Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение котовника крупноцветкового (NEPETA GRANDIFLORA BIEB.) флоры Карачаево-Черкесской республики

□Ü348ST59

На правах рукописи

ХАЧИРОВА ФАТИМА СЕИТОВНА

ФАРМАКОГНОСГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КОТОВШ1КА КРУ1ШОЦВЕТКОВОГО (NEPETA GRANDIFLORA BIEB.) ФЛОРЫ КАРАЧАЕВО-ЧЕРКЕССКОЙ РЕСПУБЛИКИ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени ^ О ЛЕН 2009 кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 2009

003488759

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Челомбитько Вячеслав Александрович Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Мелик-Гусейнов Валерий Владимирович

кандидат фармацевтических наук, доцент Кичев Дмитрий Геннадьевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Самарский государственный меди-

ТТЛ чппоиплупаийшпл и ллт/чпщлщг П'ПП 1ГП11ИЧ

""^ . «^ш|И1||ХЧ Ж, ъ^У'«11V*-*>*'■ ^Яииинии»

Защита состоится ^е/е^Х«^- 2009 года в У часов на заседании Диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росз-драва» (357532, Ставропольский кран, Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава».

Автореферат разослан ««£3 » к£>2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

профессор ' Е.В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одним из приоритетных направлений поиска новых растительных источников биологически активных веществ является изучение дикорастущих видов флоры России, запасы которых достаточно велики. Такой подход будет обеспечивать долгосрочную надежную сырьевую базу, позволит рационально использовать эти растительные ресурсы и даст возможность расширить ассортимент лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на их основе.

fi"* 1# 11Г-1 Ил »Лгг^иит.'пи ifuíltnmiofiini ппет гтпп/ч"1 илптт\' тгл^чл^плттпт tv

v> Viiub»u>im nvtv HII^IV^IUUUIII t J у ■ " lIWKVtVU 11UUULA JlvllU^V t UWtiliUtA

растений является арсенал средств народной медицины. С этой точки зрения, особый интерес представляют растения сем. Lamiaceac (яснотковые). Виды из известных родов Mentha, Salvia, Thymus , Melissa ,Leonurus, Scutellaria, Rosma-rinum, Hyssopus, Lavandula и др. уже давно прочно вошли в арсенал официального лекарственного растительного сырья не только в зарубежных странах, но и в России.

Одним из таких перспективных и недостаточно изученных растений является котовник крупноцветковый (Nepeta grandiflora Bieb.), который во флоре Карачаево-Черкесской Республики (КЧР) является самым распространенным видом в сем. яснотковых. У народов КЧР котовник крупноцветковый используется как отхаркивающее средство; траву в виде чая пьют как общеукрепляющее средство и при анемии.

Недостаточная фармакогностаческая и фармакологическая изученность этого интересного растения не позволяет до сих пор использовать его в научной медицине. В связи с этим, комплексное изучение сырья (травы) к. крупноцветкового является перспективным и актуальным.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы является фармаког-ностическое изучение сырья (травы) котовника крупноцветкового, выявление запасов сырья на территории КЧР, выявление возможности производства зке-

тракционных препаратов и изучение их фармакологического действия, а также стандартизация сырья и сухого экстракта на его основе.

Для достижения поставленной цели должны быть решены следующие задачи:

1. Выявить характерные места произрастания и определить запасы сырья котовника крупноцветкового на территории КЧР.

2. Изучить качественный и количественный состав основных групп биологически активных веществ (БАВ) травы котовника крупноцветкового.

3. Разработать методы нормирования подлинности (выявление характерных анатомо-диагностических признаков) и качества (содержания основных групп БАВ) сырья (травы) котовника крупноцветкового.

4. Обосновать технологию сухого экстракта и разработать нормы его качества.

5. Провести фармакологические исследования водного настоя и водно-спиртового экстракта котовника крупноцветкового.

6. Составить соответствующую нормативную документацию (НД) на траву котовника крупноцветкового и экстракт сухой.

Научная новизна. В результате экспедиционных обследований основных горных районов КЧР выявлены места произрастания и определены ориентировочные запасы сырья котовника крупноцветкового. Установлено, что объем возможных ежегодных заготовок на территории КЧР составляет около 12 т. воздушно-сухого сырья.

Методом ВЭЖХ в траве котовника к ру п но цв етков о го (экстрагент - спирт этиловый 70%) впервые идентифицированы и количественно определены 9 фенольных соединений: дигидрокверцетин, гиперозид, рутин, салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, дикумарин, кумарин. Установлено, что доминирующими соединениями в полифенольном комплексе являются кислота кофейная (24,16%) и кислота салициловая (22,66%).

Методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный химический состав эфирного масла котовника крупноцветкового. Иден-

тифицированы 38 соединений, среди которых доминирующими являются би-циклический монотерпен 1,8-цинеол (39,91%) и сесквитерпен кариофиллен-оксид (32,83%).

Впервые спектрофотометрическим методом установлено содержание флавоноидов в различных частях растения: наибольшее содержание обнаружено в листьях (до 0,217%), наименьшее - в корнях (0,024%); в траве содержание флавоноидов может достигать 0,165%.

Впервые методом колоночной жидкостной хроматографией изучен аминокислотный состав травы котовника крупноцветкового, который представлен

1 ^ 01»Ш1П1'Т1^ттпт01/!1' !'ЛТЛ«Г »V О /П1!Т>!П -гмалтлм» ТТТУГУ ттппттп«11«тт гг л* г

1ШШ1, но У

цин, лизин, фенилаланин, гистидин, аргинин) являются незаменимьши.

Впервые полуколичественным спектральным анализом изучен макро- и микроэлементный состав травы котовника крупноцветкового. В траве определено содержание 27 элементов. Из них эссенциальными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальными: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.

