Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение растений семейства пасленовые (красавка обыкновенная, петуния гибридная, никандра физалисовидная), содержащих стероидные гликозиды

orí л п

i i w Vil

На правах рукописи

ЛАТЦЕРДС НАТАЛИЯ ВЛАДИМИРОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА ПАСЛЕНОВЫЕ (КРАСАВКА ОБЫКНОВЕННАЯ, ПЕТУНИЯ ГИБРИДНАЯ. НИКАНДРА ФИЗАЛИСОВИДНАЯ), СОДЕРЖАЩИХ СТЕРОИДНЫЕ ГЛИКОЗИДЫ

15.00.02-фармацевтическая химия и. фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск- 1996

- г -

Работа выполнена на кафедре фармакогнозии Пятигорской Государственной фармацевтической акдемии.

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, • профессор Д.А.Муравьева .

Научный консультант: доктор химических наук, профессор П.К.Кинтя

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Арзамасцев А. П. доктор химических наук, профессор Маршалкин М.Ф.

Ведущая организация: Санкт-Петербургский химико-фармацевтический институт

"Л^п об 199й Р в

Защита состоится п<±±_" уо 1996 г. в _часов на

заседании диссертационного совета Д 084.54.01 по защитам диссертаций при . Пятигорской Государственной фармацевтической академии по адресу: 357533, г.Пятигорск, пр.Калинина, 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской Государственной фармацевтической академии

Автореферат разослан " 1996

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук, профессор Е.В.Компанцевг

í

Общая характеристика работы Актуальность темы. Лекарственные препараты растительного происхождения занимают значительное место среди применяемых лекарственных средств.

В настоящее время объектом пристального внимания становится класс, стероидных гликозидов (С.Г.). Они обладают широким спектром биологического действия и находят применение в медицине и в сельском хозяйстве, отличаясь малой токсичностью, технология получения обладает экологической чистотой,что в настоящее время немаловажно: способны тормозить рост злокачественных новообразований, снижать уровень холестерина в крови, проявлять антиокси-дантную, антимикробную, фунгицидную. антивирусную и контрацептивную активность.

На основе стероидных гликозидов созданы такие лекарственные препараты как "диоспонин","полиспонин","трибуспонин".

Составная часть гликозидов - сапогенины, служат исходным материалом для синтеза гормональных препаратов .

Немаловажная роль отводится С. Г. в системе обеспечения ..устойчивости растений к неблагоприятным факторам внешней среды, патогенам. Отмечается ростстимулирующая активность некоторых С.Г.

Именно поэтому поиск новых растительных источников С.Г., разработка способов получения, установление их химического строения, установление объективных показателей стандартизации сырья, интродукционные исследования и определение биологической активности представляется весьма актуальной задачей как в теоретическом, так и в практическом плане.

Цель работы. Фармакогностическое изучение семян Atropa belladonna L.,Petunia hybrida L., Nlcandra physaloides Adans флоры Северного Кавказа, выявление возможности .использования Atropa belladonna L. в качестве источника получения лекарственных препаратов, интродукционные исследование, стандартизация сырья. Для поставленной цели решались следующие задачи: 1. Подробные химические исследования Atropa belladonna L.; Petunia hybrida L., Nicandra physaloides.Adans.

-качественное обнаружение отдельных классов природных соединений в изучаемых видах сырья;

-количественное определение жирного масла в семенах изучаемых объектов и определение его констант;

►

-разработка рационального способа получения из семян кра савки суммы гликозидов, спиростаноловой и фуростаноловой фрак ций, а также индивидуальных соединений; •

-доказательство строения индивидуальных веществ.

2. Определение динамики накопления атропозидов в семена красавки обыкновенной различной степени зрелости.

3. Проведение ресурсно-интродукционных исследований на баз ботанического сада ПГФА.

4. Разработка метода количественного определения сумм] атропозидов.

5. Морфолого-анатомические и товароведческие исследования.

6. Предварительные фармакологические исследования атропо зидов на гипохолестеринемическую, антиоксидантную активности.

7. Проведение биологических испытаний атропозидов на виро цидную и ростстимулирующую активности.

Научная новизна. В общем фитохимическом обследовании изу чаемых объектов исследованы на содержание БАВ: фенольных соединений, алкалоидов, сапонинов, жирного масла.

