Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фитопрепараты, стимулирующие и угнетающие репродукцию в эксперименте

На правах рукописи

ЖИГАЛОВ Сергей Александрович

г Г Б ОД

-НОЯ ш

ФИТОПРЕПАРАТЫ, СТИМУЛИРУЮЩИЕ И УГНЕТАЮЩИЕ РЕПРОДУКЦИЮ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.00.25 - фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 1999 г.

Работа выполнена в научно-исследовательском институте экспериментально! медицины РАМН и научно-исследовательском институте акушерства и гинекологии им Д.О.Отга РАМН.

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор И.В. Маркова

заседании диссертационного совета К. О/ч. л. ни ¿ащп Iо напцуща IОЛМА ц/тллц!1аци при Санкт-Петербургском государственном медицинском университете им. акад. И.Г Павлова (197089, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6/8).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Саню Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлов {197089, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6/8).

профессор, з.д.н. РФ П.П. Денисенко

доктор медицинских наук, профессор Е.Е. Лесиовская

Ведущая организация: Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

Защита диссертации состоится

Автореферат разослан

/<[. /исТЛ ¡999г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Э.Э. Звартау

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Репродуктивная система является важнейшей из жизненных систем, так как она обеспечивает воспроизводство и сохранение вида. Становление нового направления в науке, названного репродуктологией, связано с интеграцией таких • дисциплин, как акушерство, гинекология, перинатология, фармакология, эндокринология и других.

Социально значимой проблемой в этой области медицины является бесплодный брак. Уже сегодня от бесплодия страдает каждая 7-8 семья. Бесплодный брак, составляющий 10-15% в России, порождает проблему бездетного будущего миллионов граждан, снижение и потерю генофонда нации. В основе многих причин бесплодия лежит нерациональное репродуктивное поведение населения и искусственный аборт, остающийся, к сожалению, в нашей стране основным способом регулирования рождаемости.

Несомненно, многочисленные аборты являются одной из главных причин создавшегося в России демографического кризиса. Ежегодно в нашей стране проводится более 3 млн. абортов (Цвелев Ю.В., 1997). Последствия абортов драматичны. Высокая материнская и младенческая смертность, невынашивание, осложнения беременности и родов, ухудшение здоровья потомства. В структуре материнской смертности около 30% составляет смертность женщин, связанная с проведением абортов и их осложнениями. Искусственные аборты приводят не только к воспалительным процессам в репродуктивных органах, но, возможно, и к изосенсибилизации организма женщины, нарушающей иммунологический контроль репродукции.

Имеются все основания и возможности ограничить это ужасающее число хирургических абортов путем предупреждения нежелательной беременности. Поэтому вопросы контрацепции и планирования семьи являются весьма актуальными. Планирование семьи, главным элементом которого является применение контрацептивных методов и средств, направлено на рождение желанных для семьи здоровых детей, профилактику абортов и их осложнений, сохранение репродуктивного здоровья, достижение гармонии в браке.

Вместе с тем, имеющиеся гормональные, внутриматочные и местные средства не лишены недостатков. Так, гормональные и внутриматочные средства обеспечивают надежную (почти 100%) контрацепцию, но их применение сопровождается различными побочными эффектами. Местные контрацептивы, например, спермициды, как правило,

вызывают незначительные побочные явления, но, с другой стороны, не отличаютс высокой контрацептивной надежностью (Корхов В.В., 1996; Стрижаков А.Н., Давыдс А.И., Шахламова М.Н., 1996). Все это определяет необходимость активного поиск новых контрацептивных средств, эффективных и, вместе с тем, безопасных. Одним V недостаточно научно разработанных направлений является поиск растительнь препаратов, обладающих контрацептивными свойствами и одновременно н вызывающих заметных побочных явлений.

Фитопрепараты имеют преимущество перед синтетическими, выражающиеся том, что при их назначении в организм человека поступает целый комплек биологически активных соединений. Созданные на основе лекарственных растени препараты влияют на организм мягче, чем синтетические, лучше переносятс больными, вызывают меньше побочных эффектов. Поэтому, поиск фитопрепаратов, ка угнетающих, так и стимулирующих репродуктивную систему, является актуальным.

Целью исследования явилось изучение влияния на репродуктивную систем лабораторных животных (крыс, кроликов) растительных препаратов.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние фитопрепаратов аралии маньчжурской и змееголовника н овуляцию и массу репродуктивных органов у крыс и кроликов. Исключить ил подтвердить наличие контрацептивных свойств у этих растительных препаратов.

2. Изучить влияние указанных растительных препаратов на уровен гонадотропинов в сыворотке крови лабораторных животных.

3. Исследовать контрацептивную активность препаратов диоскореи кавказской I проломника северного. Изучить влияние указанных препаратов на овуляторнун функцию, массу репродуктивных органов, биопотенциалы миометрия в эксперименте.

