Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование растений - источников биологически активных кислородсодержащих гетероциклических соединений и оксикоричных кислот

I 3 0 9 3 11

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР В/О "СОЮЗФАРМАШШ" Всесоюзный научно-исследовательский институт фармации

На правах рукописи

ГЕЛЛА ЭДУАРД ВИКТОРОВИЧ

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ

ИССЛЕДОВАНИЕ РАСТЕНИЙ—ИСТОЧНИКОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КИСЛОРОДСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ

СОЕДИНЕНИЙ И ОКСИКОРИЧНЫХ КИСЛОТ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

ДИССЕРТАЦИЯ

эрме научного доклада на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Москва -1991 г.

Работа выполнена на кафедре фармакогнозии Курского ордена Трудового Красного Знамени государственного медицинского института.

Официальные оппоненты:

•> доктор фармацевтических наук, профессор Д.А.Муравьева

- доктор фармацевтических наук, профессор В.Н.Ковалев

- доктор фармацевтических наук, гл.научный сотрудник

¿.14. Попов

Ведущая организация - Львовский медицинский институт.

Заяита диссертации состоится " У " г. _" часов аа заседании специализированного Совета Д074.28.

01 при Всесоюзном научно-исследовательском институте фармации (г.Москва, ул.Красикова, 34).

в

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИ фармации.

Дата рассылки " X $~п и^ЛРь/Лг 1991 г.

Ученый секретарь специализированного Совета Д074.28.01 кандидат фармацевтических наук, старший

научный сотрудник 1.М.Б0БР0ВА

! ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

кус-ртгц1,а (

Актуальность теки. Перед фармацевтической наукой и медицинской промышленностью поставлена задача полного обеспечения населения лекарственными средствами. Несмотря на большое количество синтетических лекарственных веществ, препараты растительного происхождения и до настоящего времени не только но утратили своего значения, но с каждым годом расширяются перспективы их использования.

Значительный объем в общем производстве лекарственных средств занимают фитохимичэские препараты. При лечеиии сердечнососудистых, кожных заболеваний, болезней печени и почех доля лекарственных препаратов растительного происхождения составляют 8090$. При этом в создании эффективных лечебных средств используются как индивидуальные соединения, так и суммарные препараты, включающие одну из групп веществ. Среди важнейших классов природных соединений значительное место занимают кислородсодержащие гетероциклические соединения - карденолиды, флавоноиды, кумарины, ири-доиды, а также оксикоричные кислоты, которые являются источником получения лекарственных препаратов направленного действия. Систематический поиск растений, содержащих упомянутые классы веществ, изучение их структуры и фармакологического действия являются актуальной проблемой. Значительное экологическое изменение^и антропогенное воздействие человека на природу приводит к резкому сокращению природных запасов многих ценных растений, в связи с чем, остро стоит вопрос о расширении сырьевой базы используемых в медицинской практике дикорастущих и культивируемых растений за счет дополнительных растительных источников, утилизации отходов и безотходного производства.

В ходе поисковых исследований выявлено, что наиболее перспективными для изучения и практического использования являются растения из семейств лютиковых, яснотковых, розоцветных и зверобойных, особенно те виды из них, которые широко применяются в народной медицине.

Цель и задачи исследования. 3 настоящем докладе обобщены исследования, проведенные автором и под его руководством с целью поиска к химического изучения растительных биологически активных кису-лородсодержащих гетероциклических соединений - стероидных лакто-

- ц -

нов, производных бензо-оС-пирона, 2~фенил-бензо- ^-пирона, иридо-идов и оксикоричных кислот и на их основе предложения растений как перспективных источников получения препаратов для лечения болезней сердечно-сосудистой системы, печени, почек, кожных заболеваний.

Для достижения этой цели решались следующие задачи:

- анализ средств народной медицины, применяемой растительные источники;

- выделение биологически активных веществ и доказательство их структуры, проведение фармакологических исследований;

- разработка способов выделения биологически активных веществ и устройств для их осуществления и оптимизации фитохимичес-ких процессов по выделении, разделению и очистке природных соединений;

- утилизация отходов лекарственного растительного сырья и расширение сырьевой базы для получения лекарственных препаратов, а также.охрана ценных лекарственных растений.

Научная новизна. Впервые выявлены перспективные растения -пус/с мс^емяш Л о / УаАу /■■<■/,р гег^а^с' ^//у<гГ ¿7у -

/¿с* /г/¿(Гк/^/Уа-// ¿/фу^-с г-/с а /а /¿у ^ „ др.,

с

изучен их химический состав и разработаны способы получения препаратов из этих растений. Из ряда растений семейств лютиковых, яс-нотковых, розоцветных и зверобойных впервые выделено и химически охарактеризовано 50 соединений, относящихся к флавоноидам (29 веществ), оксикоричным кислотам (7 веществ), кумаринам (2 вещества), карденолидам (6 веществ)» иридоидам (6 веществ). Из них 6 соединений новые, неописанные в литературе. Разработаны способы выделения флавоноидов, иридоидов и оксикоричных кислот, а также способы получения суммарных препаратов, обладавших седативным, желчегонным, диуретическим и противомикробным действием.

Установлено, что адонис волжский может быть дополнительным источником препаратов адониса весеннего, а трава лапчатки прямостоячей может быть использована наряду с корнями.

Показана возможность утилизации промышленных отходов отработанного сырья мята перечной, зверобоя обыкновенного для получения ряда биологически активных веществ, с целью расширения сырьевой базы и сохранения ценных видов растений и решению вопроса безотходного производства.

Выявлены характерные диагностические признаки при анатомичес-

ком исследовании надземной части белокудренника черного, адониса волжского и лапчатки прямостоячей.

Разработаны устройства для оптимизации процессов выделения, разделения и очистки природных соединений и их комплексов.

Научная новизна исследований подтверждена 13 авторскими свидетельствами.

Практическая значимость. Показана перспектива использования ряда растений, для создания оригинальных .лекарственных препаратов. Сумма флавоноидов мяты перечной и мяты водяной относится к группе истинных желчегонных средств /17/.

Сумма флавоноидов, иридоидоз и оксикоричных кислот зопника клубненосного проявляет низкую токсичность, центральный седатив-ный эффект на сердечно-сосудистую систему и диуретическое действие - эти особенности фармакодинаыики выгодно отличают данную сумму от используемого в медицинской практике экстракта из корней валерианы (отчет, 1978).

Сумма флавоноидов травы шлемника обыкновенного оказывает выраженное противоэкземное действие. Она обладает противовоспалительной и антимикробной активностью, не оказывает раздражающего и сенсибилизирующего действия, относится к числу нетоксичных. Учитывая равноценность 1$-ной мази этих флавоноидов и преднизолоно-вой мази на экспериментальный дерматит, а также то, что преднизо-лоновая мазь обладает рядом побочных действий, эта флавоноидная мазь может рекомендоваться как заменитель преднизолоновой .'мази (фармакологическая характеристика, 1975).

Оксикоричные кислоты белокудренника черного по действию на сердечно-сосудистую систему аналогичны эффектам пустырника и валерианы; проявляют умеренное седативное действие и диуретический эффект, превышающий мочегонную активность настойки пустырника на 47,1% и валерианы на 15$. Сумма флавоноидов белокудренника черного по острой токсичности и седативному действию аналогична настойке валерианы (отчет, 1989).

По карденолидному составу и биологической активности адонис волжский близок к адонису весеннему. Это позволяет расширить базу для производства препаратов адониса весеннего (справка,1977).

Информационное письмо "Отличительные диагностические признаки видов рода пустырник и близкого к нему рода белокудренник" внедрено ГАПУ МЗ РСФСР (акт от 22.03,89); материалы к проекту В$С на траву белокудренника'черного приняты фармакологическим комито-

- б -

том СССР для рассмотрения в качестве коронарорасширяящего действия (письмо от 15.03.90).

Установлено, что трава лапчатки прямостоячей может быть использована наряду с корнями, это позволит расширить сирьевую базу и обеспечить охрану природных популяций данного вида. Разра-ботанны к прошли апробацию проект ВЗС на траву лапчатки прямостоячей и инструкция по сбору и сушке сырья (протокол комиссии по стандартизации НПО "ВИЛР" № I от 15.02.90).

Изобретения по способам получения биологически активных веществ и устройства для проведения Цитохимического анализа используются в производственной, научной и учебной работе: Р ^16071 -"Лабораторное устройство для экстракции" - на опытном заводе ВНйИХТЛС (акт от 03.01.90), кафедре фармакогнозии Ярославского медицинского института (акт от 06.12.90); № 515948 - "Весовой порционный дозатор сыпучих материалов" - на опытном зазодо ЗИИИХТЛС (акт от 10.01.90); № 544428 - "Способ получения суммы флавоноз" -на кафедрах фармакогнозии Харьковского фармацевтического института (акт от 12.09.85), фармакогнозии и фармакология Киевского института усовершенствования врачей (акт от 26.12.90); г 569942 -"Устройство для жидкостной хроматографии" - на кафодрэ физколло-идной химии Харьковского фармацевтического института (акт от 20. 12.90), опытном заводе ВКШХТЛС (акт от 03.01.90), кафедре фармакогнозии Ярославского медицинского института (акт от 06.12.90); № 583306 - "Устройство для дробной возгонки" - на кафедре фармакогнозии Ярославского медицинского института (акт от 06.12.90), кафедре фармацевтической химии Рязанского медицинского института (акт от 04.04.78); № 603388 - "Способ получения флавоноидов, обладающих желчегонным действием" - на квфедре фармакологии Харьковского фармацевтического института (акт от 20.03.80), кафедре фармацевтической химии и фармакогнозии Киевского института усовершенствования врачей (акт от 19.12.90); 631176 - "Устройство для экстракции жидкости парообразным растворителем" - на опытном заводе ЗИИИХТЛС (акт от 14.01.90), каферде фармакогнозии Киевского' института усовершенствования врачей (акт от 18.12.90), кафедре фармакогнозии Ярославского медицинского института (акт от 06.12.90); Г 701640 - "Способ получения кверцетина" - на опытном заводе ВНЙИХТЛС (акт от 21.01.90); К 799763 - "Способ получения флавоноидов, обладавших желчегонным действием" - на кафедрах фармацевтической химки и фармакогнозии Киевского института усо-

вершенствования врачей (акт от 26.12.90); № 824040 - "Устройство для прекращения хроматографического процесса" ■» на кафедре фармакогнозии Ярославского медицинского института (акт от 06.12.90); № 904710 - "Способ получения суммы флавоноидов, иридоидов и окси-коричннх кислот" - на кафедрах фармакогнозии Харьковского фармацевтического института (акт от 19.05.89) и Ярославского медицинского института (акт от 06.12.90); № 1165405 - "Способ получения оксикоричных кислот" - на кафедре фармакогнозии Рязанского медицинского института (акт от 20.02.91); № 1175483 - "Способ получения флавонов" - на кафедре фармакогнозии Рязанского медицинского института (акт от 20.02.91). Предварительный экономический эффект от использования в производственных условиях способов получения биологически активных веществ и устройств для проведения фитохимических работ составит более 55 тысяч рублей в год.

На защиту выносится:

- результаты химического исследования ряда растений семейств яснотковых, лютиковых, розоцветных и зверобойных;

- научно-методическая концепция оптимизации фитохимических процессов выделения, разделения и очистки природных соединений на основе разработанных устройств;

- возможность использования промышленных отходов лекарственного растительного сырья для получения биологически активных комплексов;

- возможность использования горицвета волжского, как дополнительного источника для получения препаратов горицвета весеннего;

~ возможность использования надземной части шлемника обыкновенного, мяты водяной, панцерии шерстистой, зопника клубненосного, лапчатки прямостоячей и белокудренника черного, как источников биологически активных веществ.

Апробация. Результаты работы доложены и обсуждены на: Г-м Всесоюзном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 1968); научной сессии Курского медицинского института по вопросам клинической и экспериментальной кардиологии (1970); 2-м Всесоюзном симпозиуме по фенольным соединениям (Алма-Ата, 1970); научных конференциях Курского медицинского института (1970, 1973, 1985, 1987, 1990); юбилейной научно-практической конференции фармацевтов Курской области, посвященной 100-летию со дня рождения В.И.Ленина (Курск, 1970);' 2-м Всесоюзном съезде фармацевтов (Рига, 1974); Межвузовской научной конференции (Томск, 1975); 3-м Всесоюзном

съезде фармацевтов (Кишинев, 1980); Республиканской научной конференции (Харьков, 1981); Всесовзной научной конференции "Исследования по изысканиям лекарственных средств природного происхождения" (Ленинград, 1981); '»-к Всероссийском съезде фармацевтов (Воронеж, I98I),V 4-м съезде фармацевтов Казахстана (Чимкент, 1981); межобластной научной конференции "Успехи в изучении природных и синтетических лекарственных средств" (Томск, 1982); Центральной проблемной комиссии "Фармация" (Москва, 1991).

Публикации. Основное содержание отражено в 14 научных работах, из них 13 авторских свидетельств. Работа выполнена по плану Всесовзной проблемы "Фармация" научного совета К 10 "Фармакология и фармация" АМН СССР и в соответствии с планом НИР Курского государственного медицинского института МЗ СССР по проблеме "Фармация" (номер Государственной регистрации 72062288).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

I. Ресурсоведческое изучение лекарственных растений, произрастающих на территории некоторых областей России, Украины и анализ средств народной медицины»

Интерес к региону - Белгородской, Брянской, Воронежской, Курской и Липецкой областей вызван тем, что здесь очень заметно антропогенное воздействие человека на природу, что в значительной степени сказывается на запасах дикорастущего лекарственного растительного сырья.

С 1968 года совместно с Бубенчиковым A.A. и Токаревой В.Д. проводилось ресурсное обследование запасов лекарственных растений, в сырье которых отечественное здравоохранение ощущает острый недостаток. К ним относятся: адонис весенний, бессмертник песчаный, дупица обыкновенная, зверобой продырявленный, ландыш майский, мать-и-мачеха, перец водяной, тимьян ползучий, хвощ полевой, шиповник и др. /54, 58, 68/.

На основании проведенных исследований были расчитаны биологически в и эксплуатационные запасы этих растений и составлены карты распространения зарослей, имеющих промышленное значение. Полученные материалы переданы для практического использования в аптечные управления Курской, Белгородской и Воронежской областей, а также в В/О "Союзлекраспром".

По результатам изучения запасов лекарственного растительного сырья в Курской и Белгородской областях было издано информационное письмо с расчетом рекомендуемых ежегодных заготовок, возможных к проведение в областях, с учетом природоохранных мероприятий и правил сбора, позволявших сохранить природные -популяции ценных лекарственных растений на первоначальном уровне, а в некоторых случаях способствующих увеличению площади запаса изученных лекарственных растений.

На основании проведенных исследований бнло выявлено, что выполнение необоснованно высоких плановых заданий по заготовке лекарственного растительного сырья приводит к истощении запасов многих видов лекарственных растений, особенно таких как адонис весенний, тимьян ползучий и пр.

Кроме того, на сохранение запасов лекарственного растительного сырья, в обследуемых областях, оказывают влияние такие факторы, как распашка целинных и залежных земель, строительство гидротехнических сооружений, изъятие значительных площадей под открытые разработки железорудных месторождений КМА (особенно откосится к Курской и Белгородской областям). Исходя из изложенного, нами было предложено организовать на территории Курской и Белгородской областях ряд заказников от 5 до 20 га (бессмертник песчаный, чабрец ползучий и др.), а также рекомендовано аптечным управлениям законсервировать на 10 лет заросли с адонисом весенним, валерианой лекарственной, бессмертником песчаным с целью восстановления зарослей и последующей их рациональной эксплуатацией. По нашему мнению, общий объем заготовок, в обследованных областях, возможно не только оставить на стабильном уровне, но и ежегодно увеличивать, однако в этом случае необходимо учитывать строгую, предложенную нами, специализацию заготовок каждого района в изученных областях, а также проводить своевременную переориентацию заготовительных организаций на сбор лекарственного растительного сырья в плане изменения традиционно сложившихся списков лекарственных растений и практически не меняющихся в течении 10-15 последующих лет.

Предложенные мероприятия способствовали сохранению природных популяций изученных растений, а в некоторых случаях отмечено расширение зарослей о промышленными запасами у таких растений, как бессмертник песчаный, зверобой продырявленный, мать-и-мачеха и др.

Значительное внимание во время проведения ресурсных обследований уделялось работе с сотрудниками организаций, проводящих за-

готовку лекарственного растительного сырья, а также с местным населением. Особенно это касалось районов, где были организованы заказники. Это сыграло немаловажную роль в сохранении природных зарослей лекарственных растений, а также повышении общей экологической культуры населения.

В течение последних 20 лет актуальным остается вопрос поиска новых лекарственных растений, обладающих кардиотоническим эффектом. Исходя из общего положения в стране и на основании полученных нами данных, запасы лекарственных растений используемых для лечения сердечно-сосудистых заболеваний резко сократились и тенденции к лучшему не намечается. Это особенно относится к адонису весеннему. Поэтому поиск растений, находящихся в филогенетическом родстве с адонисом весенним является весьма актуальным.На-не внимание привлек адонис волжский, широко используемый в народе (Воронежская область) для лечения многих сердечных заболеваний. Одновременно с этим, нами, на основании изучения средств народной медицины и проведения опроса местного населения, был выявлен ряд растений, используемых для лечения кожных заболеваний - шлемник обыкновенный (Курская область) /54/, заболевании печени - мята водяная и мята курчавая (Воронежская и Белгородская области) /54/» белокудренник черный и зопнкк клубненосный - при сердечно-сосудистых заболеваниях (Курская и Белгородская области) и др.

Запасы травы мяты водяной, шлемника обыкновенного и зопника клубненосного определялись в Белгородской и Воронежской областях» при этом их эксплуатационный запас составил 18 т., 10 т. и И т. соответственно. Для белокудренника черного эксплуатационные запасы травы составляют только по Курской области - до 1,5 т. /63/. При определении запасов горицвета волжского и горицвета весеннего в областях Украины (Днепропетровской, Запорожской, Донецкой, Кировоградской, Одесской и Николаевской) установлено, что без удэ~ рба последующим плановым заготовкам можно собрать до 4 т. травы горицвета весеннего, тогда как горицвета волжского - до 14 т. Проведенное предварительное обследование сырьевых ресурсов этих растений показало, что заготовку сырья, при соблюдении правил сбора, можно производить в указанных пределах, т.е. сырьевая база их вполне достаточна для использования.

2. Поиск и выделение биологически активных соединений растительного происхождения.

Основными предпосылками отбора растительного материала для исследования служили данные, полученные нами при проведении ресурс оввдческих работ, изучения биологически активных компонентов /23, 26/, сведений народной медицины и филогенетического родства видов; при этом за основу были взяты растения семейств яснотко-вых, лютиковых, розоцветных и зверобойных. Отобранный материал исследовался на наличие флавоноидов, оксикоричных кислот, кумари-нов, карденолидов и иридоидов. Изучалась мята перечная /14, 15, 16, 17, 69/ для выяснения ее холеретической активности, однако запасы этого ценного культивируемого растения ограничены, а ее сорта постепенно вытесняются гибридами рода, как наиболее васокомен» тольными. В результате анализа близких видов этого рода детальному изучению мы подвергли мяту водяную и мяту курчавую /56, 62/, которые широко применяются как желчегонные средства.