Разработаны рациональные способы получения стероидны: гликозидов, спиростаноловых гликозидов, фуростаноловой фракции

Впервые изучен качественный состав С.Г.семян красавки, пет: нии и никандры,имеющих различное строение агликона и Сахаров .

Впервые из семян красавки выделено 14 стероидных гликозидов (атропозидов), отличающихся строением сапогенина и углеводной части молекулы, 7 из которых оказались новыми соединениями.

Выявлена корреляция между строением С.Г. и их биологическо{ активностью.

Выявлены морфолого-анатомические особенности строения се мян красавки, петунии и никандры, установлены отличительны« особенности каждого объекта.

Проведёны интродукционные исследования А. belladonna \ N. physaloides в условиях Северного Кавказа. Изучена динамик? накопления биомассы растений, семян по фазам вегетации,а также динамика накопления С.Г. в семенах различной степени зрелости.

Практическая значимость. В результате проведенных исследований установлено, что красавка обыкновенная является богата, источником стероидных гликозидов. Среди атропозидов выявлень соединения, обладающие значительной гипохолестеринемической г

иоксидантной активностью.

Среди стероидных гликозидов семян красавки выявлены сое-ения, повышающие всхожесть и энергию прорастания семян таба-и обладающие вироцидной активностью.

Разработан метод количественного определения стероидных козидов в сырье, проведены морфолого-анатомические и ресурсно-;ароведческие исследования, на основании полученных данных ;тавляется проект ВФС на семена красавки обыкновенной.

Перечисленные исследования и свойства гликозидов определяют .ктическую ценность исследований.

Результаты внедрения.

Методы получения атропозидов с различной биологической 'ивностью апробированы и одобрены в лаборатории регуляции •огенеза Института генетики АН Молдовы, внедрены в науч-•производственной ассоциации "БИОРЕГ". НИКТ института табака 'абачных изделий г. Кишинева.

Запатентованы пять изобретений ( приоритетные справки, ученные на патенты, направленные от ПГФА: N 95115713 от 18 ¡тября 1995г и N 95115722 от 18 сентября 1995г). Выделено 7 ¡ых соединений, на 3 из которых составлены информационные кари направлены на регистрацию.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ НА ЗАЩИТУ

На защиту выносятся следующие основные положения, харак-шзующиеся научной новизной:

- результаты химического исследования Atropa belladonna L., ;unia hybrlda L., Nlcandra physaloides Adans.;

- результаты морфолого-анатомического изучения;

- итоги ресурсно-интродукционных исследований;

- итоги предварительного фармакологического исследования юпозидов;

- итоги проведенных биологичеких исследований атропозидов.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Диссертационная'работа выполнена в соответствии с планом иных.мсследований ПГФА (регестрационный' номер 01910008620) АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты отдельных этапов исследования докладывались на:

- III Международной конференции "Регуляторы роста и развития растений" (Москва, 1995),

- 35 конгрессе ИШАК (Турция, 1995),

- 210 Национальной конференции "Химическая и биологическая активность сапонинов" (США, 1995),

- Республиканской научной конференции по фармации и фармакологии "Проблемы фармации, подготовки и использования провизорских кадров" (Пятигорск, 1993),

- Всероссийском научном обществе фармацевтов (Москва, 1995),

- Российской национальной конференции "Формирование приоритетов лекарственной политики" (Москва, 1995),

- II Международном конгрессе по народной медицине (Москва, 1995),

- на ежегодных научных конференциях ПГФА- (1992 - 1996) и опубликованы в виде тезисов на этих конференциях.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 работ, в которых отражеш ее основное содержание.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационная работа изложена на 128 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы и приложения. В тексте содержатся 21 таблица,7 схем и 9 рисунков. Список цитируемой литературы содержит 231 литературный источник, из них 99 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ В введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цели и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы.

Обзор литературы включает общие сведения,о систематическом положении и морфологических признаках семейства Solanaceae.

Представлены сведения о ботанической характеристике Atropa belladonna L., Petunia hybrida L., Nlcandra physaloldes Adans. и их химической изученности, ареалов их распространения и применению изучаемых видов в народной и официнальной медицине.

Представлены сведения о методах определения структуры С.Г., приведено химическое строение и биологическая активность известных С.Г., выделенных раннее из растений семейства пасленовые.

1. ХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ATROPA BELLADONNA L., PETUNIA HYBRIDA L., NICANDRA PHYSALOIDES ADANS.