4. Оценить влияние препаратов из семейств бурачниковых и сложноцветных н, некоторые показатели репродуктивной системы крыс.

Научная новизна. Впервые в эксперименте на лабораторных животных показан! стимулирующее влияние аралии маньчжурской и змееголовника на процессы овуляци] при длительном (7-10 дневном) энтеральном введении. Параллельно с повышение» овуляции у животных увеличилась масса яичников и матки, что также указывает н; активирующее влияние этих фитопрепаратов на репродуктивную систему.

Получены новые данные о влиянии препаратов аралии маньчжурской I змееголовника на содержание гонадотропинов в сыворотке крови крыс. Об! фитопрепарата повышают уровень фолликулостимулирующего гормона без заметного

изменения содержания лютеинизирующего гормона в активной стадии астрального цикла.

Впервые показана контрацептивная активность препаратов проломника северного, диоскореи кавказской и некоторых препаратов из семейства бурачниковых (эгонихон фиолетовый, воробейник лекарственный).

Впервые в эксперименте установлена способность препарата амброзии полыннолистной из семейства сложноцветных стимулировать сократительную активность миометрия.

Научно-практическая значимость работы.

Экспериментально установлена способность фитопрепаратов аралии маньчжурской и змееголовника стимулировать овуляцию у крыс и кроликов, /величивать массу репродуктивных органов, а также повышать содержание 'онадотропинов, особенно фолликулостимулирующего гормона, в сыворотке крови в активные стадии цикла. Отмеченные свойства этих фитопрепаратов открывают перспективу их углубленного изучения и экспериментального обоснования эекомендаций к их применению при нарушениях менструального цикла, при некоторых формах поликистоза яичников, при эндокринном функциональном бесплодии, а также в :ельском хозяйстве и звероводстве (для увеличения поголовья приплода у иногоплодных животных). Препараты могут найти применение в комплексной терапии с 4елью стимуляции созревания фолликулов у женщин, которым производится ЭКО и искусственная инсеминация, а также в гинекологии при гипоплазии матки и яичников.

Обнаруженные контрацептивные свойства у препаратов проломника северного, диоскореи кавказской и других предполагают возможность их использования для предупреждения нежелательной беременности.

Способность препарата амброзии стимулировать миометрий может найти применение для стимуляции сократительной деятельности матки при аномалиях эодовой деятельности, для родовозбуждения, проводимого по акушерским показаниям.

Реализация результатов исследования.

Результаты изучения стимулирующей овупяцию активности исследованных фитопрепаратов - аралии маньчжурской и змееголовника, а также контрацептивной активности препаратов проломника северного, диоскореи кавказской и других фитопрепаратов внедрены в НИИ ЭМ РАМН, НИИ физиологии АН Республики Беларусь, в учебный процесс и НИР кафедры фармакологии С.-Петербургской химико-

фармацевтическсй Академии, Амурской медицинской Академии, Владивостокского медицинского университета.

Апробация работы и личный вклад автора.

Результаты работы были доложены и обсуждены на Международной конференции "Фармация в XXI веке: инновации и традиции", Санкт-Петербург, 199Э г; на VI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 1999 г; на Всероссийской конференции с международным участием "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии", Санкт-Петербург, 1999 г; на XXX Конгрессе психонейроэндокринологов, Orlando, Florida, 1999 г.

По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

Постановка эксперимента, обработка, анализ и интерпретация полученных данных проведены автором самостоятельно.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Экстракты аралии маньчжурской и змееголовника способны стимулировать овуляцию и увеличивать массу репродуктивных органов.

2. Фитопрепараты аралии маньчжурской и змееголовника влияют на баланс гонадотропинов в сыворотке крови в активные стадии эстрального цикла, особенно увеличивая уровень фолликулостимулирующего гормона.

3. Препараты проломника северного и диоскореи кавказской обладают контрацептивными свойствами, что открывает перспективу их применения в практической медицине.

4. Из исследованных видов семейства бурачниковых водные экстракты из надземной части эгонихона фиолетового и надземной части воробейника лекарственного оказывают контрацептивное действие.

5. Фитопрепарат амброзии полыннолистной из семейства сложноцветных стимулирует сократительную активность миометрия крыс.

Диссертация представляет собой машинописный текст объемом 98 страниц, иллюстрированный 6 рисунками, дополненный 14 таблицами; указатель литературы состоит из 110 источников, из них - 71 на русском языке.

-7-

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Опыты выполнены на животных двух видов: самках крыс и кроликов. Все животные были получены из питомника "Рапполово" РАМН и содержались в регламентированных условиях вивария в НИИ ЭМ и НИИ АГ им. Д.О. Отта РАМН на стандартном рационе. Всего в эксперименте было использовано 630 половозрелых белых нелинейных самок крыс массой 180-220 г и 76 половозрелых самок кроликов породы "шиншилла" массой 2,2-3,2 кг.