Как успокаивающие и при сердечных заболеваниях в народной медицине применяются растения родов Зопник и Белокудренник. При хе-мотаксономическом изучении /47/ 10 видов и 45 образцов зопника, собранных в различных зонах произрастания СССР (Европейская часть, Средняя Азия, Западная Сибирь) совместно о Вавиловой Н.К. изучен зопник клубненосный /31, 36, 38, 39, 40, 44/. Кроме того, изучались зопник луговой и зопник колючий. Совместно с Жуковым И.М. изучен белокудренник черный /66, 71, 72/. Совместно с Вавиловым В.И. исследовалась надземная часть паннерии серебристобелой, пан-церии сероватой и панцерии шерстистой /19, 20, 21, 23/.

При изучении запасов лекарственных растений в Центральных областях РСФСР мы обратили внимание на широкое применение при лечении кожных заболеваний растений рода щдемник. Хроиатографическому изучению нами были подвергнуты 27 видов этого рода; изучены совместно с Поповой Т.П., Бешко Н.П. шлемник обыкновенный и шлемник высочайший /30, 33, 42/. Кроме того, для сохранения и комплексного использования лапчатки прямостоячей совместно о Гончаровым Н.3>. /73/ мы подвергли изучению ее надземную часть, сопоставив с лапчаткой гусиной и лапчаткой серебристой.

По результатам экспедиционного обследования установлено, что запасы адониса весеннего сильно истощаются. Для сохранения запасов и расширения сырьевой базы для получения препаратов адониса

весеннего мы, совместно с Яцюк Б.Я., исследовали адонис волжский /41, 43, 45, 46, 64/.

Для расширения сырьевой базы и комплексного использования растений нами изучены отходы мяты перечной после отгонки эфирного масла, ее отходы после получения настойки, а также совместно с Ша-туновсй Л.В. /8, 53, 66, 69/ изучались отходы травы зверобоя обыкновенного после получения настойки.

Среди других растений нами изучались пустынноколосник Фетисова /59/, шалфей поникающий /19/, живучка Лагссмана и др.

2.1. Выделение полифенольных соединений. Для получения и очистки извлечений использовали разработанные нами лабораторное устройство для экстракции /I/, устройство для приготовления концентрированных растворов /57/, а для взвешивания сырья - весовой порционный дозатор /2/, при проведении разделения суммарных препаратов и очищенных извлечений на индивидуальные вещества использовали сконструированные нами: хроматографическое устройство /63/, устройство для жидкосткэй хроматографии /4/, а для хроматографических исследований на бумаге -устройство для прекращения хроматографиче-ского процесса /10/. Для очитки агликонов применяли устройство для дробной возгонки /5/.

2.1.1. Выделение флавоноидов. В результате поисковых работ были обнаружены вещества флавоноидной природы, предварительно отнесенных к классам: хадконов, флаванонов, флавонов и флаванолов» Флавоноиды извлекали из измельченного растительного материала концентрированными и водными спиртами. Извлечения концентрировали, очищали и фракционировали с применением хроматографии на порошках целлюлозы, полиамида и силикагеле. Качественный состав суммарных извлечений и отдельных фракций анализировали хроматографией на бумаге с применением ряда диагностических реактивов.

Для анализа использовали суммарные флавоноидные биологически активные комплексы, способы получения которых защищены авторскими свидетельствами. Так из отходов мяты перечной, после получения настойки, разработан способ получения флавоноидов, обладающих желчегонным действием /5, 55/. С целью утилизации отходы мяты перечной после производства настойки на этаноле, промывали водой в пе-рколяторе до полдаго удаления водного спирта, затем для полного удаления воды промывали метанолом, а для удаления метанола сырье

в перколяторе промывали хлороформом, после чего сырье перегружали в экстрактор, заливали хлороформом и нагревали на водяной бане. Хлороформные вытяжки отфильтровали, контролируя их хроматографией на бумага. Очищенное сырье экстрагировали сухим метанолом до отрицательной цианидиновой реакции. Метанолькые извлечения концентрировали при нагревании под вакуумом, а выпавший мелкокристаллический продукт отфильтровывали и промывали диэтиловым эфиром. Выход -1,21+0,3$.

Для расширения сырьевой базы и увеличения выхода целевого продукта измельченную воздушно-сухую траву мяты водяной /б/ вначале обрабатывали несколько раз хлороформом при температуре 40~50°С до бесцветных порций хлороформных вытяжек, что позволяло удалить из сырья смолы, жиры, хлорофилл, фитостерины, пектиновые и другие вещества, затрудняющие кристаллизацию целевого продукта. При 40-50°С флавоноидные гликозиды в хлороформ не переходяг, что подтверждается хроматографией на бумаге. Затем сырье подвергали экстракции метанолом на кипящей водяной бане до отрицательной цианидиновой реакции. Метанол не содержит воды (в отличие от 96° этанола), что позволяет более полно выделить флавоноидные соединения практически без неорганических примесей. Метанольный экстракт концентрировали под вакуумом до образования белого мелкокристаллического осадка. При этом, образование мелкокристаллического осадка ускоряется из-за отсутствия нежелаемых примесей, удаленных раннее хлороформом. Увеличение выхода конечного продукта достигается за счет использования травы мяты водяной, а также за счет предварительной очистки сырья хлороформом и использования в качестве экстрагента практически "сухого" спирта - метанола. Кристаллический осадок отфильтровывают и обрабатывают диэтиловш эфиром для удаления метанола и возможных следов хлорофилла и др. примесей. Выход суммы флавоноидов 2,4^+0,21,

Сумму флавонов многократно экстрагировали из травы шлемника обыкновенного 96° этанолом /3, 65/. Каждый раз упаривая вытяжку до одной трети с последующим добавлением очередной порции извлечения в одну и ту же посуду для ускорения осаждения. Выпавший мелкокристаллический осадок отфильтровывали и пропивали диэтиловым эфиром. Выход - 3,8^+0,8^2.

Согласно разработанному способу получения флавонов /13/ надземную часть белокудренника черного многократно подвергали экстракции 96,?'~ным этиловым спиртом. При этом, в экстракт переходили

флавоны, другие пигменты, смолы, хлорофилл и неорганические веще» ства, которые выпадали в осадок. Осадок промывали диэтиловым эфиром, который увлекал другие пигменты, смолы и хлорофилл. Очищенным диэтиловым эфиром осадок.растворяли в горячей дистиллированной воде, добавляли 9б£-ный этанол, который вытесняет из раствора неорганические вещества, охлаждали, выпавший белый осадок отфильтровывали, а фльтрат упаривали до небольшого объема, кристаллизовали и отфильтровывали целевой продукт. Выход - 1,9£+0,1#.

Согласно разработанному способу получения суммы флавоноидов, иридоидов и оксикоричных кислот /II, 67/ надземную часть зопника клубненосного экстрагировали 70>&-ным этанолом, концентрировали, добавляли воду, отгоняли остаток спирта. Полученный водный раствор охлаждали до комнатной температуры и помещали на сутки в холодильник. Выпавший осадок отфильтровывали и растворяли при нагревании в 70$-ном этаноле, охлаждали и спиртовый раствор помещали в холодильник на сутки. Выпавший осадок опять отфильтровывали и вновь растворяли при нагревании в 70#-ном этаноле. Эту операцию проводят до тех пор, пока очередной раствор не будет давать качественные реакции на флавоноиды, оксикоричные кислоты и иридоиды, а спиртовые фильтраты объединяли, упаривали, остаток растворяли в горячей воде и полученный раствор объединяли с полученным в сомом начале водным раствором, охлавдали до комнатной температуры и хроматогра-фировали на колонке, заполненной капроном, прочно задерживающим в своих верхних слоях дубильные вещества, хлорофилл и другие примеси, производили элюирование водой. В фильтрованном УФ-свете отмечали на колонке лаково-краснув зону и удаляли ее, а оставшийся столб сорбента промывали 70^-ным спиртом до отрицательных качественных реакций на флавоноиды, оксикоричные кислоты и иридоиды. Водные элюаты объединяли со спиртовыми, при нагревании под вакуумом отгоняли спирт, а водный раствор сушили в распылительной сушилке и получали 8,12/6+0,05| целевого продукта.

По способу получения кверцетина /8/ отходы травы зверобоя обыкновенного после получения настойки зверобоя путем перколяции

водным раствором этанола экстрагировали 95-96/5 этанолом в соотношении 1:10 - 1:12 в системе с обратным холодильником на кипящей водяной бане, процесс повторяли до отрицательной цианилиновой реакции. Проведение экстракции при нагревании ускоряло процесс извлечения кверцетина. После чего извлечения отфильтровывали, упаривали досуха известными способами, а сухой остаток пере-

кристаллизовывали дважды из 60-70$ этанола, содержащего 1-2$ серной кислоты при температуре 30-35°С, промывали дистиллированной водой до нейтральной реакции по лакмусу и получали конечный продукт в виде мелкокристаллического желтого порошка. Кверцетин начинает кристаллизоваться уже при температуре 35°С, при температуре ниже 30°С наблюдается выпадение в осадок хлопьевидных антра-ценпроизводных веществ. При этом улучшаются условия кристаллизации кверцетина, так как он, как полифенольное соединение, обладает слабовыраженной кислотностью и уже при первой кристаллизации вытесняется из растворов более сильной серной кислотой. Выход конечного продукта составляет 1,1%+0,1% в пересчете на воздушно-сухое сырье.

•Из мяты водяной, мяты курчавой, мяты перечной и отходов мяты перечной после получения настойки и эфирного масла выделено одно вещество халконовой природы, раствор которого при сильном нагревании на кипящей водяной бане давал положительную цианиди-новую реакцию, 2 флаванона, 6 флавонов.

Из растений рода зопник - 5 веществ флавоновой природы. В результате исследований рода Белокудренник выделено 3 флавока. Из растений рода шлемник изолировано 6 флавонов, панцерии - 6, из адониса волжского - 5 флавоновых соединений, из шалфея поникающего - 2 флавона, из живучки Лаксмана - 2 флазона.

2.1.2. Выделение оксикоричных кислот. В результате анализа исследуемых объектов было обнаружено ряд веществ, которые по качественным реакциям, хроматографическому поведению и флюоресценции в фильтрованном УФ~свете предварительно отнесены к оксикори-чным кислотам. Способы выделения аналогичны описанным при выделении флавоноидов /II/, а также согласно способу получения оксикоричных кислот /12/ воздушно-сухую измельченную надземную часть белокудренника черного многократно экстрагировали на водяной бане 96^-ным этанолом до отрицательной реакции на фенольные соединения. Извлечения объединяли, упаривали и остатки растворяли в горячей воде, охлаждали, фильтровали и хроматографировали на полиамидном сорбенте, элвируя дистиллированной водой, образовавшуюся в колонке сверху бурую зону удаляли и продолжали элюирова-ние водой до отрицательной реакции на фенольные соединения, элюаты упаривали до небольшого объема, подкисляли серной кислотой до рН 2 и в делительной воронке извлекали оксикори-

чные кислоты смесью диэтиловый эфир-н-бутанол (1:1,05), причем диэтиловый эфир и н-бутанол перед приготовлением смеси насыщали водой. Извлечение производили до отрицательной реакции водного раствора на фенольные соединения. Выход Из растений рода зопник выделено 6 оксикори.чных кислот, из рода панцерии - Из растений рода белокудренник - 4, из пустынноколосника Фетисова - I оксикислоту.

2.1.3. Выделение кумариноз. При хроматографировании очищенных водных извлечений на полиамидном сорбенте в водные злюаты переходили кумарины, которые экстрагировали диэтиловым эфиром и в дальнейшем производили разделение на полиамиде используя в качестве элшен-тов бензол и хлороформ.

Из горицвета волжского выделено 2 кумарина, из растений рода лапчатка - 2.

2.2. Выделение карденолидов. Для извлечения сердечных гликози-дов из адониса волжского применяли спирто-хлороформную смесь в соотношении 3:7. Для отделения липофильных веществ и хлорофилла полученный экстракт смешивали с водой и осадок отфильтровывали, затем производили дополнительную очистку на окиси алюминия Ш степени активности по Брекману. Водный раствор сердечных гликозидов очищали хлороформом и получали сумму малополярных сердечных гликозидов. Хроматографией на окиси алюминия отой суммы, а также из очищенной на полиамиде суммы полярных гликозидов на силикагеле получили б сердечных гликозидов.

2.3. Выделение иридоидов. Для выделения индивидуальных иридо-идов растительное сырье обрабатывали карбонатом кальция для нейтрализации органических кислот и экстрагировали разведенными спиртами при нагревании. Извлечение упаривали, очищали петралейным эфиром и хроматографировали на полиамидном сорбенте. Водные элюа-ты фракционировали и те из них, которые давали положительную реакцию с реактивами Шталя, Трима и Хила хроматографировали на нейтральной окиси алюминия, получали сумму иридоидов, которую разделяли на полиамидном сорбенте, используя водно-спиртовые растворы с постепенным увеличением концентрации. Из растений рода зопник получили 4 иридоида, из панцерии выделено 2 йридоида, живучки Лаксмана -I иридоид, из белокудренника черного - 2.

3. Химическое исследование выделанных веществ растительного происхождения.

3.1, Методы исследования. Структуру природных соединений (аг-ликонов и гликоэидов) устанавливали, применяя химические и физико-химические методы анализа.

Качественными реакциями с использованием реактивов на хрома-тограммах обнаруживали полифенольные соединения (флавоноиды, кума-рины, фенолкарбоновые кислоты), сердечные гликозиды и иридоиды.

По продуктам деструкции, например, флавоноидов в щелочной среде определяли основные элементы типичных структур, выделяя фло-роглюцин или резорцин из А-кольца, а п-оксибензойную, протокате-ховую и другие кислоты из В-кольца, Метилирование и дезметилирова-ние использовали для установления замещения оксигрупп. Гликозиды гидролизовали кислотами, щелочами и отдельными ферментными системами (эмульсин, рамнодиастаза и др.), также производили ступенчатый и постадийный кислотный гидролиз с выделением промежуточных продуктов. В УФ-спектральном анализе применяли ионизирующие и ком-плексообразувщив реагенты. В анализе агликоновой и углеводной части флавоноидов для выявления структурных особенностей и конфигурации гликозидных связей, величин окисных циклов и конфигурации заместителей в ассимметрических центрах агликонов использовали модифицированный Литвиненко В.И. метод Клайна-Сон-Бреденберга-Чер-няева» ИК и ПМР-спектры получены на приборах И£~10 в таблетках из бромида калия и Р-20 с рабочей частотой 60 гц во ВНИИХТЛС. Анализ оптической активности проводили на поляриметре типа Шмидта и Хей-ча и спектрофотометре СПУ-Е. УФ-спехтры получены на спектрофотометре СФ-16 и ЕР-3. Гидролиз С-гликозидов проводили по методу Ки-лиани.

3.2. Установление структуры выделенных веществ.

3.2.1. Флавоноиды. Основные свойства изученных флавоноидных соединений приведены в таблице I.

Гесперидин. Зеленая окраска при реакции с хлоридом окисного железа и желтая с азотнокислым цирконилом, исчезающая от действия лимонной кислоты, говорят о наличии свободной 5-оксигруппы и об отсутствии ее в 3 положении. На основании реакции с боргидридом натрия вещество отнесено к флаванонам. Хроматографи-

Основные свойства выделенных флавокоидов

Табл,1

и источники их получения

№ ¡Названия -веществ и их стря Иоточники п/п ¡ктурная характеристика | выделения М.м. Т,пл.°С /а/°1| Общая град | формула Опубликовано (литература)

I ! 2 ! 3 4 5 6 ! 7 8

1.

2.

3.

5.

6. 7»

Халкон

Геспвретин (5,7,3 -триок-си-4А-метоксифлавонон).

Геспередин (7-рутинозид гесперетина).

Апигенин (5,7,4^-триокси-флавон).

Изороифолин (5,7,4*-три-оксифлавон-7-у>~ Р -глв-копиранозил-б-об- Ь -рам-нопиранозид)).

Ментогеннн (4 -транскофе-ил-5,7,41-триоксифлавон).

Ментозидт((4*-транскофе-ил-5,7,4-1—триоксифлавон-7-(в-1> -глюкопиранозил-6- -рамнопиранозид)).

Пиперитозид (^-транско- 1 феил-5,7,4-1—триоксифлавон-:

Мята перечная 255

Мята перечная, м. водяная, м.кур- 299 чавая

Мята перечная,м. водяная, м.кур- 613 чавая

Те же + адонис волжский, шлемник 270 копьелистный

Мята перечная,м. водяная, м.кур- 562 чавая, душица обыкновенная

Мята перечная,м. водяная 432

Мята перечная,м. водяная, м.кур- 740 чавая

1~Р~3> -глюкопиранозид;.

Космосиин (5,7,4^-триок-сифлавон-7-^-Х) -глвкопи-ранозид).

Мята перечная,м. водяная,м.курча- 594 вая

Мята перечная,м. водяная 562

191-192 224-226

260-261

346-347

269-270

266-268 271-273

251-253 254-256

" С16Н14°6 18' 53' 74

88,2 С28Н3^015 14, 18, 53, 74

~ С15НЮ°5 18, 35, 41, ^

-92 С27Н30012 15, 17, 18, 29, ®

- С24Н16°8 15' 18

-89 С36Нзб017 15, 17, 18, 33,

-63 С30Н2601э 16, 18, 33, 53

-79 С21Н20010 16, 18

2

! 3 ! 4

10. йзорамнефин (3,5,7,4 -тет-раокси-3А-метоксифлавон).

11. Кемферол (3,5,7,4 -тетра-оксифлавон).

12. кемфорол-3-0-В-]>галакто~ пиранозид.

13. Изора.мнетин-3-О-в-_Г)-глю~ копиранозид.

14. Изоракнвтин-3-0-^-1) -глв-копиранозил-6-л-Ь~ рак-нолиранозид.

15. Изорамнетин-3-0-^~1> -глю-ког,иранозил-6-с<- ¿--арабо-пиранозид.

16. Лвтеолин (5,7,31,41-тет-таоксифлазон).

17. Ориентин (В-С-син-^-Ь -глпкопиранозкд лютеолака).

Виды панцерии 314

Виды панцерии 282

Панцерия сероватая, п.шерстис-447 тая,п.сереорис~ тобелая

Панцерия сереб-ристооелая,п. шерстистая,п. сероватая

Панцерия серэб-ристсбелая.п. шерстистая, п. сероватая

Панцерия сореб-ристооелая,п, шерстистая,п. сероватая

Зопник клубненосный, з. луговой, шлемник копьелистный,-адонис волжский

Зопник клубненосный з.луговой,адо- 447 нис волжский

474

620

608

282

Гомоориентин (б-С-анти-В~]> Зопник клубне--гликопиранозид лютеол'ина! носный з.луго- 447

вой,адонис волжский

Продолжение табл.1.

! 5 ! б ! 7

303-305 - С1бН12°7 25' 3k' 61

280-284 - С15Н1006 25, 34, 61

259-269 -57,6 С21Н200п 9^ 37, 53, 61,

166-169 -59,8 С22Н22012 53, 60, 61

I79-I8I -67 С28Н3201б 9j 34, 53, 60,

178-130 -10 C27H300I6 53, 61

329-331 - С15Н100б % g, 38, 41,

60

267-269 +20,4 С21Н200п 38, 39, 41, 43,

234-235 4-30 С?цйт0и 36, 33, 41, 43,

24 20 il 53 58j 60f 6If

67

Продолжение табл.1

I

65

I !___г_____!__3_! 4 !__5__! 6 ! - 7 !_ . &

19. Цинарозид'(7-0-Д-.з-гл»- Зопник луговой, копиранозид лютеолина). з.клубненосный 448 256-257 -80 ^^Н^О^. 53, 58, 60,

20. Еайкал^ин (5,6,7-триокси- Шлемник высочайший Флавон;, ш.обыкновенный 301 263-265 - ^15^10^5 .

