Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностические исследования и биологическая активность растений семейства норичниковые
- Ученая степень
- доктора фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностические исследования и биологическая активность растений семейства норичниковые
На правах рукописи
ПЕТРИЧЕНКО ВАСИЛИЙ МИХАЙЛОВИЧ
ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА НОРИЧНИКОВЫЕ
1S.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук
Пермь-2005
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Научные консультанты: доктор фармацевтических наук,
профессор Фурса Николай Сергеевич
доктор медицинских наук,
профессор Сыропятов Борис Яковлевич
Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,
профессор Ярыгина Татьяна Ивановна
доктор фармацевтических наук,
профессор Марданова Людмила Геннадьевна
доктор фармацевтических наук,
профессор Куркин Владимир Александрович
Ведущая организация: Московская медицинская академия имени И.М.
Сеченова
Защита состоится 28 июня 2005 года в 1300 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГОУ ВПО «ПГФА Росздрава» по адресу: 614990, ГСП - 277, г. Пермь, ул. Ленина, 48, тел. 129-006.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии, по адресу: 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46.
Автореферат разослан «_»_2005 года.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент
Метел ева Е.В.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Препараты на основе лекарственных растений уверенно завоевывают фармацевтический рынок России. Ежегодно расширяется их ассортимент, увеличивается количество. Преимущество фитопрепаратов перед синтетическими лекарственными средствами заключается в малой токсичности и мягкости действия. Прочно вошла в обиход и получила широкое распространение новая группа препаратов на основе продуктов природного происхождения - это нутрицевтики или биологически активные добавки к пище (БАД). Интерес к Б АД проявляют не только производители и врачи, но и население. Наметившаяся тенденция будет расширяться, по мере улучшения благосостояния населения и повышения покупательского спроса. Сдерживающими факторами в производстве и реализации новых видов продукции является слабая фармакогностическая, фармакологическая и химическая изученность сырьевых источников фитопрепаратов.
Среди большого разнообразия лекарственных растений отечественной флоры несомненный интерес представляет семейство норичниковые (5сгорки1апасеае), мало используемое в медицинской практике. Растения семейства норичниковые привлекают внимание исследователей как источники биологически активных веществ (БАВ). Из видов сем. норичниковые прошли испытания и разрешены к применению норичник Бюргера - средство, влияющее на динамику кровообращения; вероника Виргинская -противовоспалительное средство при желудочно-кишечных заболеваниях; коровяк густоцветковый - муколитическое средство. Потенциальными источниками БАВ и сырьём для производства лекарственных препаратов являются паразитирующие виды рода Очанка, Марьянник, Погремок, Зубчатка.
Многие виды из перечисленных родов давно и эффективно применяются в народной медицине и гомеопатии для лечения заболеваний глаз, центральной нервной системы, желудочно-кишечного тракта, сердечнососудистой системы. Некоторые виды рода Очанка включены в фармакопеи стран Западной Европы (Польша, Германия, Франция).
Важное теоретическое и практическое значение для фармации имеют сведения о химическом составе и закономерностях накопления БАВ, биологической активности и их связи с условиями паразитического существования растений. Практически не исследованы начальные этапы онтогенеза и не разработаны научно-методологические принципы фармакогностического изучения паразитирующих растений. Все выше изложенное определило актуальность данной работы.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы является комплексное фармакогностическое исследование и сравнительный анализ биологических свойств и химического,,спгтава паразитирующих и автотрофных растений семейства норични
Для достижения поставленной цели исследования необходимо было решить следующие основные задачи:
- Изучить современное состояние вопроса по биологии цветковых паразитов. Проанализировать биологические, химические и фармакологические свойства растений рода Euphrasia L. (Очанка), Melampyrum L. (Марьянник), Odontites Zinn (Зубчатка), Rhinanthus L. (Погремок).
- Провести скрининговые фармакологические исследования растений научной и народной медицины и на их фоне оценить потенциал биологической активности паразитирующих растений семейства норичниковые.
Исследовать фармакологическую активность и токсичность паразитирующих и автотрофных растений и выявить перспективные виды для дальнейшего изучения.
- Провести сравнительное изучение зольности, макро- и микроэлементного состава и биогеохимических показателей растений, отличающихся типом питания.
- Изучить химический состав жиров, аминокислот, флавоноидов, иридоидов и фенолокислот. Исследовать закономерности накопления и распределения БАВ по органам и фазам развития растений. Экспериментально обосновать сроки сбора и режим сушки сырья.
- Провести морфолого-анатомические исследования и установить диагностические признаки растений рода Очанка, зубчатки обыкновенной, марьянника лугового.
- Экспериментально обосновать технологию получения экстемпоральных лекарственных форм и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой и марьянника лугового.
- Разработать методы количественного определения флавоноидов и иридоидов в сырье и экстракционных препаратах очанки и марьянника.
- Обосновать товароведческие показатели качества сырья и разработать нормативную документацию на траву ОЧАНКИ и траву МАРЬЯННИКА ЛУГОВОГО.
- Изучить условия прорастания семян, синэкологический оптимум и ресурсный потенциал очанки коротковолосистой на территории Пермской области.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. На основе сравнительного изучения физиологически неоднородных видов семейства норичниковые сформулированы научно-методологические принципы фармакогностического исследования паразитирующих растений, позволяющие анализировать виды, имеющие полиморфное строение и образующие симбионты с различными "растениями-хозяевами".
Впервые проведены скрининговые фармакологические исследования 45 видов лекарственных растений на противолейкемическую и антитромбиновую активность. Установлено, что липофильные экстракты очанки
коротковолосистой обладают высоким, а марьянника лугового средним уровнем противолейкемического действия. Выявлены перспективные растения научной медицины, показавшие высокую противолейкемическую и антитромбиновую активность.
Проведено сравнительное изучение гипотензивной активности автотрофных и паразитирующих растений. Установлено, что паразитирующие растения обладают большей силой и продолжительностью гипотензивного действия, по сравнению с автотрофными видами.
Определен макро- и микроэлементный состав растений с различным типом питания. Установлено, что у растений с уклоняющимся типом питания (паразитов) содержание Мп, Бг, Ва, Си, 2п, а также общий уровень зольности выше, по сравнению с растениями, имеющими нормальный тип питания. Изучена изменчивость биогеохимических параметров физиологически неоднородных растений.
Впервые установлено, что жирнокислотный состав семян растений определяется не типом питания растений, а глубиной и типом покоя. В семенах с глубоким эндогенным типом покоя доминирует линоленовая, а с неглубоким линолевая кислота.
У паразитирующих растений выявлена зависимость компонентного состава фенольных соединений и иридоидов от экологических условий произрастания. При изучении химического состава и разработке нормативной документации на сырье паразитирующих растений показана необходимость выделения константных, аналитически значимых компонентов.
На примере четырех видов рода Очанка показано, что для выявления диагностических анатомо-морфологических признаков у растений имеющих полиморфное строение, связанное с межвидовой гибридизацией, необходимо использовать результаты статистической обработки количественных параметров внешней и внутренней структуры.
Проведен выбор оптимальных условий получения экстемпоральных лекарственных форм и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой и марьянника лугового.
Определены оптимальные условия преодоления покоя семян, синэкологический оптимум и ресурсный потенциал очанки коротковолосистой на территории Пермской области. Установлено, что начальные этапы онтогенеза имеют сложный донорозависимый характер и невозможны без участия «растений-хозяев».
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Выявленная зависимость химического состава и биологических свойств от способа питания, у видов семейства норичниковые, позволяет расширить теоретические представления о биохимических закономерностях паразитизма цветковых растений. Разработанные методологические подходы могут использоваться для изучения паразитирующих видов среди представителей различных семейств покрытосеменных растений, а также других отделов и царств органического мира (грибов, лишайников, водорослей, простейших).
Установленная зависимость между жирнокислотным составом и типом покоя позволяет проводить предварительное химическое тестирование с целью прогнозирования скрытых физиологических свойств и глубины покоя семян.
Результаты фармакологических исследований растений семейства норичниковые являются основой для разработки препаратов гипотензивного, противовоспалительного, противосудорожного, антимикробного, антиоксидантного действия.
Технология получения сухого экстракта очанки коротковолосистой отличается простотой и доступностью, защищена патентом РФ и может быть реализована в условиях галенового производства фармацевтической фабрики.
Унифицированный способ количественного определения флавоноидов в траве трех видов рода Очанка (Е. brevipila, Е. parviflora, Е. х reuteri) и экстракционных препаратах очанки коротко вол ос истой, может быть использован для анализа сырья и препаратов других представителей этого рода.
Методика количественного определения суммы иридоидов в траве марьянника лугового, в отличие от известных, позволяет определять вещества группы аукубина и каталпола и может применяться в анализе различных видов сырья, содержащих эти классы иридоидов.
По результатам исследования разработана фармакопейная статья предприятия (ФСП) «Herba Euphrasiae». Проект ФСП, пояснительная записка, таблицы аналитических данных, материалы сравнительного изучения с зарубежными аналогами, инструкция по применению переданы заказчику I осударо ненному унитарному предприятию «МЕЖБОЛЬНИЧНАЯ АПТЕКА МЕДИЦИНСКОГО ЦЕНТРА УПРАВЛЕНИЯ ДЕЛАМИ ПРЕЗИДЕНТА» и направлены в Фармакопейный комитет. Разработан проект ФС «Herba Melampyri pratensis».
Данные ресурсоведческих исследований очанки коротковолосистой могут использоваться при организации заготовки сырья на территории Пермской области.
Результаты анатомо-морфологических, фитохимических и биологических исследований использованы Пермским НПО «Биомед» (ФГУП «Микроген») при разработке двух препаратов - «Уральская очанка» капли и таблетки (Акт внедрения от 10 марта 2005 г.).
Материалы, опубликованные в патентах, статьях и тезисах конференций, могут использоваться в учебном процессе при изучении фармакогнозии, фармацевтической технологии, ботаники и физиологии растений, работе интернов, аспирантов, слушателей факультета повышения квалификации провизоров.
СВЯЗЬ ЗАДАЧ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пермской государственной фармацевтической академии (№ Гос. регистрации 01.9.10018875).
АПРОБАЦИЯ. Результаты и основные положения диссертационной работы доложены на научно-практических конференциях Пермской государственной фармацевтической академии (1994 - 2004); областных межвузовских конференциях «Экология: проблемы и пути решения» (Пермь, 1996 - 2002); научно-практических конференциях «Современные тенденции развития фармации» (Самара, 1999) и «Фармацевтическая наука и практика» (Кемерово, 1999); научных конференциях «Актуальные проблемы медицины и фармации» (Курск, 1998, 1999, 2001, 2002); Международной научной конференции «Перспективы развития естественных наук в высшей школе» (Пермь, 2001); Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в 21-м веке», посвященной 105-летию НПО «Биомед» (Пермь, 2003); XI съезде Русского ботанического общества (Новосибирск - Барнаул, 2003); 2-м съезде Российского научного общества фармакологов (Москва, 2003); научной конференции, посвященной 20-летию кафедры фармакогнозии ЯГМА (Ярославль, 2004); научно-практической конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2004); Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005).
ПУБЛИКАЦИИ. Основное содержание работы изложено в 58 работах, из них 22 статьи и два патента.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа состоит из введения, 8 глав, обсуждения результатов исследования, общих выводов, списка литературы, включающего 441 источник, из них 89 зарубежных авторов. Работа изложена на 327 страницах машинописного текста, содержит 117 таблиц и 50 рисунков, 2 схемы. В диссертации имеется приложение, в котором приведены материалы по элементному составу растений, данные по структуре фитоценозов, протоколы фармакологических испытаний, сведения, подтверждающие внедрение научных исследований.
В первой главе приведен обзор литературы по ботанико-фармакогностическому исследованию паразитирующих растений семейства норичниковые. Проанализированы биологические, химические и фармакологические свойства растений рода Euphrasia L., Melampyrum L., Odontites Zinn, Rhinanthus L.
Вторая глава содержит характеристику объектов исследования, описание методов анатомо-морфологических, химических, фармакологических, ресурсоведческих исследований и статистической обработки результатов.
Последующие шесть глав посвящены комплексному фармакогностическому исследованию паразитирующих и автотрофных растений семейства норичниковые. В разделе «Обсуждение результатов» изложены методологические аспекты выполненных исследований, проведено теоретическое обоснование результатов и намечены перспективы их практического использования.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования
Основными объектами исследования служили паразитирующие виды семейства норичниковые: четыре вида рода Euphrasia L. - Euphrasia brevipila Burnat et Gremli - очанка коротковолосистая; E. parviflora Schag. -о. мелкоцветная; E. x reuteri Wettst. - о. Рейтера; E. vemalis List. - о. весенняя; Melampyrum pratense L. - марьянник луговой; Odontites vulgaris Moench -зубчатка обыкновенная; Rhinanthus vernalis Schischk. et Serg. - погремок весенний. Автотрофные виды: наперстянка крупноцветковая - Digítalis grandiflora Mili.; вероника дубравная - Verónica chamaedrys L.; льнянка обыкновенная - Linaria vulgaris Mili.; два вида рода Коровяк (Verbascum L.) -к. обыкновенный - V. thapsus L.; к. черный - V. nigrum L. изучались в сравнительных целях для установления зависимости между способами питания растений и их химическими и фармакологическими свойствами.
Образцы - надземную часть с корнями, заготовляли в фазу цветения -плодоношения в период с 1994 по 2003 гг преимущественно в Уральском регионе. Растения «хозяева» паразитирующих видов собирали в те же сроки, что и виды семейства норичниковые.
Извлечения для фармакологических и химических исследований получали следующими способами:
1. Растительный материал дважды экстрагировали 50% или 60% спиртом этиловым в соотношении 1:10 в течение 20 минут на кипящей водяной бане, далее извлечения охлаждали, объединяли, фильтровали через бумажный фильтр.
2. Сухое измельченное растительное сырье предварительно обрабатывали хлороформом в аппарате Соксклета в течение 15 часов, сырье сушили, проветривали и экстрагировали спиртом этиловым по способу 1.
3. Воздушно-сухое растительное сырье последовательно обрабатывали 40, 60, 80, 96% спиртом этиловым в присутствии кальция карбоната, в колбе с обратным холодильником, в соотношении 1:10 (сырье - экстрагент). Извлечения объединяли, концентрировали и подвергали жидкостной экстракции в аппарате Соксклета, оборудованном насадкой Тилипане.
4. Сухой растительный материал в аппарате Соксклета последовательно экстрагировали метиленом хлористым и метанолом (этанолом) в течение 24 часов. Растворители отгоняли в вакууме и получали метиленхлоридные (липофильные) и метанольные или этанольные (гидрофильные) фракции.
Для фармакологических исследований использовали отдельные фракции БАВ и экстракционные препараты (настои, настойки, экстракты).
Скрининговые исследования на противолейкемическую и антитромбиновую активность выполнены in vitro в университете штата Центральная Флорида (Орландо, США).
Гипотензивную активность определяли на наркотизированных мединалом кошках. Артериальное давление измеряли прямым методом в
сонной артерии. В качестве эталона сравнения использовали раствор папаверина гидрохлорида в дозе 3 мг/кг.
Антнкоагулянтную активность устанавливали с помощью коагулометра «Минилаб - 701». В качестве эталона сравнения использовали гепарин в дозе 1 ЕД/мл.
Антиагрегационную активность исследовали фотометрическим методом Борна. В качестве препаратов сравнения использовали папаверин, тримекаин, тиклид, лидокаин, аспирин, дипиридамол.
Оценку противовоспалительной активности проводили на беспородных крысах обоего пола, массой 180 - 200 г на модели каррагенинового отека задней конечности. Степень депрессии отека оценивали в сравнении с индометацином (10 мг/кг).
Противосудорожную активность оценивали на мышах обоего пола, на модели коразоловых судорог.
Антимикробную активность в отношении Escherichia coli и Staphylococcus aureus исследовали методом двухкратных серийных разведений на мясопептонном бульоне.
Оценку антиоксидантной активности проводили in vitro на модели автоокисления ланолина, в условиях ускоренного старения при 70° С.
Острую токсичность препаратов определяли на нелинейных белых мышах массой 17 - 25 г при внутрижелудочном введении.
Для обнаружения, разделения, идентификации и выделения БАВ в исследуемых объектах использовали различные качественные реакции, спектральные, хроматографические и другие общепринятые методы анализа. Количественное определение флавоноидов и иридоидов проводили по разработанным нами методикам.
Анализ макро- и микроэлементного состава проводили с помощью эмиссионного спектрального анализа на дифракционном спектрографе ДФС-13-1, в аккредитованном аналитическом испытательном центре ОАО «Уральская центральная лаборатория» г. Екатеринбург.
Состав жирных кислот устанавливали после метанолиза жиров на газовом хроматографе (ГХ) Hewlett - Packard 5890/11 (США) с квадрупольным масс-спектрометром (MS) (HP MSD 5971), с ионизацией электронным ударом (70 эВ).
Морфолого-аиатомические исследования проводили на свежем и фиксированном материале, на гербарных образцах, хранящихся на кафедре ботаники ПГФА, а так же использовали гербарные фонды Пермского государственного университета (Perm).
Описание и анализ растительных фитоценозов проводили по общепринятым методикам. Определение запасов травы очанки проводили на конкретных зарослях в ходе экспедиционного обследования дикорастущих лекарственных растений Пермской области в период 1999-2003 гг.
Биологическая активность растений семейства норичниковые и скрининг некоторых растений научной и народной медицины на противолейкемическую и антитромбнновую активность
Проведена сравнительна оценка биологической активности извлечений из автотрофных и паразитирующих растений семейства норичниковые, полученных с использованием растворителей различной полярности.
Потенциал противолейкемической и антнтромбиновой активности паразитирующих видов оценен в сравнении с лекарственными растениями научной медицины (45 видов). Испытаниям были подвергнуты метиленхлоридные и метанольные извлечения, полученные по способу 4. Установлено, что метиленхлоридные фракции из фармакопейных видов сырья хвоща полевого, элеутерококка колючего, дуба черешчатого, горца птичьего, кровохлебки лекарственной, душицы обыкновенной, пижмы обыкновенной, череды трехраздельной обладают высокой антитромбиновой и противолейкемической активностью и перспективны для углубленных исследований. Высокую антитромбиновую активность показали метиленхлоридные фракции фиалки трехцветной, пастушьей сумки, черники обыкновенной, солодки голой, ромашки ромашковидной и метанольные фракции зверобоя продырявленного, багульника болотного, толокнянки обыкновенной, липы сердцевидной. Метиленхлоридные и метанольные извлечения из 31 растения обладают высокой противолейкемической активностью. Химический состав растений, проявивших высокую антитромбиновую и противолейкемическую активность, представлен преимущественно фенольными соединениями и терпеноидами.
