Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Комплексная оценка ресурсов эфирномасличных лекарственных растений подзоны южной тайги Пермского края

На правах рукописи

Короткое Илья Викторович

КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА РЕСУРСОВ ЭФИРНОМАСЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ ПОДЗОНЫ ЮЖНОЙ ТАЙГИ ПЕРМСКОГО КРАЯ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

ООЗ176647

Пермь - 2007

003176647

Диссертационная работа выполнена в ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук,

доцент Белоногова Валентина Дмитриевна

Официальные оппоненты: заслуженный работник высшей школы РФ

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертационной работы состоится 18 декабря 2007 г в 13 00 ч на заседании диссертационного совета Д 208 068 01 при ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», по адресу 614990, г Пермь, ГСП-277, ул Ленина, 48

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», по адресу 614070, г Пермь, ул Крупской, 46

член Российской экологической академии, член Академии наук технологической кибернетики Украины, доктор фармацевтических наук, профессор Фурса Николай Сергеевич, кандидат фармацевтических наук, доцент Саттарова Ольга Евгеньевна

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 208 068 01, к ф н, доцент

Метелёва Е В

Актуальность темы Эфирномасличные лекарственные растения широко используются не только в медицине, но и в других отраслях промышленности, что требует обеспеченной сырьевой базы

Сложившаяся ситуация в ассортименте эфирномасличного сырья и его продукции показывает, что почти вся сырьевая база, обеспечивающая потребность в препаратах на фармацевтическом рынке России, оказалась на территории ближнего зарубежья

В связи с этим, представляются перспективными исследования по изучению сырьевой базы эфирномасличного лекарственного растительного сырья (ЛРС) отдельных регионов, в частности Пермского края, позволяющие оценить запасы, доброкачественность и дать экологическую оценку сырья

Поэтому, с целью расширения лекарственной сырьевой базы, сотрудники кафедры фармакогнозии Пермской государственной фармацевтической академии проводили изучение запасов эфирномасличных лекарственных растений (ЛР) Пермского края С 2001 по 2007 года были обследованы Чусовской, Нытвенский, Ильинский, Очерский, Сивинский, Верещагинский, Добрянский, Оханский, Карагайский районы

Цель и задачи исследования Целью данной работы явилась комплексная оценка ресурсов эфирномасличных лекарственных растений подзоны южной тайги (центральных районов) Пермского края

Для реализации поставленной цели следовало решить следующие задачи

- обобщи! ь литературные данные по современному состоянию изученности флоры эфирномасличных лекарственных растений Пермского края,

- проанализировать и обобщить литературные данные о морфологических, химических и фармакологических исследованиях травы душицы обыкновенной, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, побегов багульника болотного и плодов можжевельника,

- провести изучение ресурсов эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края, рассчитать биологический запас, эксплуатационный запас и возможный объем ежегодной заготовки Составить рекомендации по рациональной эксплуатации зарослей эфирномасличных лекарственных растений Пермского края,

- дать комплексную оценку качества сырья на основе качественного и

з

количественного анализа биологически активных веществ и определить экологическую чистоту сырья,

- составить карты-схемы размещения зарослей эфирномасличных лекарственных растений для заготовки в центральных районах Пермского края,

- представить результаты исследования ресурсов эфирномасличных лекаре гвенных растений центральных районов края в Управление по охране окружающей среды для создания Кадастра дикорастущих лекарственных растений

- провести стандартизацию опытных и промышленных образцов сырья полыни горькой для разработки фармакопейных статей «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой»,

Научная новизна

- впервые проведен комплекс ресурсоведческих, фотохимических, экологических исследований для оценки состояния заросчей эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края,

- проведена оценка качества сырья эфирномасличных лекарственных растений, позволившая выявить потенциальные заросли для проведения заготовок в промышленных масштабах,

- разработан проект фармакопейной статьи и пояснительная записка «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой» для Государственной фармакопеи XII издания

Практическая значимость

Управлением по охране окружающей среды Пермского края используются материалы ресурсоведческих исследований

- для составления Кадастра дикорастущих лекарственных растений -номенклатура эфирномасличных лекарственных растений, рекомендуемых для промышленной заготовки в центральных районах Пермского края,

- сведения о распространении, биологическом запасе, -эксплуатационном запасе и возможном объеме ежегодной заготовки травы душицы обыкновенной, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, побегов багульника болотного, плодов можжевельника, карты схемы размещения зарослей эфирномасличных лекарственных растений, для организации заготовки сырья в центральных районах края

Результаты внедрения подтверждены актами и используются Управлением по охране окружающей среды для контроля за охраной и рациональным использованием эфирномасличных лекарственных растений Пермского края

Предложены методики стандартизации сырья полыни горькой, позволяющие объективно оценивать его доброкачественность Результаты исследований положены в основу фармакопейной статьи для ГФ XII «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой», которая представлена на рассмотрение в фармакопейный комитет РФ

Результаты качественного обнаружения и количественного определения основных групп БАВ внедрены и используются в учебном процессе Пермской государственной фармацевтической академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, а также в учебном процессе кафедры фармакогнозии Ярославской государственной медицинской академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, дистанционных курсах повышения квалификации фармацевтических работников МЗ Бурятии

На защиту выносятся

результаты ресурсоведческих исследований эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края,

- данные о комплексной оценке качества эфирномасличного сырья, включающие фотохимический, экологический, микробиологаческий анализы,

- рекомендации по рациональному использованию эфирномасличных лекарственных растений в центральных районах Пермского края,

- материалы по разработке Фармакопейной статьи «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой»

Апробация работы Основные результаты работы изложены на межвузовской научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава "Вузы и регионы", Пермь, 2003 год, международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СПХФА, Санкт-Петербург, 2004 год, XI национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 2004 год, на II Всероссийском съезде фармацевтических работников - Сочи, 2005год, юбилейной межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых, посвященной 70-летию КГМУ "Молодежная наука и современность",

Курск, 2005 год, XI международной научно-практической конференции "Фармация и здоровье", Пермь, 2005 год, XIII национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 2006 год, 2-й международной Российско-Китайской конференции "Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice", Пермь,

2006 год, научно-практической конференции "Новая технологическая платформа биомедицинских исследований (биология, здравоохранение, фармация)", Ростов-на-Дону, 2006 год

Свячь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки Диссертационная работа выполнена на кафедре фармакогнозии ГОУ ВПО Пермская Государственная Фармацевтическая Академия Росздрава России в соответствии с планом научно-исследовательских работ Номер государственной регистрации 01 9 10018875

Публикации По материалам диссертации опубликовано 15 работ Материал для исследований собран во время проведения экспедиционных работ по изучению ресурсов лекарственных растений Пермского края в 2001 -

2007 гг

Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит 34 таблицы, 5 рисунков Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав эксперимента, выводов, списка литературы, включающего 145 источников, из них 4 на иностранных языках

В I главе представлены литературные сведения о ботанико-географическом районировании, флористических и ресурсоведческих исследованиях в Пермском крае, дана общая характеристика объектов исследования В экспериментальной части изложена характеристика объектов и методов исследования (глава II), характеристика сырьевой базы и ресурсного потенциала изучаемых объектов в центральных районах Пермского края (глава III), данные фитохимического и экологического мониторинга (глава IV), материалы по разработке фармакопейной статьи на траву и листья полыни горькой (глава V)

В приложении вынесены таблицы по характеристике ресурсов отдельных объектов в исследуемых районах, таблицы с адресом расположения зарослей исследуемых видов, пояснительная записка и проект фармакопейной статьи «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой», акты внедрения результатов исследований в практику и учебный процесс

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования.

