Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение северокавказских видов сем. бурачниковых (Boraginaceae) как источников шиконина и разработка лекарственных средств на их основе

Дайронас Жанна Владимировна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕВЕРОКАВКАЗСКИХ

ВИДОВ СЕМ. БУРАЧНИКОВЫХ (ВОКАСШАСЕАЕ) КАК ИСТОЧНИКОВ ШИКОНИНА И РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ИХ ОСНОВЕ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

003163629

Дайронас Жанна Владимировна

ФА РМ А КО Г Н ОСТ И Ч Е С КОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕВЕРОКАВКАЗСКИХ

ВИДОВ СЕМ. БУРАЧНИКОВЫХ (ВОКАСШАСЕАЕ) КАК ИСТОЧНИКОВ ШИКОНИНА И РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ИХ ОСНОВЕ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическ академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Челомбитько Вячеслав Александрович Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Компанцев Владислав Алексеевич ГОУ ВПО Пятигорская ГФА Росздрава доктор фармацевтических наук, профессор Молчанов Геннадий Иванович ГОУ ВПО «Северо Кавказский государственный технический университет» Филиал в г. Пятигорске Ведущая организация: ГОУ ВПО «Самарский государственный медицин-

ский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится ^'¿£А&<А(Я 200г. в 3°° часов на заседай

Диссертационного совета Д 208.069 01 при ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрав (357532, Ставропольский край, Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорско ГФА Росздрава

Автореферат разослан «/^» сЛб^Л^Л 200

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук, профессор Е В Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Во многих странах мира в XX веке возрос интерес исследователей к хиноид-ным пигментам К этому классу природных биологически активных соединений относятся и нафтохиноны, которые вырабатываются бактериями, грибами, морскими иглокожими, лишайниками и растениями В настоящее время они обнаружены более чем в 20 семействах цветковых растений, в том числе .1и§1апс1асеае, Р1итЬацтасеае, Вога§тасеае, Шюасеае, Огояегасеае и др Сырье, содержащее нафтохиноны, широко используется в традиционной медицине Китая, Тибета, Кореи и « • »

Японии для получения жаропонижающих, противоожоговых, ранозаживляющих, противоопухолевых лекарственных средств Из корней дальневосточного вида воробейника красно корневого (1лШозрегн1ит егуИмчэгЫгоп Б1еЬо1с1 е* Zucc ) сем. бурачниковых (Вогацшасеае) был выделен нафтохинон шиконин, который проявил себя как эффективный растительный антибиотик, оказывающий противоопухолевое, антибактериальное, противовирусное, амебоцидное, противовоспалительное и регенерирующее действие

Шиконин и его эфиры используются в традиционной и научной медицине многих стран, благодаря своему широкому спектру биологической активности Однако лекарственных средств на его основе за рубежом очень мало, а в России вообще нет. Отечественная продукция, содержащая шиконин и его производные, ограничивается только косметическими или перевязочными средствами Основная причина такого положения — недостаточная промышленная сырьевая база и отсутствие доступных методов стандартизации Фармакогностические исследования воробейника краснокорневого, проводимые в 70-е годы XX в , показали бесперспективность заготовки сырья как от дикорастущих, так и от культивируемых образцов этого вида Фитохимический анализ других представителей сем. бурачниковых выявил, что количество видов, содержащих шиконин достаточно велико Однако поиск сырьевых источников шиконина был прекращен в 80-х годах XX в , уступив место биотехнологии. Широкие исследования в этой области, проводимые в Японии и России, позволили разработать способы промышленного получения шиконина, испсльзус-

V \ \ \

мые в нзстоящее время Несмотря на полученные положительные результаты, биотехнологический способ производства шиконина остается достаточно дорогостоящим из-за сложного технологического процесса и его высокой наукоемкости

V V

Таким образом, расширение растительной сырьевой базы источников шиконина и его производных за счет изучения малоизученных видов сем Во^тасеае, произрастающих на Северном Кавказе, является актуальной проблемой

Цель и задачи исследования

Цель настоящей работы — поиск нового перспективного сырьевого источника шиконина среди малоизученных видов сем бурачниковых флоры Северного Кавказа, разработка методов стандартизации сырья и получение лекарственных средств на основе суммы нафтохинонов

Для достижения этой цели необходимо решить следующие задачи

1 Провести качественный и количественный анализ образцов сырья некоторых северокавказских видов сем бурачниковых, выявить среди них наиболее перспективный сырьевой источник шиконина.

2 Определить оптимальные условия извлечения шиконина и его производных и разработать методики для стандартизации этого вида сырья.

3. Провести предварительные ресурсные и интродукционные исследования выбранного вида на территории Ставропольского края 4 Изучить динамику накопления нафтохинонов в зависимости от фазы вегетации и

установить оптимальные сроки заготовки сырья 5. Определить основные морфолого-анатомические диагностические признаки и

числовые показатели сырья выбранного вида б Разработать проект фармакопейной статьи предприятия на сырье предлагаемого вида

7. Разработать технологию экстракта и мази, содержащих шиконин и его производные, а также методики, пригодные для стандартизации полученных лекарственных препаратов

8. Провести предварительные фармакологические исследования разработанных лекарственных препаратов по выявлению специфической микробиологической и

фармакологической активности Научная новизна исследования

у

На основании скрининговых фотохимических исследований некоторых видов сем бурачниковых установлено, что шиконин и его производные содержатся только в корнях синяка русского, синяка обыкновенного, оносмы кавказской, воробейника краснокорневого Сумма нафтохинонов в корнях различных видов колеблется от 0,1 до 1,9% Наибольшее количество нафтохинонов накапливается в корнях синяка русского (1,9%) Методом ТСХ установлено, что в корнях синяка русского наряду с описанным в литературе шиконином впервые идентифицированы ацетилшиконин, изобутирилшиконин, p-оксоизовалерилшико-нин и дезоксишиконин

Установлена локализация нафтохинонов в клетках феллодермы корней синяка русского, что позволяет определять специфику заготовки сырья Впервые выявлены закономерности изменчивости содержания нафтохинонов в корнях синяка русского в зависимости от фазы вегетации, на основании чего установлены сроки заготовки этого вида сырья

Определены оптимальные условия извлечения суммы нафтохинонов из корней синяка русского Изучена возможность препаративного хроматографического разделения нафтохинонов и разработан способ получения вещества-стандарта (ГСО шиконина), позволившего обосновать метод стандартизации сырья

Разработана технология масляного экстракта корней синяка русского и мази, содержащей полученный экстракт

Изучена антимикробная активность липофилыюго комплекса корней синяка русского и установлено, что минимальная ингибирующая концентрация составляет в отношении к Staphylococcus aureus 6,25 мкг/мл, в отношении Bacillus subtihs -12,5 мкг/мл (посевная доза 103 КОЕ/мл) Установлено, что противоожоговое действие разработанных лекарственных препаратов более выражено при низких концентрациях суммы нафтохинонов, антимикробное - при высоких.