Главным аспектом работы явилось выделение С.Г.с целью установления их химической структуры с последующим изучением биологической активности.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При хроматографировании веществ, полученных в ходе выполнения эксперимента, использовали силикагель марки 40/100, 100/250. 100/160МКМ, 5/40MKM, импрегнированный 2% азотнокислым серебром, гель-фильтрацию осуществляли на сефадексах G-25, G-50.

При доказательстве строения стероидных гликозидов использовали как химические, так и физические методы исследования: полный и частичный кислотный гидролиз, метилирование и метанолиз перметилированных производных, перйодатное окисление, ферментативное расщепление, восстановление, БХ, ТСХ, ГЖХ, ИК-, УФ-, ЯМР 13 С-, ЯМР 1 Н- спектроскопию и масс -спектрометрию. ИК-спектры снимали на спектрофотометре "Specord 71-IR", УФ - на "Specord UV-VIS", масс-спектры -на МХ-1303, ЯМР 13С спектры записаны, на приборе АМ-300, ПМР - WM-250"Bruker".

ВЫДЕЛЕНИЕ СТЕРОИДНЫХ ГЛИКОЗИДОВ

С. Г. выделяли по известной методике. В результате проведенных исследований в семенах красавки обыкновенной, петунии гибридной и никандры физали'совидной установлено содержание С.Г.:в семенах никандры - 1,24%. петунии - 2,68% и максимальный процент в семенах красавки - 3,95%.

После поного кислотного гидролиза проведено сравнительное изучение качественного состава С.Г. красавки, петунии и никандры. Для гликозидов белладонны идентифицированны агликоны:тигогенин и диосгенин;. для гликозидов петунии -тигогенин и гитогенин;для никандры - тигогенин. В углеводной части гликозидов красавки -глюкозу, галактозу и рамнозу; петунии - глюкозу и галактозу; никандры-глюкозу и ксилозу.

Также нами были разработаны новые способы получения суммы С.Г., фракций спиростаноловых и фуростаноловых гликозидов из семян красавки. Нами составлены заявки на патенты и авторские свидетельства, принятые в ' Госпатенте РФ (NN 95115713. 95115722 от

18 сентября 1995 г.). 3 новых способа выделения С.Г.апробирова! и внедрены в НПА "Биорег".

Для получения суммы С.Г.семена красавки экстрагировали бут нолом-1. Бутанольные вытяжки объединяли и упаривали на роторнс испарителе до сухого остатка. Последний растворяли в минимальнс количестве метанола и сумму гликозидов высаждали ацетоном.Осадс отфильтровывали и высушивали в вакууме. Наличие С.Г. подтвердит. ТСХ, проявляя хроматограммы реактивами Санье и Эрлиха. Выхо гликозидов составляет 4.00 % от веса исходного сырья.

Для выделения суммы гликозидов ряда спиростана нами бы разработан рациональный метод получения. Семена красавки экстра гировали смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:1.Экстрак разбавляли водой,' отделяли водно-метанольный слой, который зате концентрировали на роторном испарителе до водного остатка. С по мощью гель-фильтрации на сефадексах С-25 и С-50 и адсорбционно распределительной хроматографии на силикагеле в разных по поляр ности системах растворителей было достигнуто полное разделени на 7 различных по полярности хроматографически индивидуальны фракции (1-4-спиростаноловые гликозиды; 5-7 -фуростаноловые).

Фуростаноловые гликозиды подвергали Ферментолизу, перевод: их в спиростаноловые аналоги, которые затем экстрагировали бути ловым спиртом. Бутанольные вытяжки объединяли и упаривали до сухого остатка, последний растворяли в минимальном количестве метанола и высаждали ацетоном. Осадок отфильтровывали и высушивали.

Выделенный целевой продукт контролируют при помощи ТСХ, проявляя хроматограммы реактивом Санье и конц. Н2304. Выход суши спиростаноловых гликозидов составил 3,56 %.

■ Для выделения суммы гликозидов ряда фуростана нами был также разработан рациональный способ получения.. Экстрагирование сырья осуществляли- кипящей водой. Водный экстракт обрабатывала бутиловым спиртом, бутанольные вытяжки объединяли и упаривали дс сухого остатка, который промывали ацетоном. Осадок отфильтровывали и высушивали в вакууме.Полученную сумму С. Г. растворяли е воде и подвергали гель-фильтрации на сефадексе С-25, используя в качестве элюента дистиллированную воду. Выделение целевого продукта контролировали припомощи ТСХ, проявляя хроматограммы реактивом Эрлиха. Выход гликозидов составляет 1,9 % .

ВЫДЕЛЕНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ СТЕРОИДНЫХ ГЛИКОЗИДОВ

Нами была разработана методика разделения близких по структуре атропозидов на индивидуальные соединения: из I фракции выделили атропозиды А (I) и В(П), из II - С (III) и D(IV), из III-E(V) и F (VI), а из IV - G (VII) и Н (VIII).

Выделенные нами атропозиды дают положительную реакцию с реактивом Санье и отрицательную - с реактивом Эрлиха. Отнесение I—VIII к гликозидам спиростана было подтверждено с помощью ИК-спектроскопии, в спектрах которых были обнаружены характерные для спирокетальной группировки полосы поглощения при 968, 920>900, 865 см"1. Присутствие полос поглощения при 920>900 указывает на спирокетальную группировку (25Ю-ряда.

Для разделения фуростаноловых гликозидов (фракции V -VII), дающих при хроматографии в метанолсодержащих системах розовую окраску с реактивом Эрлиха, отнесение к фуро-ряду также подтвердили с помощью ИК-спектроскопии, использовали ферментативное расщепление, переводя их в спиростаноловые аналоги.

УСТАНОВЛЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СТРОЕНИЯ' АТРОПОЗИДОВ

Каждую из спиростаноловых атропозидов подвергали кислотному гидролизу, в результате которого для I, III, V. vn в качестве агли-кона физико-химическими методами идентифицировали тигогенин (IX): т. пл. 202-203°, [üÜ20D-65° (с 1, 0; СНС13), [МГ416, ИК-спектр: 965, 920<900,850 см"1 (полосы поглощения, характерные для спирокетальной группировки (25Ю-ряда). а атропозидов II. IV,VI, VIII - диос-генин (X): т. ПЛ. 208°, [a]20D-120° (с 1,0; СНС13). [МГ414, ИК-спектр: 965,920<900,850 см"1 (полосы поглощения, характерные для спирокетальной цепи (25Ю-ряда. В олигосахаридной части БХ определили качественный моносахаридный состав, а ГЖХ- количественное соотношение моносахаридов. В соединениях I и II идентифицировали галактозу,III и IV-галактозу и глюкозу в соотношении 1:1,V и VI-галактозу и глюкозу!:2,УПиУШ-галактозу,глюкозу и рамнозу1:2:1.

В результате анализа продуктов, полученных после метилирования и метанолиза перметилтрованных I-VIII гликозидов установили размер окисных циклов и порядок присоединения моносахаридов друг к другу.

В результате анализа продуктов, полученных после метилирова нкя и метанолиза перметилтрованных I—VIII гликозидов установил размер окисных циклов и порядок присоединения моносахаридов дру к другу. В метанолизатах методом ГЖХ в присутствии заведомых св детелей идентифицировали для I иП метил-2,3,4.б-тетра-О-Ме-p-D галактопиранозид(Х1),для Ши IV -метил-2,3,4, б-тетра-О-Ме-p-D глюкопиранозид (XII) и метил-2.3,б-три-О-Ме-р-О-галактопиранози

(XIII), для V и VI - ХН,метил-3,4,6-три-0-Ме-р-0-глюкопиранози

(XIV) и XIII-, для VII и VIII - метил-2, з; 4-три-0-Ме-Ь-рамнопира нозид (XV), метил-2,3,6-три-О-Ме-глюкопиранозид (XVI).XIV и XII

После перйодатного окисления атропозидов в гидролизата моносахариды не обнаружены.

Последовательность моносахаридов в углеводной цепи III-VII установили после частичного гидролиза.

По результатам метилирования и частичного гидролиза доказа ли, что углеводная цепь G и Н не разветвлена: концевая рамноз присоединена ко второй глюкозе 1->4 связью, которая присоединен к первой глюкозе 1->2 связью, последняя присоединена к галактоз непосредственно связанной с агликоном 1->4 связью.

