Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследование стероидных гликозидов RUSCUS PONTICUS WOR. и разработка лекарственного средства

* « г 4 t д 3 1

МИНИСТЕРСТВО1 ЭДРАВООХРАНЕЩЯ СССР МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ им. И.М.СЕЧЕНОВА

На правах рукописи

КОРКАШВИМ Тамара Шотаевна

УДК 547.918

ИССЛЕДОВАНИЕ СТЕРОИДНЫХ ГЛИК03ИД0В RUSCOS POSTICUS TOR. И РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА

15.00.02 - Фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации, да соискание ученой • степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1991

Работа выполнена в Институте фармакохимии им.И.Г.Кутателад-зе Академии наук Грузии.

Научный руководитель - член-корр. АН Грузии, доктор

фармацевтических наук, заслуженный деятель наук Грузии, профессор КЕМЕРТЕЛИДЗЕ Э.П.

Официальные оппоненты - доктор фармацевтических наук,

профессор ГРИНКЕБИЧ Н.И.

- кандидат фармацевтических наук ГАРБУЗОВА Б.А.

Ведущая организация

- Пятигорский фармацевтический Институт.

Защита состоится 11 на заседании Специализированного Совета Д 074.05.06 вМосков -ской медицинской Академии т. И.М. Сеченова (г.Москва, Большая Пироговская, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Академии .

Автореферат разослан ./о.

ХО&ФШ 1991 г. в /г- часов

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат фармацевтических

наук Н.П. САДЧЖОВА

'"•'Г-: i

I _ 3 -

j Актуальность темы. Растения, содержащие стероидные гликози-;т^.ди'представдмт больиой интерес с точки зрения разносторонней фармакологической эффективности и использования их агликонов в качестве и «ходка продуктов синтеза стероидных гормональных препаратов;'

В Институте фармакохимии ииЛ!;Г.Кутагеладзе АН Грузии было установлено» что.яодзеыные органы произрастающей на территории Грузии ruscus ponticus for. - иглицы понтийской богаты содержанием стероидных гликозидов с интересной биологической активностью, изучение которых как возионного источника лечебного препарата является актуальным вопросом.

Цэдь и задачи исследования. Целью диссертационного труда является: изучение состава стероидных гликозидов корневищ с корнями иглицы понтийской для создания на их основе лекарственного средства. Достижение поставленной цели потребовало решения следующих задач:

- исследовать состав стероидных гликозидов иглицы понтийской, выделить индивидуальные компоненты и идентифицировать их;

- разработать способ получения стероидных гликозидов, могущих быть использованными в производстве лекарственного препарата;

- разработать методику количественного анализа стероидных гликозидов иглицы понтийской.

Научная новизна работы. Установлено, что дьа вида иглицы, произрастающей в Грузии Buacus ponticus Wor. v. Ruacue oolchicua P.F.Yeo »шеют одинаковый качественный состав стероидных гликозидов, однако первый из-них более богат содержанием данных соединений;

Изучены стероидные гликозиды подземных органов иглицы пон-

тийской. Выделены и охарактеризованы.основные гликозиды: три спиросганоловой и два фуростаноловой группы.

Впервые приведены спектральные данные ЯМР ^С фуростаноло-вых гликозидов иглицы.

На примере стероидных гликозидов иглицы впервые показано, что реактив Эрятаа, считающийся до настоящего времени специфичным для фуростанолов, может дать характерное розовое окрашивание и со слиростаноловьми гликозидами.

Предложен способ получения биологически активной суммы стероидных гликозидов ИГЛИЦЫ ПОНТИЙСКОЙ.

Разработана методика количественного определения стероидных гликозидов иглицы в растительном сырье и предполагаемом лечебной препарате.

Изучена динамика накопления стероидных гликозидов в иглице понтийской и установлены оптимальные сроки для ■ сбора высококачественного сыр^я.

