Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование Artemisia pontica L. флоры Сибири

На правах рукописи

МАКАРОВА ДАРЬЯ ЛЕОНИДОВНА

Фармакогностическое исследование Artemisia pontica L. флоры Сибири

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь - 2009

003464941

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здраьоохрааению и социальном; развитию»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Ханина Миниса Абдуллаевна Научный консультант:

доктор химических наук, профессор Ткачев Алексей Васильевич

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор

Фурса Николай Сергеевич, заведующий кафедрой фармакогнозии ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

кандидат фармацевтических наук, доцент

Белоногова Валентина Дмитриевна, заведующая кафедрой фармакогнозии ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертационной работы состоится «21» апреля 2009 г. в 13.00 на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614070, г, Пермь, ул. Крупской, д. 46.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте ПГФА http://www.psfa.ru 21 марта 2009 года. Автореферат разослан «_»_200_г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук, доцент

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Поиск новых эффективных средств лекарственной терапии является одной из важных задач отечественного здравоохранения. Особенно это касается сложных по своим патогенетическим механизмам заболеваний, в лечении которых фармакологические препараты занимают одно из ведущих мест.

Несмотря на крупные достижения органической синтетической химии в области лекарственных средств, растения продолжают оставаться важным источником получения биологически активных веществ.

Широкий спектр терапевтического действия (противовоспалительное, ранозаживляющее, бактерицидное, rip оти во астм ат и ч с скос, анальгетическое) и высокая активность природных азуленов издавна привлекают к ним интерес исследователей.

Промышленный синтез хамазулена экономически невыгоден и связан с использованием токсичных исходных продуктов, поэтому растения являются единственным источником его получения. В этом плане представляют интерес растения, содержащие в своем составе хамазулен: ромашка аптечная, тысячелистник обыкновенный и некоторые виды полыней (Artemisia pontica, А. jacutica). Chamomilla recutita содержит эфирное масло от следовых количеств до 1,90 %, в составе которого обнаружено до 12 % хамазулена. A. jacutica, содержащая до 2 % эфирного масла и до 47 % хамазулена в его составе, является восточносибирским эндемиком с весьма ираниченным ареалом, для Achillea millefolium и A. asiatica характерно наличие бесхамазуленовых рас. A. pontica накапливает 0,6 - 1,8 % эфирного масла, в составе которого обнаруживается до 18 % хамазулена, характеризуется устойчивостью состава эфирного масла и отнесена к группе перспективных видов. A. pontica имеет широкий ареал: распространена в европейской части России, Западной Сибири, Средней Азии, Прибалтике, на Кавказе. Кроме того, она широко культивируется в Европейских странах как пряно ароматическое растение. До настоящего времени не было проведено детального исследования A. pontica как перспективного источника эфирного масла, содержащего хамазулен. Таким образом, всестороннее изучение A. pontica для обеспечения отечественной медицины ценным лекарственным сырьем является весьма актуальной проблемой.

Цель исследования. Проведение фармакогностического исследования Artemisia pontica L.

Задачи исследования:

1. Проведение сравнительного морфолого-анатомического исследования надземной части A. pontica по фазам развития и местам сбора (для выявления диагностических признаков сырья);

2. Проведение сравнительного фитохимического анализа надземной части A. pontica, естественных мест произрастания и выращенной в условиях интродукции;

3. Проведение сравнительного анализа качественного состава и количественного содержания эфирного масла в надземной части А. pontica, собранной в различных местах произрастания, по фазам

развития и отдельным органам растения, выявление оптимальных условий получения эфирного масла;

4. Проведение фотохимического анализа для выявления влияния эколого-ценотических факторов, фаз развития растения на динамику накопления БАВ в траве А. ропИса\

5. Установление возможности комплексной переработки сырья и использования шрота А. ропИса;

6. Определение товароведческих показателей сырья А. ропНса-,

7. Разработка проекта фармакопейной статьи «А. ропИса ЪегЪа».

Научная новизна: Впервые проведен сравнительный фармакогностический

анализ А. ропИса, собранной в естественных местах произрастания из разных точек ареала и выращенной в условиях интродукции, по фазам развития и органам.

Проведен сравнительный микроскопический анализ образцов сырья, собранных из разных точек ареала по фазам развития. Выявлены микродиагностические признаки надземной части А. ропНса.

Проанализировано 55 образцов эфирных масел. Детально изучен химический состав эфирного масла в зависимости от места произрастания растения, фазы развития, типа органа, от времени хранения сырья (с целью установления его оптимального срока годности). Методом хромато-масе-спектрометрии в составе эфирного масла впервые идентифицированы такие компоненты как: 2-сальвен, сантолинатриен, трициклен, 2,3-дегидро-1,8-цинеол, 2-пентилфуран, а-фелландрен, р-фелландрен, сантолиновый спирт, п-цименеи, линалоол, дегидросабинакетон, цис-сабинол, сабинакетон, 5-терпинеол, туйеналъ, м-цимен-8-ол, 5-изопропил-бицикло[3.1.0]-гекс-2-ен-2-метанол, г/ис-пиперитол, тяранс-пиперитол; вербеной, транс-трвеоп, борнилформиат, куминовый спирт, тимол, транс- сабинилацетат, бициклогермакрен, пресильфиперфолаи-9-ол, изокариофиллен-оксид^ Е-неролидол, вульгарон А, вульгарон В, кариофилла-3,8(13)-диен-5а-ол, гермакратриенол, эвдссмадиенол.

Впервые детально изучен качественный состав и количественное содержание групп биологически активных веществ (флавоноидов, оксикоричных кислот, кумаринов, кислоты аскорбиновой, полисахаридов, дубильных веществ) в зависимости от места произрастания растения и фазы его развития.

Изучен компонентный состав фенольных соединений травы А. ропйса. Впервые в надземной части А. ропНса установлено наличие флавоноидов: рутина, кверцетина, апигенина, лютеолина; оксикоричных кислот: хлорогеновой, кофейной, м-оксикоричной.

Впервые определено содержание в траве фракций полисахаридов (водорастворимых, пектиновых веществ, гемицеллюлозы А и В).

Впервые изучен химический состав шрота А. ропйса. На основании полученных данных установлено, что после получения эфирного масла шрот представляет собой ценный источник таких БАВ как флавоноиды, кумарины, оксикоричные кислоты, полисахариды, дубильные вещества и может быть использован для получения комплексных препаратов.

Практическая, значимость. На основании проведенных фармакогпостическихисследований для медицинской практики предложен новый вид лекарственного растительного сырья.,

Результаты микроскопических и химических исследований использованы для разработки методик диагностики и определения качества сырья A. pontica и включены в проект фармакопейной статьи «Полыни понтийской трава». Материалы диссертации, использованы при составлении методического пособия «Микродиагностические признаки отдельных видов полыней, произрастающих на территории Новосибирской области (Artemisia absinthium L., A. sieversiana Willd., A. pontica L., A. vulgaris L.)v>.