120
*
100 80 60 £ 40
| 20 >
0
■иды растений
Рис. 1. Уровень противолейкемической активности метиленхлоридных фракций трав различных видов. 1 марьянник луговой; 2. тысячелистник обыкновенный; 3. чистотел обыкновенный; 4. тимьян ползучий; 5. очанка коротковолосистая; 6. зверобой продырявленный; 7. горец птичий, 8. хвощ полевой; 9. душица обыкновенная; 10. череда трехраздельная; 11. полынь обыкновенная.
Среди паразитирующих видов норичниковых наиболее высокую противолейкемическую активность показала метиленхлоридная (липофильная) фракция очанки коротковолосистой 97.6% и марьянника лугового 65%, а у зубчатки обыкновенной активность не обнаружена (рис. 1).
Метиленхлоридная фракция травы очанки короткбволосистой, наряду с другими видами сырья, обладает высокой противолейкемической активностью в отношении штамма АТСС L1210 культуры клеток лейкемии мышей, что открывает перспективы для более глубокого изучения.
Биотестирование паразитирующих растений на антитромбиновую активность показало, что исследованные виды в условиях данного эксперимента не активны, однако это не исключает их влияния на другие факторы гемостаза.
Сухие экстракты паразитирующих растений проявляют гипотензивную активность в дозе 25 мг/кг, за исключением марьянника лугового, который вызывает достоверное снижение АД в дозе 100 мг/кг (табл. 1). Гипотензивное действие спиртовых и водных экстрактов имеет одинаковую динамику, однако, активность последних у зубчатки обыкновенной и погремка весеннего ниже на 20 - 30%. Гипотензивный эффект спиртовых и водных экстрактов трех видов рода Euphrasia L. по силе действия примерно одинаков. На пике фармакологического эффекта сила гипотензивного действия спиртовых экстрактов убывает в ряду з. обыкновенная - 60 > о. мелкоцветная - 29 > п. весенний - 23.5 > о. Рейтера - 23 > о. коротковолосистая - 21%. Продолжительность гипотензивного эффекта спиртовых экстрактов выше, чем водных. Факультативные паразиты (з. обыкновенная и виды рода Очанка) обладают большей продолжительностью действия, по сравнению с облигатными (м. луговой и п. весенний).
Отдельные фракции БАВ марьянника лугового, полученные хроматографическим разделением извлечения на полиамидном сорбенте, более активны по сравнению с сухим экстрактом (табл. 2).
Таблица 2
Гипотензивная активность суммарных комплексов БАВ Melampyrum pratense
и Время после начала введения экстракта
Комплекс БАВ i 2 мин 5 мин 10 мин
4 сниж АД, мм рт. ст. степень сниж. АД, % сниж. АД ммрт. ст степень сниж. АД, % сниж. АД мм рт. ст степень сниж. АД, %
Иридоиды 37.3 ± 2.6 23.3 р<0.01 14.0 ±0.7 8.7 рХШ 9.7 ±0.5 6 1 р>0.05
Флавоноиды 50 44.0 ± 1.3 26.0 р<0.001 18.6 ±0.7 11.0 р<0.05 13.3 ±0.5 7.8 р<0.05
Полисахариды 0 0 0 0 0 0
Гипотензивная активность экстрактов автотрофных растений отличается по силе и продолжительности действия и в отличие от паразитирующих видов, не является одновекторной (табл. 3). Отмечается различная сила
Гипотензивная активность сухих экстрактов паразитирующих растений сем. Scrophulariaceae
Вид (доза, мг/кг) ё Врем* после начала введения экстракта
2 мин 5 мин 10 мин 20 мин 30 мин 40 мин
I II I II I II I П I II I П
Euphrasia brtvipila (25) A 32.7*6.5 20.2 1X0.01 9.3*4.6 5.8 р<0 05
В 33.3*6.3 20.0 р<0.02 13.0*1.4 8.0 р<0.001 7.7*2 8 4.7 р<0.05 5.3*2.2 32 р>0.05
Euphrasia parriflora (15) A 30.7*4.1 19.0 р<0.01 13.7*2.4 8.5 р<0.01 9.0*4.7 5.6 р<0.05
В 49.0*4.7 29.0 р<0.001 26.0*4.1 16 0 р<0.01 16.0*1.7 9,8 р<0.00| 4.7*2.5 2.9 р>0.05
Euphrasia x rtuteri (25) A 38.7*4.8 24.2 ГКО.001 21.0*4.3 13.1 р<0.01 14.3*4.9 8.9 р<0.05 7.3*3.8 4.6 р>0.05
В 37.0*8.1 23.0 JX0.01 31.0*7.4 19.2 р<0.01 24.7*6.4 15.3 р<0.02 16.7*5.1 10.3 р<0.05 11.0*3.8 6.8 р<0.05 6.7*3.2 4.1 р>0.05
Melampyrum pretense (25) A 44.4*7.3 27.7 р<0.02 25.0*5.1 15.6 р<0.05 17.1*4.8 10.4 р>0.05
В 46.3*6.0 28.2 |Х0.001 25.3*5.8 15.4 р<0.01 14.0*3.3 8.5 р>0.05 6.8*2.3 р>0.05
Odontites vulgaris (25) A 60.0*6.3 46.8 р<0.001 33.3*8.7 26.0 р<0.02 14 7*7.1 11.5 р>0.05
В 72.0±5J2 60.0 (Х0.001 59.3*6.8 49 4 р<0.001 56.0*10.1 47.0 р<0.001 36.3*5.9 30.3 р<0.01 26.7*4.3 22.3 р<0.01 17.3*4 5 14.4 р<0.02
Rhinantkus vtrnaiis (25) A 21.0*1.9 18.3 1X0.01 7.0*3.6 6.1 р>0.05
В 27.7*6.6 23.5 р<0.01 18.3*5.7 15 5 р<0.05 11.0*5.6 9.3 р>0.05
Папаверин (3) 38.8*3.8 34.4 И .2*4.0 9.9 р>0.05
Примечание: * экстрагент: А - вода, В - спирт; I - снижение АД, мм рт. ст.; II - степень снижения АД, % в сравнении с исходным; ** через 50 мин снижение АД на 8.3 ± 3.1 мм. рт ст.; степень снижения АД 6.9% (р<0.05).
Гипотензивная активность сухих экстрактов автотрофных растений сем. 5кгор!т1агшсеае
* Время после начала введения экстракта
Вид, (доза 25 мг/кг) X 2 мин 5 мин 10 мин 20 мин 30 мин
m I II I П > II I П I а
Verbascum thapsus A 10.0±1.0 8.7 рХ>.05
В 63.7±8.1 54.0 р<0.001 25.7±5.9 22.0 р<0.01 14.7±1.6 12.5 р<0.001 5.7±2.1 4.8 р<0.05 1.3±0.8 í.i р>0.05
Verbascum nigrum A 32.0±1.6 26 3 р<0.001 20.3±3.6 16.7 р<0.01 9.0±3.9 7.4 р>0.05
В 26.7±9.5 21.5 р<0.05 19.7±8.9 15.9 р>0.05
Digitalis grandiflora A 40.7±1.9 38.4 р<0.001 30.3Й.8 28.6 р<0.001 21.3±3 8 20.1 р<0.01 9.7±2.2 9.2 pO.Ol
В 11.7±1.7 9.8 р<0.001 +10.0±2.6 +8.3 р<0.01 +30.0*2.6 +25.0 р<0.001
Linaria vulgaris A 23.3±5.6 21.2 р<0.001 11.7±4.0 10.6 1X0.05 3.3±1.2 3.0 р>0.05
В 50.0±6.3 42.6 р<0.001 26.7±6.6 22.8 р<0.01 19.0±7 1 16.2 р<0.05
Verónica chamaedrys A 31.3±5.8 25.4 р<0.01 9.3±3.2 7.5 р<0.05 5.7±2.S 4.6 р>0.05
В 21.7±1.7 17.6 р<0.001 5.3±2.2 4.3 р>0.05
Примечание: * экстрагент: А - вода, В - спирт; I - снижение АД, мм рт. ст.; II - степень снижения АД, % в сравнении с исходным.
гипотензивной активности на пике эффекта (2 мин) у спиртовых и водных экстрактов. Спиртовый экстракт наперстянки крупноцветковой, начиная с 5 мин после введения, оказывает гипертензивное действие, что, вероятно, объясняется содержанием, отличного от водного экстракта, комплекса БАВ. Продолжительность гипотензивного действия у большинства экстрактов ниже, чем у паразитирующих видов, за исключением спиртового экстракта коровяка обыкновенного. Наиболее продолжительное действие отмечается у спиртового экстракта коровяка обыкновенного (30 мин) и водного экстракта наперстянки крупноцветковой (20 мин).
Динамика гипотензивного действия свидетельствует об однотипности метаболизма действующих начал экстрактов растений семейства норичниковые, однако снижение гипотензивного эффекта у паразитирующих видов более плавное и медленное, а у автотрофных резкое и быстрое.
Прямое антикоагулянтное действие этанольных извлечений, полученных по способу 4, показано в таблице 4. Экстракты марьянника лугового и погремка весеннего практически не оказывают влияния на гемостаз, хотя и имеют тенденцию к антикоагулянтному действию.
Таблица 4
Антикоагулянтная активность этанольных извлечений из растений сем. БсгорШапасеае
Время Время Изменение*
Вид свертывания, сек; свертывания, сек; свертываемости, Р
контроль опыт %
Euphrasia brevipila 26.6 ±2.1 32.6 ± 1.4 -22.5 <0.05
Melampyrum pratense 26.7 ±1.4 27.8 ±37 -4.1 >0.05
Odontites vulgaris 33.8 ± 2.4 27.2 ± 2.2 +19.5 >0.05
Rhirumthus vernalis 23.9 ±0.9 25.8 ± 1.0 -7.9 >0.05
Veronica chamaedrys 32.8 ±1.9 45.3 ± 4.0 -38.1 <0.05
Digitalis grandiflora 23.3 ± 1.7 30.4 ± 2.6 -30.4 <0.05
Verbascum thapsus 25.4 ±2.3 28.7 ±1.9 И2.9 >0.05
Verbascum nigrum 22.5 ± 2.0 23.1 ±2.1 -2.6 >0.05
Linaria vulgaris 22.3 ± 1.6 22.9 ± 0.7 -2.6 >0.05
Гепарин 29.9 ±05 36.6 ± 1.8 -22.4 <0 01
Примечание: * «-» удлиняет; «+» ускоряет процесс свертывания крови.
Этанольный экстракт очанки коротковолосистой обладает высокой антикоагулянтной активностью (- 22.5%), его эффект сравним с действием гепарина. Зубчатка обыкновенная, в отличие от других паразитирующих видов, повышает свертываемость крови почти на 20%, однако это влияние статистически не достоверно. Экстракты всех автотрофных видов обладают антикоагулянтным действием. Наивысшую активность, показали экстракты вероники дубравной 38.1% и наперстянки крупноцветковой 30.4%.
Этанольные извлечения (способ 4) Е. brevipila, М pratense, О vulgaris, Rh. vernalis, D. grandiflora, V. chamaedrys, L. vulgaris, V. thapsus, V. nigrum, не оказывают влияния на процесс агрегации тромбоцитов. Результаты испытания
на антиагрегационную активность экстракционных препаратов и отдельных фракций БАВ марьянника лугового приведены в таблице 5.
Таблица 5
Антиагрегационная активность экстракционных препаратов и фракций БАВ
Melampyrum pratense
№ Препарат Агрегация % Р
контроль опыт торможение
1 Сухой водный экстракт 93.7+3.01 95.0+3.16 0 —
2 Сухой стартовый экстракт 93.7+3.01 92.9+2.99 0.8 >0.05
3 Комплекс флавоноидов 93.7+3.01 60.4+1.98 33.3 <0.001
4 Комплекс полисахаридов 93.7+3.01 81.7±2.01 12.0 <0.01
5 Комплекс иридоидов 93.7+3.01 92.5+3.98 1.2 >0.05
6 Папаверин 97.5+1.58 25.8+1.39 71.7 <0.001
7 Гиклид 97.5±1.58 52.9+1.50 44.6 <0.001
8 Аспирин 97.5±1.58 72.9+2.39 24.6 <0.001
9 Дипиридамол 97.5+1.58 94.2+1.67 3.3 >0.05
10 Тримекаин 97.5+1.58 50.4+2.28 47.1 <0.001
11 Лидокаин 97.5+1.58 71.7+1.24 25.8 <0.001
Как следует из полученных данных сухие экстракты Melampyrum pratense не обладают антиагрегантным действием. Комплексы полисахаридов и иридоидов оказывают слабую антиагрегационную активность, причем влияние последнего статистически не достоверно. Наиболее высокую активность оказывает комплекс флавоноидов, процент агрегации тромбоцитов снижается на 33.3%. Антиагрегационная активность комплекса флавоноидов сопоставима с действием таких лекарственных средств, как аспирин и лидокаин.
Установлена низкая антимикробная активность этанольных извлечений (способ 4) из паразитирующих и автотрофных растений. Активность в разведении 1:20 в отношении Е. coli показали извлечения з. обыкновенной, н. крупноцветковой, л. обыкновенной, а в разведении 1:10 о. коротковолосистой, п. весеннего, к. черного. Действие на St. aureus в разведении 1:10 показали экстракты з. обыкновенной, п. весеннего и н. крупноцветковой. Экстракты м. лугового, к. обыкновенного, в. дубравной не обладают антимикробным действием в отношении испытанных культур микроорганизмов.
Сравнительное изучение антимикробной активности экстракционных препаратов из трех видов Euphrasia L. и суммарное содержание БАВ представлено в таблице 6. Антимикробным действием обладают препараты, при получении которых не используется нагревание. Сухие экстракты, несмотря на повышенное содержание БАВ, активности не проявляют. Уровень антимикробного действия у трех видов Euphrasia L. примерно одинаков. Наиболее высокая активность отмечена у жидкого экстракта Е. brevipila (1:64).
Водные извлечения (настой 1:5) из Е. brevipila, Е. х reuteri и Е. parviflora обладают низкой противовоспалительной активностью и вызывают торможение отека на 17 - 25% (при р <0.25).
Таблица 6
Антимикробная активность извлечений из цельных растений трех видов Euphrasia L.
Извлечение (сырье: экстрагеит), вид растения Escherichia coli Staphylococcus aureus Суммарное содержание различных групп БАВ в извлечениях,%
Контроль Опыт Контроль Опыт Флавоноидов Иридоидов Полифенолов
Водное (1:5) Е. ЬгЫрИа + + + + 0.19 0.04 0.42
Е. геШеп + + + + 0.23 0.07 0.46
Я рагу'фога + + + + 0.15 0.03 0.32
Спиртовое (этанол) £ ЬгЫрИа: (1:5) 40%-ный спирт 1:2* 1:16 1 2 1 16 0.35 0.15 0.73
70%-ный спирт 1:4 1:16 1 4 1 64 0.66 0.09 0.96
90%-ный спирт 1:8 1:16 1 8 1 16 0.46 0.07 0.40
К х геШеп, 70%-ный спирт (1:5) 1:4 1:8 1 4 1 16 0.60 0.12 0.94
Е. рап/фога, 70%-ный спирт (1:5) 1:4 1:16 1 4 1 32 0.58 0.08 0.73
Жидкий спиртовый экстракт (1:2) Е. Ьгеу1рИа, 70%-ный спирт 1:4 1:64 1:4 1:64 2.45 0.57 5.4
Сухой спиртовый экстракт Е. Ьгех^рНа + + + + 15.4 4.2 18
Е. х геШеп + + + + 12.9 3.4 15
Е. раг\1(1ога + + + + 12.8 3.2 21
Примечание: *- здесь и далее, максимальное разведение, при котором наблюдается отсутствие роста микроорганизмов; + - означает рост микроорганизмов, (отсутствие активности).
Противовоспалительный эффект экстрактов Е. brevipila (табл. 7) на пике воспаления составил: сухого 44 - 66, жидкого 29 - 62%, в зависимости от дозы. Торможение отека воспаления через 5 часов в дозе 50 мг/кг остается на одном уровне, а в дозе 150 - 300 мг/кг уменьшается на 10 - 15%.
Таблица 7
Противовоспалительная активность экстракционных препаратов Euphrasia brevipila
£ и И 8 Й Прирост объема стопы, % Торможение отека, %
о. Е % i I Л * через 1 час через 3 часа через 5 часов через 3 часа через 5 часов
10 6 27.0 ±3.7 43.8 ±7.3 66.5 ±7.9 43.6* 21.9
Сухой 50 6 27.5 ±4.13 37.7 ±4.2 42.8 ±6.5 51.5« 50.3**
экстракт 150 6 7.2 ± 3.7 28.6 ± 3.9 43.2 ± 3.3 63.2»*» 49.2**
300 6 16.0 ±5.8 26.5 ± 7.0 40.3 ± 12.2 65.9*** 52.6*
Жидкий экстракт 50 6 21.8 ±3.3 55.3 ± 10.4 61.5 ±8.4 28.8 27.7
150 6 17.3 ±2.3 38.0 ±4.6 50.5 ±3.1 51.1*** 40.7*
300 6 14.3±4.1 29.8 ±4.6 42.5 ±5.6 61.6*** 50.1**
Индометацин 10 6 15.2 ±3.6 54.5 ±4.8 40.9 ±5.0 29.9* 51.9**
Контроль (Н2О) 7 26.4 ±6.8 77.7 ± 11.4 85.1 ± 13.5 - -
Примечание: *** = р < 0.01; ** = р < 0.02; * = р < 0.05.
Учитывая использование марьянника лугового в народной медицине для лечения судорожных состояний, его экстракционные препараты были испытаны на противосудорожную активность (табл. 8).
Таблица 8
Противосудорожная активность экстракционных препаратов Melampyrum pratense
Препарат Доза Кол-во животных, шт Латентный период судорог, сек Продолжительность жизни, сек Выживаемость, %
Сухой водный экстракт 100 мг/кг 6 81.7 ± 17.2 р>0.5 237.5 ± 2.8 р<0.01 50
200 мг/кг 6 73.3 ± 12.6 р>0.5 — 100
Сухой спиртовый экстракт 100 мг/кг 6 82.4 ± 6.3 р>0.5 107±8.4р>0.5 0
200 мг/кг 6 86.7 ±12.9 р>0.5 110.5 ±23.0 р>0.5 0
Жидкий экстракт 1:1, на 50% этаноле 1 мл/кг 6 106.0 ± 15.2 р>0.01 236.2 ±1.4 pO.OOl 0
Коразол 100 мг/кг 6 80 ± 8.9 102 ± 8.3 0
Жидкий экстракт оказывает умеренное противосудорожное действие в дозе 1 мл/кг, латентный период судорог удлиняется примерно на 20%, а продолжительность жизни животных увеличивается более чем в два раза.