Практическая значимость работы и внедрение результатов в практику Установлены характерные морфолого-анатомические диагностические признаки нового вида лекарственного раечтельною сырья (синяка русского корни),

нормы его качества и разработаны методики определения в нём суммы нафтохинонов: Разработаны методики выделения шиконина из корней синяка русского и его качественного и количественного анализа Разработаны проекты фармакопейных статей предприятия «Синяка русского корни» и «Шиконин Государственный стандартный образец», которые приняты ЗАО «Вифитех» г Москва (акты от 09 04 07) Установлена динамика накопления шиконина и его производных в зависимости от фаз вегетации, определены сроки заготовки корней синяка русского, которые отражены в «Инструкции по сбору и сушке корней синяка русского», утвержденной

000 НПО «ФитоЧ» г Ставрополь (акт внедрения от 12 04 07) Разработана техно-

» » »

логия производства и методики стандартизации экстракта корней синяка русскою масляного и мази, его содержащей, с рабочим названием «Эхион» Апробированы технология производства и методики анализа мази «Эхион» в условиях ЗАО «Центрально-Европейская фармацевтическая компания» г Москва, о чём получены соответствующие акты от 16 11 06.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ госрегистрации

01 200 112164)

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты фотохимического скрининга по содержанию шиконина и его производных в некоторых видах сем. бурачниковых флоры Северного Кавказа

2. Результаты экспериментальных исследований по разработке методик выделения и количественного определения суммы нафтохинонов в корнях синяка русского

3. Способ получения стандартного образца шиконина, разработка методик его анализа с использованием различных физико-химических методов.

4. Результаты ресурсных и интродукционных исследований сырья синяка русского на территории Ставропольского края

5 Результаты морфолого-анатомического диагностического изучения сырья синяка русского

6 Результаты изучения состава и изменчивости содержания нафтохинонов корней

синяка русского по фазам развития растения

7 Обоснование технологии масляного экстракта корней синяка русского и мази, его содержащей

8 Результаты изучения антимикробной активности выделенного из корней синяка русского липофильного комплекса, содержащего сумму нафтохинонов, а также ранозаживляющего и антимикробного действия разработанных лекарственных средств

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на 60-й, 61-й и 62-й межрегиональных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2005-2007 гг ), IV научно-практической конференции молодых ученых и студентов Краснодарского края (Анапа, 2006 г ), научной конференции «Актуальные проблемы фармации» (Владикавказ, 2007 г) По материалам диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 2 статьи - в журналах, рекомендованных ВАК

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 155 страницах текста компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка цитируемой литературы, включающего 154 источника, из которых 68 на иностранном языке, и приложения Диссертация иллюстрирована 46 рисунками и 42 таблицами

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Сравнительный анализ нафтохинонов в образцах сырья некоторых северокавказских видов сем.бурачниковых

Для экспериментальных исследований использовались образцы сырья 7 видов дикорастущих и 1 культивируемого вида сем бурачниковых, заготовленные в 20042006 гг в фазу цветения в разных регионах Северного Кавказа (Ставропольский край, Карачаево-Черкесская Республика, Республика Дагестан) Сырье воробейника краснокорневого было заготовлено от растений, выращиваемых в ботаническом са-

ду ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава

Для качественного анализа образцов сырья использовали цветную реакцию с раствором натрия гидроксида 5%, микросублимацию, тонкослойную хроматографию и спектрофотометрию в видимой и ультрафиолетовой области

Шиконин и его эфиры при взаимодействии с раствором натрия гидроксида образуют синее окрашивание, интенсивность которого зависит от содержания наф-тохинонов Кроме того, при наличии нафтохинонов хлороформное извлечение из сырья имеет красную окраску Результаты качественных реакций на содержание нафтохинонов в заготовленных образцах сырья представлены в таблице 1

Таблица 1 - Результаты анализа образцов сырья на присутствие нафтохинонов

Корни Окраска Микро-сублимация

извлечения растворителем из сырья после добавления раствора натрия гидроксида

Воловик лекарственный -Anchusa officinalis L Бесцветная Бесцветная -

Воробейник краснокорневой -Lithospermum eryihrorhizon Sieb et Zucc Красная Синяя +

Восковник малый -Cennthe minor L Светло-желтая Светло-желтая -

Окопник шершавый -Symphytum asperum Lepech Бесцветная Бесцветная -

Оносма кавказская - Onosma caucasica Levin ex M Pop Розовая Голубая +

Синяк обыкновенный -Echium vulgare L Светло-розовая Бледно-голубая +

Синяк русский -Echium russicum J F Gmel Красная Синяя +

Эгонихон фиолетовый — Aegonychon p'urpureo-caeruleum (L) Holub Бесцветная Бесцветная -

Как следует из данных, приведенных в таблице 1, нафтохиноны обнаружены только в 4 видах изучаемых образцов сырья

Для подтверждения наличия шиконина и его производных измеряли светопо-глощение хлороформных извлечений из сырья относительно хлороформа в диапазоне длин волн от 250 нм до 600 нм с помощью спектрофотометра СФ-56 При анализе корней синяка русского измеряли светопоглощение нативного хлороформного извлечения Извлечения из корней синяка обыкновенного, оносмы кавказской и воробейника краснокорневого требовали предварительной очистки от примесей, иска-

жающих спектр Спектральные кривые имели полосы поглощения с максимумами при длинах волн 273±2 им, 492±2 им, 525±2 нм и 5б5±2 км, соответствующие максимумам поглощения шиконина и его производных При регистрации спектра поглощения извлечений из эгонихона фиолетового, воловика лекарственного, восковника малого и окопника шершавого характерные максимумы в названном диапазоне длин волн не были обнаружены

Для идентификации производных шиконина в корнях исследуемых образцов использовался метод хроматографии в тонком слое сорбента.