Результаты фитохимического исследования шрота./!, pontica обосновывают его перспективность как дополнительного источника БАВ. На защиту выносятся:

• Результаты фитохимического исследования БАВ /). pontica,

• Исследования по изучению микродиагностических признаков травы полыни понтийской,

• Результаты фитохимического анализа шрота A. pontica,

• Данные по стандартизации травы полыни понтийской Апробация работы. Основные положения диссертационной работы

доложены и обсуждены на ежегодной конкурс-конференции студентов и молодых ученых «Авиценна» (г. Новосибирск, 2003, 2005, 2006), всероссийской 63-й итоговой студенческой конференции им. Н.И.Пирогова (г. Томск, 2004), 68-й всероссийской итоговой студенческой научно-практической конференции, посвященной 105-летию проф. Гливенко В.Ф. (г. Красноярск, 2004), 1-й студенческой научной конференции Сибирского Федерального округа «Качество жизни как критерий санитарно-эпидемиологического благополучия» (г. Омск, 2005), ежегодной международной экологической студенческой конференции «Экология России и сопредельных территорий. Экологический катализ» (г. Новосибирск, 2004, 2005), межвузовской научной студенческой конференции «Интеллектуальный потенциал Сибири» (г. Новосибирск, 2006), всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (г. Барнаул, 2007), 11-м международном съезде «Фитофарм» (Лейден, 2007), II международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (г. Алматы, 2007), научной конференции студентов и молодых ученых (г. Пермь, 2008), V Всероссийской научной конференции (г. Уфа, 2008).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры фармакогнозии и ботаники Новосибирского государственного медицинского университета (№ государственной регистрации 012000807420) и комплексной целевой программой СО АМН Российской федерации «Здоровье человека в Сибири» (№ государственной регистрации 01.9.2002479).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 29 печатных работ, из них 2 в изданиях, рекомендуемых ВАК, составлено и опубликовано методическое пособие для преподавателей и студентов: «Микродиагностические

признаки отдельных видов полыней, произрастающих на территории Новосибирской области (Artemisia absinthium L., A. sieversiana Willd., A. pontica L.,

A. vulgaris L.), получено 1 решение о выдаче патента РФ на изобретение. № (1 RU <21)2007140359.

Экспериментальные исследования по теме диссертации выполнены на

кафедре фармакогнозии и ботаники НГМУ, а также в сотрудничестве с коллективами других научных организаций: Новосибирского института органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН (лаборатория терпеновых соединений), г. Новосибирск; Института цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск); ЗАО Института хроматографии «ЭкоНова», Сибирского ботанического сада при Томском государственном университете, г. Томск. Сотрудникам данных подразделений и научных учреждений выражаем искреннюю признательность и благодарность. Особую признательность выражаем асп. Домрачеву Д.В., с.н.с. Алешиной Т.Е., к.х.н. Азаровой И.Н., к.б.н.

B.П.Амельченко.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Библиографический указатель включает 207 источников литературы, из которых 35 зарубежных. Работа иллюстрирована 64 рисунком и 56 таблицами.

Во введении обоснована актуальность ¡ ыбранной темы, сформулированы цель и задачи исследования, охарактеризованы научная новизна и практическая значимость работы.

В обзоре литературы (глава 1) приведена ботаническая характеристика А. pontica, ее применение в народной медицине, описана степень химической изученности. Показаны фармакологические свойства природных азуленов, описаны их возможные источники, приведена биологическая активность компонентов, входящих в состав эфирного масла A. pontica.

Вторая глава посвящена характеристике объектов и методов исследования.

В третьей главе приведены результаты морфо-анатомического исследования надземной части A. pontica, данные анализа качественного состава и количественного содержания биологически активных веществ надземной части А. pontica, собранной в естественных местах произрастания, в частности эфирного масла, оксикоричных кислот, флавоноидов, кумаринов, дубильных веществ, полисахаридов, кислоты аскорбиновой в зависимости от места произрастания растения, фазы развития, вида органа растения.

Четвертая глава посвящена микроскопическому и фитохимическому исследованию шрота A. pontica, остающегося после экстракции эфирного масла.

В пятой главе изложены результаты фармакогностического исследования А. pontica, выращенной в условиях интродукции

Шестая глава посвящена определению числовых показателей сырья А. pontica, собранной в естественных местах произрастания и выращенной в условиях интродукции.

В приложении представлении проект Фармакопейной статьи «Полыни понтийской трава» и акты внедрения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

Объектами исследования являются образцы гербаризированных растений и образцы надземной части растения A. pontica L., собранной из разных точек ареала (Новосибирская область, Каргатский район, 38 км от Каргата, окр. с. Усть-Сумы, Карасукский район, южнее села Хорошее, Алтайский край, Алейский район, окрестности р. Чистюнька, экспериментальные участки Сибирского ботанического сада при Томском государственном университете, г. Томск, экспериментальный участок в 3 км от с. Репьево, НСО) в период 2001-2007 гг. по фазам развития растения (фаза вегетации, бутонизации, цветения).

Качественное и количественное определение различных групп биологически активных веществ проводили с помощью общепринятых в фитохимическом анализе методов и современных методов исследования, в частности спектрофотометрии (СФ-56), БХ, ТСХ, ВЭЖХ, рефрактометрии, хромато-масс-спектрометрии.

Анагомо-морфологический анализ вегетативных и генеративных органов полыни проводили на свежем и высушенном материале по известным методикам. Микроскопические признаки сырья устанавливали на основании анатомического исследования стеблей, листьев, соцветий и цветков растения, для чего были приготовлены плоскостные и давленые препараты. Исследования проводились па микроскопах «Микмед» при увеличении в 70, 100, 150, 280, 400 и 600 раз. Рисунки выполняли на рисовальном аппарате РА-7, фотографии — с помощью микроскопа Acsio Vision и обрабатывали на компьютере в программе «Photoshop 8.0». Присутствие различных включений доказывали проведением общепринятых гистохимических реакций.

Для оценки качества сырья общепринятыми фармакопейными методиками определяли основные числовые показатели.

Статистическую обработку полученных результатов проводили общепринятым методом с определением средней арифметической (X) и ошибки средней арифметической (м). Достоверность результатов оценивали параметрически по t-критерию Стьюдента.

Микроскопический анализ надземной части А. pontica

Для установления подлинности сырья нами было проведено его морфо-анатомическое исследование, позволившее выявить основные диагностические признаки. Установлено, что эпидерма листа извилистостенная со складчатой кутикулой, устьица аномоцитные, погруженные, расположены только на нижней стороне листа. Листья густо опушены Т-образными волосками, состоящими из 2-3-клеточной ножки и длинной поперечной клетки с зауженными концами. Для надземной части А. pontica характерно наличие трех типов терпеноидсодержащих структур: неспециализированных паренхимных клеток с эфирным маслом, схизогенных вместилищ и эфирно-масличных железок. Наружные листочки обертки корзинок травянистые, опушенные, внутренние - с широким пленчатым

краем, неопушенные, с эфирно-маслич;;ыми железками и схизогенными вместилищами с эфирным маслом в центре листочка. На эпидерме венчиков пестичных и обоеполых цветков обнаружено большое количество эфирномасличных железок, покрытых выраженным кутикулярным колпачком. Цветоложе голое, с большим числом крупных эфирно-масличных железок, которые выступают над поверхностью эпидермы, располагаются на высоком «постаменте».

