Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование растений семейства вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока

он

I Ь ГсП

Ма правах рукописи

КЕЛОУСОВ МИХАИЛ ВАЛЕРЬЕПНЧ

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА ВЕРЕСКОВЫЕ ФЛОРЫ СИБИРИ И ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА

15.00 02 - фармацевтическая химия к фармакошони

АВТОРЕФЕРАТ

Д||ссер1аш1и ни соискание ученой степени кандидат фармацевтических наук

Уфа - 1995 г.

Рабата выполнена в Сибирском медицинском Университете

Научный руководитель

Научный консультант Официальные оппоненты

— чл.-корр. СО АН ВШ, доктор фармацевтических наук, профессор Дмитрук С.Е.

— доктор фармацевтических наук, профессор Комиссаренко Н.Ф.

— чл.-корр. РАМН,

доктор фармацевтических наук, профессор Фурса С.Н.,

— кандидат фармацевтических наук, доцент Никитина Т.Н.

Ведущая организация — Пермский фармацевтический

институт.

Защита диссертации состоится "!г>" (ЖМгШтЬХ/ 1995г. в Л. час на заседании специализированного совета К 084.35.02 при Башкирско государственном медицинском институте по адресу: 450025, Уфа, ул. Ленина, 3,

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государсгвенног Медицинского Института.

Автореферат разослан "П WHJM ХСУиМ 995 г.

Ученый секретарь специализированного совета,

доктор медицинских наук Э.Г. Давлстов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время расширение арсенала используемых лекарственных средств за счет внедрения в медицинскую практику новых препаратов растительного происхождения является одной из приоритетных задач отечественного здравоохранения. Низкая токсичность большинства фитопрепаратов, ограниченный спектр побочных явлений при их использовании выгодно отличают препараты растительного происхождения от синтетических, особенно при лечении хронических патологий. Высокий уровень ятрогениых осложнений вследствие использования лекарственных синтетиков, а также растущий дефицит официнальных препаратов стимулирует рост популярности известных лекарственных растений и изыскание новых источников биологически активных веществ (БАВ).

В этом плане изучение и мобилизация ресурсов флоры Сибири и Дальнего Востока - задача сегодиешнего дня.

Одним из перспективных таксонов этого региона является семейство вересковые. Видовое разнообразие этого семейства обширно. Флора Земного шара насчитывает 3000 видов, относящихся к 100 родам. Во флоре СНГ сем.вересковые представлено 54 видами. Более половины из них произрастает на территории Сибири и Дальнего Востока. Причем, 24 вида встречаются только в этом регионе.

Степень химической и фармакологической изученности растении данного семейства невелика и носит фрагментарный, не систематизированный характер, а у некоторых отсутствует вообще.

В научной медицине используется только два вида сем. вересковые: багульник болотный и толокнянка обыкновенная. Побеги багульника болотного используются как отхаркивающее средсгво. Листья толокнянки в качестве мочегонного и дезинфицирующего средсгва при воспалительных заболеваниях мочевого пузыря и мочевых путей.

В народной медицине растения сем. вересковые используются шире. Некоторые рецепты народного врачевания (лечение туберкулеза, пневмоний, шилепсии, эклампсии, чесотки, лейкодермнй) сохранились в практике народной медицины до наших дней и в довольно рациональной технологической форме с успехом используются коренными жителями Сибири и Дальневосточных районов I в настоящее время.

.Широкое распространение и разнообразное применение растений :ем. вересковые в народной медицине, недостаточная их изученность послужили >снованием нашего исследования.

Цель работь; - Химико-фармакологический анализ растений

«м. вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока с целью выявления ценных 1СТОЧНИКОВ БАВ и создание на их основе новых лекарственных средств.

Задачи исследования:

— качественный и количественный анализ БАВ;

— фармакологическое исследование суммарных комплексов ^ индивидуальных веществ на противовоспалительную, диуретическую противосудорожную, репаративную и антифунгальную активность;

— обоснование показагей норм качества сырья и разработка нормативно! документации на наиболее перспективный объект исследования.

— сравнительное анатомо-морфологическое исследование, выявленш диагностических признаков и обоснование видовой самостоятельности фармакологически перспективных, но морфологически трудно различимых вндо! сем. вересковые.

Научная новизна и теоретическая значимость. Впервые проведег целенаправленный химико-фармакологический скрининг растеши сем. вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока, выявлены виды содержании БАВ, обладающие антифунгалыюй, противовоспалительной и днурегическо! активностью.

Проведен анализ качественного состава полифенолов, относящихся к класс; высоко эффективных природш-'х соединений, выделено 12 ивидуальных вешесп фенольной природы. Методом ВЭЖХ впервые охарактеризован состав I содержание фенолкарбоновых кислот.

Среди данного семейства выявлены перспективные источники эфирны; масел и изучен их состав.

Впервые сравнительным анатомо-морфологическим и хроматографичсскии анализом растений и БАВ, выявлены диагностические признаки исследуемы: родовых комплексов и подтверждена самостоятельность видовою статус; перспективных, но морфологически трудно различимых видов.

Практическая ценность. Для практической медицины в качестве природпы: диуретиков могут быть рекомендованы багульник болотный, фнллодоц алеутская, Кассиопея Редовского, к. плаумовидная и к. четырехгранная водны экстракты которых по диуретической и экскреторной активности превосходя аналогичный экстракт толокнянки. Прямой зависимости диуретического эффект; от количества содержащегося в растениях арбутина не замечено, что дает прав! рекомендовать вести поиск и стандартизацию сырья с диуретической актиниостьи по содержанию флавоноидов, с количеством которых данный вид активиост: четко коррелирует. В практическую медицину в качестве противовоспалительны средств могут быть рекомендованы водно-спиртовые экстракты багульник; болотного и б. крупнолистного, которые угнетают каррагепнновын отек н уровне бутадиона.

Материалы выполненных исследований включены в качестве дополнении действующую ФС "побеги багульника болотного", а разработанная схем комплексного использования его сырья позволяет использовать и шрог, н который составлен проект ВСФ.

Материалы выполненных исследований включены в монографию иологически активные вещества лекарственных растений" (Новосибирск: Наука, б. отделение, 1990 - С. 115) и используются в учебном процессе на кафедрах рмакогнозин с курсом ботаники: Сибирского, Иркутского н Алтайского дицинских Университетов.

Впервые выявленная антифунгальная активность водного экстракта Зегов багульника болотного позволила включить данный вид сырья в состав фаботанного растительного сбора для лечения микоза стоп ("Диагностика и leniie микозов стоп у горно-рабочих угольных шахт. Томск, 1991. - С. 8-9).

В АПК "Союззфирлекраспром" утверждены и рекомендованы .для актического использования методические указания "Диагностические признаки ггеннй рода багульник и близких к ним видов семейства вересковые".

