и препаратов монарды дудчатой, чабреца, душицы обыкновенной путем определения тимола — диагностического компонента вышеперечисленных растений.

активных веществ при получении настойки методом перколяции, что свидетельствует о рациональном технологическом режиме.

6. Разработаны методики качественного анализа тимола в траве душицы обыкновенной, чабреца с использованием раствора РСО тимола.

7. Разработан раздел «Качественные реакции», который может быть рекомендован для включения в нормативную документацию на траву душицы обыкновенной и траву чабреца.

8. Изучена динамика фракционного состава белков, показана возможность применения полученной информации для идентификации лекарственных растений в различные периоды развития.

9. Исследована активность ПФО ЛРС по фазам вегетации. Выявлена взаимосвязь между содержанием эфирного масла и активностью ПФО по фазам вегетации.

10. Определены состав и динамика активности МФ МДГ и ЛДГ ЛРС по фазам вегетации.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Куркин В.А., Шаталаев И.Ф., Мащенко З.Е. Фитохимическое исследование травы «Монарда дудчатая» // Фармация и медицина. — 2000. -№21.-С. 49-51.

2. Мащенко З.Е. Электрофоретическое исследование белков некоторых видов семейства Губоцветных // Аспирантские чтения-2001: сборник тезисов докладов конференции молодых исследователей. - Самара: СамГМУ, 2001. -С. 132-133.

3. Мащенко З.Е. Качественный анализ тимолсодержащих видов семейства Губоцветных//Аспирантские чтения-2002: сборник тезисов докладов конференции молодых исследователей. - Самара: СамГМУ, 2002. - С. 117.

4. Шаталаев И.Ф. Структурные особенности и активность лактат- и малатдегидрогеназ тимолсодержащих видов семейства Губоцветные по фазам вегетации / И.Ф. Шаталаев, З.Е. Мащенко, В.А. Куркин, П.П.

Пурыгин, Ю.П. Зарубин. // Вестник Самарского государственного университета. - 2002. - Специальный выпуск. - С. 145-150.

5. Мащенко З.Е., Шаталаев И.Ф. Качественный анализ тимолсодержащих видов семейства Губоцветных // Сборник работ 68-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН. В 2-х частях. Часть 2. - Курск: КГМУ, 2002. - С. 237-238.

6. Мащенко З.Е., Шаталаев И.Ф., Куркин ВА Структурные особенности и активность лактат- и малатдегидрогеназ некоторых видов семейства Губоцветные // Экология и здоровье человека: Труды VIII Всероссийского конгр. - Самара: Самарский областной дом науки и техники, 2002. - С. 149151.

7. Мащенко З.Е. Электрофоретическое исследование белков некоторых видов семейства Губоцветных // Здравоохранение Башкортостана. - 2002. -№ 2. - С. 82-83.

8. Мащенко З.Е., Шаталаев И.Ф., Митрошин Е.В. Структурные особенности и активность некоторых оксидоредуктаз тимолсодержащих видов семейства Губоцветных // Актуальные проблемы медицины и биологии. Сборник научных работ. Вып. 2. Томск, 2003. - С. 10-11.

9. Мащенко З.Е. Куркин В.А., Шаталаев И.Ф. Качественный анализ тимолсодержащих видов семейства Губоцветных // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии: сборник научных трудов (Пятигорская государственная фармацевтическая академия). - Пятигорск. - 2003. - С. 45-46.

10. Мащенко З.Е. Определение активности полифенолоксидазы травы монарды дудчатой по фазам вегетации // Актуальные проблемы современной науки: Сб. статей '4-й Международной конференции молодых ученых и студентов. Естественные науки. Часть 26: Фармация. - Самара: Изд-во СамГТУ, 2003. - С. 26-27.

38 68

Подписано в печать 10.02.2004 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная Объем 1,3 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ 636

Отпечатано в типографии ОАО «Самарабланкиздат»

Оглавление диссертации Мащенко, Зинаида Евгеньевна :: 2004 :: Пермь

Введение

ОГЛАВЛЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современное состояние исследований лекарственных растений, содержащих тимол.

1.1.1 Ботаническая характеристика тимолсодержащих лекарственных растений.

1.1.1.1. Душица обыкновенная.

1.1.1.2. Тимьян обыкновенный.

1.1.1.3. Тимьян ползучий (чабрец).

1.1.1.4. Монарда дудчатая.

1.1.1.5. Ажгон душистый.

1.1.2. Химический состав тимолсодержащих лекарственных растений

1.1.3. Биологическая активность эфирных масел тимолсодержащих лекарственных растений.

1.1.4. Опыт применения тимолсодержащих растений в народной и научной медицине.j.

1.2. Характеристика ферментов высших растений.

1.2.1. Полифенолоксидаза высших растений.

1.2.2. Малатдегидрогеназа высших растений.

1.2.3. Лактатдегидрогеназа высших растений.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Мащенко, Зинаида Евгеньевна, автореферат

Актуальность темы.

В настоящее время, несмотря на увеличение числа препаратов, полученных синтетическим путем, в медицинской практике всё большую популярность приобретают лекарственные средства растительного происхождения. До 40 % всех лекарственных препаратов, применяемых в современной медицине, получают из растительного материала.

По своей фармакологической активности фитопрепараты не уступают своим синтетическим аналогам, в то же время благодаря сбалансированному комплексу биологически активных веществ они благоприятно действуют на организм человека, практически без побочных эффектов.

В научной медицине нашли значительное применение эфиромасличные растения. Среди них большой интерес представляют растения семейства Яснотковых и Сельдерейных: тимьян обыкновенный, тимьян ползучий, душица обыкновенная, ажгон душистый и другие, в состав которых входит тимол, карвакрол, цимол, борнеол, гераниол и другие ароматические и терпеноидные соединения.

Эти вещества определяют широкий спектр фармакологического действия эфирных масел. Имеется огромный практический опыт использования ряда препаратов, содержащих эфирные масла. Их применяют для лечения заболеваний дыхательных путей, неврозов и почечно-каменной болезни, т.к. эфирные масла, входящие в их состав, оказывают противовоспалительный, антибактериальный, фунгицидный, потогонный, спазмолитический и мочегонный эффекты.

Несмотря на богатство флоры Российской Федерации, ресурсы лекарственного растительного сырья (ЛРС) не безграничны, к тому же некоторые лекарственные растения имеют ограниченный ареал. В связи с этим возникла необходимость изыскания таких видов растений; которые обладают высокой биологической активностью, и могут выращиваться в условиях, отличных от условий исторической родины.

До недавнего времени в нашей стране имелись промышленные запасы таких растений, как тимьян обыкновенный и ажгон душистый. Эти эфиромасличные растения оказывают отхаркивающий и противомикробный эффекты.

Однако в настоящее время промышленные плантации тимьяна обыкновенного и ажгона душистого находятся в СНГ. В этой связи возникает необходимость расширения сырьевой базы в России путем культивирования тимьяна обыкновенного или ажгона душистого, либо путем возделывания другого растения, обладающего таким же фармакологическим эффектом.

Таким требованиям удовлетворяет монарда дудчатая, имеющая ареал в Северной Америке. В условиях России этот вид культивируется в европейской части страны и в Сибири. Учеными Никитского ботанического сада была показана перспективность использования данного растения в медицинской практике в качестве антимикробного средства [74,75]. Сотрудниками кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии экспериментально было доказано, что монарда может культивироваться в условиях Самарской области.