Сухой водный экстракт не оказывает влияния на латентный период судорог, но в дозе 100 мг/кг достоверно увеличивает продолжительность жизни более чем в два раза, при этом выживаемость животных составляет 50%, а в дозе 200 мг/кг выживаемость составила 100%.
Аятиоксидаитные свойства экстрактов и фракций БАВ очанки коротковолосистой представлены в табл. 9. Относительная антиоксидантная активность сухого водного экстракта составляет 0.28, а спиртового 0.30, они увеличивают устойчивость ланолина к окислению, соответственно в 2.5 и 2.6 раза. Из комплексов БАВ наибольшую активность показала фракция фенолокислот (Е™ = 0.57), которая увеличивает устойчивость ланолина к окислению в 4.1 раза.
Экстракционные препараты очанки коротковолосистой и марьянника лугового мало токсичны, ЛДм сухих экстрактов составляет 2930 - 4470 мг/кг, жидких 13.5 - 30.8 мл/кг.
Анализ результатов биологических испытаний подтверждает целесообразность использования растений семейства норичниковые в научной и народной медицине и позволяет отобрать наиболее перспективные (виды рода Очанка и марьянник луговой) для углубленных исследований.
Химический состав, распределение и количественное содержание БАВ и
макро- и микроэлементов в растениях семейства норичниковые
Общий уровень минеральных веществ в растениях оценивали по содержанию золы (табл. 10). В корнях обеих групп растений содержание золы имеет близкое значение и находится у паразитирующих видов в пределах 2.9 -7.1 (среднее 4.8%), а у автотрофных 3.0 - 6.1 (среднее 4.5%). У паразитирующих и автотрофных растений наблюдаются наибольшие отличия в зольности листьев, а средний уровень составляет 15.5 и 10.5%, соответственно. Стебли как паразитирующих, так и автотрофных видов характеризуются большим разбросом показателей зольности, хотя их общий уровень примерно одинаков и составляет 7.2 и 6.1%, соответственно. Средний уровень зольности цветков паразитирующих и автотрофных растений составляет 8.9 и 7.0%, а семян 6.1 и 4.8%, соответственно. Анализ содержания золы в растениях семейства норичниковые показал, что зольность органов, вероятнее всего, определяется не физиологической разнородностью растений, а биологическими закономерностями сформированными на генетическом уровне и отражает специфику видов и общий уровень минеральных веществ в них. Во всех органах паразитирующих растений наблюдается общая тенденция к повышенному содержанию неорганических веществ, по сравнению с автотрофными видами.
В почве и органах растений обнаружено 22 химических элемента, большинство из которых относится к микроэлементам. Содержание
Относительная антиоксидантная активность (Еотн ) и содержание действующих веществ в экстракционных препаратах и фракциях БАВ Euphrasia brevipila
Препарат; фракция Флавоноиды, % Иридоиды,% Окисляемые вещества, % т, час* Ещн.**
Бутилокситолуол — — — 159.2 1
Фракция фенолокислот ... - 51.6 100.9 0.57
Фракция иридоидов — 12.0 — 89.6 0.48
Фракция флавоноидов 22.1 — 80.0 0.41
Фракция полисахаридов — — — 14.8 -0.07
Сухой спиртовый экстракт 15.0 2.3 42.6 64.4 0.30
Сухой водный экстракт 12.8 2.2 39.38 61.8 0.28
Ланолин — — ... 24.4 —
Примечание: * т - время индукции 40 ммоль/кг активного кислорода; ** E^ - относительная антиоксидантная активность за время т.
Таблица 10
Содержание золы в растениях сем. Scrophulariaceae, %
Вид корни листья стебли цветки плоды семена
Euphrasia brevipila 2.9 ±0.1 10.6 ±0.5 3.8 ±0.1 7.9 ±0.3 6.9 ±0.3 6.6 ±0.1
Melampyrum pratense 7.1 ±0.3 15.8 ±0.4 11.8 ±0.2 - - 4.0 ±0.3
Odontites vulgaris 3.9 ± 0.2 22.9 ±0.5 7.2 ±0.3 10.7 ±0.3 - 7.8 ± 0.2
Rhinanthus vernalis 5.5 ± 0.3 12.5 ±0.9 5.9 ±0.2 8.1 ±0.2 - 6.0 ±0.1
среднее 4.8 15.4 7J 8.9 6.9 6.1
Verbascum nigrum 5.0 ±0.2 12.8 ±0.5 4.9 ±0.2 6.5 ±0.1 6.1 ±0.2 7.3 ±0.3
Digitalis grandiflora 3.7 ± 0.2 9.6 ±0.3 7.2 ±0.3 8.8 ±0.1 - 3.2 ±0.04
Linaria vulgaris 6.1 ±0.3 10.0 ±0.4 9.3 ± 0.4 8.2 ± 0.3 - 4.9 ±0.3
Veronica chamaedrys 3.0 ± 0.2 9.6 ±0.4 3.0 ±0.1 4.4 ± 0.2 4.5 ±0.2 3.8 ± 0.3
среднее 4.5 10.5 6.1 7.0 5J 4Л
Примечание: «-» зольность не определялась.
доминирующих элементов в корнях показано в табл. 11, в листьях и стеблях в табл. 12, в цветках и семенах в табл. 13.
Таблица 11
Содержание доминирующих химических элементов в корнях растений сем. БсгорИи1апасеае (мг/кг сухого сырья)
Вид Химические элементы
Мп Sr Ва Ti Ni Cu Zn
Паразитирующие виды 116 29.0 26.0 9.0 8.7 6.0 3.0
1 Euphrasia brevipila
2 Odontites vulgaris ПА 38.7 19.4 58.0 0.4 11.6 5.8
3 Melampyrum pratense 706 35.3 127 7.1 12.7 8.8 21.2
4 Rhinanthus vernalis 165 33.1 55.1 165 1.7 27.6 5.5
среднее 266.1 34.0 56.9 59.8 5.9 13.5 8.9
Автотрофные виды 90.4 25.1 30.1 151 3.5 15.1 5.0
5 Verbascum nigrum
6 Digitalis grandiflora 254 10.9 25.4 182 32.7 18.2 25.4
7 Linaria vulgaris 60.5 21.2 27.2 45.4 4.5 9.1 3.0
8 Veronica chamaedrys 243 24.3 54.7 243 6.1 18.2 24.3
среднее 162.0 20.4 34.4 155.4 11.7 15.2 14.4
Среднее содержание Мп, Бг, Ва выше в корнях паразитирующих видов, а Т1, N1, Си и Хп в корнях автотрофных. В листьях и стеблях паразитирующих растений концентрация Мл, Бг, Ва, Си и Ъл выше, а Т1 ниже, по сравнению с автотрофными. Цветки и семена паразитирующих видов характеризуются повышенным содержанием Мп, Бг, Ва, Си и Хп, а автотрофных "П и N1 (только цветки). Характер распределения доминирующих элементов в надземных вегетативных и генеративных органах однотипен и показывает повышенную концентрацию у паразитирующих видов марганца, стронция, бария, никеля, меди и цинка, что согласуется с уровнем зольности отдельных органов.
Анализ коэффициентов биологического поглощения показал, что большинство изученных элементов характеризуется средним уровнем поглощения. Элементы интенсивного поглощения немногочисленны. Надземными и подземными органами, всех видов, интенсивно поглощается только фосфор. Вегетативными органами паразитирующих видов интенсивно поглощается марганец, молибден, медь, а генеративными цинк. Среди автотрофных видов элементы интенсивного поглощения единичны, в корнях большинства из них аккумулируется медь. У автотрофных и паразитирующих растений большинство химических элементов имеют акропетальный характер распределения. Базипетальное распределение специфично для отдельных органов и представлено, в среднем, 3-6 элементами. Общим элементом базипетального распределения для листьев и семян паразитирующих видов является цинк, а для автотрофных видов таких элементов не выявлено.
Состав и концентрация макро- и микроэлементов в растениях-хозяевах о. коротковолосистой и м. лугового имеют близкие значения с их содержанием в паразитирующих видах.
Содержание доминирующих химических элементов в листьях и стеблях растений сем. Бсгорки1аг1асеае (мг/кг сухого сырья)
Химические элементы
Вид Mn Sr Ва Ti Ni Си 1л
листья стебли листья стебли листья стебли листья стебли листья стебли листья стебли листья стебли
1 Euphrasia brevipila 739 266 106 38.0 42.0 152 16.0 19.0 5.3 5.7 10.6 3.8 15.8 3.8
2 Odontites vulgaris 223 143 66.9 43 112 71.7 66.9 12.9 1.1 0.5 22.3 7.2 44.6 14.3
Melampyrum pratense 1583 1177 63.3 118 111 0.2 15.8 11.8 23.8 17.7 31.7 - 317 23.5
| Rhinanthus vernalis 250 89.1 87.6 59.4 125 119 12.5 5.9 3.8 1.8 25.0 11.9 62.6 4.2
I средниее 699 419 81 64.6 97.5 85.7 27.8 12.4 8.5 6.4 22.4 7.6 110 11.5
Verbascum nigrum 384 74 64.0 29.4 64.0 29.4 256 14.7 5.1 2.5 12.8 7.4 12.8 3.4
1 Digitalis grandiflora 173 130 48.2 36.1 67.4 65.0 96.3 28.9 8.7 6.5 8.7 10.8 6.7 5.1
$ Linaria vulgaris 482 95.2 97.8 19.0 86.8 47.6 145 6.3 1.9 4.8 8.7 6.3 19.3 3.2
1 Veronica chamaedrys 500 167 60.0 55.5 90.0 185 70.0 27.8 10.0 9.3 18.0 9.3 40.0 9.3
< среднее 385 117 67.5 35 77.1 81.8 142 19.4 6.4 5.8 12.1 8J 19.7 53
Таблица 13
Содержание доминирующих химических элементов в цветках и семенах растений сем. Бсгорки1агшсеае (мг/кг сухого сырья)
Химические элементы
Вид Mn Sr Ва Ti Ni Си Zn
цветки семена цветки семена цветки семена цветки семена цветки семена цветки семена цветки семена
£ Euphrasia brevipila 320 197 56.0 197 40.0 46.0 8.0 197 5.6 11.8 8.0 26.3 14.4 59.1
Odontites vulgaris 193 140 21.4 77.7 42.8 23.3 74.9 15.5 4.3 4.7 21.4 38.9 16.1 54.4
| Melampyrum pratense - 80.6 — 12.1 - 16.1 - 4.0 - 7.3 - 7.3 - 64.5
Rhinanthus vernalis 145 90.6 40.3 24.2 72.5 36.2 14.5 9.1 3.2 3.0 14.5 18.1 12.1 24.2
! среднее 219 127 39.2 33.4 51.8 30.4 32.5 56.4 4.4 6.7 14.6 22.7 14.2 50.6
Verbascum nigrum 117 91/5 9.8 24.4 26.0 30.5 45.5 30.5 5.9 4.3 13.0 11.0 9.8 6.1
3 X Digitalis grandiflora 159 47/7 13.2 6.4 26.5 9.5 132 15.9 26.5 9.5 17.7 12.7 17.7 22.3
Linaria vulgaris 80.8 56.9 6.7 15.2 13.5 15.2 8 1 56.9 3.1 1.9 4.5 19.0 4.5 56.9
Veronica chamaedrys 147 145 8.2 14.5 32.7 33.9 123 145 5.7 4.4 16.4 19.4 16.4 48.4
« < среднее 126 85.3 9.5 15.1 24.7 22J 77.2 62.1 ЮЛ 5.0 12.9 15.5 12.1 33.4
Состав и количественное содержание жиров
Количественное содержание жиров в семенах автотрофных и паразитирующих видов отличается незначительно и колеблется от 25 до 34%. 6 маслах паразитирующих видов обнаружено 8 (табл. 14), а автотрофных 10 (табл. 15) жирных кислот. Доминирующими являются непредельные кислоты. Их общее содержание в семенах колеблется от 78 до 96%. Жирные масла семян с глубоким типом покоя Е. brevipila, О. vulgaris, Rh. vernalis характеризуются высокой степенью ненасышенности. Доминирующим компонентом является линоленовая кислота 63 - 77%. Масла семян с неглубоким и промежуточным покоем V. nigrum, D. grandiflora и V. chamaedrys имеют более низкую степень ненасышенности. Доминирующим компонентом является линолевая кислота 62 - 76%. Жирное масло М. pratense по степени ненасыщенности и типу покоя семян сходно с автотрофными видами. Жирнокислотный состав липофильной фракции травы очанки коротковолосистой представлен, в основном непредельными кислотами, доминирует линоленовая кислота 38.6%, что подтверждает общую направленность биогенеза этих веществ.
Перспективность объектов исследования определяется не только ценными фармакологическими свойствами и длительным применением в народной медицине, но и широтой распространения, возможностью и доступностью заготовки сырья. Всеми этими качествами обладают растения рода Очанка и марьянник луговой, которые были выбраны для дальнейшего, более детального химического, анатомо-морфологического, технологического, фитоценотического исследования.
Биологически активные вещества растений рода Очанка
На основании результатов качественного и количественного анализа установлено, что химический состав исследованных видов Очанки имеет близкое и сопоставимое значение, что наряду с данными фармакологических исследований показывает возможность взаимозаменяемости видов и тем самым расширяет сырьевую базу. Преобладающими группами БАВ являются флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты и иридоиды.
Методом двумерной бумажной хроматографии обнаружено 13 флавоноидных веществ и 14 фенолкарбоновых кислот. Иридоидный комплекс исследован нисходящей бумажной хроматографией и представлен 7 веществами. Проведено препаративное ' разделение БАВ очанки коротковолосистой на полиамидном сорбенте. Элюирующая смесь вода и спирт этиловый 80% (схема). В результате хроматографического разделения выделено четыре фракции биологически активных веществ.
Фракция полисахаридов, представляет собой белый аморфный порошок, сладковатого вкуса, дает качественные реакции на полисахариды; влажность 1.8%; выход 0.1%.
Состав и содержание жирных кислот (% от суммы) в маслах семян паразитирующих видов сем. ЗсгорШапасеае
Кислота Индекс Еиркгсвш Ьге\1рИа Ме1атругит ргсйете СМомиез \nlKaris ЮйпаМкш мегпаНз
14:0 следы* 0.75 ±0.02 следы* следы
Пальмитолеиновая 16:1 0.8 ±0.1 2.80 ±0.06 0.62 ± 0.01 1.5610.05
Пальмитиновая 16:0 3.9 ± 0.3 13.0 ± 0.4 6.11 ±0.03 3.410.2
Линолевая 18:2 11.510.3 27.2 ± 0.2 17.8910.02 15.110.5
Лвноленовая 18:3 77.2 ±2.1 26.6 ± 0.4 62.9 Ю.5 72.511.3
Олеиновая 18:1 0.85 ±0.10 21.4 ±1.2 7.49 ± 0.05 6.61 ±0.01
Стеариновая 18:0 1.4 ±0.1 0.83 ±0.01 3.6510.03 0.8310.02
Эйкозановая 20:0 _** 0.5710.01 - -
Сумма непредельных кислот 90.4 78.0 88.9 95.8
Сумма предельных кислот 5.3 15.2 9.8 4.2
Примечание: * - кислота не обнаружена; ** - содержание менее 0.1%.
Таблица 15
Состав и содержание жирных кислот (% от суммы) в маслах семян автотрофных видов сем. 8сгорки1апасеае
Кислота Индекс К тцгшп Х>. цгапеИАога V. скатаесЬуь Ь \nilgaris
Миристиновая 14:0 следы** - следы
Пальмитолеиновая 16:1 0.1910.01 0.2710.01 следы -
Пальмитиновая 16:0 5.1210.05 5,710.2 2.95 10.05 9.510.3
Линолевая 18:2 76.3 16.2 76.011.3 75.7 ± 0.6 61.810.4
Линоленовая 18:3 1.710.2 2.4710.05 3.510.1 5.910.1
Олеиновая 18:1 11.7 ± 0.4 11.810.7 16.010.1 17.410.6
Стеариновая 18:0 3.310.1 2.910.1 1.0210.01 4.6910.03
Эйкозеновая 20:1 0.4710.04
Эйкозановая 20:0 0.78 10.08 0.5610.04 - 0.6810.01
Бегеновая 22:0 0.2910.01 - 0.6810.01
Сумма непредельных кислот 90.3 90.8 95.2 85.1
Сумма предельных кислот 9.2 9.1 4.0 14 9
Примечание: * - кислота не обнаружена; ** - содержание менее 0.1%.
Схема выделения фракций биологически активных веществ из травы очанки
коротковолосистой
Измельченная трава -1-
шрот -4- -ф- Экстракция 50% этанол
Концентрирование * -
Очистка от липофильных веществ
хлороформ
£
Разделение на колонке полиамидного сорбента
I. Элюирование водой до отрицательной реакции на иридоиды
II. Элюирование водой до отрицательной реакции на фенолкарбоновые кислоты
III. Элюирование 80% этанолом до отрицательной реакции на флавоноиды
Отгонка воды
э:
Обработка сухого ociarica 70% этанолом при нагревании
Концентрирование 1Г
Отгонка элюата
Осаждение балластных веществ
ацетон
Фракция флавоноидов
Фильтрация ▼
Фильтрация
Охлаждение
Отгонка воды -▼-
Фильтрация *
Отделение аморфного осадка
Фракция фенолкарбоновых кислот
фильтрат
Разбавление водой
Растворение в воде
Осаждение
ацетон
Осаждение балластных веществ
Фильтрация
Фильтрация
Отгонка растворителя
Фракция полисахаридов
±
Фракция иридоидов
Фракция иридоидов имеет вид аморфного, коричневого порошка, без запаха, горького вкуса, дает качественные реакции на иридоиды. Содержание иридоидов 12.0%; влажность 1.1%; выход 0.13%.
Фракция фенолкарбоновых кислот представляет собой светло-коричневый порошок, без запаха, слабо горького вкуса, дает качественные реакции на фенолокислоты. Содержание окисляемых веществ 51.6%; влажность 1.4%; выход 0.12%.
