Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение видов золника, произрастающих в Узбекистане



МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН Тапсеитский фармацевтнчеасий институт

На правах рукописи

ГА!ШЕВ Абдумумкн Каххароиич

3 А Р И А К О Г И О С Т И Ч ВИДОВ 3 О П Н И К А, В УЗБЕК

Е С К О В ИЗУЧЕНИЕ ПРОИЗРАСТАЮЩИХ И С Т А 11 Е

15.00. ог-фармзцоЕтотеанд химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание уемой стегоши кандидата фармацевтических наук

Таысент-1995

Работа выполнена на кафедре фармакогнозии Ташкентского фармацевтического института МЗ РУэ

Научный руководитель-доктор фармацевтических наук, профессор Т. П Пулатова

.Официальные оппоненты: доктор химических наук У. Н. Зайнутдинов кандидат фармацевтических наук, профессор Л. Т. Икрамов

Ведущая организация-Узбекский научно-исследовательский институт химической . технологии и катализа им,- А. Султанова

■ Защита состоится • иил-^Т®. ■ 1955г в часов на заседании специализированного.Совета . К-087.12.21 при Ташкентском фармацевтическом институте (700015, г. Ташкент, ул. Айбек,45).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ташкентского фармацевтического института.

' Автореферат, разослан фгЛЛ^ОмХ 1995г.

Ученый секретарь специализированного Совета К-087.12.21, доктор фармацевтических наук х М- Комилов

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРНО!ЖА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Важное место в практик^ здравоохранения занимает лекарственное обеспечение населения новыми и эффективными лекарственными средствами. Неотъемлемой частью этой задачи является изыскание новых лекарственных растений и дополнение офнциналь-ннх видов близкими видами.

Препараты синтетического происхождения являются эффективным! средствами лечения и обладают широким спектром действия. Однако, являясь чужеродными для организма человека,они могут вызывать различные аллергические, канцерогенные и другие реакции. Нухно ответить еще и то обстоятельство, что в результате ухудшения экологической обстановки, г. так;« разрыва экономических связей меэду фармацевтическими предприятиями ПНГ производство химиотерапевтических препаратов резко сократилось, что способствует дефициту лекарственных средств. Поэтому,несмотря на успехи в области синтеза новых лекарственных препаратов, го многих случаях лекарственные сродства раститетлького происхождения сстаягея ценными, легкодоступными, а иногда и незаменимыми средствами лечения.

В большинстве случаев лекарственны: средства растительного происхождения • внедрены в научную медицину иг растений, используемы:: в народной !\-зд;;ц!'."е. К числу широко применяемых з народе, но мало изученных научней медициной растений откосятся виды зепшнга, произрастающие в Узбекистане, что определяет актуальность работы.

Цель и вадачи исследования. Основной целью каыего исследования явилось фармзкогнсспгческое изучение зопиккое Узбекистана и обоснование возмотаости использования их в медицинской практике. Для этого необходимо было решить сдедуюсие задачи:

-провес-ги сравнительное фитохккическое изучение зогшшлв Уз- ■ бекистана с целью выявления перспективных видов;

-изучить вос!.!о;я;ость использования надземной чалти зепчкка Регеля в качества дополнительного сырья к гопнику колючему;

-провести анатомическое исследование и установить диагностические признаки сырья;

-определить ресурсно-сырьевой потенциал зопников в ксследуе-нчх регионах и провести картирование выявленных зарослей;

-составить нормативно-техническую документация (НТД) на сырье

_ о •

и разработать рекомендации по заготовке на основе данных, полученных в ходе исследования.

Объекты и общие методы исследования. Для предварительного качественного и хемотаксономического анализа использовали надземную часть з.бухарского, з. Ольги, з. коровяковидного, а. тусклого, з. кус-тарничкоЕого, з.СеггрцеЕа, з. линейнолистного, з. иеолистного, а. Ре-геля, з.снизубелого, собранных в различных районах Узбекистана. Сырьем для глубокого фармакогностического анализа служила надземная часть зопника Регеля (Phlomis regel ii M. Pop. ), собранная на склоне гор пос. Чимган Ташкентской области в различные фазы вегетации.

В работе использованы как. классические, так и современные физико-химические . методы исследования. Выделение веществ проводили экстракцией этанолом различной крепости с последующим разделением на сорбентах (полиамиде, силикагеле, нейтральной окиси алюминия и др.). В случае необходимости были использованы другие экстрагенты.

' Анализ индивидуальных веществ . проводили после многократной перекристаллизации из соответствующих растворителей и высушивания в пистолете Фишера при пониженном давлении и температуре 100-105 °С.

Результаты количественного определения обработаны с использо- ■ ванием математической статистики.

Научная новизна исследования. В целях выявления перспективных видов впервые проведено предварительное фитохимическое исследование 10 видов зопника, произрастающих в Узбекистане. Впервые проведено фармакогностическое изучение зопника Регеля. В траве зопника Регеля установлено содержание 8 ЕещестЕ флавоноидной природы, из которых основным является гиперозид (около 33.Т. суммы). Разработан метсд количественного определения суммы флавоноидов-травы зопника Регеля фотоэлектроколориметрическим методом. Впервые определена специфическая биологическая активность изучаемого растения. При этом установлено,, что' седативное действие настоев из травы обусловлено флавоноидами. Проведена стандартизация сырья по содержанию, флавоноидов. ' Определены числовые показатели травы по ГФ XI и мор-фолого-анатомические диагностические признаки отдельных органов. Определен запас сырья взпника Регеля в Ташкентской области; составлена карта его распространения.

