Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение растений рода зопник Центрального Черноземья

V 1 л

на правах рукописи

МИЛЫХ Анна Анатольевна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ РАСТЕНИЙ РОДА ЗОПНИК ЦЕНТРАЛЬНОГО ЧЕРНОЗЕМЬЯ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических паук

Москва - 1995

Работа выполнена в Курском государственном медицинском

университете

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ; кандидат биологических наук,

доцент Л.А. Бубенчико

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор фармацевтических наук,

профессор Д.А. Муравьеве

кандидат фармацевтических наук О.В. Нестерова

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

Научно-исследовательский институт фармации - НИИФ

Защита диссертации состоится 1995

в___часов на заседании диссертационного 'совета 'A-074.05.0i

Московской Медицинской Академии им. И.М. Сеченова, по адре 119881 г. Москва, Б. Пироговская ул., 2/6.

С диссертацией можно ознакомиться п фундаменталы

библиотеке ММА им. И.М. Сеченова, по адресу: г. Моа Зубовская пл., 1.

Автореферат разослан "___"__________1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д.074.05.06, кандидат фармацевтических наук, доцент

Н.П. Садчико

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темь;. Современная научная медицина широко использует лекарственные растения, арсенал которых формировался за счет растений, применяемых в народной медицине пли традиционных медицинских системах.

До настоящего примени целый ряд таких растений используется на основании опыта народной медицины или только на основании фармакологической проверки. Действующие вещества, ответственные за терапевтический эффект, для них остаются недостаточно выяснены, а оценка качества сырья проводится по товароведческим показателям, таким как содержание золы, влаги, экстрактивных веществ. Объективные показатели содержания действующих веществ для них отсутствуют. К числу подобных объектов относится трава зонника колючего. Различные виды зопни-ков издавна используются в народной медицине в качестве противовоспалительных, желчегонных средств. В научной медицине используется только зопник колючий в качестве одного из компонентов сбора Здренко. Существовавшая раннее нормативно-техническая документация на траву зопника колючего фармакопейная статья ФС 42-1565-80 не предусматривала стандартизацию сырья по содержанию активных действующих веществ. Действующие вещества травы зопника колючего до настоящего времени недостаточно выяснены. В связи с этим возникает необходимость разработки более совершенной НТД, нормирующей качество сырья. Химический состав и биологические свойства зопника колючего изучены недостаточно. Не выяснена возможность комплексного использования растений, а также использования в медицине других видов рода зопник.

Таким образом, углубленное изучение растений рода зопник с точки зрения современных требований, выделение групп действующих веществ, их исследование с применением традиционных и новейших физико-химических методов, установление объективных показателей стандартизации

сырья, а также выяснение возможности комплексного использования сырья является актуальной проблемой,

Цель и задачи исслелования. Цель работы заключалась в детальном фармакогностическом исследовании растений рода зопник, произрастающих на территории Центрального Черноземья с выделением групп действующих веществ, выборе методов стандартизации, диагностике и установлении районов заготовки сырья.

Для достижения цели решались следующие задачи:

-предварительное химическое изучение растений рода зопник, произрастающих на территории Центрального Черноземья с целью выявления различных групп биологически активных веществ;

-выделение в индивидуальном состоянии доминирующих компонентов и изучение их структуры;

-разработка методик количественного определения основных групп биологически активных веществ;

-пересмотр и уточнение товароведческих показателей сырья;

-установление мест произрастания, картирование и определение запасов сырья в областях Центрального Черноземья;

-проведение морфолого-анатомического исследования зопника колючего с целью выявления диагностических признаков для определения подлинности сырья;

-проведение фенологических исследований для определения оптимальных сроков заготовки сырья;

-разработка фармакопейной статьи на траву зопника колючего.

Научная новизна. Проведено химическое изучение двух видов зопни-ков, произрастающих на территории Центрального Черноземья. Определено наличие флавоноидов, оксикоричных кислот, оксикумаринов, дубильных веществ, тритерпеноных соединений, иридоидов, азотистых оснований, аминокислот, углеводов, минеральных элементов,' каротинои-дов и хлорофилла, Разработаны методические приемы анализа качественного состава, выделения фенольных соединений и водорастворимых полисахаридов надземной и подземной частей. Полисахаридные комплексы растений рода зопник исследованы впервые.