Этот вид дает высокий выход эфирного масла, которое обладает бактерицидной, антибиотической активностью, иммуномодулирующими свойствами. Эфирное масло используется для ингаляций при заболеваниях верхних дыхательных путей [20, 74, 75].

Применение ЛРС при лечении различных заболеваний определяет повышенные требования к его качеству.

Одной из актуальных проблем современной фармации является анализ ЛРС. Стандартизация лекарственных средств растительного происхождения имеет свои особенности, связанные со сложным составом биологически активных веществ.

В связи с этим становится актуальным исследование не только химического состава, но и биохимических характеристик ЛРС, в частности, изучение состава и динамики активности терминального фермента гликолиза лактатдегидрогеназы (L-лактат: NAD-оксидоредуктаза, 1.1.1.27, ЛДГ), ключевого фермента цикла трикарбоновых кислот малатдегидрогеназы (L-малат: NAD-оксидоредуктаза, 1.1.1.37, МДГ) и фракций белка по фазам вегетации, а также полифенолоксидазы (орто-дифенол: Ог-оксидоредуктаза; КФ 1.10.3.1.), фермента, ответственного за накопление и окисление фенольных соединений в лекарственных растениях.

Государственная фармакопея СССР XI издания предлагает для стандартизации многих видов J1PC, в т. ч. «Трава чабреца», «Трава душицы обыкновенной», следующие параметры: внешние признаки, микроскопия и ряд числовых показателей, в частности, содержание экстрактивных веществ, эфирного масла, влажность, количество золы общей и другие. Для стандартизации исследуемого JIPC выше названных параметров недостаточно.

Одними из перспективных методов стандартизации JIPC являются хроматография в тонком слое сорбента (ТСХ), колоночная хроматография, газожидкостная хроматография (ГЖХ), позволяющие объективно решать проблему идентификации сырья и фитопрепаратов, но также дающие полную комплексную оценку подлинности и качества сырья.

Экспериментальное обоснование и рекомендация некоторых из выше перечисленных методов для стандартизации ЛРС также является актуальной задачей данного исследования.

Цель работы: фитохимическое и биохимическое исследование травы монарды дудчатой {Monarda fistulosa L.), выращенной в условиях Самарской области; сравнительное изучение полученных параметров качественного состава биологически активных соединений травы монарды дудчатой и официнальных тимолсодержащих видов сырья семейства Яснотковых (трава душицы обыкновенной - Herba Origani vulgaris и трава чабреца - Herba Serpylli).

Для достижения поставленной цели предстояло решать следующие конкретные задачи:

1. Исследовать состав биологически активных соединений (БАС) эфирного масла травы монарды дудчатой.

2. Определить товароведческие показатели для сырья «Монарды дудчатой трава».

6. Разработать методику качественного анализа тимола в траве душицы обыкновенной и траве чабреца.

8. Исследовать активность полифенолоксидазы (ПФО) JIPC по фазам вегетации.

9. Определить состав и динамику активности молекулярных форм (МФ) малатдегидрогеназы (МДГ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) исследуемого ЛРС по фазам вегетации.

Научная новизна.

Впервые разработан проект ФСП на новый вид ЛРС «Монарды дудчатой трава» - (Herba Monardafistulosae).

Впервые выделено эфирное масло из травы монарды дудчатой, культивированной в Самарской области.

Впервые проведена газожидкостная хроматография (ГЖХ) фракций и эфирного масла травы монарды дудчатой.

Впервые выделен и идентифицирован тимол из травы монарды дудчатой, культивированной в Самарской области.

В результате проведенных исследований разработаны: проект ФСП на лекарственное растительное сырье «Монарды дудчатой трава» методика качественного анализа травы душицы обыкновенной с использованием РСО тимола. методика качественного анализа травы чабреца с использованием РСО тимола. методика определения периодов вегетации высушенного JIPC по динамике фракционного состава белков и активности ПФО, МФ ЛДГ и МДГ душицы обыкновенной, чабреца, монарды дудчатой. На защиту выносятся: результаты исследования по разработке проекта ФСП на ЛРС «Монарды дудчатой трава». результаты исследования химического состава эфирного масла травы монарды дудчатой, выращенной в условиях Самарской области. данные исследований по разработке методик качественного анализа

БАС травы душицы обыкновенной, чабреца. результаты исследований по разработке методики определения сроков вегетации высушенного ЛРС.

Апробация диссертации.

Основные положения работы докладывались в течение 2000-2003 г.г. на 8 научных конференциях, в частности, научной конференции молодых исследователей «Аспирантские чтения» (Самара, 2001, 2002); 68-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН (Курск, 2002); 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2003).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 10 научных работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в Самарском государственном медицинском университете в соответствии с. планом научно-исследовательских работ (№ государственной регистрации 01200109135 и договор № 10/02 от 28 мая 2002 г. - заказчик ЗАО «Самарская фармацевтическая фабрика») и соответствует тематике Проблемной комиссии по фармации № 36.08 РАМН, МЗ РФ.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 120 страницах, содержит 23 таблицы, 15 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов и списка

Заключение диссертационного исследования на тему "Фитохимическое исследование и стандартизация тимолсодержащих растений семейства Яснотковых"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

3. Предложен новый вид ЛРС - трава монарды дудчатой. Разработан проект фармакопейной статьи предприятия травы монарды дудчатой, выращенной в условиях Самарской области, составлена пояснительная записка к ФСП «Монарды дудчатой трава».

5. Предложены новые лекарственные формы на основе травы монарды дудчатой - эфирное масло и настойка на 70 % спирте. Результаты химического анализа показали наличие всего комплекса биологически активных веществ при получении настойки методом перколяции, что свидетельствует о рациональном технологическом режиме.

10.Определены состав и динамика активности МФ МДГ и ЛДГ ЛРС по фазам вегетации.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2004 года, Мащенко, Зинаида Евгеньевна

1. Алаева-Зыкова, Н.А Разработка ресурсосберегающей технологии экстракта чабреца жидкого / Н.А Алаева-Зыкова, Ю.Г. Пшуков // Фармация. 1989. - Т. 38. - № 5. - С. 22-25.

2. Аналитические методы белковой химии / Под редакцией В.Н. Ореховича. М.: Издательство иностранной литературы, 1963. - 640 с.

3. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. М., 1980. -340 с.

4. Банаева, ЮА. Исследование химического состава эфирного масла представителей рода Thymus L., произрастающего на Алтае / Ю.А. Банаева, Л.М. Покровский, А.В. Ткачев // Химия растительного сырья. -1999.- №3.-С. 41-48.

5. Банах, Р. Определение химического состава флавоноидов шести видов растений рода Монарда и изучение их биологической активности: Автореф. дис. канд. фарм. наук / Р. Банах. Москва, 1988. - 23 с.

6. Барабой, В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений / В.А. Барабой. Киев: Наука думка, 1976. - 260 с.

7. Березовская, Т.П. Использование в медицине эфиромасличных растений Сибири / Т.П. Березовская, С.Е. Дмитрук, Г.И. Калинкина // Фармация. -1996. Т. 45. - № 1. - С.37-40.

8. Богуцкий, Б.В. Влияние эфирного масла монарды дудчатой на живые клетки in vitro / Б.В. Богуцкий, В.В. Николаевский, А.Е. Еременко // Фитонциды: Науч. тр. Киев: Наука думка, 1981. - С. 87-90.

9. Бубенчиков, А.А. Морфологические диагностические признаки некоторых видов рода Thymus L. / А.А. Бубенчиков, Я.С. Трембаля, Т.И. Васильченко // Фармация. 1983. - Т. 32. - № 4. - С. 15-17.

