Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение можжевельника длиннохвойного и можжевельника казацкого

На правах рукописи

ПИСАРЕВ ДМИТРИЙ ИВАНОВИЧ

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ МОЖЖЕВЕЛЬНИКА ДЛИННОХВОЙНОГО И МОЖЖЕВЕЛЬНИКА КАЗАЦКОГО

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего

«Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Денисенко Олег Николаевич Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова Валентина Николаевна Доктор фармацевтических наук, доцент Коновалов Дмитрий Алексеевич

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (г. Пермь)

Зашита состоится «15» декабря 2005 года в 9 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.069.01 при Пятигорской государственной фармацевтической академии (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

Автореферат разослан «/#» 2005 г.

профессионального образования

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук, профессор

200 <ь- А \%Q>37

МЪъ 5ЯЗ

3

Общая характеристика работы

Актуальность темы. В последние годы неизмеримо возросла актуальность лечения лекарственными растениями и лекарственными препаратами на их основе. Это в первую очередь обусловлено ростом токсико-аялергических заболеваний, терапевтических неудач от применения синтетических лекарственных средств. Многовековые традиции и опыт народной медицины убедительно доказывают целесообразность применения лекарственных растений при профилактике, поддерживающей или курсовой терапии ряда заболеваний. Народная медицина использует огромное количество лекарственных растений, значительная часть которых при надлежащем уровне их химической и фармакологической изученности могут применятся официально. К числу подобных растений относятся представители рода можжевельник.

Отечественная научная медицина ограничивается использованием плодов можжевельника обыкновенного, которые применяются при ряде заболеваний сердечно-сосудистой, мочевыделительной, дыхательной систем, а также входят в состав некоторых мочегонных сборов, в том числе по прописи Здренко. В настоящее время наша страна испытывает дефицит в этом ценном сырье, так как основные промысловые районы можжевельника на территории бывшего СССР остались в Беларусии и Украине. Решить данную проблему позволяет привлечение потенциала других видов можжевельников. В частности, на Кавказе произрастает очень близкий в систематическом отношении вид - можжевельник длиннохвойный - Juniperus oblonga Bieb. Здесь это растение широко распространено и образует обширные заросли. Сведения о химическом составе и фармакологических свойствах м. длиннохвойного весьма ограничены, хотя его плоды и хвоя успешно применяются в народной медицине, подобно м. обыкновенному. В связи с этим необходимость обеспечения сырьевой базы ценным видом сырья за счёт мало изученного м. длиннохвойного нам представляется весьма целесообразной. __

РОС. НАЦИОНАЛЬНА* БИБЛИОТЕКА

Перспективным растением из рода Лаарегия Ь. является и можжевельник казацкий. Хвоя этого вида используется в народной медицине как трихомона-цидное, цитостатическое, противовирусное средство, несмотря на известную токсичность растения. Такие ценные терапевтические эффекты связаны с наличием в нём лигнанов, производных 1-фенилтетрагидронафталина и флавонои-дов. Кавказская популяция м. казацкого в этом направлении не была изучена.

Таким образом, обеспечение ценным сырьём отечественной медицины за счёт м. длиннохвойного и установление перспективности кавказской популяции м. казацкого является, несомненно, актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - научное обоснование возможности обеспечения сырьевой базы лекарственных растений за счёт ранее мало изученных видов рода можжевельник, произрастающих на Северном Кавказе.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи.

1. Провести исследования по установлению мест произрастания и определению ресурсных возможностей исследуемых водов.

2. Изучить химический состав основных групп биологически активных веществ объектов исследования.

3. Установить основные морфолого-анатомические диагностические признаки и товароведческие показатели сырья.

4. Разработать НД на плоды можжевельника длиннохвойного и можжевельника обыкновенного.

5. Выявить оптимальные условия получения экстракта из плодов можжевельника и его фармакологическую активность.

Научная новизна. Впервые определены районы наибольшего распространения м. длиннохвойного и м. казацкого на территории Северного Кавказа и их сырьевые возможности. Установлен химический состав основных групп биологически активных" веществ м. длиннохвойного и состав лигнанов и флавоноидов м. казацкого. Изучены основные компоненты эфирных масел плодов и хвои м.

длиннохвойного. Установлено, что главными компонентами являются: а-пинен, сабинен, Р-мирцен, гермакрен О, терпинен-4-ол. Определен состав смолистых веществ м. длиннохвойного, впервые в плодах этого вида обнаружены: пимаро-вая, кауреновая, дегидроабиетиновая кислоты и дегидроабиетан, в хвое - пима-ровая кислота и 7-кетоферругинол; из фенольных соединений в плодах и хвое м длиннохвойного идентифицированы: дезоксиподофиллотоксин, апигенин, апигенин-7-глюкозид, изокверцитрин, рутин, скутедляреин-7-глюкозвд, умбел-лиферон, (+)-катехин, (-)-эпикатехин, дубильные вещества конденсированного типа. Изучены полисахариды по фракциям: водорастворимые полисахариды (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), и гемицеллюлоза (ГЦ) и установлен аминокислотный и микроэлементный состав м. длиннохвойного. Также обнаружены яблочная кислота и фруктоза в свободном виде.

Установлена близость химического состава и фармакологической активности плодов м. длиннохвойного и м. обыкновенного, что позволяет рекомендовать плоды м. длиннохвойного в качестве нового сырьевого источника ценного лекарственного растительного сырья - плоды можжевельника.

Предложены критерии оценки качества и идентификации плодов м. длиннохвойного по его основным морфологическим и анатомическим диагностическим признакам.

Результаты химического изучения свидетельствуют о перспективности хвои м. длиннохвойного, богатой эфирными маслами и полифенольными соединениями, для дальнейшего внедрения этого вида сырья в практическую медицину.

Впервые в хвое м. казацкого идентифицированы лигнаны: дезоксиподофиллотоксин, дезоксиподоризон и дезоксиизоподофиллотоксин, что свидетельствует о несомненной перспективности данного вида, как источника этих соединений с цитосгатической и противовирусной активностью.

