Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование эфирномасличных растений флоры Сибири

яргз.гз: ру

КАЛИНКИНА ГАЛИНА ИЛЬИНИЧНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФИРНОМАСЛИЧНЫХ РАСТЕНИЙ ФЛОРЫ СИБИРИ

15.00.02 - фарма^гвтэтгсггз зпмся и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

дкееертаипп яа сснгклппа учгпоп стгпгая доктора пауп

ГЛсггна - 1995

Работа выполнено в Сибирском медицинском университете (Томск)

Научные консультанты

Официальные оппоненты -

чл.-корр. СО АН ВШ, доктор фармацевтических паут., профессор С.Е.Дмитрук

доктор биологических наук, профессор Т.П .Березовская

доктор фармацевтических наук, профессор ДА.Муравьеша

доктор фармацевтических ноу^, профессор В.И.Прокофьева

Ведущая организации

1£:

- доктор фармацевтически* наук, профессор Б.А. Курит

- Н'З'.-чыо-ксследовательсгагй институт фармации

г. в

тоциошюго Сое^т^/Д074,05.06/

¿ашита диссертации состоится

часов на заседании Диссертационного Сов£пГ/Д074.1 яр»; Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова /Москва. Суворовский бульвар, д. 13/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Академии до адресу: г.Москва. Зубовская площадь, д. 1.

Автореферат разослав

199^1.

Ученый секретарь Диссертационного

Совета, кандидат фармацевтических

наук доцент Н.П.Садчикава

о::;лл г у..«сге^стпкл рлсогк

AnrygAbiiQcrr. nyw.lAPMii. Зфпрныо масла. так сдиа мз лапСолсе распространенных групп биологически активных вежсст лекарственных растении, обуславливают фармакологическое действие многих лекарственных средств. Д\я них характерно, прежде псрго, антимикробное, рапозажпслнющес.

противовоспалительное, отхаркивающее и другие свойства. Все большое значение приобретают эфирные масла в профилактике и лечении сердечно-сосудистых, неврологических заболеваний, повышении иммунного статуса организма человека.

В СНГ производится не менее 35 наименований эфирных насел, за рубежом - более 200. Однако ассортимент эфирных масел, используемых и настоящее время и медицинской практике, очень ограничен | мятное, эвкалиптовое, фенхелевоо, анисовое :» некоторый , лругие|. Кроме гого. производство эфирных масел, сосредоточено в основном а южных районах европейской чести России, на Украине, и Крыму н на Кавказе, где создана сырьевая база ддя эфирномасличном промышленности. Принято считать, что эти районы япляюгея наиболее перспективными и для изыскания новых лекарственных и ароматических растений.

На основании исследований , проведенных сибирскими ботаниками В.В.РевордаггЛ, М.А.Альбиикой, К.А.Соболевскои и А.В.Положий, молено утверждать, что флора Сибири представляет большой интерес для изучения и отбора перспективных лекарственных н эфирномасличных видов. По данным Гербария им.П.Н.Крылова при Томском госупиверситете а Сибири произрастает 3330 пидоп. Из них потенциальными эфироносами признаны 74 вида, что составляет 2,1% от общего числа растений. Это дает основание ставить попрос о возможности создания в Сибири эфирномасличной промышленности на базе местных сырьевых ресурсов. Подтверждением рациональности постановки и решения дЪшгого и о проса служат многолетние научные исследования, проводимые п области изучения эфирномасличных растений флоры Сибири. Работы по изысканию иерспекгегиых ллл медицинской практики эфироносов несомненно создали предпосылки для проведения завершенных исследований. Однако они носят разноплановый характер, а выявленные виды мало изучены с химической и фармакологической точек зрения и не доиедены до уровня лекарственного средства. Данный факт являете;! существенным аргументом а пользу актуальности проведения целенаправленного поиска перспективных эфирномасличных растений и создания на их основе эффективных лекарственных средств.

Цел;, диссертационной работы состоит в проведении целенаправленного поиска перспективных эф:гриомасм!ч<шх растении но флоре Сибири и создании на их основа лекарственных

препаратов ронозаживляющего, противовоспалительного,

антимикробного и противоязвенного действия.

Для реализации составленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- разработпть научно-методические основы поиска перспективных -»фироносов на основании данных количественного содержания эфирных масел в растениях б зависимости от их систематического положения и экологической приуроченности, а также антибактериальной активности эфирных масел;

изучить химический состав эфирных масел перспективных видов;

провести анатомическое изучение некоторых эфирномасличных растений с целью выявления характера локализация эфирного масла н обоснования выбора метода его извлечения из лекарственного растительного сырья;

провести скринииговое фармакологическое исследование эфирных масел н разработать на кх основе лекарственные средства ранозаживляющего,

дротивовоспалотельного и сствмикробного действия;

- изучить возможность комплексного использования сырья тысячелистника азиатского и разработать на основе-экстракта из шрота /екарственный препарат противоязвенного действия;

- разработать нормативно-техническую документацию на предложенное лекарственное сырье, субстанции и препараты Наутапя новизна работы. В диссертации впервые проведен

целенаправленный поиск во флоре Сибири перспективных эфирномасличных растений, обладающих антимикробным, рлиозаясивляющим, противовоспалительным и противоязвенным действием. Исследовано 170 видов растений из 22 семейств

Выявлены наиболее оптимальные экологические условия для накопления эфирных масел в растениях флоры Сибири

'Установлено, что около 40% эфирномасличных видов накапливают более 0,5% эфирного масла и с этой точки зрения представ^ют интерес для промышленной переработки

Показано, что большинство эфирномасличных растений обладают избирательной антимикробной ахтявностыо. 15 из которых наиболее перспективны для дальнейшего 1'сслелования

Изучен химический состав более 21) образцов эфирных масел растении флоры Сибири. что позволило уточнить систематическое положение отдельных видов и установить взаимосвязь между биологической активностью и компонентным составом эфирных масел.

Впервые проведено летальное анатомическое исследование иехиторых эфкрно«шсл1гчных ростсилй. Показана закономерность е

структуре секреторных образований в зависимости ст систематического положения пндв.

Обоснована возможность комплексного использования травы тысячелистника л\я полпенни локарственпш: средств раноздживлнюмюго, противовоспалительною и противоязвенного депствии.

Исследованы Гшологическпе осооенногти рационального исполкшванин ресурсов тысячелистника liii территории Сибири.

Новизна т.опепгческнх и ripamrii'CKUx исследовании и области разработки новых лекарственных препаратов на основе биологически активны), веществ эфирномасличных растении и .методов контроля их качества г.а:;;шцена Л патентами и авторским свидетельством

и прове-денны.' .щеперичеяти покалил целесообразность использования выявленных ебьоктоп (злвпми цни ресни гчатая. зизифора клиноподневидтив вид» родов тимьян, полынь, тысячелистник' и другие ) в качестве источников чфирных мпсел и создания па их основе новых «тнблктернольних, рано ¡аживляюпшх, противовоспалительных и противоязвенных средств.

Материалы диссертации витвлн в технологическую документ« пню получения новых лекарственных препаратов тысячелистника Ахизапа (раноза;;;;!вляюгцее, противовоспалительно средство) и Axurpjnn (противоязвенное средство',; проведено их доклиническое исследование. В Фармакологический комитет \!3 и МП РФ представлены необходимые .материалы, характеризующие специфическую активность и безвредность препаратов.

Разработана и включена в Госфариакопто СССР X! нздаши! акт.'.' ФС "Трава тысячелистника'.

Рсзрайшаны проекты НФС на aqnjpnoe масло, густой экстрак-тыспчелнетиика и их лекарственные формы, а так;ко Па сырье полыни Сйверса и п серой. Документы прошли первичную •»Kcneprniv л.-.оорятоонн фармакогнозии НПО ВИЛАР и Государственного института доклииич^скон и клинической экспертиза'лекарств (ГИДКЭЛ1 МЗ и МП РФ

На основании злоключения лаборатории токсикологической экспертизы ¡протокол M 228 от 7.02 94) и лаборатории фарманевтнческой зкепертизы ¡акт N 36 от 14.00.95i ГИДКЭЛ по-наиат лхиграч допушон до клинических нешгганин

Раз&зботанм и утверждены Томским центром метрологии и стандартизации Технические vcaobhw 'Эфирное масло

тысячелистника". "ФктолоСмвка Ахигра» '. "Эфирное масле! полыни сегюи' и "Лечебно-профил^ктическоо средство девмапмхтил"

Материалы. onvdAHKOBaiiHue в монографии "Выделение v анализ природных оиологически активных вошеств" (изд-во Томского университета, 14S7) а также М'-тодичесхие указания "Днагп<кгшчегкие признаки растений рода полынь' используются в

учебном процессе фармацевтических вузов и контрольно-аналитических лабораториях областных а/о "Фармация".

Разработай опытно-промышленный регламент получения фитодобавки на основе экстракта тысячелистника "Ахигран". На АООТ "Томский химфармзавод" наработана опытная партия фитодобавки Ахигран, рекомендованная для использования при заболеваниях желудка и 12-перстной кишки.

На защиту выносятся результаты поиска во флоре Сибири перпективных эфирномасличных растений и возможности создания на их основе лекарственных средств антимикробного, ранозаживляющего, противово-спалительного и противоязвенного действия.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Ш Всесоюзном съезде фармацевтов (Кишинев, 1980); республиканской конференции "Актуальные вопросы поиска и технологии лекарственных средств (Харьков, 1981); IV Всероссийском съезде фармацевтов (Воронеж. 1981); Всесоюзной конференции "Проблемы освоения лекарственных ресурсов Сибири и Д-Востока" (Новосибирск, 1983); (V симпозиуме по эфирным маслам (Симферополь, 1985); IV Всесоюзном съезде фармацевтов (Казань, 1986); Сибирских конференциях "Актуальные проблемы фармакологии и поиск новых лекарственных препаратов (ToIDck. 1986, 1987, 1989): !1 и 111 республиканских конференциях по медицинской ботанике (Киев, 1988, 1992); Всесоюзной конференции "Фитонциды. Бактериальные болезни растений! (Львов, 1990); I Ме;кдународном научном конгрессе" Традиционная медицина и питание. Теоретические и практические аспекты" (Москва, 1994); итоговых научных конференциях фармацевтического факультета Сибирского медицинского университета (Томск, 1982, 1984, 1985, 1986, 1988, 1991).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры фармакогнозии с курсом ботаники Сибирского медицинского университета и комплексной цело вой программы СО . АМН РФ "Здоровье человека в Сибири" (N Гос.регистрации 01.85.0069848).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано &7 статей и тезисов докладов, 1 монография, получены 1 патент на изобретение, 2 положительных решения на патенты, 2 авторских свидетельства, подана 1 заявка на патент.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 3 >0 страницах и состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, библиографии. Приложения представлены отдельным томом. Работа иллюстрирована 31 таблицей и 50 рисунками. Библиографический указатель включает 479 источников литературы, из них 86 - зарубежных авторов.

В обзоре лктерэтуры рассмотрены осаостыа нвзгегвлатая нспользоваяяз эфирных насел и эфлряохаслячяых ргстннвД в медицине; пркзеден анализ совремеяттых лекарственных средств, содержащих биологически ахтивныэ вещества эфирномасличных растений. отечественного и зарубежного производства; проанализированы данные литературы об изучении п персдоятятит использования а медицинской практике эфирномасличных расгеннА флоры Сибяри.

Вторая глаза посвящена описанию объектов и методов исследования.

В третьей главо приведены результаты поиска во флоре Сибяри перспективных эфпрпоиасличпих растений на основании анализа растений па содержание эфирных масел а зависимости от нх систематического положения п экологической приуроченносга. Дана оценка антибактериальной активности эфирных мгсел н подно-спиртовых экстрактов эфирномасличных растений. приведены результаты изучения ргнозажнвляющих и противовоспалительных свойств перспективных эфирных масел.