Хлороформные извлечения из сырья хроматографировали в системах растворителей петролейный эфир - диэтиловый эфир в соотношении 10 3,5 (система 1) и гексан - ацетон 20 1 (система 2) Пятна обнаруживали по собственной окраске В качестве свидетелей использовали сумму нафтохинонов дикорастущего воробеини-ка краснокорневого, любезно предоставленную акад П Г Горовьгм - заведующим лабораторией хемотаксономии Тихоокеанского института биоорганической химии (г Владивосток) Производные шиконина идентифицировали по величинам сравнивая их с литературными данными (таблица 2)

Таблица 2 — Качественный состав нафтохинонов в образцах сырья исследуемых видов сем бурачниковых __

Образцы сырья Значения Идентифицированный нафтохинон

система 1 система 2

Воробейник краснокорневой 0,13(0,10) 0Д0 (0,23) 0,10(0,10) 0,14 (0,14) р-оксоизовалерилшиконин шиконин

Оносма кавказская 0,20 (0,23) 0,13 (0,14) шиконин

Синяк обыкновенный 0,14(0,10) 0,12 (0,10) ^-оксоизовалерилшиконин

Синяк русскии 0,09(0,10) 0,25 (0,23) 0,45 (0,42) 0,63 (0,62) 0,11 (0,10) 0,15(0,14) 0,42 (0,40) 0,48 (0,47) (З-оксоизовалерилшиконин шиконин ацетилшиконин изобутирилшиконин

Сумма нафтохинонов, выделенная из дикорастущего воробейника краснокорневого 0,08 (0,10) 0,17(0,23) 0,47 (0,42) 0,67 (0,62) 0,78 (0,77) 0,11(0,10) 0 16(0,14) 0,41 (0,40) 0,47 (0,47) 0,56 (0,55) Р-оксоизовалерилшиконин шиконин ацетилшиконин изобутирилшиконин дезоксишиконин

Примечание в скобках приведены значения Яг из литературных данных Как следует из данных, приведенных в таблице 2, качественный состав нафто-

хинонов образца сырья воробейника краснокорневого, выращенного в Ботаническом саду Пятигорской ГФА, менее разнообразен по сравнению с дальневосточным об-

разцом этого вида. Наиболее близок к составу суммы нафтохинонов дикорастущего воробейника краснокорневого состав суммы шиконинаи его производных дикорастущего образца сырья синяка русского

Количественное определение нафтохинонов в заготовленных образцах сырья мы проводили по модифицированной методике Н В Тареевой (1969 г ), основанной на измерении оптической плотности раствора, полученного при извлечении нафтохинонов из органического растворителя раствором натрия гидроксида 5% В качестве рабочего стандартного образца использовали раствор шиконина в растворе натрия гидроксида 5% Результаты эксперимента представлены в таблице 3

Таблица 3 — Содержание сучий нафточиноков (ь пересчете на шикснин) в образцах исследуемых видов сырья __

Навеска, г | А | X, % Метрологические характеристики

Корни синяка русского ^=1,91% 8=0,0745 5-..... Ддг=0П78! е=±4,08%

0.4499 0,430 1,92

0,5234 0,504 1,99

о чадо П 41 1 1 70

0,4612 0,460 1,98

0,4286 0,405 1,93

0,4746 0,427 1,87

Корни синяка обыкновенного X =0,20% 8=0,0075 =0,0031 =0,0079 Е=±3,92%

0,5099 0,610 0,21

0,5081 0,579 0,20

0,4952 0,564 0,20

0,4867 0,582 0,20

0,5049 0,575 0,19

0,5114 0,640 0,24

Корни воробейника краснокорневого ^=0,35% 5=0,0147 =0,0060 Л*=0,0154 е=±4,39%

0,3099 0,600 0,34

0,3234 0,663 0,36

0,3502 0,658 0,33

0,3312 0,660 0,35

0,3286 0,674 0,36

0,2746 0,579 0,37

Корни оносмы кавказской X =0,! 4% Э=0,0052 =0,0021 А* =0,0054 е =±3,96%

0,4499 0,359 0,14

0,5234 0,387 0,13

0,4050 0,323 0,14

0,5011 0,400 0,14

0,4132 0,306 0,13

0,4763 0,380 0,14

Как следует из данных, приведенных в таблице 3. наибольшее содержание суммы нафтохинонов в пересчёте на шиконин обнаружено в корнях синяка русско-

го, изучению которого посвящены наши дальнейшие исследования.

В связи с тем, что основным компонентом суммы нафтохинонов, выделенных из корней синяка русского, является шиконин, а остальными соединениями — его эфиры, то мы сочли целесообразным выделить шиконин в чистом виде для дальнейшего использования в качестве государственного стандартного образца (ГСО).

Шиконин нами был выделен из корней синяка русского по модифицированной методике A.C. Романовой к соавторов (1967 г.). Иостадкикая схсма представлена на рисунке 1.

Рисунок 1 — Схема выделения шиконина из корней синяка русского Подлинность и чистоту выделенного вещества оценивали с помощью:

1) ТСХ в системе петролейный эфир — диэтиловый эфир (10:3,5). Идентификацию шиконина проводили по величине Яг (0,22), совпавшей с данными литературы;

2) определения температуры плавления, которая составила 143-)47°С и соответствует чистому шиконину;

3) ИК-спекгроскопии таблетки (смесь шиконина с калия бромидом). 3640, 28003000, 1658 (плечо), 1615, 1578 (плечо). Полосы поглощения полученного спектра

11

соответствуют химической структуре шиконина; 4) УФ-спектроскопии хлороформного раствора в диапазоне длин волн от 250 нм дс 600 нм.

При анализе спектра поглощения шиконина, было установлено, что он имеет четыре максимума в области 273, 492, 525 и 565 нм, согласующихся с литературными данными и соответствующих шиконину (рисунок 2).

А

l.a ОС

-О-« . . .

■/"Л 1-0-Х - - \

1/' \ \ V J«*

;V ' ! n,0 L . 1 ... ' ' ..... \J

л, КМ

Рисунок 2 - Спектр поглощения раствора шиконина в хлороформе 3,0008% Для определения удельного показателя поглощения строили график зависимости оптической плотности при 525 нм от концентрации шиконина. Аппроксимирующая кривая и величина достоверности аппроксимации R2 были определены при помощи Microsoft Excel и представлены на рисунке 3.