На основе плодов можжевельника разработан жидкий спиртовый экстракт. Определены нормы качества экстракта и установлена диуретическая активность.

Практическая значимость. В результате проведённых ресурсных исследований, определены запасы и установлены объёмы заготовок сырья м длинно-хвойного и м. казацкого в районах наибольшего их распространения на Северном Кавказе. Показана возможность обеспечения практической медицины ценным лекарственным сырьём - плодами можжевельника за счёт близких по химическому составу и фармакологической активности плодов м. длиннохвойного и м. обыкновенного. На основании ресурсных, химических, морфолого-анатомических и фармакологических исследований разработан проект ФС «Можжевельника плоды - Дитреп АисИв». Получен экстракт плодов можжевельника, проведена его стандартизация. Установлено диуретическое действие экстракта плодов можжевельника, значительно превышающее активность их настоев, что позволяет рекомендовать его для дальнейших клинических испытаний в качестве эффективного диуретического средства.

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности использования плодов м. длиннохвойного наряду с плодами м. обыкновенного, а также в качестве сырья для производства экстракта плодов можжевельника.

Внедрение результатов исследования. Проект ФС на плоды можжевельника, находится на экспертизе в Институте стандартизации лекарственных средств ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора (письмо №1281 от 19.04.2005 г.), «Инструкция по сбору и сушке шишкоягод можжевельника длиннохвойного», утвержденная Всероссийским институтом лекарственных и ароматических растений (Москва, ВИЛ АР, протокол №3 от 01.04.2005 г.).

Апробация полученных результатов. Основные результаты исследования доложены на научных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии (2001 - 2005 г.г.).

По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

Основные положения, выносимые на защиту.

- итоги ресурсных исследований плодов, хвои м. длиннохвойного и хвои м. казацкого',

- результаты исследования химического состава биологически активных веществ м. длиннохвойного и м. казацкого флоры Северного Кавказа;

- основное содержание ФС «Можжевельника плоды - Juniperi fructus»;

- условия получения экстракта из плодов можжевельника жидкого (1:1) в качестве диуретического средства.

Связь задач исследований с проблемным планом Фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01200112164) в рамках проблемы «Фармация» секция №38 Учёного совета МЗСР РФ.

Обьём и структура диссертации. Работа изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка литературы и приложений; иллюстрирована 32 рисунками и 35 таблицами. Список литературы включает 145 источников, в том числе 17 - на иностранных языках.

Основное содержание работы

I. Изучение ресурсных возможностей м. длиннохвойного и м. казацкого

Объектами исследования явились плоды и хвоя можжевельника длинно-хвойного - Juniperus oblonga Bieb. и хвоя можжевельника казацкого - Juniperus sabina L. семейства кипарисовых - Cupressaceae Baril.

Для изучения сырьевой базы выбранных объектов, проведены экспедиционные обследования некоторых районов Северного Кавказа, учитывая эколого-ценотическую приуроченность изучаемых видов. Оценку запасов проводили по методике ВИЛАРа на конкретных зарослях. Плотность запасов определяли методом модельных экземпляров.

Результаты определения запасов плодов, хвои м. длиннохвойного и хвои м. казацкого в исследованных районах Северного Кавказа представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 - Запасы плодов и хвои м. длиннохвойного в исследованных __районах Северного Кавказа _

Участок Пло- Плотность запаса, ц/га Рекомендуемые

щадь заготовки (т)

заросли, га Плоды Хвоя Плоды Хвоя

Эльбрусский район 150,0 1,79±0,2 4,2±0,09 6,85±1,25 5,57±0,12

Зольский район 5,0 0,75±0,13 2,9±0,52 0,13±0,03 0,086±0,02

Черекский район 3,0 0,8±0,2 3,3±0,37 0,07±0,03 0,11±0,01

Карачаевский район 12,0 0,9±0,12 3,5±0,09 0,45±0,07 0,35±0,01

Ирафский район 20,0 1,2±0,28 4,6±0,5 0,71 ±0,3 0,66±0,092

Алагирский район 18,0 1,3±0,23 4,3±0,3 0,66±0,2 0,6±0,055

Итого: 208,0 6,74+1,16 22,8±1,87 8,87±1,88 7,37±0,31

Таблица 2 - Запасы хвои м. казацкого в исследованных районах Северного __Кавказа_

Участок Площадь заросли, га Плотность запаса, ц/га Рекомендуемые заготовки (т)

Эльбрусский район 190,0 6,38±0,62 8,8±1,15

Зольский район 12,0 5,5±0,5 0,516±0,06

Черекский район 15,0 5,2±0,24 0,68±0,035

Карачаевский район 18,0 5,7±0,7 0,76±0,12

Ирафский район 22,0 5,7±0,47 1,01±0,1

Алагирский район 23,0 6,1±0,33 1,2±0,073

Итого: 280,0 34,58±2,94 13,0±1,54

Таким образом, установлено, что объём возможных заготовок для плодов

составил - 8,87±1,88 т, для хвои м. длиннохвойного - 7,37±0,31 т, хвои м. казацкого -13,0±1,54 т воздушно-сухого сырья.

2. Фитохимическое изучение м. длиннохвойного и м. казацкого Для установления качественного состава и количественного содержания биологически активных веществ использованы высушенные и измельчённые плоды и хвоя м. длиннохвойного, а также хвоя м. казацкого.

Эфирные масла выделяли методом гидродистилляции. Основные физико-химические константы определяли по методикам, изложенным в ГФ XI изд.

Состав эфирных масел анализировали газохроматограф ическим методом на приборе - высокоэффективный газовый хроматограф HRGC - 5300 Mega Series с использованием пламенно-ионизационного детектора FID - 40. Результаты газохроматографического разделения использовали для расчётов линейно-

логарифмических индексов удерживания исследуемых компонентов. Индексы удерживания каждого компонента сравнивали с таковыми, имеющимися в научной литературе и результатами экспериментальных исследований лаборатории аналитической фитохимии Ботанического института имени В.Л. Комарова, полученными в аналогичных условиях проведения анализа.

