Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение змееголовника молдавского (Dracocephalum moldavica L.) и иссопа лекарственного (Hyssopus officinalis L.) с целью обоснования применения в фармации и медицине

НИКИТИНА АНГЕЛИНА СЕРГЕЕВНА

ФЛРМ ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЗМЕЕГОЛОВНИКА МОЛДАВСКОГО (DRACOCEPHALUM MOLDAVICA L.) И ИССОПА ЛЕКАРСТВЕННОГО (HYSSOPUS OFFICINALIS L.) С ЦЕЛЬЮ ОБОСНОВАНИЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ФАРМАЦИИ И МЕДИЦИНЕ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

с

' илло

шиш игсл ¿UUO

003163463

НИКИТИНА АНГЕЛИНА СЕРГЕЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЗМЕЕГОЛОВНИКА МОЛДАВСКОГО (DRACOCEPHALUM MOLDAVICA L.) И ИССОПА ЛЕКАРСТВЕННОГО (HYSSOPUS OFFICINALIS L.) С ЦЕЛЬЮ

ОБОСНОВАНИЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ФАРМАЦИИ И МЕДИЦИНЕ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего

профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Попова Ольга Ивановна Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Денисенко Олег Николаевич кандидат фармацевтических наук, доцент Кусова Раиса Дзиппоевна Ведущая организация: Государственное образовательное учрежден

высшего профессионального образования «Пермская государственн фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению социальному развитию»

Защит юстоится « Y3 » <pt2>PduL& 200S г в & часов на заседании Диссертационного совета Д 208 069 01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФ Росздрава» (357532, Ставропольский край, г Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорск ГФА Росздрава»

Автореферат разослан «_

Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор

ЕВ Компанцева

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В настоящее время лекарственные препараты на основе растительного сырья успешно применяются при лечении многих заболеваний. Однако, антропогенное воздействие на природу и сложность экологической обстановки в ряде регионов России привели к резкому сокращению природных запасов большинства лекарственных растений Возрастающая потребность здравоохранения в лекарственных препаратах растительного происхождения на первый план ставит вопросы обеспечения сырьевой базы за счет дополнительных растительных источников и их комплексного использования Широкая и неконтролируемая эксплуатация эфирномасличных растений привела к истощению многих сырьевых ресурсов, поэтому возникает необходимое* ь в изучении интродуцентов, способных обеспечить стабильную сырьевую базу. В этом плане особый интерес представляют эфирномасличные растения семейства яснотковые, так как они содержат комплекс биологически активных веществ (эфирные масла, иридоиды, тритерпеноиды, полисахариды, фенольные соединения и др), обладают разносторонней фармакологической активностью и малой токсичностью Змееголовник молдавский (Dracocephalum moldavica L) и иссоп лекарственный (Hyssopus officinalis L) не произрастают на территории Северо-Кавказского региона Однако на экспериментальных участках лаборатории лекарственных растений Ставропольского ЛИИ сельского хозяйства (СНИИСХ) на протяжении пяти лет проводятся исследования по культивированию различных селекционных форм змееголовника молдавского и ботанических форм иссопа лекарственного (розовая и синяя окраска венчика) Экспериментально установлено, что в экологически благоприятных условиях юга России возможно получение необходимого количества семенного и посадочного материала для создания промышленных плантаций исследуемых растений В тоже время внедрение близкородственных видов семейства яснотковые в медицинскую практику позволит значительно расширить сырьевую базу официальных видов лекарственного растительного сырья, а также номенклатуру лекарственных растений, сырья и лечебных средств на их основе

Змееголовник молдавский и иссоп лекарственный широко применяются в национальной медицине многих стран мира и включены в фармакопеи ряда Европейских стран, однако в химическом отношении они изучены недостаточно. Поэтому всесторонние исследования указанных видов растений являются весьма актуальными

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы заключается фармакогностическом исследовании змееголовника молдавского и иссоп лекарственного, разработке методик стандартизации сырья и проведеш • фармакологического скрининга для обоснования возможности использовани надземной части этих растений в качестве лекарственного растительного сырья Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи

• провести фитохимический анализ надземной части змееголовника молдавског и иссопа лекарственного для выявления основных групп БАВ,

• разработать оптимальные условия методик для оценки качества сырья п количественному содержанию эфирного масла и флавоноидов,

• установить основные морфолого-анатомические диагностические признаки товароведческие показатели сырья;

• изучить антимикробные свойства эфирного масла и спиртовых извлечений травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного,

• провести фармакологический скрининг спиртовых извлечений из трав исследуемых видов,

• провести стандартизацию травы змееголовника молдавского и разработа нормативную документацию на данный вид сырья

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Проведе фотохимическое изучение травы змееголовника молдавского и иссо лекарственного (ботанические формы с синим и розовым венчиком) Установле наличие эфирного масла, флавоноидов. иридоидов, полисахаридов, фенолокисл органических кислот, дубильных веществ, тритерпеновых соединений Вперв изучен состав аминокислот и макро- и микроэлементов травы змееголовш

молдавского Методом газожидкостной хроматографии впервые изучено эфирное масло разных ботанических форм иссопа лекарственного

Впервые из надземной части змееголовника молдавского выделены и охарактеризованы полисахариды, определено их количественное содержание, изучен качественный моносахаридный состав Полисахариды представлены нейтральными сахарами (глюкоза, фруктоза, арабиноза, ксилоза, галактоза, рамноза) и уроновыми кислотами (галактуроновая и глюкуроновая кислоты)

Впервые в траве змееголовника молдавского методом ВЭЖХ идентифицированы 12 соединений фенольной природы флавоноиды (лютеолин, апигенин, цинарозид, кверцетин, дигидрокверцетин, гесперидин) и фенолокислоты (хлорогеновая, кофейная, феруловая, коричная, цикориевая, галловая) В сырье иссопа лекарственного идентифицированы 5 соединений флавоноидчой природы (гиперозид, гесперидин, рутин, апигенин и диосмин) и 4 фенолокислоты (хлорогеновая, кофейная, феруловая и розмариновая)

В траве змее! оловника молдавского и иссопа лекарственного впервые исследован качественный состав и определено количественное содержание суммы иридоидов

Впервые изучена динамика накопления эфирного масла и флавоноидов в траве змееголовника молдавского по фазам вегетации, определены оптимальные сроки заготовки сырья

Комплексные исследования селекционных образцов змееголовника молдавского позволили определить сортообразец, признанный селекционерами наиболее перспективным по совокупности хозяйственно-полезных признаков, в том числе, по продуктивности эфирного масла Получено авторское свидетельство №43954 на новый сорт змееголовника молдавского «Эгоист»

В ходе фармакологического скрининга выявлена антибактериальная активность эфирного масла и спиртовых извлечений из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного, определены острая токсичность и наличие отхаркивающего, диуретического и седативного действия спиртовых извлечений из сырья

Практическая значимость результатов исследования.