Фракция флавоноидов представляет собой аморфную массу коричневого цвета, без запаха, слабо горького вкуса, дает качественные реакции на флавоноиды. Содержание флавоноидов 22.1%; влажность 2.2%; выход 0.12%.
Полученные фракции БАВ были подвергнуты рехроматографированию с целью получения индивидуальных соединений.
Фракцию фенолкарбоновых кислот подвергали препаративному разделению на бумаге. В результате были выделены три вещества (1 - 3), которые по УФ спектрам, температуре плавления и люминесцентно-хроматографическим характеристикам, в сравнении с аутентичными образцами фирма «Sigma», совпадают с хлорогеновой, кофейной и феруловой кислотами (табл. 16).
Таблица 16
Физико-химические свойства фенольных веществ идентифицированных в Euphrasia brevipila и Melampyrum pratense
1 * Название вещества Молекулярная формула зГ 5 очанка коротковолос истая марьянник луговой
а» в'* а в
1 Кофейная кислота с,н,о4 195-197 234,325 + + + +
2 Хлорогеноаая кислота С.бНцО» 203-205 240,326 + + + +
3 Феруловая кислота С10Н10О4 163-166 234, 298,322 + + + +
4 Апигенин (5,7,4'-триоксифлавон) С15Н10О5 246-248 268,338 + +
5 Лютеолин (5,7,3',4'-тетраоксифлавон) CiSH,o06 328-329 253, 267,352 + + +
6 Диосметин (5,7,3-триокси-4'-метоксифлавон) С,6Н1206 258-260 240, 290,345 + +
7 Космоссиин (Апигенин-7-р-15-глюкопиранозид) СцНгоОю 227-229 265,335 + +
8 Цинароэид (Лютеолин-7-(№-глкжопиранозид) С21Н20О11 264-268 257, 266,353 + + +
9 Гиперозид (Кверцитин-З-о- P-D-галактопиранмид) С21Н20О12 254,359 +
Примечание: *а - выделено; ** в - идентифицировано по УФ спектрам элюатов и с
помощью свидетелей.
Разделение фракции флавоноидов проводили рехроматографированием на колонке полиамидного сорбента (60, 80 и 96% спирт этиловый). Были получены семь веществ, из которых идентифицированы пять - цинарозид, космоссиин, лютеолин, апигенин, диосметин (табл. 16). Температуры плавления, спектральные и хроматографические характеристики этих веществ совпадают с литературными данными и аутентичными образцами.
В спиртовом извлечении травы о. коротковолосистой обнаружено семь, веществ иридоидной природы. По качественным реакциям на хроматограммах эти соединения разделены на две группы. Вещества группы А (1 - 4) проявляются только реактивом Бэкона-Эдельмана, что указывает на их принадлежность к иридоидным соединениям подгруппы каталпола. Вещества группы Б (5 - 7) проявляются как реактивом Бэкона-Эдельмана, так и другими реактивами (табл. 17). В сравнении с аутентичным образцом вещество 5 идентифицировано как аукубин. Изучены УФ - спектры элюатов с хроматограмм, значение максимумов вещества 1 имеет близкое значение с изокаталполом, 2 с каталполом, 3 с метилкаталполом, 5 с аукубином, 7 с одонтозидом. Данные вещества были ранее идентифицированы у видов рода Очанка.
Биологчески активные вещества марьянника лугового
Результаты качественного и хроматографического анализа показали, что преобладающими группами БАВ являются фенольные соединения -23 вещества и иридоиды - 6 веществ. Для идентификации флавоноидных соединений проведено фракционное разделение водно-спиртовых экстрактов с помощью органических растворителей различной полярности, по способу 3 в аппарате Соксклета.
Эфирная фракция представляет собой густую вязкую массу черно-зеленого цвета со специфическим запахом. Выход составляет 1.6% от массы сухого сырья. Препаративной бумажной хроматографией были выделены и идентифицированы хлорогеновая, кофейная и феруловая кислоты (табл. 16).
Этил ацетатная фракция представляет собой густую вязкую массу черно-зеленого цвета с характерным запахом. Выход составляет 2% от массы сухого сырья. По результатам люминесцентно-хроматографической характеристики и в сравнении со свидетелями идентифицированно три вещества - цинарозид, лютеолин и хлорогеновая кислота (табл. 16).
Бутанольная фракция представляет собой темно-коричневый кристаллический порошок с характерным запахом. Выход составляет 3,5% от массы сухого сырья. Бутанольная фракция содержит 8 веществ фенольной природы из которых с помощью аутентичных образцов и УФ спектров элюатов идентифицированы цинарозид, гиперозид, хлорогеновая и кофейная кислоты (табл. 16).
Иридоидный комплекс представлен соединениями группы каталпола (вещества 1 - 4) и аукубина (5 - 6). В сравнении с аутентичным образцом
Характеристика иридоидов рода Euphrasia L. и Melampyrum pratense
Таблица 17
Значение Rf в системе БУВ 4:1:2 Окраска пятен УФ спектры, Xnux, НМ Название вещества (значение Rf* в системе БУВ 4:1:5)
№ вещества Реактив Бэкона-Эдельмана Реактив Шталя Реактив Трим-Хилла экспер имента льные литера турные
Род Euphrasia Melampyrum pratense
видимый УФ-свет видимый УФ-свет видимый УФ-свет
1 0.13 1 0.10 желто-оранжевая оранжевая — — — — ___»»* — Изокаталоол (0.17)
2 0.22 2 0.20 желто-коричневая коричневая — — — — 201 198 Каталпол (OJO)
3 0.26 3 0.37 желтая лимонно-желтая — — -- — 198 199 Метал катжлпол (0-32)
4 0.37 4 0.42 оранжевая ярко-оранжевая — — — — — —
5 0.41 5 0.47 коричневая темно-коричневая сине-голубая темно-синяя серая фиолетовая 212 210 АукуСиш (0.36)
6 0.56 - ... оранжева! оранжевая сине-голубая темно-синяя серая фиолетовая ... —
7 0.78 6 0.80 светло-коричневая темно-коричневая сине-голубая темно-синяя голубая фиолетовая 232, 274, 285 232, 273, 283 Одонтомд (0.70)
Примечание: * Деготь А. В., 1971;** Мнацаканян В .А., 1986; *** спектральные характеристики не стабильны.
вещество 5 определено как аукубин (табл. 17).
В извлечениях из трех видов рода Очанка обнаружено 12, а у марьянника лугового 22 аминокислоты. Девять веществ в сравнении с достоверными образцами определены как орнитин, аргинин, аспарагин, серии, глутаминовая кислота, пролии, р-аланин, валин, изолейцин. Изучено распределение аминокислот по органам растений и видам Очанки.
Влияние экологических, онтогенетических, температурных факторов на характер распределения и количественное содержание БАВ в траве очанки коротковолосистой и марьянника лугового
В результате хроматографических исследований установлено, что компонентный состав флавоноидов, иридоидов и фенолокислот очанки коротковолосистой и марьянника лугового изменчив. У очанки коротковолосистой, произрастающей на территории Оханского района (Пермская обл.), в различных местообитаниях, количество флавоноидных веществ изменяется от 7 до 11, фенолокислот от 5 до 9, иридоидов от 3 до 5. Изменчивость компонентного состава, вероятнее всего, связана с уклоняющимся типом питания и способностью паразитирующих растений образовывать симбионты с различными растениями-хозяевами. Константными компонентами, имеющими аналитическое значение, у исследованных видов Euphrasia L. и М pratense, являются хлорогеновая кислота, цинарозид, аукубин. Значение Rf и люминесцентно-хроматографические характеристики этих веществ можно использовать для идентификации и определения доброкачественности сырья.
Количественное содержание БАВ в трех видах рода Euphrasia L. показывает их близкое значение. В траве содержание флавоноидов находится в пределах 3.1 - 4.7, окисляемых веществ 6.9 - 7.6, иридоидов 0.5 - 0.7%. Содержание фенольных соединений максимально в генеративных органах - в цветках и в плодах, а иридоидов в стеблях и корнях. Максимальное количество фенольных веществ и иридоидов Е. brevipila отмечается в фазу вегетации и цветения (рис. 2). По мере роста и развития растений количество фенольных соединений и иридоидов уменьшается. Оптимальной для сбора травы Очанки является фаза цветения, начало плодоношения, так как в этот период отмечается высокое содержание БАВ (флавоноиды 4.5; окисляемые вещества 8.1; иридоиды 0.54%) и максимальная биомасса сырья. Сравнительный анализ сырья высушенного при различных температурных режимах показал, что максимальное количество действующих веществ обнаружено в контрольных образцах, высушенных воздушно-теневым способом (рис. 2).
Накопление БАВ в органах Melampyrum pratense показано на рисунке 3. Характер их распределения по органам однотипен с видами Euphrasia L. Максимальное количество содержится в цветках и плодах, а минимальное в корнях (иридоиды) и листьях (флавоноиды).
Рис. 2. Влияние фазы развития (А) и режима сушки (Б) на содержание БАВ в траве Euphrasia brevipila.
корни стебли листья цветки плоды
Нфлавоноиды Ииридоиды
Рис. 3. Содержание флавоноидов и иридоидов в органах Melampyrum pratense.
вегетация бутонизация цветения плодоношения отмирания Вфлавоноиды Н иридоиды
Рис. 4. Содержание флавоноидов и иридоидов в траве Melampyrum pratense в различные фазы развития.
Наибольшее количество флавоноидов в траве м. лугового содержится в фазу вегетации - 0.57 и бутонизации - 0.55 и далее постепенно уменьшается, в фазу отмирания надземной части их количество минимально 0.18% (рис. 4).
Динамика накопления иридоидов у м. лугового, в отличие от видов рода Очанка, находится в противоположной зависимости, по сравнению с флавоноидами (рис. 4). Наблюдается общая тенденция увеличения количества иридоидов от фазы вегетации к фазе плодоношения. Максимальное их количество обнаружено в траве, заготовленной в фазу плодоношения 3.0, наименьшее в фазу отрастания надземной части 0.71%. Экспериментально установлено, что оптимальным режимом сушки травы м. лугового является воздушно-теневая.
Морфолого-анатомическое строение паразитирующих растений семейства норичниковые
Анализ морфолого-анатомических признаков видов рода Euphrasia L. показал, что, несмотря на принадлежность к различным рядам изученные растения имеют общий план строения и трудно отличимые диагностические признаки. Ни один признак не обладает абсолютной таксономической и диагностической ценностью. На основе статистической обработки результатов морфометрического анализа предложен комплекс низковариабельных признаков, имеющих достоверные отличия.
Диагностическими признаками морфологической структуры являются:
- для вегетативных органов - ветвистость стебля; длина максимального бокового побега; отношение длины стебля к длине максимального бокового побега; форма и количество зубцов на листовой пластинке; остистость зубцов стеблевых и прицветных листьев.
- для генеративных органов - длина венчика; отношение длины венчика к длине нижней губы; степень рассечения лопастей верхней губы; форма плода; глубина выемки плода; отношение длины плода к глубине выемки.
Диагностическими признаками анатомической структуры являются:
- для листа - сочетание типов трихом; длина устьиц верхней и нижней эпидермы;
- для стебля - величина радиуса; отношение первичной коры к радиусу, число рядов клеток ксилемы;
- для корней - отношение толщины флоэмы к радиусу; отношение толщины перидермы к радиусу.
Предложенный подход к выделению диагностических признаков может быть использован для исследования других родов сем. Scrophulariaceae, а так же различных семейств цветковых растений, среди представителей которых наблюдается полиморфизм и межвидовая гибридизация.
Установлены диагностические признаки возможной примеси к видам рода Очанка - зубчатки обыкновенной.
Исследовано морфолого-анатомическое строение марьянника лугового. Установлено, что большинство морфологических и анатомических признаков характеризуется постоянством параметров. Вариабельность вида в фитоценозе незначительна.
Технология получения экстракционных препаратов травы очанки коротковолоснстой и марьянника лугового
Оптимальные технологические параметры приготовления экстемпоральных лекарственных форм травы очанки коротковолоснстой и марьянника лугового показаны в таблице 18. Они обеспечивают максимальное извлечение фенольных соединений и иридоидов из сырья.
Таблица 18
Оптимальные технологические параметры приготовления экстемпоральных лекарственных форм травы Euphrasia brevipila и Melampyrum pratense
Технологический фактор Значение параметра
Euphrasia brevipila Melampyrum pratense
Измельченность сырья > 0.25 £ 7.0 мм > 0.25 £ 5.0 мм
Соотношение сырья и экстрагента 1:20 1:10
Метод получения Бисмацерация и настаивание в течение 1 часа на кипящей водяной бане, охлаждение 10 мин Отвар по методике ГФ XI
Нами разработана технология получения сухого и жидкого экстрактов с высоким содержанием комплекса БАВ. Оптимальными условиями получения экстракционных препаратов очанки являются: экстрагент - 40% спирт этиловый для сухого и 70% для жидкого экстрактов; степень измельчения сырья > 0.25 < 2.0 мм; время настаивания 8 часов; метод получения -реперколяция.
Оптимальными параметрами получения жидкого и сухого экстрактов марьянника лугового являются: экстрагент 50% спирт этиловый; степень измельчения сырья > 0.25 < 2.0 мм; время настаивания 6 часов; метод получения - реперколяция.
Стандартизация и разработка нормативной документации на лекарственное растительное сырье
Оформление нормативной документации проведено в соответствии с ОСТ № 91500.05.001 - 00. Товароведческий анализ травы очанки проведен на десяти, а марьянника лугового на восьми образцах цельного и измельченного сырья. Срок годности обоих видов сырья рекомендовано установить до 3 лет.
Разработан унифицированный способ количественного определения флавоноидов в траве и экстракционных препаратах очанки. В основе лежит метод дифференциальной спектрофотометрии и реакция комплексообразования с алюминия хлоридом и натрия ацетатом. Результаты количественного определения и метрологическая характеристика способа приведена в таблицах 19,20.
Относительная ошибка среднего результата с достоверной вероятностью 95% не превышает 6%. Разработанный способ может использоваться в фармацевтической и медицинской промышленности для стандартизации сырья и экстракционных препаратов различных видов Очанки по содержанию действующих веществ, проведения технологического контроля за производством.
Таблица 19
Метрологическая характеристика способа количественного определения суммы флавоноидов в траве трех видов Euphrasia L. (Р = 0.95)
Исследуемые виды Статистические параметры
f X Sr Дх е,%
О. коротковолосистая 9 4.98 0.1195 0.27 ±5.5
О. мелкоцветная 9 4.69 0.0929 0.21 ±4.5
О. Рейтера 9 3.12 0.0708 0.16 ±5.1
Таблица 20
Метрологическая характеристика способа количественного определения суммы флавоноидов в экстракционных препаратах Euphrasia brevipila (Р = 0.95)
кстракционные препараты Статистические параметры
f ТЕ S7 Дх е,%
1. Настой (1:10) 4 0.15 0.001549 0.00399 ±2.65
2. Жидкий водный экстракт (1:2) 4 0.51 0.003162 0.008126 ± 1.59
3. Настойка (1:5) 4 0.65 0.003878 0.009966 ±1.53
4. Жидкий спиртовый экстракт (1:2) 4 2.85 0.005711 0.01468 ±0.52
5. Сухой водный экстракт 4 12.80 0.04472 0.11494 ±0.90
6. Сухой спиртовый экстракт 4 19.82 0.03748 0.09634 ±0.49
7. Субстанция, содержащая комплекс флавоноидов (сумма флавоноидов) 4 26.00 0.1789 0.46 ± 1.77
Разработана методика количественного определения флавоноидов в сырье марьянника лугового с использованием дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на цинарозид (Е,%|СМ = 361, при X = 385 нм). Изучено влияние времени экстракции, природы и концентрации экстрагента, соотношения сырья и экстрагента на выход I
БИБЛИОТЕКА С.Нетервург
09 300 *ст
\ t
ошибка среднего результата с достоверной вероятностью 95% составляет 5.5%.
Для травы марьянника лугового разработана методика количественного определения иридоидов. В основе лежит фотоэлектроколориметрическое определение окрашенных комплексов с реактивом Трим-Хнлла в пересчете на аукубин. Методика позволяет определять иридоидные соединения группы аукубина и каталпола. Относительная ошибка среднего результата в 10 независимых определениях составляет 4.53%, при достоверной вероятности 95% (табл. 21).
Таблица 21
Метрологическая характеристика методики количественного определения иридоидов в траве Melampyrumpratense (Р = 0.95)
f Sr Д5Г "Е, %
9 5.046 0.1011 0.2285 ±4.53
Сннэкологичеекий оптимум, особенности семенного размножения и ресурсоведческая характеристика очанки коротковолосистой
В Пермской области о. коротковолосистая произрастает в полидоминантных растительных сообществах с преобладанием мезофитов и поликарпиков. Средняя высота травостоя в фитоценозах составляет 40 см, очанка в сообществе занимает 2 или 3-й ярус и проходит полный цикл развития. Доминирующими видами в фитоценозах с очанкой являются: Agrostis stolonifera L., Agrostis canina L., Deschampsia caespitosa L., Trifolium pratense L., Trifolium repens L., Achillea millefolium L., Prunella vulgaris L.
Наиболее благоприятными экологическими условиями, обеспечивающими максимальное обилие (copi - сорз по шкале Друде) в фитоценозах, являются: почва - от довольно богатой до богатой азотом; степень увлажнения - от переменного до достаточного; по освещенности - от открытых до полуоткрытых пространств. Данные условия, вероятно, соответствуют синэкологическому оптимуму вида.
Для семян Е. brevipila характерен эндогенный тип покоя, связанный с действием физиологического механизма торможения прорастания. С целью его преодоления изучены семь режимов стратификации. Установлено, что максимальная всхожесть 44% наблюдается у семян, прошедших 70-дневную стратификацию, при температуре - 6°С, во влажных условиях с хорошей аэрацией (фильтровальная бумага). Почвенное проращивание стратифицированных семян показало, что начальные этапы онтогенеза имеют сложный донорозависимый характер и невозможны без участия растениий-хозяев.
Изучены ресурсоведческие показатели о. коротковолосистой в пяти административных районах Пермской области: Оханском, Большесосновском, Нытвенском, Чусовском, Березовском. С использованием полученных данных
и сведений о расчетных площадях сельскохозяйственных угодий (сенокосы и пастбища), занимаемых Е. ЬгЫрИа, проведена прогнозная оценка запасов сырья на территории Пермской области (табл. 22).