Изучено анатомическое строение корневищ с корнями иглицы понтийской и выявлены характерные признаки для данного рода;

Практическая значимость работы. Результаты проведенной работы дали возможность рекомендовать подземные органы иглицы понтийской в качестве лекарственного сырья для получения лечебного препарата. Сумма стероидных гликозидов, полученная из данного сырья под названием "Ру«солонин", проявляет специфическую противовоспалительную и флебодинамическую активность. Завершено углубленное фармакологическое и токсикологическое изучение рускопонина, и он предлагается для клинической апробации.

На основе предложенного способа получения суммы гликозидов разработан лабораторно-технологический регламент субстанции пре-

парата рускопонина, который освоен экспериментально-производственной базой Института фармакохимии Академии наук Грузии.

Созданы проекты временных фармакопейных статей на корневища с корнями иглицы понтиИской и на субстанцию рускопонина.

На защиту выносятся результаты изучения стероидных гликози-дов корневищ с корнями иглицы понтийской, предложенная техноло -гия получения препарата рускопонин и методика количественного анализа стероидных гликозидов.

Апробация результатов работы. Основные материалы диссерга -ции доложены на ХХУ1, ХХУП, XXIX научных конференциях Института фармакохимии АН Грузии / Тбилиси, 1983, 1984-, 1986 /; республи -канских конференциях молодых химиков / Тбилиси, 1985, 1987 г.г./; республиканской школе-семинаре молодых ученых /Кишинев, 1987 /; П съезде фармацевтов Грузии /Тбилиси, 1987/; И республиканской научно-технической конференции /Кутаиси, 1987/.

Публикация. По материалам диссертации опублгковано 10 научных трудов, получено одно авторское свидетельстве.

йвяэь задач исследования с проблемным плано» Фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по научному плану Института фармакохимии им. Й.Г.Кутателадзе АН Грузии и является основной частъв темы: "Изучение алкалоидов, стероидных гликози -дев, лдлмдоэ, цяклоартанов и флавоноидов растений флоры Грузии" (И Гвсудареягвенной регистрации 01860006147 от 30.01.86), включенное в тгробмку 2^29.6 "Химическое неумение природного сырья (ряеятелйюго и микробного) для изыскания биологически активных веществ".

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 8 глав 'экспериментальной части, вы-

- б -

водов, списка использованной Литературы и приложения в отдельном томе. Материалы диссертации изложены на 132 страницах машинописного текста, содержит 27 рисунков, 27 таблиц, б схем. Список литературы охватывает 189 наименований, из них 133 иностранных; Приложение состоит из 128 страниц^ Обзор литературы включает сведения о стероидьых гликозидах и агликонах растения рода Ruscus а также данные биологической активности сапонинов и лекарственных средств, полученных из них»

В экспериментальной части изложены: введение к эксперименту, химическое исследование стероидных гликозидов корневищ с корнями иглицы лонтийской, разделение суммы стероидных веществ и идентификация выделенных гликозидов; последующие главы посвящены вопросу о специфичности реактива Эрлиха на стероидные гликозиды, о биологической активности препарата рускопонин и разработке способа его получения, разработке методики количественного олределе -ния гликозидов в подземных органах иглицы понтийской и рускопо -нине.

СОДЕШШЕ РАБОТЫ

Химическое исследование стероидных гликозидов корневищ с корнями Ruecus conticua Wor « Проведенная нами экспериментальная работа показала, что подземные и надземные органы двух видов иглицы, произрастающей в Грузии Ruscus pontlcus Wor. - иглица понтийская и R.colcMcus P.F.Yeo - иглица колхидская по качественному составу стероидных сапонинов почти не отличаются друг от друга. Сапонины накапливаются в основном в корневищах и корнях, а в филокладодиуые их количество незначительное. Однако, иглица понтийская более богата отдельными гликозидами и имеет широкое распространение, поэтому стало более целесообразным уг-

ч

лубленное химическое изучение именно этого вида.