Сравнительный микроскопический анализ показал, что выявленные диагностические признаки характерны для всех исследуемых образцов А. ропИса, независимо от места их произрастания и фазы развития, поэтому могут использоваться для установления подлинности как дикорастущего, так и культивируемого сырья.

Анализ содержания эфирного масла в надземной части А. ропйса

А. рописа перспективна для практической медицины за счет содержания эфирного масла и хамазулена в его составе. Для установления сырьевой части растения проанализированы образцы эфирного масла из отдельных органов растения, с целью выявления оптимального времени сбора сырья -проанализированы образцы эфирных масел сырья, собранного по фазам развития (вегетация, бутонизация, цветение).

Образцы эфирного масла А. ропИса представляют собой легкие подвижные жидкости интенсивно синего цвета с характерным ароматным полынным запахом. Установлено, что из травы извлекается от 0,63 до 1,77 % эфирного масла в зависимости от фазы развития растения (табл. 1). Синтез компонентов эфирного масла начинается на самых ранних этапах развития растения и достигает максимума в фазу конец бутоиизации - начало цветения (до 1,77 %). Выявленная динамика в содержании эфирного масла сохраняется в растениях в течение ряда лет.

Таблица 1

Выход эфирного масла из надземной части А. ропи'са в зависимости от места произрастания и фазы развития растения (в % от массы абсолютно сухого сырья) ___

Номер образца Характеристика места сбора сырья, время сбора, фаза развития растений Содержание масла, %

1 Новосибирская область, Каргатский р-н, 38 км от г. Каргат, фаза вегетации, надземная часть, 11.08.06 0,94 ± 0,05

2 Там же, фаза бутонизации 1,77 ±0,08

3 Там же, фаза цветения 1,57 ±0,06

4 Новосибирская область, Каргатский р-н, окрестности с. Усть-Сумы, фаза вегетации, надземная часть, 11.08.06 0,63 ± 0,03

5 Там же, фаза бутонизации 1,34 ±0,06

6 Там же, фаза цветения 1,48 ±0,05

7 Алтайский край, Алейский р-н, берег р. Чистюнька, фаза вегетации, надземная часть, 20.08.06 0,66 ± 0,03

Продолжение таблицы 1

5 Там же, фаза бутонизации 1,22 ±0,05

) Там же, фаза цветения 1,28 ±0,04

Исследование динамики извлечения эфирного масла из надземной части А. роп^са в зависимости от длительности хранения сырья показало, что срок хранения сырья не должен превышать 3 года.

Среди органов растения максимальный выход эфирного масла характерен для соцветий (корзинки) г- до 4 %, несколько меньший отмечен из листьев и минимальный - из стеблей (табл. 2).

Таблица 2

Выход эфирного масла из надземных органов рош1са в зависимости от фазы развития растения (в % от массы абсолютно сухого сырья)

№ Место и дата сбора, фаза развития растения Стебель Листья Соцветия

1 НСО, Каргатский район, 38 км от г. Каргат, фаза вегетации, 11.08.06 0,03 ±0,01 0,75 ± 0,04

2 Там же, фаза бутонизации 0,04 ± 0,02 1,02 ±0,05 3,76 ±0,10

3 Там же, фаза цветения ■ 0,04 ± 0,02 0,99 ± 0,04 3,99 ±0,10

Исследование извлекающегося из надземной части A. pontica эфирного масла в зависимости от места произрастания растения показывает, что географический фактор в пределах Сибири не оказывает существенного влияния на динамику накопления эфирного масла: наибольшее содержание характерно для фазы цветения растения, минимальное - для фазы вегетации.

Анализ компонентного состава эфирного масла A. pontica Хромато-масс-спектрометрический метод исследования образцов эфирного масла A. pontica позволил установить наличие более 150 компонентов, большая часть которых нами идентифицирована. Основные компоненты: сабинен (до 6,5 %), п-цимол (до 3,3 %), 1,8-цинеол (до 71,8 %), камфора (до 26,4 %), борнеол (до 16,7 %), хамазулен (до 18,8 %).

Нами установлено, что по мере развития растения качественный состав компонентов эфирного масла из надземной части A. pontica меняется незначительно. Анализ образцов эфирных масел, полученных из растений, собранных из разных точек ареала, показывает, что качественный состав компонентов остается постоянным, изменениям подвержено только соотношение отдельных компонентов (табл. 3).

Максимальное содержание хамазулена характерно для эфирного масла из растений, собранных в фазы вегетации и цветения (до 18,3 и 11,7 % соответственно). При этом наибольшее его количество характерно в эфирном масле из стеблей. На основании полученных данных рекомендуем применять в

качестве сырьевой части А. ротка олиственную часть растений, собранных во время начала цветения при максимальном развитии сырьевой части.

Выявление оптимальных условий выхода эфирного масла из надземной

части А. ропнса

Выход эфирного масла при получении его из растительного сырья методом гидродистилляции или перегонкой с водяным паром зависит не только от вида сырья, но и от технологических характеристик: продолжительности экстракции и размера частиц сырья. Для определения оптимальной продолжительности экстракции нами была исследована зависимость количественного содержания и качественного состава эфирных масел от времени экстракции горячим водяным паром (в течение 2, 4, 6 и 8 ч). Установлено, что при увеличении продолжительности экстракции происходит постепенное увеличение выхода эфирного масла и достигает максимума при экстрагировании в течение 6-8 ч. Установленное время является оптимальным и для образования хамазулена, т.к. при продолжительности экстракции менее 6 ч хамазулен образуется недостаточно полно.

Для установления оптимальных размеров частиц сырья был проведен сравнительный анализ зависимости количественного выхода эфирного масла и его качественного состава от размера часткц. Проведенные исследования показали, что с увеличением степени измельчения сырья происходит увеличение выхода эфирного масла. Наибольшее количество эфирного масла получено при экстракции сырья с размером частиц 1,0-3,0 мм, так как при данной степени измельчения сырья высокий выход эфирного масла сочетается с наиболее высоким содержанием хамазулена.