О&ьекгами исследования являлись лекарственные эфирномасличные растения, произрастающие на территории Пермского края багульник болотный, душица обыкновенная, можжевельник обыкновенный, полынь горькая, тысячелистник обыкновенный ЛРС было собрано в различных эколого-фитоценотических условиях, в местах, удаленных от дорог (не менее 100 метров) и крупных промышленных предприятий Заготовка ЛРС проводилась в ходе ресурсоведческих экспедиционных исследовании в Очерском, Ильинском, Карагайском, Большесосновском, Сивинском, Верещагинском, Добрянском, Пытвенском и Чусовском районах края

Всего исследовано 395 зарослей дикорастущих эфирномасличных лекарственных растений, проведен анализ 102 образцов ЛРС, согласно поставленным задачам

Определение запасов лекарственного растительного сырья проводили общепринятыми методами

Запас лекарственного сырья на конкретных зарослях рассчитывали гак произведение средней плотности запаса сырья на общую площадь заросли (биологический запас)

Возможный ежегодный объем заготовки сырья рассчитывали как частное от деления эксплуатационного запаса сырья на оборот заготовки, включающий год заготовки и продолжительность периода восстановления ("отдыха") заросли

Геоботанические описания проводили по общепринятой методике Всего было изучено 83 попучяции душицы, 159 - тысячелистника, 15 - багульника болотного На основе геоботанических описаний зарослей составляли сводные списки Каждый сводный список включает типы ассоциаций, в которых лекарственные растения играют роль доминашгов или субдоминантов, а популяции видов по занимаемой площади и сырьевой фитомассе имеют промышленное значение

Виды, включенные в сводные списки, имеют константность не менее 30 -40% Статистическую оценку влияния различных факторов на плотность запасов сырья устанавливали с помощью критериев Стыодента и Фишера

Анализ образцов лекарственного растительного сырья на содержание, влаги, золы, эфирного масла и экстрактивных веществ проводили по методикам Государственной фармакопеи СССР XI издания

Содержание флавоноидов в траве полыни горькой определяли с использованием дифференциального варианта снектрофоюметрического метода, модифицированного нами для данного сырья Измеряли оптическую плотность окрашенного комплекса, полученного по реакции флавоноидов с 2% раствором алюминия хлорида с помощью спектрофотометра СФ-2000

Определение микробиологической чистоты проводили по методике ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» (выпуск 2, с 187) и Изменению №3 01 19 06 2003 в разделе «Требования, предъявляемые к микробиологическому копгролю лекарств, субстанций и вспомогательных материалов»

Экологическую оценку сырья проводили по методике ГФ XI издания в зольном остатке после сжигания сырья, радионуклиды определяли по естественному гамма-фону ЛРС Оценку удельной активности радионуклидов в ЛРС проводили на измеригеле мощности дозы РКСБ-104 («Бслвар») Для получения более точного результата проводили три параллельных измерения и считали среднее арифметическое значение

Токсичные элементы (свинец, кадмий, медь) и железо количественно определяли атомно-адсорбционным методом по ГОСТ 30178-96, мышьяка по ГОСТ 26930-86, пробоподготовку проводили по ГОСТ 26929-94 Анализ проводился в Вологодском областном центре контроля качества лекарственных средств

РЕСУРСОВЕДЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ЗАПАСЫ СЫРЬЯ ДИКОРАСТУЩИХ ЭФИРНОМАСЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНЫХ РАЙОНОВ ПЕРМСКОГО КРАЯ

С целью установления хозяйственно продуктивных сообществ, влияние факторов местообитания на продуктивность зарослей, установление ценокомплекса и определение запасов сырья в центральных районах края, нами изучены 232 ценопопуляции луговые виды (душица обыкновенная и тысячелистник обыкновенный) и лесной вид (багульник болотный) Исследования показали, что сила влияния факторов места произрастания на

продуктивность зарослей не существенна, что позволяет проводить заготовку сырья в различных эколого-ценотических условиях

Багульник болотный (Ledum palustre L) В обследованных районах багульник болотный встречается в сосняках сфагновых и осоково-сфагновых, а также на осоково-сфагновых болотах. Плотность запаса сырья в пересчете на воздушно-сухое сырье колеблется от 5,27±0,07 до 574,00±63,4 кг/га Заросли имеющие эксплуатационное значение обнаружены в б районах Верещагинском, Добрянском, Карагайском, Нытвенском, Чусовском, Оханском и Очерском (таблица 1)

Таблица 1

Сводные данные о зарослях багульника болотного

№, п.'п Административный район Общая площадь, га Воздушно - сухой запас сырья, кг Возможная ежегодная заготовка, кг

Биологический Эксплуатационный

1 Верещагинский ол 58,60±9,40 39,80 6,60

2 Добрянский 18,0 1396,4±336,85 1722,80 279,50

3 Карагайский 100,0 29316,50=4780,00 19756,5 3292,80

4 Нытвенский 17,0 1719,37±292,70 1133,97 189,0

5 Очерский 2,0 1001,70±168,б0 664,50 66,50

6 Чусовской 6,0 2875,27±317,07 2241,10 373,50

7 Всего 143,20 36367,841±5904,62 25558,68 4207,90

Душица обыкновенная (Onganum vulgare L) Произрастает во всех обследованных районах на суходольных лугах, склонах южной, юго-восточной и юго-западной экспозиций как один из основных компонентов Плотность запаса сырья в пересчете на воздушно-сухое сырье колеблется от 5,96±1,10 до 1293,60±209,50 кгУга Заросли имеющие эксплуатационное значение обнаружены в 8 районах Болыпесосновском, Ильинском, Карагайском, Нытвенском, Чусовском, Сивинском, Оханском и Добрянском (таблица 2)

Таблица 2

Сводные данные о зарослях душицы обыкновенной

Общая площадь, га Воздушно - сухой запас сырья, кг Возможная

п/п Административный район Биологический Эксптуата-ционный ежегодная заготовка, кг

1 4 Большесосновский 5,31 381,42±58,28 264,8 52,90

2 Добрянский 19,4 2171,54±238,02 1492,48 298,20

3 Ильинский 16,05 2250,92±282,80 1685,32 561,80

4 Карагайский 21,5 2638,511273,55 2081,61 693,80

5 Нытвенский 3,30 392,49±52,43 287,63 57,50

6 Оханский 16,81 3617,9±447,12 2723,66 544,70

7 Сивинский 6,7 3174,501:296,9 2622,6 781,90

8 Чусовской 3,20 458,77±72,46 313,85 104,60

9 Всего 92,27 15086,05± 1721,56 11471,95 3095,40

Можжевельник обыкновенный (Jumperus communis L) Произрастает в обследованных районах на опушках лесов и сухих склонах, преимущественно южной и юго-восточной экспозиции

Плотность запаса сырья (воздушно-сухого) колеблется от 9,21±2,30 до 2309,16±246,45 кг/га Заросли имеющие эксплуатационное значение обнаружены в районах Болыпесосновском, Верещагинском, Добрянском, Ильинском, Карагайском, Нытвенском, Оханском

Таблица 3

Сводные данные о зарослях можжевельника обыкновенного__

п/п Административный район Общая площадь, га Воздушно - сухой запас сырья, кг Возможная ежегодная заготовка, кг

