Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Сравнительное фармакогностическое исследование растений рода Sphagnum и перспективы их использования

На правах рукописи

□0345 1930 Дмитрук Вадим Николаевич

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РАСТЕНИЙ РОДА SPHAGNUM И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь-2008

003451930

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук БЕЛОУСОВ Михаил Валерьевич

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор ПЕТРИЧЕНКО Василий Михайлович

доктор фармацевтических наук, профессор ТУРЕЦКОВА Вера Феопеновна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «25» ноября 2008 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, д. 48

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46

Автореферат разослан «/1» 2008 г.

8.01

Т.В. Ярыгина

Ученый секретарь диссертационного совета Д 2| доктор фармацевтических наук, профессор

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Исторически всеобщее признание сфагновый мох получил как высокоэффективный перевязочный материал. Его применение основывалось на высокой гигроскопичности дерновины, значительно превосходящей аналогичные свойства ваты, а так же наличии свойств, способствующих ранозаживлению. Но, несмотря на многовековую историю применения сфагновых мхов в народной медицине, ни один из видов до сих пор не является официнальньш. Информация о химическом составе растений рода Sphagnum носит фрагментарный несистематизированный характер, а по представителям флоры Западной Сибири практически отсутствует. В то же время, литературные данные о биологической активности извлечений из растений рода сфагнум указывают на их многостороннее, комплексное действие на организм. Эти сведения обосновывают перспективность использования представителей рода сфагнум для разработки новых высокоэффективных и малотоксичных лекарственных средств, что является актуальной проблемой современной фармации.

Таким образом, недостаточная изученность сфагновых мхов определяет необходимость их комплексного фармацевтического изучения.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является обоснование возможности практического использования в медицине наиболее распространенных представителей рода Sphagnum флоры Томской области.

Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:

1. Дать оценку ресурсного потенциала наиболее распространенных видов сфагновых мхов флоры Томской области на примере исследуемого участка, изучить особенности восстановления их популяции и определить перспективный вид для дальнейшего исследования.

2. Определить диагностические признаки сфагновых мхов флоры Томской области на основе их сравнительных анатомо-морфологических исследований для выявления возможных подмесей к перспективному виду.

3. Провести изучение химического состава основных групп БАВ перспективного вида сфагнового мха.

4. Провести оценку острой токсичности и биологической активности суммарных комплексов, выделенных из перспективного вида

сфагнового мха.

5. Разработать методики стандартизации качества его сырья.

6. Разработать проект фармакопейной статьи на сырье («Дерновина сфагнового мха»).

Научная новизна исследования. Впервые дана оценка ресурсного потенциала 7 наиболее распространенных видов сфагнового мха на территории Томской области на примере исследуемого участка и предложена рациональная схема их практического использования. Для идентификации наиболее распространенных и перспективных для применения в медицинской практике видов сфагновых мхов Томской области определены макро- и микроскопические диагностические признаки.

На основании оценки ресурсного потенциала сфагновых мхов и химико-фармакологических исследований суммарных комплексов БАВ выявлен перспективный для внедрения в медицинскую практику вид растений рода Sphagnum - S. fuscum (Shimp) Klinggr (сфагнум бурый). Впервые подробно изучен состав его фенольного комплекса и мономерного состава ПСК. Экспериментально доказано, что суммарный комплекс, выделенный из дерновины сфагнум бурый обладает противовоспалительной и анальгезирующей активностью, ранозаживляющими свойствами и противомикробным действием. Для предложенного биологически активного комплекса S. fuscum экспериментально доказана его безвредность и обоснованы показатели норм качества сырья.

Практическая значимость работы. Разработаны и предложены методики стандартизации сырья сфагнума бурого. Результаты диссертационного исследования используются в научных изысканиях ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава и внедрены в учебный процесс ГОУ ВПО СамГМУ Росздрава и ГОУ ВПО «Самарский государственный университет» в виде учебного пособия для студентов фармацевтических и биологических факультетов «Характеристика сфагновых мхов флоры Томской области», утвержденного и рекомендованного к печати ЦКМС ГОУ ВПО СамГМУ Росздрава (протокол № 2 от 21 ноября 2007 г.), (акты внедрения от 5.12.07 г и 8.12.07 г.). Разработана технологическая Инструкция по сбору и сушке дерновины мха сфагнума бурого. Для внедрения предложен разработанный проект фармакопейной статьи на сырье «Дерновина Сфагнума бурого».

На защиту выносятся следующие положения: а) экспертная оценка ресурсного потенциала 7 видов сфагнового мха (5. fuscum (Shimp) Klinggr., S. balticum (Russ.) Russ. ex C. Jens., S.

papillosum Lindb., S. lindbergii Schimp. ex Lindb., S. fallax (Klinggr.) Klinggr., S. magellanicum Brid., S. angustifolium (Russ. ex Russ.) C. Jens.), результаты их сравнительного анатомо-морфологического исследования;

б) результаты изучения химического состава БАВ, содержащихся в дерновине S. fuscum, их токсических свойств и биологической активности;

в) экспериментальное обоснование методик стандартизации качества сырья дерновины S. fuscum.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на межкафедральных научных семинарах фармацевтических факультетов СибГМУ г Томск и СамГМУ г. Самара в 2004-2006 г., на заседании ученого совета СамГМУ. . Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научной конференции, посвященной 50-летию Алтайского гос. ун-та, (г. Барнаул 2004 г.), на всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005 г.), на 2-й всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2005 г.), на научной школе «Болота и биосфера» (Томск, 2005 г.), на всероссийской научно практической конференции поев. 100-летию со дня рождения проф. JI. Н. Березнеговской (Томск, 2006 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, из них 2 в рекомендованных ВАК изданиях.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы и четырех глав собственных исследований, изложенных на 163 страницах компьютерного набора, иллюстрирована 47 рисунками, 37 таблицами, содержит 178 источника литературы, в том числе 17 на иностранных языках, а также 8 приложений.

Работа выполнена на базе кафедр химии и фармакогнозии, ботаники и экологии Сибирского государственного медицинского университета, кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета.