21. Байкалин (7-В-'¡'-глвкофу-Шлемник обыкно- ' ; • ранозид байкелеина). венный,яг.высочай-446 224-226 -87 Со^дО^; 33, 42, 53,

ший

22. Галерозид (7-^ С -рамко- Шлемник обыкно- -фуранозид байкалеина). венный 330 189-190 -56 СэтН^ 30, 33, 42, 53,

65

¿3. Альтизин <.5-окси-7,8,2 , Шлемник высочай- т

о1-■тетра-матоксифлавон). ший 360 165-167 - • 53

1ч. Лиосмин ииосметик-7-В- Шалйэй поникаю- ^

-глюкопиоаноэил-б-.х -/. - щий 614 277-279 -95 С2дНос0гс 53 о

рамнопирлнозид).

Лиосмзтин (5,7, З^-триок- Шалйей поникаю-

сх-41-метоксифлазон). щий 300 258-260 - С16Н1?06 19, 53

26. К^ерцетин (3,5,7,3^,4*- Панцерин сереб-

тэграокси&павон), оистобелая.ззезобой

обыкновенный ' 300 306-309 - С15К100? 21, 25, 27,

¿7. Скутолляоин (скутелляре- Цлемник копье-

ин-7-0-В~,7 -глякуоонил- листный ^62 210-213 -131 СотНтоО-о 35 пиранозид).

2*3, Скутелляоаин (5,6,7,41- Млвмник копье-

тетраоксйфлавон). листный 330 334-336 -

29. Витексин 48-С-З-" -глюко- Адонис волжский 432 264-265 -14,7 С->тН?о0тп 41,. 43 пиранозид апигенин;. :

ческим исследованием продуктов энзиматическсго гидролиза сахарная часть гликозида идентифицирована с рутинозой. В ИК-спектре имеется интенсивная несимметричная полоса поглощения при 3460 см^ спиртовых и фенольных гидроксильных групп, как свободных, так и связанных меж- и внутримолекулярными водородными связями, а также полоса при 2940 см" , прянадлежащая поглощении алифатических 0Н-групп углеводных заместителей. Спектр содержит интенсивную полосу поглощения при 1655 см-* карбонильной группы флаванонов. Обнаружены также полосы при 1617, 1530 см~^, свойственные поглощению ароматических С-С связей. Интенсивность полосы при 1617 см"*^ меньше, чем полосы 1655 см"*, что свидетельствует о флаваноновой природе соединения. В области 1000-1150 см"* есть интенсивные полосы поглощения валентных колебаний G-0 и колебаний пиранозных циклов углеводных заместителей. Для I, 3, 4 - замещенного бокового фенлльного радикала характерна полоса поглощения при 871 см" . Сопоставление физико-химических констант флавоноида и его аглико-на с гесперидином и гесперетином, а также тождество их Ж-спект-ров дали основание идентифицировать его как гесперетин-7-рутино-зид.

X а л к о н . Положительная цианидиновая реакция по Брианту, а также низкая подвижность в водных системах и высокая в органических говорит об агликоновой природе вещества. Красное окрашивание при рагтзорении в щелочах, оранжевое с .пятихлористой сурьмой, желтой о борной и лимонной кислотами, дающее красную флюоресцен-ц.х ¡3 У£-свете, указывают на его халконову природу. Это подтверждается и условием проведения циан::диновой реакции. Обычно халконы не дипт этой реакции, но если их "заставить" нагреванием в кислой срэде зациклизоваться до флаванонов, то они дают ее. Реакция же с И водным раствором хлорида окисного железа свидетельствует о том, чго это поляоксихалкон. Халконовую природу подтверждает ИК-спектр. В спектре отсутствуют полосы поглощения валентных колебаний С-0 и кольцевых колебаний.углеводних заместителей, что отрицает принадлежность флоэоноидз к гликозидом. В Ж-спектре флавоноида имеется полоса при '34 0 0 см" , повидииоку, поиняллежит карбонильной группе хэлкона, но связанно;'; внутримолекулярной водородной связью. На халконовую природу соединения укаэыэают также интенсивные полосы поглощения скелетных колебаний ароматических систем при 1590,1524, 1503 см"1. Полоса пои 812 см""*, очевидно, относится к поглощению I, 3. 4 - замещенного бокового цедильного радикала.

Изороифолин. Положительная цианидиновая реакция и отрицательная по Брианту указывает на флавоноидную гликозидную природу. Зеленое окрашивание с I% раствором хлорида окисного железа и желт09 с нитратом цирконила, которое утрачивается в присутствии лимонной кислоты, говорит о флавоновой структуре и свободной пятой гидроксилькой группе как у гликозида, так и у его агликона. Это же подтверждается спектральным анализом в УФ-области, с нитратом цирконила происходит батохромный сдвиг максимума первой полосы поглощения на 45 нм. Качественной реакцией была обнаружена свободная 4 -гидроксильная группа в агликоне. В этилате натрия максимумы первой полосы У^-спектров гликозида и его агликоны сдвигаются на 45-60 нм, что подтверждает наличие свободней 4^-гидроксиль-ной группы не только в агликоне, но и в гликозиде. В присутствии ацетата натрия в УФ-спектрах исследуемого гликозида не наблюдается батохромных сдвигов максимумов длинноволновой полосы, но они появляются в агликоне, что свидетельствует о нахождении углеводных заместителей в 7 положении. На основании физико-химических свойств, щелочного расщепления, получения ацетильного производного и спектральных исследований агликон изороифолина идентифицирован как апигенин. ИК-спектр агликона содержит полосы поглощения гидроксиль-ных групп при 3310 см"*1, полосы, принадлежащие поглощению ароматических СН-Групп при 3110 см"1. В спектре имеется полоса, соответствующая поглощению карбонильной группы ¿> -пиронового цикла при 1663 см""''", а также полосы поглощения скелетных колебаний С-С ароматических систем: 1615, 1590, 1564 и 1509 см" . Пара-замещенный боковой фенильнай радикал характеризуется интенсивной полосой поглощения при 836 см"1, которая принадлежит вкеплоскостным деформационным колебаниям СН. Кроме этого, в спектре есть ряд других полос, свойственных деформационным колебаниям ОН* (1450 см" ), валентным колебаниям С-0 (1250 см""Ъ и т.д. Эти же полосы присущи и ИК-спектру достоверного апигенина. Таким образом, в гликозиде установлены гидроксильнае группы в 4* и 5 положениях, а поело кислотного гидролиза в нем появляется свободная гидроксильная группа в 7 положении, что характеризует это вещество как 7-гликозил-5,7, 4^-триоксифлавона или апигенина. Кислотный гидролиз показал, что сахарная часть гликозида содержит ^ -глюкозу и I -рамноэу. При ступенчатом кислотном гидролизе было установлено, что непосредственно с агликоном (в 7 положении) связана -глюкоза, а концевым сахаром является и -рамноза. Анализируя данные исследования этого

флавоноидного гликозида, можно предположить, что он есть 7~ракно-гликозид апигенина-роифолин. Однако в последнее время установлено, что в роифолине ¿ -рамноза связана со вторым углеродным атомом J? -глюкозы. Исследуя щелочным и ферментативным гидролизом порядок связей между сахарами, мы определили, что I «рамноза связана с шестым атомом Ь -глюкозы. Поэтому выделенный нами 7-рамногликозид апигенина является не роифолином, а новым соединением - изороифо-лином.

При анализе ИК-спекгра изороифолина выявлен целый ряд характерных полос поглощения: полоса, присущая карбонильной группе у-пиронового цикла при 1663 см"*; полосы поглощения скелетных колебаний С-С связей при 1613, 1590, 1574, 1505 см"*"; интенсивная по~ лоса поглощения гидроксильных групп при 3450 см" ; полоса при 2940 см-1, принадлежащая алифатическим СН-группам углеводных заместителей, В области IQ00-II50 см**^ имеются несколько интенсивных полос поглощения, свойственных валентным колебаниям С-0 и кольцевым колебаниям углеводных заместителей. Оара-замвщенный боковой финильный радикал характеризуется полосой при 050 см" , присущей внеплоскостним деформационным колебаниям ароматических СН.

Таким образом, изороифолин охарактеризован как 5, 7, 4^-три-оксифлавон-7(^-Х> - глюкопиранозил-^-^-i -рамнопиранозид).

Мэнтозид, пиперитозид, менторе н и н . Вещества дают позитивную цианидиновую реакцию. Образующиеся при этом оранжевые пигмента первых двух веществ не экстрагируются октанолом, что предварительно характеризует кх как флавоноиды гликозидной природы, а третье - как агликон, т.к. пигменты переходят в октанол. Зеленое окрашивание с I% спиртовым раствором треххлористого железа и желтое с нитратом цирконила говорит о свободной 5-оксигрулле. Положительная реакция веществ с аммиачным раствором нитрата серебра показывает, что в них, очевидно, есть ортодиоксигруппировка. G борной кислотой и ацетатом натрия в спектре гликозидов и их агликона наблюдается батохромный' сдвиг максимумов I полосы поглощения на 10-14 нм, что тоже подтверждает наличие в В-кольце ортодиоксигруппировки. Зеленое окрашивание с 1% раствором хлористого железа, желтое с азотнокислым цирконилом, которое исчезает в присутствии лимонной кислоты, а также батохромный сдвиг максимума I полосы на 40 нм в присутствии азотнокислого цирконила показывает свободную 5-оксигруппу.

Исследуя ментозид в ИК-области, мы обнаружили, наряду с поло-

сой 1657 см"1 и 1665 см**^ соответственно (карбонил- /-пирона), полосу при 1688 см"1 для ментозида и 1710 см для пиперитозида (карбонил сложного эфира). Это свидетельствует о том, что менто-зид и пиперитозид содержат сложноэфирную группировку. Для более детального исследования ментозида и пиперитозида их превращения мы провели спектральный анализ в УФ-области с использованием ионизирующих и комплексообразующих реагентов. В коротковолновой части спектров флавоноидов имеются два максимума поглощения, что подтверждает ортодиоксизамещение. Однако после омыления ментозида 1% едким кали в спектре вновь полученного изороифолина обнаруживается только один максимум поглощения. В присутствии ацетата натрия в У§-спектрах исследуемых гликозидов, ментозида и пиперитозида, а также их продуктов омыления не наблюдается батохромных сдвигов длинноволновой полосы, но они появляются в их агликонах, что указывает на нахождение углеводных заместителей в 7 положении. В системе борная кислота - ацетат натрия максимум спектра первой полосы' ментозида, пиперитозида и их агликона до омыления батохром-но смещается на 10-16 нм, благодаря чему обнаруживается орто-ди-оксигруппировка э В-кольце. В омыленных продуктах таких сдвигов нет, гак как, очевидно, носителем орто-диоксигруппировки есть отделяемая во время омыления часть молекулы гликозидов. В этилате натрия максимумы первой полосы спектров гликозидов и их агликонов батохромно смещаются на 45-60 нм, что обусловлено наличием свободной 4 оксигруппы. Батохромные сдвиги максимумов первой полосы на 40-50 ни в присутствии азотнокислого цирконила показывают свободную 5-оксигруппу. В ментозиде и пиперитозиде обнаружены свободные гидроксильные группы в 5, 3 и ^ положениях, а после кислотного гидролиза - дополнительно оксигруппа в 7 положении. Это дает возможность допустить, что ментозид и пиперитозид есть 7-гликозид-5, 7. З1, 4^-тетраоксифлавона или лютеолина. Но после омыления 3 , 4 -диоксигруппировка утрачивается.

Учитывая данные ИК-спектроскопии о наличии в ментозиде и пиперитозиде сложноэфирной группировки, мы предположили, что ортоди-оксигруппировка содержится в ацильном заместителе. Чтобы установить это, мы омылили ментозид и пиперитозид в мягких условиях и выделили вещество, которое по физико-химическим свойствам, качественным реакциям и храматографическому поведению идентифицировали с транс-изомером кофейной кислоты. Для определения положения аци-лького заместителя в гликозидах мы провели кислотный гидролиз ме-

нгозида и пиперитозида и проанализировали полученный агликон мен-тогенин. По данным ИК-спектра, в агликоне обнаружена сложноэфирная группировка (1700 см" ), а после чего омыления получены апигенин и кофейная кислота, что говорит о связи ацильного заместителя с фла-воноидной частью агликона. Таким образом, агликон ментозида - м а -нтогенин является Стране кофеил-апигенином. В его ИК-спе-ктре есть полоса, принадлежащая связанным меж- и внутримолекулярными водородными связями гидроксильным группам при 3180 Особенностью спектра ментогенина, как и ментозида и пиперитозида является наличие максимума С-0 сложноофирной группировки при 1710 см-1. Спектр содержит также полосу при 1660 см"**, принадлежащую поглощению С-0 f -пирона, а также полосу при 1630 см" трансзамещен-ной двойной связи транс-кофейной кислоты. Имеются также полосы скелетных колебаний С-С ароматических систем (1610, 1588, 1570, 1518 см'1). Для пара-замещенного бокового фенильного радикала присуща интенсивная полоса при 831 см"^, соответствующая внеплоскостным деформационным колебаниям СН.

УФ-спектроскопия показала, что в флавоноидной части агликона, представленной апигенином, 5- и 7-гидроксильные группы свободные. Следовательно, ацильный заместитель находится в 4 положении.

Чтобы охарактеризовать сахарную часть, мы провели полный кислотный гидролиз ментозида и его продукта омыления и, проанализировав гидролизаты, установили, что оба гликозида содержат I_-глюкозу и и-рамнозу.

На основании физико-химических свойств, спектрального исследования и щелочного расщепления, при котором получены флороглюцин и п-оксибензойкая кислота, агликон гликозида полученного омылением ментозида идентифицирован как апигенин. Для определения последовательности присоединения Сахаров мы провели ступенчатый кислотный гидролиз этого вторичного гликозида и обнаружили, что непосредственно с агликоном в 7 положении связана ])-глюкоза, а концег вым сахаром есть L -рамноза. При ферментативном гидролизе рамне-диастазой получен агликон, из чего можно допустить, что рамноза в нем связана с шестым углеродным атомом глвкозы. Таким образом, вещество, полученное при омылении ментозида, является изороифолином, а ментозид - 4*~транскофеил-изороифолином.

В ИК-споктре ментозида имеется полоса поглощения групп при 3400 см"1 и полоса поглощения алифатических СН групп углеводных заместителей при 2935 В спектре есть также полоса при 1700

см"1 свойственная поглощению С-0 сложнсэфирной группировки, и полоса при 1666 см"*, характерная для карбонильной группы ¡Г'-пироно-вого цикла. Скелетные колебания С-С ароматических систем проявляются интенсивными полосами поглощения при 1614, 1590 и 1510 см"*. Интенсивные полосы поглощения в области 1000-1150 см~* и оказывают валентные колебания С-0 и кольцевые колебания углеводных заместителей. Полоса при 840 см""* указывает на наличие пара-замещенного фенильного радикала, а полоса при 812 см"* относится к поглощению I, 3, 4-замещенного бензольного кольца кофейной кислоты.

На основании проведенных исследований ментозид охарактеризован как 4*-транскофеил-5, 7, 4*-триоксифлавон-7- (р- £> -глюкопирано-эид-б-о(- Ь -рамнопиранозид).

Омылением пиперитозида получено два продукта (рис.1), один из которых по хроматографичоскому поведению идентифицирован с трансизомером 3, 4-диоксикоричной или кофейной кислоты, а второй дал положительную цианидиновую реакции. Образующиеся пигменты не переходили в октанол. Поэтому эта часть флавоноида является гликозид-ной. Анализ сахара и щелочного расщепления агликона показал, что вновь полученный гликозид представляет собой глюкозид апигенина. ИК-спектр агликона полностью соответствует ИК~спектру апигенина. Отсутствие батохромных сдвигов максимумов длинноволновой полосы в присутствии ацетата натрия у пиперитозида и полученного гликозида, а также наличие их в спектрах агликонов указывает на то, что Л -глюкоза находится в 7 положении. Положительная реакция пиперитозида с аммиачным раствором азотнокислого серебра и отрицательная глюкозида дает возможность предположить, что ортооксигруппировка находится в ацильном заместителе флавоноида.

Б УФ-спектре этого вещества с этилатом натрия происходит сдвиг максимума длинноволновой полосы на 52 нм, который свидетельствует о том, что после омыления пиперитозида освободилась 4 -ги~ дроксильная группа. Но батохромный сдвиг на 40 нм, который наблюдается в спектро пиперитозида при действии этилата натрия, может ввести в заблуждение, говоря о наличии свободной 4*~оксигруппы. Очевидно, батохромия в этом случае могла бить вызвана ионизацией 4*-оксигруппы в кофеильном заместителе или частичным его отщеплением в щелочной среде. Таким образом, вещество полученное из пиперитозида, есть -глюкозид 5, 7, 4 -триоксифлавона или известный флавоноид - космосиин, а пиперитозид его 4 -транскофеил-производное.

СХЕМА доказательства структуры ацилированных флавоноидов

ом

Рис.1.

В ИК-спекгре пиперитозвда имеется интенсивная полоса поглощения гидроксильных групп при 3450 см"**, а также полоса поглощения алифатических связей СН углеводного заместителя при 2930 см*. В спектре есть также полоса 1655 см"**, принадлежащая поглощению карбонильной группы % -пиронового цикла. Наряду с ней, ИК-спектр пиперитозида содержит полосу при I7IQ см"*, свойственную поглощению С~0 сложного эфира. Скелетным колебаниям ароматических систем присущи интенсивные полосы поглощения при I6II и 1510 см~*. ИК-спектр гликоэида имеет несколько интенсивных полос в области 10001150 см" , которые принадлежат валентным колебаниям С-0 и кольцевым колебаниям углеводных заместителей. Паразамещенный боковой фенильный радикал характеризуется полосой поглощения при 825 см***, al, 3, 4 - замещенное бензольное кольцо кофейной кислоты - полосой при 815 см""1, принадлежащей внешнеплоскостным деформационным колебаниям СН-группы. Таким образом, пиперитозид охарактеризован как 4*-транскофеин-5, 7, 4*-триоксифлавон-7-р-^-глюкопиранозид.

Для определения величин окисных циклов и конфигурации глико-зидной связи между агликонами и сахарами в исследуемых гликозидах мы провели анализ оптического вращения (таблица 2).

Установлено, что 2> -глюкоза в исследуемых флавоноидных гликозидах связана с агликонами ^З-гликозидной связью и находится в пи-ранозной форме, a U -рамноза ментозида и изороифолина - в пирано-зной форме и присоединена к глюкозе ^ -гликозидной связью.

И з.о рамнетин, кемпферол, кверце-т и н . Вещества, относящиеся к классу флавонолов, широко распространены в качестве агликонов. Восстановление веществ цианидиновой и цианидиновой в модификации по Брианту реакцией свидетельствует о наличии 2-фенил~у-пиронового ядра.

В ультрафиолетовой области их спектров максимум поглощения коротковолновых (255-267 нм) и длинноволновых (365-375 нм) полос указанных веществ лежат в пределах, которые характерны для поглощения флавонолового ядра. Ацетат натрия в спектрах этих соединений вызывает батохромное смещение как коротковолновых (2-6 нм), так и Длинноволновых (10-20 нм) полос, что указывает на присутствие свободных оксигрупп у Cj. Батохромный сдвиг максимума с добавкой борной кислоты и ацетата натрия на 30 нм у кверцетина подтверждает наличие гидроксильных групп в 3*, сложении. У изора-мнетина и кемпфарола батохромный сдвиг длинноволновой полосы незначительный (7-10 нм), что свидетельствует об отсутствии ортоди-

Табл.2.