Практическая значимость работы. Разработан и представлен в Фармакологический Комитет МЗ РУз проект Временной фармакопейной статьи на траву зопника Регеля. Составлена инструкция по сбору и сушке травы зопника Регеля. Составлена карта распространения зопника Регеля по Ташкентской области с указанием запаса сырья.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом, научно-исследовательских работ Ташкентского фармацевтического института по теме: "Фармакогностическое, фотохимическое и фармакологическое изучение лекарственных растений Узбекистана, в тон числе применяемых в народной медицине, и разработка новых фиг препаратов" (Номер государственной регистрации 01910G00745).

На защиту выносятся:

-результаты фотохимического изучения 10 видов зопника, произрастающих в Узбекистане; .

-возможность использования- надземной части гопника Регеля;

-рекомендации по использованию выявленных морфолого-анатоми-ческих признаков для определения подлинности сырья;

-рекомендации по заготовке и картографические материалы.

Апробация работы., Основные положения диссертации доложены на конференции "Охрана окружающей среды" на ВДНХ УзССР (Ташкент, 1990); I съезде молодых ученых-медиков и врачей Узбекистана (Андижан,1391); научной конференции "Биологически активные соединения, синтез и использование" (Пенза, 1992) ¡научно-практической конференции "Приоритетные направления фармацевтической науки и практики" (Ташкент,1S93).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа кзлог?-на на 120 стрзжшзх кзгккопкского текста, ккгясгрярсвзш .'.'. г;'-'ук-г.ом и 2<3 таблица?.';'.. г;".:стн сссто;;. иге,г,е:!;*.л, .""г:;

четырех r.ia'i 4 об"1;:;: о леи. Гг.-; •-с ■

;-сс.'• • у:: ' •

В первой главе представлен обзор литературы, включающий сведения о растениях рода зопник, их распространении, химической изученности, применении в научной и народной медицине.

Во второй главе приводятся данные по изучению основных видов зопника, произрастающих в Узбекистане, в сравнении с оффицинальным видом и выявлению наиболее близких к нему по химическому составу. Среди них более подробно изучен доступный для заготовки перспективный вид - зопник Регеля (Phlomis regel ii M.Pop.j. В следующей, третьей главе, приводятся результаты Фотохимического анализа травы зопника Регеля.

В четвертой главе подробно освещены результаты изучения фла-воноидного состава травы гопника .Регеля (качественное обнаружение, выделение суммы флавоноидов, разделение на индивидуальные компоненты, а также идентификация и разработка методики количественного определения).

Пятая глава посвящена стандартизации'сырья зопника Регеля на основании товароведческого и химического методов анализа, а также резулътам ресурсоведческих исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Выявление наиболее перспективных видов зопника. С целью выявления во флоре Узбекистана видов гопника, наиболее близких оффици-нальным, были изучены г. бухарский, з.Ольги, з. коровяковидный, з. тусклый, з. кустарничковый.з. Северцева, з. линейнолистный, з. иволистный, Е. снизубелый, з. Регеля в сравнении' с гопниками колючим и клубненосным, используемыми в научной медицине. Для этого из сырья изучаемых видов получали петролейно-эфирные, хлороформные, спиртовые и спирто-Еодные' извлечения и исследовали "хроматографи-чсски на содержание основных биологически активных компонентов, описанных для оффицинальных видов, в различных системах растьзрителей.

Петролейно-эфпрные и хлороформные извлечения изучали методом тонкослойной хроматографии на пластинке "Silufol" в системе растворителей 1Z- раствор уксуснг* кислоты в бензоле (1 система) и этанол-ацетон-четыреххлорпстый углерод 5:20:75 (II система). Проявителями служили У0>-свет, насыщенный раствор сурьмы хлорида в хлороформе и 25Х-спиртовый раствор фосфорновоАМ>1.амовой кислоты. При

этом во всех видах с2наруг»ии 2 со«дкиеш!Д со значениями КГ---0,07 и 0,32 з ! системе и 0,12 н 0,72 по II системе растворите;:-?!*!, кото-риз при помоги "свидетелей'1 идентифицированы как в-ситостерин и урсодовзя кислота.

Спиртов;« и епирто-содиуг извлечения изучали методом бумаэтюй хрсзтогр^чн на бумаге "?И1а~:" марки ?'А-2 в система:: растворителей 15%-уксуснал кислота (111'система) и н-бутанол-унсусная .кислота-пода 4:1:5 (IV систем.-;:. Проявителями слуяю! 'У"1гсвет, пари ам-яизка. 1%-ош!рто2Уй раствор а.те>«:нид хлорида, реактвви ЧЗгьля и Тримм-Хилла. При этом во всех видах обнаружено наличие Флавоноидов и иридопдов, по качественному составу которых «окно выделить .как близкие г. оф4ицинальному виду в. Регеля,. з. кузтзряичкоЕЫй, в. иволпстныи и з.днкейнолисткии. Учитывая доступность для заготовки « широкий ареал распространения, зопника Регеля в Ташкентской сб-. ласти, ш задались целью более глубокого изучения этого растения.