Разработана стандартизация сырья (травы) котовника крупноцветкового, определяющая показатели подлинности и доброкачественности сырья.

Предложена оптимальная технология сухого экстракта (экстрагент -спирт этиловый 70%) из травы к. крупноцветкового и методы его стандартизации. Разработана методика спектрофотометрического количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин должно быть не менее 0,5%.

Фармакологический скрининг водного настоя травы (I) котовника крупноцветкового и сухого экстракта (70% этанол, И) выявили антимикробную (I), ранозаживляющую (И) и противовоспалительную (II) виды активности.

Практическая значимость. Выявлена возможность использования нового вида отечественного сырья - травы котовника крупноцветкового для получения БАВ, обладающих противомикробным, раиозаживляющим и противовоспалительным действием.

У водного настоя травы котовника крупноцветкового (10:200) выявлено антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus. У экстрактов (70% и 40% этанол) кроме отмеченного, выявлено также антимикробное действие и на спорообразующие микроорганизмы рода Bacillus.

Фармакологический скрининг в опытах на животных позволил установить, что сухие экстракты (70%, 40% этанол) в дозе 30 мг/кг проявляли рано-заживляющую и противовоспалительную активность.

Внедрение результатов исследования в практику. Подготовлены проекты ФСП «Котовника крупноцветкового трава цельная» и ФСП «Травы котовника крупноцветкового экстракт сухой» (подтверждены актами внедрения от 09.04.07), позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид лекарственного растительного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ, для расширения ассортимента и структуры выпускаемой продукции на ЗАО «Вифитех» (Россия).

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на 53-й, 54-й, 56-й, 57-й и 58-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1998, 1999, 2001, 2002, 2003 гг.), материалах Всероссийской научно-практической конференции «Химия в технологии и медицине» (Махачкала, 2002). По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА (номер государственной регистрации 01.200.112164) в рамках темы «Разработка лекарственных средств и их рациональное использование», согласно договору 016/146/050 между Министерством здравоохранения й социального развития РФ и Пятигорской ГФА.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения распространения котовника крупноцветкового на территории КЧР и определение его запасов и объема возможных ежегодных заготовок.

2. Результаты фитохимического изучения содержания основных биологически активных веществ в траве к. крупноцветкового.

3. Данные по изучению подлинности (анатомо-диагностические признаки сырья) и качества (содержание флавоноидов) травы котовника крупноцветкового.

4. Методики качественного и количественного состава сырья (травы) котовника крупноцветкового и сухого экстракта (70% этанол).

5. Результаты доклинического изучения водного настоя (1:20) и сухого экстракта (70% этанол) из травы котовника крупноцветкового по выявлению антимикробного, ранозаживляющеш и противовоспалительного действия.

Объем и структура диссертации. Диссергациинная работа изложена на 110 страницах текста в компьютерном наборе, состоит из введения, обзора литературы и четырёх глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 224 источника, в том числе 36 иностранных; содержит 17 таблиц, 14 рисунков и приложение.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Морфолого-анатомическое изучение сырья котовника крупноцветкового

(Nepeta grandiflora)

Мезофилл листа на поперечном срезе дифференцирован на палисадный

и губчатый. Палисадный мезофилл состоит из одного слоя клеток, которые плотно прилегают друг к другу и вытянуты в вертикальном направлении. Губчатый мезофилл состоит из клеток округлой формы, рыхло расположенных в 34 слоя. На поперечном срезе лист имеет сильно выступающие с нижней стороны жилки. Центральная жилка значительно выделяется по размерам и имеег округлую форму. По строению она похожа на черешок. Проводящая система

жип1ги ппрптипрня пTTHUlLf nnrionuommi тлигпш (tyxin ----------r-M---—...............Г..............J ......... \r------ - ! ■

Условн. обознач.: 1 - волосок, 2 - эпидерма, 3 - паренхима, 4 - колленхима, 5 - ксилема, 6 - флоэма.

Рисунок 1 - Схема строения листа котовника круг.ноцветкоеого (поперечный срез)

При рассмотрении верхней эпидермы с поверхности листа обнаружены слегка извилистые клетки, имеющие почти прямые боковые стенки. Клетки нижней эпидермы, в отличие от клеток верхней эпидермы, имеют сильно извилистый характер стенки. Устьица расположены как на верхней, так и на нижней (больше) эпидерме и имеют диацитный тип устьичного аппарата. На верхней и нижней эпидерме встречаются три типа волосков: 1) двух-трех-клеточные с бородавчатой поверхностью, 2) мелкие, сосочковидные, 3) головчатые на одноклеточной ножке.

Вдоль жилок листа преимущественно располагаются многоклеточные волоски. Эфирномасличные железки округлой формы с четырьмя выделительными клетками. При действии реактивом Судан III капли эфирного масла, содержащиеся в железках, приобретали розовое окрашивание.

Таким образом, для листа к. крупноцветкового характерно наличие следующих характерных анатомо-диагностических признаков: диацитный тип расположения околоустьичных клеток, три тапа волосков - бородавчатые, сосочковидные и головчатые; эфирномасличные железки округлой формы с четырьмя выделительными клетками.

1 2 3 ■

3 — клетка эпидермы, 4 — устьице, 5 - желёзка, 6 - головчатый волосок.

Рисунок 2 - Строение верхней (А) и нижней (Б) эпидермы листа котовника крупноцветкового

Фотохимический анализ травы котовника крупноцветкового Изучение фенольных соединений Исследование фенольных соединений проводили методом ВЭЖХ на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы "GILSTON", модель 305, Франция; инжектор ручной, модель RHEODYNE 7125 USA с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для "Windows". Всего было обнаружено 14 веществ, а идентифицировано 9 (табл. 1, рис. 3).