Полифенолы представлены 22 компонентами, из которых 16 выделены в индивидуальном состоянии и установлена их химическая структура. Десять фенольных соединений: цинарозид, ориентин, гоМоориентин, апигенин-7-глкжуронид, витексин, изовитексин, виценин, скополетин, ум-беллиферон и эскулетин выделены из травы зопника колючего впервые. Так же впервые выделен из травы зопника клубненосного кумарин эскулетин. Из подземных частей растений впервые выделены: кофейная, фе-руловая, хлорогеновая, неохлорогеновая кислоты и кумарин умбеллифе-рон.

Полисахаридные комплексы состоят из: галактуроновой и глкжуроно-вой кислот, галактозы, глюкозы, ксилозы, рамнозы, фруктозы, арабинозы; определено их количественное содержание.

Впервые разработана методика количественного определения суммы флавоноидов травы зопника колючего.

Проведено морфолого-анатомическое исследование зопника колючего, выявлены диагностические признаки сырья; уточнены товароведческие показатели, определены два новых показателя, характеризующие качество сырья.

Практическая значимость. Выявленные, уточненные и вновь опред ленные показатели качества сырья зопника колючего, диагностичесю особенности, методика количественного определения суммы флавоноид< включены в фармакопейную статью иа траву зопника колючего. Изучен запасы травы зопника колючего в Курской, Белгородской и Воронежскс областях. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности и пользования травы зопника колючего в качестве источника биологичеа активных полифенольных и полисахаридных веществ с противовоспал тельной, диуретической и седативной активностью.

Внедрение в практику. Разработана и утверждена фармакопейн. статья "Трава зопника колючего". Методика количественного определен! суммы флавоноидов п траве зопника колючего апробирована в ко трольно-аналитической лаборатории Красногорского завода по перер ботке лекарственного растительного сырья.

В результате ресурсных исследований установлено, что ориентир вочная площадь зарослей зопника колючего в обследованном регионе с ставляет 283,9 га земли, а объем возможных заготовок составляет около тонн, Результаты изучения запасов травы зопника колючего в обслед ванном регионе и карты по распространению зарослей растения в Ку ской области внедрены в практическую работу Курского облпотребсоюз<

Положения, выдвигаемые лля зашиты. Результаты исследования би логически активных веществ зопника колючего и зопника клубненосног Методы их выделения и идентификации; установление химической стру туры 16 фенольных соединений и полисахаридов из травы зопника кол* чего и клубненосного; стандартизация травы зопника колючего по соде жанию суммы флавоноидов, результаты фенологических и ресурсных и следований зопника колючего на территории Центрального Черноземья.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических нау Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-и

ледовательских работ Курского государственного медицинского универ-итета (номер государственной регистрации 01.9.40 007548).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены : на 1сесоюзных конференциях "Проблемы стандартизации и контроля ка-ества лекарственных средств" (Москва, 1991) и "Актуальные проблемы :имиотерапии бактериальных инфекций" (Москва, 1991); республиканкой научной конференции "Реализация научных достижений в практи-:еской фармации" (Харьков, 1991); научной конференции, посвященной 0-летию фармацевтического факультета БГМИ (Уфа, 1991); научно-прак-ической конференции, посвященной 25-летию фармацевтического фа-;ультета Курского медицинского института (Курск, 1991); региональной юнференции "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической ¡едицины и фармации" (Курск, 1993); научной конференции, посвящен-юй 50-летию НИИ фармации, (Москва, 1994).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ.

Объем и структура лиссертаиии, Диссертационная работа изложена ia 180 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора лтературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, :писка литературы и приложения. В тексте содержится 34 таблицы, 24 >исунка. Список цитируемой литературы содержит 213 источников, из [их 39 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

I. Изучение качественного состава и выделение биологически активных веществ.

При предварительном изучении на различные группы природных сомнений в подземных и надземных частях зопника колючего и зопника слубненосного обнаружены флавоноиды, оксикоричные кислоты, оксику-ларины, полисахариды, азотистые основания, каротиноиды, иридоиды,

дубильные вещества, аминокислоты, минеральные элементы, тритерпено-вые соединения.