На основе проведенных исследований разработаны показатели и нормь качества сырья, установлены характерные диагностические особенности травь змееголовника молдавского. Разработаны и включены в проект ФСП на трав змееголовника молдавского оптимальные условия методики количественног определения суммы флавоноидов и эфирного масла. Предложена методика ТСХ анализа флавоноидной фракции травы змееголовника, позволяющая подтвердит подлинность сырья. Определены оптимальные сроки заготовки сырья

Интродукциониые исследования, проведенные совместно с сотрудникам лаборатории лекарственных растений Ставропольского НИИ сельского хозяйств (СНИИСХ), и фотохимическое изучение змееголовника молдавского и иссоп лекарственного свидетельствую1, о возможности культивирования данных видо растений в условиях Ставропольского края в качестве источников биологическ активных веществ эфирных масел, фенольных и полифенольных соединений

Показана возможность применения в медицинской практике трав змееголовника молдавского и иссопа лекарственного в качестве источник отхаркивающих, диуретических, седативных и антимикробных средств, ч позволит значительно расширить номенклатуру лекарственного растительно сырья и лечебных средств на его основе

Внедрение результатов исследования в практику.

Разработаны проект ФСП «Змееголовника молдавского трава» и «Инструкц по сбору и сушке травы змееголовника молдавского», прошедшие апробацию ФГУП «Пятигорская фармацевтическая фабрика» (акт от 21 апреля 2007) Основные положения, выносимые на защиту:

• резулыаш фитохимического исследования травы змееголовника молдавско. и иссопа лекарственного,

• рекомендации по использованию выявленных диагностических признак травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного,

• результаты исследований по выбору экстрагента, обеспечивающего наиболее полную экстракцию определенной группы БАВ из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного;

• основные положения стандартизации сырья (травы) змееголовника молдавского,

• результаты некоторых фармакологических и микробиологических исследований эфирного масла и спиртовых извлечений из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на 59-61-й межрегиональных конференциях по фармации, фармакологии и лодгоювке кадров (г Пятигорск, 2005-2007 гг) По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии ПятГФА (номер государственной регистрации 0120011264)

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 187 страницах машинописного текста, содержит 54 таблицы, 39 рисунков, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы, посвященной материалам и методам исследования, 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 193 источника, в том числе 21 иностранного, и приложения

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Фитохимическое исследование змееголовника молдавского и иссопа лекарственного

Объектами исследований являлись трава змееголовника молдавского и трава иссопа лекарственного, заготовленная в 2004-2006 годах в Ставропольском НИИСХ, г. Михайловск, и в ботаническом саду ПГФА

В результате исследования биологически активных веществ травы исследуемых видов установлено присутствие в нём эфирного масла, фенольных

соединений, иридоидов, полисахаридов, тритерпеновых и органических кислот, макро- и микроэлементов и аминокислот.

Эфирное масло из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного получали дистилляцией по методу I ГФ XI издания Содержание его выражали в объемно-весовых процентах в пересчёте на абсолютно-сухое сырье Изучение динамики накопления эфирного масла в сырье показало, что его содержание возрастает по мере развития растения и достигает максимума в фазу массовог цветения растений - 0,43% Для определения оптимальной высоты среза при уборк проводили изучение накопления эфирного масла по органам растения (табл 1).

Таблица 1 - Содержание эфирного масла в органах змееголовника молдавского

в период массового цветения

органы растения

Надземная часть

Содержание органов растения в навеске, %

100

Массовая доля эфирного масла в % от абсолютно сухого сырья

2004 год

0,30-0,43

2005 год

0,30-0,36

Соцветие

35

0,40-0,53

Лист

35

0,23-U jj

0,35-0,48 О, ¡8-0,29

Стебрчь

40

0 09-0,12

0,09-0,15

Наибольшее накопление эфирного масла в сырье змееголовника молдавског происходит в соцветиях и листьях, поэтому оптимальная высота среза верхней част стебля растения 25-35 см, при общей высоте растения около 70-75 см

В разных ботанических формах иссопа лекарственного (синий и розовы венчик) содержание эфирного масла варьирует в зависимосги от фазы вегетации возраста растения (табл 2)

Таблица 2 - Динамика накопления эфирного масла в надземной части иссопа лекарственного в зависимости от возраста растений (в % от массы сухого сырья)_

Фаза вегетации

Возраст растения (в годах) 2|3 j 4~

Содержание эфирного масла, %

Отрастание цветущих побегов --------- 0,38 0,44 0,50 0,58

Бутонизация 0,40 0,45 0,50 0,68 0,70

Начало цветения 0,44 0,50 0,55 0,70 0,70

Массовое цветение 0,58 0,68 0,79 1,00 1,00

Отцветание (плодоношение) 0,36 0,40 0,42 0,42 0,45

Качественный состав эфирного масла изучали методом газо-жидкостн хроматографии на газовом хроматографе «Цвет-500» совместно с доц ка

аналитической химии Л С Ушаковой. Компонентный состав установлен сравнением времен удерживания пиков исследуемых веществ со стандартными образцами (Згдта) Количественное содержание компонентов эфирного масла определяли методом внутренней нормализации, для расчета использовали площадь пиков (табл 3)

Таблица 3 - Компонентный состав эфирного масла змееголовника молдавского и иссопа лекарственного (ч=6)___

№п/п Соединение Содержание в обпазиах эфирного масла, %

Змееголовник молдавский Иссоп лекарственный

1 Цитраль (нераль и гераниаль) 16,779-24,413

2 а-Терпинеол 4,570-13,168 1,657-1,851

3 Лимонен 1,796-6,499 0,077-0,287

4 Линалоол 3,733-9,621 36,433-42,387

5 Неошга^етат ! 407-2,33!