Таблица 1 — Фенольные соединения водно-спиртовых извлечений из травы котовника крупноцветкового, идентифицированные методом ВЭЖХ_

Группа Б АВ Идентифицированные вещества Содержание веществ в выделенной смеси, %

Флавоноиды Дигидрокверцетин 6,35

Гиперозид 2,77

Рутин 3,15

Фенолокислоты Кислота кофейная 24,16

Кислота феруловая 15,33

Кислота хлорогеновая 1,73

Кислота салициловая 22,66

Кумарины Дикумарин 0,83

Кумарин 1,74

Рисунок 3 - ВЭЖХфенольных соединений травы котовника крупноцветкового

Методом внутренней нормализации определено, что в выделенной сумме веществ, превалирует кофейная, кислота - 24,16 %. Содержание кислоты кофейной в траве котовника крупноцветкового составляет 1,02%.

Количественное определение флавоноидов в траве котовника крупноцветкового Для анализа содержания флавоноидов мы избрали методику спектрофо-

тометрического определения, основанную на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом. Расчет производился по стандартному веществу, в качестве которого использовали СО рутина. Со всеми образцами проводили по шесть

определений, статистически обработанные результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Количественное содержание флавоноидов в различных органах

котовника крупноцветкового

Образец Содержание флавоноидов, % Метрологические характеристики

Яг

Корни 0,024±0,002 0,00078 8,3

Стебли 0,091±0,002 0,00080 2,2

Листья 0,217±0,003 0,00117 1,4

Соцветия 0,134±0,002 0,00078 1,5

Трава 0,165±0,003 0,00116 1,8

Аминокислотный состав травы котовника крупноцвгткового Качественный и количественный составы аминокислот котовника крупноцветкового определяли методом колоночной жидкостной хроматографии.

В результате исследования аминокислотного состава травы котовника крупноцветкового установлено наличие 15 аминокислот, девять из которых являются незаменимыми: валин, треонин, метионин, изолейцин, лейцин, лизин, фенилаланин, гистидин и аргинин.

Макро- и микроэлементный состав травы и корней котовника крупноцветкового В траве котовника крупноцветкового полу количественным спектральным

анализом определено содержание 27 элементов, в корнях - 32, которые можно подразделить на следующие группы (трава/корень, мг/кг соответственно в абсолютно-сухом сырье):

1) эссенциальные: Ре (13/66), Со (0.13/0.66), Ъп (0,2/0,39), Мп (0,79/2,62), Сг (0,03/0,08), Са (393/131), Мё (131/66), Мо (0,02/0,01;

2) условно-эссенциальные: В (0,8/1,3), V (0,013/0,13), (66/262), № (0,039/0,066);

3) биогенные: К (262/262), Иа (13/39);

4) токсичные: А! (79/131), Ва (2/1), РЬ (0,02/0,079);

5). потенциально-токсичные: Бп (0,004/0,007), Ag (0,00013/0,0026), Бг (0,655/0,393), Ъс (0,026/0,079), Т1 (2,6/5,2).

11

Содержание токсичных элементов в траве котовника не превышает ПДК, принятые в нашей стране для чая.

Изучение компонентного состава эфирного масла котовника крупноцветкового Содержание эфирного масла в воздушно-сухом сырье (трава) к. крупноцветкового, заготовленной в период цветения в Даутском ущелье КЧР, составило 0,18% (метод перегонки с водяным паром). Эфирное масло представляло собой подвижную жидкость желто-зеленого цвета со своеобразным запахом.

Методом газовой хромато-масс-спектроскопии на приборе HP 5973 Agul-lent technologies (США) в составе эфирного масла обнаружено 44 компонента, из которых идентифицировано 38 (табл. 3).

Таблица 3 - Качественный и количественный состав эфирного масла ко-

товника крупноцветкового

Название вещества Содержание, в % Название вещества Содержанием %

а-фелланарен 0,04 р-бурбонен 0,84

а—пинен 0,31 R—к-япипфиллен 1,34

камфен 0,04 а-гумулен 0,19

вербеной 0,05 0-ионон 0,37

сабинен 0,57 гермакреп 1,30

рИшнен 2,35 бициклогермакрен 0,32

камфен 0,22 Д-кадинен 0,23

р-цимен 0,33 изо-кариофиллен-оксид 2,98

1,8-цинеол 39,91 кариофиллеи-оксид 32,83

гамма-терпинек 0,12 нор-копанон 0,22

а-терпинолен 0,32 Гумулен-эпоксид 0,59

нор-иоион 0,53 нафталшшетанол 0,38

транс-пинокарвеол 1,07 эпиглобулол 0,76

вербенон 0,23 виддрол 0,47

пинокарвон 0,76 карифшиенол 1,99

4-терпиненол 0,62 пентадеканон 0,93

миртеналь 1,16 пентакозан 1,26

а-терпинеол 0,16 фитол 0,63

миртенол 0,56 * 1,49

а-кубебен 0,10 * 0,21

* 0,24 « 0,43

* 0,12 * 0,42

*- не идентифицированные вещества.

Летучие компоненты эфирного масла котовника крупноцвегкового представлены в основном соединениями терпенового ряда, среди которых преобла-

дают 1,8-цинеол (39,9%) и кариофшшен-оксид (32,83%), составляющие около 73% эфирного масла.

Разработка норм качества травы котовника крупноцветкового На основании проведенных фотохимических исследований нами были установлены нормы качества травы котовника крупноцветкового, представленные в таблице 4.

Таблица 4 — Показатели норм качества «Котовника крупноцветкового трава цельная»

Показатели Методы Нормы

Внешние признаки Визуальный, органолептиче-скин В соответствии с ФСП 42-

Микроскопия Микроскопический. В соответствии с ФСП 42-

Качественные реакции на флавоновды 1. Цианидиноиая реакция в спиртовой среде - 2 мл извлечения, 10-15 мг металлического магния при прибавлении 5-7 капель кислоты хлористоводородной кон- ЦС liip iipC ¡>2!П'0ы Оранжсво-красное окрашивание.