Исследован аминокислотный состав изученных растений. Аминокислоты представлены аспарагиновой кислотой, глутаминовой кислотой, треонином, серином, глицином, аланином, валином, тирозином, фенилалани-ном, лизином, лизином, аргинином, гистидином. Установлено, что аминокислоты содержатся в свободном и связанном состоянии, при этом суммарное содержание свободных аминокислот достигает 6,013 мг/%; суммарное содержание связанных аминокислот колеблется от 57,24 мг/% до 166,63 мг/%,

Минеральный состав изучали атомно-абсорбциониым методом, Результаты минерального анализа показали, что различные органы исследуемых растений содержат элементы, влияющие на обменные процессы в организме. Преобладающими являются из макроэлементов кальций, а из микроэлементов - цинк.

Хроматографическими методами в надземной и подземной частях зопника колючего и зопника клубненосного обнаружено не менее 22 веществ фенольной природы, На основании качественных реакций, флуоресценции в УФ-свете до и после обработки хромогенными реактивами 13 веществ предварительно были отнесены к флавоноидам, 6 - к оксикорич-ным кислотам и 3 - к оксикумаринам.

Выделение веществ осуществляли экстракцией 70%-ным этиловым спиртом. Для разделения суммы веществ на индивидуальные компоненты нами были использованы методы избирательной жидкостной экстракции, дробной кристаллизации, препаративной бумажной и колоночной хроматографии на полиамиде и селикагеле,

Из изучаемых объектов выделено 16 индивидуальных веществ фенольной природы (9 флавоноидов, 4 оксикоричные кислоты, 3 оксикума-

рина), основные физико-химические свойства которых приведены в таблице 1.

2. Химическое изучение фенольных соединений.

Установление структуры выделенных соединений проводили современными физико-химическими методами. Окончательный вывод о структуре делали на основании сравнения физико-химических констант веществ с образцами достоверных свидетелей.

Вещества 2.01 и 2.02 дают положительную цианидиновую реакцию по Брианту, что позволяет отнести их к флавоноидньм агликонам. Флавоно-идная природа подтверждается также ИК-спектрами, в которых отмечаются полосы поглощения в области 3385-3200 см'1 (фенольные оксигруп-пы), 1639-1665 см'1 (карбоксильная группа у-пирона), 1615-1510 см"1 (колебания ароматических колец). Положение свободных оксигрупп доказывали на основании данных прямой и дифференцированной УФ-спектроскопии, применяя ионизирующие и комплексообразующие реактивы. Продуктами щелочной деструкции вещества 2.01 являются флоро-глюцин и пара-оксибензойная кислота, вещества 2.02 - флороглюцин и протокатеховая кислота.

Ацетильные произвольные исследуемых веществ полностью совпадали по физико-химическим свойствам с соответствующими производными апигенина и лютеолина.

На основании изучения свойств исходных веществ и их производных, а также сравнения с идентичными образцами они идентифицированы как: 2.01-5,7,4'-триоксифлавон или апигенин; 2,02-5,7,3',4'-тетраоксифлавон или ллотеолин,

Вещества 2.03 и 2.06 на основании качественных реакций отнесены к флавоноидным гликозидам. Флавоноидные гликозиды, по отношению к кислотному гидролизу разделились на О- и С-гликозиды. Флавоноидная

природа выделенных О-гликозидов подтверждается также ИК-спектра В дифференциальном ИК-спектре этих соединений обнаружены три пс сы поглощения в области 1100-1010 см указывающие на пираноз!-форму Сахаров и полосы поглощения в области 880-890 см ука вающие на.р-конфигурацию гликозидной связи между агликоном и у: водом. По молекулярной массе, количественному соотношению агликок углеводного компонента, а также соотношению интенсивностей погло ния максимумов длиноволновой полосы в УФ-спектрах гликозида и а1 кона установили, что вещества 2.03 и 2.06 имеют манозидную природу.