6 Гераниол 6,513-10,163

7 Нерол 0,002-4,996

8 Линалилацетат 1,342-1,930 2,164-2,672

9 1,8-цинеол 0,794-1,322 2,681-2,856

10 Геранилацетат 0,460-1,248

11 Теопенилаиетат 1 18-2 355 3 196-3.431

12 Тимол 1,351-6,565 1,114-1,876

1 1 I } Корнйлацетат Г\ ДО 1 1 АЛЛ и,

14 Пинокамфон 5,996-6,207

15 Изопинокамфон 0,934-0,978

Основными компонентами эфирного масла змееголовника молдавского являются цитраль П 6.7-24,4%). а-терпинеол (4,5-13,1%) и линалоол (3,7-9,6%), иссопа лекарственного - линалоол (36,4-42,3%) и пинокамфон (5,9-6,2%)

Для изучения фенольных соединений использовали спирто-водные извлечения из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного Извлечения концентрировали, очищали и вещества разделяли фракционированием по растворимости методом жидкостной экстракции, тонкослойной и препаративной бумажной хроматографии в различных системах растворителей. Идентификацию обнаруженных соединений проводили сравнением по люминесцентно-хроматографическим характеристикам и значениям при хроматографировании с достоверными образцами

В этилацетатной и бутанольной фракциях змееголовника молдавского на хроматограммах в различных системах растворителей в присутствии достоверных

образцов идентифицированы по величине и окраске зон адсорбции лютеолин, кверцетин, лютеолин-7-гликозид, гесперидин, апигенин, хлорогеновая, кофейная, феруловая и розмариновая кислоты Хроматографически в этилацетатной и бутанольной фракциях иссопа лекарственного из 11 обнаруженных нами идентифицированы 9 веществ фенольной природы гиперозид, гесперидин, рутин, апигенин, диосмин, хлорогеновая, кофейная, феруловая и розмариновая кислоты

Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии впервые установлены фенольные соединения змееголовника молдавского (табл. 4)

Таблица 4 - Результаты исследования фенольных соединений травы змееголовника молдавского методом ВЭЖХ_

Название вещества Время удерживания, Содержание, % (абсолютно

мин су^ое сырье)

Галловая кислота 2,02 0,95

Хлорогеновая кислота 2 294 2,28

Кофейная кислота 3,141 11,81

Феруловая кисло га 4 069 22,04

Цикориевая кислота 5,311 30,93

ГйС"£р"мИЧ 7,32 2,09

Коричная кислота 8,234 1,99

Дигидрокверцетин 9,762 ч-,73

Цинарочид 11.6 3,59

Лютеолин 14,05 4,32

Кверцетин 15,71 2,59

Апигенин 21,64 1,59

В исследованных образцах травы змееголовника молдавского доминировал

феруловая (22,04%) и цикориевая (30,93%) кислоты, дигидрокверцетин (4,73%) лютеолин (4,32%)

Для обоснования сроков заготовки сырья изучали динамику накоплени суммы флавоноидов в траве змееголовника молдавского по фазам вегетации Количественное определение суммы флавоноидов проводили совместно с к ф i О М Марковой методом дифференциальной УФ-спектрофотометрии, используя качестве стандартного образца PCO лютеолина. Максимум светопоглощет комплексов флавоноидов спиртовых извлечений из травы змееголовника лютеолина с алюминия хлоридом находился при длине волны 393 нм Наибольше содержание флавоноидов наблюдается в фазу бутонизации (табл 5) Однак максимальное накопление эфирного масла в растении происходит б фазу массовог

цветения Учитывая, что наибольшая сырьевая масса растения наблюдается в фазу цветения, целесообразно заготавливать траву змееголовника молдавского в фазу массового цветения растения

Таблица 5 - Содержание суммы флавоноидов в сырье змееголовника молдавского (в пересчёте на лютеолин) (п-6)__

I Найдено флавоноидов, %

I Фаза бутонизации, начала 1 цветения Фаза массового цветения Фаза плодоношения

2,04±0,03, е =±1,89% 1 ' ' 1,28±0,01 е=±1,07% 1,04+0,01, £=±¡.,22%

Количественное содержание суммы флавоноидов в сырье иссопа лекарственного проводили по аналогичной методике. Максимум светопоглощения комплекса флавоноидов спиртовых извлечений из травы иссопа лекарственного с алюминия хлоридом совпадал с максимумом светопоглощения комплекса PCO гиперозида с алюминия хлоридом и наблюдается при длине волны 405 нм. Поэтому расчет содержания суммы флавоноидов проводили в пересчёте на гиперозид. Результаты эксперимента показали, что оптимальным экстрагентом для извлечения суммы флавоноидов из сырья иссопа лекарственного является спирт этиловый 70%. содержание суммы флавоноидов достигает 0,91 %

Количественное определение фенолокислот проводили методом прямой спектрофотометрии, предложенным профессором В.А Куркиным Результаты эксперимента показали, что в траве змееголовника молдавского содержание фенолокислот достигает 5,10%, несколько ниже в траве иссопа лекарственного — 4,67%

Состав иридоидов изучали с помощью хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил» в различных системах растворителей Люминесцентно-хроматографические характеристики и значения Rf зон адсорбции 6 веществ позволили идентифицировать в спиртовых извлечениях из травы змееголовника гарпагид, пеонифлорин, гарпагида ацетат При изучении спиртовых извлечений травы иссопа установлено наличие 7 веществ иридоидной природы, из них идентифицированы каталпол, гарпагид и гарпагида ацетат Для количественного определения иридоидов выбран спектрофотометрический метод с использованием гидроксамовой реакции Максимум светопоглощения комплексов

наблюдался при длине волны 512 нм, что совпадает с данными литературы для

гарпагида ацетата Установлено, что содержание иридоидов в пересчете на

гарпагида ацетат в траве змееголовника молдавского составляет 0,51%, в траве

иссопа лекарственного - 0,38%.

Полисахариды выделяли гравиметрическим методом Н.К Кочеткова и М

Эшпег из сырья, предварительно обработанного хлороформом и спиртом этиловым

(табл 6) Навески отличались соотношением органов растения

Таблица 6 -Содержание полисахаридов в траве змееголовника молдавского и иссопа лекарственного (%, воздушно-сухое сырьё)

Фракция полисахаридов

Змееголов1!ик молдавский

Иссоп лекарственный

Внешний вид и содержание в сырье выделенной фракции полисахаридов, %

Водорастворимые

полисахариды

(ВРПС)

Серый аморфный порошок

9,2-10,7%

Серовато-зеленый аморфный попошок

¡,6-9,7%

Пектиновые вещества (ПВ)

Серый блестящий порошок

1.1-4,1%

Серый порошок

4.3-4,8%

Гемицеллюлоза А \ГЦ А1

Бурый аморфный

порошок

4,1-7,3%

Светло-коричневый аморфный порошок

7 7-8 0%

Гемицеллкшна Б Серый блестящий

; (гц б)

порошок

0,1-1,5%

Серовато-зеленый аморфный порошок

3,0-3,9%

Изучение моносахаридного состава полисахаридов показало, что наиболе разнообразными являются фракции водорастворимых полисахаридов и пектиновы веществ Для них характерным является наличие рамнозы, арабинозы, ксилоз глюкуроновой и гапактуроновой кислот