10. Воронкова, С.В. Исследование некоторых физико-химических свойствводорастворимых белков / С.В. Воронкова, Н.П. Садкова, О.Н. Альбицкая // Прикладная биохимия и микробиология. 1980. - Т. 16. - № 3. — С. 363-370.

11. Гааль, Э. Электрофорез в разделении биологических макромолекул / Э. Гааль, Г. Медьеши, Л. Верецкеи. М.: Мир, 1982. - 448 с.

12. Гейхман, Л.З. Фитонциды и сердечно-сосудистые заболевания / Фитонциды: Науч. тр. Киев: Наука думка, 1981. - С. 192-197.

13. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук. -Новосибирск: Наука. Сибирское отделение, 1990.-333 с.

14. Государственная фармакопея СССР 11 издания. Вып. 1. М.: Медицина, 1987.-336 с.

15. Государственная фармакопея СССР 11 издания. Вып. 2. М.: Медицина, 1989.-400 с.

16. Гребинский, О.С. Влияние окислителей на образование и свойства эфирных масел / О.С. Гребинский, Л.А. Люкова // ДАН СССР. 1952. -Т. 84.-№4.-С. 25-36.

17. Гурвич, Н.Л. Опытная классификация эфиромасличных растений // Растительное сырье. Эфиромасличные растения: Науч. тр. ботанического института им. В.Л. Комарова АН СССР. М.: Изд-во АН СССР, 1960. -Т.6, ч. 5. —С. 7-127.

18. Гусакова, С.Д. Липиды некоторых лекарственных растений / С.Д. Гусакова, Г.А. Степаненко, Д.Г. Асилбекова // Растительные ресурсы. — 1983.- Т. 19.-№4.-С. 444-455.

19. Гуськова, И.Н. Новые для Сибири пряноароматические растения семейства Губоцветные / Новые культуры в народном хозяйстве и медицине. Научная конференция, Киев, 5 7.06.75.: Тез. докл.. - Киев: Наука думка, 1976.-Т. 1.-С. П5-116.

20. Дмитриев, М.Т. Хромато-масс-спектрометрическое исследование летучих выделений растений Южного Крыма. / М.Т. Дмитриев, Е.Г. Растянников, Ю.А. Акимов // Растительные ресурсы. 1988. - Т. 24. - № 1.-С.81-85.

21. Доля, B.C. Efipni олп рослин роду м'ята та чебрець / B.C. Доля, B.I. Мозуль, О.Б. Приходько // Фармац. ж. 1999. - № 5. - С. 88-91.

22. Доля, B.C. Исследование эфирных и жирных масел некоторых видов семейства Яснотковые / B.C. Доля, В.И. Мозуль, А.В. Приходько // Человек и его здоровье: Тез. докл.. Курск, гос. мед. ун-т, 1998. - № 1. -С. 250-253.

23. Драгомирецкий, Ю.В. Целебные свойства жиров и масел: Лечебник / Ю.В. Драгомирецкий. Д.: Сталкер, 1997. - 352 С.

24. Дробытько, В.Г. Антимикробные вещества высших растений / В.Г. Дробытько, Б.Е. Айземан, С.И. Зелепуха. Киев: Издательство Академии наук УкССР, 1958.-335 С.

25. Дрягина, И.В. Секрет целебности монарды / И.В. Дрягина, М.О. Кан// Картофель и овощи. 1997. - № 5. - С. 17-18.

26. Епринцев, А.Т. Активность и изоформы малатдегидрогеназы в высоко- и низкомасличных сортах кукурузы / А.Т Епринцев, А.У. Игамердиев // Физиология растений. 1995 - Т. 42. - № 5. - С. 759-764.

27. Епринцев, А.Т. Малатдегидрогеназная система Wolfjia arrhiza: характеристика и роль в адаптации к свету и темноте / А.Т. Епринцев, А.У. Игамердиев, Л. Ашнин // Физиология растений. 1996. - Т. 43. - № 1.-С. 36-42.

28. Епринцев, А.Т., Пинейру М.А., Зубков Е.Д. Субклеточная локализация малатдегидрогеназы высших растений / А.Т. Епринцев, М.А. Пинейру, Е.Д. Зубков // 4-ая Всесоюз. конф. молодых ученых по физиологии растительной клетки: Тез. докл.. Минск, 1990.- С. 25.

29. Ермаков, А.И. Методы биохимического исследования растений / А.И. Ермаков. Л.: Агропромиздат, 1987. - С. 107-118.

30. Ермоленко, Л.Н. Генетика изоферментов лактатдегидрогеназы у лососевых рыб / Л.Н. Ермоленко // Генетика. 1987. - Т. 23. - № 2. - С. 344-354.

31. Замуренко В.А. Исследование компонентного состава эфирного масла Monarda fistulosa / В.А. Замуренко, Н.А. Клюев, Б.В. Бочаров // Химия природных соединений. 1989. - Т. - № 5. - С. 646-649.

32. Запрометов, М.Н. Метаболизм фенольных соединений в растениях / М.Н. Запрометов // Биохимия. 1977. - Т. 42. - №1. - С. 3 - 20.

33. Запрометов М.Н. Фенольные соединения и их биогенез / М.Н. Запрометов // Итоги науки и техники: сер. Биологическая химия. — М., 1988.-Т. 27.- 188 с.

34. Зарубина, Л.А. Антимикробные свойства эфирных масел сибирских, видов чабрецов / Л.А. Зарубина, В.Н. Тихонов // Фитонциды. Бактериальные болезни растений: Материалы конф.: Тез. докл.. — Киев, Львов, 1990.-Ч. 1.-С.20.

35. Зауралов, О.А. О физиологическом значении эфирных масел в растении / О.А. Зауралов // Растительные ресурсы. 1975. - Т. 11. - № 2. -С.289-304.

36. Зелепуха, С.И. Антимикробные свойства растений употребляемых в пищу / С.И. Зелепуха. Киев: Наука думка, 1973. — 408 с.

37. Казакевич, Г.М. Чабрец ползучий (Thymus serpyllum) на Украине / Г.М. Казакевич // Лес, наука, молодежь: Материалы международной научной конференции молодых ученых, Гомель, 5-7 окт., 1999: Тез. докл.. Гомель, 1999. - Т. 2. - С. 224-225.

38. Казаринова, Н.В. Опыт использования Origanum vulgare• L. и О. Tytthanthum Gontsch для борьбы с внутрибольничными инфекциями / Н.В. Казаринова, К.Г. Ткаченко, JI.M. Музыченко // Растительные ресурсы. -1999.-Т. 35.- №4.-С. 51-58.

39. Калинкина, Г.И. Перспективы использования в медицинской практике эфирно-масличных растений флоры Сибири / Г.И. Калинкина, Т.П. Березовская, С.Е. Дмитрук // Химия растительного сырья. 2000. — № 3. — С. 5-12.

40. Капелев, И.Г. Интродукция монарды как эфиромасличного растения / И.Г. Капелев // Новые культуры в народном хозяйстве и медицине. Научная конференция, г. Киев, 5 7.06.75: Тез. докл.. - Киев: Наука думка, 1976.-С. 100-101.

41. Карташов, B.C. Идентификация фенолов, хинонов и их производных методом спектроскопии ЯМР 'Н с использованием персонального компьютера / B.C. Карташов, С.В. Шоршнев, А.П. Арзамасцев // Фармация. 1996. - Т. 45. - № 2. - С. 47-48.