Таблица 1.

Физико-химические свойства веществ, выделенных из изучаемых растений.

Шифр ве- Вещество Общая форму- Т^.С УФ-спектр, Д, макс.. Величина

щества ла нм

2.01 Апигении С15Н10О5 340-345 335, 295, 270 0.18 А, 0.87 Б

2.02 Лютеолин С|5Н,0О6 328-330 350. 265. 255 0.16 А. 0.57 Б

2.03 Цинарозид СлНгоОп 256-258 350. 265. 255 0.24 А

го4 Ориеитин С21Н20ОЦ 260-262 350, 257, 270 0,25 А

2.05 Гомоориенпш С21Н20О11 229-231 350, 257. 270 0.31 А

2.06 Апигешш-7-глюкуро1шд С21Н1вОп 335-336 332, 268 0,41 А

2.07 Витексин СцНмОю 260-265 335, 270 0.45 А

2.08 Изовитексин СлНяОю 256-258 335. 270 0,52 А

2.09 Вицешш С27НзоО,5 232-234 335, 270 0,61 А

2.10 Скополетип СюНеОд 204-205 340, 298, 256, 230 0.55 Г

гп Умбеллиферон СзНвОз 233-234 325. 256. 218 0,50 Г

2.12 Эскулетин с9н6о< 268-272 355, 306. 262 0,49 А. 0,08 Г

2.13 Кофейная кислота СвНаО^ 193-195 325, 290. 245 0,46 В

2.14 Феруловая кислота СкЗДбОд 165-169 319. 296,^, 234 - 0,45 В

2.15 Неохлорогеновая кислота С16Н1809 - 319, 299„л, 245 0,72 В

2.16 Хлорогеновая кислота С1бН|вОэ 203-205 328. 299т, 240 0.76 В

Система для хроматографироваиия: А-30% уксусная кислота, Б-бепзол-этилацег-уксусная кислота

(50:50:1), В-2% уксусная кислота. Г-хлороформ-формамид

В продуктах кислотного гидролиза вещества 2.03 обнаружили Б-глюкозу и лютеолин. В результате вещество 2.03 охарактеризовали как лютеолин-7-0-р-0-глюкопиранозид или цинарозид.

Вещество 2.06 было отнесено нами к 7-0-глюкуронидам. Глюкурониды характеризуются ИК-спектрами с полосой поглощения в области 17201730 см"' (СООН-группа). Глюкуроновая кислота, выделена из продуктов кислотного ферментативного гидролиза и идентифицирована по основным физико-химическим свойствам. В результате вещество 2.06 охарактеризовали как апигенин-7-р-Б-гл10куронид.

Среди С-гликозидов встречаются моногликозиды лютеолина(вещестпа 2.04, 2.05), апигенина (вещества 2.07, 2.08) и дигликозид апигенина (вещество 2.09). Структуру выделенных флавоновых С-глнкозидов доказывали по продуктам кислотной окислительной деструкции, изомеризации, данных УФ- и ИК-спектроскопии, В результате вещество 2.04 охарактеризовано как 8-С-Р-В-глюкопиранозид лютеолина или ориентин, 2.05 • б-С-р-О-глюкопиранозид лютеолина или гомоориентин, 2.07 - 8-С-р-О-глюкопиранозид апигенина или витексин, 2.08 - 6-С-р-Б-глюкопиранозид апигенина или изовитексин, 2.09 - 8,6,-С-р-О-диглюкопиранозид апигенина или виценин.