Биологический Эксплуатационный

1 Большесосновский 11,23 13218,94±1626,23 9966,48 9966,50

2 Верещагинский 7,0 2733,40*22,40 2688,60 2688,60

3 Добрянский 1,0 19,73±1,48 16,77 16,80

4 Ильинский 2,33 96,90±25,30 64,96 65,00

5 Карагайский 6,10 479,11±74,01 331,09 331,10

6 Нытвенский 2,11 73,54± 15,50 42,54 42,50

7 Оханский 2,75 72,б1± 15,57 41,47 41,50

8 Всего 31,62 16694,63± 1807,49 13151,91 13152,00

Полынь горькая (Artemisia absinthium L ) Произрастает на территории всех обследованных районов на залежах, вблизи жилья, у дорог, на выгонах, полевых межах, залежных землях, выпасах с рыхлыми почвами Урожайность

ю

составляй от 36,04±7,10 до 1256,0±77,1 кг/га Заросли имеющие эксплуатационное значение обнаружены в районах Большесосновском, Верещагинском, Ильинском, Карагайском, Ныт венском, Оханском, Очерском

Таблица 4

Сводные данные о зарослях полыни горькой___

Общая площадь, га Воздушно - сухой запас сырья, кг Возможная

Il/П Адмипис грашш iuii район Биологичсскии Эксплуатационный ежегодная заготовка, кг

1 Большесосновский 23,63 4496,231482,21 3041,00 943,50

2 Верещагинский 3,80 1748,70*147,64 1453,42 363,40

3 Ильинский 2,35 474,83186,95 300,93 100,30

4 Карагайский 2,9 675,09188,09 498,91 166,30

5 Ныгвенский 5,10 2469,651296,44 1876,77 625,60

6 Оханский 12,11 1941,83*244,51 1452,81 484,30

7 Очерскии 21,0 11421,201559,70 10301,80 2767,50

8 Всего 70,89 23227,5311905,54 18925,64 5450,90

Тысячелистник обыкновенный (Achillea millefolium L ) Произрастает на территории всех районов области на суходольных лугах и склонах Часто встречается вдоль полей и дорог Урожайность составляет от 4,58±0,90 до 255,00±58,30 кг/га Заросли имеющие эксплуатационное значение обнаружены во всех обследованных районах

Таблица 5

Сводные данные о зарослях тысячелистника обыкновенного_

п/п Административный район Общая площадь, га Воздушно - сухой janac сырья, кг Возможная ежегодная заготовка, кг

Биологический Эксплуатационный

1 Большесосновский 15,8 419,26172,18 274,9 91,60

2 Верещагинский 35,5 3836,52±602,16 2632,32 877,50

3 Добрянскии 7,50 273,00±53,45 162,1 80,80

4 Ильинский 16,50 748,811110,58 527,65 175,90

5 Карагайский 23,5 583,81185,77 412,27 137,40

6 Нытвенский 1,70 69,84113,62 42,60 14,20

7 Оханский 14,15 1279,821165,44 948,90 316,30

8 Очерский 5,00 491,001127,20 236,6 78,90

9 Сивинскии 11,90 1264,561216,34 832,04 277,40

10 Чусовской 12,70 550,87182,81 385,25 128,40

11 Всего 144,60 9517,4911529,55 6454,63 2178,40

Заросли изучаемых эфирномасличных дикорастущих лекарственных растений центральных районов Пермского края по сырьевой базе разделены нами на группы: 1) имеющие промышленное значение (170 зарослей); 2) лекарственные растения, имеющие недостаточно обеспеченную сырьевую базу и используемые для местных нужд (205 зарослей).

Результаты ресурсоведческих исследований площадей занятых эфирномасличными растениями показали, что крупные заросли в центральных районах края образуют багульник болотный, полынь горькая, тысячелистник обыкновенный и душица обыкновенная.

120 100 80 60 40 20 0

лд

Пл.

Ли^

И г^ы

/

У

Ййш

/

□ Большесосновский

□ Верещагинский

□ Добрянский

□ Ильинский ■ Карагайский

□ Нытвенский

□ Оханский

□ Очерский

□ Сивинский

□ Чусовской

Рисунок 1. Сравнительная характеристика площадей зарослей эфирномасличных растений в центральных районах Пермского края

Наибольший ассортимент видов и объем ежегодных заготовок выявлены в районах: Большесосновский, Верещагинский, Карагайский. В данных районах суммарный объем ежегодных заготовок сырья всех видов составил от 3,90 до 11,40 тонн (таблица 6).

Таблица 6

Сводные данные о возможной ежегодной заготовке сырья в центральных

п/п Администра гивный район Побеги багульника Трава душицы Плоды можжевельника Трава полыни горькой ' Трава тысячелистника Всего по району

1 Большьсосновскии 0 0,05 9,96 0,94 0,09 11,04

2 Верещагинский 0 0 2,66 0,36 0,88 3,90

3 4 Добрянский 0,28 0,23 0,02 0 0,08 0,61

Ильинский 0 0,56 0,06 0,10 0,17 0,89

5 Карагайский 3,30 0,69 0,33 0,17 0,14 4,63

6 Пытвенский 0,20 0,06 0,04 0,63 0,01 0,94

Оханский 0,07 0,54 0,04 0,48 0,31 1,44

8 Очерский 0 0 0 2,77 0,08 2,85

9 Сивинскии 0 0,78 0 0 0,28 1,06

10 Чусовской 0,37 0,10 0 0 0,13 0,60

11 Итого по видам 4,20 3,10 13,1 5,45 2,17

Сравнительная характеристика запасов эфирномасличного сырья в центральных районах Пермского края показала, что в центральных районах края возможна крупнотоннажная заготовка плодов можжевельника (Большесосновский и Верещагинский районы), побегов багульника болотного (Карагайский район), травы полыни горькой (Очерский район), гравы тысячелистника (Верещагинский район), травы душицы (Карагайский, Оханский, Ильинский и Сивинский районы)

Максимальная ежегодная заготовка в центральных районах приходится на плоды можжевельника (13,1 т), траву полыни горькой (5,5 т) и побеги багульника болотного (4,2 г)

ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ЭФИРНОМАСЛИЧНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

Для эффективного использования ресурсно-сырьевого потенциала природных популяций, важна количественная оценка содержащихся в них биологически активных или экстрактивных веществ и других товароведческих показателей

Определение числовых показателей Согласно фармакопейным статьям на

исследуемое сырье определяли общие показатели содержание эфирного масла,

13

влаш, золы общей и золу нерастворимую в 10% растворе хлористоводородной кислоты для травы тысячелистника

Товароведческий и химический анализ образцов сырья травы душицы, травы тысячелистника, плодов можжевельника и побегов багульника болотного показал, что по основным показателям качества все образцы соответствуют требованиям ГФ XI издания Это характеризует все обследованные заросли, как пригодные для заготовок доброкачественного сырья

Однако, количественный анализ образцов сырья, по содержанию в них эфирного масла, выявил химическую неоднородность зарослей

Таблица 7

Результаты ко тчественного анализа содержания эфирного масла

Вид ЛРС Содержание эфирного масла, % Среднее значение, %

1ШП шах

Трава душицы 0,11 0,44 0,32±0,04

Грава тысячелистника 0,12 0,24 Г0,17±0,01

Плоды можжевельника 0,55 0,79 0,63±0,03

Побеги багульника болотного 0,22 0,36 0,27±0,04

Учитывая, что для эффективности использования запасов важна количественная оценка содержащихся в них биологически активных веществ, представляло интерес выявить площади с высокой плотностью запаса сырья, характерные фигоценозы с содержанием в сырье эфирного масла выше среднего значения

Анали) данных ресурсоведческих исследований, изучаемых видов и данных по содержанию эфирного масла в них показал, что оптимальными фитоце!юзами для душицы обыкновешюй и тысячелистника обыкновенного являются суходольные дуга, а для багульника болотного, можжевельника обыкновенного и полыни горькой заготовка сырья с высоким содержанием эфирного масла возможна во всех тинах фитоценозов