Анализ конфигурации гликозидных связей новых флавоноид-ных гликозидов мяты перечной, ее отходов после получения эфирного масла и настойки и мяты водяной.

Гликозиды М» К, Ф И/Ф | 4° | «м ЬА

Пиперитозид -374 0,43 -161 _ - -

Космосиин -281 0,59 -166 - - -

Фенил-В-5 -глюкопиранозид -182 1,00 -182

Фенил-оС-й-глюкопиранозид +402 1,00 +402 _

Изороифолин -517 0,65 -336 -154 0,75 -116

Ментозид -659 0,50 -329 -147 0,75 -ПО

Метил-ос - (, -рамкопиранозид -III т 1,00 -III

Метил-^В-1 -рамнопиранозид +170 - - - 1,00 +170

оксигруппировки в кольце Б. Значительный гипсохромный сдвиг (3550 нм) с добавкой этилата натрия дает возможность заключить, что все они содержат свободную оксигруппировку в положении Возникновение батохромного сдвига первой (45-60 нм) и второй (10-15 нм) полосы с добавкой цйрконила азотнокислого указывает па присутствие гидроксильной группы в 3- и 5- положениях, В продуктах щелочного расщепления изорамнетина, кэмпферола и кверцетина хроматографией на бумаге с достоверными образцами обнаружены: фло-роглюцин - для всех трех соединений; ванилиновая кислота для изорамнетина; 4-оксибензойная кислота - для кемпферола и протокатэ-ховая кислота - для вещества кверцетина. Полученные данные свидетельствуют о том, что изорамнетин и квмпферол в боковом фенильном радикале имеет одну свободную окоигруппу, а квэрцетин - две; кроме того, оксигруппы конденсированного бензольного кольца для всех трех соединений расположены в положении С^ и С^.

В ПК-области спектров исследуемых веществ отмечены характерные для флавоноидных агликонов максимумы полос поглощения. Так, обнаружение полос поглощения в области 1665-1650 ом™ характеризует валентные колебания карбонильной группы 2-фвнилбензо- у-пи» ронового цикла с оксигруппой у С^. По данным ИК-слектров в аналя-

эируемых соединениях содержится несколько оксигрупп (широкая полоса в области 3300 см" ); положительная реакция с раствором хлорного железа указывает на их фэнольную природу. В ИК~спектре вещества изорамнетииа обнаруживается полоса поглощения при 2907 cmJ характерная для метоксильной группировки. Количество метоксильных групп определяли по методу Цейэеля с последующей идентификацией продуктов дезметилирования. Была установлена одна метоксигруппа и получено вещество (продукт дезметилирования) с т.п. 310-312°, идентифицировано с кверцетином.

Таким образом, на основании физико-химических свойств, а также в результате хроматографических, химических и спектральных исследований установлено, что первое вещество представляет собой 3, 5, 7. 4^~твтраокси-3^-метоксифлавон (изорамнетин), второе - 3, 5, 7, 4 -тетраоксифлавон (кемпферол) и третье - 3, 5, 7, 3*, 4*-пвн-таоксифлавон (кверцвтин).

Квмпферол-З-О-^З -2) - галактопирано-з и д. , изорамнетин - 3- 0- J3 -J) - глюкопира-н о з и д . При определении расположения свободных и замещенных фенольных оксигрупп в молекулах исследуемых гликозидов нами установлено, что они в отличие от соответствующих им агликонов дают отрицательную реакцию с цирконилом азотнокислым и лимонной кислотой. Сравнительно легкая гидролизуемость, а также желтое окрашивание пятен на хроматограммах дает основание считать, что у всех гликозидов оксигруппы в положении С3 связаны с сахарами, а такжо, что все остальные гидроксилы свободны и расположены таким образом, как у соответствующих агликонов. Соединения давали положительную цианидиновую реакцию, что указывает на их флавоноидную природу, на гликозидный характер указывает отрицательная реакция по Брианту. Количественный гидролиз исследуемых веществ приводил к образованию эквивалентных количеств агликона и сахара, указывая на то, что эти вещества - моноэида. Ацетилирование агликонов приводило к получению соответствующих тетраацетатов, что свидетельствует о незамещенных четырех гидроксильных группах. Сахарные компоненты гликозидов по результатам хроматографии на бумаге с достоверными образцами, а также по величине значений Rj- и окраске пятен на хроматограммах идентифицировали с J) -галактозой и J> -глюкозой соответственно. При хроматографическом сопоставлении агликонов исследуемых гликозидов с кепфаролом и изорамнетином наблюдали полное совпадение как по величине Hj- , так и по окраске. Место присоеди-

кения углеводных остатков определяли качественными реакциями и У$-спектроскопией. Образующаяся желтая окраска и исчезающая при добавлении лимонной кислоты свидетельствует о замещении 3 положения. В УФ-спектрах батохромный сдвиг в присутствии цирконила азотнокислого и лимонной кислоты снижается.

Конфигурацию гликозидной связи определяли ИК-спектроско-пией. Максимумы при 760 см""*, 890 см"* и 925 см"* характеризуют валентные колебания пиронового кольца о ^-связью. Таким образом установлено, что вещества являются кемпферсл-З-О-в-Ъ -галактопи-ранозидом и изорамнотин-З-О-в-£>-глюкопиранозидом соответственно.

Рутин, изорамнегин-3-0-_р-'ь~глю~ копиранозил-6-</ - ¿.-рамнопиранозид, изорамнетин-3-0-^в»]) - глюкопирано-зил-6~^~[,~арабопиранозид. Флавоноидная гликозидная природа веществ была подтверждена положительной циа-нидиновой реакцией и отрицательной в модификации по Брианту. Количественный гидролиз дает возможность предположить, что на моль агликона приходится не менее двух молей сахарного остатка у этих веществ. При хроматографияеском исследовании углеводных компонентов исследуемых гликозидов обнаружено два пятна, свидетельствующих о том, что углеводный компонент состоит из двух Сахаров. При сопоставлении с достоверными образцами Сахаров обнаружены!) »глюкоза и Л -рамноза для первых двух гликозидов и £>-глюкоза и I -арабиноза - для третьего.

Для определения последовательности присоединения Сахаров проведен ступенчатый гидролиз. В качестве промежуточного продукта для первого гликозида получен кверцотин-3-глюкозид, второго и третьего - изорамнетян-3-глюкозид. Промежуточные продукты довольно легко гидролизовались _р-Гидролазой эмульсина, что подтверждает наличие ^-гликозидной связи между агликоном и углеводной частью. Гидролиз ферментом рамнодиастазой, специфическим ферментом, отщепляющим ^В-биозы с 1-6 порядком связи между монозами, а также лерекисное окисление гликозидов приводило в каждом отдельном случае к получению биозы.

ИК-спектры подтверждают эти выводы - имеются полосы поглощения, характерные для ,3-пиранозной формы (890, 760 и 920 см™ Агликоном первого гликозида является кверцетин, а гликозидов второго и третьего - изорамнетин.

Качественными реакциями ориентировочно доказано наличие сео-

бодных гидроксильных групп б положении 5. 7, 4* для второго и третьего гликозида и в положении 5, 7, 3 , 4 для первого вещества. При сравнении спектров гликозидов и соответствующих им агли-конов можно сделать вывод, что у всех гликозидов оксигруппы в положении С^ связаны с сахарами,'т.е. гликозидированы. Так, спектры гликозидов с борной кислотой и ацетатом натрия свидетельствуют о том, что у первого вещества, наблюдается батохромное смещение на 23 нм, в то время как у второго и третьего гликозидов - от 0 до 5 км, что является подтверждением наличия свободной ортодиоксигруп-пировки у первого и отсутствия таковой у второго и третьего. Батохромное смещение максимумов с добавкой ацетата натрия длинноволновых (10-15 нм) и коротковолновых (4-15 нм) полос поглощения характеризует наличие в молекулах исследуемых гликозидов свободной оксигруппы у Су,

В ИЯ-спектрах изорамнетиновых производных обнаруживается полоса при 2905 см"1, характерная для метокоильной группировки. Установлена по методу Цейзоля одна метоксигруппа. В продуктах дез-метилировакия второго и третьего вещества обнаружено вещество, идентифицированное с кверцетином. Таким образом, на основании данных качественных реакций, результатов кислотного, ферментативного гидролизов, перекисного окисления, продуктов щелочного расщепления, идентификации сахарных компонентов, УФ и ИК-спектросколии исследуемые гликозиды можно представить как: - 5, 7, 3 , 4 -тетра-оксифла§он~3~0-э~])-глюкопиранозил-б-^-2 -рамнопиранозид (рутин); 5, 7, 41-трио1сси-3*~метоксифлавон~3-0-^з-}) -глюкопиранозил-б-.у -рамнопиранозид; 5, 7, 4 -триокси-З^-метокоифлавон-З-О^-Ь-глюко-пиранозил-б-^- / -арабинопиранозид.

Лютеолин. Качественными реакциями со спиртовым раствором хлорида окисного железа, диазотированной сульфаниловой кислотой установлен фенольный характер вещества. Темная окраока на хроматограммах в У§ свете позволила предположить, что выделенное вещество является производным флаЕона. На флавоноидную природу исследуемого вещества указывала положительная цианидиновая реакция (оранжевое окрашивание), положительная реакция по Брианту - переход оранжевой окраски в октанол, характеризующий данное соединение как агликон. Флааоноидная природа вещества подтверждена также ЯК-спектроскопией. Бали отмечена полосы поглощения в области 1630-1690 см"1 характерные для производных бензо- ^-пирона. Для определения количества гидроксильных групп было проведено ацети-

лиров ние. Полученный ацетат с т.пл. 227-2280 содержал 4 ацетильных группы. Хроматографичеекое исследование продуктов щелочного расщепления показало, что значение Л/ полученных соединений совпадает с величинами образцов флороглюцина и протокатеховой кислоты.

В У§ спектрах отмечена почти равная интенсивность максимумов I и П полос, что свидетельствует о ток, что данное соединение относится к флавонам, а наличие в коротковолновой области максимума и плеча указывает на то, что в кольце имеется 3"*", ^-замещение. Батохромныа сдвиги максимума I полосы на 25 нм при прибавлении ацетата натрия, на 25 нм с ацетатом натрия и борной кислотой^ 60 нм со щелочыэ и 55 нм с хлорокисью цирхонила указывали на тс, что оксигруппы находятся в 5, 7, 3^, 4 -положениях флавонового ядра. Исчезновение сдвига с лимонной кислотой и хлорокисью цир-конила свидетельствовало об отсутствии оксигруппы в положении С-3.

Данные ЯМР-спектра подтверждают наличие ароматических протонов в кольцах А, Б и В, а также алифатических протонов глюкозы (таблица 3).

Табл.3

ЯМР характеристика лютеолиновых производных

Вещество Ароматические протоны (м.д.) Алифатические протоны глюкозы

В С А

Н-21 | Н-61 ; Н-51 Н-3 Н-8 ¡Н-6 Н-1 ; 0 ¡протонов

Лютеолин

Ориентин 7,49

Гомоориен-тин

Цинарозид 7,43

7,38 7,37

7,28 7,43

6,91 6,68 6,48 6,21

6.88 6,50 - 6,24 4,75 3,30

6.89 6,45 - 6,11 4,79 3,29-3,45 6,93 6,76 6,31 6,47 4,91 3,39-3,82

I I

Таким образом, вещество охарактеризовано как 5, 7, 3,4-тетраоксифлавок или лютеолин.

Ориентин. Качественные реакции, хроматографичеекое исследование, отрицательная реакция по Бриангу позволили отнести вещество к флавоноидным гликозидам. Гидролиз вещества 10$ раствором серной кислоты в течение суток приводил к получению исходного вещества и появлению гомоориентина.

Гидролизом по Килиани был получен агликон лютеолин и углеводный остаток, идентифицированный как I)-глюкоза. Выход агликона составляет 56$ от навески, что характеризует исследуемый гли-козид как монозид.

Анализ конфигурации гликозидов и величины окисного цикла свидетельствует о ^-конфигурации присоединения углеводного заместителя и о пиранозной форме сахара, что подтверждено и ферментативным гидролизом.

Место присоединения углеводного остатка установили сравнением УФ-спектров гликозида и агликона, а также данными ЯМР-спектра. В ИК-области гликозида отмечены полосы 1650 см"* (-0=0) 3400-3520 см-1 (-ОН) и три интенсивные полосы при 1010-1100 см~^, характеризующие пиранозную форму глюкозы.

Таким образом, на основании качественных реакций, хроматог-рафического поведения в различных системах растворителей, кислотного гидролиза, физико-химических свойств, У§, ИК» и ЯМР-спект-ров, а также расчетных значений Мд»Кф вещество охарактеризовано как 8-С-сик-р»1> -глюкопиранозид лютеолина (ориентин).

Гомоориентин. Вещество отличалось от ориентика хроматографической подвижностью, температурой плавления, однако имелась и тождественность, как то: одинаковые продукты гидролиза, отсутствие значительных различий в УФ~, ИК-, ЯМР-спектрах, что дало возможность отнести это соединение к изомерному. Анализ конфигурации гликозидной связи свидетельствует о ^конфигурации гли-козидной связи. Однако смешанная проба вещества с образцом достоверного гомоориентина депрессии температуры плавления не дала. Таким образом, вещество охарактеризовано как' 8-С-анти-^В-£>-глюкопиранозид лвтеолииа или гомоориентин.

Цинарозид. Качественными реакциями, хроматографией на бумаге была подтверждена гликозидная природа вещества. Гидролиз 10$ раствором серной кислоты исследуемого гликозида в течение 6 часов указывал на возможность присоединения углеводного остатка по 7 положению, т.к. в случае замещения по другим положениям расщепление проходит в более короткое время. Выход агликона - 61,65$, что характеризует иссле,дуемое вещество как монозид. При этом получен агликон лвтеолин.

Ферментативный гидролиз эмульсином, приводящий к отщеплению -глюкозы, указывает на присоединение глюкозы к агликону ^-связью. В ИК-области спектра наряду с характерными полосами отмече-

ны также полосы в области 1010-1100 см"**, характеризующие пирано-зную форму глюкозы. Место присоединения углеводного остатка устанавливали сравнением УФ-спектров гликозида и агликона. Отсутствие батохромного сдвига максимума I полосы при добавлении ацетата натрия в гликозиде и наличие его в агликоне (35 нм) указывали на присоединение 2) -глюкозы по 7 положению. Таким образом, вещество, на основании химического поведения УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии охарактеризовано как 7-0-3-]]) -глюкопиранозид лютеолина или цинарозид.

Байкалеин. Положительная реакция по Брианту и результаты хроматографии на бумаге говорят об агликоновой природе вещества. Его УФ-спектральный анализ показал, что максимумами поглощения являются: в метаноле 325 и 275 нм; с ацетатом натрия 365 и 265 нм; с ацетатом натрия и борной кислотой 365 и 265 нм; с эти-латом натрия 375 и 265 нм, а с хлористым цирконилом 365 и 285 нм, что позволило отождествить вещество с байкалеином. Этот вывод подтверждается также продуктом ацетилирования вещества, отсутствием депрессии температура плавления и полное совпадение на хроматогра-ммах о достоверным байкалеином.

Галерозид. Вещество относится к флавоновым гликози-дам. Оно дает положительную цианидиновую и отрицательную реакцию по Брианту. Его УФ-спектр: в метаноле 315 и 280 нм (Е^м 315 и 557), с ацетатом натрия и борной кислотой 315 и 280 нм, с этилаток натрия 350 и 270 нм; с хлоридом цирконила 350 и 295 нм. ИК-спектр характерен для флавонового гликозида с нейтральным углеводным заместителем. В результате гидролиза обнаружены рамноза- и байкалеин. Результаты поляриметрического анализа (МДКфж—I33°), в сравнении с фенил-В-/. -рамнофуранозидом (-90°) и дифференциального ИК-спектра (две полосы поглощения 1010 и 1100 см"*) показали, что рамноза ввязана с байкалеином В-связьв и находится в фуранозной форме. Поэтому вещество нами охарактеризовано как байкалеин-7-в--рамнофу-ранозид.

Байкалин. Соединение является флавоновым гликозидом. Оно дает положительную цианидиновую реакцию и отрицательную по Брианту. УФ-спектр в метаноле 315 и 280 нм (Е^ 315 и 557), с ацетатом натрия 315 и 280 км; с ацетатом натрия и борной кислотой 315 и 280 нм; с этилатом натрия 350 и 270 нм; с хлоридом цирконила 350 и 295 нм. Гидролитическое расщепление дало байкалеин и глю-куронозую кислоту. По данным поляриметрического анализа глюкуроно-вая кислота находится в пиранозной форме и связана с байкалеином

_Э»связью. Поэтому вещество нами охарактеризовано как байкалеин-7~В~]) -глюкуронопиранозид.

Альтизин. Вещество является флавоновым агликоном, отрицательная реакция по Брианту. У$-спектр в метаноле 265, 290 (пл.), 345 (пл.) нм, с ацетатом натрия изменений не наблюдалось, со щелочью - 385 нм, с хлоридом цирконила - 405 нм. После дезметилирования хлоридом пиридина получено другое вещество, его УФ-спектр в метаноле 270, 290 (пл.) и 350 (пл.) нм, о ацетатом натрия и щелочью разрушается, с хлоридом цирконила - 415 нм. По данным ЯМР-спектроскопии оказалось, что агликон имеет одну оксигруппу у С^ (12, 52 м.д. с 1Н). Протоны кольца В представлены двумя группами сигналов: однопротонннм квартетом (дуплет дуплета) при 5 7, 29 м.д. J = 3 = 85 г^, обусловленным протоном у С^, и двухпротонным дуплетом при J =■ 8,5 гц, с 6,55 м.д. определенным протонами у С3 С^. Такое распределение линий сигнала характерно для 6^-дизамещенных флавонов, т.е. когда три ароматических протона расположены подряд, причем два из них, находящиеся в 0-положении к третьему, эквивалентны и значительно отличаются от него по химическому сдвигу. Сильное смещение сдвигов протонов у С3 и С^ в область высокого поля обусловлено нахождением их в 0- и п-положении к электронодонорным заместителям, какими являются метоксильные группы. Спектр тоже содержит два однопротонных синглета ароматических протонов при 6,26 и 6,12 м.д. Синглагная природа этих протонов указывает на то, что в А-кольце содержится только один ароматический протон у Сд или С^. Первый сигнал можно отнести к протону у С^, а смещение второго сигнала в область высоких полей свойственно протону у С^ Для 5, 7-замещэнных флавонов.

В веществе обнаружены четыре метоксильные группы - у Су (3,88 м.д., 3 Н), у С2 и С6 (3,79 м.д., б Н) и у Сд (3,74 м.д.,ЗН). Результаты сравнения вэличин батохромного сдвига комплексов данного вещества и его дезматилированного продукта с хлоридом цирконила (60 нм для альтизина и 65 нм - для дезматилированного продукта) со сдвигом 6-оксизамощенного флавона (байкалина с л А =30-40 нм) свидетельствует о том, что в веществах альтизина и его дезметили-рованного продукта нет заместителей у С^, снижающих батохромию.^В связи с этим соединение охарактеризовано как 5~окси~7, 8, 2 , 6 -тетраметоксифлавон. Это соединение относится к довольно редкой группе 6^-дизамащенных флавонов.