'.гучение химического состава травы зопника Регеля.

С целью изучения химического состава трапы зопника Гегеля проведено предвеют'злъксе исследование сырья из со'дер.такко осйоп-ных биологически активных векэств с использованием классическим методов качественного анализа. Для этого готовили водки?, спиртб-ЕЬ'-?, хлоре,ормнь;-, петрелейно-эфирные извлечения (1:10) и проволи-.•:« ■ соответствую«:« качественнее реакции. Для подтверждения полученных результатов и предварительной идентификации обнаруженных веществ пут^м сопоставления с известными "свидетелями" нами проведено хроматографическсо исследование тех же извлечений, где эти вещества били найдены. Результаты представлены в таблице 1.

Приведенное исследования показали, что трава гопника Регеля'. ■богата биологически активными вецестзами. сбус лав л: дающими широкое применение гопников в народной медицине. Учитывая высокое содержание флавоноидов, обуславливающих, как показали результаты фармакологических исследований, специфическую биологическую активность гопника Регелл.в дальнейшем мы подвергли более глубокому изучению' флавоноиды этого р.гстения.

' Изучение флавоноидов.

Для установления качественного состава Флавоноидоз зопника Регеля било проведено хроматогра;,ьическое изучение спиртового из в-

Таблица l

Основные биологически активные вещества травы аопника -Гегеля

Н | Биоактивные Еещества' iКолич. содержание, в %

1. Зфпрныэ.масла. 0,10

2, Смолистые вещества 3,32

3. р-ситостерип -

4. УрсолоЕая кислота -

5. Кумарины 0,42

6. Иридоиды 5,15

7. (Ьлавононди . ■ 4,50

8. Антоциани (в соцветиях) 0. 43

S. Сзнолокнслоты , . 3,20

10. Дубильные веюства (титруе-

f.íüo яожфзнэли) 2,30

И.-АгрОТКНОНДЫ 0,13

, 12- АскзрЗпшал га:сг.отг 0,055

12. Оргаккчэскз кислоты .1,70

14. Сахара . 4,24/11,1*

адо гидролиза/послс гидролиза

леч;нип (1:10) на букзге "Filtra!-:" одзкг Fpí-2 катодом двумерной хроьртографкк. В качестве кодоиянэй фазы были использованы системы разтЕ5рителбй: 15Х- уксусная. кис хота (III система) и к-СутансЗл-уксусная кислота-Еода 4:1:5 (IY система)

: В результате анализа установлена; что фхавоновды аопника Регеля представлены 8 веществами, которые имеют следующие значения Rf: G,57; 0,93; 0,93; 0,58; 0,66; 0,76; 0,4¿; 0,55 в III системе и 0;34; 0,38; 0,50; 0,53; 0,56;, 0,58; 0,64; 0,7-5 в IY системе растворителей. '

Проведя сравнительное изучение различных способов выделения суммы флавоноидов с, целью выявления наиболее оптимального, остановились на методе, описанном у В.С.Тали, и методе, с использованием полиамидного сорбента.'

Исследование выделенных флавоноидов методом двумерной хроматографии на бумаге показало , что суммы веществ, полученные обоими методами, имеют одинаковый состав. Однако, отмечено, что при использовании полиамидного сорбента сумма флавоноидов не -полностью-очистилась от фенолокислот. Сумма флавоноидов, полученная методом осаждения, более чистая (на хроматограммах не обнаруживаются-другие соединения), желтого цвета; По эффективности выделения суммы флавоноидов эти два метода почти одинаковы. Однако, более доступным является метод осаждения флавоноидов. Поэтому в дальнейшем для изучения качественного состава и фармакологических исследований использовали сумму флаьоноидов, полученную-методом оса.дения по В. С. Тали. . ,' .

Препаративное разделение флавоноидов на индивидуальные компоненты.

Разделение суммы флавоноидов зопника Гегеля на индивидуальные компоненты проводили методом колоночной хроматографии с использованием полиамидного сорбента. При элюировании суммы веществ спиртоводной смесью с концентрацией этанола от 30 до 80% .выделено 8 веществ флавоноиднсй природы (таблица 2).

Таблица 2 '

■ Результаты препаративного разделения суммы флавоноидов гопника Регеля

Г"1 1NI Ве- Конц-я 1 Значение|Содержание индивидуального вецес:: — 1 Е-а I

1 | щес- Элкян- Злюаты П)*^ т> -1 К? 1 1

1 1 1 1 1

! 1 I | тво та, % уке. к-те [в 1 rpai.it,-;ах | в 1 сумме в-в. %|в 1 сырье, %\

1 1 111 ЗР-1 30 14-19 1 0,76 | 1 0,1525 | 1 10,19 | 0,11 . 1 1

|2| ЗР-2 35 23-55 0,62 | 0,2709 ! 18,11 | 0,20 • 1

|3| ЗР-З 40 5-3-54 0,53 I 0,1505 1 10,05 I 0,11 1

|4| ЗР-4 45 М-86 0,40 I 0,5059 | '33,88 | 0,33 . 1

151 ЗР-5 65 134-137 0.34 | 0,1673 ! 11.20 I 0,12 ' 1

|б| ЭР-6 70 130-М5 0,24 ! 0,0818 | 5,47 ! 0,05 1 1

171 ЗР-7 75 . 145-157 0,14 I 0,0873 | 5,53 | О.СЧЗ 1

1Ы 1 1 зр-а ао 155-169 0,12 | | 0,0737 | I 5,26 I 1 0,С5 1

- а -

Таким образом, основным;! фяавовоидаьж трсва гоишжа Гегеля являются вещества ЭР-1 - ЗР-5. Самое високое содерглйие в сукзла флавсноидов (337.) игеет гл-щестЕО ЗР-4 , а самое меньшее. - вещество ЗР-8 (5,267,).