На защиту выносятся:

1. Результаты химико-фармакологического и анатомо-морфологнческого ледования растений сем. вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока.

2. Расширение спектра действия и перспективы комплексного юльзовання сырья багульника болотного.

Апробппия работы. Основные положения работы доложены и обсуждены IV Всесоюзном съезде фармацевтов (Казань, 1986); Сибирских конференциях сгуальные проблемы фармакологии п поиск новых лекарственных препаратов" imck, 1986, 1987); V Всероссийском съезде фармацевтов (Ярославль, 1987); •еспубликанскон конференции по медицинской ботанике (Ялта, 1988); союзных конференциях "Новые лекарственные препараты из растений Сибири 1альпего Востока (Томск, 1988, 1989); Всесоюзной конференции "Фитонциды: ггерпальные болезни растений" (Львов, 1990); научно-практической [фереиции "Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на 1ьнсм Востоке" (Томск, 1991); научной конференции "Поиск, создание и чение новых лекарственых средств растительного и синтетического шехождепня" (Томск, 1993); I Международном научном конгрессе >адпционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты" эсква, 1994).

Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры 1макогнозин с курсом ботаники Сибирского Государственного Медицинского терситета и комплексной целевой программы СО АМН Российской федерации оровье человека в Сибири (№ государственной регистрации 01.85.0069848).

Публикации. Содержание работы отражено в 20 статьях и тезисах ладов.

Структура н объем диссертации. Диссертация изложена на 191 страницах и гоит из введения, обзора литературы, объектов и методов исследования, трех в собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, ота иллюстрирована 30 таблицами н 23 рисунками. Библиографический затель включает 281 источников литературы, из них 29 зарубежной.

Работа выполнена на базе кафедры фармакогнозии с курсом ботаники Сибирского государственного медицинского университета. Отдельные разделы химии и фармакологии - на базе ВНИИХТЛС (г. Харьков); лаборатории медицинской ботаники республиканского ботанического сада (г. Киев); Института фармакологии ТНЦ и кафедры фармакологии АГМУ (г. Барнаул); лаборатории природных соединений института Органической химии Казахской АН (г. Алма-Ата) н военно-медицинского факультета (г. Томск).

В обзоре литературы дана краткая характеристика семейства вересковые (систематика, морфология, биологические особености) и распространение растений этого семейства по регионам нашей страны. Представлены данные по использованию растений сем. вересковые в народной медицине Сибирских и Дальневосточных регионов. Анализ литературных данных свидетельствует о том, что представители сем. вересковые флоры Сибири и Дальне! о Востока изучены недостаточно, а у некоторых данные о качественном составе БАВ отсутствуют полностью, что.и послужило обоснованием нашего исследования.

Вторая глава посвящена описанию методов исследования и объектам.

В третьей главе приведены результаты качественного и количественного анализа БАВ, выделения и идентификации фенольных соединений (арбутин, флавоноиды, кумарнны, фенолкарбоновыс кислоты), эфирных масел и полисахаридов.

В четвертой главе изложены материалы фармакологического исследования. \ Приведены результаты противосудорожной, противовоспалительной, ранозаживляющей и антифунгальной активности а также действия суммарных комплексов на выделительную функцию почек.

Пятая глава посвящена микроскопической диагностике рододендронов и багульников.

В приложении - дополнения к ФС "Побеги багульника болотного" и проект ВФС на шрот багульника болотного.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

1. Объекты и методы исследования.

Сырьем для исследования служили листья и облиственные побеги 31 вида растений сем. вересковые, собранные в фазу цветения и плодоношения в районах Сибири и Дальнего Востока в пределах естественного ареала.

Сбор материала проводился в период с 1982 по 1988 год во время полевых исследований, осуществляемых сотрудниками лаборатории высших растений биолого-почвенного института ДВНЦ АНРФ. Сбор гербария и сырья пелся лично автором диссертации под руководством к.б.ч. В.М. Старченко.

Обнаружение различных групп БАВ, количественное их определение проводилось с помощью общепринятых гистохимических, химических и хроматографиЧеских методов.

Выделение и химическое изучение биологически активных веществ проводили методами градиентной хроматографии на колонках с полиамидным сорбентом, хроматографии на бумаге и в тонких слоях сорбента, ГЖХ и ВЭЖХ. Для исследования структуры выделенных веществ использовали традиционные химические и инструментальные методы анализа.

2. Исследование БАВ.

Количественное • содержание флавоноидов, кумаринов и арбутина представлено в таблице 1.

Наиболее перспективными источниками фенольных соединеий (высокое содержание всех групп фенольного комплекса, широкое распостранение на територин Сибири и Дальнего Востока, доступность и возможность заготовки сырья) являются багульник болотный, рододендрон сихотинский и р. остроконечный. С точки зрения химии фенольных соединений они наименее изучены.

Выделение индивидуальных компонентов фенольного комплекса из листьев рододендрона сихотинского и багульника болотного проводили по схеме (рис. 1).

Выделено и идентифицировано 12 веществ.

Вещество А[ выделенное из рододендрона сихотинского - белые игольчатые кристаллы с 1пл. 195-197°С (из воды); [а]20д-59,0° (с 1.0; метанол).

Вещество при гидролизе 5%-ной серной кислотой расщепляется на гидрохинон (СбНбОг, 1ПЛ - 170-171°С) н Д-глюкозу. На основании данных физико-химического анализа, величин ЯГ в различных системах растворителей, отсутствия депрессии 1-ры плавления с достоверным образцом вещество (А|) было идентифицировано с гидрохинон-о-Р-Д-глюкопиранозидом (арбутином)

Количественное содержание флавоноидов, кумаринов и арбутина в растениях семейства вересковые (Ericaceae)

Содержание в % на абсолютную

Вид сухую массу (Mini)