Выделенная нами сумма стероидных гликозидов из корневищ с корнями иглицы понтийской в количестве 4-4-,5 % состоит из восьми веществ, которые мы назвали "рускопонтикозидами" и, по мере увеличения полярности, обозначили латинскими буквами "а", "6", "с", "d"t "в"» "i"« "8"» " Среди них доминирующими являются "е" и в значительном юличестве содержатся "с" и "Л".

Распределительной и адсорбционной хроматографией на колонках силикагеля марки "КСК" указанной суммы, а затзм рехроматогра-фированием обогащенных отдельными гликозидами фракций различной полярности, мы достигли выделения пяти индивидуальных компонентов - рускопонтикозидов 11 В", "с", " cL", "е" и "4".

Все пять гликозида дают специфичные реакция на стероидные сапонины с реактивом- Санье и Маттиуса. С реактивс-J Эрлиха глико-зиды окрашиваются в ро'зовый цвет. Положительная рзакция с реактивом Эрлиха дала основание предположить фуростаноловую природу выделенных гликозидов, но кристаллическая форма рускопонтикозидов "с", " <А", присутствие характерных полос слирокеталь-ной группировки в ИК-спектрах, указывали на их принадлекность к спиростаноловой форме. Углубленное физико-химическое изучение, исследование спектральных, данных ЯМР дали возможность подтвердить спиростаноловую структуру рускопонтикозидов " "с" , "J" и фуростаноловую рускопонтикозидов "е" и 11J".

Рускопритикозид " &" представляет собой кристаллический порошок (из МеОН), т.пл. 235-240 °С ( с разл.); /.¿/J0 - 79,0 0 (с 0,5; ЕЮН). В ИК-спектре имеются полосы поглощения в области 850, 900, 920,-960 см"1, характерные для спирокетальной группировки.

В результате кислотного гидролиза-выделены 30 % агликона с т.ял. 197-199 °С; -118,2 0 (с 1,0; СНС13); т.пл. диацета-

та агликона 130-134 °С; /Wj° -64 0 (с 1,0; CHCIg). В ИК-спектре ацетата отмечены полосы поглощения яри 1670, 1660, 1020, 990, 880, 810 На основании полученных данных агликон рускопонтикози-

да охарактеризован как неорускогенин. В углеводной части гид-ролизата обнарукеаа L -арабиноза.

Сравнением слектров ЯМР ^С неорускогенина и рускопонтикози-да " i" установлеко место присоединения углеводной части в глико-зиде. В спектре Я® ^С рускопонтикозида "I" атом C-I резонирует при 83,5 м.д., атом С-3 при 68,32 м.д. В спектре ЯШ3 неорус -когенина атом C-I резонирует при 78,1 м.д., а С-3 при 68,1 м.д. Положительный эффект гликозилирования для атома C-I составляет (+5,4 м.д.), что указывает на наличие гликозидной связи при C-I. Арабиноза связана с генином «¿-гликозидной связью, о чем свидетельствует величина константы спин-спинового взаимодействия / J =7,3 Гц/ ее аномерного протона.

Проведенная экспериментальная работа по изучению физико-химических свойств рускопонтикозида привело нас к заключению, что он является стероидным гликозидом спиростанолового ряда и имеет струкгутру 1-0-/^-Л,-арабинопиранозил/-спиростан-5(6), 25 (27)-диен Iji ,3f> -диол, соответствующий дезглюкодезрамнорусцину.

Рускопонтикозид "с" - мелкие игольчатые кристаллы ( водный этанол), т.пл. 254-256 °С (с разл.); /¿/р -74,5 0 (с Г,9; EtOH); кислотным гидролизом выделен неорускогенин, а в углеводной части обнаружены L-арабиноза и Ц-рамноза. Гидролизат, после восстановления боргадридом натрия, ацетилировали в смеси Acg/Py 1:1. ГК анализом ацетатов полиолов были идентифицированы ацетаты ара-

бита и рамнита в соотношении 1:1.