В четвертой главе изложены материалы изучения химического состава эфирных масел методом газо-жидкостной хроматографии, выделения и установления структуры основных компонентов.

Пятая глава посвящена анатомическому исследованию некоторых перспективных эфирномасличных рзстенвй и характеристике секреторных образований как основного фактора при выборе оптимального способе извлечения эфирного масла из растнтелыгаго сырья.

В шестой глава представлены данные о разработке лекарственных препаратов па основе эфирного масла н экстракта яз шрота, полученных из травы тысячелистника по принципу комплексной технологии. результаты исследовапгя

фармакологических свойств в безвредности полученных комплексов, разработка 11 лекарственных форм и методов контроля их качества; приведена характеристика сырьевой базы тысзчелвстготса на территории Сибкря и биологических особенностей ее радаопальпсго использовав и*.

в приложения представлены материалы. подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Объекты и методы исследования

Объектами исследования служили растения флоры Сибири, отнесенные нами к эфирномасличным на основании данных литературы н собственных исследований. На содержание эфирного масла изучено 170 видов растений из 22 семейств. Для изучения антибактериальной активности эфирномасличных растений в условиях in vitro из них было получено 45 эфирных масел и 40 водно-спиртовых настоек. В качестве тест-микроорганизмов использовали Staphylococcus aureus 209 Р, Escherichia coli М 17. Streptococcus pyogenes 11, Pseudomonas aeruginosa 1, Klebsiella pneumoniae T 43 2182 из SS и Proleus vulgaris 4175 из NCTS.

Ранозаживляхнцие н противовоспалительные свойства изучены АЛЯ 8 наиболее перспективных эфирных масел.

Изучение химического состава эфирных масел и выделение основных компонентов проводили методом аналитической и препаративной газо-жпдкостной хроматографии; установ\енне их структуры - методами ИК-, ПМР-, Я.МР 13С- и масс-спектроскошш. Данный раздел работы проведен на базе института химических наук АН Республики Казахстан иод руководством доктора химических паук />_АДек5<:цкого, за что выражаем ему искреннюю пркзпателыюстъ и благодарность.

FaCoTb! по созданию препаратов проводились совместно с кефедрой технолог»! лсхарстпеннцх форм Томского медицинского университета (профессор Т.П.Прпщеп. доц.Т.Г.Хоружая). Фармакологические исследования выполнены ко кафедре фармакологии Томского медицинского университета под руководством академика МАИ, заслуженного деятеля науки РФ. профессоре А-С.Ссратиковс и из кафедре ьоенно-медицииского сиабженш; Военно-медицинского факультета при Томском медицинском университете доцентами, полковниками медицинской с.',у;г.б:-' Д.Д.Тарг;!ом и Н.М.Слнпченхо.

2, Полег; cspcnesrnsüMx эфирномасличных растений 1.0 флере Сибири

Преследуй цель выявления наиболее перспективных ;фнро!юсоь г.о флоре Сибири, ми иопыталпсь установить определенные закоао.мер;! ости накопления эфирных масел в зависимости от систематического положения видов, а также их экологической пр\!ураченностн. Это позволила бы в дальнейшем вести более целенаправлеиный поиск источников эфирных масел по принципу филогенетического родства и с учетом . условий местообитания растений.

s

Нами проведен анализ содержания эфирных масел в 170 енаох из 22 семейств флоры Сибири. Наибольшее количество исследованных видов относятся к семействам Asteraceae (66), Larmaceae (43). Apiaceae (1SI, известных богатством эфирномасличными видамп К последним можно отнести также семейства Ericaceae (9) и Pinaceae (5). По содержаяню эфирных масел исследованные растения можно разделить на 3 группы: I -до 0,1% (29 евдов); II - 0.1-0.5% (71 вид); III - более 0,5% (72 вида). Последняя группа растений, составляющая 43,6% от общего числа анализируемых видов, представляет И1пер*»с для промышленной переработки. К пен относятся пион уклоняющийся, рододендрон даурский, феллодоция, шизонепета однолетняя, девясил высокий, пиды родов тимьян, багульник. тысячелистник, полынь, виды сем. селадерейные и другие

Анализ данных по накоплению эфирных масел в зависимости от экологической приуроченности видов показал, что исследуемые растения произрастают в самых разнообразных экологических услогиях (рис.!). На пат езгляд. в Сибири наиболее благоприятными для накопления зфирн?пс масел являются районы с богатыми недостаточно, грекекио недостаточным или умеренно увлажненными почвами. то есть ксерофитные, мезоксерофитные и мазофитные условия обитания. С угулпе.чнеч услспмй обитания (высокогорья, сгллькые. избыточно увлажненные места или засоленные почвы ) количество видов в экологических группах уменьшается. Образование г-фнрних насел в растениях обусловлено генспгчссхи. а наиболее благоприятные и привычные для данного вида зкологичесхие условия способствует реализации этих генетических признаков

Оценка гптшпжроЕкай гктнвггост эф;гр!!37:эс.Л!г:.-п-гх растепгй

Поставив задачу целенаправленного поиска перспехтнзких для медляттсг-сй практики эфганомаелнчныз растении нами изл-'епк антибактериальные свойства 122 суммарных комплексов 52 растении г.з 10 семейств. из них - -зб эфирных масел Многие из видоз известны з ос^ицина-льной .и народной медицине и ;:гирско распространены в Cüöirp»!

>CTc:icü\ei!e. тто бо льиишетво эфзтрночасличньгх растений облалакл избирательной антибактериальной ¿ктигкостью , диапозон которое очепь шире.", и :!Ь'рал<аетоз s концентрации для эфирных касел от 31.25 до 1СХХ) мкг/мл, для зодно-спиртсзых васто?к - 1:20 -1-5 50. Наиболе» чувствительны к. зфкр:шм маслам стаф:иококк золптгтетый и стрегпококг. кччо.мтгч^схнй. Активность з концентрациях егт 31.2.5 до 1000 мкг/мл по отпэиепгпо к данным тест-мкгрсСгм презгпли Б7% п ¡54,3% эфирных мэгел состгстсггсггпо. Одгахо erT:!!;:;oiTb з ' ког.цетгградп^т 3I.25-C2.Z0 у.кт/i-

яро.такля лн-'ъ б гф^грпых масел. Б с-п:с:::с::;--т пало*?х:1

> 0.5 %

к Гг Гад 1ЭК IX 35Í

Рас. 1. Распределение эфвриздимиишх ргстенкй во зилолпссхмм груаплк M - мезофит, Мк - ыезоксерофит. Л1Гг - мезогнгрофнт, Гг -гигрофит. Гал - галофит, К - ксерофит, Кпт - кссронстрофит, П -психрофнт. Ппт- психрофит-пстрофит, Ми - мезопсихрофэт.

оказались zjmv^-ли 43,5% исслсдусмых эфигссл. в ocbcwcm о предельных копцентрагсет; 500-1050 икг/мл. На:*,более резнстенттпт к зфирпъги иаслам клебсйелла ппегмояийнгя. прстсЛ вульгарный н синепгойнгя палочка. Рост клебсиаллы пяегмонкЯнай ггагкбгроЕалп лишь 10 из 46 испытанных эфирных масел (21,5%), протея вульгарного - 19 (4i.3%), синегпойяой палочки - (I (23,9). Агткзяосгь в отаотпеиш! данных тест-культур проявили эфирные млела ргстеяий семестровых, гсяотконых и пиоиогых (тгСл.1).

Анализ антибактериальной активности водао-ш;р::цщд пастоек показал, что к большинству гас них наяЗслыпая 4yscTB!freAbHccrb отмечена у стгф1!локсетл золотистого (77,5% настоек) и стрептококка гемолитического (95% пгсгоех). Более полотты настоек (55%) проззнли активность в отнепгенни протея вульгарного.

На осноЕашш полученных данных а число перспестазтгах п качестве возможных антибактериальных средств нами отнесгвьп эфирные кзелд пиенл уклоняющегося, шизопепеггы однолетней, элынольцки реснитчатой, видов р. тимьян, полыни серой. п.эстрагсз. тысячел1гстиика азиатского, золотарника обыкновенного: еодно-спиртовые настойки пиона уклоняющегося. колюрии rpa3rt.vrroai!.Miofi. лабазника сязолкспюго, грапнлата аллепского, г. речного, элыиольции реск:ггчатоД и золотарника сбыкпопе'гпого.

Изучена ргнозадютлятзщта: я протягез^кзтздкгельпых с=сЛет зфяркъгх мзссл

Поскольку антимикробное дсйстпиэ С:!олсгачесг.п агтигпых комплекссз гагкотся необходимы;» фгхтсром при лечкпга ргя, ожогоз и воспалений разл:пт'сй этиологии, представляло интерес исследование ргнозажиагяющих н сраткгоЕоспзлнтельяыг сзогстз эфирных иасел темьяпз изящного. злыпальцйи реаптпгтоЭ, тысячелистника азиатского, золстаркккз обыкпозенпого, полынеЛ серой, сизерса. якутской, пиона уклоняющегося и неяоторьп друпгх.

Установлено. что асе исследуемые эфирные масга проявляют выраженной гнтиэкссудатзгеиеа до Г: стп на пике гсспглени;» а близки по активности с препаратом сргглев:1.ч бутадиеном. Презент угнетения отека под плняш'.ем эфирных массл тысячелистника азиатского (52%) н полыян якутской (50%) прегосход1гг эффект других эфирных мгеел. что иоктто объясяхгть присутствием ™ i:;.:x хгмазуленз.под влигпием которого угнетение стека составляет 53.3%. Активность эфирных масел полыни серей; тинюта изящпого, элылольцнп и золотарника достоверно sie отлггчастся от азуленеядержгщих эфирных массл. Можно предположить, что кроме хаяазулена а;гп1экссудгткгк«хчи фоктерг'п» зфиршгх ггеел могут быть Ii друте терпеноидц.

t i

il Вя a fe о et 3 s ^ s С ■= О S -Si s cu •*• Е 8 с S1 ' »i 5 8§ ? 8 & 6 ä se и g и rt о "С Я ■§8 к s О ftf £ Ё 3 S" g ¿Л " 500.0 Ti/ Я n/n 500.0 II/я 1000.0 1000.0 II/я 500.0 il la Il/я и/я 500.0 II/я и/а и/я

250.0 500.0 250.0 250.0 500.0 125.0 500.0 1000.0 125.0 250.0 II/я H/n 125.0 it/я и /а n/n

в/и В/II В/II В/II . В/II в/II 00ÎÎ 0 0001 В/II U/II 000? 00001 В /II В/II в/п 0*0001

31.2 31.2 500.0 1000.0 62.5 62.5 250.0 62.5 500.0 62.5 500.0 125.0 31.2 125.0 62.5 500.0

от в/II и / II В/II В/II В/II O'OÎZ 000S 00001 О'ОК 0 00Í ¡tt/ll в /а O'OOS в/и O'OOÍ

62.5 62.5 500.0 500.0 ' 250.0 62.5 250.0 1000.0 125.0 250.0 500.0 125.0 62.5 125.0 125.0 1000.0

ís s S e Б S с S оке S й е- о

S в t.. ь I 1 Ä с гз К : "г- ь ~ ■ л и . _ S • îî > " с В И 5 J - Г— Ö С Й tJ ^ Г1 : Г ; С s ® £ HKS . £ £ к J ï-i _ = »■ S £ V- r: £ « ^г — e-"Sc"5!WîS5:3 -"gen ^ £ Л 5 5 -S £ E — = ~ Я £ 3 g s 1 = g | E £ 5 S = 1 « ? e — "S. H ^ -5 ~ э г! ~ ~ Ь. ^ "S E п n n g- — í* ir. — -- ï; s= i- ' = JSÊ'ïssfeËffcgsSs's&t S^Jcí. EESS-b^l-S-iSS и о — - = с .«

Лечение кожных дефектов аппликацией препаратами эфирных масел показало, что они достоверно ускоряют заживление экспериментальных ран у крыс, стимулируя репаратигшые процессы. Наибольшую активность по отношению к контролю проявили азуленсодерячатцис эфирные масла полыни якутской и тысячелистника азиатского (33-40%), а также эфирное масло золотерннка (40%). Эти же эфирные масла в отличие от других достоверно превосходят по активности препарат сравнения лифузоль (9.9-17,1%).