Таблица 22
Прогноз ресурсов сырья Euphrasia brevipila на территории Пермской области
Плоишь, га 116.9
Биологический запас, кг „ 8062.5 ± 1693.1
Эксплуатационный запас, кг 4676.2
Возможная ежегодная заготовка, кг 2338.1
Прогнозируемый биологический запас составляет 8062.5 кг. Учитывая необходимость восстановления заросли, рассчитан эксплуатационный запас сырья, который равен 4676.2 кг, объем возможной ежегодной заготовки с учетом периода очередности для однолетних трав раз в два года, составляет 2338.1 кг.
Результаты проведенных химических, фармакологических, биологических исследований паразитирующих и автотрофных растений сем. Scrophulariaceae позволили сформулировать научно-методологический подход к фармакогностическому изучению паразитирующих видов, который представлен в виде блок-схемы.
Принципиальным отличием предложенного метода от традиционного подхода к изучению дикорастущих растений являются следующие положения:
Во-первых, паразитирующие виды образуют симбионты с различными «растениями-хозяевами» в пределах одного фитоценоза. Поэтому требуется изучение растений, произрастающих не только в разнообразных климатических зонах, но и в различных экотопах в пределах одного геоботанического района с целью выявления константных, аналитически значимых компонентов.
Во-вторых, при изучении морфолого-анатомического строения паразитирующих видов, среди которых наблюдается полиморфизм и межвидовая гибридизация, необходимо использовать статистико-фармакогностический подход с целью выявления диагностических признаков.
В-третьих, при разработке приемов и условий интродукции перспективных видов необходимо учитывать наличие глубокого эндогенного покоя у семян паразитирующих растений и сложный донорозависимый характер начальных этапов онтогенеза.
Разработанная методологическая схема базируется на общеизвестном дедуктивном принципе развития знания «от общего к частному» и состоит из VI блоков, объединенных общей целью. Наиболее объемные исследования выполняются на начальных этапах. Предусматривается проведение скрининговых исследований in vitro и in vivo и сравнительное изучение фармакологических эффектов растений научной и народной медицины.
Блок схема исследования паразитирующих растений семейства БсгорЫйапасеае
Фотохимические исследования проводятся на образцах, заготовленных в разнообразных климатических зонах и в различных экотопах в пределах одного геоботанического района. Наряду с общим химическим составом устанавливаются константные, аналитически значимые компоненты, содержание которых не зависит от экологических факторов. Полученные сведения используются при разработке методик количественного определения БАВ и химических характеристик подлинности сырья.
При выявлении диагностических морфолого - анатомических признаков необходимо использовать результаты статистической обработки количественных параметров внешней и внутренней структуры морфологически близких видов, а также проводить изучение строения возможных примесей из других родов.
По мере накопления информации исследовательские задачи конкретизируются и становятся более узкими. На конечных этапах исследования разрабатывается нормативная документация на перспективные виды сырья, лекарственные препараты и решаются вопросы сырьевого обеспечения производства.
Блок - схема может быть методологической основой для изучения паразитов и полупаразитов среди представителей других семейств цветковых растений, а также различных отделов и царств органического мира (лишайников, водорослей, грибов, простейших).
Общие выводы
1. На основании сравнительного изучения физиологически неоднородных видов семейства норичниковые сформулированы научно-методологические принципы фармакогностического исследования паразитирующих растений, позволяющие анализировать виды, образующие симбионты с различными «растениями - хозяевами».
2. В результате скрининговых фармакологических исследований установлено, что липофильная фракция травы очанки коротковолосистой обладает высоким, а марьянника лугового средним уровнем противолейкемической активности. Выявлены перспективные растения научной медицины, проявляющие высокую противолейкемическую и антитромбиновую активность.
3. Сила и направленность гипотензивного, антикоагулянтного и антимикробного действия автотрофных и паразитирующих видов сем. норичниковые определяется индивидуальным набором биологически активных веществ и не зависит от способа питания растений. Растения рода Euphrasia L. перспективны для разработки фитопрепаратов с антиоксидантной, антимикробной, антикоагулянтной, гипотензивной, противовоспалительной активностью, а марьянник луговой - с антиагрегантной, гипотензивной и противосудорожной.
4. В золе растений сем. норичниковые обнаружено 22 химических элемента. Средний уровень зольности паразитирующих видов выше, чем автотрофных. В подземных органах паразитирующих растений, по сравнению с автотрофными, отмечается повышенное содержание марганца, стронция и бария, а в надземных - дополнительно меди и цинка. Элементы интенсивного поглощения (Mn, Sr, Ва, Ni, Си, Zn) характерны преимущественно для паразитирующих видов, а среди автотрофных единичны.
5. Запасными питательными веществами семян автотрофных и паразитирующих растений являются жирные масла (24 - 34%). Качественный состав и количественное содержание жирных кислот в маслах определяется типом покоя семян. В составе жирных масел семян с глубоким эндогенным типом покоя преобладает линоленовая, а с неглубоким и промежуточным -линолевая кислота.
6. Установлено, что виды рода Euphrasia L. (Е. brevipila, Е. parviflora, Е. х reuteri, Е. tenuis) имеют близкий химический состав, представленный флавоноидами, иридоидами и фенолкарбоновыми кислотами. Аналогичный состав БАВ имеет марьянник луговой. Выделены и идентифицированы с помощью свидетелей - хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, гиперозид, цинарозид, космоссиин, лютеолин, апигенин, диосметин, аукубин. Константными компонентами, пригодными для использования в аналитических целях, являются - хлорогеновая кислота, цинарозид, аукубин. Максимальное количество действующих веществ накапливается в фазу цветения - плодоношения.
7. Методом сравнительного анализа морфолого-анатомического строения марьянника лугового и четырех видов рода Euphrasia L. определен комплекс низковариабельных признаков для диагностики цельного и измельченного сырья. Установлены диагностические признаки возможной примеси к видам рода Очанка - зубчатки обыкновенной.
8. Экспериментально обоснована рациональная технология получения экстемпоральных лекарственных форм и галеновых препаратов очанки коротковолосистой и марьянника лугового. На технологию получения сухого экстракта очанки коротковолосистой получен патент РФ «Способ получения средства, обладающего противовоспалительной и гипотензивной активностью». Из экстракта марьянника лугового выделены отдельные фракции БАВ, обладающие высокой антиагрегационной и гипотензивной активностью, способ фракционирования биологически активных веществ защищен патентом РФ.
9. Установлены оптимальные числовые показатели, регламентирующие доброкачественность сырья, на основании которых разработана фармакопейная статья предприятия (ФСП) «ТРАВА ОЧАНКИ». ФСП, пояснительная записка, таблицы аналитических данных, материалы сравнительного изучения с зарубежными аналогами, инструкция по применению направлены в Фармакопейный комитет. Разработан проект ФС «ТРАВА МАРЬЯННИКА ЛУГОВОГО». Материалы фитохимических исследований
растений рода Очанка использованы Пермским НПО «Биомед» (ФГУП «Микроген») при разработке и составлении нормативной документации на препараты «Уральская очанка» (капли и таблетки).
10. Разработан унифицированный способ количественного определения суммы флавоноидов в траве и экстракционных препаратах очанки, который позволяет определять содержание флавоноидов в траве трех видов очанки (Е. brevipila, Е. х reuteri, Е. parviflora) в водных и спиртовых извлечениях, субстанции, содержащей комплекс флавоноидов. Для травы марьянника лугового разработан метод количественного определения флавоноидов и иридоидов.
11. Определены синэкологический оптимум и прогноз ресурсов очанки коротковолосистой на территории Пермской области. Прогнозируемый биологический запас равен 8062 кг, эксплуатационный 4676 кг, возможная ежегодная заготовка 2338 кг. У семян очанки коротковолосистой выявлен глубокий эндогенный покой, преодолеваемый влажной, холодовой стратификацией. Установлено, что начальные этапы онтогенеза имеют сложный, донорозависимый характер и невозможны без участия «растений-хозяев».
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Патент 2222339. Способ получения биологически активных веществ, обладающих антиагрегационным и гипотензивным действием/ Петриченко В.М., Галишевская Е.Е., Сыропятов Б.Я., Трошкова О.В.; Перм. гос. фармацевт, акад. - № 2002108102/15; Заявл. 29.03.02; Опубл. 27.01.04; Приор. 29.03.02 (Россия).
2. Патент № 2220735. Способ получения средства, обладающего противовоспалительной и гипотензивной активностью/ Петриченко В.М., Сухинина Т.В., Бабиян JT.K., Шрамм Н.И., Сыропятов Б.Я., Юшков В.В.; Перм. гос. фармацевт, акад. - № 2002108096; Заявл. 29.03.02; Опубл. 10.01.04; Приор. 29.03.02 (Россия).
3. Особенности анатомо-морфологического строения видов вероники в некоторых районах Пермской области - 51 е.: ил. - Деп. в ВИНИТИ 1.12.94, № 2768 (Соавт.: Вотинова Т.И., Зеленина М.В., Кондаурова Т.С., Соломаха Т.В., Абашева В.В.).
4. Распространение и морфолого-анатомическая характеристика очанки татарской в Пермской области// Актуальные проблемы фармации: Материалы межвуз. науч.- практ. конф. посвящ. 30-летию фармацевт, фак-та. - Тюмень, 1994. - С. 114 (Соавт.: Вотинова Т.И., Дармодехина О.А., Винокурова О.И.).
5. Исследование марьянника лугового, произрастающего на Урале// Актуальные проблемы фармации: Материалы межвуз. науч.- практ. конф. -Пермь, 1995. - С. 102 (Соавт.: Марценюк В.Б.).
6. Сравнительное морфологическое изучение видов рода Euphrasia L.// Актуальные проблемы медицины и фармации: Материалы научн. конф. -
Курск: КГМУ, 1999. - С. 351 - 353 (Соавт.: Сухинина Т.В., Вотинова Т.Н., Шустов А.Д.).
7. Влияние экологических условий на морфологию плодов и семян очанки// Экология: проблемы и пути решения: Материалы межвуз. науч. конф.
- Пермь, 1999. - С. 44 (Соавт.: Сухинина Т.В., Вотинова Т.И.).
8. Биологические особенности семян очанки коротковолосистой// Современные тенденции развития фармации: Материалы науч.-практ. конф. -Самара, 1999. - С. 56 (Соавт.: Сухинина Т.В., Вотинова Т.И.).
9. Фитохимический анализ видов рода Euphrasia L.// Фармацевтическая наука и практика: Материалы межвуз. науч.- практ. конф. - Кемерово, 1999. -С. 100 (Соавт.: Сухинина Т.В., Вотинова Т.Н., Макарова Л.С.).
10. Исследование по разработке лекарственных форм очанки// Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы юбил. межвуз. науч.-практ. конф. - Пермь, 2000. - С. 95 (Соавт.: Шрамм Н.И., Бабиян Л.К., Сухинина Т.В.).
11. Изучение анатомического строения марьянника лугового// Там же. -С. 173 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Загребина М.В.).
12. Элементный состав очанки коротковолосистой// Там же. - С. 190 (Соавт.: Сухинина Т.В., Фурса Н.С., Шустов А.Д.).
13. Иридоиды рода Euphrasia L.// Там же- С. 195 (Соавт.: Сухинина Т.В., Лепина С.Н.).
14. Разработка лекарственных форм на основе травы очанки// Актуальные проблемы медицины и фармации. Материалы науч. конф. - Курск, 2001. -С. 346 (Соавт.: Сухинина Т.В., Бабиян Л.К., Шрамм Н.И.).
15. Фенольные соединения марьянника лугового// Там же - С. 308 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Марценюк В.Б.).
16. Изучение иридоидов марьянника лугового, произрастающего на Урале// Перспективы развития естественных наук в высшей школе: Материалы международной науч. конф. - Пермь, 2001. - Т. 1. - С. 201-205 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Хлебников А.В., Федорова Т.Н.).
17. Флавоноиды рода Euphrasia L.// Там же - С. 206 - 210 (Соавт.: Сухинина Т.В., Белоногова В.Д., Шестакова Т.С.).
18. Компонентный состав иридоидов марьянника лугового// Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. науч.-практ. конф. - Пермь, 2001. - С. 100 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Федорова Т.Н.).
19. Биологические и фармацевтические аспекты исследования растений семейства норичниковые// Там же. - С. 112.
20. Показатели качества травы очанки коротковолосистой// Там же. - С. 113
- 114 (Соавт.: Сухинина Т.В., Макарова Л.С., Лепина С.Н.).
21. Содержание суммы флавоноидов и окисляемых веществ в растениях рода Очанка// Там же.- С. 119 (Соавт.: Сухинина Т.В., Шестакова Т.С.).
22. Антиагрегационная активность марьянника лугового (сем. Scrophulariaceae)// Там же. - С. 120 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Сыропятов Б.Я.).
23. Фармакологическая активность препаратов марьянника лугового// Здравоохранение Башкортостана. - 2002. - № 2. С. 142-144 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Сыропятов Б.Я., Трошкова О.В.).
24. Элементный состав марьянника лугового// Материалы 67-й межвуз. конф. - Курск, 2002. - Ч. 2. - С. 110 (Соавт.: Галишевская Е.Е.).
25. Показатели качества травы марьянника лугового// Там же. - С. 137 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Макарова Л.С., Лепина С.Н.).
26. Технология получения и биологическая активность экстракционных препаратов очанки коротковолосистой// Там же. - С. 138 - 139 (Соавт.: Сухинина Т.В., Бабиян Л.К., Шрамм Н.И., Юшков В.В.).
27. Жирнокислотный состав очанки коротковолосистой// Там же. - С. 150 -151 (Соавт.: Сухинина Т.В., Фурса Н.С.).
28. Анатомическое строение Euphrasia brevipila Burn, et Gremli - 13 е.: ил. -Деп. в. ВИНИТИ 28.05.02, № 938 (Соавт.: Сухинина Т.В., Вотинова Т.И., Фурса Н.С.).
29. Фенолкарбоновые кислоты рода Euphrasia L.// Экология: проблемы и пути решения: Материалы X Всерос. науч. - практ. конф. - Пермь, 2002. - 4.2. - С. 181 - 187 (Соавт.: Сухинина Т.В., Шестакова Т.С.).
30. Спектрофотометрический метод определения содержания флавоноидов в Euphrasia brevipila Burn, et Gremli// Растит, ресурсы. - 2002. - Вып. 2. - Т. 38. -С. 104 - 109 (Соавт.: Сухинина Т.В., Фурса Н.С.).
31. Антимикробная активность извлечений из трех видов Euphrasia L.// Растит, ресурсы. - 2002. - Т. 38, вып. 3. - С. 82 - 86 (Соавт.: Сухинина Т. В., Одегова Т. Ф., Бабиян Л. К., Шрамм Н. И.).
32. Хроматомассспектральный анализ жиров с использованием селективного ионного детектирования// Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы. Материалы межвуз. науч.-практ. конф. - Пермь, 2002. - С. 46 - 47 (Соавт.: Разумовская Т. А., Гаранин В.П.).
33. Жирнокислотный состав трех видов Verbascum L.// Там же. - С. 56-57 (Соавт.: Разумовская Т.А., Гаранин В.П.).
34. Ресурсоведческая характеристика и прогнозирование запасов сырья Euphrasia brevipila в Пермской области// Там же. - С. 59 - 60 (Соавт.: Сухинина Т. В., Белоногова В. Д.).
35. Аминокислотный состав льнянки обыкновенной, произрастающей на Урале// Сборник статей Международной 62-й итоговой науч. конф. им. Н.И. Пирогова. - Томск, 2003. - С. 213-214 (Соавт.: Томилов А.Г.).
36. Анатомо-морфологическое строение Melampyrum pratense L., произрастающего в Пермской области - 21 е.: ил. - Деп. в ВИНИТИ 15.05.03, № 958 (Соавт.: Марценюк В.Б., Галишевская Е.Е.).
37. Токсичность экстракционных препаратов марьянника лугового// Сборник работ 68-й итоговой сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН. -Курск, 2002. - 4.2. - С. 243-244 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Сыропятов Б.Я.).
38. Растения семейства Норичниковые - перспективные источники биологически активных веществ// Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в 21 веке: Материалы Всерос. науч. конф. посвящ. 105-летию Пермского НПО «Биомед». - Пермь, 2003. - С. 326-328.
39. Макро- и микроэлементный состав Euphrasia brevipila Burn, et Gremli// Растит, ресурсы. - 2002. - Т. 39, вып. 3. - С. 111-114 (Соавт.: Сухинина Т.В., Фурса Н.С., Запоров А.Ю., Жекин A.B.).
40. Компонентный состав фенольных соединений двух видов Verbascum L., произрастающих в Пермской области// Ботанические исследования в Азиатской России: Материалы XI съезда Русского ботанического общества. -Новосибирск - Барнаул, 2003. - Т. 2. - С. 154 - 156 (Соавт.: Разумовская Т.А.).
41. Жирнокислотный состав марьянника лугового// Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. науч. - практ. конф. - Пермь, 2003. - С. 105 - 106 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Гаранин В.П.).
42. Аминокислотный состав растений рода Euphrasia L.// Там же. - С. 107 — 108 (Соавт.: Сухинина Т.В., Панова О.С.).
43. Состав жирных кислот семян видов Scrophulariaceae// Там же. - С. 109 -110 (Соавт.: Сухинина Т.В., Ванькевич Т.А.).
44. Противомикробная активность экстракционных препаратов льнянки обыкновенной// Там же. - С. 110-112 (Соавт.: Томилов А.Г., Одегова Т.Ф.).
45. Элементный состав цветков коровяка обыкновенного// Там же. - С. 118 — 119 (Соавт.: Разумовская Т.А.).
46. Микроэлементный состав Melampyrum pratense L. в окрестностях города Перми// Растит, ресурсы. - 2003. - Т. 39, вып. 4. - С. 104 - 108 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Фурса Н.С., Запоров А.Ю.).
47. Фенольные соединения марьянника лугового, произрастающего на Урале// Современные вопросы фармакогнозии: Межвуз. сб. науч. тр. с междунар. участием - Ярославль, 2004. - С. 73 - 84 (Соавт.: Галишевская Е.Е.).
48. Использование морфометрических показателей видов Очанка {Scrophulariaceae) для диагностики лекарственного сырья// Там же. - С. 264 272 (Соавт.: Сухинина Т.В.).
49. Гипотнезивная активность некоторых растений из семейства норичниковые {Scrophulariaceae)!I Фундаментальные проблемы фармакологии: Материалы 2-го съезда Российского научного общества фармакологов. - Москва, 2003. - Ч. 2. - С. 230 (Соавт.: Трошкова О.В., Сыропятов БЛ.).