Характер связи между остатками арабинозы и рамнозы установили с помощью метилирования исследуемого соединения по методу Ха-комори. В результате меганолиза 5 % раствором НС1/МеОН метилированного гликозида методом ГЖХ идентифицировали полностью метилированный метил -2,3,4-три -О-метил.-рамнопиранозид, являющийся по-видимому терминальным моносахаридом, и 3,4-ди-0-метил-арабинопирано-зид в соотношении 1:1. Таким образом, показано наличие 1—~2 связи между остатками рамнозы и арабинозы.

Место присоединения углеводной части в рускопонтикозиде "с" при С-1 подтверждено сравнением спектров Я!£Р георускогенина и рускопонтикозида "с".

В спектре ЯМР С рускопонтикозида "с" атом (-1 резонирует при 83,59 м.д., а атом С-3 при 68,29 м.д. В спектре ЯМР нео-рускогенина атом С-1 резонирует при 78,1 м.д., а &том С-3 при 68,1 м.д. Большой положительный эффект гликозилирсвания (+5,5 м.д.) для атома С-1 указывает на присоединение сахарного остатка к гид-роксильной группе при С-1 генина.

В спектре ПНР рускопонтикозида "с" аномерные протоны резонируют при $ 6,25 (уширенный синглет) - для рамнозы и $ 4,68 (Л =7,4 Гц) - для арабинозы. Эти данные однозначно указывают на наличие -гликозидных связей у обоих моносахаридов.

Таким образом, рускопонтикозид "с" по своему химическому строению представляет собой 1-0-/«^-А-рамнопирансзил-(1-»-2)-°<.-^-арабин;»11иранозйл/-слиростан-5(б)125(27)-диен-.1 р ,3|> -диол или дезгл.юкорусцщи

Рускопонтикозид "Ж " белый кристаллический порошок, с т.пл. 212-215 °С (с разл.); -72,10 0 (с 0,5; ЕШ); кислотным

гидролизом расщепляется на неорускогенин, Б -глюкозу, Ь -раыно-зу и Ь -арабинозу. ГНХ-анализоы восстановленного и ацетшшрован-ного гидролизата идентифицированы ацетаты сорбита, рамнита и ара-бита в соотношении 1:1:1. После метилирования рускопонтикозида »¿п пх анализом в метанолизате перметилата идентифицированы 2, 3,4,б-тетра-0-ме?ил-глюкопиранозид, являющийся терминальным ыоно-сахаридным остатком, а также 2,4-ди-0-метил-рамнопиранозид и 3,4--ди-О-метил-арабинолиранозид. Это свидетельствует о наличии 1—3 гликозидной связи между глюкозой и рамнозой и 1-«-2 связи между рамнозой и арабинозой.

Сравнение спектров ЯМР неорускогеника и рускопонтикозида "с1" выявило большой положительный эффект гликоаилироваяия (+6,4 м.д.) для атома С-1.

Аноыерные протоны в ПМР-спектре рускопонтикозида "А" резонируют при £ 6,28 (уш.с.) - для рамнозы; 3 4,70 (J =8,5 Гц) -для глюкозы и 5 4,67 ( Л =7,5 Гц) для арабинозы. Величина констант расщепления однозначно указывает, что глюкоза имеет ^ь , а раыноза и арабиноза - <=( -гликозидные связи.

Все вышесказанное дает нам возможность утверждать, что руско-понтикозид "с1" имеет строение: 1-0- / ^ -э-глюкопиранозил (1->-3)--с^-Ь-рамнопиранозил (1-»-2)-е<-Ь-арабинопиранозил/-спиростан --5(6), 25(27)-диен-1^ -диол, соответствующий русциру.