Таким образом, экспериментальные данные характеризуют исследуемые эфирные масла как достаточно активные ранозаживляющие средства с выраженным противовоспалительным действием. Сочетание указанных свойств с антимикробной активностью эфирных масел подтверждает перспективность их дальнейшего исследования с целью использования д\я разработки фитопрепаратов реноэаживляюгцего. противовоспалительного и антимикробного действия.

3. Исследосгипс химического с.¡ста".а зфирних масел

На основании двух тестов: количественного содержания эфирных масел и их биологической активности для дальнейшего исследования нами выбрани mvjj, широко распространенные в Сибири и имеющие достаточную сырьевую базу: некоторые виды эндемичны, но доказана возможность их интродукции. Большинство растении применяются о народной медицине, некоторые - в офнципальной. Однако химический состав эфирных масел избранных видов изучен недостаточно, что не позвомит рексменлоЕать их для использование в медицине.

Методом ГЖ\ нз\-чон химический состав эфирных масел IE вклов^растепий. Идентификацию компонентоз на хроматограмчах проводили во времени v.r. уд'-рленваиия, а теюке по увеличению пик- на хроматограмме при добавлении известного вещества (метод подегдки свидетелей) Основные компоненты выделяли из зферных масел метолом препарзтивной ГЖХ и мдеитификкрояали физико-химическими и спектральными методами: по данным ИК- и ПМР-свектрам сплрнепием со спектрами заведс?.то известных веществ и литературными сведениями Компоненты, идентификация которые описанным способом и«* представлялась нозмо/кнеи. выделяли из эфирных мас>\\ в количестве. достаточном для установлен!:'! их ситггуры. Он шко-\нмпческая характеристика оО"лвны>, компонентов, выделенных ив исследованных эфирных масел, представлена 5 табдпце 2. Ii качестве примера приведено исследование состава зфирнцх масел некоторых растений.

TaßAHna 2

OiuuiKO-xiiMii'iecKtiH xapaKTCpiicniKä neiuecTu, nuAeAeiiuux in atjnjpuux MOCßA

Bcmhüci'BO

______

ß-Miipuiüi

CTpyKTypnaji (|)opMyAd (J^ A^ Hcro'iiniK noAyioiiiin

20

_4 5 1.4650 0.79GG 0"

Thymus krylovil

Y-Tepiiiiiion Apri'MiiatiaKurou

ApTCMiiniienuft cuupr a-TopiiiiiiooA

3AMIIl>AI>l|l(dKUT0ll

1.4000 0.0475 0

I.4G70 0.07G2 0

1.4500 0.0973 -20

1.4079 0.9015 0

//

Artemisia absinthium A.sieversiana

I.4U0Q 0.9100 M06 Thymu» krylovil

Elshollzia ciliata

3 I 4 I 5 I_6_I

1.4865 0.967 0 -li-

li

1.4400 • 0 Thymus krylovii

1.4534 0.916 -19.6 Artemisia absinthium

1 Taiiacelum vulgare

Тид i73° 0.986 -45.8 Tanacctum vulgaro

(cn) 5 (cn)

1.020 -39 Thymus krylovii 0

1.4643 0.977 -44 -//-5

is

а-Фпрпплоп «-Ппсеболси р-Кар!!Оф)!ЛЛ1М1 (П-Куркумои

у-Колимеп ВРИ ЧЛЛ1ЛРГИД

хс

Таблица 2 (продолжение)

IZZZ]

1.4870 0.830 0 - // 0

1.4910. 0.070 -54 - // • О

1.4900 0.900 -14.5 Thymus krvlovii

О Artemisia yunica

1.4909 0.802 -22.9 Artemisia glauca 0

1.5000 0.916 +00.7 0

1.5450

1.0 IG

О

О

Paeonia anomalía

liVBVoV.xliio ч\онч пхчн ■ 1-) .jiiHi'i,ûi;i!d[]

- // *

- II

- 11 *

// •

-

" 0

o co¿go cr,¿si

оэш?|Ь Pisiuiauy О QOCOt ¿ICSI

<фс

iiao|Aj>) впшХцх чкои)

впиио L'iodJUozitps о • 0S¿6'0 oÇ'!Ç v".L

О OlGl'l OQES't

НО'

YS

^YlcnV

НО-

О

но с/поо1

О 0SG01 ¿9151 "Р

РНЭООЭ!

ого?-1

>кч

5

111(11 Vvi 11И csy H DV.OdVH.I V! 1.1.0 I\J

llllIlVYlll llo(JV!I.UH\l

VOIIO.IUCVIU.OJ^

UIHIii

i uviilnive3viu.i>|^

a4>ni.itoQvii.io¡\i

Vll.MY4VWt.ll.>yH3*0<IVuj-ll l

(оинамл/üVadu) £ Gtntvgpj,

Pceonla anomala — г.иоа узиаиххицайся.

Эфирное мас\п получали из измельченных, предварительно замоченных корневищ и корней. перегонкой с водяным паром. Эфирное масло состоит практически из двух компонентов и не содержит веществ терпеиового строения. Среди шгти компонентов, находящихся в минорных количествах и в сумме не превышающих 1%. выделено вещество с 11 а 1,5450 и запахом миндаля. Дополнительные данные ИК- и ПМР-спектроскопии позволили идентифицировать вещество как бензальдегид (0,2%). Другое вещество идентифицировано как метилбензоат (0.1%]: "л 1,5167; ИК-спектр I max см 1 : 1243,1671 (0-С*=0). 712. 741. 1603, 3024. 3073. 3087 (С„Н5-). Основным компонентом эфирного масла является метилсалнцилат (88%): "а 1.5360: а» 1,1810; "'а О". ИК-спектр 1 шах см ': 1615 (QHr): »250. '678 (-0-С=0); 3190 (ОН). ПМР-спектр (5. m.v.CACIj. ГМДС) 3.87 (ЗН. cl ОСН* 6.90 (2Н,м).7.42 (1Нлл. 8Гц. 2Гц) QH,-, 10.75 (1Н. с| ОН-группа. Идентификация подтверждена получением салициловой кислоты (Т. пл. 158-159", этанол).

В меньшем количестве (11%) в эфирном масле содержится п-гидрокенбензальдегид: 11а 1,5628. ИК-спектр Я. max см"1: 1580 (СбН4-): 1668, 2755 (Н-С = 0| ; 3150 (ОН, широкая полоса). ПМР-спектр"*(6. мл. CACIj. ГМДС): 6.95 (2Н. м) и 7.4-1 (2Н, м) С«,НГ; 9.85 (IH.c) НС = 0 и 10.95 (1Н. с) -ОН. Кроме того, методом ГЖХ идентифицированы метилоеизоат (0,1%), а также fi-фснилэтиловый спирт (0,1%) и тимол (0Д%).

Полученные результаты значительно отличаются от лнтсрагурных данных, в которых основным компонентом эфирного масла н. уклоняющегося является пеонол.

Dracocephaltia percgrinum L.— знесгаловпик чужеземный

В эфирном масле нэ надземной части обнаружено 47 компонентов, из которых идентифицировали 27. Эфирное масло содержит в своем составе довольно своеобразный набор компонентов, относящихся к различным классам терпеноидов (%):а-ншк'и 5,76, камфен 0,15, Э-пинен 7,So, сабинен 6.04, а-терпннен 4.42. а-фелландрен 0,70. цниеол 0.46, Y-терпш.'сн 2.07, п-цнмен 0,83, тершшолен 0,46, Р-цитронеллаль 0,29, линалоол 0.66, лнналилацетат 2.42, кам^юро 1.35, терпиненол-4 0,39, а-тернинеол 1,80. (S-цитронеллпл Z07. гераниол 1.57, гераннлацетат 6.68, нераль 267, карион 1,99, нерол 1,08, элемол 5.56. а-бнеаболол 9.48, (НЗисаболол 1,10. По данным литературы 8 образцах хчужезе.чИого из флоры Монголии преобладает и-феллаидреп (70%).

Виды рода Elsbollxia Willd. - Элииолщая

Исследовали эфирные маелд, полученные из надземной части эльшольцин реснитчатой (E.ciliata), собранной в окрестностях г.Точска и выращенной на питомнике лекарственных растений

СГ>Г/, а T-'j.'-y 5. лзлногреОе::чйТоЛ (E.psevdocnstEt5| из Приморского гтргя.

• 3 эфирном масле э. реснитчатой обнаружили но менее 30 компонентов. нэ которых 15 минорных идентиф.чцировяли хроматографически: а- и ß-пннеиы, камфен, сабинен, мирцон, 1,0-цинеол, т-терпинен, n-цимен, а- и ß-туйоии, артемизиевый спирт, цитронеллаль, линалоол, линалилацетат, камфора, тертшенол-4, ß-кариофнллен, а-терпинеол, борнеол, у-кадинен, калакорен. Два

основных компонента выделяли из эфирного масла ПГЖХ.

.20

Вещество I состава С,0НПС>5; "А 1,4265; "а» 0,9674; а О". Содержание в эфирном масле (Г/KJC) 85%. В ИК-спехтре вещества наблюдаются интенсивные полосы поглощения (1SC0, 1618, 1658 см'1), принадлежащие валентным колебаниям двойкой ссязи к карбонильной группы, сопряженных между собой. Присутствие интенсивных полос поглощения (773 и 812 см'1), а также полосы поглощения (850 см1) в области деформационных колебаний С-Н связей позволяет предположить наличие & молекуле цис-дизамещечной С = С связи. Сильная полоса поглощения а области 1270 см"1 свидетел1,ствуит о том, что второй атом кислорода в молекуле представлен в виде простой эфирной связи.

В ПМР-спектре вещества I (СДС1* ГМДС, t£T мл) шесть сигналов 1,93 (ЗН. д. J = 1 Гц. H-S). 2,20 (ЗН, д, J=1 Гц, Н-10). 2,37 (ЗН. с. H-U). 6.31 (Ш. д. J-2 Га Н-4), 6,74 (1Н. м. J=1 Гц, Н-7), 7,30 (1Н, Л. -1™2Гц, Н-5) ( рис. 2 ). Двойной резонанс подтверждает, что однопротешшй мультиплст при 6,74 мл обусловлен взаимодействием с протонами сигналов метальных групп 1,92 я 2,20 мл Анализ величин химедвигов сигналов протонов вещества ] позволяет предложить соединению наиболее верояпгуто структуру 3-метил-2-(3-метнл-2-бугсн-1-о:|)-фурана.

Такое строение кетока объясняет разницу в химических сдвигах сигналов протонов пзопропилиденовой группы, вращение которой затруднено в результате конъюгации.

Спектр ЯМР "С (5, мл. СС1») вещества 1 состоит из десяти сигналов (рнс.З): трех квартетов прн 11,5; 20,4; 27,6 мл (-CHj); трех дублетов прн 115,3: 142.3 и 149.3 мл (-СН = ) и четырех сииглетов при 120.6; 128.9 ); 154,2 (-О-СД и 180.1 кл рС-О). Отнесение сшналов представлено в формуле соединения. Масс-спектр вещества 1 m/z (%|: 23 (33). 29 (29), 39 (33), 41 (15), 43 (б), 65 (51. 69 (10). 77 (10). 82(131, 83 (1С0|, 84 (7), 91 (12), 93 (191, 95 (7), 37 (9), 107 (10), 109 (21), 121 (24). 135 (19), 147 (14I.14Ö (10), 164 (53), 165 (7).