Масс-спектры отдельных соединений, входящих в состав эфирных масел регистрировались на газовом хроматографе - масс-спектрометре ЬКВ - 2091. Идентификация компонентов осуществлялась с помощью компьютерной базы данных масс-спектров, имеющейся в распоряжении этой же лаборатории. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Компонентный состав эфирных масел хвои и плодов м. длинно_ хвойного по индексам удерживания _

Индекс Содержание в Содержание в Идентифицирован-

удерживания (ИУ) хвое % шишкоягодах % ный компонент

920 3,0 2,7 а-туйен

927 41,4 30,0 а-пинен

960 13,4 25,4 сабинен

975 0,9 16,0 р-мирцен

990 3,0 - 0-пиронен

1000 2,5 0,9 А3 - карен

1007 5,5 2,1 D-лимонен

1012 - 4,75 п-цимен

1047 4.0 1,9 у -терпинен

1090 1,5 1,5 терпинолен

1170 9,5 6,1 терпинен-4-ол

1185 0,8 - а - терпинеол

1465 - 4,5 гермакрен D

1505 1,35 1,2 у - кадинен

1540 1,3 2,3 а-кадинен

Таким образом, установлен состав эфирных масел м. длиннохвойного, глав-

ными компонентами которых являются: а-пинен, сабинен, p-мирцен, терпинен-4-ол, D-лимонен и гермакрен D.

Химический состав смолистых веществ и лигнанов устанавливали методом хромато-масс-спектрометрии на приборе Agilent Technology 6890N. Иденгифи-

кация компонентов проводилась при сравнении полученных масс-спектров с данными библиотек масс-спектров - NIST и WILEY 275.

Для выделения смол воздушно-сухой материал экстрагировали спирто-хлороформной смесью (1:3) и полученные извлечения очищали на колонке с силикагелем марки КСК, элюируя смесью хлороформ - спирт метиловый (3:1). Состав элюатов, в количестве 1 мкл вводили в испаритель хромато-масс-спекгромстра. В смоле плодов обнаружены: пимаровая, кауреновая, дегвдроа-биетиновая кислоты и дегидроабиетан, в смоле хвои: пимаровая кислота и 7-кетоферругинол.

Выделение лигнанов из хвои м казацкого осуществляли с помощью методики Хартуэлла. В полученной фракции хромато-масс-спектрометрически установлено наличие трёх веществ лигнановой природы: дезоксиизоподофилло-токсина, дезоксиподоризона и дезоксиподофиллотоксина. Выделенные лигнаны в основе структуры которых лежат тетрагидронафталиновое ядро и лактокиый цикл, подобно подофиллотоксину, обладают цитостатической активностью.

Выделение кумаринов и флавоноидов осуществляли экстракцией спиртом этиловым 70%. Для разделения сумм веществ на индивидуальные компоненты использованы методы избирательной жидкостной экстракции, препаративной бумажной, тонкослойной, а также колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте. Из плодов и хвои м. длиннохвойного были выделены вещества К|, Ф] - ФУ, из хвоил«, казацкого Кь Ф,, Фп, и Фу1-

Вещество К] выделено из хлороформной фракции и представляло собой бесцветные ромбические призмы с t™ 225°, легко растворимые в спирте, эфире, труднее в горячей воде, 256, 325 нм. Положительный результат взаимодействия вещества с диазореактивом свидетельствует о свободной -ОН группе в положении С7. Физико-химические свойства, величины Rf в различных системах растворителей, а также отсутствие депрессии температуры плавления в пробе смешения вещества с истинным образцом свидетелем позволили идентифицировать вещество Ki как 7-оксикумарин или умбеллиферон.

Из этил ацетатных фракций путём адсорбционной колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте и дополнительным разделением препаративной бумажной хроматографией, выделены вещества Ф; — Фш. Идентификацию индивидуальных соединений проводили на основании изучения физико-химических констант, как самих исходных веществ, так и продуктов их кислотного гидролиза и щелочной деструкции агликонов, УФ-спектроскопии с ком-шгексообразующими и ионизирующими добавками, а также с помощью бумажной и тонкослойной хроматографии с достоверными свидетелями и последующей проявкой специфическими хромогенными реактивами. Для идентификации гликозидов проводили кислотный гидролиз в мягких условиях кислотой уксусной 15%. Сахарную часть обнаруживали анилинфталатным реактивом.

Щелочное расщепление агликонов осуществляли 20% водным раствором калия гидроксида. Продукты расщепления на хроматограммах проявляли кислотой сульфаниловой и бромфеноловым синим.

Окончательным выводом о подлинности выделенного вещества служило отсутствие депрессии температуры плавления в пробе смешения идентифицируемого компонента с истинным образцом свидетелем.

Вещество Ф1 - жёлтые кристаллы, даёт положительную цианидиновую пробу по Брианту, что говорит об агликоновой природе вещества, 1,ш - 350 -353 °С (спирт этиловый), Как- 268, 294^, 336 нм, при щелочном расщеплении образуются флороглюцин и кислота п-оксибензойная. По результатам проведённых исследований вещество идентифицировано как апигенин (5,7,4' тригидроксифлавон).

Вещество Фц - жёлтые кристаллы, ^ - 220 - 222 °С (спирт этиловый), даёт положительную цианидиновую реакцию, продукт которой не переходит в спирт октановый (гликозид), проба с циркония (III) оксихлоридом в присутствии кислоты лимонной отрицательная, что говорит о замещении гидроксила в положении Сз. 258, 356 нм. При добавлении диагностирующих добавок (натрия ацетат и натрия этилат), наблюдался батохромный сдвиг обоих полос

поглощения, что говорит о свободных оксигруппах при Cs, С7, Сз , Су . При кислотном гидролизе (15% СН3СООН, 2 часа) образуются кверцетин и D-глюкоза. При щелочном расщеплении агликона обнаруживались флороглюцин и кислота протокагеховая. Проведённые исследования, а также отсутствие депрессии t™ смешанных проб с достоверным образцом, позволили утверждать, что исследуемое вещество - кверцетин-3-глюкозид.