Таблица 3

Содержание компонентов эфирного масла А. роппса (в % от цельного масла)

№ п.п. Индекс удерживания Наименование компонента Номер образца по таблице 5

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1 946 камфен 2,5 0,9 1.6 1,6 + 2,5 1,5 1,0 0,8

2 1014 а-терпинен 0,2 0,4 0,3 0,5 0,9 1,5 0,5 1,0 0,5

3 1024 п-цимол 1,3 0,7 0,6 3,2 2,5 2,7 3,3 2,5 1,9

4 1030 1,8-цинеол 18,1 14,9 19,5 34,8 71,8 17,8 24,7 22,0 18,5

5 1058 у-терпинен 0,4 0,7 0,5 1,0 1,6 2,7 0,9 1.6 0,8

6 1088 терпинолен + 0,1 0,1 0,2 0,3 0,6 0,2 0,3 0,1

7 1102 а-туйон 1,7 0,1^ 0,2 6.9 - - 14,9 16,6 23,3

8 1117 Р-туйон 0,2 + + 0,8 - + 1,9 2,1 2.7

9 1144 камфора 14,2 7,9 15,5 18,0 0,2 26,4 3,6 7,4 3,7

10 1156 сабинакетон 0,1 0,2 + 0,1 + 1,1 0,5 0,6 0.3

11 1162 пинокарвон 0,3 0,1 0,2 0,4 0,6 0,6 1,6 0,5 1,5

12 1166 борнеол 2,9 1.8 4,2 1,3 - 8,0 16,7 8,0 12,8

13 1177 4-терпинеол 1,0 1,9 1,3 2,4 3,5 5,6 2,2 3,8 2,2

14 1191 а-терпинеол 0,1 0,3 0,3 0,3 1,5 0,6 0,2 0,6 0,4

15 1287 борнилацетат 0,4 0,3 0,8 0,1 - 0,3 2,6 1,7 3,6

16 1579 спатуленол 2,5 0,2 1,1 0,5 0,2 0,2 0,5 0,2 0,3

17 1586 окись кариофиллена 0,7 0,2 0,3 0,9 0,2 0,3 0,6 0,2 0,3

18 1601 вульгарон А 8,7 3,2 3.2 0,2 - - - - -

19 1654 вульгарон Б 28,6 52,4 41,0 0,9 - - 0,3 - -

20 1732 хамазулен 5,1 1,8 3,5 Li_8,3 12,3 11,7 13,2 10,6 12,3

Примечания: в таблице приведены основные компоненты. * - даны экспериментально найденные индексы удерживания (Я1), приведенные в шкале н-алканов (Ш = 800 для н-октана, 900 - для н-нопана, 1 ООО - для п-декана и т.д.), «+» - содержание соответствующего компонента составляет менее 0,05 %, «-» - отсутствие компонента или компонент присутствует в количестве менее 0,01 %

Исследование химического состава А. ропйса

С использованием общепринятых методов анализа было проведено исследование надземной части А. ропйса на присутствие других групп БАВ. Выявлены: оксикоричные кислоты, флавоноиды, кумарины, дубильные вещества, полисахариды, витамин С.

Анализ качественного состава и количественного содержания оксикоричных кислот в надземной части А. ропйса При исследовании качественного состава оксикоричных кислот надземной части А. ропйса методом бумажной хроматографии было обнаружено 12 веществ, из которых идентифицированы хлорогеновая, кофейная, м-оксикоричная кислоты. Количественное содержание веществ данной группы определяли спектрофотометрическим и

хроматоспектрофо гомерическим методами в пересчете на преобладающий компонент - хлорогеновую кислоту. Установлено, что оптимальным экстрагентом для извлечения суммы оксикоричных кислот из надземной части А. ропйса является 40 % этанол. Хроматоспектрофотометрический метод является предпочтительным для определения суммы оксикоричных кислот, т.к. позволяет освободиться от сопутствующих веществ. Установлено, что максимальное накопление суммы оксикоричных кислот (до 5,6 %) характерно для растений, собранных в фазу цветения (табл 4).

Таблица 4

Содержание оксикоричных кислот в надземной части А. ропйса в зависимости от фазы развития и места сбора (в % в пересчете на абсолютно сухое сырье)

№ образца Место, время сбора и фаза развития растения Содержание оксикоричных кислот

1 НСО, 38 км от Каргата, 11.08.2006, фаза вегетации 4,68 ± 0,04

2 Там же, фаза бутонизации 4,70 ± 0,05

3 Там же, фаза цветения 5,62 ±0,03

4 Алтайский край, Алейский р-н, берег р. Чистюнька, 16.08.2006, фаза вегетации 4,61 ±0,03

5 Там же, фаза бутонизации 4,63 ± 0,03

6 Там же, фаза цветения 4,95 ± 0,02

Анализ качественного состава и количественного содержания флавонондов в надземной части А. ропйса

При исследовании качественного состава флавоноидов хроматографическими методами было обнаружено 10 веществ флавоноидной природы, из которых идентифицированы рутин, кверцетин, кверцетина рамнозид, байкалеин, апигенин, лютеолин. Количественное содержание веществ данной группы определяли спектрофотометрическим, хроматоспектрофотометрическим методами в пересчете на преобладающий компонент - рутин и методом ВЭЖХ. Установлено, что оптимальным

экстрагентом для извлечения суммы флавоноидов из надземной части А. ропИса является 70 % спирт этиловый. Проведенное хроматоспектрофотометрическое исследование выявило, что наибольшее содержание суммы флавоноидов среди органов растения характерно для корзинок (до 3,5 %). Сравнительный анализ количественного содержания суммы флавоноидов в надземной части А. ропйса в зависимости от фазы развития растения позволил установить, что их максимальное количество характерно для фазы цветения - до 3,82 % (табл. 5).

Таблица 5

Содержание суммы флавоноидов в надземной части А. ропИса (в % в пересчете на абсолютно сухое сырье)

№ образца Место, время сбора, фаза развития растения Содержание суммы флавоноидов

1 НСО, 38 км от Каргата, 11.08.2006, фаза вегетации 3,43 ± 0,02

2 Там же, фаза бутонизации 2,94 ± 0,04

3 Там же, фаза цветения 3,82 ± 0,03

4 Алтайский край, Алейский р-н, берег р. Чистюнька, 16.08.2006, фаза вегетации 3,65 ±0,03

5 Там же, фаза бутонизации 2,52 ± 0,02

6 Там же, фаза цветения 3,10 ±0,02

Сравнительное исследование этанольных извлечений из надземной части А. ропйса, проведенное методом ВЭЖХ подтвердило, что оптимальным экстрагентом для извлечения суммы флавоноидов является 70 % спирт этиловый, содержание рутина в извлечениях составляет до 1,3 %.

Анализ полифенольных окисляемых веществ (дубильных веществ) Наибольшее содержание дубильных веществ по органам растения характерно для листьев (до 10,9 %). При исследовании динамики их накопления в зависимости от фазы развития установлено, что максимальное количество (до 13,3 %) отмечается в фазу бутонизации.

Определение качественного состава и количественного содержания полисахаридов

Анализ фракционного состава полисахаридов в надземной части А. ротка показал наличие водорастворимой фракции, пектиновых веществ, гемицеллюлозы А и В. Среди фракций полисахаридов с точки зрения биологической активности наибольший интерес представляют ВРПС и Г1В. Содержание ВРПС в А. ропйса в зависимости от фазы развития растения колеблется от 6,8 до 9,3 % (табл. 6). Содержание ПВ меньше и не превышает 4 %. По фазам развития растения содержание данных групп веществ постепенно снижается от фазы вегетации к фазе цветения.