Гидрирование вещества (. 0,85 г (0.05 М) вэщест"« гидрировали о 10 мл ледяной кислоты уксусной на оксиде платины по Вильштеттеру до замедления поглощения водорода. Посла соответствующей обработки основное вещество смеси выделяли с

СИ,

Ркс. 2. ПМР-спектр Аеп!дроэльшоль^иахетоиа

U

'•л i. rj

fa

4 X

'TS, .0

":tlo

J-н

щ

СИ,, Z3

а

5 ¡! »

"VÄ

;¡kí? !-с-спс

".ofCIui:

помощыо ПГЖХ. В ПМР-спсхтре вещества П наблюдаются сигналы: 0.95 (6Н. д. Л-7 Гц, Н-^,10); 2,30 (Ш. м, -)«7 Гц. Н-8); 2.50 |ЗН, с. Н-11!; 2,70 |2Н. д. .1 = 7 Гц, Н-7); 6.32 (1Н. д, ,) = 1 Пи Н-4); 7,30 (1Н. д, .1«»1Гц, Н-5). ПМР-спектр показывает с одной стороны, что гидрируется краткая связь изопропилиденовой группы, с другой -подтверждает сделанное выше отнесение сигналов вещества I. По ИК-сиектру гидрированный продукт идентичен выделенному из этого же эфирного масла методом ПГЖХ компоненту, который по константам и строению соответствует описанному в литературе плыпольциякетону - вещество II. В ИК-гпектре эльшольциакетона исчезает лишь интенсивная полоса поглощения 1620 см'1, что связано с гидрированием одной сопряженной связи.

Эльшольциакетон - вещество II, С^НцО?, 1,4879:

0,9015: а О". Содержание в эфирном масло (ГЖХ) 6,5%.

На основании результатов физико-химического и

спектральном» исследования новое терпеновоо соединение (I) названо дегидроэльшольциакетоном. Полученные данные по химическому составу эфирного масла з реснитчатой не совпадают с литературными о преимущественном содержании в нем злынольциакетома. Основным компонентом сибирского образца является дегидроэльшольциакетон (85%), а содержание указанного в литературе злмиольциакстоиа составляет 6,5-9,8%. Зфиршю масла дикорастущих и культивируемых особой не отличаются по качественному составу, а при некотором снижении в культуре содер;хания дегидроэльшольциакетона отмечается повышение количества зльшольциакетона засчот восстановления предыдущего.

Состав эфирного масла з.лажисгребончатой существенно отличается от э.ресшгтчатоЛ. Хроматографнчески установлено, что преобладающими компонентами эфирного масла являются лнналоол (28.3%) и лналилацетат (14%); содержание зльшольциакстонз 112%) значительно превышает количество его дегидрспронзводного (1,69%).

Виды рода ГЛустиз — Тимьяя

В научной медицине издавна используется т.ползучим, который рассматривается кок сборный вид "ПььегруПит и

характеризуется значительной видовой химической изменчивостью По данным некоторых систематиков типичный _ т.ползучий за Уральский хребет, очевидно ко подходит и п южной Сибири розчожно не встречается. В этом регионе произрастают 14 близкородственных видов, химический состав которых практически не изучен. Д\я обоснования правомерности использования некоторых из них в качестве лекарственного сырья мы исследовали эфирные масю двух эндемичных гидов: т.Крылоиа (П).кгу1сл'1]| и т.'.пгнцного (Т1> е!еагпь).

В эфирном м.-.слс иадзечной части т.Крылоза. гсбрапной о окр. г.М:шус;:нсг.л Ксагаопрсгого храя, идентифицировали 27 яомнс.чечтотЕ.

Фракционированием прг.ег.ои;,з:> на роктифкяацйонкой колонке получили ряд фракций, из которых хроматографией на силикагеле (соотношение 1:30) сыделнли в индивидуальном виде мирцен, у - терпипен, камфору, борнеол, а-терпинеол, тимол и сабиненгидрат. Из кубового остатка хроматографией на силикагеле получили смесь сесквитерпенов, борниладетат, тимол,

кариофилленоксид. Повторной хроматографией сесквитерпенов на силикагеле, импрогнированном 20% нитрата серебра, выделили 5-, £ -ну- кадинены, у-муролен, 6-бисаболен, а-фарнезен, кариофиллен. Все выделенные компоненты идентифицировали по данным ПМР-спектроскопии сравнением со спектрами известных веществ и литературными сведениями. Установлено, что состав эфирного масла т.Крылова близок к данным для официнального вида т.ползучего, на основании чего может быть рекомендован наравне с ним д\я заготовок.

Тимьян изящный - алтайский эндемичный вид, выделенный Л.П.Сер! невской из полиморфного вида т.нолзучий, . привлек внимание исследователей оригинальным лимонным запахом. Данный вид ннтродуцирован п ЦСБС (г.Новосибирск). Нами исследовано эфирное масло из надземной части культивируемого растения. Вччо сосгаве обнаружили 37 компонентов, из них хро.чатографичесХи идентифицировали: мирцен, п-цимен, лимонен, у-герпинен, терпинолен, камфору, борнеол, териннеол-1, гераниол, цитронеллол, тимол, кариакрол, 15-кариофиллеп, г-кадипен, u-муролен, (}-бисаболен. Основным компонентом является гераниол (60,32%), обуславливающий в смеси с другими компонентами приятный лимонный запах эфирного масла и растения. Вместе с тем, р незначительном количестве в эфирном масле содержатся характерные для р.тимьян тимол (1,21%) и карвакрол (0,-1%).

Различия в составе эфирных масел исследуемых видов тимьяна не только подтверждают их видовую самостоятельность, но и обт.ясьяюг биологическую активность: т.Крылова, содержащий 3,9% тимола, обладает более выраженным аиимикробным действием; т. изящный превосходит его по ранозаживляющему и противовоспалительному эффекту.

Виды рода Achillea L — Тысячелистник

Исследовали химический состав эфирных масел in надземной чг.стн тысячелистника азиатскою, т. обыхновеЛног» и г. благородного. При эго VI преследовали цель сопоставить состав эфирных масел систематически и морс{х>логическн близких видов т азиатского и т. обыкновенного д\я обоснования их видовой самостоятельности, а д\я иохучоння (мхьективного заключения игс\е virtHMi niinpiu ><• M.iCA(j систематически Ci\H 1Г.ОГП. но достоверного вида т. благородного.

Т<Л«<ша 3

Cocí iз тфирлюс мзсел виаоз р. AchiL'ea L (фага ииэтск»';!,' % от ютзго наслз)

A. asiatica A. milli- A. nobilis i

folium i

1

Компоненты Краснояр- Томская Новоси- Томская HOSOCH- j

ский край сбл. бирская обл. обл. бнрекая | сбл. i

_I______ 2 3 4 5 6 i

а - mmtii 4.32 4 iS 2.61 0.87

хамфен 110 4.09 3.62 0.78 -

(5 - пипги + 26.85 22.56 26.10 23.35 4.25

егбннгч

а - терпинем 1.44 4.37 6.06 133 0.79

а-феллгнлрен 0.S2 сл. - 1.31 0.95

лимонен 0.56 4.16 9.49 4.07 0.18

1.3 - шшеол 5.21 1174 10.57 12.73 5.93

(3-фсллзндрги 0.96 «1. 0.72 0.94 -

Y - тершшен 1.92 3.43 121 2.91 0.95

п - h1iv.ch 0.56 1.37 167 2.06 0.79

терпшю.кгн 0.41 0.62 0.45 0.5S 0.32

ахиллашлацетгт 0.10 ст. 0.03 0.05 -

артсмизиакстом - - - - 0.02

а - кубОси 0.17 сч. 0.03 сл. -

илгигеи + злемен 0.21 0.62 0.14 0.34 -

3 - к>б5снсн 1.10 0.34 3.57 0.S1

а - ту'Лон - - - - 0.0!

р - rviíon - - - - 0.13

артсмизнгспирт - - - - 0.05

лиизлоол ' - - - - 0.37

камфора 0.14 0.21 0.23 0.13 0.23

Q - терПШКОЛ 0.54 0.19 0.11 0.53 0.42

Р - карнофлллем II.Í6 6.70 5.47 5.G') 1.S0

гуму.-си НО 0.92 1.03 0.97 0.59

борнеол 2.05 175 4.97 113 -

гг - куркуисн ' - - - - 3.02

геризкрен Я 10.29 7.1-', 7.СЭ SAO -

герзнилзнгпгг 0.78 0.27 0.59 0.73 -

1 - кздиигм 1.44 1.03 0.95 1.15 45.72

Таблица 3 (продолжение)

1 . ..« , л 2 1 3 1 4 ! 5 ; 6

Б - кадшкн 1.09 0.69 0.81 1.11 0.53

гемакрон ' 09 сл. 0.16 0.05 -

и - элсмсол 1.37 0.94 0.32 0.82 -

а - сслянелол 0.55 1.53 »0.58 2.25 -

р - селикелсл 0.56 0.98 - - -

р-кгриофнлленея 1.28 0.68 сл. 0.97 -

Р - куркумен - - - - 0.18

тимол - - - - 2.38

карвакрал - - - - 2.01

кдлшюл - - - - 8.6

хлмазулен 12.34 ' 5.01 3.86 5.14 сл.

непдегггифишфо- ■ 7.14 6.82 2.89 9.42 17.69

вшные

Методом ГЖХ в сосгаье эфирных масел идентифицировали около 40 компонегггов. Длппие таблицы 3 показипают, что как но тачестигп'юму с о ста чу, так и по количественному содержанию всех 1из>:лоцс1гто11 эфирные масла т. азиатского и т. обыкновенного довольно близки. Некоторые различия в содержании отдельны} поществ сеимкы вероятно, не с видовыми различиями, а с местом произрастания растопил (зколого-географнческий фактор) или счстц.мстичсскс,"! неоднородностью вида. При этом заметно отличие сосгака ^¡¡щрного масла т. благородного, особенно по с_ск:!П;ср.:онс;у_1м. Так, если в эфирных маслах т. азиатского и т. ^¡¿«нг.г»сг.::ого креоолалсшт коиотерпенопди, с основном засчет ^исохого <еодср;;иш:ш ¡'»-янисиа. саОинена м цинеола. то более 60% гф:;р;:с.го масла т. благородного составляют ссскв/Гтерпеноиды. .: - "чуБ&стссз ,;ю у - ходни?;! и его первичнин спирт калииол. В то ;ке ..р-.'Ял 5 сьг-ГЛГтеряеноЕсЛ част)! эфирного масла т.благородного спсугстиург углеводород герчагрон О и ряд с1П1рто::. характерны* дзух ;.^уткх т1дся'и-/>.:стиила Редким пс-с/иоченнс:.:

р тысячелистник пилястоя наличие тимола и харг,акрола, сОыар/же,!«:« к.-иа в гфкриом масле т благородного. Хамазулеп ;:;;исутстиуст л „лпьс: щдг ;; елгдовых количествах По мнению »•етоторь:* авторов и лачеггпе хемотахсоночг.ческого признака .*я,ч'.р>и>-:;^сл1.Ч|П;ч растений следует нснользонагь именно состав '.осямле^гкокАра. 1.рсдггааи:,ои;;:.~ Оолее [ujcoxr.it у}хчлчп.

тер::а'.;окдоа. На сскс-Е2!:т1 этого «и»™ предположит-что Оллзхзд* г. о состг^у тел:.ко л.опотерленоядо". но и

сссзкт."рг.<. т. азъэтсый т. обыкног.енш :й л"йС1В11 iev.no

с Сол „д!г::>:Г| Это с^дтьеря'л ет

современных ботзпиков (Колычева, 1980) рассматривать т. азиатский в составе полиморфного вида A. millefolium L. s.l. На наш взгляд т. азиатский представляет особый интерес как хемораса т. обыкновенного, характеризующаяся высоким содержанием проазуленов и однородностью проазулеповмх популяций.