Вещество Фш - жёлтые кристаллы, t™ - 178 -180 °С (спирт этиловый), даёт положительную цианидиновую пробу, А™ах: 268, 336 нм, данные УФ-спектров с диагностирующими добавками указывают на свободные гидрокси-группы в положениях С5 и С4 Под влиянием натрия ацетата не наблюдалось батохромного сдвига максимумов, что указывает на отсутствие свободной -ОН группы в положении С7. При кислотном гидролизе (15% СН3СООН, 4 часа) обнаруживался агликон апигенин и D-глюкоза. Таким образом, вещество Фш идентифицировано как апигенин-7-глюкозид (космозиин).

Вешество <t>IV - светло-жёлтые кристаллы, t,u - 145 - 198 °С (спирт этиловый), даёт положительную цианидиновую пробу, Хт»: 259, 266[Ц1, 299гл., 359, при добавлении диагностирующих добавок, наблюдался батохромный сдвиг I полосы поглощения (натрия ацетата +25 нм, кислоты борной и натрия ацетата безводного +28 нм, алюминия хлорида +45 нм), что говорит о свободных -ОН группах при С7, Cs, Сз , С4. Батохромный сдвиг при добавлении алюминия хлорида с кислотой хлористоводородной понижался (+30 нм), что указывает на свободную гидроксигруппу при Cs и замещении при С3. При гидролизе в мягких условиях (15% СН3СООН, 30 минут), получили агликон кверцетин и дисахарид рутинозу. Проба смешения Фгу с достоверным образцом не давала депрессии t^ в связи с чем, вещество идентифицировано как кверцетин-3-руткнозид (рутин).

Вещество Фу - жёлтые кристаллы, t„, - 233-235 °С (спирт этиловый), даёт положительную цианидиновую пробу, и реакцию со стронция хлоридом, что указывает на наличие орто-диоксигруппировки в 5-м и 6-м положениях.

Хью- 285, 339. УФ-спектр с диагностирующими добавками показывает отсутствие свободной -ОН группы в 7-м положении (отсутствие батохромного сдвига с натрия ацетатом) и наличие свободных гидроксигрупп в положениях 5 и 4'. При гидролизе (10% Н2804, 3 часа), получили агликон скутелляреин и глюкозу. Таким образом, вещество идентифицировано как скутелляреин-7-глюкозид.

Вещество ФУ1 - светло-желтые кристаллы, ^ - 183-185 °С (спирт этиловый), даёт положительную цианидиновую пробу, продукт не переходит в спирт октиловый (гликозид), проба с циркония (III) оксихлоридом в присутствии кислоты лимонной отрицательная, что даёт информацию о замещении гид-роксила в положении С3. Кж' 256, 350 нм, при добавлении диагностирующих добавок (натрия ацетат и натрия этилат), наблюдался батохромный сдвиг обоих полос поглощения, что подтверждает присутствие свободных -ОН групп при С5, С7, С3', С7" При кислотном гидролизе (15% СН3СООН, 2 часа) образуются кверцетин и Ь-рамноза. При щелочном расщеплении агликона обнаруживались флороглюцин и кислота протокатеховая. Проведённые исследования, а также отсутствие депрессии ^ пробы смешения с достоверным образцом, позволили утверждать, что исследуемое вещество - кверцитрин (кверцетин-3-рамнозид).

Катехины выделяли по методике Запромётова. Хроматографированием в тонком слое силикагеля на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей спирт бутиловый - кислота уксусная ледяная - вода (40:12:28) обнаружено присутствие катехинов, которые предварительно идентифицированы как (+) ка-техин и (-) эпикатехин. Кроме того, в плодах и хвое м. длиннохвойного обнаружены конденсированные дубильные вещества.

Выделение и идентификацию полисахаридов м длиннохвойного проводили известными методиками, описанными в литературе. Моносахаридный состав фракций полисахаридов устанавливали после кислотного гидролиза. Во фракции ВРПС плодов м. длиннохвойного обнаружены - глюкоза, ксилоза и арабино-за, во фракции ПВ - арабиноза, глюкоза, ксилоза и мальтоза, в ГЦ А -глюкоза и ксилоза. Во фракции ВРПС хвои м. длиннохвойного идентифицированы - глю-

коза, ксилоза и арабиноза, ПВ - глюкоза, галактоза и ксилоза и в ГЦ А - ксилоза, мальтоза и глюкоза.

Высокоэффективной жидкостной хроматографией в плодах и хвое м. длин-нохвойного установлен качественный состав аминокислот. Наибольшее содержание отмечено для глютаминовой, аспарагиновой кислот и аргинина.

Элементный состав плодов и хвои м длиннохвойного определён атомно-абсорбционным методом после озоления проб. Установлено, что преобладающими элементами являются калий, кальций и фосфор.

Содержание эфирного масла в сырье определяли путём гидродистилляции по методу 2 Гф XI издания с последующим измерением объёма эфирных масла, смолистых веществ и полисахаридов - гравиметрически, флавоноидов в пересчёте на рутин - спектрофотометрически, органических кислот и дубильных веществ - титриметрическим методом.