Значения констант спин-спинового взаимодействия(КССВ) и ха рактерных расщеплений скелетных протонов сахарного остатка соот ветствуют • рамноглюкогалакто-конфигурациям моносахаридов в пира нозных формах, причем из величин КССВ следует а-конфигураци гликозидного центра остатка рамнозы(химический сдвиг-6,13 и 5,6 м. д., J1-2= 1,5 Гц) и ^-конфигурация глюкоз и галактозы в каждо гликозиде (сигнал аномерного атома с химическим сдвигом 4,82 м. и большой КССВ. J1-2=7,8 Гц). При сравнении спектров ЯМР 13С ти гогенина, диосгенина.и I-VIII установлено, что сигнал атома С-генина у каждого гликозида смещен в слабое поле. Это объясняете эффектом- гликозилирования, возникающим при присоединении сахар ного остатка к гидроксильной группе при С-3 агликона. Структур ные формулы атропозидов приводятся на Рис.1,2.

Двумерный гетероядерный 13С /*Н COSY спектр XII подтверди типы замещения в моносахаридных остатках. Слабопольное положени сигналов С-4 галактозы. С-2 первой глюкозы и С-4 второй глюкоз по сравнению с соответствующими незамещенными остатками, указыв ет на их замещение по указанным атомам углерода.

• Атропозиды А, В, C,D и Е являются известными соединениями, вь

ХИМИЧЕСКИЕ СТРУКТУРЫ АТРОПОЗИДОВ РЯДА СПИРОСТАНА

Н где S = R1:

для атропозидов А,В сн*он

НО J-0

он

дяя атропозидов С,Р

НО

сн^он он ■ ÓH

ÇHJÛH

о.

для атропозидов Ё,Р СНг0Н CHÎOH

для атропозидов 0-,Н

СН20Н СНдОН

но он

Рис. I.

ХИМИЧЕСКИЕ СТРУКТУРЫ АТРОПОЗИДОВ РЯДА ФУРОСТАНА

H

для атропозидов 1,К для атропозидов Ь,М

для атропозидов//,О

Рис. 2.

- и -

деленными из корней стручкового перца.Остальные ранее не описаны (табл.1).

Таблица 1

Физико-химические константы атропозидов

1 Атропо.-| Выход Брутто | Т. пл. 1 1 [а]п20 \ I Агликон

• зид 1 % формула 1 град. Г град. I

1 1 1 1 1 (с 1.0) | 1 1

А 0,17 С33Н54 08 273 -62 (СН30Н) тигогенин

В 0,06 ^■33^52 08 268 -87 (СН30Н) диосгенин

С 0,25 ^3 9^6 4 °13 287 -76 (СН30Н) тигогенин

П 0,07 СздНв2 013 282 -82 (СН30Н) диосгенин

Е 0, 78 С45Н74 °18 279 ' -67 (СН30Н) тигогенин

Р 0,25 С45Н72 018 291 -70 (Ру) диосгенин

й 0,32 ' 1 На 4 огг 296 -83 СРУ) тигогенин

Н 0,15 022 293 -96 (Ру) диосгенин

СТРОЕНИЕ АТР0П03ИД0В РЯДА ФУРОСТАНА

Качественными реакциями в тонком слое силикагеля с реактивами Санье и Эрлиха определили, что 5-7 хроматографически-индивиду-альные фракции содержат гликозиды ряда фуростана. Природа атропозидов 1.К.Ь, М,N. О была подтверждена и их ИК-спектрами, в которых имелась лишь одна широкая полоса поглощения при 900 см"1.

В условиях кислотного гидролиза фуростаноловый генин с открытой боковой цепью переходил в свой спиростаноловый аналог-было обнаружено два генина, которые по физико-химическим константам и спектральным характеристикам идентифицировали как тигогенин и ди-эсгенин, но, учитывая фуростаноловую природу гликозидов,нативные згликоны характеризуются как (25Ю-5а-фуростан-3(5, 22а, 26-триол л (25Ю-фурост-5-ен-3£, 22а, 26-триол.

Энзимное расщепление V фракции привело к образованию двух гликозидов ряда спиростана (спиростаноловых аналогов),которые по физико-химическим константам и спектральным характеристикам идентичны атропозидам С и Б. Из VI фракции получили - Е и К, из VII-1тропозидам С и Н.

Атропозиды I и К оказались известными соединениями, выделен ными ранее из корней стручкового перца, а атропозиды K.M.N и С являются новыми, ранее не описанными соединениями.

2. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ АТР0П03ИД0В

2.1. Испытание атропозидов на гипохолестеринемическую

и гипотриглицеридемическую активности

Опыты по определению гипохолестеринемического и триглицери-демического действия проводили на нелинейных белых крысах, у которых экспериментальная гиперлипидемия вызывалась внутрибрюшин-ным введением твина-80. Препарат сравнения - полиспонин.

Как видно из таблицы 2, гипохолестеринемическая активност! атропозидов превосходит эффект полиспонина, содержащего С.Г. диоскореи в 4 раза.

2.2. Испытание атропозидов на антиоксидантную активность

Проведена серия опытов по выявлению корреляции между структурой атропозидов и антиоксидантной активностью.Исследования пр< водились по методу, основанному на окислении ненасыщенных жирны; кислот в составе твина-80 кислородом воздуха и изучении влиян] испытуемых веществ на накопление в инкубационной смеси продукта перекисного окисления липидов.

В качестве структурного аналога использовали мелонгозид Q.

Как видно из таблицы 3 атропозиды ряда фуростана статиста чески значимо обладают антиоксидантной активностью. Установлено чем длиннее цепь, тем более выражена антиоксидантная активность Суша фуростаноловых атропозидов в 6 раз превышает по эффектив ности действие суммы атропозидов и в И раз-спиростаноловых гли козидов. Причем, фуростаноловые атропозиды превосходят по актив ности структурный аналог в 3 раза.

2.3. Биологические испытания атропозидов в области сельского

хозяйства

Совместно с сотрудниками НИКТ института табака и табачны изделий изучали влияние предпосевной обработки семян табака сум мой стероидных гликозидов из Atropa belladonna на всхожесть се мян растений, развитие рассады и поражаемость растений вирусо

Таблица 2

иние атропозидов на содержание холестерина и триглицеридов в крови крыс с экспериментальной гиперлипидемией

" )УППЫ - 1 Содержание холестерина в| Содержание триглицеридов в

ютных сыворотке крови Ммоль/л 1 сыворотке крови в Ммоль/л

п Г 1 1 М * ш | Р |%измен. 1 1 1 М * т | Р |%измен.

I | к контр 1 1 1 1 I |к контр 1 1

зотн. 1 1 1 1 1 1 1 1

луч., 2.7 ± 0.2 | | | 2,2 ± 0,1| !

йУ 1 1

= 9 II 1 1 1

зотн. 1 I 1

пуч., 1,46± 0,1 |<0.001| -45,8 | 1,0 ± 0,11 <0,0011 -54,9

мму I 1 1 1 1

р-ов 1 1 1 1 1

= 10 1 1 1 1 1

вотн.. 1 1 1

луч. 3,3 ±0, 06 |<0,001| -11,3 1 1 1

лиспон 1 [ 1 1 1

= 8 1 I 1 1 1 1 1 1 1 1

Таблица 3

Антиоксидантная активность атропозидов

/И 1 1 1 Вещество | Концентрация, снижающая липо-

/п пероксидацию на 50%(в МхЮ"4)

|атропозиды ряда фуростана | 0,64 д 0,09

¡фракция атропозидов I и К | 0, 80 А 0,1

I фракция атропозидов Ь и М | 0,64 ± 0,15

1 фракция атропозидов N и 0 | 0,60 ± 0,1

|атропозиды ряда спиростана! .11.80 0,2

1 сумма стероидных | 6,45 £ 0,6

1гликозидов. красавки |

1мелонгозид й | 2,55 0,05

табачной мозаики (ВТМ), бронзовости томатов (ВБТ), У-вирусом картофеля (УВК). черной корневой гнили (ЧКГ). Был выявлен важный аспект биологического действия атропозидов, выступающих в роли иммунизаторов растений, что позволяет повысить устойчивость растений к поражению вирусами в естественных условиях, что позволяет получать высокопродуктивные формы с хорошим качеством сырья.

Растения незначительно поражались ВТМ,ВБТ и УВК в концентрациях от 0,05 до 0,01%. А при обработке семян табака атропозидами ряда фуростана в концентрации 0,01% вообще не поражались ВТМ.Таким образом, оптимальными оказались концентрации 0.05 и 0,01%.

Можно предположить, что атропозиды воздействуют на патоген косвенно, через усиление самозащиты растений от болезней, так как при таком воздействии используются естественные механизмы устойчивости растений, сдерживающие развитие патогенов и исключающие развитие патогенов и исключающие их высокую вредность.