Самок крыс перед началом опытов в течение двух недель выдерживали в условиях вивария с регулярной 12 часовой сменой освещения. В это время у них брали влагалищные мазки с целью отбора животных с регулярным 4-5 дневным эстральным циклом. Крыс с нерегулярным половым циклом выбраковывали. Отсев животных в каждой партии колебался от 10 до 20%.

При необходимости забоя животных - крыс декапитировали в условиях эфирного наркоза, а кроликам вводили 10-20 мл воздуха в ушную вену.

Для оценки влияния растительных препаратов на процессы овуляции у крыс после введения препаратов в течение 2-х эстральных циклов животных умерщвляли и подсчитывали количество проовулировавших яйцеклеток. По критерию Стьюдента согласно методике упрощенного статистического анализа, предложенного Е.В. Монцевичюте-Эрингене (1964), вычисляли средние показатели для каждой группы контрольных и подопытных животных. По той же методике сравнивали показатели контрольных и подопытных групп и определяли достоверность различий при р<0,05,

С целью индукции овуляции кроликам внутривенно вводили 1,2% водный раствор ацетата меди. Подопытным животным исследуемый растительный препарат вводили в желудок в течение нескольких дней. Одновременно с последним введением фитопрепарата стимулировали овуляцию введением раствора ацетата меди и подсчитывали число проовулировавших фолликулов, что определяет реактивность фолликулов. Полученные результаты сравнивали с показателями животных контрольной группы, получавших в указанные сроки дистиллированную воду в том же объеме и раствор ацетата меди.

Контрацептивную активность изучали на половозрелых самках крыс с установившимся эстральным циклом. Смену фаз цикла определяли цитологическим анализом влагалищных мазков, позволяющим не только определить стадию полового

цикла животного, но дающим возможность следить за эстроген-прогестероновой насыщенностью организма (Зеленина Н.В., 1990).

Характеристика препаратов. Растительные препараты в виде 70% спиртовых экстрактов аралии маньчжурской (Aralia mandshurica rupr. et maxim), змееголовника (Dracocephalurn L.), препараты проломника северного (Androsace septentrionalis L.), a также из семейства бурачниковых (Boraginaceae), получены из БИН РАН; диоскореи кавказской (Dioscorea caucasica L.) - из фармацевтической академии (г. Пятигорск).

Испытывали также водный экстракт из надземной части амброзии полыннолистной (Ambrosia L.) семейства сложноцветных (Astaeraceae).

Исследуемые растительные препараты вводили крысам самкам через зонд в желудок в течение 14 дней. На третий день опыта к ним подсаживали самцов из расчета два самца на пять самок для того, чтобы крысы могли свободно покрываться на фоне введения препаратов. Ежедневно брали влагалищные мазки. День обнаружения под микроскопом сперматозоидов в мазке считали первым днем беременности. Покрытых самок отсаживали в отдельную клетку и завершали 14-дневный курс введения испытуемого препарата. В некоторых группах животных вещество вводили парентерально.

На 20-21 день беременности самок декапитировали для определения характера развития беременности. О контрацептивной активности фитопрепаратов судили по наличию плодов в матке. У крыс, сохранивших беременность, определяли число плодов, их массу, краниокаудальный размер и сопоставляли полученные данные с контрольными показателями. Кроме того, у всех животных определяли количество желтых тел, число мест имплантации и резорбций.

Контрацептивную активность фитопрепаратов исследовали также и в опытах на половозрелых кроликах со степенью "охоты", равной 3-4 баллам по 4-х балльной шкале. Степень "охоты" определяли по интенсивности гиперемии наружных половых губ животного. Исследуемый препарат вводили в течение 7 дней до спаривания. Крольчих спаривали в состоянии "охоты". Через несколько дней животных забивали и регистрировали наличие или отсутствие беременности.

Для исследования влияния некоторых фитопрепаратов на гонадотропную активность гипофиза крыс использовали специфические для этого вида животных иммунологические препараты. Перед взятием крови крысам в течение 14 дней вводили изучаемый фитопрепарат, а животным контрольной группы - растворитель. На 15-й

ень в соответствии со стадией астрального цикла (диэструс, проэструс, эструс) ;ивотных декапитировали и собирали кровь от каждого отдельного животного. Кровь ентрифугировали, отбирали сыворотку и хранили ее замороженной при -40*С. Для остроения калибровочной кривой и расчета уровня гормонов использовали 1од1одК реобразования или сплайн-функцию, реализованные на счетчик 1.КВ 1270 :аскОатта (УУаНас, Финляндия).