Таблица 6

Содержание фракций полисахаридов в надземной части А. ропйса (в % в пересчете на абсолютно сухое сырье)

Место и дата сбора, фаза развития растения Фракции полисахаридов

ВРПС ПВ Гемицеллюлоза

А В

НСО, 38 км от Каргата, 11.08.2006, фаза вегетации 9,33 ± 0,09 3,88 ± 0,04 6,82 ± 0,07 2,34 ± 0,03

Там же, ф. бутонизации 6,84 ± 0,07 3,51 ±0,05 12,56 ±0,12 3,76 ±0,04

Там же, ф. цветения 6,80 ± 0,07 3,49 ± 0,04 16,33 ±0,15 3,56 ±0,04

Алтайский край, Алейский р-н, 20.08.2006, ф. вегетации 5,46 ± 0,06 7,13 ±0,08 10,69 ±0,10 2,63 ± 0,03

Там же, ф. бутонизации 5,03 ± 0,06 5,39 ± 0,05 8,38 ± 0,09 2,94 ± 0,04

Там же, ф. цветения 5,43 ± 0,05 3,87 ± 0,04 10,92 ±0,12 2,86 ± 0,03

Рациональное использование сырья А. ропйсц

Учитывая современные аспекты рационального использования растительных ресурсов и комплексной переработки сырья, предпринято изучение химического состава суммарных извлечений из шрота А. ропИса.

Для определения перспективности использования шрота, полученного после экстракции эфирного масла горячим водяным паром из надземной части А. ропйса, нами проведено его химическое исследование в сравнении с исходным сырьем (табл. 7).

Таблица 7

Содержание биологически активных веществ в сырье и шроте Л. ропИса (в % в пересчете на абсолютно-сухое сырье)

Биологически активное вещество Сырье Шрот

Оксикоричные кислоты 4,65 ± 0,06 4,61 ± 0,06

Флавоноиды 2,94 ± 0,03 3,44 ± 0,04

Полисахариды: водорастворимая фракция - пектиновые вещества - гемицеллюлоза А - гемицеллюлоза В 6,84 ± 0,08 3,51 ±0,05 12,56 ±0,12 3,76 ±0,06 13,71 ±0,13 1,65 ±0,03 7,03 ± 0,09 1,84 ±0,04

В результате полученных данных можно сделать вывод, что шрот А. ротка является ценным источником биологически активных веществ, что создает предпосылки для комплексного использования сырья А. ропйса.

Интродукциоиные исследования А. ропйса в условиях Западной Сибири

К рациональному использованию растительных ресурсов можно отнести и интродукцию растений, которая позволяет получать лекарственное сырье высокого качества в необходимых для промышленности количествах.

Проведенные исследования показали, что интродукция не оказывает существенного влияния на выход эфирного масла из надземной части А. ропйса, компонентный состав образцов эфирного масла остается постоянным, изменениям подвержено количественное соотношение компонентов, что, возможно, свидетельствует о генетически закрепленном свойстве А. ропйса синтезировать эфирное масло определенного качественного состава (табл. 8, рис. 1,2).

В растениях, выращенных в условиях интродукции, сохраняется и качественный состав фенольных соединений, что подтверждает генетическую закрепленность их качественного состава.

Таблица 8

Содержание биологически активных веществ в А. ропйса,собранной в естественных местах произрастания и выращенной в условиях интродукции (в % в пересчете на абсолютно-сухое сырье)___

Биологически активное А. ропйса естественных A. ропйса, выращенная в

вещество мест произрастания условиях интродукции

Эфирное масло До 1,8% До 1,6%

Оксикоричные кислоты До 5,6 % До 5,3 %

Флавоноиды До 3,8 % До 3,7 %

Дубильные вещества До 13,3% До 13,6%

Полисахариды:

водорастворимая До 9,3 % До 6,8 %

фракция

- пектиновые вещества До 7,1 % До 4,8 %

- гемицеллюлоза А До 16,3 % До 13,6%

- гемицеллюлоза В До 3,8 % До 4,2 %

I i , ! И . ! .11 , 1: Ml J, '.!!!,. .„I ■ ! i I s. .л . ;

Рис. 1 .Хроматограмма эфирного масла A. pontica, НСО, 38 км от г. Каргат, ф. цветения, надземная часть, 11.08.2006 Рис. 2. Хроматограмма эфирного масла A. pontica, НСО, 3 км от с. Репьево, ф. цветения, надземная часть, 26.08.2006

Стандартизация сырья

Для оценки качества лекарственного растительного сырья А. роп^са использовали количественное определение эфирного масла фармакопейным методом - метод гидродистилляции в аппарате Клевенджера. Продолжительность экстракции эфирного масла из сырья была установлена экспериментально и должна быть не менее 6 часов с момента закипания воды. Эфирного масла должно быть не менее 0,50 %.

Анализ содержания. эфирного масла но органам растения показал, что наибольшее количество эфирного масла содержится в соцветиях и листьях. Анализ содержания эфирного масла в онтогенезе выявил, что максимальное накопление отмечается в фазу цветения. Поэтому предлагаемое нами сырье «Полыни понтийской трава» представляет собой верхнюю олиственную часть растений собранную в фазу цветения.

Для оценки качества эфирного масла А. ропйса использовали цвет, показатели плотности и преломления света, данные хроматографического анализа в тонком слое сорбента, качественное и количественное определение хамазулена. Для количественного определения хамазулена нами разработан спектрофотометрический метод (табл. 9). Существующая методика количественного определения хамазулена в эфирном масле полыни якутской для А. роппса не применима, т.к. в УФ области спектра поглощением характеризуется не только хамазулен, но и другие компоненты эфирного масла. Однако в видимой области спектра поглощением обладает только окрашенный в синий цвет хамазулен. Максимум поглощения хамазулена в видимой области спектра 550-650 нм. Наиболее высокая интенсивность поглощения характерна

Рис. 3. УФ-спектр эфирного масла А. pontica и PCO хамазулена

1 - УФ-спектр PCO хамазулена

2 - Уф-спектр эфирного масла А. pontica

Таблица 9

Метрологическая характеристика методики количественного определения хамазулена в эфирном масле А. ротка

№ Р Хср. Р Т(Р, о АХ АХср. р

10 9 9,32 0,032 95 2,23 0,23 0,072 0,77

Для построения калибровочного графика использовали хамазулен, выделенный методом колоночной хроматографии на колонке с силикагелем при элюировании гексаном. Чистоту полученного образца контролировали хромато-масс-слектрометрически.

Товароведческие показатели травы полыни понтийской

Согласно перечню разделов фармакопейной статьи на лекарственное растительное сырье, утвержденному ОСТ 91500.05.001-00, установлены числовые показатели для стандартизации сырья (табл. 10).