Изучение состава тритерпеновых соединений проводил хроматографированием хлороформных и спиртовых извлечений Эксперимент показали, «то в хлороформных ч 70% спиртовых извлечениях из трав змееголовника молдавского и иссопа лекарственного присутствуют олеаколовая урсоловая кислоты Количественное определение тритерпеновых кислот растительном сырье проводили методом спектрофотометрии поел термостатироваиия с раствором кислоты серной Установлено, что содержани тритерпеновых кислот в пересчете на урсоловую кислоту в траве иссоп

лекарственного ниже, чем в сырье змееголовника молдавского и составляет соответственно 0,98% и 2,08%

Изучение аминокислотного состава сырья проводили на аминокислотном анализаторе ААА 339 на базе лаборатории патологии обмена веществ животных ГНУ Ставропольского НИИ животноводства и кормпроизводства Установлено наличие в сырье 15 аминокислот, из которых в траве змееголовника молдавского преобладают аспарагиновая, глютаминовая кислоты и лейцин, в траве иссопа лекарственного - глютаминовая кислота, метионин и лейцин С помощью бумажной и тонкослойной хроматографии в присутствии достоверных образцов идентифицированы в траве змееголовника молдавского лимонная, яблочная, винная и щавелевая, в траве иссопа лекарственного — лимониая, винная и щсшьлевая

Методом спектрального анализа в испытательной лаборатории спектрального анализа ФГУ «Пятигорский центр стандартизации, метрологии и сертификации» на приборе ДФС-8-1 в исследуемом сырье впервые идентифицировано от 25 до 27 элементов Количес! венное определение основных БАВ в сырье исследуемых видов проводили с учетом их физико-химических свойств (табл 7)

Таблица 7 - Количественное содержание основных групп БАВ в траве змееголовника молдавского и иссопа лекарственного_

БАВ Метод определения Количественное содержание в пересчете на абсорютно-сухое сырьё (~Х±А~Х),%

Змееголовник молдавский Иссоп лекарственный

Эфирное масло Дистилляция 0,43±0,001 0,78±0,002

Флавоноиды в пересчёте на лютеолин/гиперозид Дифференциальная УФ-спектрофотометрия 1,28 ±0,01 0,91 ±0,005

Фенолокислоты в пересчете на кофейную кислоту Спектрофотометрический 5,10±0,02 4,67±0,01

Иридоиды в пересчёте на гарпагида ацетат Спектрофотометр ический 0,51 ±0,012 0,38±0,003

Полисахариды Гравиметрический 9,20-10,70 8,60-9,70

Тритерпеновые кислоты Спектрофотометрический 2,08±0,04 0,98±0,002

Дубильные вещества Перманганатометрический 7,91± 0,21 9,37±0,27

Свободные органические кислоты в пересчёте на кислоту яблочную Алкалиметрический 3,50 ± 0,04 3,80±0,03

Кислота аскорбиновая Титриметрический 0,027±0,001 0,037fc0,001

Свободные аминокислоты, г/кг Аминокислотный анализатор 10,94 ±0,01 12,81±0,01

В результате фотохимического исследования установлено содержание основных БАВ травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного флавоноиды (1,28% и 0,91%), эфирное масло (0,43% и 0,78%), фенолокислоты (5,1% и 4,67%), полисахариды (9,2% и 8,6%) соответственно

2. Стандартизация сырья и разработка проекта фармакопейной статьи предприятия на траву змееголовника молдавского

Анализ совокупности морфологических признаков змееголовника молдавского и иссопа лекарственного и их систематизация позволили описать внешние признаки сырья Цельное сырье змееголовника молдавского представляет собой смесь облиственных стеблей высотой 25-35 см с цветками, бутонами цветков, незрелыми плодами, отдельных стеблей, цельных или измельченных листьев. Характерно опушение всех частей растения Стебли растения имеют зеленовато-пурпуровое окрашивание Листья супротивные, черешковые, продолговато-ланцетные длиной 2,6-3,3 см, шириной 0,8-1,8 см, с тупозубчатым краем, цветки голубоватые или сиреневые длиной 15-21 мм собраны в колосовидное соцветие длиной 16-20 см, состоящее из сближенных мутовок с 5-6 цветками Плод распадается на 4 трёхгранных, продолговатых орешка длиной 2,4-3,2 мм и шириной 1,2-1,9 мм. Семена бурого, почти черного цвета

Цельное сырье иссопа лекарственного представляет собой смесь облиственных стеблей с цветками, бутонами цветков, незрелыми плодами, отдельных стеблей, цельных или измельченных листьев Характерно слабое опушение всех частей растения Листья супротивные, ланцетовидные, длиной 2,02,5 см, ширина 0,6-1,0 см, короткочерешковые, цельнокрайные со слегка завернутыми краями, жесткие Цветки мелкие, 7-9 мм длиной синие или фиолетовые, реже розовые или белые расположены ложными полумутовками по пять - семь в пазухах верхних листьев, образуют колосовидное соцветие в верхней части стебля Плод состоит из четырех ребристых орешков, заключенных в чашечку.

Для внедрения нового вида лекарственного растительного сырья (ЛРС) в медицинскую практику необходима разработка нормативной документации, одним из разделов которой должна быть «Микроскопия».

Установлено, что лист змееголовника молдавского имеет дорзовентральное строение, заметно выделяется центральная жилка. При рассмотрении листа с поверхности видно, что клетки нижней эпидерма листа с сильно извилистыми антиклинальными стенками, устьица многочисленные диацитного типа (рисунок I).

Рисунок 1 - Строение верхней (А) и нижней (Б) эпидермы листа змееголовника молдавского: 1 - эпидермапьные клетки; 2 - замыкающие клетки устьиц; 3 -простой волосок; 4 — эфирномасличная желёзка; 5 - железистый волосок (х200).

Вдоль жилок и по краю листовой пластинки с обеих сторон листа густо

располагаются кроющие трихомы в виде многоклеточных волосков с бородавчатой поверхностью. На верхней стороне листа эпидермальные клетки имеют слабо извилистые антиклинальные стенки, устьица редкие более крупные. Эфирномасличные желёзки 8-16 клеточные, радиального типа.

Характерными особенностями стебля являются: четырёхгранная форма в верхней и средней зонах и округлая - в нижней; тип строения проводящей системы - от пучкового в верхней зоне к непучковому - в нижней. В большом количестве присутствуют простые 1-3-клеточные волоски с бородавчатой поверхностью, конечная клетка у которых изогнута. Железистые трихомы такого же строения, как и на листе.

Лист иссопа лекарственного дорзовентрального типа. Клетки нижнего эпидермиса листа сильноизвилистостенные, устьица многочисленные диацитного

типа. На верхнем и нижнем эпидермисе листа в большом количестве расположены округлые 8-клеточные эфирномасличные железки с радиально расположенными выделительными клетками и одноклеточной округлой ножкой. На верхнем и нижнем эпидермисе листа часто встречаются головчатые волоски с одноклеточной шаровидной головкой и короткой одноклеточной ножкой (рисунок 2).