арбутина флавоноидов кумаринов

Подбел многолистный 7.28±0.10 2.3910.03 1.79+0.33

Арктериха токая 12.81+0.26 6.1310.20 0.1910.34

Толокнянка 15.69±0.76 1.9710.02 1.09+0.02

Арктоус альпийский 8.7410.17 2.73+0.04 2.1310.17

Бриантус Гмслина 13.6810.14 2.7210.04 3.95+0.59

Кассиопея вересков!щная 2.6610.00 i. 1510.05 . 1.2610.14

К. четырехгранная 4.06+0.34 4.1010.08 3.2710.02

К.Редовского 3.4410.16 1.0010.00 .8.1310.08

К.плауиовидная 7.7510.53 2.3410.05 3.00+0.0S

Хамедафне чашечная 9.1910.26 2.7610.04 2.4510.09

Эвботрноидес Грея 9.9010.05 2.08+0.02 3.26+0.17

Багульник стелющийся 7.7310.07 2.3810.00 1.3510.04

Б.-подбел 16.2010.44 1.6210.01 1.32+0.07

Б.крупнолистный 9.7010.4S 1.1510.02 1.37+0.04

Б.болотный 3.9010.04 2.0910.03 .2.1610.04

Луазелеурия лежачая 13.8310.13 1.2810.02 2.9210.38

Менцизия пятнтычинковая - 0.4710.01 0.9210.02

Гаультерия Микеля 10,1710.58 2.0910.06 2.5010.50

Филлодоце голубая 16.5810.64 2.4510.00 0.9310.02

Ф.алеутская 13.8311.96 2.2010.00 0.4210.05

Рододендрон Адама 7.5810.21 3.17+0.09 3.1210.04

Р.золотистый . 5.7010.60 I..86+0.0I 1.78+0.03

['.камчатский 2.6310.09 4.35+0.04 2.6110.09

Р.даурский 3.38+0.02 1.8510.00 1.8210.07

Р.Ледебура - 1.6610.05 2.58+0.02

Р.остроконечный 5.9010.11 1.43+0.08 1.5510.02

Р. мелколистный 7.0410.56 2.4310.02 2.3010.04

Р.Редовского 1.7910.37 2.3510.01 1.87+0.09

Р.Шлиппенбаха 0.83+0.00 2.3910.06 2.3410.02

Р.сихотинский 10.6410.00 0.95+0.00 6.6510.05

Р.Чоноски 5.18+0.05 2.55+0.02 2.7910.06

Примечание: " - " содержание не определялось.

Сгущение (удаление спирта)

Фильтрация (удаление осадка липофилькых веществ)

Рис. 1. Схема выделения фенольных соединений.

Из листьев рододендрона сихотинского были выделены вещества ф-1. ф-2, ф-3 и ф-4. Хроматографнческое исследование показало, что вещества ф-1 и ф-2 имеют гликозидную природу. Из продуктов кислотного гидролиза веществ ф-1 и ф-2 выделили один и тот же агликон, который по физико-химическим показателям, данным УФ-спсктроскопни с комплексообразующими и ионизирующими добавками (табл. 2) и в сравнении с достоверным образцом тождествен кверцетнну.

Выделенное соединение (ф-1) по поведению на хроматограмме было отнесено к гликозиду флавонола с замещенным углеродным остатком у С3.

В продуктах кислотного гидролиза были идентифицированы кверцетин и D-галактоза. Спектральными исследованиями в УФ-области установили наличие защищенной оксигруппы при С3 и свободных окснгрупп при С7, С5.

Исходя из полученных данных ф-1 идентифицировано как кверЦетин-3-O-ß-D-галактопнранозид (гиперознд).

Сахарным компонентом вещества ф-2 оказалась а-арабиноза, что было доказано бумажной хроматографией гидролизата в сравнении с эталонными сахарами. Спектральными исследованиями (табл. 2) было доказано, что вещество ф-2 в сравнении с подлинными веществами и литературными данными соответствует 5,7,3',4'-тетракси- З-О-а-Ь-арабофуранозиду (авикулярину).

Вещества ф-3 и ф-4 - свободные агликоны. При спектральной характеристике вещества ф-3 были обнаружены полосы 3380-3300 см"', что характерно для фенольных оксигрупп; полоса 1665 см*' - соответствует карбонильной группе у-пиронового кольца; полосы 1615, 1565 и 1515 см-' (колебания ароматического кольца): Положение свободных оксигрупп определяли по характеру батохромных сдвигов (табл. 2).Проба смешения вещества Ф-3 и достоверного образца кверцетина не давала'депрессии температуры плавления. Вещество ф-3 можно охарактеризовать как 3,5,7,3',4-пентаокснфлаво1! или кверцетин.

Вещество Ф-4 по физико-химическим свойствам, спектральным данным и величинам батохромного сдвига, свидетельствующим о наличии свободной оксигруппы при С5' (в ß-кольце), отличается от вещества Ф-3. В сравнении с заведомо известным веществом Ф-4 индетифицировано как 3,5,7,3',4',5'-гексаоксифлавон (мирицетин).

Хроматографическп и препаративно во всех четырех видах рододендрона подрода Rhodorastrum (Maxim) Drude (р. сихотинский, p. остроконечный, p. Ледебура и р.даурский) были обнаружены гиперозид, авикулярин, кверцетин if мирицетин, что соответствует и литературным данным по наличию флавоноидов в листьях рододендрона даурского. Гиперозид, авикулярин и кверцетин можно отнести к константным веществам для всего рода. В рододендроне сихотинском, р. остроконечном и р. Ледебура зги флавоноиды идентифицированы впервые.

Батохромные сдвиги максимумов поглощения в УФ-спектре флавоноидов в присутствии ионизирующих и комплексообразующих добавок.

Вещество Поглощение в УФ-области, 1тах. им. .

и Полоса • 2x10-5М Натрия Натрия Натрия Алюминий .Алюминий

шифр поглощения р-рв этилат ацетат ацетат+ хлористый хлорнстый+

абсол. борная соляная

этаноле кислота кислота

ф-1 гиперозид I 361 410(49) 381(20) 378(17) 439(78) 406(45)

5,7,3',4'-тетраоксифлавон-

З-о-Ъ-Д-галактопиразид II 258 274(16) 276(18) 264( 6) 277(19) 277(19)

ф-2 авнкулярин I 360 400(40) 370(10) 388(28) 400(40) 380(20)

5,7,3',4'-тетраоксифлавон- II 260 - - 270(10) 280(20) 282(22) 272(12)

З-а-Ь-арабофуранозид 271(11)

ф-3 квсрцетин I 375 332(-43) 390(15) 394(19) 436(61) 430(55)

3,5,7.3',4'-пентаоксифлавон II 257 270(13) 267(10) 261(4) 267(10) 266(9)

ф-4 I 375 320(-55) 335(-40) 392(1'7) 450(75) 428 (53)

мнрицетин 301 304 (3) 316(15) 308 (7)

3,5,7,3',4'.5'-гексаокснфлавон 255 270(15) 269(14) 258 (3) 271(16) 275 (20)

ф-5 азалеатнн I 368 ' 438(70) 390(22) 370(2) ' 410(42) 410(42)

3,7,3',4'-тетраокси-

5-метоксифлавон II 252 300(48) 271(19) 260(8) 300(48) 300(48)

ф-о кемпферол I 36В 330(-38) 375(7) 375( 7) 422(54) 430(62)

3.5,7.4'-тстраоксифлавон II 265 277(12) 275(10) 270 ( 5) 272(7) 270 (5)

Из листьев багульника болотного по схеме (рис. I) было изолировано 7 веществ флавоноидной природы, что соответствует данным, полученным на кафедре фармакогнозии СГМУ ранее. Шесть из выделенных индивидуальных веществ нами было идентифицировано. Четыре из них оказались идентичными флавоноидам, выделенным из родондендрона сихотинского: гпперозиду - ф-1, авикулярину - ф-2, мирицетину - ф-3 и кверцетину - ф-4. В фенолыюм комплексе багульника болотного гиперозид является доминирующим компонентом и составляют 70%.