Результаты количественного определения биологически активных веществ (%) в сырье представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Содержание БАВ (%) в изучаемых объектах

Группа БАВ Плоды м длиннохвойного Хвоя м длиннохвойного Хвоя м. казацкого

Эфирное масло 2,14±0,022 1,02±0,033 3,0±0,027

Смолистые вещества 13,9±0,07 7,1±0,053 8,1±0,014

Флавоноиды 0,91±0,0025 1,406±0,006 2,13±0,036

Дубильные вещества 6,27±0,07 7,05±0,03 8,3±0,076

Органические кислоты 1,075±0,033 0,8±0,003 1,1±0,043

Аминокислоты 3,0±0,021 2,1±0,034 *

Полисахариды 5,74±о,01 4,81 ±0,025 ♦

Микроэлементы 3,3*0,01 1,0±0,032 *

* - количественное содержание не определялось

3. Исследования по стандартизации плодов м. длиннохвойного С целью стандартизации плодов м. длиннохвойного, были проведены их

морфолого-анатомические исследования, позволившие выявить основные

диагностические элементы: клетки эпидермы покрыты слоем кутикулы, округ-ломногоугольные с сильно утолщёнными стенками, пронизаны множеством плазмодесм. Под однорядной эпидермой залегают два ряда клеток гиподермы, которые крупнее эпидермальных. В паренхиме расположены идиобласты -крупные клетки с толстыми стенками и вместилища с эфирным маслом, округлой формы, разного диаметра, схизолизигенного типа, с 2 - 3 слоями выстилающих клеток. Кожура семени состоит из толстостенных каменистых клеток. Эпидерма однорядная, под которой расположены толстостенные паренхимные клетки. С внутренней стороны к каменистым клеткам примыкает спавшаяся ткань. Клетки эндосперма содержат алейроновые зёрна и жирное масло.

Рисунок I - Эпидерма плода

1 - клетка эпидермы; 2 - плазмодесма

Рисунок 2 - Строение плода 1 - кутикула; 2- эпидерма; 3 - гиподерма; 4 - клетка паренхимы; 5 - эфиромасличное вместилище

Рисунок 3 - Идиобласты Рисунок 4 - Эфиромасличное

1 - клетки паренхимы; 2 • идиобласты вместилище

В препарате порошка плодов установлены в качестве диагностических элементов: каменистые клетки, округлой или 5-6-угольной формы, клетки эпидермы околоплодника с бурым содержимым, клетки эндосперма и зародыша с каплями жирного масла и алейроновыми зёрнами.

Результаты выявленных макро- и микроскопических признаков плодов м. длиннохвойного сравнивали с таковыми сырья м. обыкновенного. Принципиального различия в их основных диагностических признаках не было обнаружено.

Кроме того, с целью стандартизации определены числовые показатели цельного и порошкованного сырья м. длиннохвойного в сравнении с плодами м. обыкновенного. Результаты определения числовых показателей плодов м. длиннохвойного им. обыкновенного представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Результаты определения общих числовых показателей плодов м. длиннохвойного и м. обыкновенного

Показатель Плоды м. длиннохвойн ого Порошок Плоды м. обыкновенного Порошок

Содержание эфирного масла, % 2,14±0,022 1,96±0,012 1,5+0,017 1,2+0,031

Содержание фла-воноидов, % 0,91*0,0025 0,87+0,063 0,82+0,0012 0,78+0,07

Влажность, % 7,6±0,035 8,63+0,012 8,1+0,021 9,2+0,027

Зола общая, % 3,3±0,037 3,31 ±0,041 3,0+0,01 3,0+0,02

Зола, нерастворимая в 10% HCl, % 0,86±0,012 0,85±0,032 0,76+0,021 0,76+0,01

Побуревших плодов, % 2,3±0,04 - 5,3+0,014

Зелёных плодов, % 0,116+0,045 - 0,6±0,027

Органических примесей, % 0,246+0,02 • 0,35±о,09 -

Минеральных примесей, % 0,108±0,023 О,5±0,02

Частиц, не проходящих через сито с отверстиями 1,0 мм - 2,36±0,036 - 3,8+0,042

Таким образом, установлены общие числовые показатели плодов м. длин-нохвойного и м обыкновенного', содержание эфирного масла не менее 1,0%, содержание флавоноидов не менее 0,5%, потеря в массе при высушивании (влажность) - не более 20%, золы общей не более 5,0%, золы, нерастворимой в 10%-ном растворе кислоты хлористоводородной не более 1,0%, количества побуревших плодов не более 6%, органических примесей не более 1,0%, минеральных примесей не более 0,5%, частиц, не проходящих через сито с отверстиями 1,0 мм не более 5,0%.

Испытания микробиологической чистоты изучаемого сырья проводили в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 2, с. 193 и изменениями №3 «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» (категория 4 а). Исследованные образцы соответствовали предъявляемым требованиям НД.

4. Разработка, анализ и фармакологические испытания экстракта из плодов можжевельника

На основе плодов можжевельника нами предложен лекарственный препарат в виде жидкого спиртового экстракта.

С целью стандартизации сырья были установлены следующие нормы качества на плоды можжевельника:

- содержание экстрактивных веществ, извлекаемых спиртом этиловым 70%, не менее 26,0%;

- влажность, не более 20,0%;

- общая зола, не более 5,0%;

- содержание флавоноидов, не менее 0,5%.

Для теоретического обоснования оптимальных условий проведения экстракции, расчёта эффективности процесса, прогнозирования и нормирования качества жидкого экстракта, нами были экспериментально определены технологические показатели сырья:

у — насыпная масса сырья, см3/г - мера объёма, занимаемая единицей массы измельчённого сырья. Используется для определения массы сырья, вмещающейся в диффузор определённой ёмкости.

Г - коэффициент наполнения сухого сырья, см3/г - мера объёма экстрагента, находящегося между частицами единицы массы сухого сырья. Используется для расчёта высоты уровня экстрагента над сырьём в диффузоре.

У - отношение фаз (см3/г) или коэффициент готовой продукции. Обозначает меру объёма внешнего сока.

К - коэффициент образования внутреннего сока см3/г. Мера объёма жидкости, образующейся в единице массы сырья при растворении влаги и экстрактивных веществ в экстрагенте. Использовали при расчётах эффективности экстрагирования.

Кп - коэффициент поглощения сырья, см3/г. Мера объёма экстрагента, поглощаемого единицей массы сырья. Использовали для расчёта объёма экстрагента, вводимого в диффузор.

Ъ - коэффициент увеличения объёма экстрагента при растворении экстрактивных веществ, см/г. Мера увеличения объёма экстрагента при растворении в нём единицы массы экстрактивных веществ. Используется при расчёте норм качества препарата.

Результаты определения технологических характеристик плодов можжевельника представлены в таблице 6.