Отдельные разделы работы по идентификации химического состава объектов исследования были выполнены на базе Института органической химии СО РАН (г. Новосибирск).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

Объектами для исследования служили 1005 дерновинок 7 видов растений рода сфагнум, собранные в экспедиционных условиях на территории Томской области в 2003-2006 годах. Сбор сырья производился ручным способом в естественных местах обитания видов. При определении видов сфагновых мхов использовали «Определитель листостебельных мхов Томской области», «Определитель сфагновых мхов СССР» и «Флору мхов средней части европейской России». Исследования урожайности сфагновых мхов проводили с помощью метода проективного покрытия. Морфолого-анатомические исследования сырья проводились по методикам, изложенным в ГФ XI, вып.1.

Для обнаружения, разделения, идентификации, выделения и количественного определения БАВ в исследуемых объектах использовали различные качественные реакции, спектральные, хроматографические и другие общепринятые методы анализа.

Объекты для фармакологических исследований выделяли, используя технологические приемы в соответствии с требованиями ГФ XI.

Испытание микробиологической чистоты проводилось по методике, изложенной в ГФ XI издания, вып. 2, стр. 193 и Изменением № 3 к ГФ XI от 19.06.2003 г.

Для анализа элементного состава использовали метод нейтронно-активационного анализа. Работу проводили на ядерном реакторе «Спутник» (г. Томск).

Исследования биологической активности проведены на 400 белых беспородных мышах-самцах массой 18-22 г и 100 белых беспородных крысах-самцах массой 180-200 г, полученных из питомника «Рассвет» НПО «Вирион» (г. Томск). Все манипуляции с животными были проведены в соответствии с правилами гуманного обращения с животными, регламентированными «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденные приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г, ФЗ «О защите животных от жестокого обращения» от 1.01.1997 г, а также положениями Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 18.03.1986 г.).

Острую токсичность, противовоспалительную и анальгезирующую активности, ранозаживляющие свойства исследуемого экстракта исследовали согласно Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2000 г.).

Статистическую обработку экспериментальных данных

проводили общепринятыми методами с определением средней арифметической (М) и ошибки средней арифметической (т). Достоверность результатов оценивали параметрически по t-критерию Стьюдента. Кроме того, использовали пакет статистических программ «Statistica for Windows 7.0».

Оценка ресурсного потенциала наиболее распространенных видов растений рода Sphagnum на территории Томской

области

При заготовке сырья дикорастущих растений возникает необходимость решения целого ряда экологических и биологических вопросов, в первую очередь проведения научно обоснованной оценки ресурсного потенциала. Кроме того, для правомочности рекомендаций к объемам и правилам заготовки сырья, необходимо также оценить способность популяции к восстановлению.

Для решения этих задач нами были проведены 4-х летние полевые исследования на территории болот Шегарского и Бакчарского районов Томской области.

Определение особенностей роста и возобновляемости сфагновых мхов

В результате проведенных нами исследований процессов регенерации сфагновых мхов через один год после изъятия дерновины на площадках размером 25x25, 50x50 и 100x100 см было зафиксировано активное вегетативное возобновление для всех исследуемых видов. Скорость восстановления имеет четкую зависимость от вида мха и от размеров нарушенного участка. Быстрее всего происходит возобновление дерновины топяных мхов: S. balticum, S. papillosum, S. lindbergii, S. fallax на площадках 25x25 см и 50x50 см. Дерновины сфагновых мхов «рямовых» сообществ: S. fuscum, S. magellanicum, S. angustifolium восстанавливаются дольше. При этом заметна четкая зависимость не только от площади, но и от глубины изъятия дерновины.

Восстановление нарушенного участка протекает «наползанием» дерновины, путем ветвления сфагновых дерновинок по краю нарушенного участка, а также за счет регенерации оставшихся нижних частей дерновины путем формирования придаточных почек на стебле вблизи места отхождения стеблевых листьев.

Наибольшая скорость восстановления характерна для топяных видов S. balticum, S. papillosum, S. lindbergii, S. fallax, которая составила 3 года, а для представителей рослого ряма S. angustifolium и S.

та^еИатсит - 4 года. Восстановление дерновины у /шсит при выборке сырья до торфа за 4-летний период наблюдений составляет 6070%, но если производить заготовку до очеса — полное восстановление происходит всего за 2 года.

Определение ресурсов сырья сфагновых мхов в Томской области на примере исследуемого участка «Плотниково»

Определение запасов сфагновых мхов нами проводилось для 7 наиболее распространенных на территории Томской области видов на участке «Плотниково», методом определения урожайности по проективному покрытию. Величины запасов сфагновых мхов представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Урожайность и биологический запас наиболее распространенных видов сфагновых мхов на исследуемом участке

Вид рода Sphagnum Урожайность (т/га) Биологический запас, (тыс. т) Эксплуатационный запас, (тыс. т) Объем ежегодной заготовки, (тыс. т)

S. fuscum 33,7 ±3,2 489,4 404,5 36,8

S. balticum 6,8 ± 0,6 28,4 23,8 6,0

S. papillosum 11,3 ± 1,3 48,4 38,4 9.6

S. lindbergii 3,2 ± 0,6 14,6 10,0 2,5

S.fallax 1,0 ±0,2 4,6 ЗД 0,8

S. angustifolium 7,5 ±0,8 28,5 23,0 4,6

S. magellanicum 7,1 ±0,7 26,7 21,9 4,4

Как видно из представленных данных, наибольшую урожайность имеют S. fuscum — 33,7 т/га и S. papillosum - 11,3 т/га.

Высокие показатели S. fuscum объясняются особенностями вида и его местообитанием. Вид имеет очень плотную дерновину. Очес этого растения в условиях ряма может достигать 15-50 см, так как данный вид создает сильно кислую среду (до рН 2,5), что значительно замедляет разложение его нижней части.

Всего по исследуемому участку «Плотниково» эксплуатационный запас 7 наиболее распространенных видов составляет 524,7 тыс. т, а объем ежегодных заготовок - 64,7 тыс. т.