Ниды рода Artemisia L — Полынь

Нами исследован химический состав эфирных масел полыней подрода Artemisia Less.(п. горькая - A. absinthium L., п.Сиверса - А. sieversiana Willd.) и подрода Dracunculus Bess. (11. серая - A.glauca Pall., п.зстрагон - A.dracunculus L.|, собранных в окрестностях г. Томска.

П.горькая и п.Сиверса - систематически и морфологически близкие виды и относятся к группе азуленсодержащих растений

В составе эфирных мзсел из надземной части данных вндоп обнаружили не менее 50 компонентов, идентификацию которых проводили хромато графически. Для уточнения некоторых кислородсодержащих соединений данную фракцию концентрировали при ректификационной перегонке и отдельные компоненты выделяли с помощью ПГЖХ.

.70

Найдено !0,4"о) пе!цостпо : пл 1,4678; "я 0,8762; а = О"; по ИК-снектру полностью совпадает со спектром артемизнакетопа.

Вещество (0,8%) : Пд 1,4507; "т 0,8973; '"'л -28. ИК-гпектр указывает па принадлежность вещестпа к глифатическим спиртам с двумя кратными связями, одна из которых является вниильной | полосы 918, 1002, 1640. 3079 см>|, другая -трохзамрщепная, входящая » изопропилиденовую . группу СН = С(СНз)з. Описанный спектр совпадает с ИК-спектром дртемизиевого спирта.

Полученные данные свидетел|>стпуу)т о близком сходстве качественного состава эфирных масел п.горькой и и Cimepca. но наблюдаются сущестиенныо различия в количественном содержании отдельных компонентов (табл.4|. Так, основным компонентом эфирного масла п.сиверса является I.Q-цинеол тогда как ь

и горькой его содержание 0.3%. Следует обратить внимание lid ,"-:3i.i;:;y п содержании a ,'i fi- туйинов. обуславливающих некоторую М'.чп'чность рзегений. п.Снсерсл содержит эти вещества » следовых количествах и имеет преимущество по сравнению с п.горькой. Содержание хамазуленл » эфирных маслах них видов полыни составляет 1.2-1,3?^, что екгьяспяет более низкую рапозаживляющую и противовоспалительную активность эфирною мосла п.Сиверса но сравнению с эфирным маслом тысячелистника ■nnjtcKuro [¡мосте с тем высокое содержанию цииеола <:Сусл"1.зл1,на(,г, по-нилимочу, проу»ляемую и низких лоиценграцнмх а<п м'ики-рплльную и яншфунгальпую активность зфирного масла и.Син'.'рс« Получении»1 результаты не только подчерки!;-I'or с::ст<"ь;--!г:ескую блг'-чтгъ п.гчрьхой и п.сияерса. но и подт::ер,гд.:;',;т рзи;:->

Т-5,и!ца 4

Состав эфирных' масел омдоз p. Artembia L. (окр. г. Томска, фаза цветения, % от целого масла)

Компоненты полрол Artemisia подрод Dracimculus

A. absinthium 1 A. sieversiana A. glaiicajA diacunculus

1 2 | 3 4 5

а - шшен 0.60 6.70 3.00 2.50

камфен 0.30 0.60 0.87 0.18

Р - пинеи . 0.08 1.50 0.29 5.44

сабшкм 6.50 2.30 0.29 0.14

б3 - карен - - 5.42 2.05

а - тершшен 20.60 11.80 - 0.76

лимонен - - 7.09 5.35

а - феллашрен 0.50 1.80 - -

р-фелландрен 0.50 - 2.32 -

1,8 - minean 0.30 27.90 0.32 0.23

у - тершшен 0.70 2.60 6.37 0.60

П - U5IMCH 0.30 2.00 сл. 14.45.

тершшолгн 0.30 0.S0 13.15 V

артемизиаксточ 0.40 0.10 0.29 0.12

a -туйои 5.90 0.07 1.79 0.23

Р - туйон 6.60 0.30 0.29 1.19

артемнзиаацетат 2.70 0.30 - -

аргемизиаспирт 0.30 0.80 - -

камфора 4.00 2.40 0.39 0.23

бориилаистат 2.S0 2.90 - 0.27 •

и - тершшеол 8.40 5.70 - 3.37.

Р - янтрояеллол 0.40 2.60 - -

н забор! i го.1 1.50 4.50 - -

борнсол 2.50 0.30 1.S6 -

каргдаи 2.03 2.20 - -

нерол • 1.80 2.20 - -

'гераниол 0.40 0.30 - -

(i - кариофкллен - - 1.13 -

а • кариофиллен - - 1.42 *

Р - фенил лило- 2.50 1.30 • -

вый эфир

ТгЗлиш 4 (прс.толлхкне)

I 'I . .

гермгкрек д

ar - куркуме»

кэламенен

халгкорсн

метилэвгенол

МеП1КбС1П!1ЛЯ111!Н

мстилертогка-

рОКСИбсНЗИЛАИИН хамгзулен нешентифици-рованяыс__

„.2 . .«1 * j _.L 4 I 5

0.53 .

- 4.90 0.23

1.16 0.34

_ 0.43 0.37

8.20 1.70 1.89 10.76

1.50 1.90 2144 46.23

- - 9.57 0.55

1.30 1.20 _

16.09 11.13 15.23 4.41

нальность использования з медицинской практике п.Скверса наравне с п.горькой в качестве источника лекарственного сырья.

Эфирные масла систематически н морфологически близки* видов подрода Dracunculus п. серой и п. эстрагон значительно отличаются от эфирных масел полыней подрода Artemisia как по органолентнческнм свойствам. так и более высоким уровнем а1гтимикробной активности. В составе эфирных масел п.ссрой и н.зсграгон обнаружили на менее 47 компонентов, нз которых идентифицировали 25 (табл. 4). Наиболее распространенные компоненты монотерпеновой фракции идентифицировали хроматографнчески (ГЖХ). Сескнтерпенонды выделяли нз эфирного масла методом ПГЖХ. По данным ПК- и ПМР-спектроскопии сравнением со спектрами нзгсстных вощестз и литературными, сведениями идентифицировали ar-куркумен, а- и ф-кариофиллени, каламенен, халакорен и гермакрон D. Наибольший интерес представляет фракция ароматических терпеиоидсв, составляющая 35-58°Ь эфирных масел, из которых 32-45% приходится на дилцетилепопйс соединения.

Для идентификации хомпоиситсз данной фракции эфирное масло подвергали фрикционной перегонке. При исследовании высококннящей части эфирного млела выделили углезодород (I) и его оксипроизподяос (2).

Вещесгяо 1 выделили ПГЖХ m фракции эфирного ие.саз, кипящей при Т'120-145° и остаточном давлении 5 мч рт.ст. Очистку вещества 1 проводили путем повторной перегонки.

Вещество 1 состава CnH10 (МЧ54). Т"!35-135"С (5 ммрт.ст.1.

J31 , i*V

11 л 1,5723; 0,9783: '"'а 0°.Это жидкость светло-желтого цгета с характерным приятным запахом. краснеющая при нзгрсознии и хранении на свету. 3 спуктуре соединения имее".<:я монозамещенное бензольное ко ibiví (ИК-спектру! max см ': 703, /42. 149Я. 1605, 3032, 3035. 3000). которое сохраняется .:рн быстром

поглощении четырех молей водорода при гидрировании в кислоте уксусной над окисью платины (по Адамсу). Последнее обстоятельство позволяет предположить, что данное вещество принадлежит к ацетиленовым углеводородам. Действительно, в ИК-гпектре в области 2200-2280 см"1 'аблюдаются две полосы поглощения слабой интенсивности, принадлежащие валентным колебаниям -С = С-связей. В ПМР-спектре (5*. м.д. СДОд. ГМДС) вещества 3 сигнала: в сильном поле трехпротонный синглет 1,88 мд, принадлежащий = С СН группе; в слабом поле - слаборасщекленный пятнпротоьный мультиилет бензольного кольца 7,32 мл и двухпротонпый синглет '3,72 мл свидетельствуют о том, что СН -группа находится рядом с Бензольным кольцом |рис.4). Полученные результаты позволяют сделать вывод что выделенное соединение имеет наиболее вероятное строение б-фснил-гексгдиин-2,4 (метклбензилдиин).

ЯМР 13С-свектр (б", мд.. CCI« ) подтверждает это заключение (рис.5): 3,5 (1 С, кв. С-1|; 25,2 (1С, i, С-6); 64,99 (1С, с, С-21; 67.С9 (1С, с, С-5); 73,5 (2С. с, С-3,4); 126,40 (1С, дС-4' 127,55 (2С, дд, С-З' 3'!; 128,20 (2С. дд, С-2',б'); 135,45 (1С. с. C-l').

Масс-спектр 1 (rn/z, J%): 39(14), 50(24), 51(37), 62(7), 63(18), 64(8), 74(12).- 75(13), 76(26), 77(19), 87(5), 91(6), 102(7), 115(21). 119(8). 126(10), 127(12). 120(19). 139(19). 150(7), 151(24), 152(71), 153(80), 154(100), 155(13).

На осиомь'.чп физико-химических и спектральных данных основной компонент эфирных масел п.серой н п эстрагон | идентифицирован как. метилбензилдиин. известный под названием капиллеп. Из эфирного масла п.серой капнллен выделен нами впервые.

Из кубового остатка от перегонки эфирного масла, после соответствующей обработки, методом ПГЖХ выделили вещество 2.

Вещество 2 состава С„Н,0О (М* 170): ПА 1.5493: ""а О". В ИК-ciïCïrrpe вещества шггеисивнау. полоса поглощения 3280 см'1 (фепольноя ОН-группа), расположенная » орто-положении по . отношению к углеводородному дин новому заместителю ПМР-спектр вещества 2 отличается от спектра 1 присутствием однопротонною сип глота Е области S,7 ид., смещающимся в сильное nov np)i повышении температуры ЮН-группа) и четирехпротошшм мультнплетон при 7,6 мд.. аизмьз констант спин-спинового взаимодействия которого сввдетельстпут об ортоза.чещении и бензольном кольце. Получении." результаты позволяют предложить выделенному соединенно структуру С>-(2-гп,\рохснфеш!л(-гексадиЛн-2,4 (;.;етил-срто-г!1,\роксиСч.'нз1ь».дннп) (II). Данное* вещество новое и сцделепо нам!! из эфирных масел п.серой п п. эстрагоп впервые.

©-

-CH¿

72ai0-

-cu.3

S

6 £ 4 3 2 Рис. 4. ПМР-сяекгр мстилбонзилдиинд

ЧЛ '»«S

<r>

VJ

o, Cl iCtJ

<—АЛ

Таким образом, предполагаемое на основании систематической близости сходство состава эфирных масел л.серой и п.эстрагон подтвердилось. Вместе с тем, полученные данные не совпадают с данными зарубежных авторов, где основным компонетом эфирного масла п.эстрагон является является метилхавихол (70%). Присутствием полиацетиленовых соединений можно объяснить проявляемую этими эфирными маслами высокую антимикробную активность, что подтверждено нами экспериментально.

4. Анатомическое исследование эфирномасличных растений

В результате проведенного микроскопического и гистохимического исследования эфирномасличных растений флоры Сибири (пион уклоняющийся, колюрия гравилатовидная. змееголовник чужеземный, эльшольция ресшггчатая, зизифора клиноподиевидиая, золотарник обыкновенный, тысячелистник азиатский, полынь серая ) нами выявлены ряд характерных для каждого вида признаков, которые могут служить диагностическими для лекарственного сырья и использованы в нормативной документации.