УСТаЯОПЛеНП-;- пр'.;рО.!',!,[ фЛЗВОПОИДОЗ ЗОПНИГ.а реТеЛН.

С целью усталэвлбккл природы флавокоидов еопшшз Гегеля проводили кислотный гидролиз суммы фЛОЕОКОКДОВ по МеТОДУ Л И. Дзрвгк-иой .

В результата хроуатографнческого анализа агликонов установлено, что они представлены тремя веществами со значениями ВГ-0,72; 0,В6 и 0,96 в системе в-бутанод-уксусная кислота-вода (4:1:5). При сопоставлении со "сьидетеллм:;". эти Ееществл ¡¡дектнфпцировсны ш: кверцетин, л'отеолнл и ярогаводноб флаванона. ■

С целью более точно:: идентификации суп::у агликонов подвергли . препаративному разделении и ' отдельные агликоны ндеяти&ишровадн с испольЕованизы физико-химических методов анализа.

Дгли'сон-1 представляет собой лпмонно-желтого цвета крксгалли-ческсз вещество, с температурой плавления 316-318°С, растворимое г.' 5'4'кре, хлороформе, этаноле \\ нераствоспмсе в воде. В У£>-спетре его имеется_ два максимума поглощения: 372 ны (! полоса) и 255 нм III ■полоса). Батсгхрокиа; с ацетатом натрия й%*1Ь им; с борной .кислотой в присутствии ацетата натрия дЯ*21 нм; с .хлористым цирконило.ч 90 иы. Это указывает на то, что исследуемое вещество и:,кет свободные -ОН группы в 3-,5-,7-,3'-и 4'-полол'Енилх.

Полученные ' данные и результаты хроматсграфччгского анализа (таблица 3) подтверждают, что • выделенный агллкон является •3,5,7,3' ,'4'-пенгаоксифлаЕоком, т.е. кьерцетиком.

Кверцетин' , {/о о ■бгликон-2 представляет собой бйе дно-желтое вещество с температурой плавления 330-3510С, не растворимое в ^оде, хлороформе, < рас.тьоримое 'а ме лоле, зтилацетате и ацетоне. При спектральном анализа в У<3>-области спсктра максимумы поглощения наблюдается при ЗЬО нм ( I полоса) и 2*3'.* Нм ( 11 полоса). Батохрсмия: с ацетатом . катрия.дЯ+34 нм; с борной кислотой в присутствии э цитат а натрии ¿¡1 + 25 нм; со щэлочыо 43 ям и хлоридом алкмйчпл лХ<-40 нм. Это ука-

Результаты хроматографического анализа флаюнових веществ гопника Регеля

Таблица 3

n ; с;!лчс¡¡кз пг

О крас ;: а

пятен

Щдентифици-Ч рсвано

1: !: 5 |15^-у:;с. к-та|£ащ. свет |У'Х^спет | ННз |5%-А1С1з |СНзСОСОо I ггС1с

0 ГС» 0,75

2 0 50 0,02

3 0 0,53

; 0 '-'о ■ 0, Ш

5 0 е. 5 о,;-/.

6 0 5.0 0,24

7 0 о; 0,14

'.! 0, 12

0 0 0,10

•0 0 1. . 0,04

0 г.' ' 0,02

кср. бл. -;й?л. бл. -л^л. 6л. -х?л. бл. -л?л. кор. желтый шлтий аелтый - - - бл. -жл. голубой

го.г/пл"; 1;ор. ;\с-л.-зел. зал.-зел. же л.-зел.

бл. -.тел. голубой бл. -¿ел. голубой ;-.елтий лэл. -зел. :зя.-гея. мел. -зел.

ас л. - ко р. ко р. лт и ¡1 ;■& лт ы Я ха лт ий бл. -.:;ел. бл. -;;кл. голубой ::ср. холг^ор. гклтий гслтий желтый гллтий гелтый -зел. ;г?л. -зел. .\ил. -сел.

|Р-в Виль-|Диазо- ! I сона I реаятир .

флавонол-гл.

флавонол-гл.-

флаванон-гл.

гиперозид

флаванон-гл.

флаванон-гл.

КЕерцемеритрин

лютеолин-гл.

флаванон

лютеолин

гаерцетин

зьшает на то, что исследуемое вещество имеет свободные -ОН группы е 5-,7-,3'-,4'-положениях. Эти данные и результаты хроматографичес-кого анализа.в .присутствии "свидетелей" подтверждают, что исследуемое Бегство является 5,7,3' ,4'-тетраоксифлаьоном, т.е. лютеоли-ном. ¿-тг-ОН

но Ч~~\_у~он

Дотеолин НО

Агликон-3 представляет собой желтое кристаллическое вещество, относящееся к производным флаванона, которое не удалось идентифицировать физико-химйческими методами из-за малого количества.