Сравнительный анализ анатомо-морфологических признаков исследуемых видов сфагновых мхов с аналогичными видами,

произрастающими в европейской части России и в арктической зоне не выявил качественно-значимых анатомо-морфологических отличий, что позволяет установить единые требования к определению подлинности сырья при его заготовке на всей территории РФ.

На основании оценки ресурсного потенциала сфагновых мхов на примере исследуемого участка «Плотникове», в том числе биологического и эксплуатационного запасов, объема ежегодных заготовок, а так же литературных данных по использованию сфагнового мха, нами выбран наиболее перспективный объект - сфагнум бурый, для дальнейшего его химико-фармакологического исследования.

Качественный и количественный анализ содержания основных групп БАВ в сфагнуме буром

Общий фотохимический анализ дерновины сфагнума бурого нами был проведен с использованием общепринятых качественных реакций (табл. 3).

Таблица 3 — Результаты качественного и количественного анализа на основные группы БАВ в сфагнуме буром

Биологически активные вещества Результат анализа Содержание % от массы абсолютно-сухого сырья

Выход экстрактивных веществ 6,06 ± 0,30

Фенольные соединения, в т.ч.: + 0,23±0,02

- флавоноиды + 0,04±0,01

- кумарины + 0,02±0,01

- дубильные вещества +- -

- фенолкарбоновые кислоты + 0,16±0,0]

Полисахариды, в т.ч.: + 2,88±0,12

- водорастворимые полисахариды 0,13±0,02

- пектиновые вещества 0,61+0,04

- гемицеллюлоза А 2,14+0,10

Сапонины - -

Антраценпроизводные - -

Алкалоиды +- -

Примечание: «+» - реакция положительная;

«-» - реакция отрицательная;

«-ь-» - положительная реакция слабо выражена.

Таким образом, в исследуемом объекте доминируют две группы соединений - полисахаридный комплекс и фенольные соединения, представленные преимущественно фенолкарбоновыми кислотами.

Исследование мономерного состава полисахаридов сфагнума бурого

Исследование моно- и дисахаридного состава водорастворимого ПСК для вида сфагнума бурого было проведено впервые. Для этого мы предварительно провели кислотный гидролиз ВРПС с помощью трифторуксусной кислоты, и полученный гидролизат триметилсилилировали с помощью триметилсилилимидазола, как наиболее часто используемого реагента силилирования Сахаров. Полученную смесь анализировали с помощью ГЖХ-МС, как наиболее информативного и чувствительного метода анализа для решения данной задачи. При идентификации использовали традиционные для метода параметры и библиотеку данных масс-спектров соединений данного класса

Полученные нами данные, представленные в таблице 4, совпадают с данными литературы о моносахаридном составе других видов сфагновых мхов только по наличию Б-ксилозы, Б-маннозы, Б-галактозы, Б-глюкозы и Б-глюкуроновой кислоты.

Кроме этого, установлено, что моносахаридный состав ПСК сфагнума бурого также представлен Ь-арабинозой, Ь-рамнозой и Б-манитолом, а дисахаридный - Б-мелибиозой, Б-лактозой и Б-мальтозой, наличие которых в ПСК сфагновых мхов ранее в литературе не отмечалось.

Наличие фруктозы и дисахаридов - сахарозы и раффинозы, найденных по данным литературы в других видах, в гидролизате ПСК сфагнума бурого установлено не было.

Помимо идентифицированных, в гидролизате присутствует компонент со временами удерживания 17.19 мин, структуру которого не удалось определить.

Фракционирование экстракта сфагнума бурого на этаноле 70% методом колоночной хроматографии

Для изучения химического состава фенольного комплекса из сфагнума бурого был получен экстракт на этаноле 70%, который разделяли методом колоночной хроматографии с использованием в качестве сорбента полиамида \Voelm (Германия).

Таблица 4 - Компонентный состав триметилсилилированного гидролизата ПСК сфагнума бурого по результатам ГЖХ-МС

Время удерживания, мин С ил ильные производные стандартных образцов Углевод, соответствующий стандартному образцу или его производное Время удерживания силилирован-ных компонентов ПСК сфагнума бурого Углевод, соответствующий компоненту или его производное

1 2 3 4 5

15.50-15.60 2,3,4,5-тетракис-О-(триметилсилил)-Ь-арабиноза Ь-арабиноза 15.57 Ь-арабиноза

15.66-15.69 6-дезокси-2,3,4,5-тетракис-0-(триметилсилил)-Ь-манноза Ь-рамноза 15.70 Ь-рамноза

16.53-16.65 2,3,4,5-тетракис-О-(триметилсилил)-О-ксилоза О-ксилоза 16.62 Б-ксилоза

- - - 17.19 438 [М]+(<1%), 217[С9Н2102812]+(60%), 204[С8Н20028и]+(100%), 191 [С7Н|9028Ь]+ (57%), 147[С5Н705]+(35%), 73[С3Н981]+(100%)

17.66-17.68 2,3,4,5,6-пентакис-О-(триметилсилил)-О-манноза О-манноза 17.72 О-манноза

18.23 2,3,4,5,6-пентакис-О-(триметилсилшт)-О-галактоза Б-галактоза 18.26 В-галактоза

Продолжение таблицы 4

1 2 3 4 5

18.50-18.52 2,3,4,5,6-пентакис-О-(триметилсилил)-О-глюкоза Б-глюкоза 18.60 Б-глюкоза

18.68-18.75 1,2,3,4,5,6-гексакис-О-(триметилсилил)-В-маннитол Б-маннитол 18.70 О-маннитол

19.44-19.56 2,3,4,5-тетракис-О-(триметилсилил)-О-глюкуроновой кислоты триметилсилиловый эфир Б-глюкуроновая кислота 19.45 О-глюкуроновая кислота

- - - 24.97 Б-мелибиоза, 6-0-[2,3,4,6-тетракис-0- (триметилсилил)- Р-Б- галактопира-нозил]-1,2,3,6- тетракис-О- (триметилсилил)-О- глюкопираноза

25.36-25.49 4-0-[2,3,4,6-тетракис-0-(триметилсилил)-Р-О-галактопиранозил]-1,2,3,6-тетракис-0-(триметилсилил-0-глюкопираноза Б-лактоза 25.46 Э-лактоза