Анализ структуры секреторных образований исследуепих видов показал не только их многообразие, но подтвердил данные литературы о том, чго эфирное масло может локализоваться в различных органах растения не только в специализированных секр<ггориых образованиях, но также и и обычных паренхимних и эпадермальных клетках-. Если .рассматривать анализируемые нами растения по степени эволюционной продвинутости их семейств: Раеописае - Иоиссае - Цагшасеае - А51егасеае, то нетрудно заматить, что система секреторных образований усложняется в том же направлении. Так, пион уклоняющийся из наиболее примитивного в филогенетическом отношении семейства пионовых продуцирует и накапливает эфирное масло, как в корневищах, так и в листьях, в иарехимных клетках различных тканей. Эфирное масло колюрни гравилатовидной семейства розоцветных , состоящее на 90% из ароматического фенола эвгенола, локализуется в виде кристаллов также в основном в паренхимных клетках корневища и следовых количествах в эпидермальных клетках и мезофилле листа. Растения более высокоорганизованных семейсгв ясноткопых и астровых накапливают эфирное масло в специализирован них образованиях. Змееголовник чужеземный, эльшольция реснитчатая и зизифора клиноподиевидная семейства ясногковых имеют секреторные »¿разевания в виде железистых трихом (железок), структура которых слабо дифференцирована (змееголонинх), либо они состоят из 6-8 (эльшольция) или 8-12 (зизифора) клеток, расположенных в один рцд. В меньшем количестве .клирное масло локализуется в эпндермальмых и паренхимных клетках. И, наконец, значительно

разнообразнее приставлены секрсторние образования растсснй семейства астровых, что подтЕорждгет его эаоАЮЦксяную продвкнутость. Tax в надземной части золотарника обыкновенного эфирное масло накапливается и' железистых трихомах, схизогекаых вместилищах, идиобластах, а также в клетках эпидермы и паренхимы. Причем, структура железистых волосков разнообразна н оригинальна: на эпидерме листа железистые трихомы 2-3 клеточные, на эпидерме цвегхов они двухрядные, многоклеточные н отличаются по форме от железок, характерных для данного семейства. Секреторные образования тысячелистника азиатского представлены железистыми трихомами и схизогенными каналами. Характерные для этого рода проазулены локализуются в железках и отсутствуют п каналах.

Характеристика секреторных образований рястениЗ p.Artemisia представляет особый интерес, так как наличие или отсутствие каких-либо типов служит диагностическим признаком подрода. ряда и других таксономических единиц. Например, видозым признаком полыни серой могут служить схизогениые каналы и экзогенные секреторные железки цветоложа.

Таким образом, проведенные исследования подтверждают мнение разных авторов, что структура секреторных образований может служить достоверным как систематическим, так и диагностическим признаком эфирномасличных растений. Новизпа данного исследования заключается в исследовании новых, ранее мало изученных видов эфирномасличных растений, выявлении оригинальных анатомических признаков сырьвой части, а также структуры их сохреторных образования. Полученные данные позволяют научно обосновать и разработать оптимальные технологические режимы извлечения : эфирных масел из-прелагаемых впдоз растительного сырья. Так, разработанный нами способ получения эфирного масла тысячелистника азиатского, обладающего выраженным ранозажналяющкм и

противовоспалительным действием, защищен патентом РО.

5. Реиеииг попресоя рационального кспользозгппя эфнркоиясличпых растеикД

Разработка лекарственных препаратг.оз на основе npapojmjz кочп\су.сон тысячелистника азиаснгхого

Предварительные фармакологические исслсдопакт-л доказали перспективность получения на основе эфирного .«пела тысячелистника азиатского препаратов ранозгжиачягощего и противовоспалительного действия. По данным литературы растеякл р.тысячелистник содержат кроме эфирного хаем фенол ип.-о соединения, полиСахариды. микроэлементы ч другие се:;:ест£а, которые а г.азнатскои изучены недостаточно. Утитык^я rjiipesc.?

распространение и . применение т.азиатского в народной и официнальной медицине, а также необходимость его рационального использования нами предпринято получение ряда биологочески активных комплексов из сырья данного вида и разработка на их основе лекарственных трепаратов.

Последовательное извлечение из надземной части тысячелистника эфирного масла и фенолъно-полисахаридною комплекса проводили по схеме, представленной на рисунке С.

Для определения возможности дальнейшего использования шрота после извлечения из травы тысячелистника эфирного масла нами проведено его химическое исследование в сравнении с Исходным сырьем. Данные таблицы 5 показывают, что по содержанию осповных групп биологически активных веществ шрот мало отличается от исходного сырья, а выход ПСК значительно увеличивается вследствие повышения диффузионной способности полисахаридов ш обработанного паром сырья.

Таблица 5

Содержание биологически активных веществ (БАБ)

_в надземной части и шроте тысячелистника__

| БАВ .. | Надземная часть | Шрот |

Эфирное масло 0.50^0.01

Сумма фенольнш соединений 7.50 + 0.10 6 40.±0.10

Олагонокды 1.72.±0.03 1.66^0.03

Кумарины 0.30±0.01 0.3^0.01

Каротино1;ды 6.05^.0.05 6.25.±0.04

Витамин С 24.78jt0.05 25.53jt0.06

Полисахариды 2.60^012 7.С5^0.11

Примечакпе: Содержание каротнноцдос и витамина С дано в пг/%, ОСТАЛЬНЫХ ВОЩОСТВ В /о% (П массы абсолктт-сухого сиртя; прочерк - отсутствие эфирного масла.

Как з исходном сырьс.так н в шроте обнаружили 11 веществ флшопицдион природы, нз которых идентифицировали кверцетии. апнгенин, лктгеолг.п, рутин, гиперознд. «¡пигеннн-7-глк1м»знд. .•аегтеолнн^-глюкозид. Качественный состав кумаринов сырья и шрота также идентичен н представлен 6 компонентами, н^ них идентифицировали умОсллифсрон, скополетин н кумарин. В сырье и Шроте сбпаруяшл;! кофейную, хлорогенозую и неохлорогеновую кислоты.

Ихмельтхшяг сьгтье

Обработка паром (перегонка с веданьш паром)

Реперколяцня

Ра1кпаз::;зл5»пцге, про ■пяо=оспз.,лгте.,ть!!0се ерггетго

удсбркп!»

Кормсхзя мука

Лола мапы)

Бяолс-птчгсхи

3 КОС"

-.¡тракт густой

Гранушфопатп::

4

Ахпгр:

3

ПрСЛ1Я05ПВе!П102

срглстгл, ф:гголо-

Рпе. 6. Схема ;сс':яле?:с::оГ1 пергрпботто: тр^пы тьтсотглпстгппса

Сравпгггедьное исслсдо^шис цслисахаридвых комплексов (ПСК). экстрагируемых из сырья и шрота горячей водой показали, что в кх состав входят нейтральный и кислый полисахариды. Методами БХ и ГЖХ в продуктах кислотного гидролиза ПСК из надземной части обнаружили галактуроновую кислоту, рамнозу, арабинозу, ксилозу, маяозу, глюкозу, галактозу и некдентифициро ванный сахар в соотношениях

7,3:8,9:3,6:8,9:19,4:49,4:1 соответственно. В составе ПСК из шрота соотношение этих же Сахаров несколько иное 16,3:28,0:4,3:3,8:12,5:35,5:1. Таким образом, в ПСК из сырья преобладает галактоза и глюкоза, а в ПСК из шрота • галактоза и арабиноза. В составе полисахаридов шрота преобладают фракции гемицеллмлозы А и Б, составляющие в сумме 10,3%. Эта фракция отличается и наибольшим содержанием нейтральных Сахаров. Качественный моносахаридный состав водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ и гемицеллюлозы определяют глюкоза, галактоза, арабиноза, рамноза. ксилоза, маноза и галактуроновая кислота: число Сахаров меняется в зависимости от типа полисахарида.

Таким образом, данные по химическому составу шрота после извлечения из надземной части т.азиатского эфирного масла характеризуют его как сырьевой источник ценных биологически активных веществ: фсяольных соединений. ' полисахаридов и витаминов.

Дня выбора оптимального экстрагеита, позволяющего извлечь из сырья и шрота комплекс биологически активных веществ с целыо разработки на их основЬ лекарственного препарата, получили ряд водно-спиртовых экстрактов и провели их сравнительную химическую и фармакологическую оценку.

Несмотря на то, что наибольшее количество сухих веществ из надземной части извлекается водой, лучшим экстра гейтом следует считать 40%-ный этанол, поскольку максимальное содержание фенольных соединений отмечено в 40%-ных спиртовых экстрактах как из надземной части, так и из шрота. Выбор данных экстрактов в качестве исходной субстанции для разработки лекарственного препарата обоснован фармакологическими исследованиями на противоязвенную активность.

Установлено, что 0,5% и 1% растворы эфирного масла тысячелистника в персиковом масле ускоряют заживление ран на 24-28%. Повышение концентрации эфирного масла до 3% усилило стимуляцию ропаративных процессов: ускорение заживления кожных дефектов составило 38% (р»0,0001, что превосходит эффективность мази Вишневского (20%) и линимента синтомицина (20%). Дальнейшее увеличение концентрации эфирного масла до 5% существенно не слиало на скорость злжиалення ран по срапненню с 3"1»-ным раствором. Характер основы (вазелино-ланолиновая, водно-эмульсионная. персиковое масло), используемые в

эксперименте дчя приготеплекия мази или расгаора эфярпого нхи, не оказывали существенного елпяяия ка степень его ектигкэсти. В связи с этим в качество лекарственной формы для исследуемого эфирного масла был предложен его раствор в персиковом масле. 3% масляный раствор эфирного масла тысячелнстннка назвав иамя "Ахизаи".

Ахизаи н его основной бкологичесет активный компонент хамазулен обладают противовоспалительны»! действием : тормозят развитие декстринового, альбуминового, каррагенизового. термического отеков. УФ-эритемы. экссудатявпого перитонита; у крыс с адьюваитнои болезнью препятствуют повышению пронндаеяоета капилляров. развитию соспалеяпя в голепостоппых суставах. сердце, почках, сечею«; нормализуют строение я метаболизм соединительной ткгяп . и паренхимы . органов. Флоголитпческая активность их обусловлена. а частности, антагонизмом к медиаторам аоспалеикз.

Ахизаи и хамазулен проявляют авалыстическое действие, обусловленное антагонизмом к альгогезяым веществам в питябацней медиаторов воспаления.

Установлено, что ахизаи и хамазулен стимулируют сролнфера тивно-репаратнвные процессы соединительной ткани: ускоряют заживление кожно-мыщечиых ран, нптснсифнцирухгг восстановительные процессы заживающей раны по основным биохимическим показателям, ускоряет • отторжение струпа и нор«алнзутот гистологическую картниу раны на модели напалмового ожога; по плияиию на эажиалепяе экспериментальных рая превосходят эталопаыа препараты - линимент синтомицина 1%. мазь Вишиессжого и по ряду показателей мазь цягерола 10%. Ахизая-рекомендовал для клинических испытаний з качестве ранозаживляющето средства при рапеяяжх. п ожогах, длятся1=о иезажизахкапх пгойао-воспалнтельных . ззболезанкзх кожа а

слизистых. ,

Спектр протиЕоязгенной активности экстракта тысячелистника кссмдогали на различных моделях острой и хронической гзз -•желудка в сравнения с пАгнтгглзодадом.