Рисунок 2 - Строение верхней (А) и нижней (Б) эпидермы листа иссопа лекарственного: 1 —эпидермальные клетки; 2 - железистый волосок; 3 - простой волосок; 4 -замыкающие клетки устьиц; 5 - эфирномасличная желёзка (х200)

Клетки верхнего эпидермиса со слабо извилистыми стенками, устьица

крупные, редкие. Верхний эпидермис и край листа характеризуются наличием простых волосков, состоящих из 2-3 клеток с тонкими стенками и слегка бородавчатой поверхностью, терминальная клетка бечевидно изогнута.

Товароведческие показатели сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного определяли фармакопейными методами. Стандартизацию сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного проводили по содержанию эфирного масла и суммы флавоноидов, идентификацию сырья - методом тонкослойной хроматографии спиртового извлечения (табл. 8).

Таблица 8 - Нормативные показатели сырья змееголовника молдавского

Показатели Метод определения Нормативные показа! ели

1 2 3

Внешние признаки Визуально Смесь листьев, стеблей, цветков, бутонов, незрелых плодов. Все части растения опушены. Край листа тупозубчатый, цветки сине-голубые, сиреневые 15-25 мм в длину. Запах сильный, лимонный, напоминает запах мелиссы. Вкус горьковатый.

Продолжение таблицы 8

1 2 3

Микроскопия Микроскопия Извилистые стенки клеток нижнего эпидермиса и слабо извилистые верхнего эпидермиса, волоски простые многоклеточные с бородавчатой поверхностью, головчатые и эфиромасличные железки 8-16-клеточные

Подлинность - Флавоноиды Цв реакция с магнием в присутствии кислоты хлороводородной, ТСХ (пластинки «8огЬШ»., система БУВ (4 1 2)) Красное окрашивание раствора Зона адсорбции с Rf=0,8±0,01, соответствует PCO лютеолина

Количественное определение - Флавоноиды - Эфирное масло Спектрофотометрия Дистилляция Не менее 1,0 % в пересчете на лютеолин Не менее 0,30%

Влажность ГФХ1, вып 1, с 285 Не более 11,0 %

Золы общей ГФ XI, вып 2, с 2А Не более 9,0 %

Золы, нерастворимом в 10% растворе кислоты хлороводородной ГФ XI, вып 2, с 25 Не более 2.0 %

Органической примеси ГФ XI, вып 1, с 276 Не более 1,0%

Минеральной примеси ГФ XI, вып 1, с 276 Не более 1,0 %

Частиц, проходящих сквозь сото с отверстиями диаметром 7 мм ГФ XI, вып 1, с 275 Не более 1,0 %

Микробиологическая чистота ГФ XI вып 2, с 193, и изм от 10 06 05 Категория 4Б

Количественное определение суммы флавоноидов в траве змееголовника

молдавского проводили на основании методики, рекомендуемой ГФ XI издания для определения суммы флавоноидов в траве зверобоя Установлено, что максимальное извлечение суммы флавоноидов из растительного сырья достигается спиртом этиловым 70% через 120 минут при трехкратной экстракции (30+30+30) Устойчивое окрашивание извлечений из растительного сырья с алюминия хлоридом наступает через 40 минут и сохраняется в течение 1,5 часов, что достаточно для проведения анализа Результаты исследования 6 серий сырья показали, что содержание суммы флавоноидов колеблется от 1,16% до 1,28%, поэтому норма содержания суммы флавоноидов не менее 1,0%

Результаты фотохимического исследования травы змееголовника молдавского, разработанная методика количественного определения суммы флавоноидов послужили основой для создания нормативной документации проекта фармакопейной статьи предприятия (ФСП) «Змееголовника молдавского трава» и инструкции по заготовке сырья. При разработке норм качества проведен анализ образцов сырья, заготовленных в период с 2004 г. по 2006 г.

3. Фармакологические исследования извлечений из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного

Фармакологические исследования проводились совместно с доц каф. фармакологии Пятигорской ГФА С А Кулешовой Экспериментально установлено, что спиртовые извлечения из сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного токсичностью не обладают.

Для исследования отхаркивающей активности использовали модель изучения двигательной активнос-1 и мерцательного эпителия пищевода лягушки Критерием отхаркивающего эффекта извлечений из травы змееголовника молдавского (ЗМ) и иссопа лекарственного (ИЛ) служило время движения нити (сек ) вдоль пищевода лягушки. Препарат сравнения сироп «Пертуссин» (табл 9)

Таблица 9 - Результаты изучения отхаркивающей активности спиртовых извлечений змееголовника молдавского и иссода лекарственного

Исследуемый объект Время исходное, сек Время после введения, сек Д%

Извлечение ЗМ (экстрагент - спирт этиловый 40%) 78,07±8,33 56,57±4,77* -2б,66±4,25

Извлечение ЗМ (экстрагент - спирт этиловый 70%) 93,95±9,65 69,57±9,77 -23,68± 10,05

Извлечение ИЛ (экстрагент - спирт этиловый 40%) 158,85±19.49 82,72±11,88* -45,65+10,93

Извлечение ИЛ (экстрагент — спирт этиловый 70%) 108,65±7,47 80,67±9,86* -26,39±4,32

Пертуссин 122,90±6,53 87,93±6,50* -28,33±5,01

Примечание * - изменения достоверны относительно исходных данных (р<0,05)

В сравнительном аспекте отхаркивающий эффект исследуемых извлечений из змееголовника молдавского и иссопа лекарственного сопоставим с действием лекарственного препарата «Пертуссин»

Диуретическую активность изучали в эксперименте на 36 белых крысах Четырем группам животных (крысы) однократно утром натощак вводили перорально через зонд исследуемые водные растворы спиртовых извлечений из исследуемых растений в дозе 1 мл на 100 г массы животного Одной группе животных аналогичным образом вводили препарат сравнения - «Фитолизин» в дозе 153 мл/кг Шестая группа, служившая контролем, получала в адекватном количестве воду Общая нагрузка жидкости составила 25 мл/кг Всех животных помещали по одному в уроколлекторные камеры для постоянного сбора мочи, регистрацию диуреза проводили в течение 5 часов.