Исследование сахарного компонента флавоноидов.

Гидролизат .после -отделения агликонов нейтрализовали баритовой водой по лакмусу и фильтровали. Сильтрат упаривали на водяной бане .при слабом нагревании .до.2 мл и подвергали хроматографированию на бумаге в системе растворителей н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5) с использованием в качеств0 проявителей аналин-фталатного реактива и термического воздействия. В качестве "свидетелей" использовали спиртовые растворы глюкозы, рамнозы,. галактозы и других сахараЕ.В результате в гидролийате установлено содержание глюкозы, ■ рамнозы и галактозы. .

Природу отдельных . флавоноидных компонентов мы устанавливали по характерным реакциям окрашивания на бумажных хроматограммах (таблица 3).

■ Таким' образом, флавоноиды зопника Регеля в основе своего строения имеют агликоны кверцетин, лотеолин и неидентифицированный

' нами фдаванон. Сахаристая часть флавоноидов представлена глюкозой, рамиоаой и галактозой.

Идентификация основного флаВоноидного гликозида.

■ При определении количественного содержания отдельных компонентов суммы флазоноидов зопника Регеля установлено, что преобладающим является вещество ЗР-4 (таблица 2). Оно представляет собой-кристаллический порокок желтого цвета с температурой плавления 237-238%.'

В УФ-спектре исследуемое вещество имеет максимумы поглощения з области 361 нм (I полоса) и 258 нм (II полоса): Еатохромия: с ацетатом натрия ¿Я+19 нм; "с борной кислотой в присутствии ацетата

натрия йЯ +26 нм; с хлоридом алюминия дЯ+77 нм; Это'указывает на то, что исследуемое вещество имеет свободные гидроксильные группы в 5~,7-,3'-и 4'-положениях.

В ИК-спектре вещества ЗР-4 отмечены полосы поглощения, характерные для гидроксилышх ( 3200-, 3400 см1) и карбонильных ( 1670 см"1) групп, ароматической системы (1615, 1580 и 1520 см^ и других полос поглощения. Пиранозная форма сахарного компонента подтверждается наличием максимумов поглощения -при 1080, 1050 и 1020 Максимум поглощения при 805 см-■'•и отсутствие такового при 893'см-^-указывает, что сахарный компонент связан с агликоном уз-гликозидной связью.

В результате кислотного гидролиза 0,2 г флавоноида ЗР-4 'по методу Л. И. Дерюгиной получили агликон в количестве 0,128 г , чтс составляет 61X от взятого для гидролиза количества флавоноида. Следовательно, исследуемое вещество является монозидом.

Выделенный агликон представляет собой лимонно-желтого цвета кристаллическое вещество с температурой плазления 311-312°С, растворимое в эфире, хлороформе, спиртах и нерастворимое в Еоде. Максимум поглощения в У'Х-спектре составляет 372 нм и "55 нм. Эти данные и результаты хроматогра^'ического анализа с достоверным образцом "свидетеля" подтиер.тдают, что выделенный агликон является 3,5,7,3' ,4'-пектаоксифлаЕоном, т.е., КЕерцетинсм.

Гидролизат после отделения агликона нейтрализовали баритовой' водой по лакмусу, фильтровали. Фильтрат упаривали на водяной бане при слабом нагревании до'2 мл I! подвергли хроматографическсму исследованию на бумаге в присутствии "свидетелей" Сахаров.

В результате проведенного анализа нами обнару.^ена галактоза. Полученные даннь; подтверждают, что исследуемое вещество является

Таким образом, установлено, что флавоноиды зопника Регеля являются производными агликонов кверцетина, лютеолина и неидент. цированйого нами флаванона. Сахаристая часть флавоноидов представлена глюкозой, рамнозой и галактозой.' Основной флавоноид, составляющий около 337' от всей суммы, идентифицирован нами на основе реакций. окрашивания на хроматограммах, данных УФ-, ПК-спектроскопии, температуры плавления и пробы смешения с достоверным образцом как кверцетин-З-О-^-О-галактопиранозид, т. е. гиперозид'.

Полученные данные позволяют стандартизовать сырье зопника Регеля по содержанию гиперозида - основного компонента суммы биологически активных веществ.

Количественное определение флавоноидов. •

Количественное определение суммы флавоноидов проводили фотоз-лсмстроколориметричэ.ским. методом' с использованием калибровочной кривой, разработанной нами по ГСО гиперозида (таблица 41 Метрологическая характеристика результатов 'количественного определения суммы ¿лавоноидов в 5 образцах травы зопника Регелл представлена в таблице 5. ' •

' Таблица 4

Показатели оптической плотности • стандартных растворов гиперозида

м I Количество | Количество IРазведение,! Концентрация ги- I Оптическая

¡раствора А,мл|гиперозида,г I мл |перозиДа, мг/мл I плотность

1'. 1,0 0,006 - 25 0,24 - ;