2. В спиртовой среде 1 мл полученного извлечения прибавляли 0,5 мл раствора аммония гидроксида Ярко-желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое.

3. У- спектрофотометрия дифференциальная Максимум в области 405±4нм.

Влажность ГФ XI, вып.1, с.285 - 286. Не более 8%.

Зола общая ГФ XI, вып.2, с.24. Не более 6,5%.

Зола не растворимая в хлористовоя. к-те 10% ГФ XI, вып.2, с.25. Не более 1,5%.

Экстрактивные вещества (растворитель спирт этиловый 70 %) ГФ XI,, вып. 1, с.295. Не менее 15%.

Органические примеси ГФХ1, вып.1, с.276. Не более 3,0%.

Минеральные примеси ГФ XI, вып.1, с.276. Не более 1,0%.

Количественное определение суммы флавоновдов в пересчёте на рутин Дифференциальная спектрофотометрия Не менее 0,15%.

Микробиологическая чистота ГФ XI, вып.2, с. 194 - 195 и Изменение № 2 Категория 4А.

Упаковка ГФ XI, вып.2, с.381. В мешки тканевые не более 20 кг, в тюки не более 50 кг.

Маркировка ГФ XI, вып.2, с.384. ГОСТ 17768-80.

Транспортировка ГФХ1, вып.2, с.385. По ГОСТ 14192-77 и ГОСТ 17768-80.

Срок годности 2 года.-

Прогноз ресурсов травы котовника крупноцветкового в КЧР

Фитоценозы с участием котовника крупноцветкового довольно значительны и обнаружены нами в КЧР в следующих районах:

1. Кубанское ущелье: в окрестности поселка Учкулана, Хурзука и Даутское ущелье.

2. Зеленчукский район: верховье реки Уруп и Архыз.

3. Тебердинское ущелье: Тебердинский заповедник, Домбай (почти до ледника Алибек).

4. Карачаевский район: перевал Гумбаши и его окрестности.

Во всех 4 районах запас воздушно-сухого сырья в тоннах составляет: биологический - 60 т; эксплуатационный - 48 т. Объем возможных ежегодных заготовок - 12 т. Результаты определения площадей зарослей и запасов надземной части котовника крупноцветкового приведены в табл. 5.

Таблица 5 - Площади зарослей и запасы надземной части котовника крупноцветкового в обследованных районах Карачаево-Черкесской Республики

Географические пункты Категория зарослей Общая площадь, га Запас воздушно-сухого сырья, т Объем возможной ежегодной заготовки, т

биологический эксплуатационный

Бассейн р. Кубань Учкулан [ 37 5,50±0,22 4,4+0,12 1,1+0,18

Хузрук I 70 10,5+0,11 8,4+0,10 2,1+0,13

Ущелье р. Даут I 82 12,3+0,17 9,8±0,21 2,5+0,21

Эпчинский перевал III 33 4,9+0,38 3,9±0,32 0,98+0,35

Верховье р. Те-берды Домбай II 38 5,7+0,46 4,3+0,21 1,08±0,31

Перевал Гумбаши Верхняя и Нижняя Мара I 49 _7,3±0,49 5,9+0,37 1,48±0,41

Архыз II 93 13,9±0,24 11,2±0,51 2,8+0,16

Всего 402 60,1±0,30 47,9±0,26 12,04±0,25

Для определения скорости восстановления надземной фитомассы после ее срезки были проведены опыты на площадках размером 20-25 м2 в Даутском ущелье, в верховье реки Даут выше поселка Даут. Надземную часть срезали на высоте 10-12 см от поверхности почвы в фазу цветения. Эксперимент включал четыре варианта режима срезки: I - ежегодная срезка; II - один год «отдыха»

после срезки; III — два года «Отдыха» после срезки; IV - три года «отдыха» после срезки надземной массы.

Проведенные нами опыты по изучению влияния режима заготовки сырья на состояние зарослей котовника крупноцветкового показали, что ежегодное скашивание отрицательно влияло на восстановление растений: экземпляры котовника были угнетены и отставали в росте на 20-30 см по сравнению с контрольными. Урожайность воздушно-сухой надземной массы при ежегодной срезке (вариант 1) составлял 120 г с площади 20 м2. в других вариантах опыта с «отдыхом» один, два и три года наблюдалось постепенное улучшение состояния растений и повышение накопления их фитомассы. Урожайность воздушно-сухой надземной массы составляла 120 г, 200 г и 280 г соответственно с площади 20 м2, а на контрольной площадке 300 г.

Таким образом, из основании данных наблюдений экспериментально установлено, что урожайность травы к. крупноцветкового на контрольных участках (300 г) и в варианте опыта с трехлетним отдыхом (280 г) почти одинаковы. Тем не менее, мы рекомендуем увеличить продолжительность перерыва в эксплуатации зарослей еще на один год в целях гарантии надежного восстановления надземной фитомассы, т.е. заготовку сырья в одном и том же массиве проводить лишь по истечении четырех лет после предыдущей, соблюдая при этом строгую очередность эксплуатации массивов. Поэтому объем возможных ежегодных заготовок рассчитан нами в размере ~ 25% от эксплуатационного запаса сырья. Таким образом, объем возможной ежегодной заготовки сырья к. крупноцветкового в КЧР составляет примерно 12 тонн.

Разработка рациональной технологии сухого экстракта из травы котовника крупн(¡цветкового и его стандартизация Исследования по разработки технологии сухого экстракта проводили с учетом производственных условий отечественного производителя растительных препаратов [ЗАО «Вифитех», г. Москва]. В качестве экстрагента был выбран этиловый спирт, 70%, как оптимальный для извлечения фенольных соединений и комплекса веществ липофильного характера. Поскольку в условиях

промышленного производства сухие экстракты зачастую изготавливаются в ограниченных количествах, строго рассчитанных и достаточных дом получения серии лекарственной формы, для экстрагирования растительного сырья, применяют, как правило, различные схемы с замкнутыми циклами. На рис. 4 представлена схема технологии экстракта котовника крупноцветкового, сочетающая реперколяцию с дробной мацерацией.