Ф-5 соответствует агликону азалеатину, физико-химические его константы представлены в таблице 2 и 3.

Вещество ф-6 - аглнкон (1пл. 270-275°С). С помощью УФ-спектроскопии с ионизирующими и комплексообразующимн реагентами в исследуемым веществе установлены ОН - группы в положениях 3, 5, 7 и 4'. Известно, что подобное расположение гидроксилов наблюдается у кемпферола. ПроЬеденное сравнение различных свойств выделенного вещества с достоверным образцом кемпферола подтвердили их идентичность.

Характеристика фенольных соединений, выделенных в индивидуальном виде из багульника болотного и рододендронов подрода ИкоЛогаИгит представлены в таблице 3.

Из 11 веществ кумарнновой природы, обнаруженных в рододендронах подрода ЯНойогазШип, в индивидуальном виде были выделены и идентифицированы эскулин, эскулетни, умбеллиферон, скополетин и кумарин (табл. 2, 3).

Методом ВЭЖХ проведена качественная и количественная оценка свободных фенолкарбоновых кислот (СФК) у 27 видов сем. вересковые. Установлено, что они представлены фенолокислотами - производными бензойной кислоты (галловая, протокатеховая, п-оксибеизойная, салициловая и др.) и оксикоричнымн кислотами (коричная, кофейная п-кумаровая, о-кумаровая и др.).

Доминирующими СФК являются протокатеховая, п-оксибензойная и солициловая кислота, что свидетельствует о специфической направленности синтеза фенольных соединений - арбутина, катехинов и дубильных всщесгв.

Объяснением малого количества оксикоричных кислот может служить значительное содержание флавоноидов и кумаринов, Химическими предшественниками которых они являются.

Состав СФК дает возможность предположить о противовоспалительных и антифунгальных свойствах у рододендронов, арктоуса, фнллодоце и багульника , болотного.

3. Количественная и качественная характеристика эфирных

масел (ЭМ).

Наличие эфирных масел (ЭМ) обнаружено практически у всех представителей семейства вересковые. У одних видов (багульники,

Таблица 3.

Физико-химическая характеристика веществ, выделенных из растений семейства вересковые.

Название Формула тл., "С Полосы поглощения

вещества и его ишфр УФ-спеюр ИК-слектр, си-1

Арбутин гидрохинон-Ь-О-глкжозид А-1 С12Н1607 195-197

Гиперозид 5,7,3', 4'-тетра -оксифлавон -З-о-Ъ-О-галактопиранотд Ф-1 С21Н20012 238-240 361,258 896,998-1005 1096, 1610, 1660 3330, 3470

Авикулврнн 5,7,3',4-тстра-оксшфлавон-3-о-¿-Ь-арабофуранозид ф-2 СМИ 18011 210-213 360, 260 835, 1050,1615 . 1665, 3150,3315 .

Кверцетин 3,5,7,З'Д'-пентаоксифл авон ф-3 С15Н1007 316-3182 318-320 375, 257 1515, 15ь5,1515 1665, 3300, 3380

Мирицегин 3,5,7,3\4',5'-гексаокснфлавон ф-4 С15Н808 350-357 375, 255 865, 940, 1520 1560, 1608, 1663 . 3370

Аэалсатии 3,7,3\4'-тетра окси-5-иетокенфл авон ф-5 С16Н1207 317-320 366, 252 840, 1530,1610 1660,2740, 3330 3420

Кеипферол 3,5,7.4'-т«гтра оксифлавон ф-6 С15Н10С6 279-280 368, 258 850,1510, 1570 1615, 1659, 3340

Эскулин К-1 С15Н1609 203-205 - -

Эскуяешн 6,7-дноксикумарШ1 К-2 С9Н604 270-272 235, 260, 300,350 1160,1205, 1375 1406, 1475, 1585 1640, 1660, 1720 2890, 2980, 3250 3290

Скополспш 6-метокси-7-оксику-марнн К-3 СЮН1804 204-206 227, 250, 290,355 1100,1200,1300 1390, 1450,1500 . 1545, 1590, 1620 1720, 2890, 2900 3380

Уыбсллифсрон 7- оксихуиарин К-4 С9Н603 233-240 320,250 905, 1000, 1140 1240, 1400, 1620 1690, 1720, 3200

Кумарин К-5 С9Н602 67-68 275,325 1596, 1620,1706 1750

рододендроны) ЭМ были получены в значительном количестве меюдом перегонки с водяным паром; у других (кассиопея, Кассандра) судили по наличию специализированных секреторных образовании. У некоторых (гаультерия, подбел многолистный) ЭМ были обнаружены гнстохимнчески в живых клетках различных тканей: в клепках эпидермы, мезофилла листа, в клетках сердцевины стебля.

Эфирные масла - прозрачные жидкости с очень острым резким, специфическим, но приятным запахом (ЭМ рододендрона остроконечного и филлодоце). Масла очень летучи, быстро осмоляющиеся. Значительная часть ЭМ эмульгируется вотгонных водах.

Данные о количественном п качественном состаье ЭМ рододендрона сихотинского, р. остроконечного, филлодоце алеутской, ф. голубой и гаультерин Микеля в литературе о1суте1В)нн. Они и явились объектами нашего исследования.

Высушеные безводным натрия сульфатом ЭМ были разделены на фракции кислот, фенолов и терпеноидов и подвергнуты анализу методом ГЖХ на приборе "Хром 5" и "хром 41" с неподвижной фазой 10% БР-ЮОО на Бирегсороп 80/100 (кислоты и фенолы),полиэтиленглпкольадинат (ПЭГА), полиметилсиликоном (ПМС) (терпеноиды).

Во фракции фенолов идентифицированы гвайкол, фенол п- и м-крезол, изопропилфенол. Из кислот идентифицированы масляная, валерьяновая, капроновая, энаптовая', каприловая, тридециловая (ЭМ р. остроконечного), в ЭМ р. остроконечного еще и пальмитиновая.

Так как ранее изученные рододендрон даурский и р. Ледебура являются видами одного подрода ¡\hodorastrum терпеновые фракции всех четырех видов были подвергнуты сраннтелыюму исследованию. Идентифицировано от 25 до 34 компонентов. Четкие различия по составу подтверждают их видовую самостоятельность. Общими компонентами являются лимонен, сабинен, 1,8-цинеол, у-терпинен, сабиненгидрат, а-терпинеол, борнеол, борнилацетат, геранилацетат, лонгифолен, кариофиллен, а-муролен, а-гумулен, алло-аромадендрен, ат-куркумен, р-бизаболен, палюстрол, ледол, бетуленол. Лимонен, карифиллен, а-гумулен, а-сслннен, алло-аромадендрен, р-бизаболен преобладает в ЭМ р. остроконечного и р. сихотинского. По их наличию можно предположить возможную противовоспалительную активность исследуемых объектов.