Таблица 10

Товароведческие показатели травы полыни понтийской

Числовой показатель, % Норма содержания

Эфирное масло Не менее 0,50 %

Хамазулен (в составе эфирного масла) Не менее 7 %

Влажность Не более 13 %

Зола общая Не более 13 %

Зола, нерастворимая в 10 % растворе кислоты хлористоводородной Не более 3 %

Потемневших частей травы Не более 3 %

Побуревших, пожелтевших и почерневших частей травы Не более 3 %

Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм Не более 10 %

Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,310 мм Не более 10 %

Органической примеси Не более 2 %

Минеральной примеси Не более 1,5 %

По результатам проведенных исследований нами разработан проект Фармакопейной статьи «Полыни понтийской трава».

Общие выводы

1. Проведен сравнительный морфолого-анатомический анализ сырья А. ронйса,дикорастущей и культивируемой.

2. Установлено, что общие анатомические признаки сохраняются у всех растений независимо от места произрастания и фазы развития растения.

3. На основе фитохимического анализа установлено наличие в траве Л. pontica эфирного масла, кумаринов, флавоноидов, оксикоричных кислот, дубильных веществ, полисахаридов, кислоты аскорбиновой.

4. Изучено влияние эколого-ценотических факторов и фаз вегетации на динамику накопления БАВ.

5. Установлено, что качественный состав БАВ остается постоянным независимо от места произрастания растения и фазы его развития.

6. Установлено, что А. pontica является перспективным источником эфирного масла и хамазулена. Определены оптимальные условия получения эфирного масла.

7. В результате сравнительного фитохимического анализа травы А. pontica, собранной в ествественных местах произрастания и выращенной в условиях интродукции, установлено, что эти виды сырья содержат идентичные БАВ в сопоставимых количествах.

8. Исследования шрота А. pontica выявило наличие БАВ флавоноидов, оксикоричных кислот, кумаринов, полисахаридов, следов эфирного масла, что говорит о возможности безотходной технологии использования сырья А. pontica.

9. Разработаны числовые показатели для стандартизация сырья -«полыни понтийской травы» согласью современным требованиям, предъявляемым к качеству лекарственного растительного сырья.

10.Разработан проект фармакопейной статьи «Полыни понтийской трава -Artemisiae ponticae herba».

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Макарова Д.Л. Фармакогностическое исследование Artemisia pontica L. / Д.Л.Макарова, О.М.Иванова // Материалы ежегодной конкурс -конференции молодых ученых и студентов «Авиценна - 2003». -Новосибирск: Сибмедиздат, 2003. - С. 106.

2. Макарова Д.Л. Artemisia pontica L. - перспективное лекарственное растение / Д.Л.Макарова, О.М.Иванова // Сборник статей по материалам Всероссийской 63-й итоговой научной студенческой конференции им. Н.И.Пирогова (19-21 апреля 2004 г.), Томск: СибГМУ, 2004. - С. 255 - 257.

3. Фармакогностическое исследование Artemisia pontica L., выращенной в СибБС при ТГУ / Д.Л.Макарова, В.В.Никулич, Н.А.Семенова // Сборник статей по материалам Всероссийской 63-й итоговой научной студенческой конференции им. Н.И.Пирогова (19 - 21 апреля 2004 г.), Томск: СибГМУ, 2004.-С. 262-263.

4. Макарова Д.Л. Фармакогностическое исследование Artemisia pontica L. / Д.Л.Макарова, О.М.Иванова // Материалы ежегодной конкурс конференции молодых ученых и студентов . «Авиценна - 2004», Новосибирск: Сибмедиздат, 2004.

5. Макарова Д.JI. Artemisia pontica L. - перспективное лекарственное растение / Д.Л.Макарова, О.М.Иванова // Материалы 68-й Всероссийской итоговой студенческой конференции, посвященной 105-летию профессора Гливенкс В.Ф., Красноярск: Кларетианум, 2004. - Т.2. С. 3 - 6.

6. Фармакогностическое исследование Artemisia pontica L., выращенной в СибБС при ТГУ / Д.Л.Макарова, В.В.Никулич, Н.А.Семенова // Материалы 68-й Всероссийской итоговой студенческой конференции, посвященной 105-летию профессора Гливенко В.Ф., Красноярск: Кларетианум, 2004. - Т.2. С. 45-49.

7. Макарова Д.Л. Влияние экологических факторов на строение и развитие Artemisia pontica L. / ДЛ.Макарова, О.М.Иванова // Материалы IX международной экологической студенческой конференции «Экология России и сопредельных территорий. Экологический катализ», Новосибирск: РИЦ НГУ, 2004. - С. 294.

8. Влияние экологических факторов на морфометрические и числовые показатели сырья Artemisia pontica L., выращенной в условиях интродукции / Д.Л.Макарова, В.В.Никулич, Н.А.Семенова И Материалы IX международной экологической студенческой конференции «Экология России и сопредельных территорий. Экологический катализ», Новосибирск: РИЦ НГУ, 2004. - С. 295.

9. Макарова Д.Л. Сравнительное фармакогностическое исследование дикорастущей полыни понтийской и выращенной в условиях культуры // Материалы IX международной экологической студенческой конференции «Экология России и сопредельных территорий. Экологический катализ», Новосибирск: РИЦ НГУ, 2005. - С. 170 - 171.

10. Макарова Д.Л. Исследование биологически активных веществ Artemisia pontica L. // Материалы ежегодной конкурс - конференции студентов и молодых ученых «Авиценна - 2005», Новосибирск: Сибмедиздат, 2005. — С. 366.

11. Макарова Д.Л. Сравнительное фармакогностическое исследование Artemisia pontica L. естественных мест обитания и выращенной в условиях интродукции // Сборник материалов 1-й студенческой научной конференции Сибирского Федерального округа «Качество жизни как критерий санитарно -эпидемиологического благополучия», Омск: ОмГМА, 2005. - С. 145 - 149.

12. Макарова Д.Л. Сравнительный анализ эфирного масла Artemisia pontica L., собранной в естественных местах произрастания и выращенной в условиях интродукции // Материалы ежегодной конкурс - конференции студентов и молодых ученых «Авиценна - 2006», Новосибирск: Сибмедиздат, 2006. - С. 490.

13. Макарова Д.Л. Сравнительный анализ эфирного масла Artemisia pontica L., дикорастущей и культивируемой // Программа и тезисы докладов Новосибирской межвузовской научной студенческой конференции «Интеллектуальный потенциал Сибири», Новосибирск: Сибмедиздат, 2006. -С. 19.

14. Сравнительный химический анализ эфирного масла Artemisia pontica L," собранной в естественных местах обитания и выращенной в условиях йнтродукции / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина, А.В.Ткачев // Материалы X международного съезда Фитофарм 2006 «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения», СПб, 2006. -

C. 223 - 227.

15. Сравнительное фармакогностическое исследование Artemisia pontica L., собранной в условиях интродукции и в естественных местах произрастания / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина, А.В.Ткачев [и др.] // Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения: материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н.Березнеговской, Томск: Печатная мануфактура, 2006. -С. 223 - 229.