Рисунок 4- Структура замкнутого цикла экстракции и схема производства сухого экстракта котовника: а,Ь, с—загрузки сырья; I—IV— ступени экстракции сырья; Э — «свежий» экстрагент ;1.1-1.4;2.1-2.4;3.1-3.4- сливы.

Как видно из рис. 4 первые извлечения от сырья объединяются, а последующие проходят постадийное насыщение. Каждая загрузка подвергается четырехкратной обработке, а весь процесс может осуществляться в двух реакторах. Упаривание и сгущение извлечения проходит под вакуумом (Р=0,8110'5 Па), сушка - в вакуум-сушильном шкафу при температуре 80 °С. Нормы качества и методики стандартизации сухого экстракта разработаны в соответствии с требованиями действующей нормативной документации.

Таблица 6-Динамит экстрагирования сырья (травы) котовника крупно__цветкового в замкнутом 3-х ступенчатом цикле _

Загрузка сырья, кг Содержание ЭВ исходное, г Номер слива ЭВ в сливе, г Извлечено ЭВ на стадии, г Всего ЭВ из загрузки, г % от исходного содержания

2 300 1.1. 120 120 261 87,0

1.2. 72 72

1.3. 43 43

1.4. 26 26

2 300 2.1. 170 100 260 86,7

2.2. 115 60

2.3. 85 50

2.4. 50 50

2 300 3.1. 1 1М 1IV 268 89,3

3.2. 170 85

3.3. 93 43

3.4. 30 30

6 900 789 87,7

Изучение динамики экстракционного процесса (таб. 5) показывает, что эффективность выбранного нами метода экстракции составляет 87,7%, т.е. он приемлем для промышленного производства сухих экстрактов.

Стандартизацию сухого экстракта котовника мы предлагаем проводить по содержанию флавоноидов, (методика дифференциальной спектрофотомет-рии). На рис. 5 представлены УФ-спектры растворов экстракта котовника крупноцветкового и стандартного образца рутина, по которому мы предлагаем проводить расчет суммы флавоноидов.

Рисунок 5 —Дифференциальные спектры поглощения комплексов флавоноидов с алюминия хлоридом: 1-раствор экстракта котовника

|-П1'Я и И Ч Л ,ТМ1!-,1Щ • 1_ ПЛЛНМЛП ГУ! П|;М//НЛ

V----1".....—-----' - ------г--' ->-------

Найдено, что в одном образце экстракта котовника крупноцветкового содержится сумма флавоноидов 0,53+0,02 (%). Относительная погрешность предложенной нами методики (3,8%) является приемлемой для анализа суммарных препаратов.

Относительная погрешность предложенной нами методики является приемлемой для анализа суммарных препаратов.

Для установления норм содержания флавоноидов мы приготовили и проанализировали ряд образцов сухого экстракта котовника. Таблица 7- Содержание флавоноидов в сухом экстракте котовника круп-

ПоКаЗаТсль КачСи 1 Ба Номер образца

1 2 3 4 5

Содержание флавоноидов, % 0,55 0,58 0,52 0,57 0,54

Содержание флавоноидов в абсолютно сухом экстракте котовника крупноцветкового в пересчете на СО рутина - более 0,5% (табл. 7).

В анализе сухого экстракта котовника крупноцветкового нами применена так называемая «сквозная» стандартизация, когда раствор, предназначенный для количественного определения, сначала испытывается по разделу «подлинность», т.е. в УФ-спектре раствора приготовленного для количественного определения должен бьггь максимум поглощения при длине волны 405+3 им. Подлинность также устанавливается по качественным реакциям на фенолы и тер-пеноиды.

Изучение антимикробного действия котовника крупноцветкового

Для определения антимикробной активности травы к. крупноцветкового готовили водный настой: 5,0 г измельченной травы заливали 100 мл воды очищенной и нагревали на водяной бане 15 минут. Настой охлаждали 30 минут, фильтровали, объем доводили до 100 мл (настой № 1). Для сравнения нами использовался водный настой листьев эвкалипта (настой № 2), приготовленный аналогично. Определение антимикробной активности водного настоя котовника ктшноцветкового ппонодилк методом ди^^^зии в агар (способ «колодцев»).

Таблица 8 - Сравнительное изучение антимикробной активности различных лекарственных форм из травы котовника крупноцветкового и листьев эвкалипта

Штаммы микроорганизмов Диаметр зоны задержки роста тест-культур микроорганизмов, мм

Водный настой котовника Водный настой эвкалипта Сухой экстракт (спирт, 70%) котовника Сухой экстракт (спирт, 40%) котовника

Staphylococcus aureus (209) 14 17 14 16

Staphylococcus aureus (Макаров) 12 16 12 13

Staphylococcus aureus (Type) 12 16 12 12

üuipiij'iuwuvvuj vpiuwiuauu Wood-46 14 15 ¡5 12

Escherichia coli 675 - - - -

Escherichia coli 055 - 15 - -

Shigeila flexneri 266 14 17 15 15

Bacillus subtilis L2 - - И 12

Bacillus antfiracoides - 96 - - 11 11

Bacillus anihracoides-1 - - 11 12

Результаты проведенных микробиологических исследований свидетельствуют, что водные настои котовника крупноцветкового (опыт) и эвкалипта (контроль) обладают сходным спектром антимикробного действия в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus. В то же время антибактериальное действие в отношении энтеробактерий более сильное у водного настоя эвкалипта, поскольку он угнетает рост Shigella flexneri 266. У экстракта котовника спиртового 70% и 40% выявлено выраженное антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и спорообра-зующих микроорганизмов рода Bacillus. В отношении энтеробактерий: у исследуемых веществ, выделенных из котовника, не выявлено антимикробного действия в отношении Escherichia coli 675 (табл. 8).