Рускопонтикозиды "е" и "4-". имегацие близкие значения ^ сперва были выделены в виде смеси. Характерное поведение руско -понтикозидов "е"=гг" 4" на ТСХ силикагеле в системе хлороформ-метанол-вода 65:35:7, проявляющиеся в виде двух четко разделяемых пятен, а на двумерной ТСХ в этой же системе в виде 4 пятен, одного неразделяемого пятна в системе бутанол-этанол-вода 5:3:1, а также

наличие трехпротонного синглета 'при 3,14 м.Дь в ПМР-спектре рус-{опонтикоэида "е" и отсутствие этого сигнала в рускопонтикозиде ' дали нам основание судить о принадлежности этих гликозидов с стероидам фуростана. Продолжительным кипячением руснопонтикози-;ов а метаноле мы достигли получения индивидуального

¡ещества "е", в воде - "

В ИК-спектре отсутствуют полосы поглощения, характерные для юединения ряда спиростана, в частности, меняется характер погло-ения четырех полос в области 1350-850 см~* и появляется малоин-енсивная полоса при 890 см"*.

Рускопонтикозид "а" белый аморфный порошок с т.пл. 172-174 °С С разл.); - 50,4 ±2 0 (с I; Н?0).

Рускопонтккозид "^" белый аморфный порошок плавится при 16768 °С (с разл.); -48,6 ±2 0 (с I; Н20).

Полным КИСЛОТНЫМ гидролизом РУСКОПОНТИКОЗИДОВ ПеЧ^сг"!» мучен неорускогенин, а в углеводной части обнаружены глюкоза, шноза и арабииоза. ГИ анализом ацетатов полиолов гидролизата ши обнаружены ацетаты сорбита, рамнита и арабита в соотношении

В результате метанолиза 5 % раствором НС1/МеОН метилирован-то, гликозида по методу Хадом'ори ПСХ анализом идентифицировали в ^отношении 1:1:1 полностью метилированный 2,3,4-три-О-метил-/.-|амнопиранозид, 3,4-ди-0-метил-Ь-арабинопиранозид и 2,3,4,6 -етра-О-метил-С-глюкопиранозид, что подтверждает наличие (1—2) икозидной связи между рамнозой и арабинозой, а глюкоза не связа-одной'цепью с остатками Сахаров. Ферментативным гидролизом рус-понтикозида { " при помощи комплексного фермента уааиси

Их рХвсЬсь70^)1.8 получен соответствующий спиростанодовый* глико-ц-биозид-рускопонтикозид "с" и Б -глюкоза";

Большой полонительный эффект гликозилирования для атома С-1 (+5,9 и 5,6 м.дО при сравнении спектров ЯМР ^С рускопонтикозидов "е" и " с неорускогенином, указывает на наличие в них глико -зидной связи при С-1.

В спектрах ПМР рускопонтикозидов "е" и 11 ^ 11 наблюдаются сигналы аномерных протонов моносахаридов: 5 6,30 (уш.с.) - для рам-нозы; 8 4,72 ( Л =8,6 Гц) - для глюкозы; 8 4,71 ( Л =7,5 Гц) -для арабинозы. Эти данные однозначно указывают на то, что в обоих гликозидах глюкоза имеет ^ -, а рамноза и арабиноза -гликозид-ные связи.

Все вышеуказанное дает нам возможность сказать, что рускопон-тикозид представляет собой 1-0-/^-Ь-рамнопиранозил (1-»-2)--/-¿1-арабинопиранозил/-1^ ,22 и ,26-тетра-гидрокси-фуростан--5(6), 25(27)-диен-26--глюкопиранозид или дезглюкорускозид« а рускопонтикозид "е" является метоксильной формой рускопонтико-зида " |" (дезглкжорускозида) в положении С-22.

К вопросу о специфичности реактива Эрлиха на стероидные гли-козиды. В процессе использования реактива Эрлиха при анализе стероидных гликозидов иглицы понтийской, выяснилось, что он дает розовое окрашивание с гликозидами неорускогенина, как фуростаноло-вой, так и спиростаноловой структуры, что противоречит общепринятому мнению о строгой специфичности данного реактива для фуроста-нолов. Проведенные нами опыты, на имеющейся в нашем распоряжении, небольшой группе генинов и спиростаноловых гликозидов убедили нас, что реактив Эрлиха может дать полокиетльную реакцию с некоторыми спиростаноловыми гликозидами.