Для определения влияния изучаемых фитопрепаратов на сократительную ктивность миометрия были поставлены опыты на половозрелых крысах самках массой 00-220 г. О моторной деятельности матки судили по величине амплитуды и частоте иопотенциалов миометрия.

Для количественной характеристики исследуемых параметров использовали асчеты средней арифметической (М) и ее ошибки (т). Для оценки достоверности азличий использовали критерий Стьюдента.

Объем выполненной работы представлен в табл. 1.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Влияние изучаемых препаратов на репродуктивную систему.

1.1. Влияние спиртового экстракта аралии маньчжурской (30 мг/кг) на овуляцию зучено на 30 половозрелых крысах самках массой 180-220 г и 16 половозрелых рольчихах массой 3,1-3,3 кг.

У контрольных крыс (10) количество ооцитов, извлеченных из яйцеводов, оставляло 10,2±0,8, что соответствует физиологической норме, определенной в наших пытах, и данным литературы. У подопытных крыс (20) количество ооцитов составляло 3,5+0,6 (р<0,05).

1.2. Влияние экстракта змееголовника на процессы овуляции у крыс изучено на 5 половозрелых самках крыс массой 180-200 г с установившимся эстральным циклом 10 половозрелых крольчихах. Крысам препарат вводили внутрь в дозах 10 и 30 мг/кг в иде спиртового раствора в течение 10 и более дней до стадии проэструс.

Опыты показали, что у животных контрольной группы количество вымытых оцитов составляло 10,6±0,5. У подопытных крыс, получавших препарат змееголовника

Таблица 1

Объем выполненных исследований

Препарат Доза Путь введения Характер исследований Животные Количество

Аралия маньчжурская Спиртовый экстракт 30 мг/кг Внутрь Влияние на овуляцию Вес репродуктивных органов Гонадотропные гормоны в крови Контрацептивный эффект Крысы; 30 Кролики; 16 Крысы; 16 Крысы; 30 Крысы; 30

Змееголовник Экстракт 10; 30 мг/кг Внутрь Овуляция Вес репродуктивных органов Гонадотропный эффект Контрацептивный эффект Крысы; 45 Кролики; 10 Крысы; 30 Крысы; 30 Крысы; 30

Проломник северный Суммарная фракция тритерпеновых гликозидов 1; 5; 10 мг/кг сумма фенольных соединений 10 мг/кг жидкий экстракт травы 50 мг/кг Овуляция Контрацепция Контрацепция Контрацепция Сократительная деятельность миометрия Крысы; 20 Крысы;20 Крысы; 20 Крысы; 20 Крысы; 20

Диоскорея кавказская 1; 3; 5 мг/кг, внутрь 1; 3; 5 мг/кг, подкожно 3; 5 мг/кг, в/брюшинно Овуляция Овуляция Сократительная деятельность миометрия По 20 крыс на каждую дозу По 5 кроликов на кажд. дозу По 15 крыс на каждую дозу

Семейство бурачниковых: 30 мг/кг, в желудок Эгонихон фиолетовый Короткокистник воронеглазый Надземная часть Подземная часть Липучка незабудковая Воробейник краснокоричневый лекарственный Медуница мягонькая Контрацептивный эффект Контрацептивный эффект Контрацептивный эффект Контрацептивный эффект Контрацептивный эффект Контрацептивный эффект Контрацептивный эффект Крысы;12 Крысы; 12 Крысы; 12 Крысы;12 Крысы; 12 Крысы; 12 Крысы;12

Амброзия полыннолистная 50 мг/кг, внутрь 50 мг/кг, в/брюшинно Контрацептивный эффект Влияние на миометрий Крысы; 18 Крысы;8 .

-11в дозе 10 мг/кг, количество яйцеклеток составляло 11,2±0,4. У крыс, получавших препарат в дозе 30 мг/кг, количество яйцеклеток возросло до 15,8±0,3 (табл. 2).

Наблюдения показали, что введение экстракта арапии маньчжурской (30 мг/кг) не влияло на продолжительность астрального цикла, но вызвало значительный прирост массы яичников и матки. В табл. 3 приведены данные влияния 10-дневного энтерального введения фитопрепарата (30 мг/кг) на массу яичников и матки у крыс.

Таблица 2

Влияние 10-дневного энтерального введения препарата аралии маньчжурской и змееголовника на количество яйцеклеток у крыс

Препарат, доза Число животных Количество яйцеклеток абсол. %

Контроль (аралии) 10 10,2±0,8 100

Аралия маньчжурская, 30 мг/кг 20 13,5±0,6* 132

Контроль (змееголовника) 10 10,61:0,5 100

Змееголовник, 10 мг/кг 10 11,2±0,4 105

Змееголовник, 30 мг/кг 25 15,8±0,3* 144

Примечание: * - достоверное отличие по сравнению с контролем (р<0,01)

Таблица 3

Влияние препарата аралии маньчжурской и змееголовника на массу репродуктивных органов крыс при 10-дневном энтеральном введении

Препарат (п) Доза, мг/кг Масса яичников, мг/100 г % Масса матки, мг/100 г %

Контроль (аралия) (Ю) - 40,82±2,60 100 210,50±11,62 100

Препарат арапии маньчжурской (10) 30 мг/кг 58,05±4,71* 142 241,00±18,00* 114

Контроль (змееголовник) (10) - 42,10+1,80 100 210,17+13,10 100

Препарат змееголовника (25) 30 мг/кг 58,20±2,50* 138 240,62±17,50* 114

Примечание: * - достоверное отличие по сравнению с контролем (р<0,05).