В эфирном масле филлодоце алеутской обнаружено 50, у ф. голубой - , 33 компонента, 28 из них идентифицировано.

При наличии четких видовых различий имеется ряд общих компонентов - а-пинен, камфен, р-пинен, сабинен, Д3-карен, лимонен, 1,8-цинеол, у-терпинен, цис-аллооцимен, транс-аллооцимен, а-терпинсол, копаен, Р-элемен, Р-кариофиллсн, р-гумулен, у-кадинен, а-селинен.

Г5

Эфирное масло гаультерии Микеля предсгавлсно только в виде эмульгированного в отгоных водах. В нем обнаружено 23 минорных компонента (трнциклен, а-пииен, камфеи, а-фелландрен, терпинеол-4, геранилсалинилат, кадинел ы и ряд нсндентифшшрованных веществ). Доминирующим веществом (более 90% от массы эфирного масла) является метнлсалнцилат.

4. Фармакологнеское исследование суммарных комплексов и индивидуальных веществ из растении семейства вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока. '

Суммарные комплексы БАВ для фармакологического исследования получены различными технологическими приемами:

- методом перегонки с водяным паром - эфирное масло;

- а аппарате Сокслета и холодным настаиванием - гексановые и эфирные экстракты;

- экстракты на 40% и 70% этаноле - по Чулкову;

- методом мацерации - водные экстракты.

Острая ток-сичность определялась по методу Личфильда и Уилкинсона. ЬИзо от 1840 до >000 мг/кг. Исследуемые суммарные комплексы обладают очень низкой токсичностью, т.к. согластно гигиенической классификации ядов малотоксичными считаются вещества, имеющие ЬЭ50 - 1500 мг/кг.

Противосудорожная активность водно-спиртовых извлечении. На моделях судорожных состояний (МЭШ и коразоловое "титрование") они все оказывают протппосудорожное действие разной степени активности в зависимости от концентрации эксграгента и продолжительности введения. Экстракты, полученные на 70% этаноле обладают большей противосудорожной активностью по сравнению с. экстрактами на 40% этаноле. Курсовое введение в течение 3-х суток существенно повышает их противосудорожную активность. Наиболее активными являются экстракты фил.тодоце, рододендрона остроконечного и р. камчатского, арктоуса и багульников.

Влияние водных экстрактов на выделительную функцию почек. Одной из актуальных проблем медицинской науки и практического здравоохранения является профилактика и лечение почечных заболеваний, нормализация экскреторной функции почек. К сожалению перечень лекарственных средств растительного происхождения, положительно влияющих на диурез и выделительную функцию почек, очень ограничен, а в официнальной медицине представлен только двумя видами, применяемыми в качестве диуретиков - толокнянкой и брусникой. Отвары из листьев указанных видов сырья используются при различных нефропатнях септичесой этиологии в качестве антиуросептических и диуретических средств. Исходя из многочисленных литературных данных; перечисленные фармакологические свойства связаны с содержанием арбутина и других фенольных соединений.

Представители' семейства вересковые, произрастающие на территории Сибири, и Дальнего Востока, и содержащие весь комплекс полифенольных . соединений, ответственных за уросептинеский и диуретический эффект, на этот вид' фармакологической активности практически не изучены. Данное обстоятельство, а также сходство в химическом составе толокнянки и представителей изучаемых нами видов, широкое использование их в народной медицине Сибири и Дальнего Востока при почечных заболеваниях послужили основанием исследования.

Изучено влияние водных экстрактов 21 вида семейства вересковые на суточный диурез и экскреторную функцию почек крыс. Сухие экстракты были получены методом дробной мацерации на кипящей водяной бане с последующей конвекционной сушкой.

Исследованные нами водные экстракты представителей семейства вересковые оказали различную степень диуретической и экскреторной активности.

Экстракты 13 видов показали в эксперименте статистически достоверные изменения диуреза а экскреторной функции почек крыс.

Луазелеурня и хамедафне представляют интерес в плане дальнейшего изучения антидиуретической и антинатриуретическои активности.

Экстракты из листьев, филлодоце алеутской и 3-х видов Кассиопей (к. Редовского, к. плауновндная и к. четырехгранная) проявили более высокую диуретическую активность в сравнении с экстрактом из официнального растения - толокнянки. Указанные растения представляют интерес для дальнейших углубленных химико-фармакологических исследований в качестве потенциальных растительных диуретиков.

Результаты исследования диуретической активности багульника болотного также показали, что все исследуемые суммарные комплексы обладают умеренным диуретическим действием в узком диапазоне доз (0.1 -0.005 мл/кг).

Результаты биохимического • анализа -выделенной мочи свидетельствуют о том, что суммарные извлечения багульника болотного не оказывает отрицательного действия на функциональную деятельность почек даже в повышенных дозах.

Аитигрибковые свойства. Одним из наиболее важных направлений в медицинской науке и практике является совершенствование терапии грибковых заболеваний кожи (микозы). Обусловлено это тем, что микозы отличаются склонностью к хроническому течению и определенной устойчивостью даже к самым совершенным методам лечения. По данным ВОЗ, не менее 20% населения земного шара страдает микозами, а в отдельных регионах (в том числе в России)' отмечается тенденция к росту грибковых заболневаиий. Особенно высок процент заболеваемости у шахтеров, металлургов, военнослужащих (60-80%), работников сельского хозяйства (1519%).

Практическая микология сегодня располагает достаточно большим ассортиментом противогрибковых средств (жпорал, клотримазол, миконаюл. гризеофульвнн, ламизин и др.), однако многие из них, особенно при оральном применении отличаются побочными эффектами в виде диспепсии, гепато-, нефротоксического и тератогенного 'действия. При местной терапии возможны аллергические реакции. Поэтому они противопоказаны при заболеваниях печени, почек, а также при беременности, лактации. Во время лечения требуется врачебный контроль за картиной крови, функциональным состоянием печени и почек.

Учитывая остроту проблемы грибковых заболеваний и известные преимущества лекарственных средств растительного происхождения мы сочли рациональным провести поиск эффективных противогрибковых средств среди представителей семейства вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока.

Ряд отечественных ученых отмечают что в этом плане перспективной группой БАВ являются эфирные масла. Другие, считают что наибольшую противогрибковую активность проявляют фенольные соединения (особенно фенолокислоты) и полисахаридный комплекс. Наши исследования показали, что в растениях семейства вересковые все выше упомянутые группы БАВ накапливаются в заметных количествах. Кроме того коренным населением Сибири и Дальнего Востока для лечения грибковых поражений кожи используются некоторые представители семейства вересковые.