42. Клименко, В.Г. Формы азота зерна и белков некоторых сортов гороха / В.Г.Клименко//Биохимия. 1953.-Т. 18.-№2.-С. 141-150.

43. Клоков, М.В. Расообразование в роде тимьянов -L. на территории Советского Союза / М.В. Клоков. Киев, 1973. - 190 с.

44. Клюев, Н.А. Использование масс-спектрометрии в структурном анализе компонентов эфирных масел / Н.А. Клюев, В.А. Замуренко, Н.С.

45. Евтушенко // Фармация. 1986. - Т. 35. - № 5. - С. 69-76.

46. Клюев, Н.А. Применение физико-химических методов в анализе эфирных масел / Н.А. Клюев, В.А. Замуренко, Н.С. Евтушенко // Фармация. 1986.-Т. 35.-№ 1.-С. 76-83.

47. Клюев, Н.А. Применение хромато-масс-спектрометрии для определения компонентного состава эфирных масел / Н.А. Клюев, В.А. Замуренко, Н.С. Евтушенко // Фармация. 1987. - Т. 36. - № 5. - С. 70-77.

48. Колесников, М.П. Фенольные соединения в лекарственных растениях / М.П. Колесников, В.К. Гинс // Прикладная биохимия и микробиология. -2001. Т. 37. - №4. - С. 457-465.

49. Колесников, П.А. Действие светового режима на полифенолы, полифенолоксидазу и образование эфирных масел в листьях мяты и кориандра / П.А. Колесников, С.В. Эменова // Физиология растений. — Т. 3. № 5. - С. 480-486.

50. Корочкин, Л.И. Генетика изоферментов / Л.И. Корочкин, О.Л. Серов, А.И. Пудовкин. М.: Наука, 1977. - 275 с.

51. Костенникова, З.П. Изучение компонентного состава эфирного масла настоек гомеопатических матричных, содержащих терпеноиды / З.П. Костенникова, Я.Ф. Копытько // Фармация. 1996. - Т. 45. - № 6. - С. 4143.

52. Кретович, В.Л. Биохимия растений / В.Л. Кретович. М.: Высшая школа, 1986. - 503 с.

53. Кретович, В.Л. Дегидрогеназы зерна кукурузы различных фракций /

54. B.J1. Кретович, А.И. Яковенко, В.А. Яковенко // Прикладная биохимия и микробиология. 1969. - Т. 5. - № 4. - С. 34-36.

55. Куркин, В.А. Компоненты надземной части Thymus bashiriensis / В.А. Куркин, В.Б. Браславский, П.Е. Кривенчук // Химия природных соединений. 1988. - № 5. - С. 758.

56. Куркин, В.А. Флавоны и розмариновая кислота Thymus zheguliensis /

57. B.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, П.Е. Кривенчук // Химия природных соединений. 1988. - № 4. - С. 594-595.

58. Лекарственные растения Государственной фармакопеи / Под ред. И.А. Самылиной. М.: АНМИ, 1999. - 496 с.

59. Леонова, Н.С. Система иммунитета и влияние на нее биологически активных веществ растений / Н.С. Леонова // Новая аптека. 2001. - №2. —1. C. 32-34.

60. Лысенко, Н.И. Внутриклеточная локализация изоферментов NAD+-зависимой МДГ сахарной свеклы / Н.И. Лысенко, И. П. Куличенко, В.И. Николайчук // Докл. АН УССР. 1984. - № 2. - С. 98-104.

61. Мартынов, A.M. Фармакогностическое изучение растений рода Монарда: Автореф. дис. канд. фарм. наук / A.M. Мартынов. Тбилиси, 1976.-31 с.

62. Машанов, В.И. Пряно-ароматические растения / В.И. Машанов, А.А. Покровский. М.: Агропромиздат, 1991. - 210 с.

63. Мецлер, Д. Биохимия / Д. Мецлер. М.: Мир, 1980. - 3 т.

64. Мирович, В.М. Фармакологическое изучение душицы обыкновенной: Автореф. дис. канд. фарм. наук/В.М. Мирович. Л., 1989.-29 с.

65. Михлин, Д.М. Биохимия клеточного дыхания / Д.М. Михлин. М.: Изд-во АН СССР, 1960. -415 с.

66. Михлин, Д-М. Йодометрический метод определения полифенолоксидазы и пероксидазы / Д.М. Михлин, З.С. Броновицкая //

67. Биохимия. 1949.-Т. 14. -№ 4. - С. 379-381.

68. Михлин, Д.М. Полифенольные соединения кок-сагыза / Д.М. Михлин, К.В.Пшенова//Биохимия.-1953.-Т. 18.-№ 1.-С. 24-28.

69. Муравьев, И.А. Технология лекарств / И.А. Муравьев. — М.: Медицина, 1980. Т. 1. - С. 173-186.

70. Муравьев И.А. О возможности комплексного использования травы чабреца / И.А. Муравьев, Н.А. Зыкова // Фармация. 1993. - Т. 42. - № 1. -С. 18-21.

71. Муравьева Д.А. Тропические и субтропические лекарственные растения. Учебное пособие для студентов фармацевтических институтов и фармацевтических факультетов /. М.: Медицина, 1997. - 383с.

72. Муравьева, Д.А. Некоторые итоги интродукции монарды в условиях Пятигорска / Д. А. Муравьева, A.M. Мартынов // Научные доклады высшей школы. Биологические науки: Науч. тр. 1975.-№2.-С.82-84.

73. Мустяцэ, Г.М. Возделывание ароматических растений / Г.М. Мустяцэ. -Кишинев, 1988.- 196 с.

74. Надирова, Т.Я. Одновременное исследование изоферментного спектра образцов, значительно отличающихся по общей активности лактатдегидрогеназы / Т.Я. Надирова, И.П. Слуцкий // Лабораторное дело. 1983. - № 6. - С.27-29.

75. Николаевский, В.В. Аромотерапия: Справочник / В.В. Николаевский. М.: Медицина, 2000. 336 с.

76. Николаевский, В.В. Биологическая активность эфирных масел / В.В. Николаевский, А.Е. Еременко, И.К.Иванов.- М.:Медицина, 1987.-144с.

77. Новицкая, Г.В. Жирнокислотный состав масел семян некоторых видов сем. Labiatae в связи с их систематическим положением / Г.В. Новицкая, В.И. Мальцева // Растительные ресурсы. 1967. - Т. 3. - № 3. - С. 438442.

78. Новицкая, Г.В. Состав триглицеридов семян Monarda Jistulosa L.,

79. Monarda mollis L. и Pycnantheum virginianum L.(ceM. Labiatae) / Г.В. Новицкая, В.И. Мальцева // Биохимия.- 1966. Т.31. - №5- С.953-958.,

80. Омиадзе, Н.Т. Внутриклеточная локализация и характеристика монофенолоксидазы в листьях чая / Н.Т. Омиадзе, Г.Н. Пруидзе, Н.И. Мчедшвили // Украинский биохимический журнал. 2000. - Т. 72. - № 3. -С. 38-43.

81. Опарин, Р.В. Исследование химического состава эфирного масла Monarda fistulosa L. и Monarda dydima L., культивируемых в условиях Западной Сибири / Р.В. Опарин, J1.M. Покровский, Г.И. Высочина // Химия растительного сырья. 2000. - №3. - С. 19-24.

82. Пинейру де Карвалью, М.А.А. Малатдегидрогеназа высших растений / М.А.А. Пинейру де Карвалью, А.А. Землянухин, Е.Т. Епринцев. -Воронеж: Изд-во ВГУ, 1991. 21.6 с.