50. Разработка и исследование лекарственных форм травы очанки// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции:
Сборник науч. тр. Пятигорской гос. фармац. акад. - Пятигорск, 2004. - С. 140 (Соавт.: Шрамм Н.И., Бабиян Л.К., Сытник Г.Н.).
51. Количественное определение суммы флавоноидов в траве марьянника лугового// Фармация. - 2004. - № 1. - С. 24 - 25 (Соавт.: Гапишевская Е.Е.).
52. Анатомическое строение Odontites serótina (Lam.) Dum., произрастающей в Пермской области - 16 е.: ил. - Деп. В ВИНИТИ 09.06.04, № 975 (Соавт.: Сухинина Т.В.).
53. Состав жирных кислот трех видов Verbascum L., произрастающих в Пермской области//Растит. ресурсы. - 2004. - Т. 40, вып. 3. - С. 72 - 76 (Соавт.: Разумовская Т.А.).
54. Запасы и прогноз ресурсов Euphrasia brevipila Burnat et Gremli на территории Пермской области// Генетические ресурсы лекарственных и ароматических растений: Сборник науч. тр. междунар. науч. конф. поев, памяти А.И. Шретера. В 2-х томах. - М.: ВИЛАР, 2004. - Т. 1. - С. 60 - 63 (Соавт.: Сухинина Т.В.).
55. Технология получения и фармакологические свойства сухого экстракта из травы очанки коротковолосистой// Хим.-фарм. журн. - 2005. - Т. 39, № 3. -С. 33 - 36 (Соавт.: Сухинина Т.В., Шрамм Н.И., Бабиян Л.К., Юшков В.В.).
56. Стандартизация и фармако-технологические свойства травы марьянника лугового// Хим.-фарм. журн. - 2005. - Т. 39, № 4. - С. 39 - 44 (Соавт.: Галишевская Е.Е., Данилова В.К., Шрамм H.H., Бабиян Л.К.).
57. Антигипертензивная активность паразитирующих растений семейства норичниковые// Человек и лекарство. Материалы XII Российского нац. конгр. - М., 2005. - С. 792(Соавт.: Сухинина Т.В., Сыропятов Б.Я., Трошкова О.В.).
58. Anticancer and antithrombin activity of Russian plants/ E.A. Goun, V.M. Petrichenko, S.U. Solodnikov, T.V. Suchinina, M.A. Kline, Glenn Cunningham, Chi Nguyen, H. Miles// Journal of Ethnopharmacology - 2001. - № 81 - S. 337 - 342.
Автор считает своим приятным долгом выразить признательность и уважение сотрудникам, оказавшим консультативную помощь в выполнении настоящей работы: Бабиян Л.К. и Шрамм Н.И. - доц. каф. фармацевтической технологии, к.ф.н.; Даниловой В.К. — доц. тф. фармакологии, к.б.н; Гайсиновичу М.С. - доц. каф. неорганической химии, к.х.н.; Макаровой Л.С. и Лептой С.Н. - доц. каф. МФТВ, к.ф.н.; Гаранину В.П. - зав. химическим отд. Пермского бюро СМЭ; Запорову А.Ю. -науч. сотр. отд. экологии леса ЕНИ при ПГУ.
Особая благодарность бывшим аспирантам Сухининой Т.В. - доценту каф ботаники, к.ф.н и Галишевской Е.Е. -ст преп каф. ботаники, к.ф.н. за веру в научный успех и трудолюбие.
Искренняя благодарность Варламову А.П. и Каменчуку А.П. за техническую поддержку научных исследований.
ПД-11-0002 от 15.12.99
Подписано в печать 19.04.2005 Формат 60X90/16. Набор компьютерный Усл. печ. л. 2,0 Тираж 100 экз. Заказ № 468/2005
Отпечатано на ризографе в отделе Электронных издательских систем ОЦНИТ Пермского государственного технического университета 614600, г. Пермь, Комсомольский пр., 29а, к.113, т.(3422) 198-033
4
»-784 9
РНБ Русский фонд
2006-4 7217
Оглавление диссертации Петриченко, Василий Михайлович :: 2005 :: Пермь
Введение.
Обзор литературы
ГЛАВА 1. Современное состояние ботанико-фармакогностических исследований растений семейства норичниковые.
1.1. Общая характеристика.
1.2. Уровни паразитизма.
1.3. Фармакогностические исследования некоторых паразитирующих видов.
1.3.1. Биологическая, химическая и фармакологическая характеристика растений рода Очанка.
1.3.1.1. Распространение, систематическое положение и биологические особенности.
1.3.1.2. Химический состав.
1.3.1.3. Экспериментальные и клинические данные о применении в научной и народной медицине.
1.3.2. Биологическая, химическая и фармакологическая характеристика растений рода Зубчатка.
1.3.2.1. Распространение, систематическое положение и биологические особенности.
1.3.2.2. Химический состав.
1.3.2.3. Экспериментальные и клинические данные о применении в научной и народной медицине.
1.3.3. Биологическая, химическая и фармакологическая характеристика растений рода Марьянник.
1.3.3.1. Распространение, систематическое положение и биологические особенности.
1.3.3.2. Химический состав.
1.3.3. Экспериментальные и клинические данные о применении в научной и народной медицине.
1.3.4. Биологическая, химическая и фармакологическая характеристика растений рода Погремок.
1.3.4.1. Распространение, систематическое положение и биологические особенности.
1.3.4.2. Химический состав.
1.3.4.3. Экспериментальные и клинические данные о применении в научной и народной медицине.
Экспериментальная часть
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования.
2.1. Объекты исследования.
2.2. Методы морфолого-анатомических исследований.
2.2.1. Морфологический и макроскопический анализ.
2.2.2. Методы анатомических исследований.
2.3. Методы фитоценотического и ресурсоведческого исследований
2.4. Методы химических исследований.
2.4.1. Получение извлечений для качественных реакций и хроматографического анализа.
2.4.2. Исследование гидроксикоричных кислот, флавоноидов и иридоидов.
2.4.3. Исследование азотистых веществ.
2.4.4. Исследование жирнокислотного состава.
2.4.5. Исследование аминокислот, кумаринов, стероидных веществ.
2.4.6. Исследование макро- и микроэлементного состава.
2.5. Физико-химические методы исследования.
2.6. Количественное определение БАВ и статистическая обработка результатов исследования.
2.7. Методы фармакологических исследований.
2.7.1. Испытание на противолейкемическую активность.
2.7.2. Испытание на антитромбиновую активность.
2.7.3. Испытание на гипотензивную активность.
2.7.4. Испытание на антиагрегационную активность.
2.7.5. Исследование на противовоспалительную активность.
2.7.6. Испытание на противосудорожную активность.
2.7.7. Испытание на антимикробную активность.
2.7.8. Определение антиоксидантной активности.
2.7.9. ' Исследование острой токсичности.
2.8. Статистическая обработка результатов фармакологического эксперимента.
ГЛАВА 3. Биологическая активность растений семейства норичниковые и скрининг некоторых растений научной и народной медицины на противолейкемическую и антитромбиновую активность.
3.1. Скрининг растений научной и народной медицины на противолейкемическую и антитромбиновую активность.
3.2. Гипотензивная активность.
3.3. Антикоагулянтная активность.
3.4. Антиагрегационная активность.
3.5. Антимикробная активность.
3.6. Противовоспалительная активность.
3.7. Противосудорожная активность.
3.8. Антиоксидантная активность.
3.9. Острая токсичность экстракционных препаратов очанки коротковолосистой и марьянника лугового.
ВЫВОДЫ.
ГЛАВА 4. Химический состав, распределение и количественное содержание БАВ и макро- и микроэлементов в растениях семейства норичниковые.
4.1. Состав и характер распределения макро- и микроэлементов.
4.2. Состав и количественное содержание жиров.'.
4.3. Биологически активные вещества растений рода Очанка.
4.3.1. Качественные реакции и хроматографический анализ.
4.3.2. Выделение биологически активных веществ очанки коротковол осистой.
4.3.2.1. Исследование фракции фенолкарбоновых кислот.
4.3.2.2. Исследование фракции флавоноидов.
4.3.3. Исследование иридоидного комплекса.
4.4. Биологически активные вещества марьянника лугового.
4.4.1. Качественные реакции и хроматографический анализ.
4.4.2. Исследование фенольных соединений.
4.4.3. Исследование иридоидного комплекса.
4.4.4. Фракционирование комплекса биологически активных веществ марьянника лугового.•.
4.5. Аминокислотный состав очанки коротковолосистой и марьянника лугового.
4.6. Влияние экологических, онтогенетических, температурных факторов на характер распределения и количественное содержание БАВ в траве очанки коротковолосистой и марьянника лугового.
4.6.1. Изменчивость состава БАВ в образцах сырья, заготовленных в различных пунктах.
4.6.2. Динамика накопления БАВ.
ВЫВОДЫ.
ГЛАВА 5. Морфолого-анатомическое строение паразитирующих растений семейства норичниковые.
5.1. Исследование комплекса морфолого-анатомических признаков растений рода Очанка.
5.1.1. Сравнительный анализ морфологического строения.
5.1.2. Сравнительный анализ анатомического строения.
5.2. Морфолого-анатомическое строение зубчатки обыкновенной.
5.2.1. Морфологическая характеристика.
5.2.2. Анатомическое строение.
5.3. Морфолого-анатомическое строение марьянника лугового.
5.3.1. Морфологическая характеристика.
5.3.2. Анатомическое строение.
ВЫВОДЫ.
ГЛАВА 6. Технология получения экстракционных препаратов травы очанки коротковолосистой и марьянника лугового.
6.1. Выбор оптимальных условий получения экстемпоральных лекарственных форм.
6.1.1. Выбор степени измельченности сырья.
6.1.2. Выбор оптимального соотношения сырья и экстрагента.
6.1.3. Выбор способа приготовления извлечения.
6.2. Разработка технологии получения экстракционных препаратов очанки и марьянника.
6.2.1. Выбор оптимальной концентрации экстрагента.
6.2.2. Выбор степени измельченности сырья.
6.2.3. Выбор метода экстрагирования.
ВЫВОДЫ.
ГЛАВА 7. Стандартизация и разработка нормативной документации на лекарственное растительное сырье.
7.1. Стандартизация травы очанки.
7.1.1. Обоснование показателей качества.
7.1.2. Разработка унифицированного способа количественного определения флавоноидов в траве и экстракционных препаратах очанки.-.
7.2. Стандартизация травы марьянника лугового.
7.2.1. Обоснование показателей качества.
7.2.2. Разработка методики количественного определения флавоноидов в сырье.
7.2.3. Разработка методики количественного определения иридоидов в сырье.
ВЫВОДЫ.
ГЛАВА 8. Синэкологический оптимум, особенности семенного размножения и ресурсоведческая характеристика очанки коротковолосистой.
8.1. Структура фитоценозов и синэкологический оптимум.
8.2. Биологические особенности семенного размножения.
8.3. Ресурсоведческие исследования и прогноз запасов сырья очанки коротковолосистой в Пермской области.
ВЫВОДЫ.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Петриченко, Василий Михайлович, автореферат
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Препараты на основе лекарственных растений уверенно завоевывают фармацевтический рынок России. Ежегодно расширяется их ассортимент, увеличивается количество. Преимущество фитопрепаратов перед синтетическими лекарственными средствами заключается в малой токсичности, мягкости действия. Прочно вошла в обиход и получила широкое распространение новая группа препаратов на основе продуктов природного происхождения - это нутрицевтики или биологически активные добавки к пище (БАД). Интерес к БАД проявляют не только производители и врачи, но и население. Наметившаяся тенденция будет расширяться, по мере улучшения благосостояния населения и повышения покупательского спроса. Сдерживающими факторами в производстве и реализации новых видов продукции является слабая фармакогностическая, фармакологическая и химическая изученность сырьевых источников фитопрепаратов.
Среди большого разнообразия лекарственных растений отечественной флоры несомненный интерес представляет семейство норичниковые (iScrophulariaceae), мало используемое в медицинской практике. Растения семейства норичниковые привлекают внимание исследователей как источники биологически активных веществ (БАВ). Из видов сем. норичниковые прошли испытания и разрешены к применению норичник Бюргера - средство, влияющее на динамику кровообращения; вероника' Виргинская -противовоспалительное средство при желудочно-кишечных заболеваниях; коровяк густоцветковый — муколитическое средство. Потенциальными источниками БАВ и сырьём для производства лекарственных препаратов являются паразитирующие виды рода Очанка, Марьянник, Погремок, Зубчатка.
Многие виды из перечисленных родов давно и эффективно применяются в народной медицине и гомеопатии для лечения заболеваний глаз, центральной нервной системы, желудочно-кишечного тракта, сердечнососудистой системы. Некоторые виды рода Очанка включены в фармакопеи стран Западной Европы (Польша, Германия, Франция).
Важное теоретическое и практическое значение для фармации имеют сведения о химическом составе и закономерностях накопления БАВ, биологической активности и их связи с условиями • паразитического существования растений. Практически не исследованы начальные этапы онтогенеза и не разработаны научно-методологические принципы фармакогностического изучения паразитирующих растений. Все выше изложенное определило актуальность данной работы.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы является комплексное фармакогностическое исследование и сравнительный анализ биологических свойств и химического состава паразитирующих и автотрофных растений семейства норичниковые.
Для достижения поставленной цели исследования необходимо было решить следующие основные задачи:
- Изучить современное состояние вопроса по биологии цветковых паразитов. Проанализировать биологические, химические и фармакологические свойства растений рода Euphrasia L. (Очанка), Melampyrum L. (Марьянник), Odontites Zinn (Зубчатка), Rhinanthus L. (Погремок).
- Провести скрининговые фармакологические исследования растений научной и народной медицины и на их фоне оценить потенциал биологической активности паразитирующих растений семейства норичниковые.
- Исследовать фармакологическую активность и токсичность паразитирующих и автотрофных растений и выявить перспективные виды для дальнейшего изучения.
- Провести сравнительное изучение зольности, макро- и микроэлементного состава и биогеохимических показателей растений, отличающихся типом питания.
- Изучить химический состав жиров, аминокислот, флавоноидов, иридоидов и фенолокислот. Исследовать закономерности накопления и распределения БАВ по органам и фазам развития растений. Экспериментально обосновать сроки сбора и режим сушки сырья.
- Провести морфолого-анатомические исследования и установить диагностические признаки растений рода Очанка, зубчатки обыкновенной, марьянника лугового.
- Экспериментально обосновать технологию получения экстемпоральных лекарственных форм и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой и марьянника лугового.
- Разработать методы количественного определения флавоноидов и иридоидов в сырье и экстракционных препаратах очанки и марьянника.
- Обосновать товароведческие показатели качества сырья и разработать нормативную документацию на траву Очанки и траву Марьянника лугового.
- Изучить условия прорастания семян, синэкологический оптимум и ресурсный потенциал очанки коротковолосистой на территории Пермской области.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. На основе сравнительного изучения физиологически неоднородных видов семейства • норичниковые сформулированы научно-методологические принципы фармакогностического исследования паразитирующих растений, позволяющие анализировать виды, образующие симбионты с различными "растениями-хозяевами" и имеющие полиморфное строение.
Впервые проведены скрининговые фармакологические исследования 45 видов лекарственных растений на противолейкемическую и антитромбиновую активность. Установлено, что липофильные экстракты очанки коротковолосистой обладают высоким, а марьянника лугового средним уровнем противолейкемического действия. Выявлены перспективные растения научной медицины, показавшие высокую противолейкемическую и антитромбиновую активность.
Проведено сравнительное изучение гипотензивной активности автотрофных и паразитирующих растений. Установлено, что паразитирующие растения обладают большей силой и продолжительностью гипотензивного действия, по сравнению с автотрофными видами.
Определен макро- и микроэлементный состав растений с различным типом питания. Установлено, что у растений с уклоняющимся типом питания (паразитов) содержание Mn, Sr, Ва, Си, Zn, а также общий уровень зольности выше, по сравнению с растениями, имеющими нормальный тип питания. Изучена изменчивость биогеохимических параметров физиологически неоднородных растений.
Впервые установлено, что жирнокислотный состав семян растений определяется не типом питания растений, а глубиной и типом покоя. В семенах с глубоким эндогенным типом покоя доминирует линоленовая, а с неглубоким линолевая кислота.
У паразитирующих растений выявлена зависимость компонентного состава фенольных соединений и иридоидов от экологических условий произрастания. При изучении химического состава и разработке нормативной документации на сырье паразитирующих растений показана необходимость выделения константных, аналитически значимых компонентов.
На примере четырех видов рода Очанка показано, что для выявления диагностических анатомо-морфологических признаков у растений имеющих полиморфное строение, связанное с межвидовой гибридизацией, необходимо использовать результаты статистической обработки количественных параметров внешней и внутренней структуры.
Проведен выбор оптимальных условий получения экстемпоральных лекарственных форм и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой и марьянника лугового.
Определены оптимальные условия преодоления покоя семян, синэкологический оптимум и ресурсный потенциал очанки коротковолосистой на территории Пермской области. Установлено, что начальные этапы онтогенеза имеют сложный донорозависимый характер и невозможны без участия «растений-хозяев».
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Выявленная зависимость химического состава и биологических свойств от способа питания у видов сем. норичниковые позволяет расширить теоретические представления о биохимических закономерностях паразитизма цветковых растений. Разработанные методологические подходы могут использоваться для изучения паразитирующих видов среди представителей различных семейств покрытосеменных растений, а также других отделов и царств органического мира (грибов, лишайников, водорослей, простейших).
Установленная зависимость между жирнокислотным составом и типом покоя позволяет проводить предварительное химическое тестирование с целью прогнозирования скрытых физиологических свойств и глубины покоя семян.
Результаты фармакологических исследований растений семейства норичниковые являются основой для разработки препаратов гипотензивного, противовоспалительного, противосудорожного, антимикробного, антиоксидантного действия.
Разработанные подходы к выделению диагностических признаков могут использоваться для исследования растений, других родов и семейств, среди которых наблюдается полиморфизм и межвидовая гибридизация.
Технология получения сухого экстракта очанки коротковолосистой отличается простотой и доступностью, защищена патентом РФ и может быть реализована в условиях галенового производства фармацевтической фабрики.
Унифицированный способ количественного определения флавоноидов в траве трех видов рода Очанка {Е. brevipila, Е. parviflora, Е. х reuter'i) и экстракционных препаратах очанки коротковолосистой, может быть использован для анализа сырья и препаратов других представителей этого рода.