Фармакологическое изучение экстрактов котовника крупноцветкового Учитывая литературные данные о фармакологической активности котовника крупноцветкового (применение для лечения гнойных ран, болезней ротовой полости, респираторных инфекций) была исследована: острая токсичность, ра-

нозаживляющая и противовоспалительная активность экстрактов, полученных из этого вида сырья.

Проведенные исследования позволили сделать вывод о том, что суммарные экстракты № 1 (экстрагент 70% спирт) и № 2 (экстрагент 40% спирт) при пероральном введении согласно табуляции классов токсичности, относятся к 3 классу опасности — веществам малоопасным.

В ходе проведенных экспериментов установлено, что эти сухие экстракты котовника крупноцветкового в дозе 30 мг/кг проявляют ранозаживляющую и противовоспалительную активность.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. В результате проведенных экспедиционных исследований в 4-х основных регионах КЧР выявлены фитоценозы с участием котовника крупноцветкового. Определен объем возможных ежегодных заготовок сырья котовника крупноцветкового, который составил 12 тонн воздушно-сухого сырья.

2. Для сырья котовника крупноцветкового (трава) выявлены характерные ана-томо-диагностические признаки и установлены товароведческие показатели сырья: влажность, зола общая, зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной и экстрактивные вещества.

3. Проведено фитохимическое изучение основных групп биологически активных соединений травы котовника крупноцветкового:

- методом ВЭЖХ впервые идентифицировано 9 фенольных соединений: дигидрокверцетин, гиперозид, рутин, дикумарин, кумарин и кислоты: салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая.;

- спектрофотометрическим методом установлено содержание флавонои-дов в различных частях растения: корни - 0,024±0,002%, стебли -0,091±0,002%, листья - 0,217±0,003%, соцветия - 0,134±0,002%, надземная часть (трава) - 0,165±0,003%;

- методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный состав эфирного масла котовника крупноцветкового. В эфирном масле

идентифицировано 38 компонентов, из которых основными являются 1,8-цинеол (39,9%) и кариофшшен-оксид (32,83%), составляющие около 73% эфирного масла;

- методом колоночной жидкостной хроматографией был изучен качественный и количественный состав аминокислот. Установлено наличие 15 аминокислот, девять из которых являются незаменимыми - валин, треонин, метио-нин, изолейцин, лейцин, лизин, фенилаланин, гистидин и аргинин.

- полуколичественным спектральным анализом установлен макро- и микроэлементный состав травы и корня котовника крупноцветкового. Использованная методика позволила определить 27 элементов в траве и 32 в корнях. Из них эссенциальными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальнымими: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.

4. Предложена технологическая схема промышленного производства сухого экстракта из травы котовника крупноцветкового на основе использования 70% спирта этилового с эффективностью извлечения экстрактивных веществ 87,7%. Разработана методика спектрофотометрического определения суммы флавоноидов в сухом экстракте. Установлено, что содержание суммы фла-вовдидов в экстракте в пересчете на рутин должно быть не менее 0,5 %.

5. Установлено что настой травы котовника крупноцветкового обладает выраженным антимикробным действием в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и по своему действию не уступает аналогичному настою из листьев эвкалипта. Для настоя травы котовника крупноцветкового характерно угнетение роста Shigella sonnei. Для двух экстрактов травы котовника крупноцветкового (70% и 40% спирт) выявлено выраженное антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus.

6. В ходе проведенных фармакологических экспериментов на лабораторных животных установлено, что сухке экстракты (70% к 40% спирт зтиловыи.

травы котовника в дозе 30 мг/кг проявляют ранозаживляющую и противовоспалительную активность.

7. По результатам исследований разработана ФСП «Котовника крупноцветкового трава цельная» и ФСП «Травы котовника крупноцветкового экстракт сухой», позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид отечественного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ для расширения ассортимента и структуры выпускаемой ЗАО «Вифитех» (Россия) продукции.

Список опубликованных работ;

1. Аминокислотный и минеральный состав Nepeta grandiflora // Химия природных соединений. - 2007. - №3. - С. 303 (соавт. Челомбитько В.А.).

2. Анатомические особенности строения вегетативных органов котовника крупноцветкового /'/' Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы...- Пятигорск, 20ÚÍ. - С. 39-40.

3. Виды рода Nepeta L. во флоре Карачаево-Черкесской Республики // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы ... — Пятигорск: ПятГФА, 2001.— С. 42-43 (соавт, Челомбитько В.А., Байрамукова Ф.А.).

4. Изучение антимикробной активности травы котовника крупноцветкового (Nepeta grandiflora Bieb.) // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: материалы 62-й межрегион. конф. по фармации и фармакологии (62; 2007; Пятигорск). - Пятигорск: ПятГФА, 2007. - С. 529-530 (соавт. Челомбитько В.А., Клишина И.И.).

5. Компонентный состав эфирного масла надземной части Nepeta grandiflora Bieb. (сем. Lamiaceae) // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (58; 2003; Пятигорск): материалы...- Пятигорск, 2003. - С. 8889 (соавт. Челомбитько В.А.).

6. Котовник крупноцветковый - прогноз на использование // Регион, конф. по фармации, фармакологии й подготовке кадров (53; 1998; Пятигорск): материалы... — Пятигорск, 1998. — С. 30-31 (соавт. Койчуева A.C.).

7. Макро- и микроэлементы сырья котовника крупноцветкового // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002; Пятигорск): материалы...- Пятигорск, 2002. - С. 29-31 (соавт. Мануков А.Н.).