83. Понтович, В.Э, Изменение активности окислительных ферментов (полифенолоксидазы) с возрастом растений / В.Э. Понтович // Биохимия.- 1949. Т. 14. - № 5. - С. 460-466.

84. Попов, А.И. Изучение элементного состава душицы обыкновенной {Origanum vulgare L.) / А.И. Попов, В.А. Попов // Фармация. 1992. - Т. 41.-№3. С. 41-43.

85. Попов, В.Р. Полифенолоксидазная активность побегов чая при их росте и технической переработке / В.Р. Попов // Биохимия. 1958. - Т. 23.- № 6. С. 856-861.

86. Правила сбора и сушки лекарственных растений (сборник инструкций). М.: Медицина, 1985. - 328 с.

87. Пруидзе, Г.Н. Разнородность молекулярных форм полифенолоксидазы листьев винограда / Г.Н. Пруидзе, М.Н. Запрометов, С.В, Дурмишидзе // Биохимия. 1983. - Т. 48. - № 7. - С. 1188-1194.

88. Работягов, В.Д. Внутривидовая изменчивость состава эфирного масла чабреца при семенном размножении / В.Д. Работягов, С.Н.

89. Корсакова, Б.А. Виноградова // Физиология и биохимия культурных растений. 2001. - Т. 33. - № 5. - С. 398-403.

90. Райдер, К. Изоферменты / К. Райдер, К. Тейлор- М.:Мир, 1983-106с.

91. Растительные ресурсы СССР. Вып. 6: Сем. Hippuridaceae -Lobeliaceae. Л.: Наука, 1991. - 254 с.

92. Регистр лекарственных средств. РЛС-аптекарь / Под ред. Ю.Ф. Крылова. М.: РЛС-2000, 1999. 1376 с.

93. Родионова, М.А. Влияние фотопериода на содержание и метаболизм фенольных соединений Perilla ocomoides / М.А. Родионова, И.К. Лапа, Т.К. Кашина // Физиология растений. -1995- Т. 42. № 6. - С. 842-848.

94. Розенфельд, Л.И. Фитонциды в лекарственных растениях (Ташкентский оазис): Автореф. дис. канд. мед. наук / Л.И. Розенфильд. -Тбилиси, 1964.-29 с.

95. Рубин, Б.А. Окислительные превращения фенолов и их роль в явлениях устойчивости картофеля к Phytophthora infestans / Б.А. Рубин, Е.В. Арциховская, Т.А. Проскурникова // Биохимия. 1947. - Т. 12. - № 2. -С. 141-151.

96. Руднева, И.И. Антропогенное изменение белкового состава у морских организмов / И.И. Руднева // Доклады АН СССР. 1983. - Т. 271. - № 2. -С. 502-505.

97. Руклиш, М.П. Лактатдегидрогеназы продуцента лизина Brevibacterium flavum и Micrococcus glutamicus / М.П. Руклиш, Я.Д. Анцанс, М.К. Тома // Изв. АН Латвийской ССР. 1987. - № 8. - С. 97-10L

98. Рупасова, Ж.А. Сезонная динамика биологически активных веществ душицы обыкновенной в условиях Белоруссии / Ж.А. Рупасова, Л.В.Кухарева, В.А. Игнатенко // Весщ АН Беларусь Сер. б1ял. н. 1998. -№2.-С. 10-15.

99. Самылина, И. А. Лекарственные растения Государственнойфармакопеи / И.А. Самылина, А.А. Сорокина, В.А. Ермакова // Мир медицинских и лекарственных растений. 1999. - № 3-4. - С. 2-62.

100. Сатановская, В.И. Влияние отвара чабреца на ферменты обмена этанола и ацетальальдегида / В.И. Сатановская, Ю.М. Островский, М.Н. Садовник // Химико-фармацевтический журнал. 1989. - Т. 23. - № 5. -С. 528-530.

101. Сафонов, В.И. Метод электрофореза в синтетической среде -полиакриламидном геле / В.И. Сафонов, М. П. Сафонова // Физиология растений. 1964. - Т. 11. - № 1. - С. 147-152.

102. Сафонов, В.И. Анализ белков растений методом вертикального микроэлектрофореза в полиакрамидном геле / В.И. Сафонов, М.П. Сафонова // Физиология растений. 1969. - Т. 16. - № 2. - С. 350-357.

103. Сафонов, В.И. Выделение препаратов растворимых белков из вегетативных органов растений для электрофоретического исследования / В.И. Сафонов, М.П. Сафонова // Физиология растений. 1969. - Т. 16. — № 1.-С. 161-166.

104. Северная, Т.А. МДГ корней, листьев и семян кукурузы / Т.А. Северная, М.К. Гильманов, В.П. Яковлева // Докл. АН СССР. 1968. - Т. 21.-№5.-С. 125-129.

105. Симонян, А.В. Флавоновые гликозиды некоторых видов рода Thymus / А.В. Симонян // Химия природных соединений. 1972. - № 6. - С. 801.

106. Симонян, А.В. Количественное определение тритерпеноидов в растениях рода Thymus / А.В. Симонян, A.JT. Шинкаренко, Э.Т. Оганенсян // Химия природных соединений. 1972. -№ 3. - С. 293-295.

107. Спиридонов, Н.А. Цитостатическое действие лекарственных растений на лимфобластоидные клетки в культуре / Н.А. Спиридонов, В.В. Архипов // Химико-фармацевтический журнал. 1994. - Т. 28. - № 9. -С. 49-51.

108. Стентон, Г. Медико-биологическая статистика / Г. Стентон.- М.:1. Практика, 1999.-459 с.

109. Страйер, JI. Биохимия / Л. Стайер; Под ред. С.Е. Северина. М.: Мир. - 1984. - Т. 2. - С. 183-184.

110. Сур, С.В. ГЖХ-определение тимола и карвакрола в растительном сырье и настое травы чабреца / С.В. Сур, Ф.М. Тулюпа, А.Я. Толок // Химико-фармацевтический журнал. 1990. - Т. 24. - № 10. - С. 69-71.

111. Сур, С.В. Методы выделения, идентификации и определения терпеновых соединений (обзор) / С.В. Сур // Химико-фармацевтический журнал. 1990. - Т. 24. - № 5. - С. 42-50.

112. Тихонов, В.Н. О возможности использования сибирских видов чабреца / В.Н. Тихонов // Всерос. конф.: Тез. докл.. Куйбышев, 1988. — С. 176-177.

113. Ткачева, Н.И. Изучение фунгицидной активности некоторых эфирных масел / Н.И. Ткачева, И.А. Муравьев, Н.Н. Николаевский, // Фармация. — 1989. Т. 38. - № 3. - С. 72-73.

114. Ткаченко, К.Г. Компонентный состав эфирного масла Origanum vulgare L., выращиваемая в Ленинградской области / К.Г. Ткаченко, А.В. Ткачев // Растительные ресурсы. 2002. - Т. 38. - № 1. - С. 97-101.

115. Ткемаладзе, Г.Ш. Влияние фенольных соединений на активность малатдегидрогеназы чайного растения / Г.Ш Ткемаладзе, З.Н. Морчиладзе, Ц.Ш. Джамаспишвили // Прикладная биохимия и микробиология. 1972. - Т.8. - № 3. - С. 275-281.