Вещества 2.13, 2,14, 2,15 и 2.16 по флуоресценции пятен на хромато-граммах в Уф-свете и качественным цветным реакциям с хлоридом железа, диазотированной сульфаниловой кислотой и бромкрезоловым зеленью отнесены к фенолкарбоновым кислотам, В УФ-спектрах исследуемых ве ществ максимумы поглощения находится при 310-325 нм и 246-250 нм, чтс характерно лдя производных коричной кислоты. Батохромные сдвиг)-максимумов поглощения при добавлении ацетата натрия и борной кисло ты к соединениям (2.13, 2.15, 2.16), а также образование протокатехово* кислоты в результате их щелочного гидролиза указывает на присутстви)

•4-диоксигруппировки. Продукты щелочного гидролиза идентифицирова-Ы с кофейной, О-хинной (2.15, 2.16), ванилиновой (2.14) и 3,4-иоксибензойной (2.13) кислотами. С целью определения места присоеди-ения остатка кофейной кислоты к Э-хинной кислоте проводили нагрева-ие исследуемых соединений 2.13-2.16 с ледяной уксусной кислотой. При том у вещества 2.11 образование лактона не происходило, что указывает :а замещение оксигруппы в С-5 положении Э-хинной кислоты остатком юфейной кислоты. Сравнение физико-химических свойств изучаемых еществ с достоверными образцами кофейной, феруловой, неохлорогено-ой и хлорогеновой кислот показало их идентичность.

Таким образом вещество 2.13 охарактеризовано как 3,4-локсикоричная (кофейная), 2.14 - как 4-окси-З-метоксикоричная феруловая), 2.15 - как З-О-кофеил-О-хинная (неохлорогеновая), 2.16 - как ¡-О-кофеил-Б-хинная (хлорогеновая) кислоты.

Вещества 2,10., 2.11, и 2.12 на основании качественных реакций, наличия флуоресценции в УФ-свете при обработке хроматограммы 10%-ным :пиртовым раствором щелочи, диазотироввнной сульфаниловой кислотой )тнесены к производным кумарина, При растворении их в щелочи и по-:ледующем подкислении растворов выпадают осадки исходных соединении, что характеризует их как лактоны кумариновой природы. Кумарино-зая природа исследуемых соединений подтверждена также деструкцией -IX йодистоводородной кислотой в среде жидкого фенола. Присутствие в УФ-спектре интенсивного максимума поглощения в области 320-240 нм, а гаюке батохромный сдвиг максимума длинноволновой полосы в УФ-:пектрах при добавлении ацетата натрия на 40 нм выявляют свободную эксигруппу у С-7.

В ИК-спектрах исходных соединений обнаруживаются С «О группа а-цирона (1720-1730 см'1), колебания сопряженных двойных связей (15801730 см-1), свободная оксигруппа (3350-3200 см-1), а в веществе 2,10 допол-

нительно метоксигруппа (2980 см'1). Сравнение физико-химических свойств, величин в различных системах растворителей, а также идентичность УФ- и ИК-спектров с достоверными образцами позволило охарактеризовать вещество 2.1 с! как 6-метокси-7-оксикумарин или скополе-тин, 2.11 - как 7-оксикумарин или умбеллиферон, 2.12 - как 6,7-диоксикумарин или эскулетин.

3. Получение и исследование водорастворимых полисахаридов.

Водорастворимые полисахаридные комплексы (ВРПС) извлекали горячей водой из высушенного шрота, после экстракции полифенольных соединений. ВРПС осаждали 96% этиловым спиртом, отфильтровывали, промывали органическим растворителем, высушивали.

Для качественного анализа полисахаридного комплекса последний подвергали гидролизу 10% серной кислотой. Хроматографически в гидро' лизатах обнаружены следующие вещества моносахаридного характера глкжуроновую кислоту, галактуроновую кислоту, арабинозу, галактозу ксилозу, рамнозу, глюкозу, фруктозу.

Количественное определение суммы глкжуроноаой и галактуроново! кислот проводили спектрофотометрически карбазольным методом.' Сущ ность метода заключается в деструкции уронового ангидрида под воздей ствием концентрированной серной кислоты и последующей конденсацш образующегося фурфурола с карбазолом, в результате чего получаете; окрашенное соединение. Карбазольным методом в ВРПС из подземных 1 наземных частей зопника колючего и зопника клубненосного обнаружен' от 15,45% до 32,69% кислых Сахаров.