25.64-25.70 4-0-[2,3,4,6-тетракис-0-(триметилсилил)-а-В-глюкопиранозил]-1,2,3,6-тетракис-0-(триметилсилил-В-глюкопираноза Э-мальтоза 25.74 Э-мальтоза

Фракции № 12, 13 и 14, из полученных 27, содержащие по данным ТСХ максимальное количество компонентов, были объединены и разделены на колонке с силикагелем Chemapol (L 40/100 мкм). В результате деления были получены 32 фракции, из которых № 3 (D1), 4 (D2), 5 (D3), 6 (D4), 9 (D5), 10 (D6), 14 (D7) и 16 (D8) отобраны для последующего исследования методами ВЭЖХ и ВЭЖХ-МС, а фракции № 19 и 20 объединены и разделены на колонке с полиамидом. Из полученной 51 фракции для ВЭЖХ и ВЭЖХ-МС были отобраны фракции № 2 (D10), 4 (DU), 8 (D12), 11 (D13), 16 (D14), 22 (DIS), 23 (D16), 28 (D17), 33 (D18), 39 (D19), 49 (D20) и 51 (D21).

Критерием отбора фракций являлась максимальная концентрация индивидуального компонента по данным ТСХ, наряду с минимальным содержанием примесей.

Анализ состава фенольного комплекса методами ВЭЖХ и ВЭЖХ-МС

При идентификации индивидуальных компонентов исследуемых фракций методами ВЭЖХ и ВЭЖХ-МС на жидкостном хроматографе с диодно-матричным УФ- и масс-селективным детекторами (Agilent 1100 Series LS/MSD) нами были использованы некоторые стандартные образцы фенолокислот, кумаринов и флавоноидов. При выборе предполагаемой структуры мы использовали следующие критерии: время удерживания исследуемых веществ; УФ-спектры и масс-спектры соответствующих пиков на ВЭЖХ; базы данных и обзорные статьи по основным спектральным и физико-химическим характеристикам природных соединений.

УФ-спектры компонентов в исследуемых образцах можно разделить по максимумам поглощения на четыре основных типа, характерных для: фенолкарбоновых кислот (галловая, сиреневая, ванилиновая, протокатеховая - 235-270 нм и 290-305 нм); гидроксикоричных кислот (кумаровая, кофейная, феруловая - 230-240 нм и 290-320 нм); кумаринов (230-250 нм и 290-360 нм); флавоноидов (кверцетин, рутин - 250-270 нм и 350-390 нм). Следовательно, основными компонентами исследуемой смеси могут являться производные этих классов соединений.

Методом ВЭЖХ мы провели первичный аналитический скрининг всех полученных фракций. Максимально информативными оказались данные при длине сканирующей волны 274 нм.

На основании анализа полученных УФ-спектров, фракции с высоким содержанием основного компонента (Dl, D3, D5, D6, DIO, D15,

D17, D19) нами были отобраны для дальнейшего анализа методом ВЭЖХ-МС. В результате ВЭЖХ-МС анализа, на основании УФ-спектров и данных величин m/z, нами был предположен ряд структур основных компонентов (табл. 5, 6,7).

Таблица 5 - Состав фракции D1 по данным ВЭЖХ-МС (в режиме ХИ APCI, Pos, Scan и APCI, Neg, Scan)

Время удерживания, мин m\z Предполагаемая структура Примечание

13.0113.22 152,1 3,4-дигидрокси-коричный спирт (кофейный спирт)

13.7014.01 192,1 Скополетин

14.4214.60 178,1 Эскулетин

15.9616.12 138,1 3,4-дигидрокси-бензальдегид

16.8717.00 180,1 218,2 248,2 Кофейная кислота (m/z 180,1) Смесь трех веществ, основной компонент с m/z, равной 218,2. На УФ-спектрах смеси имеются максимумы 240, 300 и 326 нм

17.6617.80 208,1 220,2 Ацетоксикофейный спирт (m/z 208,1) Смесь двух веществ, основной компонент с m/z равной 220,2. На УФ-спектрах смеси имеются максимумы в области 259 (более интенсивный) и 350 нм

20.3120.50 278,2 300.2 308.3 310,3 4-O-ß-D-рамнопиранозил-протокатеховая кислота или 4-O-ß-D- глюкопиранозил-4-гидроксибензойная кислота (m/z 300,2) Судя по масс-спектру в режиме APCI, Neg, Scan и УФ-спектру основным компонентом является соединение с m/z 300,2, и это соединение можно отнести к гликозиду фенолокислоты (макс, при 255 нм). В качестве примеси в данной смеси вероятно присутствуют гликозидированные производные умбеллиферона (m/z 308,2) и эскулетина (m/z 310,2) на что указывают УФ-спектры (макс, при 320 и 345 нм)

Время удерживания, мин m\z Предполагаемая структура Примечание

4.17-4.21 138,1 176,1 Тирозол (m/z 138,1) Максимум в УФ-спектре при 279 нм характерен для тирозола. Максимум в УФ-спектре при 310 нм - возможно производное коричной кислоты.

5.08-5.10 282,3 Не идентифицированный компонент Максимум в УФ-спектре при 255 нм, можно отнести к производному фенолкарбоновой кислоты

6.67-6.70 122,1 4-гидроксибензальдегид

8.91-8.96 136,1 4-гидроксибензальдегид

10.39-10.43 208,2 3,4-диметоксикоричная кислота

10.84-10.86 284.0 176.1 Метиловый эфир 2-(4-гидроксибензоил)-3 -гидрокси-бутандиовая кислота (m/z 284,0), Смесь двух соединений с максимумами: при 255 нм для первого соединения (m/z 284,0), 242 нм и 300 нм для второго соединения (m/z 176,1)

11.49-11.52 182,1 Сиреневый альдегид

11.76-11.85 262,1 Не идентифицированный компонент Максимум в УФ-спектре при 296 нм -характерен для производного коричной кислоты.