На основании проведенных исследований можно заключить, что терапевтический эффект экстракта тысячелистника является комплексными и обусловлен преимущественно зоздейстгнем на различные звенья патогенеза язвснпоЯ болезни: регулядизэ вегетативной нервной системы, клслотно-пегггичесхнй фхтгер. моторику желудочио-хищечнаго трдктА защитный барьер слизистой желудка. ее регенергторныэ способности. ассаалитсльпо-ди строфически" измсясияа. Наиболее значимо

фзрмакотерзпеэтнчесхое вренмупеттпо этого препарата в дозе llO мг/кг. Пал1газл2Я7!гость действия экстракта из феяг? з^сперхтпеитальгюД прстсогзге::ис;'з терапии обусловлена. по-

j5

видимому, благоприятным сочетанием и его составе фенолыюю и полисахдрндного комплексов. Разделение экстракта на фракции (фе 11 ильная, волнеахариддая. очищенная сумма флавоциндои и другие) не привело к усилению иротивохзкенною э4>фекта. Оеиальный и поллсазг-^ондный комплексы ограничивали развитие таких деструкции как крупные I: полосовидные язви, достоверно в сравнении с контролем м несущественно - с плантаглюиидом.

Известно, что вещества палифенолыюй природы оказывают ехтигнос влияние на биосинтез и метаболам простагландннов в организме, угнетая энзнматическую деградацию последних. Степень благоприятного влигниа палкфенолсв на метаболизм простогландинов коррелирует с их антиоксида1ггной активностью. Оеиольные соединенна обладают капиллароукренляющей £1хи2ностыо и сильным гпгтигигтзминным действием, обуслааленным угнетением гнетндиндехарбокеллази. В результате снижается продукция гнетамина и ослабляется повреждающее действие ульясрогеноЕ. /ит.тиста.чнкные препараты занимают одно из домитптруюхцнз мест Б арсенале црзтнЕокзьешшх средств.

Присутствие е эхетрвггге тыскчалистника нолисехарндного комплекса. сбуслгЕлиггсгг за^днтаэе дейстспг препарата «¡а слизистую оболочку желудка, так кал продукты полисахаридов действуют испосрадстве::по па ткм! желудка н пред^елудка. повышая засягтсуто сехрецк» гастрг»;укопа\лсахар1!доЕ. Полисахаридам сьойстт.етко понижать протеолктичеагузо акгиЕностъ пепсина. Полисахариды природного пронехоадеиил относятся к г. биологическим стимуляторам. аг.тквкзпрукяцкк защитные реакции организма, его иеспецнфичесхую иммунологическую роакпеишеть, хлэточкые г: гуморальные механизмы. Образуя комплексы с фсг.'о.'Л.::^).:;; полисахяр1^ди увенчивают их

ретт.оричоеть, что щдет г. усилению фапмахолопгчссг.от действии /. екарстЕснмих пр^гмрегге::

Все ¡рлолепиоо слуяоп пид7Е<-'рл-.дснпе>;

Келесообразностн ;:спол;«зозйЛ.чз Е качестве сратигоязвеннпю средстхп суммарного экстракта тысячелистника. Он"нку кочестиа экстракте тысячелистника и его лскгрсгЕенное, формы милло ирогадгп. ео содержанию и инх соединении

Пр;: ратрабс—и- слп:малз.!:он лекарственной с>_:р«ь:

с:-:страгта тысгг*:ел:-,сп;ккз проследах-ьи: цель расширения асссрт1сче!ггг прот;:^а:;з^'.<и:;ых средств п улучшение ряда техпо.'.сппссгл:! харзстсряспж (вкус. биодоспмоггь, удобстьо дознрогас;^!. хра.чешц; н тр.-.нспортираЕКШ. Цель т/а достигнуто гра:.г,'л:.грог-а;:;с-м сухого пли густого экстракта ти^гчелистника. Состав гр.1:;у,\ определи,«! исходя из фаркадолепгческих ;иратн2=азве;£н^л эффект) тс:х1:алоп:ческ>гх г.: ил.

фрахц;:спыый состав, пггросг.оэг-шость. сызуч«»сть, срсг. годносг,1:

сеойств прадлагаеяыз вариантов смеси. Способ получения граиулировзнного препарата экстракта тисячелпсттшха "Ахкгран" за- _ щищеи патентом РФ.

Разрабопха методов контроля качества препаратов тысячелистника

На основании данных литературы и фармакологических исследований установлено, что основным действующим веществом эфирного масла тысячелистника и его препарата является ха.чазулен. Для оценки качества эфирного масла и Ахизана использовали качественное и количественное определение хамазулена

Определение подлинности эфирного масла и Лхизана предложено по ерганолептическим и физико-химическим показателям. Эфтоное масло тысячелистника и Ахизан имеют интенсивно-синюю окраску, обусловленную присутствием в шгх хамазулена. Изменение окраски до зеленовато-синей или зеленой свидетельствует об изменении качественного состава эфирного масла и его доброкачественности. В гачестве физико-химических констант использованы растворимость в органических раствор!ггелях плотность и удельный показатель прелечлег-тня препарата. Качественное обнаружение хамазулена предложено пропод1Гть хроматографическн з тонком слое сорбента. Синее пятно хамазулена видно без дополнительного проявления (Ю п гексапе 0.25-0,27).

Для количественного определения хамазулена п эфирном мас-ле и Ахизане нами разработан спектрофото.четртюскни метод.

Максимумы поглощения хамазулена в УО-области 235-250 и 230-290 им. в кидимой - 550-С50 нм. Наиболее высокая интенсивность характерна для полосы 2В0-290 им. которую можно использовать как аналитическую. Сравнение УФ-спектроя поглощения хамазулена и эфирного масла показало, что наиболее выраженные максимумы имели гексгнепые растворы (рис ?|. Для этих растворов установлена прямопроперциональная зависимость между концентргавей хамазулена и их оптической платностью. Для разработки методики количественного определения хамазулена в эфирном масле тысячелистника и Ахизане использовали прямое сцетрофотометрирозанке гексаноЕЫХ растворов Содержание хамазулена в анализируемых растворах расчитывали по удельному показателю поглощения 1Е|*"„) при 28э им

Методики определения хамазулена описаны в проектах ВФС па эфирно«; масло тысячелистника и Ахизан. Относительная ошибка методик при проведении анализа в трех псптсрностях находится в пределах величины сл'/чайпой ошибки.

а., ял

Рз:г. 7. УФ - спигфы хаказуляпх ь гсхсгкг (1), этаноле (2), эфирного масга т. &з:гггсеого в гсхсане (3) a ^лизана. в гексавг (4).

На основании фгрмггслопгчесхнх и 5н?;;гческих иссиздозавяб за критерий доброклчестгешюстн экстаета тысячелистника и его препарата. Ахнгран нам!1 принято качестаенноэ обнаружение к количественное содержание суммы фсполышх (окисляемых) веществ.

Преследуя цель разработки метода определения фенолышх соединений в водно-спиртовых экстрактах, отличающегося высокой степенью достоверности и избирательности. мы обратились к антиоксида нтным свойствам полнфенолоз. Нами предложен а мщищен авторским свидетельством метод количественной оценка 1нтиоксидантов фенолыюй природы в распгтелышх экстрактах по атетнхе инициированного окисления изопропнлбензола. Количественную оценку ентиоксидантов проводили гашетичеким методом, в основу которого положена модельная реакция шицннрованного окисления кумола. Расчет содержания фенольных :оединений в экстракте проводили относительно стандартного >бразца, в качестве которого использовали галловую кислоту, либо )дин из фенольных компонентов экстракта тысячелистника.

Предложенный нами метод определения фенольных соединений по их антноксидантной активности надежен, дает юспронэводимыа результаты, однако требует хотя и недорогое, по специальное оборудование. Поскольку исходной субстанцией кхиграна является жидкий'экстракт тысячелистника (1:1) нами сроведен анализ фенольных (окисляемых) веществ в густом кстракте-субстаяции и а гранулах по методихо гермапгаиатометрического титрования, предлагаемой ВФС 42-1637-56 Экстракт тысячелистника жидкий". Методики проведения анализов езложены в соответсгауюпдих проектах Временных Фармакопейных татей (приложение к диссертации)-

ВЫВОДЫ

1. Впервые во флоре Сибири проведен целенаправленный онех перспективных эфирномасличных растений, обладающих нтимикробным, ранозажияляющим я противовоспалительным ействием. Исследовано 170 видов растений из 22 семейств.

2. В пределах изученных гидоз установлено, что 42,6% фиропосов накапливают более 0.5% эфирного масла и с этой точки эения представляют интерес для промышленной переработки, становлсно, что поиск видов, богатых эфирными маслами, глесообразно вести среди растений семойсто Ейсасеае, . Ар)асеее, ншасеае и А^егасеае. произрастающие в основном в кссрофшпых, езоксерофнтных и мезофцтиых условиях обитания.

3. Большинство исследованных видов эфирномасличных ктгепий обладают избирательной антибактериальной активностью: > из них проявили пыра'хепноа ргноззгиюлкюгзее и зотиясзоспалнтелыгоэ действие. & связи с чем псрспс.тгчгпи для

дальнейшего исследования: Paeonia anomala. Dracocephaium рсгедлЕша. Fltiioltzia cilia tt, Mentha spicata. Origanum vulgare, Ziziphora clinopodicides, 7'anacetum vulaaie, Solidago virgaurea. вилы родов Thymus. Achillea. Artemisia.

4. Изучен химичесл-ш состав более 20 образцов эфирных масел. Установлено, что эфирные масла пиона уклоняющегося, эльтольции реснитчатой, видов р. тимьян, полынь существенно отличаются ст образцов из других регионов по составу компонентов и их количественному содержанию. Достоверность различии подтверждена выделением кз эфирных масел и установлением структуры oasosaux кемпенигтоз: бензальдегнда, п-гндрохенбепзальдегида. «етклБгпзоота, кетилсалицилата, ß-мирцеиа, ■у-терпипеаа. камфоры. борвеола. а-теряивеала, тимола, сабикевпцргта. 6-, с-, у-кадннепоз. 7-мурсленг. 5-бисаболепа. а-фарпезепа, {¡-хариофиллепа, сг-курхумепа, каламепеиа, калакорена. термакрена D. гртечизиахетоиг, ертелнзиевого спирта, а-туйона. метплзЕгезола, эльшольцг^кетона. ыетклбензилдиина. а также ранее не саксспных в литературе дсп^£>озльшальциа)г.етона и нетил-2-

5. Давиые по хг.кячесиску состгзу кассл г.сслс&огзлаих еидоб позволили уточщгть систематическое палая-.еигг тахсовов с предела*. родов Achillea и Artemisia, а такле устааоасть Езаикоажзь кежду биологической активностью и комиокыггиым составом эфирных ыасел. Установлено впервые и падтЕср^депы литературные денные, что папОольпл-Л антпбактергильпый эффект проявляют эф;ф::ы? >:ac\a, содержащие в еззен составе орох!ггпгче<ла:е фенолы (тимол г, караакрол!. терпепохщг гхтоиы «зльщольцнакс-гоп. дегилроэльыольцнакетоп. пулегеп. мсптс;;. туйоп). с также Еолиацетиленопые согдипения (кгеиллеи и его гропззэд>;ые|: ранозажиЕЛЛющно и хгрстхгго^оспйлптельпьге свойства более выражены у гаягзулгзходгргхггцкг зф1~.пых

6. Про^едекз ксслсдогалпе анатомической crpyinypu пиона уклоищсщггосз. колюрнм гргнилегпдаакон, з:<геегслоЕнкка тохеземиого. ^.ьщальции реснитчатой. зпзнфоры

зслстаг-^нха обыкновенного, тысячелистник азиатского, ::слы::к cepcil i: ¿ыдгле;:ы in: отл): ч;гтельпыг признаки, которые могут Сыть г.сгальэс^ах;и в нормативной доку>; г нта щ: и пи соотЁстстсузощее лекарствен и эе сырье. Показано, что структура секреторных сбразосапий г.сследуемцх ендов 1;ожет служить достозерсь^м систематическим и диагностическим признаком. Полученное ддлгкг позы^итлп сиссно^ть и разраЬзтать епт»з^альцые тех^ал^гйчгг^ч^е ипро^гтры з^прпмх

маекл кз гредл^й с- м:^- гпдсб распгтсльасго cupi^i.