Содержание нейтральных моносахаридов в ВРПС определяли денси тометрнчески на денситометре ЕШ после проведения гидролиза и хроме тографирования в тонких слоях сорбента (система растворителей бутано/ уксусная кислота-вода 3:1:1). Расчет количественного содержания моносг

харидов проводили по стандартным образцам. Результаты анализа представлены в таблице 2.

Как известно, уроновые кислоты обладают противовоспалительной активностью. Наличие в ВРПС значительного количества уроновых кислот (около 30%) поставило перед нами задачу определения их противовоспалительного действия. Проведенные фармакологические исследования показали противовоспалительную активность ВРПС из травы зопника колючего

4. Исследования по стандартизации травы зопника колючего.

Действующими веществами травы зопника колючего являются фла-воноиды. Это послужило предпосылкой к выбору методики определения суммы флавоноидов в данном сырье.

Таблица 2.

Нейтральные моносахариды водорастворимых полисахаридов зопника колючего и зопника клубненосного.

Виды растений, их части Моносахаридпый состав, % к ВРПС

галактоза фруктоза глзокоза арабипозп ксилоза рамноза

Тропа зопника колючего 9,3 6,2 11,9 9,1 3,1 8,8

Корень зопника колючего 6,3 18,1 7,2 5,2 5,9 4,9

Трава зопника клубненосного 15,6 5,0 7,5 8,1 4,4 7,9

Корень зопника клубненосного 9,0 6,9 6,3 11,3 9,8 7,5

В основу количественного определения суммы флавоноидов положен спектрофотометрический метод анализа непосредственно в извлечениях из сырья. Для этого использована реакция комплексообразования флавоноидов с хлоридом алюминия в солянокислой среде. Образующийся окрашенный комплекс имеет максимум поглощения при 395 нм. Эта область достаточно удалена от спектров поглощения сопутствующих фе-нольных и других органических веществ, которые не могут влиять на количественное определение флавоноидов. При изучении условий экстракции определено, что максимально флавоноиды извлекаются из сырья кипящим 70% этиловым спиртом через 30 минут при соотношении сырье-растворитель 1:100.

Учитывая то, что преобладающим компонентом в сумме флавоноидов зопника колючего является цинарозид, определение их суммы проводили в пересчете на цинарозид. Расчет содержания флавоноидов в сырье вели с применением удельного показателя поглощения цинарозида с алюминием хлоридом, который равен 345.

По предложенной методике проанализированы 10 образцов травы зопника колючего. Анализы показали, что содержание суммы флавоноидов колеблется от 0,95 до 1,71% (табл. 3).

На основании этих данных установлены нормы содержания суммы флавоноидов - не менее 0,9%, введенного в проект ФС.

Таблица 3.

Содержание суммы флавоноидов в траве зопника колючего.

Номер Место сбора сырья Дата сбора Содержание суммы

образца сырья флавоноидов в траве, %

1. Курская область, ЦЧЗ (питомник), 1988 1,07

2. Краснодарский край, совхоз "Гиагинский" 1988 1,12

3. Курская область, ЦЧЗ (дальние участки), 1988 0,98

4. Краснодарский край, Горячий ключ, 1985 1,12

5. Орлопская область, Мцен-ский район, 1988 0,99

6. Орловская область, Мало-архангельсхий район, 1988 1,04

7. Липецкая область, Чаплы-гинский район, 1988 0,99

8. Белгородская область, Ва-луйский район, 1991 1,70

9. Белгородская область, Ко-рочанский район, 1988 1,22

10. Белгородская область, Старооскольский район. 1988 1,16

При проведении товароведческого анализа травы зопника колючего установлено, что содержание влажности находится в пределах 6,6-13%; содержание золы 5,8-7,8%; золы нерастворимой в 10% соляной кислоте - 0,3-

1%. Помимо этого определено, что хранение сырья в сухом помещении при температуре 20'С в течение пяти лет практически не влияет на содержание суммы флавоноидов, что дает основание рекомендовать установить срок годности сырья 5 лет.

5. Ресурсно-биологические исследования в условиях Центрального

Черноземья.