116. Ткемаладзе, Г.Ш. Обратимая диссоциация растительной малатдегидрогеназы / Г.Ш Ткемаладзе, Т.А. Садунишвили // Биохимия. -1977. Т. 42. - № 8. - С. 1491-1498.

117. Токарева, Н.В. Белки облепихи в сортовой идентификации культуры / Н.В. Токарева // Проблемы стабилизации и развития сельскохозяйственного производства Сибири, Монголии и Казахстана в

118. XXI веке: Тез. докл. междунар. науч.-практ. конференции, Новосибирск, 20-23 июля, 1999 г.- Новосибирск, 1999. Т.1. - С. 298-299.

119. Толкунова, Н.Н. Антиокислительные свойства композиций эфирных и жирных масел / Н.Н. Толкунова // Мясная индустрия. 2002. - № 6. - С. 87-88.

120. Толок, А.Я. Фотометрическое определение фенолов в эфирных маслах. / А.Я. Толок, С.С. Артемченко // Химия природных соединений. -1988.-№4.-С. 509-511.

121. Тульчинская, В.П. Антибактериальная активность эфирных масел и их компонентов в отношении бруцелл / В.П. Тульчинская, А.П. Дегтярева // IV совещание по проблемам фитонцидов (3 6.07.62. г. Киев): Тез. докл.. - Киев: Изд-во АН УкССР, 1962. - С. 54-55.

122. Тульчинская, В.П. Антибактериальная активность эфирных масел и их компонентов в отношении бруцелл / В.П. Тульчиская, А.П. Дегтярева, Т.И. Фролов // Фитонциды в народном хозяйстве: Тез. докл.. Киев: Наука думка, 1964. - С. 272-273.

123. Туманова, Е.А. Состав эфирных масел растений сем. Яснотковые в среднетаежной подзоне республики Коми / Е.А. Туманова // Вестник Института биологии. 1999. - Вып.21. - С. 67-70.

124. Туманова, E.JI. Выделение монотерпеноидов эфирного масла Origanum vulgare L. методом твердофазной экстракции / E.JI. Туманова, А.В. Кучин, В.В. Пунегов // Лесохимия и органический синтез: Тез. докл. III Всерос. совещ. Сыктывкар, 1998. - С. 57.

125. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение / А.Д. Турова, Э.Н. Сапожникова. М.: Медицина, 1982. - 304 с.

126. Тюкавкина, Н.А. Изучение химического состава нового фитопрепарата «Бальзам Первопрестольный». 1. Летучие компоненты / Н.А. Тюкавкина, И.А. Руленко, Н.Н. Колесникова // Фармация. 1997. — Т. 46.-№ 1.-С. 20-26.

127. Тюкавкина, Н.А. Изучение химического состава нового фитопрепарата «Бальзам Первопрестольный». 1. Летучие компоненты / Н.А. Тюкавкина, И.А. Руленко, Н.Н. Колесникова // Фармация. 1997. -Т. 46. -№3.-С. 22-23.

128. Физико-химические методы исследования природных биологических соединений. В 3 ч. / В.А. Куркин, В.Б. Браславский, Е.В. Авдеева и др.; Под ред. В.А. Куркина. Самара: СамГМУ, 1997.

129. Ч.1. Хроматографические методы: Учебное пособие для студентов 3-5курсов фармацевтического факультета. — 38 с.

130. Фитонциды в эргономике / Под ред. A.M. Гродзинского- Киев: Наука думка, 1986.- 188 с.

131. Фитотерапия с основами клинической фармакологии / Под ред. В.Г. Кукеса. М.: Медицина, 1999. - 192 с.

132. Хачкалян, Т.К. Множественные молекулярные формы NAD-зависимой малатдегидрогеназы в онтогенезе /.Т.К. Хачкалян, А.А. Симонян Ереван, 1986. - 13 с. - Деп. в ВИНИТИ 25.02.86, № 8150-В 86.

133. Чернядьев, И.И. Фиксация углекислоты на Сз-акцепторах при. . фотосинтезе у Rhodopsendomonas palustris / И.И. Чернядьев, В.Э.

134. Успенская, Н.Г. Доман// Биохимия. 1972. - Т. 37. - № 5. - С. 521-527.

135. Шаталаев, И.Ф. Фракционный состав белков активного ила очистных сооружений нефтеперерабатывающего завода / И.Ф. Шаталаев // Гидробиологический журнал. 1992. - Т. 28. - № 5. - С. 28-32.

136. Шаталаев, И.Ф. Методы выявления молекулярных форм некоторых оксидоредуктаз микроорганизмов активного ила / И.Ф Шаталаев, М.М. Телитченко // Гидробиологический журнал. 1992 - Т.28. - № 2.-С.70-74.

137. Шаталаев, И.Ф. Динамика молекулярных форм лактат-, малат- и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназ в моделях экосистемы активного ила / И.Ф Шаталаев, М.М. Телитченко, Т.Б. Волгина // Гидробиологический журнал. 1992. - Т. 28. -№ 3. - С. 32-39.

138. Шретер, А.И. Лекарственная флора Кавказа / А.И. Шретер, Д.А. Муравьева, Д.А. Пакли. М.: Медицина, 1979. - 368 С.

139. Шубина, А.П. Ингаляции эфирными маслами в комплексном лечении больных хроническим бронхитом / А.П. Шубина, С.А. Сюрин, В.М. Савченко // Врачебное дело. 1990. - № 5. - С. 66-67.

140. Щербаковский, Л.Р. Бензо-, нафто- и антрохиноны цветковых растений как антимикробные вещества / Л.Р. Щербаковский, Л.С. Шубина // Растительные ресурсы. 1975. - Т. 11. - № 3. - С. 445-455.

141. Янкин, С.И. Термоустойчивость полифенолоксидазы в плодовых соках / С.И. Янкин // Биохимия. 1962. - Т. 27. - № 2. - С. 2351-2240.

142. Adersone, U. Changes of morphogenic competence in mature Pinus sylvestris L. buds in vitro / U. Adersone, G. Ievinsh // Ann Bot (Lond) . 2002. - Vol. 90. - № 2. - P. 293-298.

143. Adzet, T. Chromatographic analysis of polyphenols of some Iberian

144. Thymus / Т. Adzet, R. Vila, S. Canigueral // J Ethnopharmacol. 1988. - Vol. 24.-№2-3.-P. 147-154.

145. Alves-Pereira, I.M.S. Essential oilsand Hydrocarbons from leaves and calli of Origanum vulgare ssp. virens / I.M.S. Alves-Pereira, M. Fernandes-Ferreira // Phytochem. 1998. - Vol. 48. - № 5. - P. 795-799.

146. Alzoreky, N.S. Antibacterial activity of extracts from some edible plants commonly consumed in Asia /N.S. Alzoreky // Int J Food Microbial. 2003. -Vol. 80. - № 3. - P. 223-230.

147. Arai, T. Characteristics of lactate dehydrogenase isosymes in tissue extracts of herbivorous, Microtus arvalis pallas / T. Arai, S. Masashi, T. Juichi // Jap. J. Vet. Sci. 1988. - Vol. 50. - № 1. - P. 287-290.

148. Araoz, R. Electrophoretic applications of phycobiliproteins / R. Araoz, M. Lebert, D.P. Hader // Electrophoresis. 1998. - Vol. 19. - P. 215-219.

149. Asker, H. The physiological role of the isoenzymes of lactate dehydrogenase in potatoes / H. Asker, D.D. Davies // Planta. 1984. — Vol. 161.- №3.-P. 272-280.