Время удерживания, мин m\z Предполагаемая структура Примечание

3.10-3.14 154,0, 240,3 Протокатеховая кислота (m/z 154,0) Максимум в УФ-спектре при 259 нм относится к протокатеховой кислоте. Максимум в УФ-спектре при 294 нм характерен для производного коричной кислоты

4.14-4.72 138,1, 176,1 Тирозол (m/z 138,1) Максимум в УФ-спектре при 279 нм относится к тирозолу, а максимум при 310 нм характерен для производного коричной кислоты.

5.08-5.13 282,3 Не идентифицированный компонент Максимум в УФ-спектре при 255 нм, можно отнести к производному фенолкарбоновым кислотам

6.03-6.12 192,1 Метиловый эфир 4-метоксикоричной кислоты (m/z 192,1) Максимум в УФ-спектре при 310 нм, характерен для гидроксикоричных кислот и их производных

8.68-8.73 176,2 Ацетоксикоричный спирт (ацильное производное коричного спирта) (m/z 176,1) Максимум в УФ-спектре при 275 нм

10.38-10.42 316,2, 346,2 Не идентифицированные компоненты Два интенсивных максимума в УФ-спектре при 288 и 320 нм

11.79-11.84 218,1, 226,2, 244,1 Дигидросинаповая кислота (m/z 226,2) Максимум в УФ-спектре при 296 нм характерна для производных дигидроксикоричной кислоты. Гидрокси-и дигидроксикоричные кислоты имеют несколько максимумов в интервале 298-330 нм. Наличие одного максимума свидетельствует о том, что часть молекулы имеет общий структурный фрагмент

11.76-11.85 262,1 Не идентифицированный компонент Максимум в УФ-спектре при 296 нм характерен для производного коричной кислоты

В результате проведенных нами исследований химического состава фракций экстракта сфагнума бурого на этаноле 70% с помощью ВЭЖХ- и ВЭЖХ-МС анализа было подтверждено наличие для данного вида ряда ранее известных соединений, а так же выявлены новые для него соединения.

Исходя из УФ- и масс-спектральных данных можно сделать вывод о том, что химический состав объекта в большей степени представлен фенолкарбоновыми (феноло- и гидроксикоричными) кислотами и спиртами.

Исследование элементного состава сырья

При исследовании элементного состава сырья сфагнума бурого нейтронно-активационным методом было выявлено 26 элементов, содержание токсичных из которых не превышает значения допустимых концентраций установленных СанПиН 2.3.2.1078-01 для пищевых продуктов.

Оценка биологической активности экстракта из сфагнума

бурого

Исследуемый экстракт сфагнума бурого на этаноле 20% является малотоксинным. Результаты экспериментов не позволили определить ЛД50. При введении в желудок белым беспородным мышам-самцам в дозе 10000 мг/кг симптомы острого отравления отсутствовали, не наблюдалось гибели животных и изменения их двигательной активности и поведенческих реакций в течение двух недель наблюдения.

Мы провели исследования влияния биологически-активного комплекса, выделенного из сфагнума бурого, на процессы, сопутствующие протеканию экспериментальных раневых патологий.

При исследовании противовоспалительной активности наиболее выраженный антиэкссудативный эффект исследуемого экстракта отмечался для доз 250 и 500 мг/кг. Угнетение отека у мышей составило 30,1% и 31,1% соответственно.

Экстракт сфагнума бурого обладает выраженным болеутоляющим действием. Предварительное внутрижелудочное введение данного экстракта в диапазоне доз 250-500 мг/кг приводит к достоверному, практически не уступающему аналогичному действию индометацина по снижению среднего количества «корчей» - на 36,9% и 42,9% соответственно.

Исследуемый экстракт оказывает выраженное ранозаживляющее

действие. При обработке раны мазью экстракта сфагнума бурого 3% ускорение заживления раны у крыс по отношению к контрольной группе составило 34,4%. Обработка раны мазью данного экстракта способствовала ликвидации гнойно-экссудативной воспалительной реакции, о чем свидетельствовало отсутствие скопления гноя под удаляемой корочкой на 7-е сутки после нанесения раны. Препараты сравнения - мазь метилурацйловая 10% и масло облепихи в аналогичных условиях эксперимента оказали менее выраженные ранозаживляющие эффекты. Аналогичная картина наблюдается на модели «ампутации хвоста» у крыс - аппликации мази исследуемого экстракта 3% проявляют сравнимое с мазью метилурациловой 10% ранозаживляющее действие, ускоряя процесс заживления ампутационной культи (по сравнению с контрольной группой) на 22,9% и 19,8% соответственно.

Антигрибковую активность экстракта сфагнума бурого на этаноле 20% исследовали in vitro методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде Сабуро. При этом установлено, что в концентрации 15,7 мкг/мл исследуемый экстракт активен в отношении возбудителей дерматофитий на уровне препаратов сравнения нитрофунгина и сангвиритрина.

При исследовании антибактериальной активности экстракта сфагнума бурого, в качестве объектов сравнения использовали извлечения из фармакопейного сырья шалфея лекарственного и зверобоя продырявленного, используемых в качестве антимикробных средств. Судя по полученным данным, экстракт сфагнума бурого на этаноле 20% проявляет выраженный бактериостатический и бактерицидный эффекты. В разведении 1/80 он ингибирует размножение микроорганизмов штаммов Escherichia coli Н-304, Staphylococcus aureus Р-209 и Klebsiella pneumoniae, слабо влияя на штамм Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 (б/ст - 1/20). Бактерицидное действие проявляется в более высоких концентрациях: 1/40-1/20, за исключением влияния на Staphylococcus aureus Р-209 (б/ц - 1/80).

Стандартизация сырья сфагнума бурого

В результате выполненных анатомо-морфологических и химических исследований были определены критерии подлинности и показатели качества сырья сфагнума бурого, на основе которых был разработан и представлен проект ФС «Дерновина Сфагнума бурого».