п - количество животных в группе.

Полученные результаты показывают, что при 10-дневном введении внутрь экстракт аралии маньчжурской достоверно увеличивает массу яичников и приводит к нарастанию массы матки. Прирост массы репродуктивных органов можно

расценить как свидетельство об активирующем влиянии препарата на репродуктивную систему.

Ежедневно в течение 6 дней половозрелым крольчихам массой 3-3,5 кг энтерально вводили препарат аралии маньчжурской в дозе 30 мг/кг и препарат змееголовника в дозе 30 мг/кг. Далее индуцировали овуляцию внутривенным введением 1,2% раствора ацетата меди (4 мг/кг). Одновременно с индуцированием вводили исследуемый препарат (7-ое введение) (табл. 4).

Таблица 4

Влияние 7-дневного энтерального введения препарата аралии маньчжурской и змееголовника на количество проовулировавших фолликулов у кроликов

Препарат, доза Количество Продолжительность Количество

животных введения, дни проовулировавших фолликулов абсол. %

Контроль (аралия) 8 - 10,1 ±0,4 100

Аралия, 30 мг/кг 8 7 13,2±0,8 130,6

Контроль (змееголовник) 5 - 10,0±0,7 100

Змееголовник, 10 7 14,6±1,0* 146

30 мг/кг

Примечание: * - достоверное отличие по сравнению с контролем (р<0,05).

Полученные данные свидетельствуют о том, что препараты аралии маньчжурской и змееголовника в дозе 30 мг/кг стимулируют овуляцию у крыс и кроликов. Об активирующем влиянии этих препаратов на репродуктивную систему кроликов свидетельствует также увеличение массы репродуктивных органов.

Для подтверждения возникшего представления о стимулирующем влиянии изученных препаратов на эту функцию были поставлены опыты с определением содержания гонадотропных гормонов в крови крыс.

Исследования выполнены на 30 половозрелых крысах самках массой 180-200 г. Препараты аралии маньчжурской и змееголовника вводили внутрь в дозе 30 мг/кг в течение 10 дней и более. Содержание гонадотропных гормонов (ЛГ и ФСГ) в сыворотке крови контрольных и подопытных крыс определяли радиоиммунологическим методом.

Препарат аралии маньчжурской статистически значимо повысил уровень фолликуло-стимулирующего гормона (ФСГ) в крови в активные стадии астрального

|икла (проэструс, эструс) с 3,S0±0,62 нг/мл (проэструс) и 2,S1±0,38 нг/мл (эструс) в онтроле до 4,81±0,9 нг/мл (проэструс (+26,5%) и 3,60+0,62 нг/мл (эструс (+28%) в >пыте соответственно, но не изменил уровень лютеинизирующего гормона (ЛГ) в ыворотке крови крыс в проэструсе и эструсе. Существенных изменений в содержании эСГ и ЛГ в крови в дизструсе не отмечено.

Препарат змееголовника (30 крыс) в дизструсе не вызывал заметных изменений i содержании гонадотропинов крови по сравнению с контролем. В активные стадии [икла, особенно в проэструсе, уровень ФСГ повысился с 3,41 нг/мл в контроле до 5,12 -, опыте. Отмечена тенденция к увеличению содержания ФСГ в стадии эструс.

Уровень ЛГ в крови у подопытных животных не претерпевал заметных изменений ,о сравнению с контролем.

Полученные результаты экспериментальных исследований на крысах и кроликах видетельствуют о стимулирующем влиянии препаратов аралии маньчжурской и мееголовника на процессы овуляции, на гонадотропную активность гипофиза, собенно инкрецию ФСГ. Эти фитопрепараты увеличивают массу репродуктивных рганоа. Все это можно расценить как активирующее влияние исследованных эитопрепаратов на репродуктивную систему.

1.3. Влияние препаратов суммы тритерпеновых гликозидов из проломника веерного и диоскореи кавказской на овуляцию изучено на 40 половозрелых крысах амках массой 180-220 г с установившимся эстральным циклом.