Используя различные фитохимические приемы и методы из воздушно-сухого сырья 29 видов семейства вересковые получали суммарные комплексы и индивидуальные вещества.

Всего было получено около 270 условных препаратов. Их антигрибковая активность исследовалась в условиях. in vitro методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде Сабуро. В качестве тест-микроорганизмов использовали Trichophyton rubrum, Trychophyton menlagrophyles, Microsporum canis. Aspergillus niger и Candida albicans. Оценку антигрибковых свойств исследуемых комплексов и индивидуальных веществ проводили на фоне препаратов . сравнения (нитрофунгин и сангвиритрин).

Основные результаты выполненных исследований представлены в таблице 4. Следует отметить, что в таблицу нами включены только те объекты, БАВ которых ингибнровали рост отдельных грибов в концентрациях, не превышающих 31,2мкг/мл. Растения, суммарные комплексы которых проявляют активность в концентрациях выше 31,2мкг/мл, в таблицу не внесены и являются неперспективными для практического использования в качестве источников противогрибковых средств.

Анализируя представленные в таблице 4 данные, можно отметить, что в перспективных концентрациях суммарные комплексы и индивидуальные

Антигрнбковая активность суммарных комплексов и индивидуальных веществ, выделенных из растений семейства вересковые (мкг/мл).

Тест • грибы

Источник выделения Исследуемый препарат 1 richoplyton rubrum rnchplyton mentagrophytes Microsporum canis Aspergillus niger Candida albicans

Арктоус альпийский Водный зкстракт 1/15.7 1/7.9 1/15.7 1/1000 1/1000

Кассиопея Редовского ЦолныП экстракт i/15.7 1/125 1/31.7 1/1000 1/1000

Багульник ролотный Декатированное эфирное масло 1/62.5 t/15.7 1/15.7 1/1000 1Д000

Эмульгированное • эфирное наело 1/7.8 1/62.5 1/3.94 1/1000 [/1000

Гексановый экстракт 1/31.7 1/62.5 1/31.7 1/1000 1/1000

пек 1/7.8 1/7.8 1/3.9 H/a и/а

Багульник крупнолистный Дскшгшрованное эфирное масло 1/3.94 1/62.5 1/15.7 1/250 1/500

Рододендрон Гексановый экстракт 1/31.7 1/62.5 1/31.7 1/1000 l/IOOO

даурский 'Эфирный экстракт 1/31.7 1/62.5 1/31.7 1/1000 1/1000

СпиртозыП экстракт 1/31.7 1/62.5 1/62.5 1/1000 1/1000

Рододендрон остроконечный - 'Эмульгированное эфирное пасло 1/7.9 1/7.9 1/7.9 1/1000 1/1000

ч пек 1/7.9 1/7.9 1/7.9 1/1000 l/IOOO

Сумма фенолкарбо-новых кислот 1/62.5 1/250 1/31.7 1/1000 l/IOOO

Гиперо»ид 1/5Q0 1/62.5' 1/7.9 1/1000 1/1000

Мирицетин 1/62.5 1/31.7 1/31.7 l/IOOO 1/1000

Рододендрон сихотинский Декантированное эфирное масло 1/7.9 1/125 1/31.7 1/1000 i/1000

Гексановый экстракт 1/7.9 1/7.9 „ 1/7.9 l/IOOO 1/1000

пек 1/62.5 1/62.5 1/250 1/1000 1/1000

Препараты Нитрофунгин 1/7.9 1/31.7 1/15.7 1/7.8 1/31.7

сравнения Сантвиритрин 1/15.7 1/15.7 1/15.7 1/15.7 1/15.7

вещества, выделенные in растений семейства вересковые, действуют только на возбудителей дерматофитий. При этом более высокую чувствительность к исследуемым препаратам проявляют Trichophyton rubrum и Microsporum canis. Из исследуемых комплексов выделяются: эфирные масла и гексановые извлечения из сырья рододендрона даурского, р. остроконечного, р. сихотинского, багульника болотного и б. крупнолистного.

Экспериментально было установлено, что после отделения монотерпеновых фракций из эмульгированных ЭМ рододендронов фунгнстатическая активность последних значительно повышается.

Весьма перспективную противогрибковую активность проявили также водные извлечения из арктоуса альпийского и полисахаридпый комплекс из рододендрона остроконечного и багульника болотного. Информации по химико-фармакологическому изучению полисахаридного комплекса багульника болотного в доступной литературе нами не обнаружено. Резуьтаты исследования свидетельствуют о том, что ПСК, как и эфирное масло не эффективны в отношении кандидоза и аспергиллеза. Водорастворимая фракция полисахаридного комплекса и фракция пектиновых веществ в перспективных дозах задерживают рост возбудителей дерматофитий. После обработки этих фракций 70% этанолом, полисахаридпый комплекс практически потерял антифунгальную активность, что позволяет сделать заключение об отсутствии прямого участия полисахаридов в механизме антифунгального действия. В спиртовом извлечении хроматографически были обнаружены оксикумарины - эскулин, эскулетин. умбеллиферон, скополетин, а также фенолокислоты - кофейная, п-. кумаровая, ванилиновая, хлорогеновая, которые по литературным данным обуславливают антифунгальный эффект.

Противовоспалительные и ранозаживляющие свойства водно-спиртовых экстрактов. Нами изучены противовоспалительные и репаративные свойства водно-спиртовых экстрактов на 40% и 70% этаноле из листьев 15 наиболее распространенных видов этого семейства (табл. б).

Анализируя полученные данные можно сделать заключение о том, что экстракты всех исследуемых растений в разной степени, обладают антиэксудативной активностью. Наиболее выражено это свойство у экстрактов из рододендрона даурского, р. сихотинского, р. золотистого, луазелеурии и арктоуса альпийского. Экстракты из этих растений на пике воспалительной реакции (3 часа) угнетают развитие отека в среднем на 52-54% и значительно превосходят фармакопейный эталон - бутадион.

Противовоспалительная активность 40% водно-спиртовых экстрактов при каррагениновом отеке (М±ш, п=6).

Доза Увеличение объема лапы (%) после

. Препарат мг/кг введения каррагеннна

1 час 2 часа 3 часа 4 часа

Бутадион

(контроль) 50 20.112.1 50.313.4 92.417.2 79.115.6

Рододендрон

даурский 50 19.211.3 21.213.6 40.112.8 58.211.6

Р.камчатский 50 19.113.4 30.211.4 61.312.9 76.114.8

Р.Шлиппенбаха 50 18.211.6 48.313.6 58.210.6 61.711.6

Р.золотистый 50 17.212.7 30.112.4 48.813.1 59.212.4

Р.остроконечный 50 16.111.7 51.212.9 68.714.2 58.111.4

Р.сихотпнскип 50 15.312.4 29.111.8 46.211.4 50.111.6

Филлодоце

голубая 50 16.711.4 30.212.7 80.111.3 76.412.4

Ф.алеутская 50 15.411.6 21.313.7 87.714.1 78.212.4

Кассиопея

плауновндмая 50 20.112.4 49.812.1 91.411.6 71.311.08

К.вер есковидная 50 19.111.1 43.111.6 85.311.7 70.111.4

Хамедафне •

чашечная 50 • 18.112.5 41.612.7 81.113.2 68.712.9

Луазелеурня ;

лежачая 50 14.211.8 31.212.6 46.211.4 58.111.7

Арктоус

альпийски» 50 14.811.4 28.211.6 40.411.7 38.111.9 .