Скутеллярин, скутелляреин. При кис-

лотном гидролизе первого вещества получен агликон С^Н^дО^ и глю-куроновая кислота. Это подтверждается величиной рН раствора и образования солей бария при нейтрализации фильтрата в момент выделения названной кислоты, а также ПК-спектрами. Полосы при 1750 и 1730 см'1 являются следствием С=0 колебаний в остатке глюкуроновой кислоты. Место присоединения глюкуроновой кислоты к агликону установлено данными УФ-спектров гликозида при добавлении ацетата натрия (в сравнении с агликоном). Малый батохромный сдвиг полос поглощения свидетельствует о замещении при С^, что подтверждается отрицательной реакцией с диазотированной сульфаниловой кислотой, а также ферментативным гидролизом только панкреатическим соком виноградной улитки. Продукты ацетилирования агликона и второго вещества ^28^18^10 (тетраацэтат) дают положительную цианидиновую реакцию и не окрашиваются раствором хлорного железа. Это указывает на сохранение 2-фенилбензопиронового кольца и на полноту замещения фв-нольных оксигрупп. На их наличие в агликоне и во втором веществе указывают максимумы полос поглощения при 3460, 3385 и 3300 см"**, кроме того, обнаружены полосы поглощения при 3455, 3320, 3100,3050, 2710 и 2640 см"1, характерные для вицинальной тригидроксильной группировки. Положение свободных оксигрупп в агликоне и во втором веществе подтверждается обнаружением в продуктах щелочной деструкции п-оксибензойной кислоты. Таким образом, агликон и второе вещество охарактеризовано как 5, 6, 7, 4*-тетраоксифлавон или скутелляреин, а его гликозид - скутелляреин -7-0-В~]> -глюкуронилпиранозид.

Диосметин. Вещество является флавоновым агликоном. Оранжевые пигменты, образующиеся в результате цианидиновой реакции, переходят в октанол. С раствором хлористого железа дает зеленое окрашивание, что говорит о свободной оксигруппе в положении 5« При дезметилировании вещества йодистоводородной кислоты получен люте-олин. По данным хроматографаческого анализа, продуктов его расщепления, спектрального исследования в УФ-области с ионизирующими и комплексообразующими реагентами, отсутствию депрессии температуры плавления вещество идентифицировано с диосметином.

3.2.2. Оксикоричные кислоты и их производные. Основные свойства изученных оксикоричных кислот показаны в таблице 4,

Кофейная кислота. С хлоридом окисного железа образует растврры, окрашенные в зеленый цвет, с диазотированной сульфаниловой кислотой - красно-коричневый. На хроматограммах ве-

Табл. 4

Основные свойства выделенных оксикоричных кислот и источники их получения

№№ ¡Название веществ и их п/п|структурная характеристик Источники ! м „ |> „„ Ор выделения | М'м'|т«пл- с Общая формула Опубликовано (литература)

I ! 2 3 ! 4 ! 5 б 7 8

I. Кофейная кислота (3,4-ди~ оксикоричная кислота).

2. Хлорогеновая кислота (3-0-кофеил-5 -хинная кислота).

Э. Неохдорогеновая кислота (5-0-кофеил- ^-хинная кислота).

4. Криптохлорогеновая кислота (4-0-кофеил- й-хинная кислота).

5. 4-0-3- Р -глюкопирано зид кофейной кислоты.

Зопник клубненосный з.луговой, 181 194-195 панцерия шерстистая,п.сероватая, п.серебристобелая, пустынноколосник Фетисова

Зопник клубненосный, пацерия шор-355 205-207 стистая.п.серова-тая,п.серебристо-белая^, луговой

Зопник клубненосный, пацерия шер- 354 200-203 стистая,п.сероватая, п. серебристо-белая, з, луговой

Панцерия шерстистая,п.сероватая, 353 182-184 п.серебристобелая зопник клубненосный, з. луговой

Панцерия шерстистая,п.сероватая, 339 206-207 п,серебристобелая зопник клубненосный

СоНоО, 20, 23, 40, 39, 9 8 и 61 63 32, 67 58, 60, 63, 71

-31,9 СТАНТЯ0Р 20. 23, 40, 39, 16 18 9 б1 б7» 58 60;

63 71

+3,3 СТАНТо0п 20, 23, 40, 39, 16 18 9 б1 бу 58 6071

-74 С16Н1809 61, 63, 32, 40,

-67 С15Н1804 40, 60, 61, 63

I

Продолжение табл.4

I !_2_!_3_! 4 ! 5 ! б ! 7 ! 8_

б» Феруловая кислота (3-окси- Зопник клубне-

-3-мвтоксикоричная кисло- носный.з.луго- 194 167-169 С"10%0®4 40, 39, 67, 58

та). вой

7. Производное кофейной кис- Зопник клубне-

лоты о сахарами-глюкозой, носный -97,7 32, 39, 63

рамнозой и ксилозой.

щество голубой флуоресценции в УФ-свеге, усиливающейся в парах аммиака. В УФ-спектрах спиртового раствора отмечены максимумы при 325 и 234 нм, характерные для кофейной кислоты. При добавлении к спиртовому раствору плавленного ацетата натрия наблюдается гипсо-хромный сдвиг первой полосы на 15 нм, в присутствии этилата натрия - батохромный сдвиг на 25 нм, что обуславливается солеобразо-ванием по карбоксильной группе и фенольным гидроксилом. Гипсох-ромный сдвиг первой полосы на 5 нм от прибавления ацетата натрия и борной кислоты объясняется ионизацией свободной карбоксильной группировки, результатом чего является ослабление сопряжения фе-нольных групп с карбоксилом. В результате щелочного плавления получена протокатеховая кислота. Сравнительной хроматографией на бумаге в различных системах растворителей с образцами оксикоричных кислот (по окраске и по величине хроматографической подвижности) установлено четкое совпадение с образцом кофейной кислоты. Проба смешения с образцом кофейной кислоты депрессии температуры плавления не дала.

При ацетилировании получено диацетильное производное, характерное для кофейной кислоты с т.пл. 196-197°. В ИК-спектре отмечены полосы 2780, 2810 см"1 (-ОН), 1630 и 1650 см"1 (С=0), 1380 и 1450 см (ароматические группировки), 1100, 1220, 1380 см"* (ЗН). Таким образом, на основании проведенных качественных реакций, хро-матографического исследования, химических превращений, а также данных УФ- и ИК-спектров данное вещество отнесено к диоксикоричным кислотам и идентифицировано как 3, 4-диоксикоричная (кофейная) кислота.

Хлорогеновая кислота. С раствором хлорида окисного железа вещество дает зеленое окрашивание, с раствором едкого кали - желтое, что характеризует его фенольную природу.Для установления структуры проведено щелочное плавление, гидролиз и ацетилирование. В результате щелочного плавления получена протека-теховая кислота, при щелочном гидролизе - кофейная кислота, ацетильное производное плавилось при температуре 183-185°, обнаружено 5 ацетильных групп. В УФ-спектре спиртового раствора вещества отмечены максимумы 328 и 245 нм.

В ИК-спектре обнаружены полосы поглощения при 1640 см"* (-СН=СН~), 2900-2970 см"* ( =СН~, -СН2-группы алифатической молекулы), 1690 и 1720 см"* (сложно-эфирные группировки). Таким образом, вещество охарактеризовано как 5-0-кофеил-])-хинная (хлоро-

геновая) кислота.

Нэохлорогеновая кислота. С диазотированной сульфаниловой кислотой образует коричневое окрашивание, с хлоридом окисного железа - зеленое, с раствором едкого кали -желтое. Положительная реакция с аммиачным раствором нитрата серебра, а также продукты щелочного плавления свидетельствуют, что соединение содержит орто-диоксигруппировку (рис.2).

По величине значений В./- и соответствующих окрасок при обработке парами аммиака, а также сравнения о образцом неохлорогвно-вой кислоты, установлено совпадение свойств с нэохлорогеновой кислотой, В У$-спектрах максимумы адсорбции в длинноволновой 325 нм, коротковолновой 245 нм, что характерно для производных оксикорич-ной кислоты. При щелочном гидролизе вещества получена кофейная и 7) -химная кислоты. Согласно найденным значениям молекулярной массой и элементарным составом полученного ацетата, вычислено 5 ацетильных групп. Депрессии температуры плавления с неохлорогеновой кислотой не наблюдалось. Таким образом, данное вещество охарактеризовано, как 3-0-кофеил-2) -хинная (неохлорогеновая) кислота.

Криптохлорогеновая кислота. На основании качественных реакций, флуоресценция пятен на хроматограм-мах и соответствующих окрасок при обработке реактивами вещество отнесено к оксикоричным кислотам. Щелочное плавление привело к получению протокахетовой кислоты.

Щелочной гидролиз I м. раствором едкого кали приводил к получению кофейной и 1>-хинной кислот. При ацетилировании уксусным ангидридом с последующим титрованием уксусной кислотой, выделившейся после омыления щелочью, определено 5, 4-ацетильных групп. В УФ-спектрах спиртового раствора вещества отмечены максимумы поглощения, характерные для эфиров оксикоричных кислот. Прибавление к спиртовым растворам вещества плавленного ацетата натрия вызывало батохромный сдвиг на 50 нм, под влиянием ацетата натрия и борной кислоты батохромный сдвиг на 25 нм первой полосы, т.к. в сложных эфирах карбоксильная группа блокирована хинной кислотой. Под влиянием этилата натрия в спектре наблюдался батохромный сдвиг 37 нм длинноволновой полосы, что указывает на то, что спектры сложных эфиров поглощают при большей длине волны, чем свободные кислоты, В ИК-области отмечены такие же максимумы, как и для хлорогеновой кислоты. При смешении с образцом криптохлорогеновой кислоты депрессии температуры плавления но наблюдалось. Таким образом, на

основании проведенных исследований вещество охарактеризовано как 4-0-кофеиаг1>-хинная (криптохлорогеновая) кислота.

Углеводное производное кофейной кислоты. Качественными реакциями с растворами хлорида окионого железа, едкого кали, окраске пятен на хроматограмме, вещество отнесено к производным оксикоричной кислоты. При сравнении с образцами 1«кофеил-1)~хинной, 3-кофеил-Д> -хинной, 4-кофеил-15 -хинной и 5-кофеил-> -хинной кислотами не наблюдали совпадения пятен, что позволило предположить, что данное соединение не тождественно известным производным оксикоричных кислот.

При щелочном гидролизе вещества получены кристаллы с т.пл. 196-197°, смешанная проба которых с образцом протокатеховой кислоты депрессии температуры плавления не дали. Гидролиз вещества 1% раствором серной кислоты приводил к получению кофейной кислоты. В гидролизате после отделения кофейной кислоты и нейтрализации на колонке с анионитом, хроматографией на бумаге обнаружена 2) -глюкоза, ь-рамноза и ¿.-ксилоза,

В УФ-спектро отмечены характерные полосы для эфиров оксикоричных кислот. Таким образом, данное вещество на основании качественных реакций, хроматографического поведения, химических свойств, данных УФ-спектра является углеводным производным кофейной кислоты, сахарная часть которого представлена глюкозой, рампозой и ксилозой.

Феруловая кислота. Вещество на основании качественных реакций со спиртовыми растворами едкого натрия, хлорида окисного железа и соответствующих окрасок на хроматограммах, до и после обработки специфическими реактивами,-отнесено к окси-коричным кислотам. На основании полученных данных молекулярной массы и элементарного состава вещества, а также молекулярной массы и элементарного состава полученного ацетата определена одна ацетильная группа. Щелочное плавление вещества приводило к поучению продукта, идентифицированного хроматографией на бумаге с образцом ванилиновой кислоты. В УФ-спектрах спиртового раствора отмечены максимумы поглощения при длинах волн 319 и 234 нм, характерные для феруловой кислоты. Прибавление к спиртовому раствору вещества ацетата натрия приводило к сдвигу максимума длинноволновой полосы в сторону более коротких длин волн (-13 нм), что обуславливается тем, что. ацетат натрия является основным для ионизации только карбоксильной группы в этом соединении.Сле-

Схема химического анализа оксикоричных кислот.

¿ц-си-с^

6 А

/

еи-см-^**

СК^Н-С^у

СИ-<!«-<? «о

Сеи%Сп)гО

о1е

Рис.2.

довательно, ионизация карбоксильной группы вещества уменьшает вклад этой группы в резонанс системы, что приводит к сдвигу в сторону более коротких дилн волн. С этилатом натрия одвиг максимума незначительный (I нм) в сторону более длинных волн, что также является характерным для монооксикоричных кислот. На основании качественных реакций, хроматографического исследования, химических превращений, данных УФ-спекгров, вещество охарактеризовано как 4-окси-З-метокси-коричная (феруловая) кислота.

4-0-__р-£>«глюкопиранозид кофейной кислоты. На основании цветных реакций с диазоти-рованной сульфаниловой кислотой, растворами хлористого железа, едкого кали вещество отнесено к фенольным соединениям. В результате кислотного гидролиза образуется 3>-глюкоза и кофейная кислота. Реакция с аммиачным раствором нитрата серебра и продукты щелочного расщепления показывают, что соединение содержит орто-диоксигруппировку. С реактивом Фелинга вещество после гидролиза дает положительную реакцию, что свидетельствует о замещении полуацетильного гидроксила сахара кофейным остатком; ферментолизом рамнодиастазой подтверждается ^ -конфигурация гликозидной связи. Таким образом, на основании качественных реакций, гидролиза, аце-тилирования, щелочного расщепления, физико-химических свойств данное соединение можно охарактеризовать как 4-0-В-:2) -глюкопирано-зид кофейной кислоты.

3.2.3. Кумарины. Основные свойства изученных кумаринов показаны в таблице 5.

Скополетин, На хроматограммах обнаруживается по ярко-голубой флюоресценции, усиливающейся при обработке парами аммиака или щелочью. С диазотированной сульфаниловой кислотой дает красное окрашивание, с хлорным железом - зеленое. Иодистово-дородная кислота в среде жидкого фенола и уксусного ангидрида расщепляют его до кумарина. Т.пл. ацильного производного 142°. % СН<эС0«18,3, что соответствует одной ацетильной группе. Т.пл. метального производного 146-147°. Смешанная проба его с димето-оксикумарином депрессии температуры плавления не давала. В ИК-спектре имеются полосы поглощения при 3064 см" (С-Н-бензольного кольца), 3122 см**1 (С-Н-пирона), 1730 см"* (С-0-пирона), а также полосы поглощения 2985 см"* и 2843 см" , обусловленные ас-симетричными и симметричными колебаниями метильной группы в ОСН^.

Основные свойства выделенных кумаринов и источники их получения

-г—---—-г-

! Названия веществ и их ! Источники п/п ¡структурная характеристика! выделения

М.м.

Т.пл. С

/а/% ! Общая град* ! формула

I. Скополетин

Адонис волжский,

лапчатка прямо- 192 203-205

стоячая

СМН8°4 73

2. Умбеллиферон

Адонис волжский,

лапчатка прямо- 162 232-234

стоячая.

С9Н603 41, 43 5 1

В связи о вышеизложенным, данное охарактеризованное вещество кок 6-метокси-7-оксикумарин или скополетин.

Умбеллиферон. На фенольный гидроксил дает аналогичные качественные реакции как и скополетин. В ИК-спектре имеются полосы поглощения, специфичные для кумаринов. Т.пл. ацильно-го производного 142°, % СНзСО-18,3, т.е. имеется одна оксигруппа. Батохромный сдвиг в УФ-спектре с ацетатом натрия указывает на наличие свободной -ОН группы фенольной природы. Вещество охарактеризовано как 7-оксикумарин или умбеллифорон,

3.2.4. Сердечные гликозиды. Выделенные вещества мы отнесли к карданолидам. Основные свойства изученных карденолидов показаны в таблице 6. Они дают положительные реакции Легаля, Раймонда, Либер-мана-Бурхарда, что указывает на наличие в молекулах стероидных соединений ненасыщенного пятичленного лактонного кольца. В УФ-спек-трах имеются два максимума поглощения 220 нм и 303 нм, что характерно для пятичленного лактонного кольца у Стр и карбонильной группы при Cjq. В ИК-спектрах, наряду с максимумом поглощения бутено-лидного кольца (1640 см"* и 1956 см"**) имеется полоса поглощения при 1734 см , характерная для карбонильной группировки.

Строфантидин. Ацильное производире имеет т. пл. 240-242°. В ИК-спектре имеются полосы поглощения при 3400-3200 см, 1777 сн , 1725 см" , 1622 см"*. Обработкой уксусным ангидридом в среде безводного пиридина получено моноацильное производное (?25%4®7 о т.пл, 242-243°. Из трех, имеющихся в молекуле гидрок-сильных групп только одна ацетилируется, две другие, по-видимому, являются третичными и располагаются при Cj^ и Сд. Наличие второй гидроксильной группы с наибольшей вероятностью следует ожидать у Сэ. Физико-химические свойства исследуемого вещества характерны строфантидину.

Цимарин. Кроме качественных реакций, характеризующих стероидное ядро и бутенолидное кольцо, вещество дает положительную ксантгидрольную реакцию на дезоксисахара. В результате кислотного гидролиза получены строфантидин и цимароза (т.пл.91°). Температура плавления полученного ацильного производного исследуемого вещества 160-162°. Депрессии температуры плавления с цимари-ном не наблюдалось, что свидетельствует об их идентичности.

К-с трофантин-JJ. Дает положительные реакции Легаля, Раймонда, Вебб-Леви. В УФ-спектре имеются полосы поглощения

Основные свойства кардоноладов выделенных из адониса волжского

)ЙГ~| Названия веществ и их ¡7Г п/п|структурная характеристика; *

Т пл °П г/аТ^Т! Общая о 5 ГраД| формула

Опубликовано (литература)

I» Строфантидин (3, 5, 14-три-Г'идрокои-19-оксо-5В-кард-20:22-внолид).

2. Цимарин (строфантидин-3-0-Д- £)-цимарозо-пиранозид).

3, К-строфантин-^В (строфанти-дин-3-0гВ-Ь-цимарозопира-нозида^' 4 •*!> -0-&-Т) -глв-копиранозид).

К-строфантозид (строфантидин-3-О-В-З) -ци ыаро з опи рано э и да 878 ¿4 -О-Э-л-глвкопирано-зида < 4 1> О—В—Х) -глюкопира-нозид.

5. Конваллатоксин (строфантидин -З-О-^с -¿. -рамнопиранозид). 550

6. Адонитоксин (14» 16-дигидро-кси, 19-оксо-3-(0-(^ -и -рам-550 нопирано зи л )-5^-кард-20:22« енолид).

404 138-143 +43 С23Н32°6 43, 45, 63

550 137-139 +37 С30Н44°9 45

703 187-193 +32 СЗбН54°14 45, 63

179-182 +13,8 С42Н6^019 43,45

245-247 -4 ^дН^О^ 43, 45 аморф. -27 С29Н42010 43, 45

-е-

с максимумами при 203 и 320 нм, что характерно для гликозидов строфантидинового ряда. Кислотный гидролиз по Манниху дал строфа-нтидин, сахара З-цимарозу и -глюкозу. При ферментативном гидролизе обнаружили цимарин и 15-глюкозу, На основании полученных данных вещество охарактеризовано как строфантидин-глюко-цимарозид или К-строфантин~}3.

К-строфантозид. В результате кислотного гидролиза 0,1 н серной кислотой обнаружили агликон строфангидин и сахара строфантотриозу, цимарозу и глюкозу. При ступенчатом ферментативном гидролизе на хроматограммах обнаруживаются цимарин и К»стро-фангин-^. Результаты кислотного и ферментативного ступенчатого гидролиза позволяют представить структуру этого вещества как строфа-нтидин-З-О-^В-Т) -цимаропиранозо-(4 )-0-^3~Е>-глюкопиранозо-(4 )~ 0~р»])-глюкопиранозид или К-строфантозид.

Конваллятоксин. Получен триацетат с т.пл. 232234°. В результате кислотного гидролиза получен агликон строфанти-дин и сахар I -рамноза. Вещество охарактеризовано как конваллятоксин,

Адонитоксин. Аморфное вещество. В результате кислотного гидролиза получены адонитоксигенин и сахар Ь -рамнозу. Хроматографическое поведение равноценно адонитоксину.