Таким образом, сырье S. fuscum является перспективным объектом для разработки на его основе новых фитопрепаратов. Сочетание противовоспалительной и анальгезирующей активности,

ранозаживляющих свойств, антибактериального и антифунгального действий водно-этанольного экстракта делает рациональным его использование в комплексной терапии раневых и воспалительных процессов, ожоговых поражений кожи, инфицированных ран.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Расчётный эксплуатационный запас S. fuscum, S. balticum, S. papillosum, S. lindbergii, S. fallax, S. angustifolium, S. magellanicum на территории исследуемого участка составляет 524,7 тыс. т, а объем ежегодных заготовок - 64,7 тыс. т, с учетом 3-4 летнего периода восстановления популяции.

2. Выявленные индивидуальные макро- и микроморфологические диагностические признаки у исследуемых видов сфагновых мхов Томской флоры позволяют установить единые требования к определению подлинности сырья при его заготовке на всей территории РФ.

3. В исследуемом объекте S. fuscum доминируют две группы БАВ - полисахаридный комплекс (2,88%) и фенольные соединения (0,200,22%), представленные преимущественно фенолкарбоновыми кислотами (0,16-0,19%).

4. В результате ВЭЖХ-МС и ГЖХ-МС анализа были выявлены новые для S. fuscum соединения: метоксилированные производные фенолокислот, протокатеховая кислота, фенилпропаноиды, метоксикатехины, флавонол, тирозол, моносахариды - L-арабиноза, L-рамноза, и D-маннитол; дисахариды - D-мальтоза, D-мелибиоза и D-лактоза.

5. Сфагновая кислота (молекулярная масса 222) описанная для ряда других видов сфагновых мхов, в составе экстракта мха S. fuscum на этаноле 70% отсутствует, что может являться хемотаксономическим признаком для S. fuscum.

6. Экстракт сфагнума бурого на этаноле 20%, обладает низкой токсичностью, проявляет в эксперименте выраженное противовоспалительное, анальгезирующее, ранозаживляющее, антибактериальное и антифунгальное свойства на уровне используемых препаратов сравнения.

7. На основании комплексного фармакогностического исследования S. fuscum определены нормативы подлинности и качества сырья, включенные в проект ФС «Дерновина Сфагнума бурого».

Список опубликованных работ

1 Биоэлементы сфагновых мхов // Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения: Материалы всероссийской науч.-практич. конф., поев. 100-летию со дня рождения проф. Л. Н. Березнеговской. - Томск, 2006. - С. 44-51 (Соавт. Л.Г. Бабешина, С.Е. Дмитрук, Н.С. Охотина, E.H. Репешева).

2 Видовой состав сфагнового мха Западной Сибири и его фармацевтическая ценность // «Информационные системы мониторинга окружающей среды» / Информационные системы: Тр. постоянно действующей научно-технической школы-семинара студентов, аспирантов и молодых специалистов. - Томск, ТУСУР, 2004. - Вып. 3. -С. 58—61 (Соавт. Л.Г. Бабешина, С.Е. Дмитрук, А.Е. Корж, Л.В. Панкова, Е.Л. Панова).

3 Изучение адсорбционной способности сфагнового мха // Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения: Материалы всероссийской науч.-практич. конф., поев. 100-летию со дня рождения проф. Л. Н. Березнеговской. - Томск, 2006. -С. 165-169 (Соавт. Н.В. Келус, Л.Г. Бабешина).

4 Исследование рынка энтеросорбентов и перспективы их поиска среди лекарственного растительного сырья //Современные проблемы фармакологии и фармации: тез. докл. всероссийской науч.-практич. конф. - Новосибирск, 2005. - С. 469-472 (Соавт. Н.В. Келус, Ю.А. Музыра, Л.Г. Бабешина).

5 Обоснование перспективы комплексного применения сфагнового мха в медицинской практике / Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения: Материалы всероссийской науч.-практич. конф., поев. 100-летию со дня рождения проф. Л. Н. Березнеговской. - Томск, 2006. - С. 89-93 (Соавт. Л.Г. Бабешина, М.В. Белоусов, P.P. Ахмеджанов, Н.В. Келус).

6 Продуктивность сфагновых мхов Современные проблемы фармакологии и фармации // Материалы всероссийской науч. практич. конф. - Новосибирск, 2005. - С. 451-453 (Соавт. Л.Г. Бабешина, E.H. Репешева, Н.С. Охотина).

7 Ранозаживляющее действие экстракта сфагнового мха // ВМЖ. -2007. - T. CCCXXVIII, № 12. - С. 41-42 (Соавт. Р.Р. Ахмеджанов, М.В. Белоусов, М.С. Юсубов, С.Е. Дмитрук).

8 Фармакологическая активность этанольного экстракта из сфагнума бурого (Sphagnum fuscum (Shimp) Klinggr) // - Химия растительного сырья. - 2008. - № 3 - С. 129-134 (Соавт. М.В. Белоусов, P.P. Ахмеджанов, М.С. Юсубов, Л.Г. Бабешина, С.Е. Дмитрук).

9. Экологические группы сфагновых мхов Томской области // Автоматизированные системы обработки информациии, управления и проектирования: докл. Томского гос. ун-та систем управления и радиоэлектроники. - Томск, ТУСУР, 2004. - Т. 9, № 1. - С. 61-63 (Соавт. Л.Г. Бабешина, С.Е. Дмитрук).

10. Экология сфагновых мхов Томской области и перспективы их использования в медицине // «Лекарственные растения в фармакологии и фармации» / Науч. конф. поев. 50-летию Алтайского гос. медицинского университета. - Барнаул, 2005. - С. 646-649 (Соавт. Л.Г. Бабешина, С.Е. Дмитрук, Н.С. Охотина, А.Е. Корж).

11. Экспериментальное обоснование применения сфагнового мха в народной медицине // Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: Материалы 2 всероссийской конф. -Барнаул, 2005. - Книга 2. - С. 20-21 (Соавт. Л.Г. Бабешина, С.Е. Дмитрук).

Подписано в печать 16.10.2008. Формат 60x84/16. Печ. л. 1. Тираж 100 Бумага офсетная. Печать оперативная. Заказ 508.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ООО «Офорт» 443068, Самара, ул. Межевая, 7. Тел.: 335-37-51,279-08-22

Актуальность темы. Растения рода Sphagnum относятся к группе высших растений. Не смотря на многовековую историю их применения в народной медицине, они остаются малоизученными растениями и не используются в официальной медицине.