2. ' -1.5 0,009 25- 0,36 -

3. 2,0 0,012 25 -1 " 0,48 -

4. 2,5 .0,015 ' 25 ,0,60 0,22

5.' ' ¡3,0 ■ 0,018' 25 0,72 0,25

6. .3,5 . 0,021 .25 0,8.4 0,31

7. • 4,0. 0,024 25 0.96 0,37

8. 4,5 ' 0,02;' 25 1,03 0,44

9. 5,0 ■ 0,030 ' 25 1,20 ' 0,51

Таолица 5

Данные количественного определения суммы флавоноидов в траЕе зопника Регеля

-1-1-1-1--1--;--

N I Содержание суммы | Ср. ариф. I Станд. откл-е | Доверит. | Относит. | флавоноидов, % | X ср | S х |вероят. Р| ошибка

I____i_i__!_i_____

1 " 4,47

2 4,42

3 4,37 4,478 0,039 0,108 2,42

4 4,55

5 4,58

Определние динамики накопления и локализации•флавоноидов.

С целью определения оптимальных, сроков заготовки сырья и рационального использования ресурсов зопника Регеля мы изучили содержание флавоноидов по фазам развития и органам растения. Для этого на месте ежегодной ваготовкл I п. Чкмган) "обирали надземную часть растения в различные фасы развития.Собранное с(.:рье Еисуюпк»-ли в тени, измельчали и содержание флавоноидов определяли выкеопи-саппым способом. Данные определений представ тени в таблице 0.

'Таблицу 6-

Динамика накопления суммы флавоноидов в траве зопника Регеля*

Место сб'ора|Дата сбора|Яаза развития растения| Сод-е Флнеоноидов,у.

Ташкентская -30.05.9:;.- ' До цветения 3.85 область 21.07.92. Цветение 4,51 пос. Чимган 27.08.92. Плодоношение 2,75. ___________:______._____________________...____________________________

^Средние данные из 5 определений.

Как видно из рдяных таблицы, содержание флааэнондс!?- по урре развития растения постепенно увеличивается г, достигает максимума к период цветения растения (4,бШ, который представляется наиболее

оптимальным сроком заготовки сырья. Затем содержание (Чяавоноидов падает (2,75Х).

Для определения локализации флавонопдоЕ изучено содержание флавоноидов отдельно по'органам растения. С этой целью сырье, собранное в период цветения, разделяли на составные органы по отдельности и измельчали. Содержание флавоноидов определяли в 5 партиях сырья вышеизложенным способом. При этом обнаружено, что наибольшее содержание флавоноидов приходится на листья (4,84%), а наимэнь-шее-нз стебли (2,631). В цветках содержится 2,85 % флавоноидов.

Стандартизация лекарственного сырья и ресурсоведческие исследования.

Для ре пения некоторых Еопросов, связанных с практическим использованием травы зопника Регеля, мы поставили перед собой задачу стандартизации сырья предлагаемого лекарственного растения и проведения ресурсоведческих исследований в наиболее доступных местах его произрастания. Стандартизацию сырья проводили на 5 партиях в соответствии с требованиями Г'1> XI, СТП 64-10-33-17-60 "Порядок разработки, согласования и представления на утверждение проектоЕ фармакопейных статей и временных фармакопейных статей на лекарственное растительное сырье" и других регламентирующих документов.

При определении запасов и картировании выявленных заросле? зопника Регеля руководствовались единой методикой, утвержденной в 1986 г. Мннмедбйопромом СССР и Госкомитетом СССР по лесному хозяйству.

В результате товароведческого и химического анализов 5 партп£ сырья установлены морфолого-анатомические ■ признаки, позволяют определять подлинность сырья зопника Регеля.

При макроскопическом анализе сырья «-установлено, что для стеблей зопника Регеля характерно серовато-густо-войлочкое опушение; листья часто продолговато-ланцетные с расставлено-пильчатыми краями, беловато-серовато войлочные; прицветники е 1,5 раза превышает трубку чашечки; венчик розоЕ.ато-лилового ЦЕета.

При микроскопическом анализе установлены следующие анатомо-диагкостические признаки. Для стебля характерно отсутствие скле-ренхимных волокон над флоэмой и наличие кристаллов оксалата кальция в клетках ксилемы. Листья покрыты простыми, ветвистыми, железистыми Еолосками и железками. Зопник Регеля отличается от гопник;

«злючего отсутствием комбинированных головчато-ветвистых волосков. Хелезки на одноклеточной ноже с 2-4-мя выделительными клетками, ло характерно для недушистых растений сем. Ьапцасеае, в частности, эастений рода зопник. Татке характерно наличие призматических сристаллов в клетках столбчатой паренхимы листа. Для анатомического строения чашечки ЦЕетка характерна четковиднзя утолщенность зтенок эпидермальных клеток. Все эти признаки позволяют отличить зопник Рег"ля от близких по морфологическому строению видоь, особенно, когда сырье в измельченном виде и трудно отличимо по внешнему виду.

Учитывая г.колого-ценотические условия произрастания и особенности сбора травм зопника Регеля, установлены допустимые нормы числовых показателей, необходимые для определения доброкачественности сырья (таблица 7).'