Таблица 6 - Технологические характеристики плодов можжевельника

№ серии у, см/г {, см3/г К„, см3/г К, см3/г У, см7г Ъ, см3/г

1 0,37 1,8 1,75 1,7 1,187 0,77

2 0,41 1,6 1,73 1,69 1,185 0,78

3 0,40 1,66 1,77 1,71 1,188 0,75

4 0,39 1,71 1,75 1,7 1,188 0,76

5 0,37 1,8 1,75 1,68 1,184 0,78

£ X = 0,39 Х= 1,71 X = 1,75 X = 1,7 Х= 1,186 X = 0,77

Полученное значение коэффициента сьема готовой продукции 1,186 см3/г позволяет рекомендовать проводить экстракцию при соотношении фаз 1:1. Используя полученные технологические характеристики сырья, провели поиск оптимального соотношения фаз и числа диффузоров в батарее, которое обеспечило бы максимальную эффективность экстрагирования. В результате проведённых исследований выявлено, что наиболее интенсивно эффективность экстракции возрастает при увеличении числа диффузоров от 3-х до 6-и.

Таким образом, рассчитанные технологические показатели позволили сделать заключение о том, что наиболее целесообразным для получения экстракта плодов можжевельника является реперколяция с завершённым циклом в батарее из 6 перколяторов.

Экстрагирование плодов можжевельника проводили по принципу противотока. Полученный продукт - экстракт жидкий (1:1) собирали в сборник, отстаивали в холодном месте при температуре 8 - 10 TU в течение 2-х суток, фильтровали через пресс-фильтр в резервуар для хранения экстракта. Затем проводили стандартизацию полученного экстракта.

На основании проведённых исследований установлены следующие нормы качества для экстракта плодов можжевельника: плотность - не менее 0,942; сухой остаток - не менее 14,9%; содержание спирта - не менее 65,0%; содержание суммы флавоноидов - не менее 0,5%.

Для фармакологических испытаний использовали экстракт плодов можжевельника и водный настой плодов м длиннохвойного полученный по классической методике изготовления настоев, регламентированной ГФ XI издания.

Изучение острой токсичности полученных лекарственных форм проводили по показателю летальности животных, а также двигательной активности, наличию судорог, координации движений, реакций на раздражители, тонуса скелетной мускулатуры, состоянию кожного покрова, шерсти и окраски видимых слизистых оболочек, потреблению воды и пищи, массе тела животных.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что введение внутрь настоя и экстракта в концентрациях 25 мг/кг не вызывало патолого-анатомических изменений и не оказывало повреждающего действия на жизненно важные системы организма.

Диуретическая активность экстракта плодов можжевельника и настоя плодов м. длиннохвойного изучалась при однократном внутрижелудочном введении животным, в качестве препарата сравнения использован настой плодов м. обыкновенного. Настой вводили в объеме 4 мл на 1 кг массы тела животного. Экстракт жидкий вводили в объеме 8 капель на 1 кг массы тела животного. Результаты определения диуретической активности представлены на рисунке 5.

Контроль Настой плодов Настой плодов Экстракт плодов

(физиологический можжевельника можжевельника можжевельника

раствор) обыкновенного длиннохвойного

(препарат сравнения)

Рисунок 5 - Оценка диуретической активности экстракта плодов можжевельника и настоя плодов м длиннохвойного

Таким образом, диуретическое действие настоев плодов м. длиннохвойного и м обыкновенного близко сопоставимо, тогда как активность экстракта плодов оказалась значительно выше активности настоев.

Выводы

1. Установлены места произрастания и определены ресурсные возможности изучаемых растений. Объём возможных заготовок в обследованных районах плодов м. длыннохвойного составил — 8,87±1,88 т, хвои м. длиннохвойного -7,37±0,31 т, хвои м. казацкого - 13,0±1,54 т воздушно-сухого сырья, что позволит решить проблемы обеспечения ценным лекарственным растительным сырьём потребности практической медицины.

2. Впервые идентифицированы и количественно определены основные биологически активные вещества плодов и хвои м длиннохвойного: эфирные масла (плоды 2,14±0,022%, хвоя 1,02±0,038%), смолы (плоды 13,9±0,07%, хвоя 7,1±0,053%), флавоноиды (плоды 0,91 ±0,007%, хвоя 1,406±0,006%), дубильные вещества (плоды 6,27±1,1%, хвоя 7,05±0,45%), полисахариды (плоды 5,74±0,01%, хвоя 4,81±0,025%), органические кислоты (плоды 1,075±3,1%, хвоя 0,8±0,37%), аминокислоты (плоды 3,0±0,021%, хвоя 2,1±0,034%) и микроэлементы (плоды 3,3±0,01%, хвоя 1,0±0,032%). В хвое м. казацкого идентифицированы флавоноиды (2,13±0,036%) и лигнаны (0,05±0,03%).

3. Определены технологические показатели сырья и оптимальные условия технологии экстракта из плодов можжевельника Показано, что наилучшим экст-рагентом является спирт этиловый 70%, а экстракцию целесообразно проводить в соотношениях 1:1.

4. Установлены морфолого-анатомические признаки плодов м. длиннохвойного и показатели качества плодов и экстракта можжевельника с целью их стандартизации.

5. Изучение диуретического действия настоя плодов м. длиннохвойного показало сопоставимость с настоем плодов м. обыкновенного. Активность экстракта оказалась значительно выше таковой у настоев, что позволяет рекомендовать его для дальнейших клинических испытаний в качестве диуретического средства.

6. На основании проведённых комплексных исследований разработан проект

ФС ■.(Можжевельника плоды - Juniperi fructus» и «Инструкция по сбору и сушке

шишкоягод можжевельника длиннохвойного».

По материалам исследований опубликованы следующие работы:

1. Некоторые итоги изучения лекарственных растений, дикорастущих и культивируемых на Северном Кавказе / О.Н. Денисенко, Д.И. Писарев, Л.В. Че-лова [и др.] // Человек и лекарство: тез. докл. 9 Рос. нац. контр. 8-12 апр. 2002.-М., 2002.-С. 608.