По данным литературы, сфагновый мох издавна использовался в Америке, Англии, Шотландии и Ирландии для лечения фурункулов, в Китае сфагновым отваром лечили болезни глаз. В России его применяли для лечения инфицированных ран, ревматизма, радикулита, артритов, заболеваний кишечника [138, 139].

В клинической медицинской практике сфагновый мох нашел применение в качестве перевязочного материала и широко использовался во время всех войн, включая первую и вторую мировую. Его применение основывается на высокой гигроскопичности дерновины, превосходящей вату, наличии дезодорирующих, бактерицидных, антигрибковых, ранозаживляющих и кровоостанавливающих свойств [138, 139].

На сегодняшний день сфагновые мхи флоры Сибири и Дальнего Востока остаются не изученными, в отличие от флоры Европейской части России [1, 68, 137, 138 и др.]. Информация о биологически активных веществах (БАВ) растений рода сфагнум носит фрагментарный характер, их фитохимическая характеристика отсутствует. Из всего рода ни один вид не является официнальным, не смотря на его широкое и эффективное использование в народной медицине и в клинической медицинской практике вплоть до 50-х годов прошлого столетия.

Имеющиеся данные о химическом составе растений рода сфагнум свидетельствуют о присутствии различных классов БАВ: фенольных соединений, карбоновых кислот, эфирных масел, углеводов и др. [10, 63, 66, 105 и др.]. Литературные данные о биологической активности извлечений из растений рода сфагнум указывают на их многостороннее, комплексное I действие на организм. Эти сведения обосновывают перспективность использования представителей рода сфагнум для разработки новых высокоэффективных и малотоксичных лекарственных средств, что является актуальной проблемой современной фармации.

Недостаточная изученность химического состава и биологической активности сфагновых мхов определяет необходимость их системного химико-фармакогностического и фармакологического изучения.

Цель исследования. Целью настоящего исследования является обоснование возможности практического использования в медицине наиболее распространенных представителей рода Sphagnum флоры Томской области.

Задачи исследования:

1. Дать оценку ресурсного потенциала наиболее распространенных видов сфагновых мхов флоры Томской области на примере исследуемого участка, изучить особенности восстановления их популяции и определить перспективный вид для дальнейшего исследования.

2. Определить диагностические признаки сфагновых мхов флоры Томской области на основе их сравнительных анатомо-морфологических исследований для выявления возможных подмесей к перспективному виду.

3. Провести изучение химического состава основных групп БАВ перспективного вида сфагнового мха.

4. Провести оценку острой токсичности и биологической активности суммарных комплексов, выделенных из перспективного вида сфагнового мха.

5. Разработать методики стандартизации качества его сырья.

6. Разработать проект фармакопейной статьи на сырье («Дерновина сфагнового мха»).

Научная новизна и теоретическая значимость. Впервые дана оценка ресурсного потенциала 7 наиболее распространенным видов сфагнового мха на территории Томской области на примере ключевого участка и предложена рациональная схема их практического использования. Для идентификации наиболее распространенных и перспективных для применения в медицинской практике видов сфагновых мхов Томской области определены макро- и микроскопические диагностические признаки.

На основании оценки ресурсного потенциала сфагновых мхов и химико-фармакологических исследований суммарных комплексов БАВ выявлен перспективный для внедрения в медицинскую практику вид растений рода Sphagnum — S. fuscum (Shimp) Klinggr (Сфагнум бурый). Впервые подробно изучен состав его фенольного комплекса и мономерного состава ПСК. Экспериментально доказано, что суммарный комплекс выделенный из дерновины сфагнума бурого обладает противовоспалительной и анальгезирующей активностью, ранозаживляющими свойствами и противомикробным действием. Для предложенного биологически активного комплекса S. fuscum экспериментально доказана его безвредность и обоснованы показатели норм 1 качества сырья.

Практическая значимость работы. Полученные результаты могут быть использованы при выборе источника сырья для получения лекарственных средств и биологически активных добавок с противовоспалительным и антимикробным действиями. Разработана и предложена методика стандартизации сырья сфагнума бурого. Результаты диссертационного исследования используются в научных изысканиях, а также внедрены в учебный процесс на фармацевтическом факультете Самарского государственного медицинского университета и Самарского государственного университета (акты внедрения от 5.12.2007 г и 8.12.2007 г.). Разработано учебное пособие «Характеристика сфагновых мхов флоры

Томской области» для студентов фармацевтических и биологических факультетов, а так же технологическая Инструкция по сбору и сушке дерновины мха сфагнума бурого. Для внедрения предложен разработанный проект фармакопейной статьи на сырье «Дерновина Сфагнума бурого» и пояснительная записка.

На защиту выносятся следующие положения: а) результаты сравнительного анатомо-морфологического исследования 7 видов сфагнового мха (S. fuscum (Shimp) Klinggr., S. balticum (Russ.) Russ. ex C. Jens., S. papillosum Lindb., S. lindbergii Schimp. ex Lindb., S. fallax (Klinggr.) Klinggr., S. magellanicum Brid., S. angustifolium (Russ. ex Russ.) C. Jens.) и экспертная оценка их ресурсного потенциала; б) результаты изучения химического состава БАВ содержащихся в дерновине S. fuscum и биологической активности; в) экспериментальное обоснование методик стандартизации качества сырья дерновины S. fuscum.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на межкафедральных научных семинарах фармацевтических факультетов СибГМУ и СамГМУ (г. Томск и г. Самара) 2004-2006 г., на заседании проблемной комиссии СибГМУ «Изыскание и изучение новых лекарственных средств. Вопросы фармации». Материалы диссертации докладывались на научной конференции, посвященной 50-летию Алт. гос. ун-та, (г. Барнаул 2004 г.), на всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005 г.), на 2-й всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2005 г.), на научной школе «Болота и биосфера» (Томск, 2005 г.), на всероссийской научно практической конференции поев. 100-летию со дня рождения проф. Л.Н.Березнеговской (Томск, 2006 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано И научных работ, из них две в центральной печати.