Применение в медицине травы зопника колючего делает необходимым изучение ее морфолого-анатомических признаков. Исследования проводили общепринятыми методиками. Диагностическое значение для надземных органов зопника колючего имеют следующие признаки:

-простые мелкие одноклеточные волоски стебля, прицветника, чашечки с расширенным основанием и лежащие под углом к поверхности;

-простые, крупные 1-3-клеточные трихомы стебля, листа, прицветника, чашечки, венчика с заостренной верхушкой и вздутиями в местах соединения клеток;

-простые ветвистые трихомы всех надземных органов; -железистые трихомы с 1-клеточной ножкой и 2-клеточной головкой; -уголковая колленхима, расположенная под эпидермисом стебля; •сосочковидные выросты эпидермиса нижней губы венчика.

Для изучения сырьевой базы зопника колючего были проведены исследования в областях Центрального Черноземья России. Определение запасов травы проводили методом конкретных зарослей, согласно которому ресурсная характеристика указывалась только для выявленных зарослей без дальнейшей экстраполяции на весь регион. Исследования проходили в летний период в фазу массового цветения растения. Установлено, что

объем возможных ежегодных заготовок в изученном регионе составляет 3,5 тонн.

Таблица 4.

Запасы травы зопника колючего в областях Центрального Черноземья.

Площадь заросли, га Выявленный биологический запас сырья (сухой вес), т Эксплуатационный запас сырья, т Объем возможных ежегодных заготовок, т

Курская область

106,3 2,388-3,611 2,388 1,194

Воронежская область

131,6 3,412-5,195 1,706 1,706

Белгородская область

46,0 1,209-1,796 1,209 0,605

Всего по региону

283,9 7,009-10,602 7,009 3,505

Ддя установления оптимального времени заготовки травы зопника колючего проведены фенологические наблюдения за развитием растения на базе Центрально-Черноземного биосферного государственного заповедника им. В. В. Алехина, (табл. 5).

Таблица 5.

Прохождение фенофаз зопником колючим в условиях луговой степи Центрально-Черноземного государственного заповедника.

Год наблю- Фенофазы

дения Начало ве- Бутониза- Цветение Плодоно- Отмирание

гетации ция шение растений

1991 25.04 10.06 18.06 17.07 14.09

1992 2.05 17.06 25.06 26.07 24.09

1993 10.05 19.06 3.07 8.08 25.09

Полученные данные о развитии зопника колючего дают возможность более совершенного планирования заготовки сырья, которую предпочтительнее проводить с конца третьей декады июня до второй декады июля, а в случае более поздней вегетации - с начала первой декады июля до конца третьей декады,

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ.

1. Проведено комплексное изучение надземной и подземной частей зопника колючего и зопника клубненосного с выделением и идентификацией основных компонентов.

2, Изучены фенольные соединения надземной и подземной частей растений рода зопник.

В изученных объектах обнаружено 22 фенольных соединений, из которых 16 выделены в индивидуальном состоянии.

3. Выделенные соединеьия исследованы с использованием химических и физико-химических методов. Установлено, что они представлены флавоноидными агликонами: апигенином, лютеолином; гликозидами-

ориентином, гомоориентином, апигенин-7-глкжуронидом, цинарозидом, витексином, изовитексином, виценином; оксикумаринами: скополетином, умбеллифероном, эскулетином; оксикоричными кислотами: кофейной, хлорогеновой, неохлорогеновой, феруловой.

Десять фенольных соединений: цинарозид, ориентин, гомоориентин, апигенин-7-глюкуронид, витексин, изовитексин, виценин, скополетин, ум-беллиферон, эскулетин выделены из травы зопника колючего впервые. Из травы зопника клубненосного впервые выделен кумарин эскулетин.

4. Выделены и изучены водорастворимые полисахаридные комплексы надземной и подземной частей зопника колючего и зопника клубненосного. Установлено, что основными компонентами его являются галактуроно-вая и глкжуроновые кислоты, галактоза, глюкоза, арабиноза, ксилоза, рамноза, фруктоза. Определено их количественное содержание.