Атропозиды обладают свойствами, аналогичными регуляторам роста фитогормонам.

3. РЕСУРСНО-ИНТРОДУКЦИОННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучена динамика роста и развития Atropa belladonna L., Petunia hybrida L., Nlcandra physaloldes Adans. в условиях открытого грунта при посадке из семян.

Установлена урожайность семян, составляющая: для красавки обыкновенной-2-4кг/100мг; для петунии гибридной-0,8-1,5кг/100м2; для никандры физалисовидной- 6-10 кг/ЮОм2.

При изучении динамики накопления стероидных гликозидов отмечено наибольшее содержание в фазу полной восковой зрелости.

; В Ы .В О д ы

1. Проведено изучение растений семейства пасленовых: ATROPA BELLADONNA L., PETUNIA HYBRIDA L., NICANDRA PHYSALOIDES ADANS. на содержание основных биологически активных веществ. Из выявленных классов природных соединений наряду с алкалоидами интерес представляли вещества стероидной природы.

2. Установлено содержание стероидных гликозидов в семенах красавки, петунии и никандры: семена красавки обыкновенной содер

кат -4% гликозидов. семена петунии гибридной и никандры физалисо-шдной менее богаты стероидными гликозидами(соответственно-2,68% \ 1,24%). Проведено сравнительное изучение качественного состава стероидных гликозидов семян изучаемых объектов, идентифицированы агликоны и моносахариды углеводной части .

3. Разработаны рациональные способы получения стероидных гликозидов из семян красавки, а также атропозидов ряда спирос-тана и атропозидов ряда фуростана. Содержание спиростаноловых атропозидов - 2.1%. фуростаноловых - 1,9%. Способы получения апробировании и внедрены в НПА "Биорег", НИКТ института табака и табачных изделий ■ (г.Кишинев); запатентованы пять изобретений ( приоритетные справки N 95115713 от 18 сентября 1995г. и N 95115722 от 18 сентября 1995 г).

4. Показано, что атропозиды А, С, Е и й представляют собой З-О-р-Б-галактопиранозид; 3 -0 -р-0-глюкопиранозил(1—4)-р-0-га-лактопиранозид; З-О-рЧО-глюкопиранозил (1—> 2)-(5-Б-глюкопирано-зил (1->4)-р-Б-галактопиранозид; З-О-а-Ь-рамнопиранозил (1->4)-р-Б-глюкопиранозил(1->2)-р- 0-глюкопиранозил (1->4)-р-Б-галакто-пиранозид: тигогенина. Атропозид С является новым соединением, а А, С и Е впервые обнаружены в красавке обыкновенной. Доказано строение атропозидов В, И, Г и Н как З-О-р-П-галактопиранозид; 3-0-р-0-глюкопиранозил(1->4) -р-О-галактопиранозид; З-О-р-Б-глю-копиранозил (1->2')-р-Б-глюкопиранозил(1->4)-р-0-галактопиранозид; З-О-а-Ь-рамнопиранозил (1->4)-р-О-гдюкопиранозил (1->2)-р-Б-глю-копиранозил (1->4)-р-0-галактопиранозид: диосгенина. Атропозиды

Г и Н - новые соединения, В и Б - впервые обнаружены в красавке.

5. Доказано строение атропозидов I, I и N как З-О-р-О-глю-копиранозил (1->4) -р-Б-галактопиранозид; З-О-р-Б-глюкопиранозил (1->2) -р-Б-глюкопиранозил (1->4)-р-0-галактопиранозид; 3-0-а-Ь-рамнопиранозил (1->4)-р-О-глюкопиранозил(1->2)-р-Б-глюкошранозил (1->4)-р-Б-галактопиранозид: -(25Ю- 5а-фуростан-зр,22а,26-триол-2б-0-р-П-глюкопиранозид. Атропозиды Ь и N являются новыми соединениями, I - впервые обнаружен в красавке обыкновенной. Доказано строение атропозидов К, М и 0 как 3-0-р-0-глюкопиранозил (1->4) -р-Б-галактопиранозид; З-О-р-Б-глюкопиранозил (1->2)-р-Б-глюкопи-ранозил(1->4)-р-0-галактопиранозид; З-О-а-Ь-рамнопиранозил(1->4) -р-Б-глюкопиранозил(1->2)-галактопиранозил' (1->4)-р-Б-галактопи-ранозид: -(25И)-фурост-5-ен-зр, 22 а, 26-триол-26- О-р-Б-глюкопи-

ранозид. Атропозиды М и 0 - новые соединения, а К - в красав? обнаружен впервые'.