Андромеда * 50 " 18.112.7 20.113.3 38.611.9 40.214.7

Анализируя данные таблицы 6 можно тоже отметить, что псе тиш, извлечений багульника болотного, собранного в Европейской части России } в Сибири (окр. г. Томска) обладают выраженной антиэксудативной активностью, причем экстракт из шрота, полученного после извлечение эфирного масла перегонкой с водяным паром, мало уступает противовоспалительной активности экстракта из нативного сырья. Наиболе« активны экстракты на 40% этаноле.

Известно, что по степени выраженности воспалительной реакции организма, можно судить об уровне его регенсрационной способности. Общая воспалительная реактивность организма, проявляющаяся при повреждении местным раневым воспалением, связана со всеми защитными адаптационно-компенсаторными механизмами организма, в т.ч. с его регенеративной способностью. Нарастание местных воспалительных реакций и осложнения раневого процесса инфекцией требует создания в ране наилучших условий регенерации и воздействия на патогенные микроорганизмы с целью подавления их жизнедеятельности.

Учитывая, что исследуемые объекты содержат эфирные масла и целый комплекс фенольных соединений и обладают выраженным противовоспалительным, противогрибковым и антимикробным действием можно было предположить наличие ранозаживляюшей активности.

Сроки заживления ран у исследованных экстрактов из 14 видов вересковых на уровне облепнхового масла. Более выраженные сроки заживления (28-30%) характерны для экстракта рододендрона даурского, р.сихотинского, Кассиопеи плауновидной, арктоуса альпийского, луазёлеурин и андромеды.

Лечение кожных дефектов апликацней сухих экстрактов багульников показало, что 5% мазь достоверно ускоряет заживление экспериментальных ран у крыс, стимулируя репаративные процессы. Однако указанные препараты не обнаружили преимущества перед 10% мазью цигерола. Наиболее активными оказались экстракты на 40% этаноле, которые ускоряют заживление ран на 28-30%. 5% мазь с экстрактом багульника подбела практически не уступает, а экстракт из побегов багульника крупнолистного (40%) превосходит аналогичное действие эталоного препарата - мазь цигерола.

Результаты химнко-фармакологического исследования растений семейства вересковые свидетельствуют о том, что виды зтого семейства (багульники, рододендроны подрода ШюёогаБ^т и др.) являются перспективной группой растений для углубленного исследования с целью создания на основе их БАВ новых лекарственных препаратов диуретического, противогрибкового и противовоспалителыюого действия.

Противовоспалительная активность водно-спиртовых экстрактов из нативного сырья и шрота багульника болотного в дозе 50 мг/кг(п=10).

Вид Суммарное Процент угнетения

сырья извлечение отека по отношению

(высушенное) к контролю (%)

Промышленный образец

Нативное водное 24(Р=0.015)

сырье 40% спирта 52 (Р=0.000)

70% спирта 41 (Р=0.001)

Шрот водное 23 (Р=0.015)

40% спирта 42 (Р=0.001)

70% спирта 38 (Р=0.001)

Сибирский образец

Нативное водное 34 (Р=0.001)

сырье 40% спирта 51 (Р=0.000)

70% спирта 44 (Р=0.001)

Шрот водное 28 (Р=0.002)

40% спирта 46 (Р=0.000)

70% спирта 36 (Р=0.001)

.Собраное на о. Сахалин

Нативное

сырье 70% спирта 50 (Р=0.000)

Бутадион 54 (Р=0.000)

ВЫВОДЫ.

1. Впервые осуществлено системное исследование растений семейства вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока с целью выявления перспективных источников биологически активных веществ и растений с диуретической, антифунгальнон и другими видами биологической активности. Исследован 31 вид из 15 родов, т.е. 80% видового состава семейства вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока.

2. Дана количественная н качественная оценка биологически активных веществ. Установлено, что растения семейства вересковые синтезируют преимущественно две группы БАВ - фенольные соединения и вещества изопреноидного характера.' Алкалоиды, аитрацепроизводные и сердечные гликозиды не обнаружены.

3. Содержание флавоноидов колеблется от I до 6%. Наиболее богаты флавоноидамн (4-6%) касснопея четырехгранная, арктерика низкая и рододендрон сихотинский. Содержание кумаринов достигает 6.5% (рододендрон сихотинский). Высокое содержание арбутина (16% и более) характерно для толокнянки, филлодоце голубой и багульника-подбела.

4. Из исследуемых растении выделено в индивидуальном виде 12 веществ фенольной природы (арбутин, эскулин, эскулетин, умбеллиферон, скополстин, кумарин, кверцегни, кемпферол, мнрнцетин, азалеатин, гиперозид и пвикулярнн). Их природа установлена физико-химическими, хромагографическими и спектральными методами исследования.

5. Методом ВЭЖХ изучен качественный состав и содержание фенолкарбоновых кислот у 27 видов семейства вересковые. Макрокомпоиситамп у большинства растений семейства вересковые являются фенолокислогы - производные бензойной кислоты (протокатеховая и салициловая). Оксикоричные кислоты (коричная, о-кумаровая, синаповая, феруловая, п-кумаровая, кофейная) в значительно меньших количествах.

6. Эфирные масла представлены как декантированным, так и эмульгированным в отгонных водах эфирным маслом. Наиболее перспективными по содержанию эфирных масел является род багульник (0.5-3.5% и более), рододендроны (0.5-1.5%), филлодоце (1-1.5%), гаультерня (более 1%). Установлено, что ЭМ локализуются не только в специализированных секреторных образованиях, но и в живых клетках других тканей.

7. Впервые был изучен состав эфирного масла рододендрона остроконечного, р. сихотинского, филлодоце голубой и филлодоце алеутской, гаультерин Мнкеля. Макрокомпонентами являются лимонен, борнилацетат, карнофнллен, а-гумулен, алло-аромадендрен и р-бизаболен.

8. Фармакологическому исследованию были подвергнуты суммарные комплексы (водные, водно-спиртовые извлечения), эфирные масла н индивидуальные компоненты 28 видов сем. вересковые флоры Сибири и Дальнего Востока.