16. Макарова Д.Л. Исследование состава эфирного масла Artemisia pontica L. / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина // Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: материалы региональной научно-практической конференции (с международным участием), посвященной 40-летию фармацевтического факультета КГМУ, Курск, 2006. - С.300-301.

17. Фотохимическое исследование Artemisia pontica L. флоры Сибири / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина, В.П.Амельченко // Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: материалы III Всероссийской конференции. Барнаул: изд-во АГУ, 2007. - Кн. 2. - С. 263266.

18. Фармакогностическое исследование полыни понтийской (Artemisia pontica L.) / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина, В.П.Амельченко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. - Пятигорск, 2007. - С. 85 - 87.

19. Эфирное масло полыни понтийской (Artemisia pontica L.) / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина, А.В.Ткачев [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. -Пятигорск, 2007. - С. 87 - 90.

20. Phytochemical study of Artemisia pontica L. overground parts /

D.L.Makarova, M.A.Hanina, D.V.Domrachev // Material of the 11 International congress Phytopharm 2007, Leiden. - Р. 114.

21. Разработка мази на основе эфирного масла полыни понтийской / Д.Л.Макарова, Н.О.Карабинцева, М.А.Ханина [и др.] // Сб. матер. II международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений». - Алматы, 2007. - С. 121.

22. Макарова Д.Л. Фенольный комплекс Artemisia pontica L. флоры Сибири / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина // Сб. матер. II международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений». - Алматы, 2007. - С. 270.

23. Фитохимическое исследование Artemisia sieversiana Willd. / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина, Д.В.Домрачев // Сб. матер, науч-практ. конф.

«Современные вопросы теории и практики лекарствоведения». - Ярославль, 2007.-С. 211 - 213.

24. Исследование состава Artemisia pontica L.флоры Сибири / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина, Д.В.Домрачев // Хисг. - 2008. - Вып. 10. - С. 217.

25. Макарова Д.Л. Разработка и внедрение препарата, обладающего противоожоговым действием // Материалы школы-семинара «Инновации: от идеи до продукта». - Новосибирск, 2007. - С. 29 - 31.

26. Макарова Д.Л. Состав биологически активных соединений Artemisia pontica L. флоры Сибири // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. - Пермь, 2008. - № 4. - С. 247 -251.

27. Макарова Д.Л. К фотохимическому изучению Artemisia pontica L. флоры Сибири: фенольный комплекс / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина // Химия и технология растительных веществ: тез. докладов V Всероссийской научной конференции. - Уфа, 2008. - С. 197.

28. Изучение химического состава эфирного масла Artemisia pontica L. флоры Сибири / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина, В.П.Амельченко [и др.] // Химия растительного сырья. - 2008. - № 2. - С. 55-60.

29. Макарова Д.Л. Микродиагностические признаки отдельных видов полыней, произрастающих на территории Новосибирской области (Artemisia absinthium L., A. sieversiana Willd., A. pontica L., A. vulgaris L.) / Д.Л.Макарова, М.А.Ханина - Новосибирск, 2008. - 40 с.

30. Фотохимическое исследование растений флоры Сибири / Д.Л.Макарова, В.В.Величко, Н.Е.Ким [и др.] // Фармация. - 2008. - № 3. - С. 19 - 22.

31. Положительное решение о выдаче патента по заявке № 2007140359/15(044175) РФ. Эфирное масло из полыни и способ его получения. - заявлено 31.10.2007.

Подписано к печати 17.03.2009 формат - 60x84 1/16, Усл. печ. л. 1

Бумага: офсетная Печать: трафаретная Тираж: 100 экз. Номер заказа № 242 Типография ООО "ЮГУС-ПРИНТ", ИНН 5402467637, г. Новосибирск, ул. Залесского, 4

Актуальность проблемы. В основе многих заболеваний различной этиологии лежит воспаление, проявляющееся разнообразными реакциями — от классических до некробиотических и деструктивных.

В настоящее время используется большое количество синтетических противовоспалительных препаратов, однако для каждого них характерен ряд недостатков: нарушения функции органов желудочно-кишечного тракта (тошнота, рвота, ульцерогенный эффект), гематологические нарушения (геморрагии, агранулоцитоз, анемия, метгемоглобинемия), аллергические реакции [79,131,137,165].

Поэтому поиск новых нетоксичных соединений, обладающих противовоспалительным, бактерицидным, регенераторным действием, способствующих заживлению ран, является актуальным в настоящее время.

В этом плане представляют интерес растения, эфирное масло которых содержит хамазулен: ромашка аптечная, тысячелистник обыкновенный и некоторые виды полыней (Л. pontica, A. jacutica, A. sieversiana, А. macrocephala) [45,98,134]. Так, из Chamomilla recutita выделено эфирное масло в различных количествах - от следов до 1,90 % [47,134], в составе которого обнаруживается до 12 % хамазулена [47,140]. Из образцов Artemisia jacutica извлекается до 2 % эфирного масла, содержащего до 47 % хамазулена в его составе [75,156,158], однако данный вид является восточносибирским эндемиком с весьма ограниченным ареалом [152], для Achillea millefolium и A. asiatica характерно наличие бесхамазуленовых рас [55,133,161]. Из перечисленных выше растений привлекает внимание А. pontica, из которой выделено 0,90 % эфирного масла с содержанием хамазулена до 13 % [139]. Данный вид характеризуется устойчивостью состава эфирного масла, поэтому отнесен к группе перспективных видов [17,139,157] и широко культивируется в Европейских странах как пряно ароматическое растение [52,203]. До настоящего времени не было проведено детального исследования A.pontica как перспективного источника эфирного масла, содержащего хамазулен.

Цель работы: Проведение фармакогностического исследования Artemisia pontica L.

Задачи исследования:

1. Проведение сравнительного морфолого-анатомического исследования надземной части A. pontica по фазам развития и местам сбора (для выявления диагностических признаков сырья);

2. Проведение сравнительного фитохимического анализа надземной части A. pontica, естественных мест произрастания и выращенной в условиях интродукции;

3. Проведение сравнительного анализа качественного состава и количественного содержания эфирного масла в надземной части A. pontica, собранной в различных местах произрастания, по фазам развития и отдельным органам растения, выявление оптимальных условий получения эфирного масла;

4. Проведение фитохимического анализа для выявления влияния эколого-ценотических факторов, фаз развития растения на динамику накопления БАВ в траве A. pontica;

5. Установление возможности комплексной переработки сырья и использования шрота A. pontica;

6. Определение товароведческих показателей сырья A. pontica;

7. Разработка проекта фармакопейной статьи «Artemisiae pontica herba».

Научная новизна: Впервые проведен сравнительный фармакогностический анализ A. pontica, собранной в естественных местах произрастания из разных точек ареала и выращенной в условиях интродукции, по фазам развития и органам.

Проведен сравнительный микроскопический анализ образцов сырья, собранных из разных точек ареала по фазам развития. Выявлены микродиагностические признаки надземной части A. pontica.