2. Писарев, Д.И. Запасы плодов Juníperas oblonga Bieb. на Северном Кавказе / Д.И. Писарев, О.Н. Денисенко, В.Б. Ушаков // Современные проблемы фармакологии и фармации: материалы всерос. науч.-пракг. конф. 18-19 мая. 2005. - Новосибирск, 2002. - С. 329 - 332.

3. Писарев, Д.И. Состав фенольных соединений шишкоягод можжевельника длиннохвойного - Juniperus oblonga Bieb. / Д.И. Писарев. О.Н. Денисенко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармац. продукции: Сб. науч. тр. - Пятигорск. 2005. - С. 46 - 47.

4. Писарев, Д.И. Состав эфирных масел хвои и плодов можжевельника длиннохвойного / Д.И. Писарев, О.Н. Денисенко // Фармация. - 2005. - №1. - С. 12-14.

5. Писарев, Д.И. Фотохимическое изучение хвои можжевельника длиннохвойного (Juniperus oblonga Bieb.) флоры Северного Кавказа / Д.И. Писарев, О.Н. Денисенко, В.Б. Ушаков // Регион конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002: Пятигорск): Материалы... - Пятигорск. 2002. - С. 26-27.

6. Писарев, Д.И. Фитохимическое изучение хвои можжевельника казацкого / Д.И. Писарев, О.Н. Денисенко, В.Б. Ушаков // Регион конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): Материалы...-Пятигорск. 2001. - С. 35 - 36.

7. Писарев, Д.И. Фитохимическое изучение шишкоягод можжевельника длин-нохвойного - Juniperus oblonga Bieb. / Д.И. Писарев, О.Н. Денисенко, В.Б. Ушаков // Разработка, исследование и маркетинг новой фармац. продукции: Сб. науч. тр. - Пятигорск. 2004. - С. 43 - 44.

8. Писарев, Д.И. Химическое изучение шишкоягод можжевельника длинно-хвойного - Juniperus oblonga Bieb. флоры Северного Кавказа / Д.И. Писарев, О.Н. Денисенко, В.Б. Ушаков // Регион конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (58; 2003; Пятигорск): Материалы...-Пятигорск. 2003. -С. 74-75.

№2 2 19 5

ПИСАРЕВ ДМИТРИЙ ИВАНОВИЧ

Ч

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ МОЖЖЕВЕЛЬНИКА ДЛИННОХВОЙНОГО И МОЖЖЕВЕЛЬНИКА КАЗАЦКОГО

Подписано к печати «8» ноября 2005 г. Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» 357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Актуальность темы. В последние годы неизмеримо возросла актуальность лечения лекарственными растениями и лекарственными препаратами на их основе. Это в первую очередь обусловлено ростом токсико-аллергических заболеваний, терапевтических неудач от применения синтетических лекарственных средств. Многовековые традиции и опыт народной медицины убедительно доказывают целесообразность применения лекарственных растений при профилактике, поддерживающей или курсовой терапии ряда заболеваний. Народная медицина использует огромное количество лекарственных растений, значительная часть которых при надлежащем уровне их химической и фармакологической изученности могут применяться официально. К числу подобных растений относятся представители рода можжевельник.

Отечественная научная медицина ограничивается использованием плодов можжевельника обыкновенного, которые применяются при ряде заболеваний сердечно-сосудистой, мочевыделительной, дыхательной систем, а также входят в состав некоторых мочегонных сборов, в том числе по прописи Здренко. В настоящее время наша страна испытывает дефицит в этом ценном сырье, так как основные промысловые районы можжевельника на территории бывшего СССР остались в Беларуси и Украине. Решить данную проблему позволяет привлечение потенциала других видов можжевельников. В частности, на Кавказе произрастает очень близкий в систематическом отношении вид — можжевельник длиннохвойный - Juniperus oblonga Bieb. Здесь это растение широко распространено и образует обширные заросли. Сведения о химическом составе и фармакологических свойствах м. длиннохвойного весьма ограничены, хотя его плоды и хвоя успешно применяются в народной медицине, подобно м. обыкновенному. В связи с этим необходимость обеспечения сырьевой базы ценным видом сырья за счёт мало изученного м. длиннохвойного нам представляется весьма целесообразной.

Перспективным растением из рода Juniperus L. является и можжевельник казацкий. Хвоя этого вида используется в народной медицине как трихомона-цидное, цитостатическое, противовирусное средство, несмотря на известную токсичность растения. Такие ценные терапевтические эффекты связаны с наличием в нём лигнанов, производных 1 -фенилтетрагидронафталина и флавонои-дов. Кавказская популяция м. казацкого в этом направлении не была изучена.

Таким образом, обеспечение ценным сырьём отечественной медицины за счёт м. длиннохвойного и установление перспективности кавказской популяции м. казацкого является, несомненно, актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - научное обоснование возможности обеспечения сырьевой базы лекарственных растений за счёт ранее мало изученных видов рода можжевельник, произрастающих на Северном Кавказе.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи.

1. Провести исследования по установлению мест произрастания и определению ресурсных возможностей исследуемых видов.

2. Изучить химический состав основных групп биологически активных веществ объектов исследования.

3. Установить основные морфолого-анатомические диагностические признаки и товароведческие показатели сырья.

4. Разработать НД на плоды можжевельника длиннохвойного и можжевельника обыкновенного.

5. Выявить оптимальные условия получения экстракта из плодов можжевельника и его фармакологическую активность.

Научная новизна. Впервые определены районы наибольшего распространения м. длиннохвойного и м. казацкого на территории Северного Кавказа и их сырьевые возможности. Установлен химический состав основных групп биологически активных веществ м. длиннохвойного и состав лигнанов и флавоноидов м. казацкого. Изучены основные компоненты эфирных масел плодов и хвои м. длиннохвойного. Установлено, что главными компонентами являются: а-пинен, сабинен, (3-мирцен, гермакрен D, терпинен-4-ол. Определён состав смолистых веществ м. длиннохвойного, впервые в плодах этого вида обнаружены: пимаро-вая, кауреновая, дегидроабиетиновая кислоты и дегидроабиетан, в хвое - пима-ровая кислота и 7-кетоферругинол; из фенольных соединений в плодах и хвое м. длиннохвойного идентифицированы: дезоксиподофиллотоксин, апигенин, апигенин-7-глюкозид, изокверцитрин, рутин, скутелляреин-7-глюкозид, умбел-лиферон, (+)-катехин, (-)-эпикатехин, дубильные вещества конденсированного типа. Изучены полисахариды по фракциям: водорастворимые полисахариды (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ) и гемицеллюлоза (ГЦ) и установлен аминокислотный и микроэлементный состав м. длиннохвойного. Также обнаружены яблочная кислота и фруктоза в свободном виде.