Таблица 7

Нормы числовых показателей для травы зопника Регеля

N I Наименован: 1/п |

показателей

I Нормы для сырья

| целг.ного | измельченного

"5

■ б 7

9 10

Содержание флавоноидса, %,не менее Содер.глннэ влаги, X, не болей Содержание общей золы, X, не более Содержание золи, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной!': кислоты, %, не более

Побуревших и почерневших частей травы, Т., не более

Стеблей толще 5 мм, не более Содержание частиц,'проходящих сквозь сито по ГОСТ 214-83 с диаметром отверстий 0,5 мм, не более Содержание частиц размером свыше 5 мм

X, не более Органической примеси, не более Минеральной примеси, X, не более

4 10 б

0,5

3,5 3

4 10

0,5

3,5 3

10

5

8

- 16 -

Определение запасов травы зопника Регеля.

С целью создания научно-обоснованной системы планирования и практического осуществления заготовок изучаемого нами лекарственного растения, организации рационального использования и своевременного воспроизводства ресурсов мы провели ресурсоведческие исследования- по Ташкентской области. Для определения запаса сырья в первую очередь изучили эколого-ценотическую характеристику растения, т.е. установили, в каких растительных сообществах встречается данный вид, где он может господствовать, какие места обитания наиболее благоприятны для его произрастания. Эти сведения мы получили .из литературных источников, приведенных е литературном обзоре, а также на основании результатов своих наблюдений и данных гербарных этикеток Гербарного отделения института ботаники АН РУз. На осно-■вании полученных сведений составили карту-схему распространения зопника Регеля по Ташкентской области (рис. 1,2).

В результате ресурсозедческих исследований установлено, что основными местами произрастания зопника Регеля являются : село Хум-еак,Еерховья Хордгкуман-еая, долина реки Угам, склоны урочища Са-ры-Д:ч,гн, бассейн реки Чаткал, Еерховья реки Сандалак и Чукур-сай, село Купган-тюбе, долина реки Чатглл, близ селения Бручмуллы, правый берег Кук-су (северо-восточный склон), кишлаки Чимган и Хадж-кент, долина реки Пскем, правый 6ер-г урочища Кунь, бассейн реки Колес, ;рочище Г-апламбек, Сары-агач, станция Дарбага, Шарап-Дана, Узун-булак (на мягких склонах), горы Курама, верховья peras Ангрен, долина сал Кара-бау, северо-восточный склон в 2-3 км к югу от урочища Кекрень, склоны у гаев Дащкарек и Лая к, бассейн реки Ангрен, северо-западный склон левого берега реки-Кртаы (на каменисто-щебенистой почве).

При определении запасов сырья -на месте ешгодаой заготоЕки методом закладки учетных площадок па территории площадмо 4,6й га ■эксплуатационный запас сырья составляет 6,15 т, а объем ежегодной заготовки 1,025 т воздушно-сухого сырья.

Данные ресурсоведческих доследований использованы при составлении инструкции г.? сбору и суике травы зопника Регеля.

Ркс. 2. Ресурсы зопника Регеля в Бостанликском

районе Ташкентской области.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. ЕперЕые проведено сравнительное Цитохимическое'' изучение 10 видов аопника, произрастающих в Узбекистане, в результате которого внявлея перспективней вид, наиболее близкий к оЗДицннэлышм видам - зопник Регеля.

2. Общеизвестными методами анализа в надземной части гопнИка Регеля обнаружено: эфирных масел-0,1%; смолистых, вещеетв-3,32%; флавонондов-4,51; дубильных веществ (титруемых полифенолов)-2,ЗХ; эдтсцизнсв-О,43^; фенслокислот-3,2%; кумариноз-О,42Х; иридоидсв-5,15*; караткноидов-О,122; ас1:орЗ::нсвси ю:слэ?и-0,055Х; органических кислот-1,76%; сахзрэг4,54Х (до гидролиза) и 11.1/? (после гидролиза; , а так?.- ^-ситостерин и урсоловал кислста.

3. Установлены качественней состав и природа фкэвоноидов гопника Регеля. ебнарухено, что сумма флаЕОНСицов представлена 3 с — '.".зствамн,. относящимися, в основном,к производным лктеолина и квер-ц.тнна.

4. Уст-^сзл-.н кслнчестге.чно пгесблада::щ;г": (33") в су-"1- г.е-1::сте флзлзногд, который п.-ектп^/иирсган как кг:срц-:-тпн-3-:.-_;3-0-га-~с"с:опкргиозкд, 'т.е. гкпероэкд.

5. Стандартизация тртвы ссг.а':.ка Регелг. прспздена с учетом результатов логических исследований по содержанию ^лавоноп-гов. .Еперзь;э разработан <отсэлзкгрополори.\*етричгс;:;:3 кэтод количественного определения сукчи флавеноидов ?олника Регеля с исполь-ссзаккем калгсбрэгзчявй кривей, построенной по пгперогкду.

5. Изучена дииакика накопления флавоноидоз и установлен ■ оптимальный -срок заготовки сырья- период цветения.

7. Изучена стабильность сырья гопника Гегеля при хранении и рекомендован срок хранения сырья 3 года.

8. Сармакологическлми исстедованиями, установлена вс?мо;<ноеть использования травы гопника Регеля в качестве ективногг енда-тивного средства.

9. Установлено, что выражонние' седативное действие изучаемого сырья- обусловлено флавоноидами.