7. occceosaa-a есзизкностъ пелучгии изтр^хт-г тг. :?.и гт

эфирного масла и экстракта из шрота по принципу малоотходной технологии с целью получения на их основе лекарственных средств. Шрот после извлечения эфирного масла содержит комплекс фенольных соединений (6,40%!, полисахаридов (7,85%) и витаминов (31,78 мг/100 г) Химическими и фармакологическими исследованиями установлено, что экстракты из сырья и шрота (извлекатель 40% этанол) являются равноценными оптимальными субстанциями для лекарственного препарата противоязвенного действия.

8. На основе эфирного масла н экстракта из шрота тысячелистника разработаны лекарственные препараты "Ахизаи" и "Ахигран". Доклинические исследования показали, что Ахизап (масляный раствор эфирного масла) обладает выраженным рапозаживляющим и иротивовоспамггелышм действием и рекомендован д\я лечения ран и ожоговых поверхностей, дмгтельно незаживающих гнойно-воспа.мгтельн1-'х заболевании кожи и слизистых. Ахигран (гранулы экстракта) показан и качестве противоязвенного средства; препарат сочетает репарзтивное, спазмолитическое и обозбо,\нваю1цсе действие, стимулирует выработку желудочной слизи. Оба препарата характеризуются низкой токсичностью. отсутствием

аллергизкрующего и местнораздражающего действия.

Ö. Разработан оригинальный способ определения фенольных соединений в растительных экстрактах, основанный па их днтиоксидаитных свойствах; способ защищен авторским ее идетельст вам.

10. Изучены сырьевые ресурсы и биологические особенности развития тысячелистника на терр!гтории Сибири. Установлено, что эксплуатационные запасы (1912 т возд.-сухого сырья) позволяют проводить промышленные заготовки эгого вида на гаге Сибири. В качестве лекарственного сырья следует использовать срсдпероЗрастшЛ парциальные побеги. Заготовка сырья возможна во всех фитоценоззх, составляющих ценокомплекс этого вида и , прежде всего, в тех районах, где произрастают и основном его гроазуленовые хеморасы

11. На _ основании выполненные нсследовалий разработана нормативная документация на прщдагаемые лекарственное сырье, субстанции и препараты.

Основные положения диссертации опубликованы п следующих работах1

1.А.С. 157CÔ51 СССР Способ определения фенольных соеднне ннй в полных и водно-спиртовых экстрактах / С.И.Писарева, Г.ИКа-линкипа, В.К Бурков.^ и др - Открытия, нзоирет.... 1990. N 25.

2. A.c. 646-3 РФ. Сорт тимьяна ползучего "Лимонный" /Н.Н.Гусьхова, Н.К.Шохнча, А.ПДо-.пгх, Г.И.Калннкииа, В.Н.Тихонов.- Зарегистрировано в Госу дарственном Реестре селекционных

достижений, допущенных к использованию.- 11ДК94-

3. Патент РФ 1297239 на изобретение * Способ получения эфирного пасла. обладающего ранотажишипгацеД а противовоспалительной активностью от 28.05.93- / Г.И.Калинхина, Т.П-Березовская. ДДТарав я АР- (Публ. не подлежит).

4. Патент РФ 93030324 на изобретение " Сред ство для лечения псориаза / С.ЕДмитрук, СЛД^мгтрук. Г.И-Калшлцшл н др. (Положительное решение от 23.02.95).

5. Заявка на патент "Лекарственное средство для лечения язвенной болезни желудка н двенадцатиперстной кишки" ДО Гос.регистрации 93011400/14, приоритет от 25.03.931 / Г.И.Калинкина, ММСлипченко, Т.Г.Хоруждя я др-

6. Заявка па патент * Лекарственное средство для лечения зубов и заболеваний пародонта" (Ы Гос.регистрации 95102585/14. приоритет от 3.03.35 / .Л_А-Зарубива, Г.И.Калинкина. С.ЕДмнтрук к АР-

7. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е-А-Красноа. ТЛ.Березовская. Г.И.Калинкина и др." Томас Изд-во Том-ун-та. 1987.- 184 с.

8. Калин кива ГЛ, Березовская Т.П. Исследование эфирного масла тысячелистника азиатского //Химия прирадгоедин.- 1974.- N 5.- С£72.

Э. Калинки на Г.И_ Березовская Т.П. Тысячелистник азиатский как возможный источник хамазулена // Раствт.ресурсы_- 1975.-Т.11, вып.? - С. 220-227.10. О возможности использования сибирских источников азулена в фармации / Т.П. Березовская . ИА-Серых. Г.И.Калинкина и др. // Материалы П1 Все рос. съезда фармацевтов,- Свердловск. 1975.- С.

11. Азуленг-одрржагцие растения сибирсхой 'флоры / ТЛБерезовсхая. Е_А_ Серых. Г.И-Калинкииа в др. // Тезлокл. XII Междунар. Ботан-Конгресса. - Ленинград, 1975.- С. 125.

12. Калишшва ГЛ. Супрунов Н.И. К - исследованию некоторых эфирномасличных растений льпевосточвой флоры II Растит.ресурсы

Сибири, их рациовялшое использование и охрана - Томск Изд-во Том. ун-та. 1982. - С. 68-71.

13. фармшогноеттеоте изучение оолыкж ххутгхоЛ / ТЛ. Березовская. Е_А_Серьгх. ГИ.Кллиякяиа ■ др. // Растит.ресурсы. -1983.- Т. 19. вып.!. - С. 54-60.

14. Пропмпшштшше свойства тфяриьгх масел тысячелястикка инквш я некоторых кадов полыней / А.С. Саратнков, Т-ГШрящеп. ДД Таран, ГИ-Калинкияд н др. // Хим.- фармлц-жураал. - 190£. N 5. - С. 535-583

15. Итоги фаршкогаосттесхого ессладужаняя некоторых расге-

Hüft флоры Счб'.трн / Т.П.Берездвсхгз, Н.И.Белеусова,

Г.И.Калинкина и др. // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных прЪнаратов. - Томск. 1966. - Т.2. - С. 56-5а.

16. Антигрибковая активность экстрактов некоторых растений флоры Сибири / С.Е.Дмитрук. Е.Н.Сальникова, Г.И.Калинкина и др. // Актуальные проблемы фармакологии н поиска новых лекарственных препаратов.- Томск, 1936. - Т.2. - С. 5255.

17. Эфирномасличные растения флоры Сибири и их комплексное использование / Г.И.Калинкина. Н.И.Белоусова, A.B.Гришин и др. // Тез. докл. IV Всесоюз. съезда фармацевтов. -Казань, 1986. - С.

18. Фармакогносгическое исследование представителей семейства сложноцветных флоры Сибири / Т.П.Березовская, Н.ВДощинская, Г.И.Калинкина и др. // Флора, растительность и растит, ресурсы Сибири,- Томск: Изд-во Том. ун-та, 1987. - С.121-132.

19. Тихонов В.Н.. Хан ВА. Калинкнна Г.И. Состав эфирного масла Thymus krylovii // Химия природ соедин. - 1988. - N 8. - С 886-887.

20. О возможности комплексного использования Achillea asiati-са Serg. как лекарственного растения / Г.И.Калинкина, Н.М.Слип-ченко. Т.Г.Хоружая и др. // Растит, ресурсы. — 1389.- Т. 25, вып.1. - С. 74-78.

21. Калинкнна Г.И., Рахимов ДА., Зорина О.В. Изучение полисахарида Achillea asiatlca // Химия природ, соедин.- IS39.-N t. -С. 136-137.

22. Антибактериальные свойства эфирномасличных растений. Сибири / Г.И.Калинкина, Т.П.Березовская, Л.А.Зарубина н др. // Фитонциды. Бактериальные болезни растений: Материалы конф. -Киев-Львов, 1990,- Ч.1.- С. 2!.

23. Зарубина A.A.. Калинкнна Г.И. Полынь серая -возможный источник лекарственных средств антимикробного действия // Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Д-Востоке: Тез. докл.- Томск. 1991.- Ч. 1.- С. 133-134.

24. Гипогликемнческий эффект экстракта тысячелистника / Э.И.Волошина, В.В.Иванов, Г.И.Калинкина н др. // Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Д-Востоке: Тез. докл- Томск. 1991,- Ч. 1. - С. 44-45.

25. Эфирномасличные растения сибирской флоры - источники антимикробных средств / Г.И.Калинкина. Л-А-Зерубина. Т.П.Березовская и др. // Ресурсоведческое и фармакогносгическое изучение лекарственной флоры СССР: Научн. труды ВНИИФ. - М., 1991,- Т. 29.С. 89-91.

26. Кумарины полыней ряда Frigidae / Е.Н.Сальникопа. Н.Ф.Комиссаренко, Г.И.Калинкина. С.Е.Дмнтрук // Химия природ.соедин.-1992.- N 1,- С. 135-137.

27. Калинкина Г.И., Писарева C..J1. Метод определения шггиохенданть'ои активности растительны?. водно-спиртовых экстрактсп // Хим.-фармаа.журнал. - ¡992- Т.26 - N 1 - С 65-bb

28. Калинкина Г.И.. Салмшкопй Н.Н., Де.мйицкии А.Д Сравнительный анализ эфирных масел полыни юрькон и н.(. иверса // Поиск, создание >: изучение новых лекарственных срелпв растит и сипгет. происхождения: Тез докл.- Бинск: НПО"Ллтан", 1994 - С.о?>-59

29. Хнмичоскии состав эфирного масла пиона уклоняющеюся / Г.И.Калннкипа, А.ДДембицкин, Е.Ш.Бергалиеп и др. // Химии природ, соединен,- 1993.- N 6,- C.905-90Ó.

30. Дембицкий АД,, Калглшша Г.И.. Бгргалне» Е.Ш. Новый терненовый кетсн - компонент эфирною масла эльшилыши реснитчатой // Химия природсосдин.- 1993 - N б,- С. 823-824.

31. Зарубина Л.А.. Калинкина Г.И., ДемОннкиН А.Д Химический corra» и антимикробные свойства эфирного масла из надземной части Artemisia glauca //' Растит, ресурсы,- 1993- Т. 29. вцп.З,- С 70-72

32. Дембицкий А.Д, Бергалиоз ЕШ., Калинкина Г.11 Исследование химического состава эфирных масел зизифор, произрастающих в различных экологических условиях // Известия НАН Республики Казахстан. Серил химическая.- 1993,- N 4,- С. 8091.

■ 33. Калинкина Г.И Попе:; и разработка фитопрепаратов аятимихребнэго, ранозажнвг.:шщегс> и прогивоязвенною действия // Материалы Первого Международного научного конгресса Традиционная медицина и питание. Теоретические и практические аспекты - М„ 199-1 - С. 163

34. Химический состав и фармакологические свойства эфирного масла ThymiK sprpyllum L.b.l., выращиваемого г. Нейтральном Сибирском ботаническом саду СО РАН / Г.И.Калникнна, В.Н.Тихонов. И.Н Гуськопа и др // Кктит ресурсы - 1Ё94,- Т.ЗО вын.З,- С. 65-70

35. Протнвоязисннме свойства Ахигпана - ноього лекарственного препарата из Achillea asiática Serq в экспесиместе / Н.М.Слияченко. Г.И.Калинкина Т.Г.Аоружаь и др /V Растил, ресурсы 1994,- Т.ЗО. вьгп.4. - С.56-62.

36. Калинкина Г.И., Березовская Т.П. Экологические аспекты поиска перспективных эфирномасличш.~х растении во сморе СиСире .'/ Сб. статей " Чтения памяти Ю.А. Льяовя" - Томск. 1995 - С.258-2Ь!