Результаты исследований на крысах показали, что у животных контрольной руппы и у подопытных животных, получавших препарат, количество вымытых йцеклеток составляло 10,4i0,5 и 10,6±0,3 соответственно. Однако, у подопытных крыс бнаружено достоверное (р<0,05) увеличение массы матки (от 150,1±15,1 до 96,1±12,44 мг/100 г, т.е. на 30,6%). Увеличение массы матки под влиянием препарата гажет свидетельствовать об изменении гормональной активности яичников в сторону реобладания эстрогенного действия, что имеет определенное значение в проявлении онтрацептивного эффекта препарата.

Аналогичные данные были получены в опытах на кроликах самкех.

II. Контрацептивный эффект фитопрепаратов.

2.1. Источником контрацептивных препаратов могут быть представители ро£ Апс1го5асе I.., семейства Рпти1асеае, в особенности проломник северный.

Опыты поставлены на 120 крысах самках массой 180-220 г с нормальны половым циклом. Все 3 препарата проломника северного вводили в желудок в вцс водных растворов в течение 14 дней: сумма фенольных соединений в дозе 10 мг/н суммарная фракция тритерпеновых гликозидов в дозах 1; 5 и 10 мг/кг; жидкий экстра, травы проломника северного (1:1) на 40% этаноле в дозе 50 мг/кг.

Опыты показали, что наиболее значительный контрацептивный эффект был пр введении суммарной фракции тритерпеновых гликозидов проломника северног Способность препарата предупреждать наступление беременности начинах проявляться с дозы 1 мг/кг (контрацептивный эффект - 20%) и достигала достовернь величин при введении суммы гликозидов в дозах 5 и 10 мг/кг (соответственно 37,5% 44% контрацептивный эффект). По существующим представлениям полоса 35 - 45 считается надежным признаком контрацепции. Введение суммы фенольнь соединений и жидкого экстракта не привело к развитию контрацептивного эффекта.

Остальные регистрируемые показатели репродуктивной системы крыс пс влиянием препаратов проломника северного существенно не изменялись.

2.2. Влияние препарата, полученного из корневищ диоскореи кавказской, / репродуктивную функцию крыс и кроликов изучено на 40 половозрелых крысах и : кроликах. Крысы были поделены на 4 группы по 10 животных в каждой. Препар; вводили крысам в желудок ежедневно в течение 14 дней в дозах 1; 3; 5 мг/| Энтерапьное введение препарата диоскореи кавказской в указанных дозах не да.1 статистически значимых результатов, контрацептивный эффект соответствовал - 20;: и 30%. Однако, результаты опытов на 30 крысах с парентеральным (подкожны введением препарата в течение 14 дней показали, что способность его тормози развитие беременности у крыс начала проявляться с дозы 1 мг/кг. Статистичес значимый контрацептивный эффект проявился уже в дозах 3 и 5 мг/кг - 39,2% и 46,1 соответственно.

Препарат не оказал существенного влияния на массу яичников, число желп тел, число имплантаций, плодов, массу плода крыс.

Опыты на 24 кроликах показали, что препарат при шестидневном подкожном рдении в дозе 3 мг/кг вызывал контрацептивный эффект, составляющий 42,4% <0,05), а в дозе 5 мг/кг - 50,1% (р<0,05).

Таким образом, полученные данные в опытах на крысах и кроликах показывают, о препарат диоскореи кавказской при парентеральном введении в дозах 3 и 5 мг/кг взывает достоверный контрацептивный эффект.

2.3. Контрацептивная активность водных экстрактов из растений семейства 'рачниковых (эгонихон фиолетовый, короткокистник воронеглазый, пипучка >забудковая, воробейник краснокоричневый, воробейник лекарственный, медуница чгонькая) в виде лиофилизированных порошков изучена в 8 сериях опытов на >ловозрелых крысах самках массой 180-200 г. В каждой серии было по 10-12 1В0тных. Испытуемые препараты вводили в желудок ежедневно в течение 14 дней по шсанной выше схеме в дозе 30 мг/кг. Животным контрольной группы энтерально юдили этинилэстрадиол в дозе 0,03 мг/кг. У забеременевших крыс регистрировали в >нце беременности (21 день) показатели репродуктивной способности.

Согласно результатам экспериментальных исследований изучаемые итопрепараты семейства бурачниковых оказывали слабый или умеренный >нтрацептивный эффект. Статистически достоверные результаты выявлены лишь в тытах с препаратами из надземной части эгонихона фиолетового (контрацептивный £)фект 30%) и из надземной части воробейника лекарственного (контрацептивный {эфект 28%, р<0,05). Остальные фитопрепараты не проявили достоверной жтрацептивной активности. Контрацептивный эффект этинилэстрадиола (группа завнения) в этих же условиях эксперимента отмечен в 46% случаев (р<0,05).

Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что в группах животных, >торым вводили препараты из надземной части воробейника краснокоричневого и эдземной части медуницы мягонькой, наблюдался значительный прирост массы тела ивотных. Фитопрепарат из надземной части воробейника краснокоричневого гатистически достоверно (р<0,05) увеличивал размер и массу плаценты.

Другие показатели репродуктивной функции у подопытных крыс существенно не гличались от контроля.

-162.4. Влияние водного экстракта амброзии (Ambrosia L.) из семейства сложноцветных (Asteraceae) на репродуктивную функцию крыс изучено в опытах на 18 половозрелых крысах самках массой 180-220 г. Препарат вводили в желудок в дозе 50 мг/кг в течение 14 дней.

Исследования показали, что энтеральное введение препарата амброзии предупреждает беременность лишь у 2 из 10 животных (контрацептивный эффект -20%, р>0,05). У 7 животных из 8, получавших физиологический раствор (контроль), зарегистрирована беременность. Следовательно, препарат амброзии полыннолистной достоверно не обладает противозачаточными свойствами.

Таким образом, наиболее значительное контрацептивное действие из испытанных фитопрепаратов оказывали препараты лроломника северного (особенно сумма тритерпеновых гликозидов - 44%) и диоскореи кавказской (контрацептивный эффект при парентеральном введении - 46,1% у крыс и 50,1% у кроликов). Несколько меньший, но достоверный контрацептивный эффект проявили препараты эгонихона фиолетового и надземной части воробейника лекарственного при энтеральном введении. Остальные изученные фитопрепараты семейства бурачниковых не оказали противозачаточного действия.

III. Влияние препаратов суммы тритерпеновых гликозидов из лроломника северного, диоскореи кавказской и амброзии на сократительную активность миометрия крыс ¡n vivo.

Известно, что от уровня сократительной деятельности миометрия в определенной мере зависит имплантация и развитие оплодотворенной яйцеклетки, то есть воспроизводство потомства.

Одним из элементов механизма контрацептивного действия препаратов проломника северного и диоскореи кавказской может быть их влияние на сократительную деятельность матки.

Сократительную активность миометрия при однократном внутрибрюшинном введении (10 мг/кг) суммы тритерпеновых гликозидов проломника северного изучали на 20 половозрелых крысах самках массой 200-220 г. При проведении расчетов исходные средние значения амплитуды и частоты биопотенциалов миометрия до

1ведения препаратов принимали за 100%. Биопотенциалы матки регистрировали у гаркотизированных животных.

Опыты показали, что через 20 и 40 мин после введения препарата проломника еверного амплитуда биопотенциалов матки снизилась. Уменьшение амплитудных оказателей биопотенциалов миометрия отмечали на фоне снижения частоты окращений.

Угнетающее влияние суммы тритерпеновых гликозидов на сократительную ктивность миометрия может указывать на причастность этого механизма к существлению противозачаточного действия вследствие влияния на скорость родвижения яйцеклетки в рогах матки. Эти изменения могут делать слизистую болочку матки непригодной для имплантации яйцеклетки.

Влияние препарата диоскореи кавказской в дозах 3 и 5 мг/кг при парентеральном знутрибргашинном) введении на сократительную активность миометрия изучено в пытах на 30 половозрелых крысах. Животным контрольной группы вводили Физиологический раствор.

Как показали опыты внутрибрюшинное введение препарата диоскореи звказской в дозе 3 мг/кг вызывало увеличение амплитуды биопотенциалов через 20 !ин на 12,6%, через 30 мин - на 13,8% (максимум). К 60 минуте амплитуда озвратилась к исходному (нормальному) уровню. Частота сокращений существенно не зменялась.

Введение этого фитопрепарата в дозе 5 мг/кг привело к увеличению амплитудь; иопотенциалов через 20 мин на 22,8%, а через 40 мин - на 39,1%. Частота сокращений эзначительно увеличилась. Амплитуда сокращений матки пришла к исходному уровню а 60 минуте от введения препарата.

В опытах, выполненных на 8 половозрелых крысах самках массой 180-220 г, зучено влияние водного экстракта амброзии полыннолистной при чутрибрюшинном введении в дозе 50 мг/кг на сократительную активность матки ивотных в условиях острого эксперимента.

Установлено, что препарат амброзии оказывает стимулирующее влияние на иометрий крыс. Отмечается увеличение амплитуды маточных сокращений через 20 и Э мин после введения препарата соответственно на 32,9±.1,5 и 34,2±1,6% по завнению с исходной, принятой за 100%. Под влиянием фитопрепарата увеличилась и астата сокращений на 20 и 13% соответственно.

Таким образом, препарат амброзии полыннолистной стимулируе' биоэлектрическую активность матки, оказывая преимущественное влияние н; амплитуду маточных сокращений. Вместе с тем препарат не проявляв' контрацептивного эффекта. Следовательно, обнаруженные свойства этоп фитопрепарата определяют перспективу возможного применения его в акушерское практике при слабости сократительной деятельности матки, а также при замедленно! инволюции матки после абортов и родов.