Площадь зарослей с высоким содержанием БАВ (не ниже среднего) дня можжевельника составила 3,3 га, для душицы 16,7 га, для тысячелистника 5,75 га, для багульника болотного 115 га

Определение содержания тяжелых металлов Заготовка всех изучаемых видов сырья проводится в природных популяциях Наибольшему

антропогенному воздействию подвергаю гея луговые виды - душица обыкновенная и тысячелистник обыкновенный, а также рудералыгый вид -полынь горькая, наименьшему воздействию лесные виды - можжевельник обыкновенный и багульник болотный

Степень загрязнения определяли по методике ГФ XI Анализ показал, что во всех образцах сырья, окраска испытуемого раствора не превышала окраску эталона

Определение радиационного фона В связи с тем, что на территории Пермского края проводились ядерные взрывы, а также имеется ряд предприятий, которые используют в своей деятельности радиоактивные изотопы, актуальным является определение общего радиационного фона лекарственного раетт ельпого сырья

По данным управления Роспотребнадзора по Пермскому краю, средняя мощность экспозиционной дозы природно-сформированного гамма-фона по Пермскому краю составляет 6-13 мкР/ч

Исследования показали, что доза гамма-фона в ЛРС изучаемых видов не превышает установленные нормы для Пермского края, поэтому заготовка сырья возможна во всех исследованных местах обитания

Атомно-адсорбциоиный анализ Всестороннее изучение элементного состава лекарственных растений и лекарственного растительного сырья представляет интерес не только вследствии наличия в них комплекса важнейших химических элементов, влияющих на различные реакции и процессы организма, но и в связи с критической экологической обстановкой во многих регионах

Нами было проанализировано 12 образцов ЛРС, с использованием атомно-адсорбционного метода по содержаншо кадмия, меди, свинца и мышьяка, собранных в самом экологически неблагоприятном районе исследования -Чуковском

Исследования показали, что все изучаемые объекты накапливают тяжелые металлы Полученные значения концентраций тяжелых металлов и мышьяка варьируют в зависимости от места произрастания и вида растения

Все образцы сырья удовлетворяют требованиям СанПиН 2 3 2 1078-01 в редакции СанПиН 2 3 2 1280-03 по содержаншо кадмия, мышьяка и свинца, что позволяет вести заготовку сырья для нужд фармацевтического производства

Материалы к разработке Фармакопейной статьи на трапу и листья полыни горькой

Фармакопейная статья на траву и листья полыни горькой разработана взамен статьи 44 ГФ XI издания, выпуск 2 «Трава и листья полыни горькой» -«Herba Artemisiae absmthn» «Folia Artemisiae abbinthii» па основании требований ОСТ 91500 05 001 00 «Стандарты качества лекарственных средств Основные положения»

Для подтверждения подлинности цельного сырья изучали анатомическое строение на растениях среднего габитуса По результатам микроскопического анализа отредактирован раздал «Микроскопия», в который включены микрофотографии листа полыни горькой с поверхности

Качественный анализ Учитывая требования системного подхода к стандартизации сырья, проведены исследования по разработке методики качественных реакций на флавоноиды

Анализ показал, что полынь горькая содержит флавоноиды, производные флавона и флавонола в виде гликозидов и агликонов

Раздел, качественные реакции впервые включен в проект Фармакопейной статьи

Определение числовых показателей При проведении исследований по разработке Фармакопейной статьи в раздел "Числовые показатели" включены их нормы качества, полученные в результате товароведческого анализа цельных и измельченных образцов сырья, позволяющие обеспечить его исходное качество

Количественное определение При получении из сырья полыни горькой различных лекарственных форм (настой, настойка, экстракты) целесообразно проводить оценку качества сырья по содержанию эфирных масел и флавоноидов, а не только экстрактивных веществ

Разработка количественного определения флавоноидов Для количественной оценки травы полыни горькой по содержанию флавоноидов, выбран метод избирательной УФ - спектроскопии

Разработка методики начата с выбора экстрагента Наличие в сырье полыни горькой фенольных соединений близких по полярности и химической структуре, делает исследования по выбору экстрагента необходимым Результаты представлены в таблице 8

Таблица 8

Влияние условий экстракции на содержание суммы флавоноидов

Экстрагент Содержание суммы флавоноидов %

Вода 0,64

Этанол %

40 0,76

60 0,89

70 1,32

90 0,85

Наиболее полное извлечение флавоноидов достигалось при экстрагировании 70% этанолом, что подтверждается количественным содержанием флавоноидов в извлечениях

Для определения аналитической длины волны были изучены УФ - спектры спиртовых извлечений сырья полыни и государственного стандартного образца (ГСО) рутина (ФС 42 - 3150 - 95)

Рисунок 2 Дифференциальная кривая поглощения ГСО рутина и извлечения из полыни горькой в присутствии алюминия хлорида, где 1 - спектр поглощения раствора ГСО рутина, 2 - спектр поглощения извлечения из полыни горькой

Дифференциальная кривая поглощения (рис 2) имеет максимум при 410 нм, который перекрывается с длинноволновой полосой ГСО рутина в присутствии алюминия хлорида

Изучена зависимость выхода флавоноидов из травы полыни горькой в 70% этанол в соотношениях от 1 10 до 1 100 (таблица 9)

Таблица 9

Соотношение сырья и экстрагента (70% этанол) Содержание суммы флавоноидов, %

1 10 0,3

1 20 0,5

1 40 0,8

1-60 1,5

1 80 1,2

I 100 0,9

Оптимальным является соотношение сырья и экстрагента 1 60, что подтверждает количественное содержание флавоиоидов в извлечении

Для определения времени экстракции изучали зависимость максимального выхода флавоноидов в извлечение от режима экстракции (таблица 10)

Таблица 10

Зависимость выхода флавоноидов от режима экстракции

Время экстракции, мин (70%-пый этанол, соотношение сырья и экстрагента) Содержание флавоноидов,%

Однократная в течении 20 30 40 50 60

0,82

1,51

1,30

0,97

0,91

Трехкратная экстракция в течение 30 минут 1,31

Установлено, что время полной эксгракции флавоноидов из сырья достигается через 30 минут

Изучена зависимость оптической плотности от соотношения извлечения и реактива (таблица 11)

Таблица 11

Зависимость оптической плотности от соотношения извлечения и реактива

№ п/п Соотношение извлечения и Оптическая плотность Содержание

реагента флавоноидов

1 1 1 0,152 0,67

2 1 2 0,160 0,84

3 1 3 0,159 0,85

4 22 0,311 0,82

5 23 0,328 0,86

6 24 0,348 0,92

7 25 0,311 0,82

8 34 0,454 0,80

9 35 0,476 0,84

10 36 0,480 0,84

Установлено, что оптимальным соотношением объема раствора А и 2 % раствора алюминия хлорида является соотношение 2 4

Для определения устойчивости комплекса флавоиоидов с алюминия хлоридом измеряли величину оптической плотности фотометр ирусмого рас']пора через каждые 5 минут в течение 2-х часов с момеша получения комплекса (рисунок 3)

Й и,295

0

Е 0 29

§ 0 285

1 ога

т

60 80 вре мя, мин

Рисунок 3 Устойчивость комплекса флавоноидов с алюминия хлоридом во времени

Анализ показал, что стабилыюс1Ь реакции наблюдается через 20 минут и сохраняется в юченис 110 минут