Это обстоятельство вызывает необходимость расширения экспериментов в данном направлении и углубленного изучения механизма

юакции Эрлиха со стероидными гликозидами спиро- и фуроотанолозо-■о ряда.

Биологическая активность суммы гликозидов корневищ с корнями 1у.всиа р'ст-Ысиз №ог. В отделе фармакологии Института фарма-:пхимии АН Грузии под руководством докт.биолог.наук Г.Б.Абуладзе >ыла изучена специфическая биологическая активность полученной на-!к суммы гликозидов корневищ с корнями иглицы понтийской под наз-¡анием "рускопонин". Показано, что рускопонин проявляет антиэкссу-[£'.тивную и флебодинамическую активность при пероральноа и внутри-¡ртошинном введении и обладает налой токсичностью - Ы) рускопо-шна =3,17 г/гсг. Завершено фармакологическое и токсикологическое 13учение рускопонина, подготовлен материал для клинической апробации в качестве противовоспалительного и флебодинамического средства.

Способ получения рускопонина. Для создания промышленно-прием-геыого способа выделения субстанции рускопонина, мы изучили от -цельные процессы технологического цикла, с использованием различных экстрагентов и приемов очистки. Предложен наиболее оптимальный способ получения рускопонина, принцип которого состоит в следую -дом: в/с измельченное сырье экстрагируется 80 % этанолом, спирт отгоняется, оставшаяся водная жидкость очищается хлороформом и гликозиды из нее извлекаются бутанолом. Бутанольный экстракт обрабатывается небольшим количеством 5 %-ного аммиачного раствора, сгущается, разбавляется метанолом и переосаждается из ацетона; осадок отделяется и высушивается.

Таким образом, получается сумма стероидных гликозидов - субстанция рускопонин в 1Соличестве 4,5 % в виде белого с бежеватьш оттенком, растворимого в воде, аморфного порошка. Сумма эта состо-

ит из находящихся в исходном растении стероидных гликозидов как спиростанолового, так и фуростанолового ряда, основным компонентом которой является рускопонтикозид "в" (дезглюкорускозид) и его метоксильный эфир рускопонтикозид Содержание суммы стероид-

ных гликозидов в 'рускопонине различных серий составляет 63-70

На основании данного способа нами составлен лабораторно-тех-нологический регламент рускопонина, который освоен на экспериментально-производственной базе Института фармакохимии АН Грузии.

Методика количественного определения суммы гликозидов в подземных органах Ииасцв роп-Исия ууог. и рускопонине. Разработана хромато-фотоколориметричеекая методика количественного анализа стероидных гликозидов в корневищах с корнями иглицы понтийской и в субстанции препарата рускопонина, основанная на цветной реакции стероидных гликозидов с реактивом Эрлиха.

Изучение процесса образования окрашенного комплекса стероидных гликозидов с реактивом Эрлиха.проводилось с использованием выделенного нами доминирующего фуростанолового гликозида руско-понтикозида "е"^^'^".

Для достикения стабильной окраски реакционной смеси, наиболее подходящей температурой оказалась 60 °С, состояние равновесия устанавливается за 1,5 ч, а закон Бера выполняется в диапазоне концентрации сапонина от 0,1 до 1,4 мг/25 мл. При этом окраска полученного комплекса остается стабильной в течение 4-х ч, что позволяет проводить анализ в достаточно широком интервале времени.

Для кочичественного определения суммы стероидных гликозидов в сырье и с/бстанции рускопонина, на пластинку ТСХ силикагеля "КСК" в двух точках наносился аетанольный раствор исследуемых объектов по 0,4 или 0,2 мл. Пластинки хроматографировались в сис-

теме хлороформ-метанол-вода 65:35:7. Соответствующие у тетки си-ликагеля на ТСХ, содержащие стероидные гликозиды выскабливались и элюировались метанолом. Растворитель отгонялся, а к остатку добавлялось '2 мл метанола и 6 мл реактива Эрлиха. Смесь выдерживалась в течение 1,5 часа при 60 0,5 °С, разбавлялась этанолом до 25 мл и оптическая плотность измерялась на фотоколориметре ФЕК 56 Ы при длине волны 590 нм.