3.2,5. Иридоиды. Основные свойства изученных монотерпеновых гликозидов - иридоидов показаны в таблице 7.

8-ацетилгарпаг ид. С реактивами Шталя, Трима и Хилла образует растворы, окрашенные в синий цвет, на хроматограм~ мах образует растворы грязно-фиолетового цвета. С реактивами Бекон-Эдельмана- на хроматограммах в виде темно-коричневого пятна, в УФ-своте имеет красно-фиолетовую флуоресценцию. При энзиматическом расщеплении эмульсином получена2> -глюкоза. Отщепление 3)-глюкозы эмульсином подтверждает наличие ^-конфигурации гликозидной связи. Омылением 25$ водным аммиаком получены гарпагид и уксусная кислота, обнаруженная методом хроматографии на бумаге в виде гидрокса-мата.

В ИК-области отмечены полосы при 1636, 1670 и 1680 см"* (изолированные двойные связи), 1625 и 1660 см" (энольно-эфирная группировка), 887 см"1 (В~гликозидная связь), 1005-1031 см" (пира-нозная форма сахара).

Таким образом, на основании качественных реакций, хроматогра-

Основные свойства выделенных иридоидов и источники их получения

} Названия веществ и их п/п;структурная характеристика

Источники выделения

Мм ¡т ли °С ¡/а/ Л1 0б1«ая М.м.Л.пл. О Iград I формула

Опубликовано (литература)

з.луговой,пус-

тынноколосник

Фитисова

1. Гарпагид (5, 6, 8-триокси- Зопник клубненос-8-цис-метил-пентапиран-1- ный, панцерия 362 151-152 В-7/-глюкопиранозид). серебристобелая

' з.луговой,пус-

тынноколосник Фитисова.

2. 8-ацатилгарпагид (5, 8-ди- Зопник клубненос-окси-8-цио-метил-8-ацетил- ный, панцерия 409 154-155 циклопентапиран-ЗМЗ-.]) - серебристобелая глюкопиранозид).

3. Прокумбит (5, 6, 7, 8-тет- Зопник клубненос-раокси-З-метил-цикло-пен- ный,з.колючий, 379 213-214 тапиран-1-8-т «глакопира- белокудренник

нозид). " черный, з.луговой

4. Аукубин (1~8-])-гяюкопира~ Белокудренник

нозид-7, 8, б-эпокси-8- черный 324 180-182

мегиланоксииридоид).

5. Аукубин-8-ацетат Белокудренник 408 аморф.

черный

6. Каталпол -глюкопи- Живучка Лаксма- 374 203-205 ранозид-7, 8-эпокси-8-ме- на

тиленоксииридоид).

-154 Ст.Н?,0то 31, 52, 53, 61, 15 ¿4 10 б0> 59( 63

-132 СТ7Н?(-0ТТ 31, 52, 53, 61, 17 25 II б7> 60' зд* 63'

-82,3 С15Н240п 44, 52, 53, 67,

-162 С15Н2209 53 -143 С1уН2^010 53 -121 С15Н22011 53

■со

фического анализа в различных системах растворителей, физико-химических свойств, энзиматического расцепления, омыления, гидроксами-нолиза, а также исследований Щ- и ЯМР-спектров, вещество охарактеризовано как 5, 6-диокси-8-цис-метил-8-ацетил-циклопентапиран-1-_р-2)-глюкопиранозид или 9-ацетилгарпагид. (Рис.3).

Гарпагид. При энзиматическом расщеплении эмульсином была получена X) -глюкоза. Гидролиз вещества I н. раствором хлористоводородной кислоты приводил к разрушению агликоновой части, а в фильтрате, после нейтрализации на колонке с анионитом АВ-17, обнаружена 2> -глюкоза. При ацетилировании уксусным ангидридом в пиридине получено ацетильное производное с т.пл. 132-133°, характерное для ацетилироизводных групп гарпагида.

В ИК-области спектра отмечены области при 1270 см"** ( =С-0-), 1148, 1420 и 3350 см*1 (-ОН), 1625 и 1660 см"1 (энольно-эфирная группировка), 886 см"* ф-гликозидная связь), 1000-1031 см (пира-нозная форма сахара).

Данные ЯМР-спектра приведены в таблице 8.

Табл.8

ЯМР характеристика прокумбита, гарпагида и его ацетата

-г Вещество ] ! Про тонн (м.д 1 Протоны заместителя у Со ] (м.д.)

И-1 | Н-3 1 ** 1 Н-6 \ Н-7 | Н-9

8-ацетилгар-пагид 5,57 6,11 4,75 5,37 2,22 4,05 2,67 1,14

Гарпагид 5,95 6,90 5,54 2,53 4,02 2,88 1,95

Прокумбит 5,45 6,64 5,00 3,91 3,53 2,48 1,57

Таким образом, вещество охарактеризовано как 5, 8-триокси-8-метил-циклопентапиран-1^В~'1}-глюкопиранозид или гарпагид.

Прокумбит.С реактивами Шталя, Трима и Хилла вещество дает характерные окрашивания.

Энзиматическое расщепление эмульсином приводило к получению Т> -глюкозы, что указывает на наличие 3-конфигурации гликозйдной связи. Д) -глюкоза идентифицирована хроматографированием на бумаге и по реакции образования озазона, полученного по известной методике. В ИК-спектре отмечены максимума как и для гарпагида. В ЯМР-спектре имеется дуплет при 6,64 м.д. СН-3), 5,00 м.д. (Н-4),

3,91 м.д. (Н-б). Мультиплет 3,53 м.д. (Н-7) и синглет 1,57 м.д. (метильная группа, находящаяся в положении 8). Дуплет 5,45 м.д. соответствует протону 2> -глюкозы в положении I.

На.основании проведенных исследований вещество охарактеризовано как 5, 6, 7, 8-тетраокси-8-метил-циклопентапиран~1-В» £>-глю-копиранозид или прокумбит.

Каталпол.С реактивом Бекон-Эдельмана вещество проявляется в виде желтого пятна. В результате гидролиза обнаружена -глюкоза, которая связана с агликоном ^связью. При ацетилиро-вании вещества получен гептаацетилкаталпол. В ИК-области спектра отмечены полосы при 890-920 см"** (полоса.В-гликозидной связи), 1000-1031 см"* (три полосы пиранозной формы сахара), 1661, 1700 см~* (полосы, вероятно, обусловленные енольно-эфирной группировкой), 1669 см"* ( -С-С=С-группировки), 3300-3400 см"* (спиртовые группы). На основании качественных реакций, кислотного гидролиза, знзиматического расщепления и спектральных исследований вещество охарактеризовано как I^В-х>-глюкопиранозид-7, 8-эпокси-8-метиле~ ноксииридоид или каталиол.

Аукубин. На основании качественных реакций с реактивами Шталя, Трима и Хилла соединение отнесено к аукубиноподобным веществам. Энзиматическое отщепление £> -глюкозы указывает на^-гликозидную связь. Получен гексаацетилаукубин с т.пл. 126-128°. В ИК-спектре обнаружены полосы поглощения, что и для каталпола. На основании проведенных исследований установлено, что вещество представляет собой 1-В-1) -глюкопиранозид-7, 8, б-окси-8-мвтиленокси-иридоид.

Аукубин-8-ацотат. Вещество дает положительные реакции на иридоиды аукубипового типа. При омылении аммиаком оно расщепляется на аукубин и уксусную кислоту. Получек гексааце-тат аукубина. При гидролизе обнаружена Д) -глюкоза, сзязанная с агликоном ^-связью. Очевидно, иридоид представляет собой аукубин, ацетилированный уксусной кислотой по свободному спиртовому гидро-ксилу у Сд.

4» Изучение основных анатомических признаков надземных органов адониса волжского, белок.удропника черного и лапчатки прямостоячей

Учитывая близость по химическому составу и фармакологическо-

Схема химического анализа иридоидов

Рис.3

му действию адониса весеннего и а.волжского, надземной части и подземных органов лапчатки прямостоячей, а также то, что белоку-дренние черный в перспективе может служить дополнительным источником препаратов седативного действия мы провели анатомическое исследование надземных органов а.волжского, б,черного и л.прямостоячей. Анализу анатомического строения подвергли стебли, листья, частя цветков и плоды.

Надземная часть а.волжского была заготовлена в фазах цветения (апрель) и начала плодоношения (май) на юго-востоке Украины (Донецкая, Днепропетровская и Запорожская области). Сырье б,черного было заготовлено в фазы цветения (июль) и плодоношения (август) в 14 районах Курской области^ а л.прямостоячей - в мае-июле в этих же местах.

4.1. Отличительные анатомические признаки адониса волжского ( ¿¡с/е/г^ .//У; ) /46/. Стебель цилинд-

рический с неглубокими ребрами. Проводящие пучки, расположенные по окружности в периферической части стебля, коллатеральные, в очертании обратнояйцевидной формы, неодинаковые по величине (крупные чередуются с мелкими); количество их изменяется по длине стебля: в нижней части насчитывается 23-29, в верхней - 14-18. Клетки эпидермы на поперечных срезах стебля овально-четырехугольной формы, почти не отличаются но величине от клеток коровой части стебля. Устьичнае клетки расположены, как правило, на уровне эпидермальных, кутикула имеет складчатость, заметную на срезе в виде зубчиков. Коровая часть не широкая, состоит из четырех-пя-ти слоев клеток округло-овальной формы, в ней наблюдается много крупных межклетников. Флоэма проводящих пучков состоит из тонкостенных многоугольных (на поперечном срезе) клеток небольшого размера. Многочисленные толстостекныо лубяные волокна имеют многоугольную форму сечения. Сосуды в ксилеме расположены беспорядочно, диаметр их от 10 до 50 мкм. Клетки древосной паренхимы толстостенные, небольшого размера. В целом ксилема по объему превышаот флоэму в 2 раза. Межпучковая паренхима и сердцевина состоят из тонкостенных клеток, причем у первой они несколько удлиненные в радиальном направлении, а у второй - округлой фор-ми разного размера (от 10 до 60 мкм). Клетки эпидермы вытянуты параллельно продольной оси стебля, часто с заостренными концами. Оболочки клеток имеют слабо выраженную четкозидность. Устьица

встречаются редко, иногда расположены парами, ориентированы параллельно продольной оси стебля и сопровождаются четырьмя околоус-тьичными клетками, Кутикулярный слой с четко выраженной продольной складчатостью. Волоски простыв, одноклеточные, лентовидные, со спиральной складчатостью кутикулы. Они встречаются в большом количестве в средней и верхней частях стебля.

Мезофилл листа дозивэнтральный. Палисадная ткань однорядная, не прерывается в центральной жилке и занимает треть толщины мезофилла. Губчатая ткань рыхлая, она состоит из лопастных клеток, благодаря чему образуется множество межклетников. Проводящие пучки центральной и боковых жилок малого размера, коллатеральные, без механических элементов, причем количество пучков боковых жилок у обеих половин долек, как правило, неодинаково: 2-3 с одной стороны, 3-4 - с другой. Клетки верхней эпидермы на поперечном срезе в от-новном овальной формы, неодинакового размера, с несколько утолщенной внешней стенкой. Клетки нижней эпидермы отличаются меньшими размерами от таковых верхней эпидермы. На обеих эпидермах встречаются простые, одноклеточные, лентовидные волоски длиной 250-340 мкм. Верхняя эпидерма в плане состоит из крупных, почти изодиамет-ричных клеток со слабоизвилистыми контурами. Устьица отсутствуют. Волоски в незначительном количестве. Основание окружено, как правило, 5-ю эпидермальными клетками. Нижняя эпидерма в плане имеет клетки с сильноизвилистыми контурами, несколько удлиненные параллельно продольной оси листа. Устьица ориентированы вдоль продольной оси листа, иногда расположены попарно. Волоски в значительном количестве (в среднем 20 на I мм^). Кутикула верхней и нижней эпидермы имеет продольную складчатость, волоски на обеих эпидермах со спиральной складчатостью кутикулы. Черешок листа на поперечном срезе имеет (/ -образную форму. Проводящие пучки в количество 5 расположены в мезофиле в один ряд. Поверхность черешка покрыта волосками, преобладающими на внешней стороне.

Чашелистик имеет рыхлый гомогенный мезофилл, состоящий из клеток овально-округлой формы. Эпидерма внутренней и внешней сторон представлена клетками овальной и овально-четырехугольной формы разнообразных размеров. Внешняя эпидерма покрыта складчатой кутикулой, которая на поперечном срезе имеет мелкие зубчики. Клетки внутренней эпидермы в плане вятянуты параллельно продольной оси чашелистика, часто с заостренными концами. Устьица отсутствуют. Внешняя эпидерма чашелистика состоит из почти изодиаметрических

клеток, имеющих извилистые стенки и покрытых продольно-складчатой кутикулой. Устьица несколько углублены, встречаются часто. Волооки простые, одноклеточные, густо покрывают эпидерму. Лепестки имеют эпидермальные клетки, вытянутые вдоль их продольной оси. Устьица отсутствуют.

Цветоножка характеризуется розко выраженной ребристостью. Ее строение на поперечном срезе подобно таковому стебля; отличие заключается лишь в меньшем диаметре, ребристости и меньшем количестве проводящих пучков. Поверхность цветоножки сильно опушена простыми, одноклеточными, лентовидными волосками длиной 320-460 мкм.

На поперечном срезе орешки имеют в очертании неправильную пятигранную форму. Внутри орешка заключено семя о относительно крупным зародышем. В паренхиме перикарпа встречаются проводящио пучки. Внешняя эпидерма (экзокарп) околоплодника состоит из крупных четырехугольных клеток о утолщенной внешней стенкой. Паренхима мезокар-па состоит из двух типов клеток: периферическая часть построена из крупных клеток многоугольной формы, а внутренняя - из мелких, несколько удлиненных в тангентальном направлении клеток. Эндокарп и эпидерма семени имеют клетки также несколько удлиненные в тангентальном направлении. Внешняя эпидерма перикарпа состоит из почти изодиаметрических клеток со слабо извилистыми стенками. Кутикуляр-ный слой имеет продольную складчатость. Устьица отсутствуют. Волоски в большом количестве, их основания окружены розеткой из нескольких эпидермальных клеток с радиально расходящейся складчатостью кутикулы. Эндосперм семени (на поперечном срезе) состоит из тонкостенных овально-многоугольных клеток, переходящих в узкие, танген-тально удлиненные во внутренних его слоях. Эпидерма зародыша хорошо различима, она состоит из тонкостенных овальных клеток, несколько удлиненных радиально.

4.2. Отличительные анатомические признаки белокудронника черного ( J'3¿7(/fc^tc■Jt псуха <2 ) /63, 71/. Стебель 4-гранной формы с несколько закругленными и выступающими ребрами. На поверхности стебля встречается множество простых толстостенных двух-трехклето-чных, реже двух-четырехклеточных волосков с суставообразными сочленениями клеток, имеющих луковицеобразные основания, приподнятые над поверхностью стебля. Поверхность волосков покрыта бородавчатой кутикулой. Кроме указанных волосков встречаются головчатые волоски двух типов: с двухклеточной головкой на двух-трехклеточной ножке и

о одно-двухклеточной головкой на. одноклеточной ножке. Характерной особенностью головчатых волосков первого типа является то, что у них базальная клетка длинная, а две другие (перед головкой) очень короткие. Эпидерма на ребрах и на гранях состоит из изодиаметрич-ных или слегка удлиненных клетбк с округло-прямолинейными стенками. В ребрах стебля наблюдаются мощные участки колленхимы. Норовая часть неширокая, состоит из трех-четырех слоев клеток овальной формы, несколько тангентально удлиненных. Осевая часть стебля отделена от коровой части эндодермой, состоящей из крупных клеток овальной формы. Проводящая система стебля образует сплошные кольца флоэмы и ксилемы, наиболее развитые в ребрах. Отдельными группами встречаются лубяные волокна. Сердцовина стебля состоит из тонкостенных округлых клеток, размеры которых постепенно увеличиваются по направлению к центральной полости. Поверхность эпидермы стебля в области грани состоит из прямостенных, почти изодиаметричных многоугольных клеток, иногда слегка удлиненных вдоль продольной оси стебля, а в области ребер - из клеток прозенхимного типа. Она и в области граней, и в области ребер покрыта простыми и головчатыми волосками, причем простые волоски преобладают на эпидерме ребер. Устьица находятся только на эпидерме граней и сопровождаются, как правило, двумя эпидермальными клетками, расположенными перпендикулярно к устьичной щели. Кутикула эпидермы имеет радиальную складчатость, Довольно редко на эпидерме стебля встречаются эфирномасличные железки.

На поперечном срезе черешка листа видны боковые выросты (крылья). Проводящие пучки коллатерального типа размещены в центральной части черешка в количестве двух-трех и по два в боковых выростах. На абаксиальной стороне черешка размещено 1-2 ряда клеток колленхимы. На верхней и нижней поверхности черешка встречаются простые двух-трехклеточные волоски с бородавчатой кутикулой и головчатые с двухклеточной головкой на одноклеточной ножке. Главная жилка листа имеет строение, подобное строению черешка, однако флоэма и ксилема образуют один пучок. Листовая пластинка имеет дорзивентра-льный тип строения с однорядной палисадной тканью, состоящей из сильно удлиненных клеток. Губчатая ткань многорядная, состоит из округлых и округло-овальных клеток. На обеих поверхностях пластинки встречаются простые и головчатые волоски. Верхняя эпидерма листа состоит из крупных клеток, имеющих слабоизвилистые стенки. Устьица отсутствуют. В значительном количестве на верхней эпидерме

встречаются простые двух-, реже трехклеточные толстостенные волоски с бородавчатой кутикулой, реже наблюдаются головчатые волоски на одно- и трехклеточной ножке. Нижняя эпидерма состоит из клеток с силыюизвилистыми стенками. Устьица встречаются в значительном количестве. Они диацитные и сопровождаются двумя, редко тремя-чв-тырьмя клетками. На нижней эпидерме в отличие от верхней встречаются более короткие простые одно- и двухклеточные волоски. Головчатые волоски на нижней эпидерме аналогичны таковым на верхней эпидерме. Редко встречаются эфирномасличные железки о крупными головками, характерными для сем.яснотковых.

Чашечка на поперечном срезе имеет ребристую структуру. В ребрах расположены проводящие пучки коллатерального типа. На внешней поверхности наблюдаются многочисленные простые одно-, реже двухклеточные (на ребрах) волоски и в незначительном количестве головчатые на одноклеточной ножко с двухклеточной головкой. На поперечном срезе в средней и верхней частях чашечка имеет также ребристую структуру, однако опушенность наблюдается как на внешней, так и на внутренней стороне. При этом в значительном количестве на обеих поверхностях находятся простые одно-двухклеточные волоски, реже головчатые. Склерэнхимные волокна наблюдаются в ребрах, а в мезофильной части встречаются редко в виде отдельных групп волокон. Характерной особенностью чашечки у основания является наличие в ребрах над пучками (и в ее мезофилле) сплошного пояса механической ткани, состоящей из склеренхимных волокон. Волокна ориентированы вдоль продольной оси и в мезофильной части образуют одно-двухрядные слои. Мезофилл чашечки во всех частях слабо развит и состоит у основания ее, как правило, из одного ряда, а в средней и верхней частях - из трех рядов округло-овальных клеток. Внешняя эпидерма чашечки состоит из клеток с извилистыми стенками. Устьица в незначительном количество сопровождаются двумя, очень редко че-тырьмя-шсстыо клетками. На внешней эпидерме в большом количестве встречаются простые короткие одно- и двухклеточные (на жилках) волоски с бородавчатой кутикулой. Реже наблюдаются головчатые зо-лоски с двухклеточной головкой на одноклеточной ножке. Внутренняя эпидерма состоит из клеток с сильно извилистыми стенками. Устьица отсутствуют.' В значительном количестве встречаются простые одноклеточные короткие и двухклеточные (по жилкам) волоски с бородавчатой кутикулой. Характерной особенностью чашечки является наличие в средней части краев зубчиков головчатых волосков на длин-

ной трех-четырехклеточной ножке с крупной двухклеточной головкой.