I А

Рисунок 3 — Зависимость оптической плотности от концентрации шиконийа

Полученные значения указывают на то, что данная зависимость вида у=Ъх+а имеет строго линейный характер (Я^0,98) Удетьный показатель поглощения шиконина составил 430±2,65.

V »»

Для количественного определения суммы нафтохинонов в корнях синяка русского в пересчете на шиконин и абсолютно-сухое сырье нами были разработаны две альтернативные методики

Определение методом спектрофотометрии заключается в экстракции суммы нафтохинонов из навески сырья хлороформом, фильтровании извлечения, разведении аликвоты в 5 раз и измерении огггической плотности Расчёты проводили с использованием удельного показа геля поглощения шиконина

Определение методом фотоколориметрии отличается отсутствием стадии разведения извлечения Расчёт количественного содержания проводили по калибровочному графику зависимости интенсивности поглощения раствора от концентрации, построенному с использованием стандартного образца шиконина.

С помощью предложенных методик было проведено количественное определение суммы нафтохинонов в 6 пробах одного образцы корней синяка русского Метрологические характеристики приведены в таблице 4

Таблица 4 — Результаты количественного определения суммы нафтохинонов в образце корней синяка русского (п=6)

Метрологические характеристики Метод сйектрофотометрии Метод фотоколориметрии

X 1,62 1,63

Б 0,065 0,075

0,027 0,031

ДХ 0,068 0,078

с, % 4,20 4,82

Проведенная валидационная оценка разработанных методик показала, что они отличаются специфичностью, линейной зависимостью, чувствительностью и воспроизводимостью

Разработанная методика количественного определения с>ммы нафтохинонов методом спектрофотометрии включена в проект ФСП «Синяка русского корни»

Ресурсные и интродукционные исследования синяка русского

Использование нового в«ца лекарственного растительного сьдрья требует оценки его сырьевой базы и возможности его интродукции

Синяк русский распространен во флоре Северного Кавказа преимущественно на степных склонах, лесных опушках, залежах и сухих лугах. Ресурсные исследования проводили на территории Предгорного и Минераловодского районов Ставропольского края. Так как этот вид является двулетним травянистым растением, у которого в качестве сырья заготавливается подземная часть, урожайность определяли методом модельных экземпляров в пересчете на воздушно-сухое сырье По результатам эксперимента урожайность корней синяка русского в среднем по обоим районам составила 5,72±0,25 г/м2

Таким образом, запасы синяка русского в обследованных нами районах невелики, поэтому следующим этапом нашей работы было изучение возможности интродукции этого вида, что позволит обеспечить стабильную сырьевую базу Фенологические наблюдения проводились сразу после прорастания семян, согласно методике исследований, разработанной Н И Майсурадзе (ВИЛАР, 1984 г )

При весеннем посеве синяка русского в грунт всходы появляются на 7-14-й день К концу первого года жизни растения развивали розетку прикорневых листьев На втором году жизни растения из розетки развивался стебель высотой до 75 см После этого растение проходило все основные стадии своего развития бутонизацию, цветение, плодоношение и отмирание надземной части

Средняя урожайность сырья при культивировании синяка русского в условиях Кавказских Минеральных Вод составила 53,23±3,93 г/м2 в пересчёте на воздушно-сухое сырье

Основным критерием возможности интродукции синяка русского явилось накопление суммы нафтохинонов в его корнях Для сравнения динамики накопления суммы нафтохинонов в сырье, заготовленном в разные фазы вегетации от дикорастущих и культивируемых растений, проводили количественное определение суммы нафтохинонов методом фотоколориметрии в пересчёте на шиконин

Полученные данные позволили выявить зависимость содержания нафтохино-нов от фазы вегетации растения (рисунок 4).

1-й |иД ГОД

образование бутонизация розетки листьев

2-й год 2-й год ¿-и год ч*азь; йёгетацйм

цветение плодоношение отмирание надземной части

-Дикорастущее растения —Культтоцзуемые растения

Рисунок 4 - Динамика накопления суммы нафтохинонов в корнях синяка русского

по фазам вегетации

Как следует из данных, представленных на рисунке 4, максимальное содержание суммы нафтохинонов в корнях синяка русского наблюдается в фазу цветения. В условиях культуры синяка русского содержание суммы нафтохинонов в его корнях по сравнению с дикорастущими образцами сырья снижается только в 1,5 раза, тогда как при культивировании воробейника краснокорневого - более чем в 9 раз.

Соотношение эфиров шиконина в зависимости от фазы вегетации определяли с использованием метода ТСХ и денситометрии. Суть методики заключалась в предварительном хроматографировании суммы нафтохинонов в системе растворителей петролейный эфир - диэтиловый эфир (10:3,5). Хроматограммы сканировали, и полученные графические файлы были обработаны программой Sorbfil TLC Videodensitometer, получив площади пиков (S), отношение площади каждого пика к сумме площадей всех пиков в треке (S%), высоты пиков (Н), отношение высоты каждого пика к сумме высот всех пиков в греке (%Н) Результаты этого исследования в обобщенном виде приведены на рисунке 5.

%

100 эо

V 80 70 60 50 40 30 20

О

1 -Д 1-К ' 2-Д 2 - К 3-Д 3-К 4-Д 4-К 5-Д 5-К

□ р-оксоизовалерилшиконин ш шиконин

ш ацетилшиконин Я изобутирилшиконин

^ да^кГИЩИКЯНИН

1 — образование прикорневой розетки листьев, 2 - бутонизация, 3 — цветение, 4 — плодоношение, 5 - отмирание надземной части Д^кориСТ^'иЦ'б риСТйпйя, К — культквиру смыс рйстсккя Рисунок 5 - Соотношение производных шиконина в сумме нафтохинонов по фазам

вегетации

Как следует из данных, представленных на рисунке 5, с фазы цветения у дикорастущих и с фазы плодоношения у культивируемых растений до окончания фазы отмирания надземной части состав нафтохинонов представлен тремя соединениями.

Определение морфолого-анатомических диагностических признаков корней

синяка русского

Сырьё состоит из освобождённых от земли и высушенных слабоветвистых конических изогнутых корней, длина которых 4,5-12 см, поперечное сечение - 0,7-1,2 см. Поверхность продольно морщинистая с отслаивающейся пробкой. Цвет корней снаружи тёмно-бурый с красноватым оттенком, под пробкой поверхность корня тёмно-красная. Цвет на свежем изломе светло-жёлтый, почти белый. Излом зернистый. Запах при соскабливании и измельчении отсутствует. Вкус нейтральный.