Таким образом, результаты по установлению оптимальных условии проведения анализа позволили разработать методику количественного определения суммы флавоноидов в траве нолыни горькой Относительная ошибка мегода составила 3,99% (таблица 12)

Таблица 12

10

0,714

Метрологическая характеристика метода О^ Г С ~1 С., 75 О' I

0,00016

0,01265

Ях

0,0040

Р,%

95

<<Р,0

2,26

%

3,99

Определение эфирного масла и эксграктшшмх веществ, извлекаемых 70%

этанолом

Для более объективной оценки качества сырья, при производстве из него различных лекарственных форм, рационально использование стандартизации сырья по содержанию и эфирного масла

Содержание эфирного масла колебалось от 0,52 до 1,48% Среднее содержание составите 0,79±0,09%

Содержание экстрактивных веществ, колебалось в пределах от 22,0% до 38,7% Среднее содержание составило 30,47±1,69%

Определение сроков годности сырья к норм содержания биологически активных веществ

Для установления срока годности и норм показателей качества сырья, были проведены исследования по изучению стабильности всех показателей в процессе хранения

В результат« установлено рекомендуемый срок годности 2 года, содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, не менее 0,5%, содержание экстрактивных веществ, извлекаемых 70% этанолом не менее 20%, эфирного масла не менее 0,2%

Микробиологическая чист ота.

Оценка качества сырья по показателю «Микробиологическая чистота» показала, что все образцы сырья соответствуют предъявляемым требованиям

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1 Впервые для территории Пермского края нами проведена комплексная оценка ресурсов дикорастущих эфирномасличных лекарственных растений центральных районов

Обследовано 375 зарослей ДЛР, определены плотность запасов сырья, биологический и эксплутациошпле запасы, и возможные ежегодные объемы заготовок

2 Заросли изучаемых эфирномасличных дикорастущих лекарственных растений центральных районов Пермского края по сырьевой базе разделены нами на группы 1) имеющие промышленное значение (170 зарослей), 2) имеющие недостаточно обеспеченную сырьевую базу и используемые для местных нужд (205 зарослей)

3 Выявлены продуктивные заросли багульника болотного, душицы обыкновенной, можжевельника обыкновенного, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного имеющие промышленное значение

4 Составлены карты-схемы запасов сырья исследуемых видов эфирномасличных ЛР

5 Изучено влияние факторов местообитания, плотности запаса сырья и фитоценоза на продуктивность зарослей багульника болотного, душицы обыкновенной, тысячелистника обыкновенного

Результаты статистической обработки показали, что существенного

влияния на продуктивность зарослей условия местообитания и гип фитоценоза не оказывают, и данный фактор не является определяющим Установлено, что заготовка сырья данных видов возможна в различных типах фитоценозов

6 Проведена оценка качества сырья багульника болотного, душицы обыкновенной, можжевельника обыкновенного, тысячелистника обыкновенного, которая показала, что по основным показателям качества сырье указанных видов соответствует требованиям НД Это характеризует все обследованные заросли как пригодные да я заготовки доброкачественного сырья

7 Проведен экологический мониториш ЛРС центральных районов Псрмского края Установлено, что все образцы сырья удовлетворяют требованиям Государственной фармакопеи XI издания по содержанию тяжелых металлов, что позволяет вести заготовку сырья для нужд фармацевтического производства Для данных зарослей ЛР составлены рекомендации по их рациональной эксплуатации

8 Проведено определение удельного радиационного фона в ЛРС исследуемых районов Установлено, чго доза гамма-фона не превышает норм установленных для Пермского края

9 Материалы о запасах ЛРС, возможных объемах заготовки во всех центральных районах края, рекомендации по рациональному использованию и охране ДЛР представлены в Управление по охране окружающей среды при Министерстве градостроительства и развития инфраструктуры Пермского края для составления Кадастра дикорастущих ЛР края

10 Разработана методика качественного и количественного определения флавоноидов в сырье полыни горькой, которая включена в проект ФС на траву и листья полыни горькой

11 Разработан проект Фармакопейной статьи и пояснительная записка «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой»

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Ресурсоведческая характеристика дикорастущих лекарственных растений Чусовского района Пермской области / В Д Белоногова, А Б Яковлев, И В Короткое [и др ] // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования июги и перспективы Материалы межвузовской научно-

практической конференции профессорско-преподавательского состава "Вузы и регионы" - Пермь,2003 -С 99

2 Анализ сырьевой продуктивности Achillea millefolium в некоторых районах Пермской области / В Д Белоногова, А Б Яковлев, ИВ Коротков [и др ] // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 85-легию СПХФА [Тез докл ]-СПб , 2004 -С 177

3 Мониторинг дикорастущих лекарственных растений Пермской области / В Д Белоногова, А Б Яковлев, И В Короткое [и др ] // Человек и лекарство тез докл XI Рос нац конгр - М , 2004 - С 52

4 Белоногова, В Д Мониторинг дикорастущих лекарственных растении Пермской области / В Д Белоногова, И В Короткое // материалы II Всероссийского съезда фармац работников -Сочи, 2005 - С 89-90

5 Коротков, ИВ Ресурсоведческии мониториш эфирномасличных лекарственных растений Ильинского района Пермской области /ИВ Коротков // Юбилейная межвузовская научная конференция студентов и молодых ученых, посвященная 70-летшо КГМУ "Молодежная наука и современность" - Курск, 2005 - С 107 -108

6 Курицын, А В Запасы дикорастущих травянистых лекарственных растений южных районов Пермской области / А В Курицын, В Д Белоногова, И В Коротков // Материалы XI международной паучно-практической конференции "Фармация и здоровье" -Пермь, 2005 -С 134

7 Перспективы использования дикорастущих лекарственных растений Пермской области / В Д Белоногова, А Б Яковлев, И В Коротков [и др ] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр Пятигор гос фармац акад - Пятигорск, 2005 - Вып 60 - С 8

8 Коротков, ИВ Сырьевая продуктивность и стандартизация сырья полыни горькой / ИВ Коротков, ВД Белоногова // Новая техноло]ическая платформа биомедицинских исследований (.биология, здравоохранение, фармация) материалы науч - практ конф (16 - 17 октября 2006 г, Ростов-на-Дону) [Тез докл ] - Ростов-на-Дону Изд-во ЮНЦ, 2006 - С 92

9 Мониторинг дикорастущих лекарственных растений Ильинского района Пермской области / В Д Белоногова, А Б Яковлев, И В Коротков [и др ] //

Человек и лекарство тез докл XIII Рос нац конгр, Москва, 2006 юд - М, 2006 - С 9

10 Мониторинг дикорастущих лекарстениых растений Карагайского района Пермской области / В Д Белоногова, А Б Яковлев, И В Коротков [и др ] // Человек и лекарство юз докл XIII Рос нац конгр , Москва, 2006 год -М , 2006 - С 787

11 Medicinal plant of flora of the Perm edge in treatment of a heart failure / V D Belonogova, А В Yakovlev, I V Korotkov [Etc] // 2-nd Russian - Chinese international scientific conference on pharmacology "Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice" Perm, Russian - 2006 p 22

12 Белоногова ВД Аспекты ресурсоведчсскою и фотохимического изучения представителей рудеральной флоры / В Д Белоногова, Н С Корепапова, Г И Олешко, И В Коротков // Приоритеты фармацевтической науки и практики Материалы международной конференции - М изд - во РУДН, 2006 - 367 с

13 Курицын, А В Количественное определение флавоноидов и траве тысячелистника обыкновенного / А В Курицын, В Д Белоногова, ИВ Коротков, EJI Королева // Вестник Пермской Государственной Фармацевтической Академии - Пермь, 2007 -№2 -С 256-260

14 Коротков, ИВ К оценке качества сырья полыни горькой / ИВ Коротко», В Д Белоногова, А С Выймова, АЮ Москотина//Весгник Псрмской Государственной Фармацевтической Академии - Пермь, 2007 - №2 - С 249 -255

15 Коротков, ИВ Качество сырья полыни горькой и душицы обыкновенной, произрастающих в Пермском крае / ИВ Коротков, ВД Белоногова, А Ю Турышев, Г Н Новоселова // Фармация - 2007 - №5 - С 16 -18

Подписано в печать 06 11 2007 Формат 60*90/16 Набор компьютерный Бумага ВХИ Тираж 100 экз Уел печ л 1,5 Заказ № 202/2007

Отпечатано на ризотрафе в типографии ГОУ ВПО ПГФА 614070, г Пермь, ул Крупской, 46, тел/факс 8-901-266-59-37

Актуальность темы. Эфирномасличные лекарственные растения (ЛР) широко используются не только в медицине, но и в других отраслях промышленности, что требует обеспеченной сырьевой базы [120, 123, 126].