Таблица I

Стабильность окраски реакционной смеси после термостатирования

Количество \часы

рускопони- 1 2 3 4 Ь 6 V •4 24

на, в мг л \

0,5 0,26 0,26 0,26 0,25 0,26 0,25 0,25 0,2 0,18 0,10

0,7 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,35 0,31 0Г3 0,24

1,0 0,52 0,52 0,52 0,52 0,52 0,52 0,51 0,47 0,43 0,33

1,5 0,78 0,78 0,78 0,78 0,78 0,77 0,73 0,73 0,,71 0,62

Определение точности, с применением метода добавок, и метрологическая характеристика показали хорошую воспроизводимость методики, относительная ошибка которой не превышала ± 4,6

С применением предложенной нами методики анализа установле -но, что содержание стероидных гликозидов в подземных частях и. понгийской составляет 6-9 а в субстанции рускопонина 60-70

Методика количественного анализа стероидных гликозидов включена в проекты ВФС на растительное сырье и субсганцию-рускопонин.

Динамика накопления стероидных гликозидов в ииЕпив уогИ;!-сив ТУог. . Изучение сезонной динами накопления стероидных гликозидов в корневищах с корнями иглицы понтийской в разных вегетационных периодах показало, что их содержание значительное в тсче-

Таблица 2

Динамика накопления - суммы стероидных гликозидов в корнях и корневищах иглицы понтийской ($5 от массы воздушно-сухого сырья)

Повтор- ность анализа Фаз а развит и я

зимний покой фаза вегетации и цветения фаза вегетации и плодоношения фаза плодоношения знаний покой

Год и м е с я ц сбора

1986 1985

I П Ш 1У У У1 УЛ УШ Н X XI ХП

I 7,0 7,0 6,0 7,0 7,6 8,1 8,5 8,9 7,3 7,6 7,5

2 6,9 6,9 6,0 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 7,2 7,6 7,6 8,3

3 7.1 6,8 6,1 6,9 7,6 8,1 8,5 9,0 7,3 7,5 7,6 8,2

средний 7,0 6,9 6,0 7,0 7,6 8,1 8,5 9,0 7,3 7,6 7,6 8,3

;'е целого года и составляет от 6 до 9 Сбор сырья мо»яо реко-зндовать в год два раза - летом, когда количество гликсзидов эстигает максимума - в конце июля-августа и зимой - в конце до-эбря. .

Мы изучили анатомическое строение корневищ с корнями и. поноской и, полученные данные в качестве диагностических лризна -з.в, включены в проект ВФС растения - источника препарата рускотина.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что подземные органы дзух видов иглицы, произ-i стающие в Грузии Ruscus ponticus Wor. - иглица понтичская и tr.cus colchicuo P. P. Ye о - иглица колхидская имеют одинако-[£ качественный состав стероидных гликозидов, составляющих не :нее, чем 8 компонентов. Они отличаются друг от друга количест-iM отдельных гликозидов, причем наиболее богатой оказалась

понтийская.

2. Изучены стероидные гликозиды корневищ с корнями и. пон-йской. Выделены 5 основных индивидуальных гликозида - 3 спиро-аноловой и 2 фуростаноловой группы, которые охарактеризованы к: дезглюкодсзрамнорусцин, дезглюкорусцин, русцин, дезглюко -скозид и его С-22 метиловый эфир.

3. Впервые описаны ЯМР спектры фуростаноловых гликозвдол дезглюкорускозида и его С-22 метилового эфира.