150. Barberan, F.A.T. The Flavonoid Compounds from the Labiatae / F.A.T. Barberan // Fititerapia. 1986. - Vol. 57. - № 2. - P. 67-95.

151. Basaglia, F. The isozymes of lactate dehydrogenase, malate degydrogenase glucosephosphate isomerase in Halian ictalurids / F. Basaglia // Сотр. Biochem. and Physiol. 1989. - Vol. 92. - № 2. - P. 395-398.

152. Burt, S.A. Antibacterial activity of selected plant essential oils against Escherichia coli 0157:H7 / S.A. Burt, R.D. Reinders // Lett Appl Microbiol. -2003.-Vol. 36.- №3.-P. 162-167.

153. Carbonaro, M. Modulation of antioxidant compounds in organic vs conventional fruit (peach, Prunus persica L., and pear , Pyrus communis L.) / M. Carbonaro, M. Mattera, S. Nicoli // J. Agr. and Food Chem. 2002. - Vol. 50- № 19.-P. 5458-5462.

154. Clintock, E. A review of the genus Monarda (Labiatae) / E. Clintock, C. Epling // Univrsity of California publication in botany. 1982. - Vol. 20. - №2.-P. 147-194.

155. Comparative analysis of essential oil composition of Origanum vulgare from Macedonia and commercially available Origani herba / R. Hristova, M. Ristic, D. Brkic, G. Stefov, S. Kulevanova // Acta pharm. (Croatia). 1999. -Vol. 49. - № l.-P. 299-305.

156. Constabel, C.P. Polyphenol oxidase from hybrid poplar. Cloning and expression in response to wounding and herbivory / C.P. Constabel, L. Yip, J.J. Patton // Plant Physiol. 2000. - Vol. 124. - № l - p. 285-295.

157. Cozzone, A. Polyacrylamide gel electrophoresis of proteins of Spirulina platensis (Gom.) Geitler and Spirulina geitleri J. de Toni / A. Cozzone, F. Busson // C. R. Acad. Sci Hebd. Seances Acad. Sci. D. 1970. - Vol. 23. - № 8.-P. 2878-2881.

158. Debowska, R. Properties о diphenolase from Vanilla Planifolia (Andr.) shoot primordial cultured in vitro / R. Debowska, A. Podstolski // Agr. and Food Chem. 2001. - Vol. 49. - № 7. - P. 3432-3437.

159. Dell'Agata Massimo Unusual steady-state kinetic properties of chilopod enzyme: L-lactate dehydrogenase purified from Scolopendra cingulata / Dell'Agata Massimo // Compar. Biochem. and Physiol. 1990. - Vol. 96. - №3.-P. 439-444.

160. Dhandayuthapani, S. LDH isoenzyme as a tool for the identification of mycobacteria / S. Dhandayuthapani, N. Nalini, V.N. Bhatia // Indian J. Lepr. -1989.-Vol. 61.- № l.-P. 61-64.

161. Dicks, L.M.T. Differentiation of Leuconoctoc species by nicotinamide adenine dinucleotide-dependent D (-)-lactic degydrogenase profiles / L.M.T. Dicks, H.J.J. Van Vuuren // FEMS Microbiol. Lett. 1990. - Vol. 67. - № 1-2.-P. 9-14.

162. Escibano, J. Subcellular localization and isoenzyme pattern of peroxidase and polyphenol oxidase in beet root {Beta vulgaris L.) / J. Escibano, F. Gandia-Herrero, N. Caballero // J Agric Food Chem. Vol. 50. - № 21. - P. 61236129.

163. Fujino, K. Biochemical polymorphism in some species of moluscs / K. Fujino // Biochem. Genetic. 1977. - Vol. 15. - № 9-Ю. - P. 285-296.

164. Garcia, M.A. Analysis of Origanum vulgare volatiles by direct thermal desorption coupled to gas chromatography-mass spectrometry / M.A. Garcia, J. Sanz // J Chromatogr A. 2001. - Vol.918.- № l.-P. 189-194.

165. Gonzalez, E.M. Partial characterization of peroxidase and polyphenol oxidase activities in blackberry fruits / E.M. Gonzalez, B. de Ancos, M.P. Cano // Agr. and Food Chem. 2000. - Vol. 48. - № 11. - P. 5459-5464.

166. Gonzalez E.M., de Ancos В., Cano M.P. Partial characterization of polyphenol oxidase activities in raspberry fruits / E.M. Gonzalez, B. de Ancos, M.P. Cano // Agr. and Food Chem. 1999. - Vol. 47. - № 10. - P. 4068-4072.

167. Gooding, P.S. Molecular cloning and characterization of banana fruit polyphenol oxidase / P.S. Gooding, C. Bird, S.P. Robinson // Planta. 2001. -Vol. 213. - № 5. - P. 748-757.

168. Goun, E. Antithrombin activity of some constituents from Origanum vulgare / E. Goun, G. Cunningham, S. Solodnikov / Fitoterapia. 2002. - Vol. 73.- №7-8.-P. 692-694.

169. Haas, L.F. Thymus serpyllum (wild thyme) / L.F. Haas // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 1996. - Vol. 60. - № 2. - P. 224.

170. G. Development, fine structure and oil content of gland hairs from Monarda fistulosa / G. Heinrich // Planta Med. 1973. - Vol. 23. - № 2. - P.154.166.

171. Heinrich G. The volatile oil of Monarda fistulosa and incorporation of labeled CO 2 into its components / G. Heinrich // Planta Med. 1973. - Vol. 23 .- № 3. - P. 201-212.

172. Ho Chien Memrane-bound D-lactate dehydrohenase of Echericia coli: a model for protein interactions in membranes / Ho Chien, E.A Pratt, S. Rule Gordon // Biocim. et biophys. acta Rev. Biomenib. Ranes. 1989. - Vol. 988.- № 2. P. 173-184.

173. Hoffman Neil, E. Induction of lactate dehydrogenase isozymes by oxygen deficit in barley root tissue / E. Hoffman Neil, F. Bent Andrew, D. Hansonk Andrew // Plant. Physiol. 1986. - Vol. 82. - № 3. - P. 658-663.

174. Hoffman Neil E., Bent Andrew F., Hansonk Andrew D. Purification and properties of hypoxically induced lactate dehydrogenase from darley roots / E. Hoffman Neil, F. Bent Andrew, D. Hansonk Andrew // Plant. Physiol. 1986.- Vol. 82. № 3. - P. 664-670.

175. Isman, M.B. Insecticidal activity of essential oils to the tobacco cutworm, Spodoptera litura / M.B. Isman, A.J. Wan, C.M. Passreiter // Fitoterapia. -2001. Vol. 72. - № 1. - P. 65-68.

176. Jerkovic, I. The effect of air-drying on glycosidically bound volatiles from seasonally collected origano (Origanum vulgare ssp. hirtum) from Croatia / I. Jerkovic, J. Mastelic, M. Milos // Nahrung. 2001. - Vol. 45. - № 1. p. 47-49.

177. Kaufmann, M. Molecular systematics of the nepetoideae (family Labiatae): phylogenetic implications from rbcL gene sequences / M.Kaufmann, M. Wink // Z Naturforsch. 1994. - Vol. 49. - № 9-10. - P. 635-645.

178. Kreis, W. Polyphenoloxidase aus der Arzeidrage Echinaceae purpureae herba / W. Kreis, U. Subner, B. Nublein // J. Appl. Bot. 2000. - Vol. 74. - № 3-4.-P. 106-112.