Сложившаяся ситуация в ассортименте эфирномасличного сырья и его продукции показывает, что почти вся сырьевая база, обеспечивающая потребность в препаратах на фармацевтическом рынке России, оказалась на территории ближнего зарубежья.

В связи с этим, представляются перспективными исследования по изучению сырьевой базы эфирномасличного лекарственного растительного сырья (ЛРС) отдельных регионов [111, 124], в частности Пермского края, позволяющие оценить запасы, доброкачественность и дать экологическую оценку сырья.

Поэтому, с целью расширения лекарственной сырьевой базы сотрудники кафедры фармакогнозии ПГФА проводили изучение запасов эфирномасличных лекарственных растений Пермского края. С 2001 по 2007 года были обследованы Чусовской, Нытвенский, Ильинский, Очерский, Сивинский, Верещагинский, Добрянский, Оханский, Карагайский районы.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилась комплексная оценка ресурсов эфирномасличных лекарственных растений подзоны южной тайги (центральных районов) Пермского края.

Для реализации поставленной цели следовало решить следующие задачи:

- обобщить литературные данные по современному состоянию изученности флоры эфирномасличных лекарственных растений Пермского края; проанализировать и обобщить литературные данные о морфологических, химических и фармакологических исследованиях травы душицы обыкновенной, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, побегов багульника болотного и плодов можжевельника;

- провести изучение ресурсов эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края, рассчитать биологический запас, эксплуатационный запас и возможный объем ежегодной заготовки. Составить рекомендации по рациональной эксплуатации зарослей эфирномасличных лекарственных растений Пермского края;

- дать комплексную оценку качества сырья на основе качественного и количественного анализа биологически активных веществ и определить экологическую чистоту сырья;

- составить карты-схемы размещения зарослей эфирномасличных V лекарственных растений для заготовки в центральных районах Пермского края;

- представить результаты исследования ресурсов эфирномасличных лекарственных растений центральных районов края в Управление по охране окружающей среды Министерства градостроительства и развития инфраструктуры Пермского края для создания Кадастра дикорастущих лекарственных растений.

- провести стандартизацию опытных и промышленных образцов сырья полыни горькой для разработки фармакопейных статей «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой»;

Научная новизна.

- впервые проведен комплекс ресурсоведческих, фитохимических, экологических исследований для оценки состояния зарослей эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края; проведена химическая таксация зарослей эфирномасличных лекарственных растений, позволившая выявить потенциальные заросли для проведения заготовок в промышленных масштабах;

- разработан проект фармакопейной статьи и пояснительная записка «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой» для Государственной фармакопеи XII издания.

Практическая значимость.

Управлением по охране окружающей среды Пермского края используются материалы ресурсоведческих исследований:

- для составления Кадастра дикорастущих лекарственных растений — номенклатура эфирномасличных лекарственных растений, рекомендуемых для промышленной заготовки в центральных районах Пермского края; сведения о распространении, биологическом запасе, эксплуатационном запасе и возможном объеме ежегодной заготовки травы душицы обыкновенной, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, побегов багульника болотного, плодов можжевельника; карты схемы размещения зарослей эфирномасличных лекарственных растений, для организации заготовки сырья в центральных районах края.

Предложены методики стандартизации сырья полыни горькой, позволяющие объективно оценивать его доброкачественность. Результаты исследований положены в основу фармакопейной статьи для ГФ XII «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой», которая представлена на рассмотрение в фармакопейный комитет РФ.

Результаты качественного обнаружения и количественного определения основных групп биологически активных веществ внедрены и используются в учебном процессе Пермской государственной фармацевтической академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, а также в учебном процессе кафедры фармакогнозии Ярославской государственной медицинской академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, дистанционных курсах повышения квалификации фармацевтических работников МЗ Бурятии.

На защиту выносятся:

- результаты ресурсоведческих исследований эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края;

- данные о комплексной оценке качества эфирномасличного сырья, включающие фитохимический, экологический, микробиологический анализы;

- рекомендации по рациональному использованию эфирномасличных лекарственных растений в центральных районах Пермского края;

- материалы по разработке Фармакопейной статьи на траву и листья полыни горькой.

Апробация работы. Основные результаты работы изложены на: межвузовской научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава "Вузы и регионы", Пермь, 2003 год; международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СПХФА, Санкт-Петербург, 2004 год; XI национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 2004 год; на II Всероссийском съезде фармацевтических работников — Сочи, 2005год; юбилейной межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых, посвященной 70-летию КГМУ "Молодежная наука и современность", Курск, 2005 год; XI международной научно-практической конференции "Фармация и здоровье", Пермь, 2005 год; XIII национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 2006 год; 2-й международной Российско-Китайской конференции "Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice", Пермь, 2006 год; научно-практической конференции "Новая технологическая платформа биомедицинских исследований (биология, здравоохранение, фармация)", Ростов-на-Дону, 2006 год.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки.

Диссертационная работа выполнена на кафедре фармакогнозии ГОУ ВПО Пермская Государственная Фармацевтическая Академия Росздрава России в соответствии с планом научно-исследовательских работ. Номер государственной регистрации 01.9.10018875.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 работ. Материал для исследования был собран во время экспедиционных работ по изучению ресурсов дикорастущих лекарственных растений Пермского края с 2001 по 2007 гг.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит 34 таблицы, 5 рисунков.

Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав эксперимента, выводов, списка литературы, включающего 145 источников, из них 4 на иностранных языках.

В I главе представлены литературные сведения о ботанико-географическом районировании, флористических и ресурсоведческих исследованиях в Пермском крае, дана общая характеристика объектов исследования. В экспериментальной части изложена характеристика объектов и методов исследования (глава И), характеристика сырьевой базы и ресурсного потенциала изучаемых объектов в центральных районах Пермского края (глава III), данные фитохимического и экологического мониторинга (глава IV), материалы по разработке фармакопейной статьи на траву и листья полыни горькой (глава V).

В приложении вынесены таблицы по характеристике ресурсов отдельных объектов в исследуемых районах, таблицы с адресом расположения зарослей исследуемых видов, пояснительная записка и проект фармакопейной статьи «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой», акты внедрения результатов исследований в практику и учебный процесс, акты внедрения Управления по охране окружающей среды правительства Пермского края.

ЧАСТЫ

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Впервые для территории Пермского края нами проведена комплексная оценка ресурсов дикорастущих эфирномасличных лекарственных растений центральных районов.