Экспериментально установлено, что спиртовые извлечения из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного обладают выраженной диуретической активностью, превосходящей эффект официального комплексного мочегонного препарата растительного происхождения «Фитолизин»

Седативная активность спиртовых извлечений была исследована на 36 белых крысах на модели нембуталового сна Исследования показали, что извлечения из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного удлиняют время нембуталового сна на 48 % и 55 % соответственно, что может свидетельствовать об их седативном влиянии на ЦНС

Изучение антимикробного действия эфирных масел и спиртовых извлечений из сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного проводили на кафедре микробиологии Пятигорской ГФА совместно с кф н ИИ Клишиной Установлено, что эфирное масло исследуемых видов оказывает выраженное антибактериальное действие на стафилококки, энтеробактерии и бациллы во всех исследуемых концентрациях Методом двукратных серийных разведений определена минимальная бактерицидная концентрация (МБК) спиртовых извлечений из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного в отношении Staphylococcus aureus, Pseudomonas aerugmoza и Bacillus subtihs.

Результаты микробиологических исследований позволяют сделать вывод о том, что эфирные масла и спиртовые извлечения из сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного обладают широким спектром антимикробной активности и могут быть использованы в разработке лекарственных препаратов с выраженным антимикробным действием как для наружного, так и для внутреннег применения

Общие выводы

1 Химическими исследованиями в траве змееголовника молдавского впервы количественно определены флавоноиды (1,28 ± 0,01%), эфирное масл (0,43±0,02%), фенилокислоты (5,10±0,02%), иридоиды (0,51 ± 0,012%) тритерпеновые кислоты (2,08^0,04%), дубильные вещества (7,91 ± 0,21%) органические кислоты (3,50 ± 0,04%), в том числе аскорбиновая кислота (0,027 0,0008%), комплекс аминокислот, также макро- и микроэлементы

2 Изучением качественного и количественного состава травы иссоп лекарственного установлено наличие эфирного масла (0,78±0,03%), флавоноидо (0,91 ± 0,005%), фенолокислот (4,67 ± 0,01%), иридоидов (0,38 ± 0,003% тритерпеновых кислот (0,98 ± 0,002%), дубильных веществ (9,37 ± 0,27% органических кислот (3,80 ± 0,03%), в том числе аскорбиновой кислоты (0,037 0,0012%), комплекса аминокислот, макро- и микроэлементов

3 Впервые в траве змееголовника молдавского методом ВЭЖХ идентифицирован 12 веществ фенольной природы флавоноиды (апигенин, лютеолин, цинарози гесперидин, кверцетин, дигидрокверцетин); фенолокислоты (кофеин:, хлорогеновая, феруловая, цикориевая, галловая, коричная) Впервые исследова фракционный состав полисахаридов- водорастворимые (до 10,7 %), пектиновы вещества (до 4,1 %) гемицеллюлоза А (до 7.3 %), гемицеллюлоза Б (до 1.5 %)

4 Изучены условия методики спектрофотометрического определения сумм флавоноидов в траве змееголовника молдавского и установлена их норм содержания в сырье в пересчете на лютеолин - не менее 1,0 %

5 На основании морфолого-анатомических исследований листьев, цветков, стебле выявлены микроскопические признаки сырья- форма клеток эпидермис

характер эпидермальных выростов (трихом), особенности строения эфирномасличных железок, позволяющие проводить диагностику сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного

6 Доказана выраженная антимикробная активность эфирных масел и спиртовых извлечений из сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного

7 Исследование острой токсичности спиртовых извлечений из травы исследуемых видов показало, что они являются относительно безвредными для организма человека

8 Фармакологическими исследованиями в опытах на животных установлено, что спиртовые извлечения из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного проявляют отхаркивающее, диуретическое и седативное действие.

9 Проведена стандартизация травы змееголовника молдавского согласно современным требованиям, предъявляемым к качеству лекарственного растительного сырья Разработан проект ФСП «Змееголовника молдавского трава», разработана «Инструкция по сбору и сушке травы змееголовника молдавского»

По материалам диссер!ации опубликованы следующие работы:

1 Зависимость содержания эфирного масла в траве иссопа лекарственного от фазы вегетации и морфологических признаков // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции- сб науч тр - Пятигорск, 2005 - С. 47-49 (Соавт Попова О И, Чумакова В В , Гаврилин М.В , Ушакова ЛС)

2 Изучение основных групп биологически активных веществ травы змееголовника молдавского (ОгасосерЬа1ит тоМаугса Ь ), культивируемого л условиях Ставропольского края // Санкт-Петербургские научные чтения материалы Международного молодежного медицинского конгресса 7-9 декабря 2005 г - СПб , 2005 - С 74

3 Хозяйственно-биологичекие особенности ОгасосерЬа1иш шоИауша Ь. и количественное содержание эфирного масла в нем // Актуальные вопросы

селекции, технологии и переработки масличных культур, сб докл. 3-й Междунар. конф. молодых ученых и специалистов (28-30 марта 2005 г Краснодар) - Краснодар, 2005. - С 224-229 (Соавт. Павличенко JIВ ).

4. Определение эфирного масла в образцах сырья змееголовника молдавского (Dracocephalum moldavica L., сем Lamiaceae) // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб науч. тр - Пятигорск, 2005 - Вып 60. - С. 49-50 (Соавт. Попова О И.)

5. Исследование травы змееголовника молдавского (Dracocephalum moldavica L ), культивируемого в Ставропольском крае // Химия, технология, медицина материалы Междунар. конф, посвященной 75-летию образования Всероссийского научнс-исследовательского института лекарственных и ароматических растений (сб науч. тр) 27-29 июня 2006 г - М, 2006 -T.XVII -С 306-310 (Соавт Попова О И., Чумакова В В.)

6 Змееголовник молдавский (Dracocephalum moldavica L.) и иссоп лекарственный (Hyssopus officinalis L.) - перспективные эфирномасличные растения // Молодые ученые - медицине тез. докл 5-й конф молодых ученых - Владикавказ, 2006 - С 75-78

7. Изучение динамики накопления эфирного масла по фазам вегетации в сырье змееголовника молдавского // Университетская наука, взгляд в будущее сб науч тр - Курс, 2006 -Т 2 - Вып 71.-С. 185-186 (Соавт Попова О И.)