- ?.о -

10. В результате ресурсоведческих исследований составлена карта-схема распространения зопника Регеля по Ташкентской области и определены запасы его сырья.

11. Определены диагностические морфолого-анатомические призпа-ки и соответствующие числовые показатели, позволяющие оценить подлинность и доброкачественность предлагаемого лекарственного сырья.

12. Составлены проект Временной фармакопейной статьи и инструкция по сбору и сушке оирья, представленные для рассмотрения в йармакологичееккй Комитет МЗ РУ?..

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Гачкез А. К. , Пулатова Т. П. К изучению видое зопника, произрастающих в Узбекистан-0 // Тез. дскл. науч. -теор. кокф. "Экологии окружающей среды". - Тазмёит, 1930.- С. 14.

2. Ганиев А. К. , Пулатова Т. П. К изучению флавоноидов зопника// Крат. тез. докл. I съезда молодых ученых-медиков и врачей Узбекистана,-Андиган, 1991. Т. 2.-С. 431.

3. Евдокимова К. И. , Ганкев А. К , Пулатова Т. П. Изучение бпо-логичес/сй активности травы гопника Регеля//Матер. конф. "Биологически актч-'Еные соединения, синтез и использование".- Пенза, 1992. -С. 49.

Л Ганиев А. К. , Пулатова Т. П. Регель цузик.улош махрулотини стандартлаа масаласига дойр. // Киме ва- фармация. -1993. - N 4. -В. 29-31.

5. Ганиев А. К. , Пулатова Т. П. Регель ь;уз1 ¡-;улога усимлигидан флаваноид препарати олиш//Кимё ва фармация.-1953. --N5.-В. 65-67.

6. Ганиев А. К. , Пулатова Т. П. Сравнительное морфолого-анатомическое изучение двух видов зеппика Узбекистана//Киме ва .фармация. -1993. -Кб. -С. 11-13.

А: Раниевнинг "Уэбекистонда усадиган нц'аикулое; турларини фармакогностик урганиш" мавзусидаги диссертация ишининг кискача мазмуни

Узбекистонда усадиган 10 та ^узичулоц турларини фармакогностик урганиб, тиббиётда ишлатиладиган тиканли к^зицуло^ усимлигига анг я^н ва исти^болли тури Регель ^уаи^улоги эканлиги ани^анди.

Умумий тахлил усуллари билан Регель ^зи^улогининг ер устки ^исмида эфир мсйлари, смоласимон моддалар, урсул кислотаси, бет-та-ситостерин, кумаринлар,. флавоноидлар, фенол кислоталар, антоци-анлар, иридоидлар за цанд моддалари борлиги аницланди.

Икки йуналишли ногоз хроматографияси усули ёрдамида Рэгель ($узи!углори флавоноидлари 8-та моддадан иборат эканлиги аншуганди. Флавоноидлар миедорини фотон^лориметрик усулда ани^аш усули так-лиф этилди.

Регель ^узшуглогидан олинган сувли ажратма флавоноидлар ва иридоидлар йигиндиси биологик фаоллиги ва иридоидлардан флавоноид-ларнинг тинчлантирувчи ва гипертензив фаоллиги буйича устунлиги аншуинди. •

Регель чуага^улогининг ма^сулотини флавоноидлар буйича стан-•дартлаш таклиф этилди. Бунда ма^сулотнинг сонли курсаткичлари ДФ XI буйича ва анатомик-диагностик белгилари ани^анди.

Регель ^узи^улоги мах,сулотига Ва^тинча фармакопея мацоласи ишлаб чш;илди. Регель !^уаиЦулогининг Тошкент вилоятида тар^алиш харитаси тузилди ва унинг махсулоти забираем аникланди.

Ыа^сулотни йигии ва к^урнтии усулларини курсатувчи инструкция тузилди.

SUMMARY

A.K.Ganiyev. "Pharmacognostical study of speciesea of Phlomis growing in Uzbekistan"

Twelve spacieses of Phlomis regelii 11.Pop. growing in Uzbekistan were studied. It was established that the most perspective and close species to Phlomis pungens Willd is Phlomis regelii M.Pop.

By generally accepted methods of analysis of Phlomis regelii'a overground part the presence of ether oils, resinous substances, ursol acid, ^-sitosterol, cumarine derivatives, flavonoids, phenoloacids, anthocianes, iridoids, vitamins and sugars was established. The qualitative compound of flavonoids from 8 substances was determined by method of two-dimensional paper chromatography.

Photocolorlmetric method on hyperoside was recommended ifor quantitative dete mination of flavonoids. The flavonoid preparation was obtained and regulations of technological process were elaborated.

The biological activity of water infusion of flavonoids and iridoids'were established and it was found out that the acti vity of flavonoids is more strong than it was of iridoids.

Standardization of herb in content of flavonoids was carried out. Niunorical indoxsa of the herb according to State Pharmacopeia XI and anatomic and diagnostic signs of selected organs wero determined. n

Ihu Temporary iharnacopeial Article for tha herb of Phlo-nik regolii and tho instruct;cms ior ita collecting and drying vi«re pads up.

The rsearvbs of Phloitio iv^tilii'c raw isac crisis in CusU-kent ret--ion wore daloiiflir.»!« and c. ¡,.»p o£ Liu opruudins iO.tio r-;aui! up.