Методика количественного определения суммы иридоидов в траве марьянника лугового, в отличие от известных, позволяет определять вещества группы аукубина и каталпола и может применяться в анализе различных видов сырья, содержащих эти классы иридоидов.
По результатам исследования разработана фармакопейная статья предприятия (ФСП) «Herba Euphrasiae». Проект ФСП, пояснительная записка, таблицы аналитических данных, материалы сравнительного изучения с зарубежными аналогами, инструкция по применению переданы заказчику -Государственному унитарному предприятию «МЕЖБОЛЬНИЧНАЯ АПТЕКА МЕДИЦИНСКОГО ЦЕНТРА УПРАВЛЕНИЯ ДЕЛАМИ ПРЕЗИДЕНТА» и направлены в Фармакопейный комитет. Разработан проект ФС «Herba Melampyri pratensis».
Данные ресурсоведческих исследований очанки коротковолосистой могут использоваться при организации заготовки сырья на территории Пермской области.
Результаты анатомо-морфологических, фитохимических и биологических исследований использованы Пермским НПО «Биомед» (ФГУП «Микроген») при разработке двух препаратов - «Уральская очанка» капли и таблетки (Акт внедрения от 10 марта 2005 г.).
Материалы, опубликованные в патентах, статьях и тезисах конференций, могут быть использованы в учебном процессе при изучении фармакогнозии, фармацевтической технологии, ботаники и физиологии растений, работе интернов, аспирантов, слушателей факультета повышения квалификации провизоров.
СВЯЗЬ ЗАДАЧ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пермской государственной фармацевтической академии (№ Гос. регистрации 01.9.10018875).
АПРОБАЦИЯ. Результаты и основные положения диссертационной работы доложены на научно-практических конференциях Пермской государственной фармацевтической академии (1994 - 2004); областных межвузовских конференциях «Экология: проблемы и пути решения» (Пермь, 1996 - 2002); научно-практических конференциях «Современные тенденции развития фармации» (Самара, 1999) и «Фармацевтическая наука и практика» (Кемерово, 1999); научных конференциях «Актуальные проблемы медицины и фармации» (Курск, 1998, 1999, 2001, 2002); Международной научной конференции «Перспективы развития естественных наук в высшей школе» (Пермь, 2001); Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в 21-м веке», посвященной 105-летию НПО «Биомед» (Пермь, 2003); XI съезде Русского ботанического общества (Новосибирск — Барнаул, 2003); 2-м съезде Российского научного общества фармакологов (Москва, 2003); научной конференции, посвященной 20-летию кафедры фармакогнозии ЯГМА (Ярославль, 2004); научно-практической конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2004); Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005).
ПУБЛИКАЦИИ. Основное содержание работы изложено в 57 работах, из них 22 статьи и два патента.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа состоит из введения, 8 глав, обсуждения результатов исследования, общих выводов, списка литературы, включающего 441 источник, из них 89 зарубежных авторов. Работа изложена на 327 страницах машинописного текста, содержит 117 таблиц и 50 рисунков, 2 схемы. В диссертации имеется приложение, в котором приведены материалы по элементному составу
Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностические исследования и биологическая активность растений семейства норичниковые"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. На основании сравнительного изучения физиологически неоднородных видов сем. норичниковые сформулированы научно-методологические принципы фармакогностического исследования паразитирующих растений, позволяющие анализировать виды, образующие симбионты с различными «растениями - хозяевами».
2. В результате скрининговых фармакологических исследований установлено, что липофильная фракция травы очанки коротковолосистой обладает высоким, а марьянника лугового средним уровнем противолейкемической активности. Выявлены перспективные растения научной медицины, проявляющие высокую противолейкемическую и антитромбиновую активность.
3. Сила и направленность гипотензивного, антикоагулянтного и антимикробного действия автотрофных и паразитирующих видов сем. Норичниковые определяется индивидуальным набором биологически активных веществ и не зависит от способа питания растений. Растения рода Euphrasia L. перспективны для разработки фитопрепаратов с антиоксидантной, антимикробной, антикоагулянтной, гипотензивной, противовоспалительной активностью, а марьянник луговой - с антиагрегантной, гипотензивной и противосудорожной.
4. В золе растений сем. норичниковые обнаружено 22 химических элемента. Средний уровень зольности паразитирующих видов выше, чем автотрофных. В подземных органах паразитирующих растений, по сравнению с автотрофными, отмечается повышенное содержание марганца, стронция и бария, а в надземных - дополнительно меди и цинка. Элементы интенсивного поглощения (Mn, Sr, Ва, Ni, Си, Zn) характерны преимущественно для паразитирующих видов, а среди автотрофных единичны.
5. Запасными питательными веществами семян автотрофных и паразитирующих растений являются жирные масла (24 - 34%). Качественный состав и количественное содержание жирных кислот в маслах определяется типом покоя семян. В составе жирных масел семян с глубоким эндогенным типом покоя преобладает линоленовая, а с неглубоким и промежуточным — линолевая кислота.
6. Установлено, что виды рода Euphrasia L. (Е. brevipila, Е. parviflora, Е. х reuteri, Е. tenuis) имеют близкий химический состав, представленный флавоноидами, иридоидами и фенолкарбоновыми кислотами. Аналогичный состав БАВ имеет марьянник луговой. Выделены и идентифицированы с помощью свидетелей — хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, гиперозид, цинарозид, космоссиин, лютеолин, апигенин, диосметин, аукубин. Константными компонентами, пригодными для использования в аналитических целях, являются - хлорогеновая кислота, цинарозид, аукубин.
Максимальное количество действующих веществ накапливается в фазу цветения — плодоношения.
7. Методом сравнительного анализа морфолого-анатомического строения марьянника лугового и четырех видов рода Euphrasia L. определен комплекс низковариабельных признаков для диагностики цельного и измельченного сырья. Установлены диагностические признаки возможной примеси к видам рода Очанка - зубчатки обыкновенной.
8. Экспериментально обоснована рациональная технология получения экстемпоральных лекарственных форм и галеновых препаратов очанки коротковолосистой и марьянника лугового. На технологию получения сухого экстракта очанки коротковолосистой получен патент РФ «Способ получения средства, обладающего противовоспалительной и гипотензивной активностью». Из экстракта марьянника лугового выделены отдельные фракции БАВ, обладающие высокой антиагрегационной и гипотензивной активностью, способ фракционирования биологически активных веществ защищен патентом РФ.
9. Установлены оптимальные числовые показатели, регламентирующие доброкачественность сырья, на основании которых разработана фармакопейная статья предприятия (ФСП) «Трава Очанки». ФСП, пояснительная записка, таблицы аналитических данных, материалы сравнительного изучения с зарубежными аналогами, инструкция по применению направлены в Фармакопейный комитет. Разработан проект ФС «Трава Марьянника лугового». Материалы фитохимических исследований растений рода Очанка использованы Пермским НПО «Биомед» (ФГУП «Микроген») при разработке и составлении нормативной документации на препараты «Уральская очанка» (капли и таблетки).
10. Разработан унифицированный способ количественного определения суммы флавоноидов в траве и экстракционных препаратах очанки, который позволяет определять содержание флавоноидов в траве трех видов очанки (Е. brevipila, Е. х reuteri, Е. parviflora) в водных и спиртовых извлечениях, субстанции, содержащей комплекс флавоноидов. Для травы марьянника лугового разработан метод количественного определения флавоноидов и иридоидов.
11. Определены синэкологический оптимум и прогноз ресурсов очанки коротковолосистой на территории Пермской области. Прогнозируемый биологический запас равен 8062 кг, эксплуатационный 4676 кг, возможная ежегодная заготовка 2338 кг. У семян очанки коротковолосистой выявлен глубокий эндогенный покой, преодолеваемый влажной, холодовой стратификацией. Установлено, что начальные этапы онтогенеза имеют сложный, донорозависимый характер и невозможны без участия «растений-хозяев».
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2005 года, Петриченко, Василий Михайлович
1. Агрохимические методы исследования почв/ З.Г. Ильковская, А.С. Коновалова, В.В. Пономарева и др.; Под. ред. А.В. Соколова. М.: Наука, 1975.-656 с.
2. Айзенман, Б.Е. Сравнение антибиотиков, образуемых микроорганизмами и высшими растениями (сходство и различия)/ Б.Е. Айзенман// Фитонциды. Киев: Наук, думка, 1981. - С. 22-28.
3. Алексеенко, В.А. Экологическая геохимия/ В.А. Алексеенко. М.: Логос, 2000. - 627с.
4. Анатомическое строение Euphrasia brevipila Burn, et Gremli/ Петриченко B.M., Сухинина T.B., Вотинова Т.И., Фурса Н.С.; Перм. гос. фармацевт, акад.— Пермь, 2002. 13 е.: ил. - Деп. в ВИНИТИ 28.05.2002, № 938.
5. Андреева, Т.И. Антиоксидантная активность * коры калины обыкновенной (Viburnum opulus L.)/ Т.И. Андреева, Е.Н. Комарова, М.С. Юсубов, Е.И. Короткова// Хим.-фарм.-журн. — 2004. — Т. 38, вып. 10. — С. 26 — 28.
6. Антимикробная активность водных извлечений растительного сбора «Полестел» для лечения легочных заболеваний/ Н.Ю. Гребнева, Т.С. Потехина, Е.Е. Лесиовская, Н.П. Харитонова// Растит, ресурсы. — 2000. Т. 36, вып. З.-С. 9-17.
7. Антимикробная активность эфирного масла Artemisia lerchiana Web. ex Stechm., произрастающей в Калмыкии/ Л.П. Цеденова, О.Е. Романов, Т.О. Романова, Е.П. Лаврентьева// Растит, ресурсы. 1999. — Т. 36, вып. 4. — С. 5860.
8. Аркадьева, Г.Е. К антибиотической оценке лекарственных растений тибетской медицины/ Г.Е. Аркадьева, К.Ф. Блинова, М.Н. Комарова// Растит, ресурсы. — 1966. Т. 2, вып. 2. — С. 218-223.
9. Бандюкова, В. А. Антибактериальная активность флавоноидов некоторых видов цветковых растений/ В.А. Бандюкова, B.C. Череватый, И.И. Озимина и др.// Растит, ресурсы. 1987. - Т. 23, вып. 4. - С. 607-611.
10. Бандюкова, В. А. Природные С-гликозиды флавоноидов/ В. А. Бандюкова, В.А. Югин// Химия природ, соединений. 1981. - № 1. - С. 5-24.
11. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений их эфиры и гликозиды/ В.А. Бандюкова// Химия природ, соединений. 1983. - № 2. - С. 271-275.
12. Барковский, В.Ф. Дифференциальный спектрофотометрический анализ/ В.Ф. Барковский, В.И. Ганапольский. М.: Высш. шк., 1969. — 95 с.
13. Барабой, В. А. Растительные фенольные вещества и защита генетического аппарата от повреждений/ В.А. Барабой, Г.Н. Винклер// Цитология и генетика. 1970. - № 4. - С. 359-376.
14. Барабой, В.А. Перекисное окисление и стресс/ В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Голотин, Ю.Д. Кудряшов. СПб.: Наука, 1992. - 148 с.
15. Балуда, В.П. Чувствительность здоровых людей к' аспирину/ В.П. Балуда, К.М. Лакин, С.А. Павлищук// Кардиология. 1981. - № 8. - С. 55-57.
16. Балуда, В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза/ В.П. Балуда, З.С. Баркаган, Е.Д. Гольдберг. Томск, 1980. - 313 с.
17. Балуда, В.П. Система гемостаза и гомеостаза/ В.П. Балуда //Гомеостаз/ Под ред. П.Д. Горизонтова. -М.: Медицина, 1981. С. 461-490.
18. Баркаган, З.С. Геморагические заболевания и синдромы/ З.С. Баркаган. -М.: Медицина, 1988. 527 с.
19. Балицкий, К.П. Лекарственные растения и рак/ К.П. Балицкий, А.Л. Воронцова. Киев: Наукова Думка, 1982. - 376 с.
20. Бейлин, И.Г. Цветковые полупаразиты и паразиты/ И.Г. Бейлин. М.: Наука, 1968.- 119 с.
21. Бейлин, И. Г. Паразитизм и эпифитотиология / И.Г. Бейлин. М., Наука, 1986,-351 с.
22. Березина, М.П. Большой практикум по физиологии человека и животных/ М.П. Березина, Н.Е. Василевская, М.С. Авербах и др.; Под ред. Л.Л. Васильева, И.А. Ветюкова. М.: Высш. шк., 1961. - 675 с.
23. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта/ М.Л. Беленький. Л.: Медгиз, 1963. — 152 с.
24. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте/ Е.Б. Бурлакова, А.В. Алесенко, Е.М. Молочкина и др. М.: Наука, 1975. - 214 с.
25. Блинова, К.Ф. Лекарственные растения тибетской медицины Забайкалья/ К.Ф. Блинова, В.Б. Куваев// Вопросы фармакогнозии. 1965. -Вып.З.-С. 171-183.
26. Бранги, Т.А. К вопросу о механизмах успокаивающего влияния аминокислот на сократительную способность миокарда/ Вопросы фармакологической регуляции деятельности сердца. М., 1969. - С. 84-85.
27. Бруснивер новый лекарственный сбор антимикробного, противовоспалительного и диуретического действия/ С.А. Вичканова, В.В. Адгина, Т.В. Фатеева, Т.Е. Трумые// Человек и лекарство: Тез. 1-го Рос. нац. конгр.-М., 1992.-№ 195.
28. Богоявленский, Н.А. К истории происхождения взглядов у русского народа на опухолевые болезни/ Н.А. Богоявленский// Вопросы онкологии. — 1955.-Т. 1, № 4. С. 106-111.
29. Бондаренко, А.С. Высшие растения продуценты антибиотиков/ А.С. Бондаренко// Фитонциды. - Киев: Наук, думка, 1981. - С. 204-210.
30. Борисова, Н.А. Изучение ресурсов лекарственного растительного сырья для организации их рационального использования и охраны/ Н.А. Борисова,
31. B.Д. Токарева, М.А. Кузнецова// Метод, указания. Курск, 1982. - 50 с.
32. Бурбелло, А.Т. Современные лекарственные средства/ А.Т. Бурбелло, А.В. Шабров, П.П. Динисенко// СПб.: Изд. Дом. «Нева», 2004. - 896 с.
33. Буткус, Д.Ю. Некоторые рецептурные прописи, используемые в тибетской медицине Забайкалья/ Д.Ю. Буткус, К.Ф. Блинова// Вопросы фармакогнозии. JL, 1968. - Вып. 5. - С. 247-263.
34. Вайнагий, И.В. Характерные черты прорастания семян горных растений/ И.В. Вайнагий// Укр. ботан. журн. 1961. - Т. 18, № 4. - С. 74-80.
35. Варлаков, М.Н. Частная патология и терапия тибетской медицины/ М.Н. Варлаков// Сов. Клиника. 1932. - Т. 17, № 1. - С. 12-28.
36. Варлаховская, И. Цитостатики, антиметаболиты и- прочие группы противоопухолевых средств/ И. Варлаховская. М.: Remedium, 1998. - №6.1. C. 44-47.
37. Викторов, С.В. Индикационная геоботаника: Учеб. пособие./ С.В. Викторов, Г.Л. Ремезова. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1988. - 168 с.
38. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах/ Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. — М.: Наука, 1972. — 252 с.
39. Влияние экологических условий на строение очанки коротковолосистой/ Т.И. Вотинова, В.М. Петриченко, О.И. Винокурова, М.Л. Мурзина// Экология: проблемы и пути решения: Материалы V областной межвуз. конф. студентов и аспирантов. Пермь, 1997. - С. 25.
40. Воронова, И.А. Очанка творит чудеса/ И.А. Воронова// Физкультура и спорт. 1998. - № 6. - С. 20-22.
41. Ворончихина, Е.А. Основы ландшафтной хемоэкологии /Е.А. Ворончихина, Е.А. Ларионова. Пермь, 2002. — 146 с.
42. Вотчал, Б.Е. Сердечные гликозиды/ Б.Е. Вотчал, М.Е. Слуцкий. М.: Медицина, 1973. - 200 с.
43. Выделение и анализ природных биологически активных веществ/ Под ред. Е.Е. Сироткиной. Томск: Изд-во Томского университета, 1987. - 184 с.
44. Галишевская, Е.Е. Изучение иридоидов марьянника лугового, произрастающего на Урале/Е.Е. Галишевская, В.М. Петриченко, А.В.
45. Хлебников, Т.Н. Федорова// Перспективы развития естественных наук в высшей школе: Материалы международной науч. конф., посвящ. 80-летию со дня образов. ЕНИ при ПГУ (18-22 сентября 2001г.). Пермь, 2001. - Т. 1. - С. 201-205.
46. Галишевская, Е.Е. Фенольные соединения марьянника лугового, произрастающего на Урале/ Е.Е. Галишевская, В.М. Петриченко, Т.В. Кулешова// Современные вопросы фармакогнозии: Межвуз. сб. науч. тр. с междунар. участием Ярославль, 2004. — С. 73 — 84.
47. Галишевская, Е.Е. Элементный состав марьянника лугового/ Е.Е. Галишевская, В.М. Петриченко// Материалы 67-й межвузовской конференции студентов и молодых ученых. Курск: КГМУ, 2002. - Ч. 2. - С. 110.
48. Галишевская, Е.Е. Фармакогностическое изучение марьянника лугового// Дис. . канд. фармац. наук/ Перм. гос. фармацевт, акад. Пермь, 2004.-152 с.
49. Гармаев, Р.Б. Изучение процесса экстрагирования суммы иридоидов в траве зубчатки поздней/ Р.Б. Гармаев// Фрамацевтичн. журн. 1976. - № 5. — С. 77-80.
50. Гармаев, Р.Б. Зубчатка поздняя/ Р.Б. Гармаев, С.М. Николаев, Ц.А. Найдакова. Новосибирск: Наука, 1982. — 73 с.
51. Гацура, В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ/ В.В. Гацура. М.: Медицина, 1974. — 143 с.
52. Гергардт, А. Гомеопатия практическое руководство/ А. Гергардт. — М.: Двойная звезда, 1993. 298 с.
53. Герберт, И.Я. Противосвертывающее действие полифенольной фракции из надземной части медуницы мягчайшей/ И.Я. Герберт, П.И. Левен, А.Ш. Бышевский// Растит, ресурсы. 1988. - Т. 22, № 3. - С. 429 - 434.
54. Герберт, И.Я. К изучению антикоагулянтных свойств медуницы мягчайшей/ И.Я. Герберт// Актуальные вопросы теоретич. и клинич. медицины: Тез. докл. конф. мол. ученых. Тюмень, 1983. - С. 120-121.