6. Выявлена антиоксидантная активность фуростаноловь гликозидов,изучена корреляция между структурой и биологическс активностью атропозидов.

7. Выявлена гипохолёстеринемическая и гипотрнглицеридем! ческая активность сгшростаноловых атропозидов. Суша спиростг ноловых атропозидов оказалась активнее официнального препара-полиспонина-.в 4 раза.

8. Установлено, что предпосевная обработка семян растеш растворами атропозидов не только сокращает срок прорастаю семян и созревания рассады, но и способствует приобретен] растениями высокой устойчивости к поражению вирусами ВТМ, ВБ' УВК и ЧКГ. Атропозиды рекомендуются для использования в к; честве ростстимулирующих и вироцидных средств.

9. Проведенные ресурсно-товароведческие исследования позв! лили установить урожайность надземной части и семян красав] (90-130 кг/ЮОм2 и 2-4 кг/ЮОм2); установить, что максимальн содержание С.Г. отмечается в фазу восковой зрелости; выяви1 структурные особенности семян красавки обыкновенной, петун: гибридной и никандры физалисовидной.

По теме диссертации опублированы следующие работы:

1. Н.В.Латцердс Предварительное исследование никандры физ лисовидной.//Проблемы фармации, подготовки и использования пр визорских кадров: Тез. докл. Республиканской научн. конф. фармации и фармакологии. - Пятигорск, 1993,- С. 43.

2. Н.В.Латцердс. Содержание стероидных сапонинов в разли ных органах никандры физалисовидной.//Региональная конф. по фа мации, фармакологии и подготовке кадров (49; 1994; Пятигорск Материалы... - Пятигорск, 1994.. - С. 31.

3. Н.В.Латцердс, Д.А:Муравьева, С.А.Швец. Получение стеро ных гликозидов из семян красавки обыкновенной.//Региональн конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (50; 199 Пятигорск): Материалы...- Пятигорск, 1995. -С. 16.

4. С.А.Швец, Н.В.Латцердс, П.К.Кинтя. Ростстимулирующая а тивность стероидных гликозидов из семян красавки.//Регулято роста и развития растений: Тез. докл. междунар. конф. (3; 199 Москва)- М., 1995'.- С. 106.

5. Д. А. Муравьева, В. И. Погорелов, 0. И. Попова, Н. Н. Гужва, С. П. Лу-:ашук, С. А. Рожнова, Н. Н. Мартынова, Н. В. Латцердс, С. Г. Яковлева. Лекар-:твенные растения Северного Кавказа, применяемые в народной меди-дане.//II Международный конгресс по народной медицине-М.,1995.

6. Д.А.Муравьева. О.И.Попова, Н.Н.Мартынова, С.П.Лукашук, I.В.Латцердс, С.Г.Яковлева, И.В.Пшукова. Изучение растений на-юдной медицины Северного Кавказа для практического применения. '/Формирование приоритетов лекарственой политики: Тез. докл. 'ос. нац. конф.- М., 1995.- С. 178-180.

■ 7. Д.А.Муравьева, Н.В.Латцердс. Рациональный метод полугения спиростаноловых гликозидов из семян Atropa belladonna L. '/Региональная конф. по фармации, фармакологии и подготовке садров (51; 1996; Пятигорск): Материалы...- Пятигорск, 1996.

8. S.A.Svets, N.V.Lattserdls. P.K.Klntia. The Isolation Of steroidal Glycosides From Atropa belladonna L. Seeds And Their Analysis.//IUPAC Congress (35th; 14-19 August 1995; Istambul): Abstract...- Istambul, 1995.

9. S.A.Shvets, N.V.Lattserdls, P.K.Klntia. A chemical on the Steroidal Glycosides From Atropa belladonna L. Seeds.//'ACS National Meetlng(210th;20-24 August 1995; Chicago): Abstracts... - Chicago, 1995,- N. 132.

■ 10. H.B.Латцердс, Д.А.Муравьева, Ю.А.Огурцов. Изучение анти-жсидантной активности гликозидов из семян красавки обыкновенной. //Новости медицины и фармации яринвест медикал.- 1996. N1.-

39-40.