Корень на поперечном срезе имеет округлую форму и вторичное нелучистое строение.

Покровная ткань представлена перидермой. Пробка слоистая, шелушащаяся, состоит из 2-15 слоев клеток. В многослойной феллодерме видны клетки с красным содержимым - нафтохиноновыми пигментами (рисунок 6).

1 - клетки паренхимы; 2 - клетки перидермы;

3 - клетки, заполненные нафтохиноновыми пигментами Рисунок 6 - Микрофотография поперечного среза пробки корня синяка русского

Клетки коровой паренхимы крупные, овальной или прямоугольной формы, бесцветные, расположенные несколькими слоями. Включений не обнаружено. Проводящие элементы флоэмы (ситовидные клетки и клетки спутницы) мелкие, располагаются довольно плотно, имеют 4-5-угольную форму. Между флоэмой и ксилемой располагается камбий, состоящий из 1-3 слоев клеток. Проводящая система имеет беспучковое строение. В центре корня располагается первичная ксилема, состоящая из крупных сосудов, узких трахеид и древесной паренхимы. Сосуды одиночные или расположены небольшими группами. Во вторичной ксилеме к центру расположены более крупные сосуды, между которыми имеются клетки паренхимы с тонкими не-одревесневшими оболочками. К периферии корня ксилему образуют сосуды разного диаметра, которые равномерно распределены по окружности.

Таким образом, характерными анатомо-диагностическими признаками корня синяка русского являются вторичное беспучковое строение и наличие в клетках феллодермы ярко-красного содержимого (нафтохиноны).

3

2

1

Стандартизация корней синяка русского

Для стандартизации сырья согласно ОСТ 42-91500 05 001-00 были определены числовые показатели согласно ГФ XI издания, для анализа нафтохинонов использовали разработанные нами методики Основные нормы качества сырья синяка русского определены на 6 сериях образцов сырья и представлены в таблице 5

Таблица 5 - Нормы качества лекарственного растительного сырья «Синяка русского корни»__

Показатель качества Нормируемое значение

Внешние признаки Соответствие морфологическим признакам при просмотре невооруженным глазом и под лупой с увеличением (10х)

Микроскопия Соответствие анатомическим признакам при просмотре под микроскопом с увеличением (не менее 40 /)

Подлинность 1) химическая реакция, 2) ТСХ-анализ, 3) УФ-спектрометрия 1) реакция с раствором натрия гидроксида 5%, наблюдается ярко-синее окрашивание (шиконин и его эфиры), 2) IV 0,10 ((3-оксоизовалерилшиконин), 0,23 (шиконин), 0,42 (ацетилшиконин), 0,62 (изобутирилшиконин, изо-валерилшиконин) 3) Хтах 273±2 нм, 492±2 нм, 525±2 нм, и 565±2 нм (шиконин и его эфиры)

Числовые показатели

Количественное определение содержания нафтохинонов в пересчете на шиконин (спектрофотометрия) не менее 1,0%

Влажность не более 10% (по ГФ XI, вып 1, стр 285)

Золы общей не более 6% (по ГФ XI, вып 2, стр 24)

Золы, нерастворимой в растворе хлористоводородной кислоты 10% не более 1,5% (по ГФ XI, вып 2, стр 24)

Органической примеси не более 3%

Минеральной примеси не более 1,5%

Микробиологическая чистота В соответствии с ГФ XI, вып 2, стр 187 и Изменением №3 к ГФ XI от 19 06 03 г , категория 4А

Содержание радионуклидов В соответствии с требованиями ВДУ ГН 2 6 005-93

Разработка технологии и стандартизация наружных лекарственных форм, содержащих сумму нафтохинонов синяка русского

Так как более полно и избирательно шиконин и его производные из корней синяка русского извлекает хлороформ, который обладает относительно низкой летучестью, не является пожаро- и взрывоопасным, мы предлагаем экстрагировать

сумму нафтохинонов из корней синяка русского именно этим растворителем Процесс осуществляли в замкнутом цикле в аппарате Сокслета Циркуляция экстр агенту повторялась до полного истощения сырья, контроль которого осуществляли по отсутствию характерной для нафтохинонов окраски новых порций извлечения Из полученного извлечения хлороформ отгоняли, остаток просушивали, после чего растворяли в растительном масле

Для выбора доз определяли минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) липофильного комплекса корней синяка русского методом двукратных серийных разведений в мясо-пептонном бульоне Антимикробную активность изучали на суточных культурах Staphylococcus aureus и Bacillus su'otihs Резулышы эксперимента показали, что величина МИК составляет в отношении к Staphylococcus aureus 6,25-50 мкг/мл, в отношении Bacillus subtilis — 12,5-50 мкг/мл в зависимости от посевной дозы (103 - 108 КОЕ/мл)

Полученный экстракт синяка русского представлял собой маслянистую жидкость красного цвета со вкусом и запахом растительного масла, применявшегося для растворения суммы липофильных веществ. Оценку качества изготовленного масляного экстракта осуществляли согласно требованиям ГФ XI изд. и ОСТ 91500 05 001 по показателям- описание (цвет, запах), подлинность, количественное определение При количественном анализе шести серий масляного экстракта синяка русского содержание суммы нафтохинонов в пересчете на цшконин составило 0,089±0,003% (е=3,46%)

В дальнейшем мы сочли целесообразным включить полученный экстракт в состав мази По результатам биофармацевтических исследований in vitro десяти различных составов нами была выбрана эмульсионная мазь на хитозановой основе. Оценку качества изготовленной мази осуществляли согласно ГФ XI изд и ОСТ 91500 05 001 по показателям описание (цвет, запах, однородность), подлинность, коллоидная стабильность, термостабильность, pH водного извлечения, микробиологическая чистота, количественное определение При количественном анализе шести серий мязи с масляным экстрактом синяке русского Содержание суммы нафтохинонов в пересчёте на шиконин составило 0,0045+0,0002% (е=4,55%).