Обследовано 375 зарослей ДЛР, определены плотность запасов сырья, биологический и эксплутационные запасы, и возможные ежегодные объемы заготовок.

2. Заросли изучаемых эфирномасличных дикорастущих лекарственных растений центральных районов Пермского края по сырьевой базе разделены нами на группы: 1) имеющие промышленное значение (170 зарослей); 2) имеющие недостаточно обеспеченную сырьевую базу и используемые для местных нужд (205 зарослей).

3. Выявлены продуктивные заросли багульника болотного, душицы обыкновенной, можжевельника обыкновенного, полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, имеющие промышленное значение.

4. Составлены карты-схемы запасов сырья исследуемых видов эфирномасличных ЛР.

5. Изучено влияние факторов местообитания и фитоценоза на продуктивность зарослей багульника болотного, душицы обыкновенной, тысячелистника обыкновенного.

Результаты статистической обработки показали, что существенного влияния на продуктивность зарослей условия местообитания и тип фитоценоза не оказывает, и данный фактор не является определяющим. Установлено, что заготовка сырья данных видов возможна в различных типах фитоценозов.

6. Проведена оценка качества сырья багульника болотного, душицы обыкновенной, можжевельника обыкновенного, тысячелистника обыкновенного, которая показала, что по основным показателям качества указанные виды соответствует требованиям НД. Это характеризует все обследованные заросли как пригодные для заготовки доброкачественного сырья.

7. Проведен экологический мониторинг JIPC центральных районов Пермского края. Установлено, что все образцы сырья удовлетворяют требованиям Государственной фармакопеи XI издания по содержанию тяжелых металлов, что позволяет вести заготовку сырья для нужд фармацевтического производства. Для данных зарослей JIP составлены рекомендации по их рациональной эксплуатации.

8. Проведено определение удельного радиационного фона в JIPC исследуемых районов. Установлено, что доза гамма-фона не превышает норм, установленных для Пермского края.

9. Материалы о запасах ЛРС, возможных объемах заготовки во всех центральных районах края, рекомендации по рациональному использованию и охране ДЛР представлены в Управление по охране окружающей среды при Министерстве градостроительства и развития инфраструктуры Пермского края для составления Кадастра дикорастущих JIP края.

10. Разработана методика качественного и количественного определения флавоноидов в сырье полыни горькой, которая включена в проект ФС на траву и листья полыни горькой.

11. Разработан проект Фармакопейной статьи и пояснительная записка «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой».

Заключение

Таким образом, багульник болотный, душица обыкновенная, можжевельник обыкновенный, полынь горькая, тысячелистник обыкновенный являются распространенными растениями на территории России. Значительный ассортимент препаратов, получаемых из этих видов сырья, требует их обеспеченной сырьевой базы и высокого качества экологически чистого сырья. Однако в литературе имеются лишь отдельные сведения по распространению на территории Пермского края изучаемых видов.

ЧАСТЫ1

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Обоснование выбора объектов исследования

Объектами исследования являлись лекарственные эфирномасличные растения, произрастающие на территории Пермского края: багульник болотный, душица обыкновенная, можжевельник обыкновенный, полынь горькая, тысячелистник обыкновенный. ЛРС было собрано в различных эколого-фитоценотических условиях, в местах, удаленных от дорог (не менее 100 метров) и крупных промышленных предприятий. Заготовка ЛРС проводилась в ходе ресурсоведческих экспедиционных исследований в Очерском, Ильинском, Карагайском, Большесосновском, Сивинском, Верещагинском, Добрянском, Нытвенском и Чусовском районах Пермского края.

Сырье собирали и сушили согласно инструкциям по заготовке и использовали для оценки доброкачественности, экологической оценки, определения микробиологической чистоты, общего радиационного фона, а также для проведения атомно-адсорбционного анализа. Образцы полыни горькой промышленных серий и индивидуального сбора использовали также для разработки Фармакопейной статьи «Трава полыни горькой» и «Листья полыни горькой».

Всего проанализировано 102 образца ЛРС.

2.2. Методика работы по изучению распространения и учету запасов дикорастущих лекарственных растений

Определение запасов лекарственного растительного сырья проводили общепринятыми методами [21 - 25, 66].

Основные термины и принципы расчетов запасов сырья, используемые в работе, соответствуют Методике определения запасов лекарственных растений [85].

При изучении распространения и учета запасов сырья лекарственных растений использовали метод работы на конкретных зарослях.

При размещении пробных площадок в пределах учетной площадки учитывали горизонтальную структуру растительного сообщества.

Если заросли однородны по растительному покрову и экземпляры изучаемого вида распределены на нем равномерно, то пробные площадки закладывали равномерно по всей площади заросли методом "челнока" или методом "конверта". Если площадь заросли неоднородна по растительному покрову, лекарственные растения занимают менее половины площади сообщества, размещены неравномерно, отдельными куртинами (пятнами), то площадки размещали через определенные интервалы, но лишь в пределах куртин (пятен изучаемого вида), а затем, многократно пересекая массив маршрутами, рассчитывали процент площади, занятой куртинами (пятнами изучаемого вида), от общей площади массива [65, 67-69].

Для полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, душицы обыкновенной и можжевельника обыкновенного запас сырья устанавливали на конкретных зарослях методом модельных экземпляров. Для багульника болотного использовали метод проективного покрытия.

Для травянистых видов: полыни горькой, тысячелистника обыкновенного, душицы обыкновенной закладывали пробные площадки в 1 м2, располагая их в пределах заросли через равные интервалы, на параллельных ходах или методом "конверта". Площади для конкретных зарослей устанавливали, измеряя расстояние шагами или по спидометру автомашины. При определении запасов плодов можжевельника (кустарник) использовали учетные площадки размером 25 м2.

Запас лекарственного сырья на конкретных зарослях рассчитывали как произведение средней плотности запаса сырья на общую площадь заросли (биологический запас). Под биологическим запасом подразумевается все количество сырья, которое можно заготовить на площади заготовки в заросли лекарственного растения без учета необходимости восстановления популяции лекарственного растения [21].

Так как часть растений при заготовке необходимо оставлять для восстановления заросли, рассчитывали величину эксплуатационного запаса сырья. Расчет величины эксплуатационного запаса сырья вели по нижнему пределу плотности запаса сырья.

Продолжительность периода восстановления запаса сырья для каждого вида лекарственного растения индивидуальна.

Возможный ежегодный объем заготовки сырья рассчитывали как частное от деления эксплуатационного запаса сырья на оборот заготовки, включающий год заготовки и продолжительность периода восстановления ("отдыха") заросли [85].

Расчеты проводили с помощью микрокалькулятора Citizen SR - 260.

2.3. Маршрут экспедиций

Маршруты экспедиций составляли после детального ознакомления с литературой по распространению и видовому составу лекарственных растений Пермского края, с материалами лесо- и землеустройства, с таким расчетом, чтобы посетить наиболее вероятные и характерные места произрастания лекарственных растений.

При составлении маршрута использовали административную карту края масштаба 1:700 ООО и атлас автомобильных дорог Пермской области и Коми - Пермяцкого автономного округа масштаба 1:20 ООО [33, 99-101, 108].

В каждом административном районе маршрут уточняли в зависимости от состояния путей транспорта и сведений, полученных от лесников и местного населения. Путь следования планировали с таким расчетом, чтобы пересечь по возможности все типы рельефа и связанные с ним типы растительности, учитывая местонахождение населенных пунктов и транспортную сеть.

В процессе работы маршрутами были пересечены 10 административных районов Пермского края. Общая протяженность маршрутов (автомобильного и пешеходного) составила более 20000 км. В экспедиции принимали участие сотрудники и студенты Пермской государственной фармацевтической академии.