Прицветник имеет шиловидную форму с сильноопушенными краями и жилками в вида простых одно-, двух- и реже трехклеточных изогнутых волосков с бородавчатой кутикулой. Реже встречаются головчатые волоски с одно-двухклеточной головкой на одноклеточной ножке. Клетки эпидермы прямостенные, удлиненные по оси прицветника.

Внешне эпидерма листочка околоцветника (лепестка) верхней губы состоит из неоднородных клеток. У основания и в средней части она состоит из прямостенных удлиненных вдоль оси листочка клеток, а в верхней части - из изодиаметричных клеток. Поверхность верхней губы снаружи сильно опушена волосками четырех типов: в верхней части губы преобладают группы (пучки) волосков, которые имеют центральный длинный крупный двух-трехклеточный волосок с луковицеобразным основанием и ответвляющиеся от него 5, 10 или 15 одноклеточных коротких волосков; в средней части имеются длинные простые одноклеточные тонкостенные волоски с одной или двумя короткими ба-зальными клетками; редко встречаются головчатые волоски на одно-леточной ножке с двухклеточной головкой. По краю вершины губы наблюдаются пяти-самиклеточные длинные тонкостенные простые слегка ступенчатойзвилистые волоски с нежной бородавчатостью кутикулы. Внутрення эпидерма верхней губы имеет аналогичное строение, но в отличие от внешней на ней не наблюдается опушенности. Однако у основания имеются одноклеточные крупные волоски, образующие сплошное кольцо. Внешняя эпидерма нижней и верхней губ имеет аналогичную структуру. На ней видна опушенность в виде простых длинных волосков с короткой расширенной базальной клеткой, реже группы волосков. В значительном количестве встречаются эфирномасличные железки и редко головчатые волоски. В отличие от верхней губы на вершине нижней опушенности нет. На внутренней эпидерме нижней губы одноклеточные волоски наблюдаются у основания. Они образуют, как и на верхней губе, сплошное кольцо. В нижней части тычиночной нити встречаются эфирномасличные железки, а также конусовидные одноклеточные грубые волоски. В средней части тычиночной нити преобладают тонкостенные простые многоклеточные, часто со спавшимися или перекрученными клетками волоски, реже - головчатые с двухклеточной головкой на одно-двухклеточной ножке.

4.3. Отличительные анатомические признаки лапчатки прямостоячей ( ^тУ/?///У^у ^гсс/п /■?су* ечс/г)» Клетки эпидермы стебля по всей высоте прямостенные, удлиненные. Устьица встречаются редко. Волоски простыо и железистые в значительной степени встречаются в средней и верхней частях стебля. Головчатые волоски на многоклеточных ножках с 1-2-3-4 клеточной удлиненной головкой. Ре-жо встречаются простые толстостенные волоски.

Клетки в верхней эпидерме листа имеют прямые стенки, а у нижней - слабоизвилистые. Устьица только на нижней эпидерме аномоцит-ного типа. Листья о обеих сторон по жилкам покрыты простыми одноклеточными толстостенными волосками с заостренным концом. Встроча^-ются волоски железистые на трех-пяти клеточной ножке с трех-пяти клеточной удлиненной головкой. Редко встречаются железистые волоски на одноклеточной ножке с одноклеточной продолговатой головкой. Нелезистых волосков, как и простых, больше встречается по жилкам и реже на пластинке. В мезофиле листа имеются друзы. Оволошеннссть средних и верхних листьев более выражена. Полисадная ткань двухрядная, губчатая ткань - 4-5 рядная. В клетках мезофила на границе палисадной и губчатой ткани встречаются в большом количестве друзы оксалата кальция.

У больших и малых листочков чашечки клетки внешней эпидермы слабоизвилистые, устьица анамоцидного типа. Клетки внутренней эпидермы прямостенные с четковидными утолщениями стенок. На обоих эпидермах встречаются железистые и простые одноклеточные толстостенные волоски. По краю листочка чашечки наряду с толстостенными, редко встречаются тонкостенные волоски. В мезофиле листочков встречаются в большом количестве друзы оксалата кальция, особенно у основания и средней части. Клетки нижней эпидермы листочков околоцветника имеют сильно извилистые и ломанные контуры. Клетки верхней эпидермы прямостенные меньшего размера с попилевидными выростами.

5. Применение разработанных устройств для проведения фитохимического анализа.

При выделении природных комплексов и индивидуальных соединений, их очистке и анализе зачастую возникают трудности с аппаратурой. Нами созданы ряд устройств, необходимых в практике фито-химика /55/.

Дли извлечения природных соединений разработаны лабораторное устройство для экстракции /I, 50/ и устройство для приготовления концентрированных растворов /57/, которые могут применяться в комплексе, При этом автоматизируются ряд процессов, которые обычно выполняются вручную, улучшаются условия труда, исключается возникновение ситуации перебросов. Кроме того, благодаря замкнутым системам, уменьшается вероятность загрязнения воздуха рабочих помещений парами вредных растворителей.

С целью очитски извлечений или элюатов разработано устройство для экстракции жидкости парообразным растворителем /7, 48/, которым, благодаря увеличению площади соприкосновения экстрагируемой жидкости с экстрагентом, улучшается качество очистки. Кроме того, данным устройством возможно отделение веществ агликонового типа.

Разработанное нами хроматографическое устройство /70/ дает возможность удаления с хроматографической колонки зон с индивидуальными веществами или примесями без прекращения работы. Однако при хроматографическоы разделении нередко необходимо применение элюентов с определенной температурой. С этой целью создано устройство для жидкостной хроматографии /4, 51/, при работе с которым происходит дозированная подача в хромагографическую колонку элюента с заданной температурой и термостатирование всей системы.

Наше устройство для дробной возгонки /5, 48/ обеспечивает получение индивидуальных зон возгона и дает возможность количественной возгонки.

Для совершенствования процесса восходящей хроматографии разработано устройство для прекращения хроматографического процесса.

Эти устройства удобны в работе, просты по конструкции, состоят из доступных частей и могут быть собраны в любой фитохими-ческой лаборатории (рис.4).

5.1. Весовой порционный дозатор сыпучих материалов /2/. Для увеличения точности взятия навески устройства (рис.5) снабжено дополнительной заслонкой, введенной в бункер через выполненное в нем окно посредством подвижной уплотнительной пластины и электромагнитом качения бункера, сердечник которого шарнирно связан с бункером, а ложка-дозатор снабжена вибратором и электромагнитом, последовательно включенными и индуцирующим прибором в цепь источника постоянного тока, и контактом, подключающим электромагнит ка-

Схема фитохимического исследования растительного сырья, разработанными устройствами

Экстракция сырья и переведение в воду

I "

Взятие иавески сырья, или фасовка

Хроматографическое разделение

Контроль восходящей хроматографией на бумаге

4 или 5

т

Концентрирование элюатов

I 1

Очистка водного ^

раствора ^

Разделение или очистка веществ дробной возгонкой

СИ]

I, Весовой порционный дозатор сыпучих материалов. 2, Лабораторное устройство для экстракции. 3, Устройство для экстракции жидкости парообразным растворителем. Устройство дли жидкостной хроматографии. 5. Хроматографическое устройство. 6. Устройство для прекращения хроматог-рафйческого процесса. 7. Устройство для приготовления концентрированных растворов. 8. Устройство для дробной возгонки.

Рис.4

I

ст.

- 62 -

Весовой порционный дозатор сыпучих материалов

I - бункер, 2 - ось, 3 - окно, Ч - шиберная заслонка, 5 - уплотни-тельная пластина, 6 - дозатор, 7, 12 - электромагнит, 8 - ложка-дозатор, 9 - призма, 10 - упор, II - рабочая площадка, 13 - источник питания постоянного тока,. 14 - гальванометр, 15 - выключатель, 16 - реостат, 17 - вибратор, 18 - контакт, 19 - источник питания переменного тока, 20 - выключатель.

чения бункера к источнику переменного тока.

Данное устройство обеспечивает автоматическое регулирование навески, что уменьшает трудоемкость настройки. Питатель-бункер подает вещество дозировано, что увеличивает точность устройства и предотвращает дополнительный расход материала, исключается также сводообразование.

5.2. Устройства для экстракции и концентрирования.

5.2.1. Лабораторное устройство для экстракции /I, 50/. Для повышения работоспособности в устройстве (рис.6) обогреваемый экстрактор снабжен фильтром и замкнуто соединен через холодильники с испарителем, приемником и вакуум-насосом.

Благодаря замкнутой цепи устройства и использования вакуум-насоса процессы загрузки растворителя-экстрагента, фильтрования экстракта, перекачка и повторное использование дистиллята, а также удалоние из сырья, после окончания экстракции, остатков растворителя производится полуавтоматически. Это позволяет уменьшить загрязнение рабочих помещений парами вредных растворителей и значительно увеличивает производительность труда.

5.2.2. Устройство для экстракции жидкости парообразным растворителем /7, Н9/. Для интенсификации процесса экстрагирования путем увеличения площади контакта экстрагируемой жидкости о экстраге-нтом в устройстве (рис,7) экстрактор выполнен в виде сферического сосуда, установленного с возможностью вращения вокруг горизонтальной оси и снабжен диаметрально расположенными горизонтальными отводами, один из которых соединен с дефлегматором, а другой - с испарителем. Экстрагент в приемнике-испарителе превращается в пар

и поступает во вращающийся экстрактор, в котором экстрагируемая жидкость, вращаясь вместе с экстрактором, распределяется по всей поверхности его пленочным слоем, а пары экстрагента, контактируя с пленочной поверхностью, конденсируются. За счет увеличения площади соприкосновения экстрагента с экстрагируемой жидкостью достигается интенсификация процесса экстрагирования.

Устройство обеспечивает по сравнению с существующими устройствами для экстракции улучшение процесса экстракции и диффузии за счет увеличения площади соприкосновения экстрагируемой жидкости с экстрагентом. Экстрагируемая жидкость, распределяясь пленкой по

Лабораторное устройство для экстракции

«

I - испаритель; 2 - влнтово.1 зажим; 3, 7, с, 9, 1->, 17, 20, 23, 2й,т2:>, 30 - краны; 5 -

змеейиковы/ холодильник; 10 - приемник; л2, -3 - шариковые холодильники; ¿.1, - сборники; 16 - экстрактор; 1& - шариковый'холодильник; а? - питательный сосуд; 21 - фильтр; 22 - манометр; ¿о, 27 - бани; 26 - термометр; 29 - вакуум насос.

Рис, 6

- ób

Уотройктзо для экстракции жидкости парообразным растъоритолем

I,- экстоок.тор, ¿, 3 - от^од:!, Ч - кран, 5 - привод зрачения, 6, iL-' - то;ло::эму. kohvs, ?, Л - слонж, с; - приомник-испари-Tfi.-.b, - l¿ - холодмьних-ггалохвднптель, 1.3 -

сферической охлажденной поверхности экстрактора, постоянно подвергается действию пара экстрагента, за счет чего увеличивается процесс диффузии веществ из экстрагируемой жидкости в экстрагент. 06-ращующийся экстракт без посторонней помощи самотеком сливается в приемник-испаритель. Кроме того, исключается вероятность образования эмульсии при экстрагировании, так как экстрактор находится з постоянном вращении. Устройство просто в изготовлении и эксплуатации.

5.2.3. Устройство для приготовления концентрированных растворов /57/. Для предотвращения переброса жидкости из испарителя в конденсатор в устройстве (рис,8) ротационный испаритель соединен с конденсатором через дефлегматор и уловитель переброса, который соединен с испарителем через сифонную трубку и змеевиковый холодильник, необходимый для охлаждения переброса, а охлажденный переброс сливаясь назад в ротационный испаритель, создает в нем такой температурный режим, который практически исключает перебросы. Устройство полностью исключает переброс концентрируемой жидкости в конденсатор, дает возможность концентрирования любых жидкостей, включая и растворы, склонные к пенообразованиа. Это приводит к значительному увеличению производительности труда.

5.3. Устройства для проведения хроматографического разделения и дробной возгонки

5.3.1. Устройство для жидкостной хроматографии /4, 51/. Для улучшения воспроизводимости условий работы за счет устранения разности температур между колонкой и подавемым в колонку элюентом,колонка в устройстве (рис.9) снабжена кожухом со спиралью нагревателя, включенного в цепь питания и регулирования, выход источника элюента - с верхней частью кожуха для подачи элюента самотеком. На входе в колонку установлен поплавковый клапан автоматической подачи элюента с прямоугольными окнами, соответствующими таким же окнам, выполненным в стенке колонки, а кожух снабжен змеевиковым холодильником для поддержания постоянного атмосферного давления в системе и конденсации паров растворителя.

Положительные отличия данного устройства заключаются в том, что термостатирование колонки с сорбентом производится путем нагрева в обогревающем кожухе растворителя, который одновременно яв-

Устройство для приготовления концентрированных растворов

I - ротационный испаритель, 2, II - трубка, 3 - кран, 4, 5 -

б' 7 " Уловит?ль, 8 - конденсатор, 9 - ¿ифадная трубка, 10 - холодильник, 12 - нагреватель.

- 68 -

Устройство для жидкостной хроматографии

I - колонка, 2 - метка, 3 - питающий сосуд, 4, 15, 19 - кран, 5 - трубка, 6 - клапан, 7 - обогревающий кожух, 8, 9 - окна, 10 - игла, II - поплавок, 12 - нагреватель, 13 - контактный термометр, 14 - стеклянный фильтр, 16 - реле тока, 17 - пробка, 18 - змеевиковый холодильник,

ляется элюентом и при прохождении через колонку поддерживает заданную температуру сорбента, а дозированная подача подогретого до необходимого температурного режима растворителя - элюента производится клапаном, обеспечивающим непрерывный технологический процесс элюирования и необходимую температуру сорбента.

5.3.2. Устройство для хроматографии /70/. Для регулирования объема сорбента или введения в колонку дополнительного сорбента и удаления зон с индивидуальными веществами, или веществами являющимися примесью, без прекращения работы устройства, а также отбора проб элюентов из отдельных зон для контроля чистоты (индивидуальности) веществ, устройство (рис.10) выполнено из отдельных секций с отростками, закрытыми герметично пробками и дно-фильтрами, расположенными друг под другом и соединенных в единое хроматографи-ческое устройство обручами на шлифах. Нижняя часть устройства заканчивается обручем, снабженным конусом с выпускным краном на конце.

Использование устройства обеспечивает по сравнению с существующими устройствами для колоночной хроматографии следующие преимущества: возможность регулирования объема сорбента в устройстве в зависимости от концентрации исследуемого раствора; введение другого, дополнительного сорбента; удаление зон с индивидуальными веществами или примесями из устройства без прекращения работы; отбор проб элюатов из отдельных зон для контроля чистоты (индивидуальности) веществ, например, хроматографией на бумаге или качественными реакциями.

5.3.3. Устройство для прекращения хроматографического процесса /10/. Для расширения функциональных возможностей в устройство (рис.II), содержащее исполнительный механизм, установленный на хро-матографической бумаге, соединяющий механический привод и электромагнит, пороговое устройство, фотометр с источником света и фотоэлемент, дополнительно введен зажим, в губках которого размещены источник света и фотоэлемент. Зажим имеет возможность перемещаться по хроматографической бумаге, которая механически связана с исполнительным механизмом, управляемым сигналом с выхода фотоэлемента через мороговое устройство.

Введение зажима, в губках которого расположен источник^света и фотоэлемент позволяет прекращать хроматографический процесс при

- 70 -

Устройство для хроматографии

I, 6 - секция, 2 - фильтр, 3 - обруч, 4 - окно, 5 - пробка, 7 - кран.

Устройство для прекращения хромато-графического процесса

!

С'П

I

г

___I

5

1 - зажим, 2 - губки, 3 - источник света, 4 - фотоэлемент,

2 - пороговое устройство, б - исполнительный механизм, 7 -электромагнит. 8 - механический привод, 9 - хроматографичес-кая бумага, 10 - камера, II - растворитель.

любом уровне фронта растворителя. В результате чего устройство позволяет расширить функциональные возможности хроматографичес-ких исследований.

5.3.4. Устройство для дробной возгонки /5, 48/. Для качественного выполнения дробной возгонки устройство (рис.12) выполнено из необходимого количества конденсационных камер шарофидной формы из стекла, соединенных на шлифах и расположенных горизонтально, а начальная конденсационная камера выполнена совместно с колбой. Конденсационные камеры снабжены автономными охлаждающими рубашками, которые соединены единой системой разъемных трубопроводов подвода и отвода охлаждающей воды. Автономное отключение охлаждения конденсационных камер осуществляется кранами установленными на трубопроводах. Вдоль камер горизонтально размещен стериневой термоэлемент с возможностью осевого перемещения и тугоплавкая гайка для крепления термоэлемента. Тугоплавкая гайка вмонтирована в первую по ходу процесса конденсационную камеру. Стержневой термоэлемент, перемещаемый в нужную конденсационную камеру, обеспечивает при этом герметичность внутренних полостей камер. Стержневой термоэлемент позволяет регулировать температурный режим не только между конденсационными камерами, но и непосредственно в необходимом месте отдельной камера, благодаря плавному передвижению его и усилению или уменьшению нагрева. Это не только снижает разность температур между камерами, но и позволяет регулировать конденсацию в отдельны) камерах, изгоняя при этом нежелаеыне зоны вещества из камеры путем увеличения нагрева термоэлемента. Устройство заканчивается конденсационной камерой, выполненной совместно с головкой с краном, через которую происходит вакуумирование.

Использование устройства для дробной возгонки обеспечивает по сравнению с существующими устройствами для возгонки следующие преимущества: возможность проведения качественной дробной возгонки; количественного получения отдельных зон возгона; создания необходимого температурного режима для возгонки в нужных конденсационных камерах.

О с н о в к ы е выводы

I. Проведен анализ средств народной медицины в ряде облестей России и Украины, установлено, что адонис волжский, белокудренник

Устройство для дробной возгонки

I - колба, 2 -охлаждающие головка

ба, 2 - гайка, 3, 4, б - конденсационные камеры, 7 -.ющие рубашки, 8 - трубопровод, 9, 10, 12 - краны, II ,, 13 - термоэлемент, 14 - ручка.

Рис.12

черный и зопник клубненосный применяются при сердечно-сосудистых заболеваниях, мята водяная - при болезнях печени, а шлемник обыкновенный - при кожных заболеваниях, определены запасы этих растений.

2. Параллельно с анализом средств народной медицины проведено ресурсоведческое изучение лекарственных растений (бессмертника песчаного, дущицы обыкновенной, зверобоя продырявленного, адониса весеннего, мать-и-мачехи, перца водяного, тимьяна ползучего, хвоща полевого и др.), составлены карты распространения зарослей, имеющих промышленное значение, даны рекомендации по их использованию.