5. Впервые разработана методика спектрофотометрического определения суммы флапоноидов в траве зопника колючего в пересчете на цинарозид' содержание суммы флавоноидов в траве должно быть не менее 0,9%.

6. Проведено анатомическое исследование надземной и подземной, частей зопника колючего. На основании полученных данных выявлены основные диагностические признаки растения,

7. Разработана и утверждена фармакопейная статья "Трава зопника колючего", в которой уточнены морфологические и анатомические признаки, товароведческие показатели, впервые включен метод стандартизации по содержанию суммы флавоноидов, введены новые показатели - содержание золы общей и золы не растворимой в 10% соляной кислоте.

8. Изучены запасы травы зопника колючего в Курской, Белгородской и Воронежской областях. Площадь выявленных зарослей составляет свыше 200 га, биологический запас около 7 тонн. Оптимальными сроками за-

готовки травы зопника колючего является период с конца третьей декады июня до конца второй декады июля, а в случае более поздней вегетации -с начала первой декады июля до конца третьей декады.

9. Предварительными фармакологическими исследованиями показано, что фенольные соединения зопника колючего обладают диуретическим, седативньм, противовоспалительным действием; полисахаридный комплекс - противовоспалительной активностью.

По теме диссертации опубликованы следующие работы.

1. Бубенчиков A.A., Милых A.A., Беликов В.В. Разработка нормативно-технической документации на лекарственное растительное сырье зопника колючего // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств. - М., 1991. ■ Т. 1. - С. 87-88.

2. Лекарственная флора района Курской магнитной аномалии и влияние антропогенных факторов на ее состояние / A.A. Бубенчиков, B.C. Жмыхова, В.Н. Бубенчикова, A.A. Милых // Поиск биологически активных веществ и проблемы лекарственного обеспечения. - Уфа, 1991. - С. 8-11.

3. Милых A.A., Беликов В.В. К фитохимическому изучению зопника колючего // Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики. -Курск, 1991. - Ч. 1. - С. 198-199.

4. Поиск новых антимикробных средств растительного происхождения во флоре Центрального Черноземья / A.A. Бубенчиков, М.П. Ховрина, В.Н. Бубенчикова, A.A. Милых // Реализация научных достижений в практической фармации. - Харьков, 1991. - С. 182-183.

5. Поиск растительных антибиотиков для лечения бактериальных инфекций / A.A. Бубенчиков, М.П. Ховрина, В.Н. Бубенчикова, A.A. Милых

// Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций. - М., 1991. - Ч. 1. - С. 33-34.

6. Фармакопейная статья 42-1565-92, Трава зопника колючего.

7. Милых А.А., Бубенчиков А.А. Азотистые основания зопника колючего и зопника клубненосного // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины и фармации, - Курск, 1993. - С. 157158.

8. Милых А.А., Кпач А.С., Бубенчиков А.А. Динамика накопления флавоноидов в траве зопника колючего // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины и фармации. - Курск, 1993. - С. 158159.

9. Милых А.А., Гримова Т.А., Бубенчиков А.А. Противовоспалительная активность действующих начал травы зопника колючего // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины и фармации. -Курск, 1993. - С. 159-160.

10. Разработка нормативно-технической документации на лекарственное растительное сырье / А.А. Бубенчиков, В.Н. Бубенчикова, О.Н. Емельянова, А.А. Милых // Поиск, создание и изучение новых лекарственных средств растительного и синтетического происхождения. -Бийск, 1993. - С. 14-15.

11. Химические и товароведческие исследования некоторых растительных объектов, необходимые для разработки показателей качества лекарственного сырья / А,А. Бубенчиков, В.Н. Бубенчикова, А.А. Милых, В.В. Беликов // Решение актуальных задач фармации на современном этапе. • М., 1994. - С. 242.

12. Extraction of the biological active substances from pharmaceutical plants and its optimisation / A.A. Bubenchikov, Yu. A. Sukhomlinov, A.I.

Konoplya, A.A. Milykh // Isecos'92 - intenational organic substances solv< extraction conference. - Voronezh, 1992. • P. 129-130.