8 Определение основных морфолого-анатомических диагностических признаков травы змееголовника молдавского (Dracocephalum moldavica L), культивируемого в условиях Ставропольского края // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр -Пятигорск, 2006 - Вып 61 - С. 42-44 (Соавт Попова О.И)

9 Изучение антимикробного действия жирного масла из семян змееголовника молдавского и ясеня обыкновенного // Науки о человеке: материалы конгресса молодых ученых и специалистов 18-19 мая 2006 г. - Томск, 2006 - С 112-113 (Соавт ЦыганковаЕ.А, ГоловаМ.А, КлишинаИИ),

10 Полисахариды змееголовника молдавского, культивируемого в условиях Ставропольского края // Вестник Воронежского государственного университета Серия химия, биология, фармация - 2006 - №2 - С 327-329 (Соавт Попова О И )

11 Элементный состав змееголовника молдавского и иссопа лекарственного, культивируемых в Ставропольском крае // Экология человека - 2006 - №12 -С 12-13 (Соавт Попова О И )

12 Изучение диуретической активности экстрактов травы иссопа лекарственного (Hyssopus officinalis L) и змееголовника молдавского (Dracocephalum moldavica L), сем Lamiaceae // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр - Пятигорск, 2007. - Вып 62 - С 520-522 (Соавт Попова О И., Кулешова С А , Никитина Н В )

13 Исследование антимикробных свойств эфирного масла змееголовника молдавского (Dracocephalum moldavica L), культивируемого в Ставропольском крае // Аптечный форум От производителя до аптеки и потребителя тез докл - М , 2007 - С 88-89 (Соавт Попова О.И, Клишина ИИ)

14 Определние иридоидов змееголовника молдавского (Dracocephalum moldavica L ) // Аптечный форум От производителя до аптеки и потребителя тезисы докладов - М, 2007 - С. 89-90 (Соавт Попова О И, Маркова О М)

15 Полисахариды иссопа лекарственного, культивируемого в условиях Ставропольского края // Медицинский вестник Северного Кавказа. - 2007 -№1.-С 56-58

16 Аминокислотный состав травы змееголовника молдавского (Dracocephalum moldavica L) и иссопа лекарственного (Hyssopus officinalis L ) // Актуальные проблемы фармации- сб статей межрегион, науч конф - Владикавказ, 2007 -С 56-57 (Соавт. Никитина Н В.)

НИКИТИНА АНГЕЛИНА СЕРГЕЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЗМЕЕГОЛОВНИКА МОЛДАВСКОГО (DRACOCEPHALUM MOLDAVIKA L ) И ИССОПА ЛЕКАРСТВЕННОГО (HYSSOPUS OFFICINALIS L.) С ЦЕЛЬЮ ОБОСНОВАНИЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ФАРМАЦИИ И МЕДИЦИНЕ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати И Ъ /¿^Формат бумаги 60*84 1/16 Бумага книжно-журнальная Печать ротапринтная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ № 2/66 В\

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

Актуальность темы. В настоящее время лекарственные препараты на основе растительного сырья успешно применяются при лечении большинства заболеваний, не смотря на то, что эпоха синтетических препаратов, начавшаяся приблизительно полтора века назад, позволила медицине шагнуть далеко вперед. Фитотерапия уходит своими корнями в глубину веков. Фитопрепараты обладают рядом преимуществ перед синтетическими лекарствами - широкий выбор терапевтически активных ингредиентов в лекарственных растениях, возможность их комбинированного использования, меньшая частота побочных эффектов и противопоказаний. Эти особенности способствуют широкому использованию фитопрепаратов в клинической практике для лечения ряда заболеваний, а также в качестве дополнения к основному лечению, в виде профилактической терапии. Однако, антропогенное воздействие на природу и сложность экологической обстановки в ряде регионов России привели к резкому сокращению природных запасов большинства лекарственных растений. Возрастающая потребность здравоохранения в лекарственных препаратах растительного происхождения на первый план ставит вопросы обеспечения сырьевой'ба-зы за счет дополнительных растительных источников и их комплексного использования. Широкая и неконтролируемая эксплуатация эфирномасличных растений привела к истощению многих сырьевых ресурсов, поэтому возникает необходимость в изучении интродуцентов, способных обеспечить стабильную сырьевую базу. В этом плане особый интерес представляют эфирномасличные растения' семейства яснотковые, так как они содержат комплекс биологически активных веществ (эфирные масла, иридоиды, тритерпеноиды, полисахариды, фенольные соединения и др.), обладают разносторонней фармакологической активностью и малой токсичностью. Большинство эфирномасличных растений семейства яснотковые в настоящее время применяются в качестве отхаркивающих, противовоспалительных, ранозаживляющих, седативных и др. средств. Многие виды растений семейства яснотковые недостаточно изучены в химическом отношении и имеют ограниченные сведения по фармакологической активности.

Змееголовник молдавский {Dracocephalwn moldavica L.) и иссоп лекарственный (Hyssopus officinalis L.) не произрастают на территории СевероКавказского региона. Однако на экспериментальных участках лаборатории лекарственных растений Ставропольского НИИ сельского хозяйства (СНИИСХ) на протяжении пяти лет проводятся исследования по культивированию различных селекционных форм змееголовника молдавского и ботанических форм иссопа лекарственного (розовая и синяя окраска венчика). Экспериментально установлено, что в экологически благоприятных условиях юга России возможно получение необходимого количества семенного и посадочного материала для создания промышленных плантаций исследуемых растений. В тоже время внедрение близкородственных видов семейства яснотковые в медицинскую практику позволит значительно расширить сырьевую базу официальных видов лекарственного растительного сырья, а также номенклатуру лекарственных растений, сырья и лечебных средств на их основе.

Змееголовник молдавский и иссоп лекарственный широко применяются в национальной медицине многих стран мира и включены в фармакопеи ряда Европейских стран, однако в химическом отношении они изучены недостаточно. Поэтому фармакогностические исследования указанных видов растений, изучение их фармакологической активности с целью внедрения в медицинскую практику, а также разработка норм качества и стандартизация новых видов сырья являются весьма актуальными.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы заключается в фармакогностическом исследовании змееголовника молдавского и иссопа лекарственного, разработке методик стандартизации сырья и проведении фармакологического скрининга для обоснования возможности использования надземной части этих растений в качестве лекарственного растительного сырья.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• провести фотохимический анализ надземной части змееголовника молдавского и иссопа лекарственного для выявления основных групп БАВ;

• разработать оптимальные условия методик для оценки качества сырья по количественному содержанию эфирного масла и флавоноидов;

• установить основные морфолого-анатомические диагностические признаки и товароведческие показатели сырья;

• изучить антимикробные свойства эфирного масла и спиртовых извлечений из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного;

• провести фармакологический скрининг спиртовых извлечений из травы исследуемых видов;

• провести стандартизацию травы змееголовника молдавского и разработать нормативную документацию на данный вид сырья.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Проведено фи-тохимическое изучение травы змееголовника, молдавского и иссопа лекарственного (ботанические формы с синим и розовым венчиком). Установлено наличие эфирного-масла, флавоноидов, иридоидов,, полисахаридов, фенол окис-лот, органических кислот, дубильных веществ, тритерпеновых соединений. Впервые изучен состав аминокислот и макро- и микроэлементов травы змееголовника молдавского. Методом газожидкостной хроматографии впервые изучено эфирное масло разных ботанических форм иссопа лекарственного.