2.4. Факторы, влияющие на продуктивность зарослей изучаемых видов

Результаты геоботанических описаний и совокупность данных по плотности запасов сырья исследуемых видов на ключевых участках использованы нами для выяснения влияния факторов (типа экспозиции склонов) на продуктивность зарослей луговых видов: душицы обыкновенной и тысячелистника обыкновенного.

Для этого статистически определяли различия между фитоценозами (рассчитывали критерий Стьюдента) и методом однофакторного дисперсионного анализа с разным числом повторностей определяли по критерию Фишера (F) наличие вариантов, существенно отличающихся от остальных, и степень (г|), или долю влияния фактора в общей дисперсии признака [45, 47, 77, 105]. Расчеты проводили в Microsoft Excel 2000.

На каждой конкретной заросли, где определяли запасы сырья багульника болотного, душицы обыкновенной, тысячелистника обыкновенного, были проведены геоботанические описания по общепринятой методике [112]. Всего было изучено 83 популяции душицы, 159 - тысячелистника, 15 - багульника болотного. На основе геоботанических описаний зарослей составляли сводные списки. Каждый сводный список включает типы ассоциаций, в которых лекарственные растения играют роль доминантов или субдоминантов (обилие по шкале Друде не менее sp.), а популяции видов по занимаемой площади и сырьевой фитомассе имеют промышленное значение.

Таким образом, принимая в целом определение ценокомплекса в трактовке М.Е. Пименовой [104], мы рассматриваем только хозяйственно-продуктивные растительные сообщества.

Виды, включенные в сводные списки, имеют константность [137, 138] не менее 30 — 40 %. Составленные списки не тождественны со сводными списками геоботанических описаний фитоценозов, которые со всей возможной полнотой характеризуют ассоциацию.

2.5. Методы оценки качества лекарственного растительного сырья

Основным показателем качества лекарственного растительного сырья является содержание биологически активных веществ (БАВ) и экстрактивных веществ. Анализ образцов лекарственного растительного сырья на содержание, влаги, золы, БАВ и экстрактивных веществ проводили по методикам Государственной фармакопеи СССР XI издания [37, 38].

Содержание флавоноидов в траве полыни горькой определяли с использованием дифференциального варианта спектрофотометрического метода, модифицированного нами для данного сырья. Измеряли оптическую плотность окрашенного комплекса, полученного по реакции флавоноидов с 2 % раствором алюминия хлорида с помощью спектрофотометра СФ-2000.

Содержание экстрактивных веществ в траве полыни горькой проводили по методике, изложенной в ГФ XI издания выпуск 1.

Содержание эфирного масла в траве душицы, траве полыни горькой и траве тысячелистника определяли методом 2 Государственной фармакопеи СССР XI издания, выпуск 1.

Нами проведен анализ 102 образцов лекарственного растительного сырья: багульник болотный - 8 образцов, душица обыкновенная - 22, можжевельник обыкновенный - 14, полынь горькая - 30, тысячелистник обыкновенный - 28.

Определение микробиологической чистоты проводили по методике ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» [38]. Согласно изменению № 3 от 19.06.2003 в разделе «Требования, предъявляемые к микробиологическому контролю лекарств, субстанций и вспомогательных материалов», категория 4 А предусматривает количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов (микробное число). В 1 г сырья допускается не более 107 общего числа аэробных

5 • • 2 бактерий, общего числа грибов - 10 , а также - Escherichia coli не более 10 .

Испытания на микробиологическую чистоту проводили путем определения в посевах на наличие грибов в среде Сабуро, жизнеспособных бактерий — среда № 1.

А также золотистого стафилококка Staphylococcus aureus, синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa - среда № 8, кишечной палочки Escherichia coli - среда № 3.

Испытания проводились в асептических условиях [59].

Экологическую оценку сырья проводили по методике ГФ XI издания в зольном остатке после сжигания сырья [36], радионуклиды определяли по естественному гамма-фону J1PC [97, 106]. Оценку удельной активности радионуклидов в JIPC проводили на измерителе мощности дозы РКСБ-104 («Белвар»). Для получения более точного результата проводили три параллельных измерения и считали среднее арифметическое значение.

Токсичные элементы (свинец, кадмий, медь) и железо количественно определяли атомно-адсорбционным методом [26, 132] по ГОСТ 30178-96, мышьяка по ГОСТ 26930-86, пробоподготовку проводили по ГОСТ 26929-94. Анализ проводился в Вологодском областном центре контроля качества лекарственных средств.

ГЛАВА III.

РЕСУРСОВЕДЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ЗАПАСЫ СЫРЬЯ ДИКОРАСТУЩИХ ЭФИРНОМАСЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНЫХ РАЙОНОВ ПЕРМСКОГО КРАЯ 3.1. Ресурсоведческая характеристика дикорастущих эфирномасличных лекарственных растений центральных районов Пермского края

Ресурсоведческая характеристика лекарственных растений включает эколого-ценотическую характеристику вида, оценку плотности запаса сырья в различных растительных сообществах и влияние отдельных факторов местообитания на продуктивность зарослей, оценку запасов сырья. Сообщества, в которых вид близок к своему фитоценотическому и экологическому оптимуму, где наблюдаются не только максимальная плотность запаса сырья, но и высокая устойчивость к деструктивным факторам (в данном случае к эксплуатационному стрессу), рекомендуются для проведения заготовок сырья. Необходимость выявления наиболее продуктивных сообществ, разработки рационального режима эксплуатации зарослей и оценки запасов сырья вытекает непосредственно из современных требований по заготовке сырья [86 - 89].

3.1.1. Эколого-ценотическая характеристика, плотность запаса сырья и влияние на нее отдельных факторов местообитания

С целью установления хозяйственно продуктивных сообществ, влияние факторов местообитания на продуктивность зарослей, установление ценокомплекса и определения запасов сырья в центральных районах края нами изучены 232 ценопопуляции.

Влияние факторов местообитания на продуктивность зарослей багульника болотного.

Изучены характерные популяции багульника болотного. Рассматривали сообщества, в которых багульник болотный встречается с обилием по Друде не менее sp и проективным покрытием не менее 1%, то есть в таких сообществах, которые могут представлять интерес для организации заготовок.

В обследованных районах багульник болотный является доминантом и субдоминантом травяно-кустарничкового яруса в сосняках сфагновых и осоково-сфагновых болотах.

Сосняк сфагновый. Микрорельеф кочковатый. Древостой сосновый или с примесью березы. Подрост редкий сосновый. Подлесок отсутствует. В травяно-кустарничковом ярусе брусника обыкновенная (Vaccinium vitis-idaea L.) (sp), черника обыкновенная (Vaccinium myrtillus L.) (sol-sp), болотный мирт обыкновенный (Chamaedaphne calyculata L.) (sp-copl), клюква четырехлепестная (Oxycoccus quadripetalus Gilib.) (sp), марьянник луговой (Melampyrum pratense L.) (sol), пушица влагалищная (Eriophorum vaginatum L.) (sp-copl), глубика, осока (Carex) (sp). Моховой покров: сфагнум (sp), политрихум обыкновенный (sp-copl). Плотность запаса сырья составляла от 37,10+5,4 до 574,0+63,4 кг/га

Болото осоково-сфагновое. ( см. ценокомплекс сосняка сфагнового) Помимо ранее указанных видов багульнику болотному сопутствует сабельник болотный (Comarum palustre L.) (сор1).

Плотность запаса сырья составляла от 5,27±0,07 до 346,60+62,5 кг/га.