Результаты экспериментов показали, что препарат диоскореи кавказской I препарат проломника северного оказывают разнонаправленное влияние на миометрий Изменения сократительной деятельности матки и маточных труб как в сторон; усиления, так и угнетения может нарушить скорость продвижения яйцеклетки и тe^ самым повлиять на развитие контрацептивного эффекта. Описанное в литератур! стимулирующее влияние препарата диоскореи на моторную функцию желудка I контрактильную активность изолированного отрезка кишки (Легчаев В.Я., 1953 согласуется с полученными нами данными в отношении изменений двигательно! активности миометрия.

3АКЛ Ю Ч ЕН И Е

Опыты на половозрелых крысах и кроликах показали, что все использованны нами в работе фитопрепараты способны влиять на репродуктивную функцию: г усиливать овуляцию (аралия маньчжурская и змееголовник); б) оказыват контрацептивное действие (тритерпеновые гликозиды проломника северного, эгонихо фиолетовый, воробейник лекарственный, диоскорея кавказская); в) увеличивать масс репродуктивных органов (аралия маньчжурская, змееголовник, тритерпеновы гликозиды проломника северного, диоскорея кавказская); г) стимулироват сократительную активность матки (экстракт надземной части амбрози полыннолистной, диоскорея кавказская) или угнетать ее (препараты проломник северного).

Выявленные особенности действия фитопрепаратов на репродуктивную систем животных заслуживает внимания для дальнейшего углубленного изучения экспериментального обоснования использования этих препаратов в гинекологической акушерской практике, в сельском хозяйстве и звероводстве для увеличения поголовь приплода у многоплодных животных.

ВЫВОДЫ

1. Препараты (спиртовые экстракты) аралии маньчжурской и змееголовника ¡еличивают количество яйцеклеток у половозрелых крыс и проовулировавших олликулов у кроликов с индукцией овуляции; повышают содержание олликулостимулирующего гормона без изменения уровня лютеинизирующего гормона крови крыс в активные стадии астрального цикла.

2. Суммарная фракция тритерпенэвых гликозидов проломника северного при нтеральном введении вызывает достоверный контрацептивный эффект у крыс. Такое э действие оказывают препараты из надземной части эгонихона фиолетового и эробейника лекарственного. Парентеральное введение крысам препарата диоскореи авказской приводит к контрацептивному эффекту.

3. Препараты аралии маньчжурской и змееголовника увеличивают массу эпродуктивных органов; фракция тритерпеновых гликозидов проломника северного, эепарат диоскореи кавказской вызывают увеличение массы матки.

4. Водный экстракт надземной части амброзии полыннолистной (при введении нутрь) и препарат диоскореи кавказской стимулируют сократительную активность атки крыс. Фитопрепараты проломника северного угнетают сократительную етивность матки.

5. Выявленное в опытах разностороннее влияние фитопрепаратов на зпродуктивную систему лабораторных животных (повышение количества яйцеклеток, эдержание фолликулостимулирующего гормона, влияние на моторику миометрия и энтрацептивный эффект) заслуживает более детального изучения на предмет озможной рекомендации использования некоторых фитопрепаратов с лечебной елью, а также в сельском хозяйстве и звероводстве.

-го-

список РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Контрацептивные свойства растительных препаратов. //Газета Фармация. ■ №4-5 (97-98). - март 1999 - стр. 13. (Соавтор: Корхов В.В.).

2. Влияние препарата аралии маньчжурской на овуляцию в эксперименте /Яезисы докладов Международной конференции "Фармация в XXI веке: инновации \/ традиции". - СПбХФА. - Санкт-Петербург - апрель 1999. - стр. 155.

3. Влияние змееголовника и аралии маньчжурской на репродукцию крыс и кроликов. //Тезисы VI Российского национального конгресса "Человек и лекарство". ■ Москва. - апрель 1999 - стр. 29. (Соавтор: Корхов В.В.).

4. Влияние препаратов из растений семейства бурачниковых на репродуктивную функцию крыс. //Тезисы Всероссийской конференции с международным участием "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии". - НИИ ЭМ РАМН - С.-Петербург - июнь 1999. - стр. 71. (Соавторы: Корхов В.В., Денисенко П.П.).

5. Search for vegetable means stimulating reproduction function. /Яезисы XXX конгресса психонейроэндокринологов, Orlando, Florida - 1999. - p. . (Соавторы: Peter P. Denisenko, Vsevolod V. Korkov).

6. Search for vegetable contraceptive means. //Тезисы XXX конгресса психонейроэндокринологов, Orlando, Florida - 1999. - p. . (Соавторы: Vsevolod V. Korkov, Peter P. Denisenko).