8. Пищевые растения семейства яснотковых // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): материалы..Пятигорск, 1999. - С. 6-7 (соавт. Байрамукова Ф.А., Койчуева A.C., Челом-битько В.А.).

9. Технология и стандартизация сухого экстракта котовника крупноцветкового // Известия вузов. Сев.-Кавк. регион. Естественные науки. - 2007. - № 3. -С. 83-85 (соавт. Челомбитько В.А., Зилфикаров И.Н.).

10.Фармакогкостическое исследование котовника крупноцветкового // ^Симия в технологии и медицине: материалы Вссоос. науч. — пракг. кенф. — fviaxa4KS-ла, 2002. - С. 154-156 (соавт. Челомбитько В Л.).

ХАЧИРОВА ФАТИМА СЕИТОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КОТОВНИКА КРУПНОЦВЕТКОВОГО (НЕРЕТА СКЛТЧВИЪОКЛ В1ЕВ.) ФЛОРЫ КАРАЧАЕВО-ЧЕРКЕССКОЙ РЕСПУБЛИКИ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 23.11.2009 Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальном)' развитию» (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

Актуальность проблемы. Одним из приоритетных направлений поиска новых растительных источников биологически активных веществ является изучение малоизученных дикорастущих видов флоры России, запасы которых еще достаточно велики. Такой подход будет обеспечивать долгосрочную надежную сырьевую базу, позволит рационально использовать эти растительные ресурсы и даст возможность расширить ассортимент лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на их основе.

Основным источником для поиска новых лекарственных растений является арсенал средств народной медицины. С этой точки зрения особый интерес представляют растения сем. Lamiaceae (яснотковые). Многие виды из известных родов Mentha, Salvia, Thymus, Melissa, Leonurus, Scutellaria, Rosmarinum, Hyssopus, Lavandula и др. уже давно прочно вошли в арсенал официального лекарственного растительного сырья не только во многих зарубежных странах, но и в России.

Одним из таких перспективных и недостаточно изученных растений является котовник крупноцветковый (Nepeta grandiflora Bieb.), который во флоре Карачаево-Черкесской Республики (КЧР) является самым распространенным видом в сем. яс-нотковых. У народов КЧР котовник крупноцветковый используют как отхаркивающее средство. Траву в виде чая пьют как общеукрепляющее средство и при анемии.

Недостаточная фармакогностическая и фармакологическая изученность этого л интересного растения не позволяет до сих пор использовать его в научной медицине. В связи с этим, комплексное изучение сырья (травы) к. крупноцветкового является перспективным и актуальным.

Цель и.задачи исследования.

Целью нашей работы является фармакогностическое изучение сырья (травы) котовника крупноцветкового, выявление запасов сырья- на территории КЧР; выявление возможности производства экстракционных препаратов и изучение их фармакологического действия, а также стандартизация сырья и сухих экстрактов на его основе. 4

Для достижения поставленной цели должны быть решены следующие задачи:

1. Выявить характерные места произрастания котовника крупноцветкового и определить его запасы сырья на территории Карачаево-Черкесской Республики.

2. Изучить качественный и количественный состав основных групп биологически активных веществ (БАВ) травы котовника крупноцветкового.

3. Разработать методы нормирования подлинности (выявление характерных анатомо-диагностических признаков) и качества (содержания основных групп БАВ) сырья (травы) котовника крупноцветкового.

4. Обосновать технологию сухого экстракта и разработать нормы его качества.

5. Провести фармакологические исследования водного настоя и водно-спиртового экстракта котовника крупноцветкового.

6. Составить соответствующую нормативную документацию (НД) на траву котовника крупноцветкового и экстракт сухой.

Научная новизна. В результате экспедиционных обследований основных горных районов КЧР выявлены места произрастания и определены ориентировочные запасы сырья котовника крупноцветкового. Установлено, что объем возможных ежегодных заготовок на территории КЧР составляет около 12 т. воздушно-сухого сырья.

Методом ВЭЖХ в траве котовника крупноцветкового (экстрагент - спирт этиловый 70%) впервые идентифицированы и количественно определены 9 фенольных соединений: дигидрокверцетин, гиперозид, рутин, салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, дикумарин, кумарин. Установлено, что доминирующими соединениями в полифенольном комплексе являются^ кислота кофейная (24,16%) и кислота салициловая (22,66%).

Методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный химический состав эфирного масла котовника крупноцветкового. Идентифицированы 38 соединений, среди которых доминирующими являются бициклический монотерпен 1,8-цинеол (39,91%) и сесквитерпен кариофиллен-оксид (32,83%).

Впервые спектрофотометрическим методом установлено содержание флаво ноидов в различных частях растения: наибольшее содержание обнаружено в листьях до 0,217%), наименьшее — в корнях (0,024%); в траве содержание флавоноидов может достигать 0,165%.

Впервые методом колоночной жидкостной хроматографией изучен аминокислотный состав травы котовника крупноцветкового, который представлен 15 аминокислотами, из которых 9 (валин, треонин, метеонин, изолейцин, лейцин, лизин, фе-нилаланин, гистидин, аргинин) являются незаменимыми.

Впервые полуколичественным спектральным анализом изучен макро- и микроэлементный состав травы котовника крупноцветкового. В траве определено содержание 27 элементов. Из них эссенциальными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром,, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальными: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.

Разработана стандартизация сырья (травы) котовника крупноцветкового, определяющая показатели подлинности и доброкачественности сырья.

Предложена оптимальная технология сухого экстракта (экстрагент — спирт этиловый 70%) из травы к. крупноцветкового и методы его стандартизации. Разработана методика спектрофотометрического количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин t должно быть не менее 0,5%.

Фармакологический скрининг водного настоя травы (I) котовника крупноцветкового и сухого экстракта (спирт этиловый 70%, II) выявили антимикробную (I), ранозаживляющую (II) и противовоспалительную (II) виды активности.