Изучение антимикробной и ранозаживляющей активности разработанных лекарственных средств

Г*

Антимикробную активность экстракта корней синяка русского масляного и мази, на его основе, определяли по отношению к 11 тест-культурам (Staphylococcus aureus 209-Р, St aureus, St aureus «Type», St epidermidis, Escherichia coh-675, Salmonella typhimunum, Shigella fiexneri 266, Sh sonnei, Bacillus subtillis-L2, Вас. anthra-coides-96, Вас anthracoides-1) путем их посева на сектора чашке Петри с питательным агаром, содержащим исследуемые лекарственные средства в концентрациях

10000, 5000, 2500, 1250, 625 мкг/мл Для получения таких концентраций готовили ¥ » • •

исходное разведение, добавляя к 0,5 г каждой лекарственной формы 4,5 мл раствора диметилсульфоксида 30%, получая концентрацию извлечения в исходном разведении 100000 мкг/мл

Экстракт синяка русского оказывал выраженную антимикробную активность в отношении стафилококков, энтеробактерий и бацилл в концентрации 2500 мкг/мл, мазь с экстрактом корней синяка русского — в концентрации 5000 мкг/мл.

Ранозаживляющую активность изучали на модели термического ожога у крыс. Выраженность ожога оценивали на 2-е, 4-е, 6-е, 8-е ,10-е, 12-е, 14-е, 16-е сутки после индукции ожога по изменению его площади В качестве лекарственного препарата-сравнения была выбрана мазь «Левомеколь»

В контрольных опытах уменьшение ожоговой раны по сравнению с исходными данными на вторые сутки составило 3,73-12,59% (в среднем 7,95%), а на восьмые сутки - 39,20-43,55% (в среднем 42,24%) В группе животных, которым с лечебной целью наносили мазь «Левомеколь», уменьшение ожоговой раны по сравнению с исходньми данными на вторые сутки составило 27,81-45,65% (в среднем 33,69%), на восьмые сутки - 64,63-80,38% (в среднем 73,51%) В группе животных, которым с лечебной целью наносили экстракт синяка русского масляный, уменьшение ожоговой раны по сравнению с исходньми данными на вторые сутки составило 22,7925,40% (в среднем 24,60%), на восьмые сутки - 52,50-61,94% (в среднем 58,04%) В группе животных, которым с лечебной целью наносили мазь с экстрактом синяка русского масляным, уменыиешге ожоговой раны по сравнению с исходными дзн-

ними на вторые сутки составило 17,81-31,98% (в среднем 25,57%), на восьмые сутки — 68,67-82,61% (в среднем 74,87%) В группе животных, которым с лечебной целью наносили мазевую основу, на вторые сутки уменьшение ожоговой раны по сравнению с исходными данными составило 18,87-24,27% (в среднем 20,50%), на восьмые сутки — 54,63-60,19% (в среднем 58,45%) Таким образом, ранозаживляю-щая активность разработанной мази превосходит активность экстракта синяка русского

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1 Результаты фитохимического скрининга 8 видов из 7 родов сем бурачниковых показали, что из изученных дикорастущих видов флоры Северного Кавказа наиболее перспективным источником шиконина и его производных являются корни синяка русского.

2 Впервые в корнях синяка русского были идентифицированы аиетилшиконин, изобутирилшиконин. В-оксоизовалерилшиконин и лезоксишиконин

3. Разработаны методики выделения и анализа шиконина как государственного стандартного образца

4. Разработаны методики количественного определения суммы нафтохинонов в сырье, отличающиеся доступностью и простотой исполнения

5 Установлена урожайность корней синяка русского, заготовленных от дикорастущих растений (5,72±0,25 г/м2) Установлено, что при интродукции синяка русского в климатических условиях КМВ растения проходят все фазы вегетации в те же сроки, что и дикорастущие Урожайность корней синяка русского, заготовленных от культивируемых растений, составляет 53,23±3,93 г/м2

6 Изучена динамика накопления нафтохинонов по фазам вегетации Наибольшее количество производных шиконина накапливается, начиная с фазы цветения дикорастущих и с фазы плодоношения культивируемых растений Максимум содержания суммы нафтохинонов наблюдается в фазу цветения

7 Установлены характерные морфолого-анатомические диагностические признаки для корня синяка русского, позволяющие определять подлинность его сырья

8 Определены числовые показатели корней синяка русского, которые вошли в проект ФСП «Синяка русского корни» нафтохинонов в пересчете на шиконин не менее 1,0%; потеря в массе при высушивании не более 10%, золы общей не более 10%, золы, нерастворимой в растворе кислоты хлористоводородной 10%, не более 1,5%, органической примеси не более 3,0%, минеральной примеси не более 1,0%, других частей синяка русского не более 0,5%

9 Разработаны технология экстракта корней синяка русского масляного и мази экстрактом, а также методики их анализа Проведена оценка качества разрабо тайных лекарственных препаратов по содержанию суммы нафтохинонов

» * ь

10 Установлено, что антимикробное действие экстракта корней синяка русского бо лее выражено, чем мази, его содержащей, а ранозаживляющее - более выражен для мази, чем для экстракта, что связано с различием концентрации шиконяна лекарственных средствах По ранозаживляющей эффективности разработай« мазь не уступает препарату сравнения «Левомеколь»

Список опубликованных работ:

1. Дайронас, Ж В. Разработка методики количественного определения нафтохиш нов в корнях синяка русского / Ж В. Дайронас // Известия высших учебных заве дений Северо-Кавказский регион. Естественные науки Спецвыпуск — 2006 — С 47-48

2 Дайронас, Ж В Стандартизация корней синяка русского (ЕсЬшт гивБютт) Ж В. Дайронас // Вестник Воронежского государственного университета Серия Химия. Биология. Фармация - 2006. - №2 - С 240-242

3. Челомбитько, В А Нафтохиноны: распространение, их роль в организмах и пер спективы их использования в медицинской практике / В.А Челомбитько Ж.В Дайронас // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтическо продукции с б науч тр — Пятигорск, 2005 — Вып. 60. — С. 69-70.