Работа выполнена на базе кафедр химии и фармакогнозии, ботаники и экологии ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава, кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии ГОУ ВПО СамГМУ Росздрава.

Отдельные разделы работы по идентификации химического состава объектов исследования выполнялись на базе института органической химии СО РАН (г. Новосибирск).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста, иллюстрирована 47 рисунками, 37 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав с изложением собственных результатов исследований, заключения, выводов, указателя литературы, включающего 178 наименований, а также 8 приложений.

ВЫВОДЫ

1. Расчётный эксплуатационный запас S. fuscum, S. balticum, S. papillosum, S. lindbergii, S. fallax, S. angustifolium, S. magellanicum на территории исследуемого участка составляет 524,7 тыс. т, а объем ежегодных заготовок — 64,7 тыс. т., с учетом 3-4 летнего периода восстановления популяции.

2. Выявленные индивидуальные макро- и микроморфологические диагностические признаки у исследуемых видов сфагновых мхов Томской флоры позволили установить единые требования к определению подлинности сырья при его заготовке на всей территории РФ.

3. В исследуемом объекте S. fuscum доминируют две группы БАВ -полисахаридный комплекс (2,88%) и фенольные соединения (0,20-0,22%), представленные преимущественно фенолкарбоновыми кислотами (0,160,19%).

4. В результате ВЭЖХ-МС и ГЖХ-МС анализов подтверждено наличие кумаровой, кофейной, феруловой кислот; кумаринов — эскулетина, умбеллиферона, скополетина, кумарина; ароматических альдегидов -ванилина, сиреневого альдегида, 4-гидроксибензальдегида; моносахаридов -D-ксилозы, D-маннозы, D-галактозы, D-глюкозы и D-глюкуроновой кислоты, а также выявлены новые для S. fuscum соединения: метоксилированные производные фенолокислот, протокатеховая кислота, фенилпропаноиды (в т.ч. дигидросинаповая кислота, производные коричных спиртов), метоксикатехины, флавонол, тирозол, моносахариды - L-арабиноза, L-рамноза, и D-маннитол; дисахариды - D-мальтоза, D-мелибиоза и D-лактоза.

5. Сфагновая кислота (молекулярная масса 222) описанная для ряда других видов сфагновых мхов, в составе экстракта мха S. fuscum на этаноле 70% отсутствует, что может являться хемотаксономическим признаком для S. fuscum.

6. Экстракт сфагнума бурого на этаноле 20%, обладает низкой токсичностью, проявляет в эксперименте выраженное противовоспалительное, анальгезирующее, ранозаживляющее, антибактериальное и антифунгальное свойства на уровне используемых препаратов сравнения.

7. На основании комплексного фармакогностического исследования S. fuscum определены нормативы подлинности и качества сырья, включенные в проект ФС «Дерновина сфагнума бурого».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании оценки ресурсного потенциала сфагновых мхов, в т.ч. урожайности, биологического и эксплутационного запаса, возможного объёма ежегодных заготовок, а так же данных народной медицины и военно-полевой хирургии из 7 исследованных видов нами для дальнейшего химико-фармакологического исследования выбран наиболее перспективный объект -S. fuscum.

В результате проведения общего фитохимического анализа дерновины сфагнума бурого установлено, что в исследуемом объекте доминируют две группы соединений — полисахаридный комплекс и фенольные соединения, представленные преимущественно фенолкарбоновыми кислотами. Проведенное нами исследование мономерного состава полисахаридов сфагнума бурого методом ГЖХ-МС впервые установило, что моносахаридный состав ПСК сфагнума бурого представлен L-арабинозой, L-рамнозой и D-маннитолом, а дисахаридный - D-мелибиозой, D-лактозой и D-мальтозой, наличие которых в ПСК сфагновых мхов ранее в литературе не отмечалось.

В результате проведенных нами исследований химического состава фракций 70% водно-этанольного экстракта из сфагнума бурого с помощью ВЭЖХ- и ВЭЖХ-МС анализа было подтверждено наличие для данного вида ряда ранее известных соединений, а так же выявлены новые для него соединения. Исходя из УФ- и масс-спектральных данных можно сделать вывод о том, что химический состав объекта в большей степени представлен фенолкарбоновыми (феноло- и гидроксикоричными) кислотами и спиртами.

При исследовании элементного состава сырья сфагнума бурого нейтронно-активационным методом было выявлено 26 элементов, содержание токсичных из которых не превышает значения допустимых концентраций установленных СанПиН 2.3.2.1078-01 для пищевых продуктов Экстракт сфагнума бурого на этаноле 20% является малотоксичным. Исследуемый экстракт проявляет выраженный антиэкссудативный эффект (угнетение отека у мышей 30,1% и 31,1% соответственно). Экстракт из сфагнума бурого обладает выраженным болеутоляющим действием, практически не уступающим аналогичному действию индометацина. Исследуемый экстракт оказывает выраженное ранозаживляющее действие, превышающее активность препаратов сравнения - мази метилурациловой 10% и масла облепихи. На модели «ампутации хвоста» у крыс — аппликации мази исследуемого экстракта 3% проявляют сравнимое с мазью метилурациловой 10% ранозаживляющее действие, ускоряя процесс заживления ампутационной культи. В концентрации 15,7 мкг/мл исследуемый экстракт активен в отношении возбудителей дерматофитий на уровне препаратов сравнения нитрофунгина и сангвиритрина. In vitro экстракт сфагнума бурого проявляет выраженные бактериостатический и бактерицидный эффекты.

На основании полученных результатов нами был разработан и представлен проект ФС «Дерновина Сфагнума бурого», включающий показатели подлинности и качества сырья.

Таким образом, сочетание противовоспалительной и анальгезирующей активности, ранозаживляющих свойств, антибактериального и антифунгального действий водно-этанольного экстракта из сфагнума,бурого делает перспективной разработку на его основе лекарственных средств для комплексной терапии раневых и воспалительных процессов, ожоговых поражений кожи, инфицированных ран.