Практическая значимость. Выявлена возможность использования нового вида отечественного сырья — травы котовника крупноцветкового для получения БАВ, обладающих противомикробным, ранозаживляющим и противовоспалительным действием.

У водного настоя травы котовника крупноцветкового (10:200) выявлено ан> тимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus. У экстрактов (спирт этиловый 70% и 40%) кроме отмеченного, выявлено также антимикробное действие и на спорообразующие микроорганизмы рода Bacillus.

Фармакологический скрининг в опытах на животных позволил установить, что сухие экстракты (спирт этиловый 70% и 40%) в дозе 30 мг/кг проявляли рано заживляющую и противовоспалительную активность.

Внедрение результатов исследования в практику. Подготовлены проекты

ФСП «Трава котовника крупноцветкового» и ФСП «Экстракт травы котовника крупноцветкового сухой» (подтверждено актами внедрения от 09.04.07), позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид лекарственного растительного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ, для расширения ассортимента и структуры выпускаемой продукции на ЗАО «Вифитех» (Россия).

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на 53-й, 54-й, 56-й, 57-й и 58-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1998, 1999, 2001, 2002, 2003 гг.), материалах Всероссийской научно-практической конференции «Химия в технологии и медицине» (Махачкала, 2002), материалах научно-практической конференции «Современные принципы и технологии разработки лекарственных средств» (Москва, 2006). По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная, работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА (номер государственной регистрации 01.200.112164) в рамках темы «Разработка лекарственных средств и их рациональное использование», согласно договору 016/146/050 между Министерством здравоохранения и социального развития РФ и Пятигорской ГФА.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения распространения котовника крупноцветкового на территории КЧР, определение его запасов и объема возможных ежегодных загото-> вок.

2. Результаты фотохимического изучения содержания основных биологически активных веществ в траве к. крупноцветкового.

3. Данные по изучению подлинности (анатомо-диагностические признаки сырья) и качества (содержание флавоноидов) травы котовника крупноцветкового.

4. Методики качественного и количественного состава сырья (травы) котовника крупноцветковогб и сухого экстракта (спирт этиловый 70%).

5. Результаты доклинического изучения водного настоя (1:20) и сухого экстракта (спирт этиловый 70%) из травы котовника крупноцветкового по выявлению антимйкробного, ранозаживляющего и противовоспалительного действия.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 110 страницах текста в компьютерном наборе, состоит из введения, обзора литературы, и четырёх глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 224 источника, в том числе 36 на иностранном языке; содержит 17 таблиц, 14 рисунков и приложение.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. 1. В результате проведенных экспедиционных исследований в 4-х основных регионах КЧР выявлены фитоценозы с участием котовника крупноцветкового. Определен объем возможных ежегодных заготовок сырья котовника крупноцветкового, который составил 12 тонн воздушно-сухого сырья.

2. Для сырья котовника крупноцветкового (трава) выявлены характерные анатомо-диагностические признаки и установлены товароведческие показатели сырья: влажность, зола общая, зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной и экстрактивные вещества.

3. Проведено фитохимическое изучение основных групп биологически активных соединений травы котовника крупноцветкового:

- методом ВЭЖХ впервые идентифицировано 9 фенольных соединений: ди-гидрокверцетин, гиперозид, рутин, дикумарин, кумарин и кислоты: салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая;

-„ спектрофотометрическим методом установлено содержание флавоноидов в различных частях растения: в корнях - 0,024±0,002%, стеблях - 0,091±0,002%, ли стьях - 0,217±0,003%, соцветиях - 0,134±0,002%, надземной части (траве) -0,165±0,003%;

- методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный состав эфирного масла котовника крупноцветкового. В эфирном масле идентифицировано 38 компонентов, из которых основными являются 1,8-цинеол (39,9%) и ка-риофиллен-оксид (32,83%), составляющие около 73% эфирного масла;

- методом колоночной жидкостной хроматографией был изучен качественный и количественный состав аминокислот. Установлено наличие 15 аминокислот, девять из которых являются незаменимыми - валин, треонин, метионин, изолейцин, лейцин, лизин, фенилаланин, гистидин и аргинин.

- полуколичественным спектральным анализом установлен макро- и микроэлементный состав травы и корня котовника крупноцветкового. Использованная методика позволила определить 27 элементов в траве и 32 в корнях. Из них эссенци-альными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальнымими: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.

4. Предложена технологическая схема промышленного производства сухого экстракта из травы, котовника крупноцветкового на основе использования спирта этилового 70% с эффективностью извлечения экстрактивных веществ 87,7%. Разработана методика спектрофотометрического определения суммы флавонои-дов, в сухом экстракте. Установлено, что содержание суммы флавоноидов в экстракте в пересчете на рутин должно быть не менее 0,5%.

5. Установлено, что настой травы котовника крупноцветкового обладает выраженным антимикробным действием в отношении грамположительных кокков из рода

Staphylococcus и по своему действию не уступает аналогичному настою из листь ев эвкалипта. Для настоя травы котовника крупноцветкового характерно угнетение роста Shigella sonnei. Для двух экстрактов травы котовника крупноцветкового (спирт этиловый 70% и 40%) выявлено выраженное антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и спорообразую-щих микроорганизмов рода Bacillus.

6. В ходе проведенных фармакологических экспериментов на лабораторных животных установлено, что сухие экстракты (спирт этиловый 70% и 40%) травы котовника крупноцветкового в дозе 30 мг/кг проявляют ранозаживляющую и противовоспалительную активность. t

7. По результатам исследований разработана ФСП «Котовника крупноцветкового трава цельная» и ФСП «Травы котовника крупноцветкового экстракт сухой», позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид отечественного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ для расши-ренйя ассортимента и структуры выпускаемой ЗАО «Вифитех» (Россия) продукции.