4 Дайронас, Ж В Сравнительное фотохимическое исследование некоторых пред ставителей сем Вогещтасеае / Ж В Дайронас, В А. Челомбитько // Химия, тех нология, медицина сб науч тр. междунар конф - М • ВИЛАР, 2006 — Т XVII -С 289-293

5. Дайронас, Ж.В Морфолого-анатомическое изучение корня синяка русского (ЕсЬшш гивзю^ш) / Ж.В Дайронас, В А Челомбитько // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции- сб науч тр — Пятигорск, 2006 -Вып 61.-С 18-20

6 Дайронас, Ж В Изучение динамики накопления нафтохинонов в корнях синяка русского / Ж В Дайронас, В А Челомбитько // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр - Пятигорск, 2007 -Вып 62 - С 39-40

7 Дайронас, Ж В Изучение противоожоговой активности лекарственных форм, содержащих шиконин и его произволные / Ж В Дайронас 11 Научное обозрение -2007,-№2 -С 45-46

8 Дайронас, Ж В Некоторые итоги ресурсных и интродукционных исследований синяка русского / Ж В Дайронас Н Актуальные проблемы фармации сб статей межрегион науч конф -Владикавказ СОГУ,2007 - С 15-16

9 Дайронас, Ж В Перспективы использования ашконина для лечения инфицированных ран / Ж В Дайронас // XIII итоговая (межре! иональная) научная конференция студентов и молодых ученых тез докл — Ставрополь, 2005. — С. 674-675

10 Дайронас, Ж В. Анализ нафтохинонов в подземных органах синяка русского (ЕсЬшш гиззшит) / Ж.В Дайронас, В А. Челомбитько // Университетская наука взгляд в будущее, сб тр. 71-й науч конф. КГМУ и сессии ЦентральноЧерноземного отделения научного центра РАМН -Курск, 2006 — С 156-157

11 Дайронас, Ж В Изучение антимикробной активности нафтохинонов синяка русского / Ж В Дайронас, И И Клишина // «Молодые ученые - медицине» тез докл 5 науч. конф. молодых ученых СОГМА - Владикавказ, 2006 - С 40-42

12 Дайронас, Ж В Разработка норм качества лекарственных форм содержащих сумму нафтохинонов синяка русского / Ж В Дайронас // От производителя до аптеки и потребителя тез докл аптечного форума — М , 2007 - С 69-70

ДАЙРОНАС ЖАННА ВЛАДИМИРОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕВЕРОКАВКАЗСКИХ ВИДОВ СЕМ

БУРАЧНИКОВЫХ (ВОЛАСШАСЕАЕ) КАК ИСТОЧНИКОВ ШИКОНИНА И » » к

РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ИХ ОСНОВЕ 15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати « Формат бумаги 60x84 1/16

Бумага книжно-журнальная Печать ротапринтная Усл. печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образо вания «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федеральной агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, г Пятигорск пп Калинина 111

л )--/

Актуальность темы

Во многих странах мира в XX веке возрос интерес исследователей к хиноидным пигментам. К этому классу природных биологически активных соединений относятся и нафтохиноны, которые вырабатываются бактериями, грибами, морскими иглокожими, лишайниками и растениями. В настоящее время они обнаружены более чем в 20 семействах цветковых растений, в том числе Juglandaceae, Plumbaginaceae, Boraginaceae, Urticaceac, Droseraceae и др. Сырьё, содержащее нафтохиноны, широко используется в традиционной медицине Китая, Тибета, Кореи и Японии для получения жаропонижающих, противоожоговых, ранозаживляющих, противоопухолевых лекарственных средств. Из корней дальневосточного вида воробейника краснокорневого (Lithospermum erythrorhizon Siebold et Zucc.) сем. бурачниковых (Boraginaceae) был выделен нафтохинон шиконин, который проявил себя как эффективный растительный антибиотик, оказывающий противоопухолевое, антибактериальное, противовирусное, амёбоцидное, противовоспалительное и регенерирующее действие.

Шиконин и его эфиры используются в традиционной и научной медицине многих стран, благодаря своему широкому спектру биологической активности. Однако лекарственных средств на его основе за рубежом очень мало, а в России вообще нет. Отечественная продукция, содержащая шиконин и его производные, ограничивается только косметическими или перевязочными средствами. Основная причина такого положения — недостаточная промышленная сырьевая база и отсутствие доступных методов стандартизации. Фармакогностические исследования воробейника краснокорневого, проводимые в 70-е годы XX в., показали бесперспективность заготовки сырья как от дикорастущих, так и от культивируемых образцов этого вида. Фотохимический анализ других представителей сем. бурачниковых выявил, что количество видов, содержащих шиконин достаточно велико. Однако поиск сырьевых источников шиконина был прекращён в 80-х годах XX в., уступив место биотехнологии. Широкие исследования в этой области, проводимые в Японии и России, позволили разработать способы промышленного получения шиконина, используемые в настоящее время. Несмотря на полученные положительные результаты, биотехнологический способ производства шиконина остаётся достаточно дорогостоящим из-за сложного технологического процесса и его высокой наукоёмкости.

Таким образом, расширение растительной сырьевой базы источников шиконина и его производных за счет изучения малоизученных видов сем. Во-raginaceae, произрастающих на Северном Кавказе, является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования

Цель настоящей работы - поиск нового перспективного сырьевого источника шиконина среди малоизученных видов сем. бурачниковых флоры Северного Кавказа, разработка методов стандартизации сырья и получение лекарственных средств на основе суммы нафтохинонов.

Для достижения этой цели необходимо решить следующие задачи:

1. Провести качественный и количественный анализ образцов сырья некоторых северокавказских видов сем. бурачниковых, выявить среди них наиболее перспективный сырьевой источник шиконина.

2. Определить оптимальные условия извлечения шиконина и его производных и разработать методики для стандартизации этого вида сырья.

3. Провести предварительные ресурсные и интродукционные исследования выбранного вида на территории Ставропольского края.

4. Изучить динамику накопления нафтохинонов в зависимости от фазы вегетации и установить оптимальные сроки заготовки сырья.

5. Определить основные морфолого-анатомические диагностические признаки и числовые показатели сырья выбранного вида.

6. Разработать проект фармакопейной статьи предприятия на сырьё предлагаемого вида.

7. Разработать технологию экстракта и мази, содержащих шиконин и его производные, а также методики, пригодные для стандартизации полученных лекарственных препаратов.

8. Провести предварительные фармакологические исследования разработанных лекарственных препаратов по выявлению специфической микробиологической и фармакологической активности.

Научная новизна исследования

На основании скрининговых фитохимических исследований некоторых видов сем. бурачниковых установлено, что шиконин и его производные содержатся только в корнях синяка русского, синяка обыкновенного, оносмы кавказской, воробейника краснокорневого. Сумма нафтохинонов в корнях различных видов колеблется от 0,1 до 1,9%. Наибольшее количество нафтохинонов накапливается в корнях синяка русского (1,9%). Методом. ТСХ установлено, что в корнях синяка русского наряду с описанным в литературе шиконином впервые идентифицированы ацетилшиконин, изобутирилшико-нин, (3-оксоизовалерилшиконин и дезоксишиконин.