Проанализировано 55 образцов эфирных масел. Детально изучен химический состав эфирного масла в зависимости от места произрастания растения, фазы развития, типа органа, от времени хранения сырья (с целью установления его оптимального срока годности). Методом хромато-масс-спектрометрии в составе эфирного масла впервые идентифицированы такие компоненты как: Z-сальвен, сантолинатриен, трициклен, 2,3-дегидро-1,8-цинеол, 2-пентилфуран, а-фелландрен, (3-фелландрен, сантолиновый спирт, п-цименен, линалоол, дегидросабинакетон, г/мс-сабинол, сабинакетон, 8-терпинеол, туйеналь, м-цимен-8-ол, 5-изопропил-бицикло[3.1.0]-гекс-2-ен-2-метанол, г/г/с-пиперитол, гарянс-пиперитол, вербеной, транс-карвеол, I борнилформиат, куминовый спирт, тимол, /и/хшс-сабинилацетат, бициклогермакрен, пресильфиперфолан-9-ол, изокариофиллен-оксид, Е-неролидол, вульгарон А, вульгарон В, кариофилла-3,8(13)-диен-5а-ол, гермакратриенол, эвдесмадиенол.

Впервые детально изучен качественный состав и количественное содержание групп биологически активных веществ (флавоноидов, оксикоричных кислот, кумаринов, кислоты аскорбиновой, полисахаридов, дубильных веществ) в зависимости от места произрастания растения и фазы его развития.

Изучен компонентный состав фенольных соединений травы A. pontica. Впервые в надземной части A. pontica установлено наличие флавоноидов: рутина, кверцетина, апигенина, лютеолина; оксикоричных кислот: хлорогеновой, кофейной, м-оксикоричной.

Впервые определено содержание в траве фракций полисахаридов (водорастворимых, пектиновых веществ, гемицеллюлозы А и В).

Впервые изучен химический состав шрота A. pontica. На основании полученных данных установлено, что после получения эфирного масла шрот представляет собой ценный источник таких БАВ как флавоноиды, кумарины, оксикоричные кислоты, полисахариды, дубильные вещества и может быть использован для получения комплексных препаратов.

Практическая значимость. На основании проведенных фармакогностических исследований для медицинской практики предложено новое лекарственное растительное сырье.

Результаты микроскопических и химических исследований использованы для разработки методик диагностики и определения качества сырья A. pontica и включены в проект фармакопейной статьи «Полыни понтийской трава». Материалы диссертации использованы при составлении методического пособия «Микродиагностические признаки отдельных видов полыней, произрастающих на территории Новосибирской области (Artemisia absinthium L., A. sieversiana Willd., A. pontica L., A. vulgaris L.)».

По результатам полученных данных получен патент на способ получения эфирного масла.

Данные, полученные при химическом исследовании шрота A. pontica, обосновывают его перспективность как дополнительного источника БАВ.

На защиту выносятся:

• Результаты фитохимического исследования БАВ A. pontica,

• Исследования по изучению микродиагностических признаков травы полыни понтийской,

• Результаты фитохимического анализа шрота A. pontica,

• Данные по стандартизации травы полыни понтийской.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодной конкурс-конференции студентов и молодых ученых «Авиценна» (г. Новосибирск, 2003, 2005, 2006), всероссийской 63-й итоговой студенческой конференции им. Н.И.Пирогова (г. Томск, 2004), 68-й всероссийской итоговой студенческой научно-практической конференции, посвященной 105-летию проф. Гливенко В.Ф. (г. Красноярск, 2004), 1-й студенческой научной конференции Сибирского

Федерального округа «Качество жизни как критерий санитарно-эпидемиологического благополучия» (г. Омск, 2005), ежегодной международной экологической студенческой конференции «Экология России и сопредельных территорий. Экологический катализ» (г. Новосибирск, 2004, 2005), межвузовской научной студенческой конференции «Интеллектуальный потенциал Сибири» (г. Новосибирск, 2006), всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (г. Барнаул, 2007), 11-м международном съезде «Фитофарм» (Лейден, 2007), II международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (г. Алматы, 2007), научной конференции студентов и молодых ученых (г.Пермь, 2008), V Всероссийской научной конференции (г. Уфа, 2008).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры фармакогнозии и ботаники Новосибирского государственного медицинского университета (№ государственной регистрации 012000807420) и комплексной целевой программой СО АМН Российской федерации «Здоровье человека в Сибири» (№ государственной регистрации 01.9.2002479).

Публикации. Основное содержание работы отражено в 29 научных работах.

Экспериментальные исследования по теме диссертации выполнены на кафедре фармакогнозии и ботаники НГМУ, а также в сотрудничестве с коллективами других научных организаций: фотографии анатомической структуры A. pontica были выполнены под руководством старшего научного сотрудника Института цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск) Т.Е.Алешиной, которой автор выражает искреннюю признательность и благодарность.

Автор выражает искреннюю признательность и благодарность сотрудникам Лаборатории терпеновых соединений НИОХ СО РАН им.

Н.Н.Ворожцова, особенно аспиранту Д.В.Домрачеву за помощь в расшифровке хромато-масс-спектрограмм.

Интродукционные исследования проводились совместно со старшим научным сотрудником СибБС при ТГУ (г. Томск) к.б.н. В.П.Амельченко, за что автор выражает искреннюю признательность и благодарность.

Исследование качественного состава извлечений из надземной части А. pontica проводилось на базе ЗАО Институт хроматографии «ЭкоНова» под руководством к.х.н. Азаровой И.Н. Автор выражает искреннюю признательность и благодарность руководителю и сотрудникам института.

Общие выводы

1. Проведен сравнительный морфолого-анатомический анализ сырья А. pontica,дикорастущей и культивируемой.

2. Установлено, что общие анатомические признаки сохраняются у всех растений независимо от места произрастания и фазы развития растения.

3. На основе фитохимического анализа установлено наличие в траве А. pontica эфирного масла, кумаринов, флавоноидов, оксикоричных кислот, дубильных веществ, полисахаридов, кислоты аскорбиновой.

4. Изучено влияние эколого-ценотических факторов и фаз вегетации на динамику накопления БАВ.

5. Установлено, что качественный состав БАВ остается постоянным независимо от места произрастания растения и фазы его развития.

6. Установлено, что А. pontica является перспективным источником эфирного масла и хамазулена. Определены оптимальные условия получения эфирного масла.

7. В результате сравнительного фитохимического анализа травы A. pontica, собранной в естественных местах произрастания и выращенной в условиях интродукции, установлено, что эти виды сырья содержат идентичные БАВ в сопоставимых количествах.

8. Исследования шрота A. pontica выявило наличие БАВ флавоноидов, оксикоричных кислот, кумаринов, полисахаридов, следов эфирного масла, что говорит о возможности безотходной технологии использования сырья A. pontica.

9. Разработаны числовые показатели для стандартизация сырья -«полыни понтийской травы» согласно современным требованиям, предъявляемым к качеству лекарственного растительного сырья.

10.Разработан проект фармакопейной статьи «Полыни понтийской трава — Artemisiae ponticae herba» (приложение 1).