Впервые из надземной части змееголовника молдавского выделены и охарактеризованы* полисахариды, определено их количественное содержание; изучен качественный моносахаридный состав. Полисахариды, представлены нейтральными сахарами (глюкоза, арабиноза, ксилоза, галактоза,, рамноза) и уроновыми кислотами (галактуроновая и глюкуроновая кислоты).

Впервые в траве змееголовника молдавского методом ВЭЖХ идентифицированы 12 соединений фенольной природы: флавоноиды (лютеолин, апиге-нин, цинарозид, кверцетин, дигидрокверцетин, гесперидин) и фенолокислоты (хлорогеновая, кофейная, феруловая, коричная, цикориевая, галловая). В сырье иссопа лекарственного идентифицированы 5 соединений флавоноидной природы (гиперозид, гесперидин, рутин, апигенин и диосмин) и 4 фенолокислоты (хлорогеновая, кофейная, феруловая и розмариновая).

В траве змееголовника молдавского и иссопа лекарственного впервые исследован качественный состав и определено количественное содержание суммы иридоидов.

Впервые изучена динамика накопления эфирного масла и флавоноидов в траве змееголовника молдавского по фазам вегетации; определены оптимальные сроки заготовки сырья.

Комплексные исследования селекционных образцов змееголовника молдавского позволили определить сортообразец, признанный селекционерами наиболее перспективным по совокупности хозяйственно-полезных признаков, в том числе, по продуктивности эфирного масла. Получено авторское свидетельство №43954 на новый сорт змееголовника молдавского «Эгоист».

В ходе фармакологического скрининга выявлена антибактериальная активность эфирного масла и спиртовых извлечений из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного, определены острая токсичность и наличие отхаркивающего, диуретического и седативного действия спиртовых извлечений из сырья.

Практическая значимость результатов исследования.

На основе проведённых исследований разработаны показатели и нормы качества сырья, установлены характерные диагностические особенности травы змееголовника молдавского. Разработаны и включены в проект ФСП на. траву змееголовника молдавского- оптимальные условия методики количественного определения суммы флавоноидов и эфирного масла. Предложена методика ТСХ-анализа флавоноидной фракции травы змееголовника, позволяющая подтвердить подлинность сырья. Определены оптимальные сроки заготовки сырья.

Интродукционные исследования, проведённые совместно с сотрудниками лаборатории лекарственных растений Ставропольского НИИ сельского хозяйства (СНИИСХ), и фитохимическое изучение змееголовника молдавского и иссопа лекарственного свидетельствуют о возможности культивирования данных видов растений в условиях Ставропольского края в качестве источников биологически активных веществ: эфирных масел, фенольных и полифенольных соединений.

Показана возможность применения в медицинской практике травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного в качестве источников отхаркивающих, диуретических, седативных и антимикробных средств, что позволит значительно расширить номенклатуру лекарственного растительного сырья- и лечебных средств на его основе.

Внедрение результатов исследования в практику. Разработаны проект ФСП «Змееголовника молдавского трава» и «Инструкция по сбору и сушке травы змееголовника молдавского», прошедшие апробацию на ФГУП «Пятигорская фармацевтическая фабрика» (акт от 21 апреля* 2007).

Основные положения, выносимые на защиту:

• результаты фитохимического исследования травы змееголовника» молдавского и иссопа лекарственного;

• рекомендации по использованию выявленных диагностических признаков травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного;

• результаты исследований по выбору экстрагента, обеспечивающего наиболее полную экстракцию определённой группы БАВ из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного;

• основные положения стандартизации сырья (травы) змееголовника молдавского;

• результаты некоторых фармакологических и микробиологических исследований эфирного масла и спиртовых извлечений из .травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на 59-61-й межрегиональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2005-2007 гг.). По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии ПятГФА (номер государственной регистрации 0120011264).

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 187 страницах машинописного текста, содержит 54 таблицы, 39 рисунков, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы, посвященной материалам и методам исследования, 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 193 источника, в том числе 21 иностранного, и приложения.

Общие выводы

1. Химическими исследованиями в траве змееголовника молдавского впервые определены флавоноиды (1,28 ± 0,01%), эфирное масло (0,43±0,02%), фено-локислоты (5,10±0,02%), иридоиды (0,51 ± 0,012%), тритерпеновые кислоты (2,08±0,04%), дубильные вещества (7,91 ± 0,21%), органические кислоты (3,50 ± 0,04%), в том числе аскорбиновая кислота (0,027 ± 0,0008%), комплекс аминокислот, также макро- и микроэлементы.

2. Изучением качественного и количественного состава травы иссопа лекарственного установлено наличие эфирного масла (0,78±0,03%), флавоноидов (0,91 ± 0,005%), фенолокислот (4,67 ± 0,01%), иридоидов (0;38 ± 0,003%), тритерпеновых кислот (0,98 ± 0,002%), дубильных веществ (9,37 ± 0,27%), органических кислот (3,80 ± 0,03%), в том числе аскорбиновой- кислоты (0,037 ± 0,0012%), комплекса аминокислот, макро- и микроэлементов.

3. Впервые в траве змееголовника молдавского методом'ВЭЖХ идентифицированы 12 веществ фенольной природы: флавоноиды (апигенин, лютеолин, цинарозид, гесперидин, кверцетин, дигидрокверцетин); фенолокислоты (ко-> фейная, хлорогеновая, феруловая, цикориевая, галловая,- коричная). Впервые исследован фракционный состав полисахаридов: водорастворимые (до 10,7 %), пектиновые вещества (до 4,1 %), гемицеллюлоза А (до 7,3 %), гемицел-люлозаБ (до 1,5 %).

4. Экспериментально разработаны условия методики спектрофотометрическо-го определения суммы* флавоноидов в траве змееголовника молдавского в пересчете на лютеолин и установлена их норма'содержания в.сырье - не менее 1,0%.

5. На основании морфолого-анатомических исследований листьев, цветков, стеблей выявлены микроскопические признаки сырья: форма клеток эпидермиса, характер эпидермальных выростов (трихом), особенности строения эфирномасличных желёзок, позволяющие проводить диагностику сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного.

6. Доказана выраженная антимикробная активность эфирных масел и спиртовых извлечений из сырья змееголовника молдавского и иссопа лекарственного.

7. Исследование острой токсичности спиртовых извлечений из травы исследуемых видов показало, что они являются относительно безвредными для организма человека.

8. Фармакологическими исследованиями в опытах на животных установлено, что спиртовые извлечения из травы змееголовника молдавского и иссопа лекарственного проявляют отхаркивающее, диуретическое и седативное действие.

9. Проведена стандартизация травы змееголовника молдавского согласно современным требованиям, предъявляемым к качеству лекарственного растительного сырья. Разработан проект ФСП «Змееголовника молдавского трава», разработана «Инструкция по сбору и сушке травы змееголовника молдавского».