Установлена близость химического состава и фармакологической активности плодов м. длиннохвойного и м. обыкновенного, что позволяет рекомендовать плоды м. длиннохвойного в качестве нового сырьевого источника ценного лекарственного растительного сырья - плоды можжевельника.

Предложены критерии оценки качества и идентификации плодов м. длиннохвойного по его основным морфологическим и анатомическим диагностическим признакам.

Результаты химического изучения свидетельствуют о перспективности хвои м. длиннохвойного, богатой эфирными маслами и полифенольными соединениями, для дальнейшего внедрения этого вида сырья в практическую медицину.

Впервые в хвое м. казацкого идентифицированы лигнаны: дезоксиподофиллотоксин, дезоксиподоризон и дезоксиизоподофиллотоксин, что свидетельствует о несомненной перспективности данного вида как источника этих соединений с цитостатической и противовирусной активностью.

На основе плодов можжевельника разработан жидкий спиртовый экстракт. Определены нормы качества экстракта и установлена диуретическая активность.

Практическая значимость. В результате проведённых ресурсных исследований определены запасы и установлены объёмы заготовок сырья м. длинно-хвойного и м. казацкого в районах наибольшего их распространения на Северном Кавказе. Показана возможность обеспечения практической медицины ценным лекарственным сырьём - плодами можжевельника за счёт близких по химическому составу и фармакологической активности плодов м. длиннохвойного и м. обыкновенного. На основании ресурсных, химических, морфолого-анатомических и фармакологических исследований разработан проект ФС «Можжевельника плоды - Juniperi fructus». Получен экстракт плодов можжевельника, проведена его стандартизация. Установлено диуретическое действие экстракта плодов можжевельника, значительно превышающее активность их настоев, что позволяет рекомендовать его для дальнейших клинических испытаний в качестве эффективного диуретического средства.

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности использования плодов м. длиннохвойного наряду с плодами м. обыкновенного, а также в качестве сырья для производства экстракта плодов можжевельника.

Внедрение результатов исследования. Проект ФС на плоды можжевельника, находится на экспертизе в Институте стандартизации лекарственных средств ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора (письмо №1281 от 19.04.2005 г.), «Инструкция по сбору и сушке шишкоягод можжевельника длиннохвойного», утвержденная Всероссийским институтом лекарственных и ароматических растений (Москва, ВИЛАР, протокол №3 от 01.04.2005 г.).

Апробация полученных результатов. Основные результаты исследования доложены на научных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии (2001 - 2005 гг.).

По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

Основные положения, выносимые на защиту.

- итоги ресурсных исследований плодов, хвои м. длиннохвойного и хвои м. казацкого\

- результаты исследования химического состава биологически активных веществ м. длиннохвойного и м. казацкого флоры Северного Кавказа;

- основное содержание ФС «Можжевельника плоды - Juniperi fructus»;

- условия получения экстракта из плодов можжевельника жидкого (1:1) в качестве диуретического средства.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01200112164) в рамках проблемы «Фармация» секция №38 Учёного совета МЗСР РФ.

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка литературы и приложений; иллюстрирована 32 рисунками и 35 таблицами. Список литературы включает 145 источников, в том числе 17 - на иностранных языках.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Установлены места произрастания и определены ресурсные возможности изучаемых растений. Объём возможных заготовок в обследованных районах плодов м. длиннохвойного составил - 8,87±1,88 т, хвои м. длиннохвойного -7,37±0,31 т, хвои м. казацкого — 13,0±1,54 т воздушно-сухого сырья, что позволит решить проблемы обеспечения ценным лекарственным растительным сырьём потребности практической медицины.

2. Впервые идентифицированы и количественно определены основные биологически активные вещества плодов и хвои м. длиннохвойного: эфирные масла (плоды 2,14±0,022%, хвоя 1,02±0,038%), смолы (плоды 13,9±0,07%, хвоя 7,1±0,053%), флавоноиды (плоды 0,91±0,007%, хвоя 1,406±0,006%), дубильные вещества (плоды 6,27±1,1%, хвоя 7,05±0,45%), полисахариды (плоды 5,74±0,01%, хвоя 4,81±0,025%), органические кислоты (плоды 1,075±3,1%, хвоя 0,8±0,37%), аминокислоты (плоды 3,0±0,021%, хвоя 2,1±0,034%) и микроэлементы (плоды 3,3±0,01%, хвоя 1,0±0,032%). В хвое м. казацкого идентифицированы флавоноиды (2,13±0,036%) и лигнаны (0,05±0,03%).

3. Определены технологические показатели сырья и оптимальные условия технологии экстракта из плодов можжевельника. Показано, что наилучшим экст-рагентом является спирт этиловый 70%, а экстракцию целесообразно проводить в соотношениях 1:1.

4. Установлены морфолого-анатомические признаки плодов м. длиннохвойного и показатели качества плодов и экстракта можжевельника с целью их стандартизации.

5. Изучение диуретического действия настоя плодов м. длиннохвойного показало сопоставимость с настоем плодов м. обыкновенного. Активность экстракта оказалась значительно выше таковой у настоев, что позволяет рекомендовать его для дальнейших клинических испытаний в качестве диуретического средства.

6. На основании проведённых комплексных исследований разработан проект ФС «Можжевельника плоды - Juniperi fructus» и «Инструкция по сбору и сушке шишкоягод можжевельника длиннохвойного».

135