179. Li, L. Overexpression or polyphenol oxidase in transgenic tomato plants results in enhanced bacterial disease resistance / L. Li, J.C. Steffens // Planta.2002. Vol. 215. - № 2. - P. 239-247.

180. Ma, H. Malate degidrogenase isoenzymes in Asperigilluss niger f H. Ma, C.P. Kubicek, M. Ronhr // FEMS Microbiology Letters. 1982. - Vol. 12. -№2.-P. 255-261.

181. Matheis, G. Multiple forms of soluble monophenol, dyhydroxyphenylalanine: oxidoreductase (EC 1.14.18.1) from potato tubers (<Solarium tuberosum) / G. Matheis, H.D. Belitz // Z Lebensm Unters Forsch . — 1975.-Vol. 157.-№4-P. 221-227.

182. Mazzafera P. Characterization of polyphenol oxidase in coffee / P. Mazzafera, S.P. Robinson // Phytochemastry. 2000. - Vol. 55. - № 4. - P. 285-296.

183. McAlister-Henn, L. Complete nucleotide sequense of the Escherichia coli gene encoding Malate degydrogenase / L. McAlister-Henn, M. Blaber, R.A. Bradshaw // Nucleic Acids Research. 1987. - Vol. 15. - № 12. - P. 985-996.

184. Mihajlov, M. Pharmacognostic study of the medicinal flora in Southeast Bosnia. Thymus serpyllum L. IV / M. Mihajlov, J. Tucakov // Glas Sip Akad Nauka Med. 1969. - № 22. - P. 43-58.

185. Mockute, D. The essential oil of Origanum vulgare L. ssp. vulgare growing wild in Vilnius district (Lithuania) / D. Mockute, G. Bernotiene, A.

186. Judzentiene // Phytochemistry. -2001. Vol. 57. - № 1. P. 65-69.

187. Nagai, T. Partial purification of polyphenol oxidase from Chinese cabbage Brassica rapa L. / T. Nagai, N. Suziki // Agr. and Food Chem. 2001. - Vol. 49. - № 8. - P. 3922-3926.

188. Nakatani, N. Phenolic antioxidants from herbs and spices / N. Nakatani // Biofactors.-2000.-Vol. 13.-№ 1-4.-P. 141-146.

189. Nikolaevskii, V.V. Effect of essential oils on the course of experimental atherosclerosis / V.V. Nikolaevskii, N.S. Kononova, A.I. Pertsovskii // Patol Fiziol Eksp Ter. 1990. - № 5. -P. 52-53 .

190. Paul, B. Purification and characterization of polyphenol oxidase from the seeds of field bean (Dolichos lablab) / B. Paul, L.R. Gowda // Agr. and Food Chem. 2000. - Vol. 48. - № 9. - P. 3839-3846.

191. Rasooli, I., Antibacterial properties of Thymus pubescens and Thymus serpyllum essential oils / I. Rasooli, S.A. Mirmostafa // Fitoterapia. 2002. -Vol.73.-№3.-P. 244-250.

192. Rivero, R.M. Resistance to cold and heat stress: accumulation if phenolic compounds in tomato and watermelon plants / R.M. Rivero, J.M. Ruiz, P.C. Garcia // Plant Sci. 2001. - Vol. 160. - № 2 - P. 315-321.

193. Ross, S.A. Antimicrobial activity of some Egyptian Aromatic Plants I S.A. Ross, N.E. El-Keltawi, S.E. Megalla // Fitoterapia. 1980. - Vol. 51. - № 4. -P. 201-205.

194. Roy, I. Separetion of an isoenzyme of polyphenol oxidase from Duranta plumieri by expaned bed choromatography / I. Roy, S. Sharma, M.N. Gupta // Protein Expr Purif. 2002. - Vol. 24. - № 2. - P. 181-187.

195. Sagrista, M.L. Lactate and malate dehydrogenase binding to themicrosomal fraction from chicken liver / M. L. Sagrista, J. Bozal. // Biochimie. 1987.-Vol. 69.-№ 11-12.-P. 1207-1215.

196. Schratz, E. Composition of the ethereal oil in the collective genus Thymus serpyllum. Thin-layer chromatographic proof of oil components / E. Schratz, S. Qedan // Pharmazie. 1965. - Vol. 20. - № 11. P. 710-713.

197. Scora, R.W. Intercpecific relationhips in the genus Monarda (Labiatae) / Scora // Univrsity of California publication in botany. 1967. - Vol. 41. - № 2. -P. 1-71.

198. Stashenko, E.E. SPME determination of volatile aldehydes for evaluation of in-vitro antioxidant activity / E.E. Stashenko, M.A. Puertas, J.R. Martinez // Anal Bioanal Chem. 2002. - Vol. 373. - № 1-2. - P. 70-74.

199. Sugita Hyroaki, Seciguchi Koichi. Lactate dehydrogenase of the horseshol crabs and their hybrids // Zool. Sci. 1984. - Vol. 1. - № 3. - P. 421-426.

200. M.-T. Existence of two forms of lactate dehydrogenase from Plaemon serratus / M.-T. Thebault // Mol. Physiol.- 1984. Vol.5. - №5-6. - P.313-323.

201. Thygesen, P.W. Polyphenol oxidase in potato. A multigene family that exhibits differential exression patterns / P.W. Thygesen, I.B. Dry, S.P. Robinson // Plant Physiol. 1995. - Vol. 109. - № 2 - P. 525-531.

202. Truarti, G. Comparative studies on skeletal muscle and liver lactate dehydrogenase of the freshwater catfish Clarias batrochus / G. Truarti, S. Shula // Biochem. Arch. 1988. - Vol. 47. - № 1. - P. 25-34.

203. Uphof J.C. The Distionary of Economic Plants/ J.C. Uphof. New-York, 1968.-591 p.

204. Yamazaki, R.K. Malate degidrogenase in leaf peroxisomes / R.K. Yamazaki, N.E. Tolbert // Biochim. Et Biophys. Acta. 1969. - Vol. 178. - №

205. Yang C.P. Partial purification and characterization of polyphenol oxidase from banana (Musa sapientum L.) peel / C.P. Yang, S. Fujita, K. Kohno // Agr. and Food Chem. 2001. - Vol. 49. - № 3. - P. 1446-1449.

206. Yang C.P. Purification and characterization of polyphenol oxidase from banana (Musa sapientum L.) pulp / C.P. Yang, S. Fujita, M. Ashrafuzzaman // Agr. and Food Chem. 2000. - Vol. 48. - № 7. - P. 2732-2735.

207. Yang Ning-Sun De novo synthesis and development control of the multiple gene-controlled Malate degidrogenase isoenzymes in maize scutella / Yang Ning-Sun, J.G. Scandalios // Biochim. Et Biophys. Acta. 1975. - Vol. 384.- №2.-P. 172-175.

208. Zekovic Zoran P. Analysis of thyme (Thymus vulgaris L.) extracts / P. Zekovic Zoran // Acta period technol. 2000. - Vol. 31. - r. B. - P. 617-622.

209. Zeng Ke Wen. Gel-electrophoresis analysis of lactate dehydrogenase isozymes (LDH) in mink / Zeng Ke Wen, Zheng Cheng Yang, Chen Feng Ying // J. North-East Forest. Univ. 1988. - Vol. 16. - № 2. - P. 58-63.

210. Zheng Wei. Antioxidant activity and phenolic compounds in select herbs / Zheng Wei, J. Wang Shiow // J. Agr. and Food Chem. 2001. - Vol. 49 - № 11.-P. 5165-5170.