9. Водные экстракты багульника болотного, филлодоце алеутской, кассиопеи Редовского, Кассиопеи плауновидной и Кассиопеи четырехгранной по диуретической и экскреторной активности превосходят аналогичный экстракт' из толокнянки и могут быть рекомендованы для углубленного фармакологического исследования в качестве перспективных природных диуретиков.

10. Перспективными для внедрния в медицинскую практику являются рододендрон даурский, арктоус альпийский, багульник болотный и багульник крупнолистный, водно-спиртовые экстракты которых угнетают каррагеннновый отек у крыс на уровне бутадиона, а репаративный их эффект превосходит мазь Вишневского и 10% мазь цигерола.

11." Наиболее активный антигрибковый эффект в отношении дерматофитий проявили водные экстракты арктоуса альпийского, багульника болотного, гексановые экстракты и эфирные масла рододендрона даурского, рододендрона сихотинского, рододендрона остроконечного и багульника болотного (МПК 7.8-15 мкг/мл).

12. На основании данных анатомо-морфологического и химического анализа багульника болотносо уточнена характеристика подлинности сырья, показатель и норма качества сырья, которые предложены для включения в качестве дополнений в действующую, ФС.

13. Впервые показана и обоснована возможность комплексного использования сырья багульника болотного. Предложено в действующую ФС "Побеги багульника болотного" внести рекомендацию использовать сырье по новому назначению (диуретическое и противовоспалительное средство) и стандартизовать сырье по содержанию флавоноидов. Разработан проект ВФС на шрот багульника болотного.

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЮЩИЕ РАБОТЫ:

1. Аитигрибксшая активность экстрактов некоторых растений Сибири и Дальнегго Востока/ С.Е.Дмитрук, С.И.Дмитрук, М.А.Салышкова и др.// Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1989., Т.2. - С.52-53.

2. Фармакогностическое изучение Кассандры./ М.В.Клокова, Т.Л.Кудинова, Е.А.Сои, М.В.Белоусов// Лекарственные растения Алтайского края. - Томск, 1986. - С.73-76.

3. Исследования антигрибковых свойств эфирных масел из растений Сибирской флоры./ С.Е.Дмитрук, И.Н.Гуськова", С.И.Дмитрук, М.В.Белоусов// Сб. тезисов Всесоюзного съезда фармацевтов. - Казань, 1986. -С.435-436.

4. Перспективы использования Снбирско-дальневосточнмх видов вересковых в качестве противогрибковых и диуретических средств./ Т.П.Березовская, М.В.Белоусов, Н.И.Белоусова, М.В.Клокова, В.М.Старченко //Материалы V Всероссийского съезда фармацевтов. - Ярославль, (987 - С. 429-430.

5. Анализ данных народной медицины Сибири и Дальнего Востока./ Т.П.Березовская, М.В.Белоусов, М.В.Клокова и др.//Матсриалы II республиканской конференции по медицинской ботанике. - Киев, 1988. - С. 1314.

6. Белоусов М.В. Эфирные масла снбирско-лальневосточных видов вересхвых и их противогрибковые свойства.// материалы II республиканской конференции по медицинской ботанике. - Киев, 1988. - С. 199-200.

7. Некоторые итоги изучения антигрибковых свойств эфирномасличных растении Сибири./ С.Е.Дмитрук, Е.Н.Сальникова, С.И.Дмитрук и др.// "Научно-технический прогресс в медицине и биологии." - Томск, 1988. - С. 9091.

8. Химико-фармакологическое исследование растений сем. вересковые./ М.В.Белоусов, В.К.Горшкова. М.В.Клокова и др.// Новые лек. препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. - Томск, 1989. - С. 22-23.

9. Белоусов М.В., ДмитрукС.Е., Белоусова Н.И. Антифунгальная активность Снбирско-лальневосточных видов сем. вересковые. //Фитонциды. Бактериальные болезни растений. - Киев-Львов, 1990, ч.Т. - С. 17.

10. Дмитрук С.Е„ Белоусов М.В., Сальникова E.H. Антигрибковые свойства растении и зависимости ог филогенетических и экологических факторов.// Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке. - Томск, 1991. -С. 52-54.

11. Белоусов М.В. ФеполкарбоновЫе кислоты рододендрона даурского, р. сихотииского.//Состояние и преспектнвы развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке. - Томск, 1191. - С. 112-114.

12. Белоусов М.В., Таран Д.Д. Химико-фармакологическое «следование аркториуса альтийского.// "Поиск, создание и изучение новых лекарственных средств растительного и синтетического происхождения11 - Бийск: НПО "Алтай", 1993.-С. 51-53.

13. Белоусов М.В., Левашова И.Г., Комиссаренко Н.Ф., Старченко В.М. Содержание арбутина в Сибирско-дальневосточных видах сем. вересковые. //Растительные ресурсы. 1992, Т. 28, вып. 4. - С. 53-55.

14. Березовская Т.П., Белоусов М.В., Старченко В.М. Анатомо-морфологическая характеристика сибирско-дальневосточных представителей рода Cassiope D.Don, и Harrimanella Соу.//Депонирована в ВИНИТИ 30.07.91, №3268-В91,-11с.

15. Белоусов М.В., ДмитрукС.Е., Березовская Т.П., Комисаренко Н.Ф. Фитотерапевтические возможности биологически активных веществ Сибирско-дальневосточных видов сем. вересковые. //Материалы 1-ого международного конгресса "Традиционная медицина ' и питание: Теоретические и практические аспекты. - Москва, 1994. - С. 138.

16. Фармакогностические иследования гаультерии Микеля (Gaultheria miqueliana Takeda)/T.n.Березовская, М.В.Белоусов, ВН. Тихонов.// Депонировано в ВИНИТИ 07.06.94, № 1388-В94. - 9с.

17. Сравнительная анатомо-морфалогическая характеристика рододендронов подрода Rhodorastrum (Maxim.) Drude./Т.П.Березовская, М.В.Белоусов, В.Г.Башкова и др.//Депонирована в ВИНИТИ 07.06.94, № 1387-8.94. - 17с.

18. Содержание микроэлементов и антимикробная активность природных комплексов БАВ.// С.Е.Дмитрук, С.И.Дмитрук, М.В.Белоусов и др.// Решение актуальных задач фармации на современном уровне. - Москва, 1994. - С. 245246.

19. Белоусов М.В., Комиссаренко Н.Ф., Березовская Т.П., Точкова Т.В. Содержание флавоноидов и кумаринов в сибирско-дальневосточных видах сем. Ericaceae.// Раст. ресурсы, 1994, вып. 4. - С. 44-47.

20. Белоусов М.В., Слижов Ю.Г. Монокарбоновые кислоты эфирного масла Rhododendron mucronulatum и Rh. sichotense.// Химия природк. Соед. 1994, №6. - С.<£25-826.