4. Установлено, что реактив Эплиха дает характерное красное окранивяние со спиростаноловыми гликозидами производными рускоге-нина и неорускогбнина. Высказано предположение относительно нв-специфичнооти данного реактива для гликозидов фуростанолового ряда.

5. Суша стероидных гликозидов подземных органов и.понтий-ской под названием "рускопонин" проявляет специфичную противовоспалительную и флебодинамичсскую активность при низкой токсичности. Завершено предклиническое изучение рускопонина.

6..Предложен способ получения субстанции предполагаемого препарата рускопонина, на основе которого создан лабораторно-тех-нологичесга.й регламент.

7. Разработана методика количественного анализа стероидных гликозидов иглицы , которая включена в проекты временных фармакопейных статей растительного сырья и субстанции рускопонина'.

8; Показано, что количество гликозидов в корневищах с корнями и. понткйской в течение целого года колеблется незначительно'; Их накопление по фазам' вегетации имеет два пика максимума в аз -густе и деьабре. Сбор сырья для промышленных целей следует проводить в эти месяца.

Опубликованные работы по теме диссертации

1. A.c. 1320928 СССР А 61 К 35/78. Способ получения суммы стероидных Гликозидов, обладающих противововспалительным действием /Э.П.Кемертелидзе, Т.Ш.Коркашвили, Т.А.Пхеидзе, Г.В.Абуладзе (СССР) - № 39119779/28-14, заяв. 24.04.85.

2. Коркашвили Т.Ш. Спиростаноловые гликозиды иглицы понтийской. Тезисы докладов. Конференция молодых химиков Груз. ССР, посвященная 40-летию победы Советского Союза в Великой Отечественной войне. Тбилиси, 1985, с. 32.

i. Коркашвили Т.И., Джикия О.Д., Вугальтер лЫ., Пхеидзо Т.А., Кемертелидзе Э.П. Стероидные гликозиды Ruscus pontieug v/ог. Сообщен. АН ГССР 1985, т. 120, й 3, с. 559-564.

4. Коркашвили Т.Ш. Иглица понтийская как источник биологически активных стероидных сапонинов. Тезисы докладов республиканской школы-семинара молодых ученых и специалистов. Кишинев, 1987, с. 103.

5. Коркашвили Т.Ш., Пхеидзе Т.А., Кемертелидзе Э.П. Дезглюкорус-цин и дезглюкорускозид из Ruscus porrticus Wor. Тезисы докладов. Ш республиканская научно-техническая конференция "Химия и научно-технический прогресс", посвященная 70-летию Октябрьской революции. Кутаиси, 1987, с. 7.

S. Коркашвили Т.Ш. Химический состав иглицы понтийской. Материалы П съезда фармацевтов Грузии. Тбилиси, 1987, с. 289-290.

7. Коркашвили Т.И. Количественный анализ и динамика накопления стероидных гликозидов Ruscus ponticus Wor. Тезисы докладов. Республиканская конференция молодых химиков Груз. ССР. Тбилиси, 1987, с. 77-78.

8. Коркашзили Т.П., Сарабунович А.Г., Пхеидзе Т.А., Явич П.А., Кемертелидзе Э.П. Количественное определение стероидных гликозидов Ruscus ponticus ffor. • Фармация. 1988, fö 5, с. 35-37

9. Коркашвили Т.Н. Реакция спиростаноловых гликозидов производных рускогенина с реактивом Эрлиха. Тезисы докладов. Республиканская конференция молодых химиков Груз. ССР. Тбилиси. 1989, с. 25-26.

М. Анели H.A. Анели Дж.!-;., Коркашвили Т.Ш., Кобаладзе Т.А. Анатомическое строение иглицы понтийской. Известия Академии наук ГССР, сер. биологическая 1939. т. 15, te 5, с. 323-327.

II. Коркашвили Т.Ш., Пхеидзе Т.А. Динамика накопления стероидных гликозидов в корнях и корневищах Buscus ponticus Wor . Известия Академии Наук ГССР, сер. химическая, 1990, т. 16, te 2, с. 175-158.