3. Разработаны способы выделения суммарных биологически активных веществ. Флавоноиды шлемника обыкновенного обладают противовоспалительным и антимикробным действием. Выявлена равноценность

ной мази флавоноидов и преднизолоновой мази. Сумма флавоноидов из мяты перечной и мяты водяной относится к группе истинных желчегонных средств. Флавоноиды, иридоиды и оксикоричные кислоты зоп-ника клубненосного проявляют седативный эффект на сердечно-сосудистую систему и диуретическое действие, что выгодно отличает их от экстракта из корней валерианы, Оксикоричные кислоты и флавоноиды белокудрвиниха черного по острой токсичности, седативному действию и диуретическому эффекту близки настойкам пустырника и валерианы.

4. Впервые выделено и химически охарактеризовано 29 веществ флавоноидной природы, которые отнесены к халконам, флаванонам, флавонам и флавонолам. 6 из них оказались новыми: ментозид, менто-генин, пиперитозид, изороифолин, галерозид и альтизин.

5. Впервые выделено и химически охарактеризовано 7 производных коричной кислоты: кофейная кислота, хлорогеновая кислота, нео-хлорогеновая кислота, криптохлорогеновая кислота, глюкорамноксило-зид кофейной кислоты, феруловая кислота, глюкопиранозид кофейной кислоты.

6. Впервые выделено и химически охарактеризовано 6 иридоидов: 8-ацетилгарпагид, гарпагид, прокумбит, каталпол, аукубин, аукубии--8-ацетат, а также впервые выделено из надземной части адониса волжскому и лапчатки прямостоячей и химически охарактеризовано 2 кумарина - скополетин и умбеллиферон.

7. Установлено, что по карденолидному составу и биологической активности адонис волжский близок к адонису весеннему и может быть полноценным его заменителем. Из адониса волжского впервые.

выделено и химически охарактеризовано б кардонолвдов: строфантидин, цимарин, К-строфантин-В, К-строфантозид, конваллятоксин и адонитоксин.

8. Для комплексного использования и утилизации отходов растительного сырья разработаны способы получения флавоноидов, обладающих желчегонным действием из отходов мяты перечной после отгонки эфирного масла и получения настойки. Разработан способ получения кверцетина из отходов зверобоя продырявленного после получения настойки. Установлено, что трава лапчатки прямостоячей может быть использована наряду с корнями.

9. Разработан ряд устройств для проведения фитохкмического анализа растительного сырья. Устройства позволяют в автоматических и полуавтоматических условиях производить процессы взвешивания, выделения, разделения и очистки природных соединений. Весовой порционный дозатор сыпучих материалов, лабораторное устройство для экстракции, устройство для экстракции жидкости парообразным растворителем, устройство для жидкостной хроматографии, устройство для прекращения хроматографического процесса и устройство для дробной возгонки защищены авторскими свидетельствами, а хроматографичеокое устройство и устройство для приготовления концентрированных растворов являются отраслевыми рационализаторскими предложениями и приняты МЗ РСФСР.

10. Установлены основные анатомические признаки надземных органов адониса волжского, белокудренника чоркого и лапчатки прямостоячей,

11. Способы получения биологически активных веществ и устройства для проведения фитохимичеекпх работ используются в производственной, научной и учебкой работе. Предварительный экономический эффект от их использования в производственных условиях более 55 тысяч рублей в год. Способы и устройства защищены 13-ю авторскими свидетельствами.

Результаты выполненных автором работ нашли свое отражение в шести защищенных кандидатских диссертациях, выполненных под руководством автора.

Автор считает своим долгом выразите глубокую благодарность В.И.Вавилову, В.Д.Токаревой, П.К.Вовиловой, ВЛ.Яцюк, И.М.Кукову и Н.Ф.Гончарову и друглн коллегам з^ их помощь и участие в настоя-

щей работе.

Основное содержание доклада изложено в следующих работах:

1. А,с» 416071 СССР, Лабораторное устройство для экстракции /Э.В.Гелла и В.И.Вавилов. Опубл. 25.11.74. Бюл.^-7.

2. A.c. 515948 СССР. Весовой порционный дозатор сыпучих материалов/В.И.Лобанов, Э.В.Гелла, А.М.Мандрик. Опубл. 02.08.76. Бюл. К 20.

3. A.c. 544428 СССР. Способ получения суммы флавоноидов/Э.В. Гелла, Н.П.Бешко, А.В.Степков, В.А.Леонов. Опубл. 30.01.77. Бюл. № 4.

4. A.c. 569942 СССР. Устройство для жидкостной хроматографии/ Э.В.Гелла, В.А.Соломоненко, В.И.Вавилов и А.М.Мандрик.Опубл. 25.08. 77. Бюл. № 31.

5. A.c. 583806 СССР. Устройство для дробной возгонки/Э.В.Гелла и В.И.Вавилов. Опубл. 15.12.77. Бюл. К 46.

6. A.c. 603388 СССР. Способ получения флавоноидов, обладающих желчегонным действием/Э.В.Гелла и И.X.Пасечник. Опубл. 25.04.78. Бюл. № 15.

7. A.c. 63II76 СССР. Устройство для экстракции жидкости парообразным растворителем/Э.В.Гелла, Н.К.Вавилова и В.И.Вавилов. Опубл. 05.11.78. Бюл. № 41.

8. A.c. 701640 СССР. Способ получения кверцетина/Э.В.Гелла, Л.В.Шатунова и В.А.Бирюк. Опубл. 05.12.79. Бюл. № 45.

9. A.c. 799763 СССР. Способ получения флавоноидов, обладающих желчегонным действием/Э.В.Гелла, Опубл. 30.01.81. Бюл. № 4.

10.A.C. 824040 СССР, Устройство для прекращения хроматографи-ческого процесса/Э.В.Гелла, В.И.Меньшиков, Н.К.Вавилова, И.П.Реше-тилова, Е.П.Решетников. Опубл. 23.04.81. Бюл. К 15.

11.A.c. 904710 СССР. Способ получения флавоноидов, иридоидов

и оксикоричных кислот /Э.В.Гелла, Н.К.Вавилова, Т.А.Гримова. Опубл. 15.02.82. Бюл. » 6.

12.А.с. II65405 СССР. Способ получения оксикоричных кислот/ Э.В.Гелла, И.М.Еуков, Т.А.Гримова, В.И.Литвиненко, В.З.Пичугин. Опубл. 07.07.85. Бюл. № 25.

13.A.c. II75483 СССР. Способ получения флавонов/Э.В.Гелла, И.М.Жуков, Т.А.Гримова, В.И.Литвиненко, В.В.Пичугин.Опубл.30.08.85. Бюл. № 32.

14.Гелла Е.В., Борисюк Ю.Г., Макарова Г.В. ФлавоноГди деяких сорт1в м'яти перцево1. Пов1домлення 1.//®армац.журн.-1965.-№ 4,-С. 32-33.

15.Гелла Е.В., Макарова Г.В., Борисюк Ю.Г., JIItbIhohko B.I. Флавоно1ди м'яти перцево1. ПовГдомлення П.//£армац.журн.-1966.-№ З.-С.58-66.

16.Гелла Е.В., Макарова Г.В., Борисюк Ю.Г. §лавоно1ди м'яти перцево1. Пов1домлення Ш.//§армац.журн.~1967.-К 4.-G.80-85.

17.Пас1чник I.X., Гелла Е.В. ЖовчогХнний препарат з м'яти пер-цево1.^Фармац.журн.-1966.-К 5.-С.49-53.

18. Гелла Э.В. Флавоноиды мяты перечной//§енольные соединения и их биологические функции. Материалы 1-го Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям.-M.-I968.-С.80-84.

19.Гелла Э.В., Прокошева Л.И. К изучению флавоноидов шалфея поникающего.//Химия природ.соедин.-1970.-№ 2.-С.270-271.

20.Вавилов В.И., Гелла Э.В, Ароматические кислоты панцерии серебристобелой//Растительные ресурсы.-1970.-т.4.-С.235-240.

21.Гелла Э.В., Вавилов В.И. Рутин из p£n-t2erici (?at/7es е///ь-//Химияприрод. соедин.-1970.-№ З.-С.370.

22.Гелла Э.В., Вавилов В.И., Буряк М.А. Полифенолы панцерии и их влияние на сердечную деятельность.//XL научная сессия Курского мединститута по вопросам клинической и экспериментальной кардиологии .-Курск. -1970. -С. 26-29.

23.Буряк М.А., Гелла Э.В., Вавилов В.И., Бешко Н.П. Влияние полифенольных соединений некоторых представителей семейства губоцветных на электрокардиограмму и артериальное давление//Тезисы второго симпозиума по фенольным соединениям.-Алма-Ата.-I970.-C. 124.

24.Гелла Э.В., Вавилов В.И., Бешко Н.П. Полифенолы некоторых представителей семейства губоцветных/Дезисы второго симпозиума по фенольным соединениям.-Алма-Ата.-1970,-С.22-23.

25.Вавилов В.И., Гелла Э.В, К химическому исследовайию производных бензо--^-пирона панцерии серовато^/Сб."Передовые методы химической технологии". ВХ0 Д,И.Менделеева.-1972.-С.II7-II9.

26.Гелла Э.В., Токарева В.Д., Буряк М.А. К химическому изучению гликозида M-I и его влияние на электрокардиограмму/^L научная сессия Курского мединститута по вопросам клинической и экспериментальной кардиологии.-Курск.-1970.-С.30-32.

27.Вавилов В.И., Гелла Э.В. Рутин панцерии (Лолифенолы губо-

цветных)//Конференция молодых ученых Курского мединститута.-Курск.-1970.-С,184-187,

28.Гелла З.В. Халкон мяты перечной//Конференция молодых ученых Курского мединститута.-Курск.-1970.-С.196-198.

29.Гелла З.В. Изороифолин душицы обыкновенной//Юбилейная научно-практическая конференция фармацевтов Курской области, посвященная ЮО-лотию со дня рождения В.И.Ленина.-Курск.-I970.-C.90-93.

30.Гелла Э.В., Бешко Н.П., Попова Т.П., Литвиненко В.И. Га-лерозид - новый флавоноидный гликозид

//Химия природ.соедин.-1972.-К 2.-С.242.

31.Гелла Э.В., Вавилова Н.К., Литвиненко В.И. Иридоидные гли-козиды зопника клубненосногд//Растит.ресурсы.-I972.-№ 4.-С.554-556.

32.Гелла З.В., Вавилова Н.К, К исследованию полифенольных соединений зопника клубненосногд//Растит.ресурсы.-1972,-К 8.-С. 107-109.

33.Попова Т.П., Л1тв1ненко B.I., Гелла Е.В., Аммосов О.С. XI-м1чний склад I л1карськ1 властивост1 шоломниц1//Фармац.журн.-1972.-К 5.-C.58-6I.

34.Гелла Э.В., Шатунова Л.В. Новый источник получения кверце-тин^//Изобретательство и рационализация в медицине.. Республиканский сборник научных трудов.-М.,-1983.-С.18-20.

35.Бешко К.П., Гелла Э.В. Апигенин, лютеолин и скутеллярин шлемника копьелистного//Передовые методы химической технологии.-Курс к,-1972.-С.-120-122.

36.Вавилова H.K«,Гелла Э.В. Гомоориентин из РЬ/ою,* ¿«S?,»^ //Химия природ.С08дин.-1973,-№ 2.-С.285-286.

37.Гелла Э.В,, Вавилов В.И, Кемпферол-З-галактозид из панце-рии серебристобело^/Донференция молодых ученых Курского мединс-титута.-Курск.-1973.-С.186-188.

Зб.Вавилова Н.К., Гелла Э.В, Флавоноиды из зопника клубненос-Horq/Димия природ,соедин.-1973.-К 2.-C.I5I-I53.

ЗЭ.Вавилова Н.К., Гелла Э.В. Фекольные соединения зопника клуб-неносного/Донференция молодых ученых Курского мединститута.-Курск. -1973. -С Д89-192j

40.Вавилова Н.К,, Гелла Э.В,, Литвиненко В.И. Выделение и идентификация оксикоричных кислот из зопника клубненосног9//Сб.Материалы Второго Всесоюзного съезда фармацевтов. Рига.-1974.-С.249-250,

41.Яцюк В.Я., Гелла Э.В., Комиосаренко Н.§. К фитохимическо-му изучению полифенольного состава адониса волжскогоУ/Иоследование. лекарственных препаратов природного и синтетического происхождения. Материалы межвузовской научной конференции.-Томск.-1975.-С. 19-20.

42.Бешко Н.П., Гелла Э.В., Литвиненко В.И., Ковалев И.П., Гор-диенко В.Г. Флавоноиды корней шлемника высочай!аего//Химия природ, соедин.-1975.-К 4.-С.514-515.

43.Яцюк В.Я., Комиссаренко Н.Ф., Гелла Э.В. Химический состав надземной части Л'/гтъ г$ Угеггг*?. .//Растит.ресурсы.-1975.-XI. в.З.-С.515.

44.Вавилова Н.К., Гелла Э.В., Литвиненко В.И. Прокумбит-ири-доидный гликозид из листьев зопника клубненосного//Сб. Материалы Третьего Всесоюзного съезда фармацевтов. Свердловск,-1975.-С.299-300.

45.Яцюк В.Я., Комиосаренко Н.Ф., Гелла Э.В. Кардонолиды УУ?

¡у:' гуе,!^, //Химия природ.соедин.-1976,-№ 5.-С.672.

46.Йцюк В.Я., Калашников И.Д., Гелла Э.В. Анатомическое строение надземных частей 1г.>^?¿У£ ■ //Растит.ре-сурсы.-1977.-т.13, в.4.-С.638.

47.Вавилова Н.К., Гелла Э.В., Пакалн Д.А., Литвиненко В.И. Хемотаксономичеокое изучение некоторых видов рода зопник флоры ССС^//Полезные растения природной флоры и использование их в народном хозяйстве. Сб. научных работ.-Киев.-1980.-С.77-80.

48.Гелла Э.В., Вавилов В.И. Устройство для дробной возгонки. //Изобретательство и рационализация в медицине.-М.-1979.-С.68-71.

49.Гелла Э.В., Вавилова Н.К., Вавилов В.И. Устройство для экстракции жидкости парообразным растворителем//Изобретательство и рационализация э медицине.-М.-1979.-С,71-74.

50.Гелла Э.В., Вавилов В.И, Лабораторное устройство для экстракции/Изобретательство и рационализация в медицине.-М.-1979.-С. 69-71,"

51.Гелла Э.В., Вавилов В.И. Устройство для жидкостной хроматографии/Изобретательство и рационализация в медицине.-1979.-С,

66-68.

52.Гелла Э.В., Вавилов Н.К. Монотерпеновые гликозиды ¿гмх.'-Х-Л/ '¡*-/п -//'Химия природ.соедин.-1980.-С.841-842.

53.Гелла Э.В. К химическому исследованию некоторых представителей семейства яснотковых (Губоцветные)//!!! Всесоюзный съезд фар-

мацевтов.-Кишинев.-1980.-С.184.

54.Бубенчиков A.A., Токарева В.Д., Гелла Э.В., Шатунова Л.В. Специализация районов заготовки лекарственного сырья - одна из факторов охраны природных популяций лекарственных растение/Актуальные вопросы поиска и технологии, лекарств. Тезисы республиканской научной конференции.-Харьков.-1981.-С,202-203.

55.Гелла Э.В. К вопросу оптимизации фитохимических процессов. //Актуальные вопросы поиска и технологии лекарств. Тезисы республиканской научной конференции.-Харьков.-I98I.-C.2I0.

56.Гелла Э.В., Пасечник И.Х. Способ получения флавоноидов, обладающих желчегонным действием//Изобретательство и рационализация

в медицине.-М.,-1981.-С.199-201.

57.Гелла Э.В., Лобанов В.И., Вавилова Н.К. Устройство для приготовления концентрированных растворов/Изобретательство и рационализация в медицине.-М.,-1981.-С.49-51.

58.Гелла Э.В., Бубенчиков A.A., Токарева В.Д., Дрозд Г.А., Шатунова Л.В. Лекарственные растения Центральных областей России и вопросы их рационального использование/Всесоюзная научная конференция "Исследования по изысканию лекарственных средств природного происхождения".-Л.,-1981.-С.8.

59.Вавилова Н.К., Гелла Э.В. Фенольные соединения пустынноко-лосника Фетисова/Материалы 1У Всероссийского съезда фармацевтов. Воронеж.-1981.-С.442.

60.Гелла Э.В. Биологически активные вещества растений родов зопник и панцерия семейства яснотковы>$//Материалы 1У Всероссийского съезда фармацевтов. Воронеж.-1981.-С.441.

61.Гелла Э.В. 0 химическом составе растений рода панцерия// Всесоюзная научная конференция "Исследования по изысканию лекарственных средств природного происхождения".-Л.,-1981.-С.3.

62.Гелла Э.В., Веременичев С.И., Леонов В.А., Пасечник И.Х.

К вопросу комплексного исследования флавоноидов мят перечной, водяной и шлемника обыкновенногд//Тезисы П съезда фармацевтов Казахстана. Чикмент.-1981.-С.480-481.

63.Гелла Э.В., Дрозд Г.И., Вавилова Н.К., Куков И.М. Фармаког-ностическое изучение некоторых представителей семейства яснотковых, //Успехи в изучении природных и синтетических лекарственных веществ. -Томск.-1982.-С.17-18.

64.Яцюк В.Я., Деля B.C., Гелла Э.В. Фитохимическое исследование надземных частей -Ä/tv«/; ^ С $ //Химия природ.соедин.-I983-C.64I.

65.Гелла Э.В. Флавоноиды шлемника обыкновенного//Изобретате-льство и рационализация в медицине.-1983.-С.34-35,

66.Ж/ков И.М., Гелла Э.В., Гримова Т.А. О биологической активности препаратов из надземной части белокудренника черного.-Курск.-I983.-I0 с.-Деп. во ВНИИМИ МЗ СССР.-1983,- № 6997.

67. Гелла Э.В. Флавоноиды, иридоиды и оксикоричные кислоты зопника клубненосного//Изобретательство и рационализация в медицине. -1983.-С.35-37.

68.Гелла Э.В., Бубенчиков A.A., Токарева В.Д., Шатунова Л.В. Вопросы рационального использования лекарстенных средств Центральных областей ССС£//Современные методы исследования лекарственных растений.-М.,-1983.-т.ХХ.-С.Ю-13.

69.Гелла Э.В. О комплексном использовании мяты перечной//йзо~ бретательство и рационализация в медицине.Республиканский сборник научных трудов.-М.,-1983.-0.207-209.

70.Гелла Э.В., Вавилова Н.К., Бубенчиков A.A. Устройство для хроматографии//Изобретательство и рационализация в медицинетМ. I983.-C.37-38.

71.Жуков И.М., Гелла Э.В,, Калашников И.Д., Гримова Т.А. Анатомическое строение надземных органов «■»•у? е?- // Растит.ресурсы.-1984,-т.20. вып.I.-С.89-96.

72.Жуков И.П., Гелла Э.В. К вопросу о межпопуляционном анализе белокудренника черного, произрастающего в различных регионах Европейской части СССР.-Курск.-1983.-6 с.-Деп. ВНИИМИ МЗ CCCP.-I985.' - »9840.

73.Гончаров Н.Ф., Ступакова Э.П., Комиссаренко Н.9., Гелла Э.В. Кумарины подземной части Р^т'^^Уг'/^ erse/tr. //Химия природ, соедин.-1987.2.-С.299.

74. Гелла Э.В. Гесперидин мяты перечной и ее отходов после получения настойки.-Деп, в НПО "Союзмединформ", Д-16825, 781, раз. 22. № 4. - 1989.

Автор выражает искреннюю благодарность доктору фармацевтических наук, профессору Николаю Федотовичу Комиссаренко и доктору химических наук, профессору Василию Ивановичу Литвиненко за постоянную консультативную помощь при выполнении настоящей работы.