Установлена локализация нафтохинонов в клетках феллодермы корней синяка русского, что позволяет определять специфику заготовки сырья. Впервые выявлены закономерности изменчивости содержания нафтохинонов в корнях синяка русского в зависимости от фазы вегетации, на основании чего установлены сроки заготовки этого вида сырья.

Определены оптимальные условия извлечения суммы нафтохинонов из корней синяка русского. Изучена возможность препаративного хроматогра-фического разделения нафтохинонов и разработан способ получения вещества-стандарта (ГСО шиконина), позволившего обосновать метод стандартизации сырья.

Разработана технология масляного экстракта корней синяка русского и мази, содержащей полученный экстракт.

Изучена антимикробная активность липофильного комплекса корней синяка русского и установлено, что минимальная ингибирующая концентрация составляет в отношении к Staphylococcus aureus 6,25 мкг/мл, в отношении Bacillus subtilis - 12,5 мкг/мл (посевная доза 10 КОЕ/мл). Установлено, что противоожоговое действие разработанных лекарственных препаратов более выражено при низких концентрациях суммы нафтохинонов, антимикробное — при высоких.

Практическая значимость работы и внедрение результатов в практику

Установлены характерные морфолого-анатомические диагностические признаки нового вида лекарственного растительного сырья (синяка русского корни), нормы его качества и разработаны методики определения в нём суммы нафтохинонов. Разработаны методики выделения шиконина из корней синяка русского и его качественного и количественного анализа. Разработаны проекты фармакопейных статей предприятия «Синяка русского корни» и «Шиконин. Государственный стандартный образец», которые приняты ЗАО «Вифитех» г. Москва (акты от 09.04.07). Установлена динамика накопления шиконина и его производных в зависимости от фаз вегетации, определены сроки заготовки корней синяка русского, которые отражены в «Инструкции по сбору и сушке корней синяка русского», утверждённой ООО НПО «Фи-тоЧ» г. Ставрополь (акт внедрения от 12.04.07). Разработана технология производства и методики стандартизации экстракта корней синяка русского масляного и мази, его содержащей, с рабочим названием «Эхион». Апробированы технология производства и методики анализа мази «Эхион» в условиях ЗАО «Центрально-Европейская фармацевтическая компания» г. Москва, о чём получены соответствующие акты от 16.11.06.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ госрегистрации 01.200.112164).

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты фитохимического скрининга по содержанию шиконина и его производных в некоторых видах сем. бурачниковых флоры Северного Кавказа.

2. Результаты экспериментальных исследований по разработке методик выделения и количественного определения суммы нафтохинонов в корнях синяка русского.

3. Способ получения стандартного образца шиконина, разработка методик его анализа с использованием различных физико-химических методов.

4. Результаты ресурсных и интродукционных исследований сырья синяка русского на территории Ставропольского края.

5. Результаты морфолого-анатомического диагностического изучения сырья синяка русского.

6. Результаты изучения состава и изменчивости содержания нафтохинонов корней синяка русского по фазам развития растения. .

7. Обоснование технологии масляного экстракта корней синяка русского и мази, его содержащей.

8. Результаты изучения антимикробной активности выделенного из корней синяка русского липофильного комплекса, содержащего сумму нафтохинонов, а также ранозаживляющего и антимикробного действия разработанных лекарственных средств.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на 60-й, 61-й и 62-й межрегиональных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2005-2007 гг.), IV научно-практической конференции молодых учёных и студентов Краснодарского края (Анапа, 2006 г.), научной конференции «Актуальные проблемы фармации» (Владикавказ, 2007 г.). По материалам диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 2 статьи - в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 155 страницах текста компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка цитируемой литературы, включающего 154 источника, из которых 68 на иностранном языке, и приложения. Диссертация иллюстрирована 46 рисунками и 42 таблицами.

Общие выводы

1. Результаты фотохимического скрининга 8 видов из 7 родов сем. бурачниковых показали, что из изученных дикорастущих видов флоры Северного Кавказа наиболее перспективным источником шиконина и его производных являются корни синяка русского.

2. Впервые в корнях синяка русского были идентифицированы ацетилшиконин, изобутирилшиконин, Р-оксоизовалерилшиконин и дезоксишиконин.

3. Разработаны методики выделения и анализа шиконина как государственного стандартного образца.

4. Разработаны методики количественного определения суммы нафтохинонов в сырье, отличающиеся доступностью и простотой исполнения.

5. Установлена урожайность корней синяка русского, заготовленных от дикорастущих растений (5,72±0,25 г/м~). Установлено, что при интродукции синяка русского в климатических условиях КМВ растения проходят все фазы вегетации в те же сроки, что и дикорастущие. Урожайность корней синяка русского, заготовленных от культивируемых растений, составляет 53,23±3,93 г/м2.

6. Изучена динамика накопления нафтохинонов по фазам вегетации. Наибольшее количество производных шиконина накапливается, начиная с фа- \ зы цветения дикорастущих и с фазы плодоношения культивируемых растений. Максимум содержания суммы нафтохинонов наблюдается в фазу цветения.

7. Установлены характерные морфолого-анатомические диагностические признаки для корня синяка русского, позволяющие определять подлинность его сырья.

8. Определены числовые показатели корней синяка русского, которые вошли в проект ФСП «Синяка русского корни»: нафтохинонов в пересчёте на шиконин не менее 1,0%; потеря в массе при высушивании не более 10%; золы общей не более 10%; золы, нерастворимой в растворе кислоты хлористоводородной 10%, не более 1,5%; органической примеси не более 3,0%; минеральной примеси не более 1,0%; других частей синяка русского не более 0,5%.

9. Разработаны технология экстракта корней синяка русского масляного и мази с экстрактом, а также методики их анализа. Проведена оценка качества разработанных лекарственных препаратов по содержанию суммы нафтохинонов.

10.Установлено, что антимикробное действие экстракта корней синяка русского более выражено, чем мази, его содержащей, а ранозаживляющее -более выражено для мази, чем для экстракта, что связано с различием концентрации шиконина в лекарственных средствах. По ранозаживляю-щей эффективности разработанная мазь не уступает препарату сравнения «Левомеколь».