55. Глазовская, М.А. Техногенез и проблемы ландшафтно-геохимического прогнозирования/ М.А. Глазовская// Вест. Моск. ун-та. Сер. География. -1968.-№ 1.-С. 34-36.
56. Голышенков, П.П. Лекарственные растения и их использование / П.П. Голышенков. Саранск, 1990. - С. 221-235.
57. Гольдберг, Е.Д., Зуева, Е.П. Препараты растений в комплексной терапии злокачественных новообразований/ Е.Д. Гольдберг, Е.П. Зуева. Томск: Изд-во Томского ун-та, 2000. - 129 с.
58. Говорухин, B.C. Флора Урала/ B.C. Говорухин. Свердловск: Обл. изд-во, 1937.-536 с.
59. Горчаковский, П.Л. Растительный мир высокогорного Урала / П.Л. Горчаковский. — М.: Наука, 1975. — 283 с.
60. Горышина, Т.К. Экология растений/ Т.К. Горышина. — М.: Высш. школа, 1979.-368 с.
61. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. - М.: Медицина, 1987. — Вып. 1. Общие методы анализа. - 334 с.
62. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. - М.: Медицина, 1990. — Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. - 398 с.
63. Гончарова, Т. А. Энциклопедия лекарственных растений: Лечение травами/ Т.А. Гончарова. М.: Изд. дом МПС, 1997. - Т. 1. - 560 с.
64. ГОСТ 12.1.007 76 Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. - М.: Издательство стандартов, 1977. — 6 с.
65. ГОСТ 30418 96. Масла растительные. Методы определения жирнокислотного состава. — М.: Издательство стандартов, 1996. - 5 с.
66. ГОСТ 26593 85. Масла растительные. Метод определения перекисного числа. - М.: Издательство стандартов, 1985. - 6 с.
67. ГОСТ 12038 84. Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения всхожести. - М.: Издательство стандартов, 1984. — 7 с.
68. Гришина, Е.А. Перспективы использования очанки коротковолосистой при остром гепатите/ Е.А. Гришина, А.В. Гришин, Н.В. Кармацкая// Лекарственные растения Алтайского края. Томск, 1986. — С. 46-49.
69. Гринкевич, Н.И. Геохимическая экология лекарственных растений — новое направление в фармакогнозии/ Н.И. Гринкевич, И.А. Баландина// Фармация. 1982. - № 3. - С. 17-19.
70. Гринцевич, О.М. Лекарственные растения Западной области/ О.М. Гринцевич // Материалы к изучению естественных производительных сил Западной области. Смоленск, 1933. - Вып. 3. - С. 19-127.
71. Гриффит, В. Витамины, травы, минералы и пищевые добавки: Справочник/ В. Гриффит; Пер. с англ. К.Ткаченко. М.:ФАИР ПРЕСС, 2000. -485 с.
72. Гром, И.И. Сведения о лекарственных растениях народной медицины Коми АССР/ И.И. Гром // Вопросы фармакогнозии. JL, 1965. - Вып. 3. - С. 199-214.
73. Гусев, Н.Ф. Вероники Кунгурско — Красноуфимской лесостепи Предуралья и перспективы их использования: Автореф. дис. . кан. биол. наук/ Н.Ф. Гусев. Пермь, 1976. - 26 с.
74. Гусев, Н.Ф. Вероники Кунгурско — Красноуфимской лесостепи Предуралья и перспективы их использования// Дис. . канд. биол. наук/ Перм. гос. фармацевт, ин-т. Пермь, 1976. -273 с.
75. Гусева, А.П. Применение в тибетской медицине забайкальских растений/ А.П. Гусева// Вопросы фармакогнозии. 1961. - Вып. 1. - С. 363 -366.
76. Давлетов, Э.Г. К фармакологии зубчатки поздней/ Э.Г. Давлетов, Х.М. Насыров// Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения Башкирии. — Уфа, 1971. вып. 3. - С. 109-111.
77. Далакишвили, Ц.М. Химическое изучение биологически активных растительных липидов: Автореф. дисс. . доктора фармац. наук/ Ц.М. Далакишвили. — Тбилиси, 1993. 47 с.
78. Дамиров, И.А. Лекарственные растения, применяемые при язвах, фурункулах и местных воспалениях (по материалам народной медицины)/ И.А. Дамиров// Лекарст. терапия гнойных инфекций: Сб. науч. тр. Баку, 1988.-С. 18.
79. Данилевский, Н.Ф. Фитотерапия в стоматологии/ Н.Ф. Данилевский, Т.В. Зинченко, Н.А. Кодола. — Киев: Здоровья, 1984. — 13 с.
80. Деготь, А.В. Фитохимическое исследование некоторых представителей семейства норичниковых: Дис. . канд. фармац. наук/ Запорожский мед. ин-т. Запорожье, 1971. - 198 с.
81. Дьоготь, А.В. 1ридо1ди в родиш ранникових/ А.В. Деготь, B.J. Литвиненко, J. Г. Черных// Фармац. журнал. 1972. — Т. 27, № 1. - С. 66 - 68.
82. Деготь, А.В. Иридоиды из Odontites serotina (Lam.) Dum./A.B. Деготь,
83. B.И. Литвиненко, И.П. Ковалев// Растит, ресурсы. — 1971. Т. 7, вып. 3. —1. C. 390-396.
84. Деготь, А.В. Распространение и возможность использования в медицине иридоидов семейства норичниковых /А.В. Деготь, Н.С. Фурса, В.И. Литвиненко// Фармац. журн. 1984. - № 5. - С. 36-41.
85. Деготь, А.В. Иридоды вегетативных и репродуктивных органов и их частей зубчатки поздней/ А.В. Деготь, Н.С. Фурса, В.И. Литвиненко// Фармац. журн. 1986. - № 1. - С. 72-73.
86. Деготь, А.В. Компоненты сухого экстракта Odontites serotina! А.В. Деготь, Р.Б. Гармаев, Н.С. Фурса// Химия природ, соедин. 1979. - № 3. - С. 421-422.
87. Деготь, А.В. Предварительное химическое исследование зубчатки поздней/ А.В. Деготь// Химические исследования в фармации. Киев, 1970. — С. 151-152.
88. Дьоготь, А.В. Методи видшення та дослщження 1ридо1д1в/ А.В. Дьоготь, М.С. Фурса, B.J. Литвиненко// Фармац. журн. 1982. - Т. 3, № 3. - С.42-46.
89. Дерябина, Ф.И. Лекарственные растения и сборы, применяемые в народной медицине Коми-Пермяцкого национального округа / Ф.И. Дерябина // Вопросы фармакогнозии. Л., 1965. - Вып. 3. - С. 215 - 224.
90. Джисман, Т. Биогенез фенолов растительного происхождения/ Т. Джисман // Биогенез природных соединений. М., 1965. - С. 482 - 527.
91. Доля, B.C. Жирные масла семян некоторых видов сем. Scrophulariaceae и состав фенолов семян двух видов Verbascum L. / B.C. Доля,"О.В. Литвиненко // Растит, ресурсы. 1996. - Т.32, вып. 4. - С. 44 - 52.
92. Еленевский, А.Г. Систематика и география вероник СССР и прилежащих стран/ А.Г. Еленевский. М.: Наука, 1978. - 259 с.
93. Желчегонная активность отваров из некоторых растений Забайкалья/ С.М. Баторова, З.Г. Самбуев, С.М. Николаев, Ц.А. Найдакова// Растит, ресурсы. 1983. - Т. 19, вып. 3. - С. 380-383.
94. Жизнь растений: В 6 т. Цветковые растения/ Под ред. А.Л. Тахтаджана — М.: Просвещение, 1981. — Т. 5, ч. 2. 511 с.
95. Залесов, B.C. О противосудорожных свойствах производных бензиловой и дифенилуксусной кислоты./ B.C. Залесов// Фармакол. и токсикол. — 1963. -Т. 26,№4. -С. 418-431.
96. Заворожнов, В.И. Лекарственные растения Центрального Черноземья/ В.И. Заворожнов, Р.И. Китаев, К.Ф. Хмелев. 3-е изд. - Воронеж, 1977. - 448 с.
97. Зайцев, Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике/ Г.Н. Зайцев. М.: Наука, 1984. - 434 с.
98. Запрометов, М.Н. Биохимия катехинов (Биосинтез, превращения и практическое использование)/ М.Н. Запрометов. М.: Наука, 1964. — 295 с.
99. Запрометов, М.Н. Основы биохимии фенольных соединений: Учеб. пособие для биол. специальностей ун-тов/ М.Н. Запрометов. — М.: Высш. шк., 1974.-214 с.
100. Запрометов, М.Н. Фенольные соединения и методы их исследования / М.Н. Запрометов // Биохимические методы в физиологии растений. М., 1971.-С. 185-207.
101. Зарудий, Ф.С. К фармакологии марьянника лугового / Ф.С. Зарудий // Материалы 1-й объединенной науч. студ. конф. мед. вузов. Свердловск, 1961.-С. 5-6.
102. Зарудий, Ф.С. Нейролептические свойства марьянника / Ф.С. Зарудий // Вопросы клинико-экспериментального изучения действия психотропных средств. Уфа, 1967. - С. 117- 121.
103. Зарудий, Ф.С. К фармакологии марьянника гребенчатого: Автореф. дис. . канд. мед. наук. / Ф.С. Зарудий. Уфа, 1967. - 17 с.
104. Захаров, A.M. Действующие вещества некоторых видов растений флоры Тянь-Шаня/ A.M. Захаров, С.М. Кабанов// Аптеч. дело. 1964. - Т. 13, № 5. -С. 46-49.
105. Зеленский, С.Е. Лекарственные растения СССР/ С.Е. Зеленский. — 3-е изд. М.: Медгиз, 1958. - 610 с.
106. Земцова, Г.Н. Источники получения лютеолина и его 7-глюкозида/ Г.Н. Земцова, Г.И. Геращенко, В.А. Компанцев, А.Л. Шинкаренко// Фармация. — 1972. -№3.- С. 37-39.
107. Зозуля, Р.Н. Жаропонижающее и сердечно-сосудистое действие зубчатки Odontites serotina и остролодочника — Oxytrropis glandulosa/ Р.Н. Зозуля// Материалы исследований лекарственных средств и сырья. — Л., 1959. -С. 164-169.
108. Иванов, С.Л. Климатическая теория образования органических веществ/ С.Л. Иванов. -М.: Изд-во АН СССР, 1961. С. 87.
109. Игошина, К.Н. Флора горных и равнинных тундр и редколесий Урала/ К.Н. Игошина// Растения севера Сибири и Дальнего Востока. М.; Л.: Сельхозгиз, 1966.-С. 135-223.
110. Изучение тибетских многокомпонентных лекарственных смесей/ И.С. Хапкин, Н.Н. Федотовских, Е.Л. Толмачева и др.// Растит, ресурсы. — 1985. — Т. 21, вып. 2.-С. 187-193.
111. Йорданов, Д. Фитотерапия. Лечение лекарственными травами/Д.v>
112. Йорданов, П. Николов, А. Бойчинов — 4-е изд. — София: Медицина и физкультура, 1976. 349 с.
113. Кабата-Пендиас, А. Микроэлементы в почвах и растениях/ А. Кабата-Пендиас, X. Пендиас М.: Мир, 1989. - 439 с.
114. Карасек, Ф. Введение в хромато-масс-спектрометрию/ Ф. Карасек, Р. Клемент. -М.: Мир, 1993.-237 с.
115. Каримова, С.Г. Действующие вещества марьянника лугового {Melampyrum pratense) и марьянника гребенчатого (Melampyrum cristatum) / С.Г. Каримова// Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения в Башкирии. Уфа, 1961, Вып. 1. - С. 137-142.
116. Каримова, С.Г. Гликозидная фракция марьянника гребенчатого и ее фармакологические свойства / С.Г. Каримова, Д.Н. Лазарева //Материалы совещ. по растительным ресурсам Южного Урала. Уфа, 1963. - С. 11-13.
117. Каримова, С.Г. Биохимические особенности марьянника гребенчатого/ С.Г. Каримова// Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения в Башкирии. Казань, 1968. - Вып. 2. - С.111-125.
118. Каримова, С.Г. Предварительное химическое изучение некоторых видов сем. Норичниковых, произрастающих в Башкирии / С.Г. Каримова // Растит, ресурсы. 1969. - Т.5, вып. 1. - С. 47 - 54.
119. Каримова, С.Г. О химическом составе и фармакологических свойствах марьянника гребенчатого/ С.Г. Каримова// Растит, ресурсы. 1969. — Т. 5, вып. 3.-С. 416-421.
120. Каримова, С.Г. Биологические и биохимические особенности некоторых представителей семейства норичниковых (Scrophulariaceae)/ С.Г. Каримова// Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения в Башкирии. Уфа, 1974.-Вып. 4.-С. 89- 105.
121. Каримова, С.Г. Интродукция некоторых норичниковых в Ботаническом саду Института биологии в Башкирии/ С.Г. Каримова// Ресурсы и интродукция растений в Башкирии. — Уфа, 1983 С. 63-70.
122. Кернер, А. Жизнь растений/ А. Кернер. Спб.: Просвещение, 1903. - Т. 1.-773 с.
123. Кибаев, O.K. Природные фенолы перспективный класс противоопухолевых и потенцируемых соединений/ O.K. Кибаев, С.Б. Балмуханов. - М.: Медицина, 1975. - 189 с.
124. Кит, С.М. Влияние вытяжек некоторых растений Прикарпатья на процесс свертывания крови/ С.М. Кит, Г.П. Кравчук// Фармацевт, журнал. -1979.-Вып. 4.-С. 55-58.
125. Кияшко, В.Г. Фармакогностическое изучение очанки лекарственной/В.Г. Кияшко// Фармация в Забайкалье. Чита, 1972. - С. 162166.
126. Клышев, JI.К. Флавоноиды растений (Распространение, физико-химические свойства, методы исследования)/ Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 220 с.
127. Клер, О.Е. О некоторых лечебных травах Среднего Урала/ О.Е. Клер // Сб. Зап. Урал. о-ва. любителей естествознания. Екатеринбург, 1878. - Т. 4. -С. 51 - 105.
128. Кретович, В.Л. Биохимия растений/ В.Л. Кретович. М.: Высш. шк., 1980.-445 с.
129. Кривоногов, В.П. Синтез и антиоксидантная активность пиримидиновых ациклонуклеозидов/ В.П. Кривоногов, В.А. Мышкин, Г.А. Сивкова// Хим.-фарм. журн. 2001. - Т. 35, вып. 8. - С. 8-11.
130. Ковалевский, А.Л. Биогеохимия растений/ А.Л. Ковалевский. — Новосибирск: Наука, 1991. -288 с.
131. Колесников, П.А. Фенольные вещества в биологических окислительно-восстановительных системах/ П.А. Колесников// Фенол, соединения и их биолог, функция. М., 1968. — С. 139-145.
132. Конопля, А.И. Использование лекарственных препаратов растительного происхождения в качестве иммуномодуляторов./ А.И Конопля, Г.А. Дрозд, Н.Н. Кудровская// Фармация. 1988. - Т. 37, № 2. - С. 17-19.
133. Колла, В.Э. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных/ В.Э. Колла, Б.Я. Сыропятов. М.: Медицина, 1998. - 263 с.
134. Колхир, В.К. Растительные антикоогулянты/ В.К. Колхир, Г.С. Сакович, В.А. Зюзин// II Российский национальный конгр. «Человек и лекарство». — М., 1995.-С. 236.
135. Короткова, Е.И. Определение антиоксидантной активности экстрактов растительного сырья методом катодной вольтамперометрии/ Е.И. Короткова, О.А. Аврамчик, М.С. Юсубов и др.// Хим.-фарм. журн. - 2003. - Т. 37, вып. 9.-С. 55-56.
136. Ковалевский, А.Л. Биогеохимия растений / А.Л. Ковалевский. Улан-Удэ, 1969. - С. 195-214.
137. Ковалев, В.Г. Нейроактивные аминокислоты и регуляция кровообращения/ В.Г. Ковалев// Тр. Волгоградского мед. ин^та. Волгоград, 1977. - Т. 30, вып. 3. - С. 13 - 16.
138. Куваев, В.Б. Предварительная химическая оценка лекарственных растений тибетской медицины, произрастающих в Забайкалье/ В.Б. Куваев, К.Ф. Блинова//Вопросы фармакогнозии. 1961. - Вып. 1. - С. 213-262.
139. Кучеров, Е.В. Медоносные растения Башкирии/ Е.В. Кучеров, С.М. Сираева. М., 1980. - 127 с.
140. Кучеров, Е.В. Марьянник новое лекарственное растение/ Е.В. Кучеров, С.Г. Каримова, Д.Н. Лазарева и др.// Вопросы рационального использования растительных ресурсов Южного Урала. — Уфа, 1963. — С. 24— 27.
141. Кушаковский, М.С. Артериальная гипертония/ М.С. Кушаковский, Н.В. Иванова. Л., 1988. - 197 с.
142. Куркин, В.А. Антиоксидантные свойства флаволигнанов плодов Silybum marianum (L.) Gaertn/B.A. Куркин, A.A. Лебедев, Г.Г. Запесочная// Раст. ресурсы. 2003. - Т. 39, № 1. - С. 89-93.
143. Кучеров, Е.В. Наперстянка крупноцветковая на Урале и ее рациональное использование/ Е.В. Кучеров, Л.Г. Щелокова. Уфа: БФАН СССР, 1987.- 124 с.
144. Лаврецкая, Э.Ф. Фармакологическая регуляция психических процессов/ Э.Ф. Лаврецкая. М.: Наука, 1985. - 289 с.
145. Ладынина, Е.А. Травник для всех/ Е.А. Ладынина. М.: Мосгорпечать, 1993.-288 с.
146. Лазарева, Д.Н. К фармакологии марьянника/ Д.Н. Лазарева, Ф.С. Зарудий// Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения в Башкирии. Уфа: БФАН СССР. - 1961, вып. 1. - С. 28-33.
147. Лазарева, Д.Н. О нейролептическом действии марьянника / Д.Н. Лазарева, Г.Г. Максимов, Ф.С. Зарудий, Н.З. Изгина // Вопросы рационального использования растительных ресурсов Южного Урала. Уфа, 1963. - С.29-31.
148. Лазарева, Д.Н. О нейротропном действии марьянника гребенчатого / Д.Н. Лазарева, С.Г. Каримова, Ф.С. Зарудий, Г.Г. Максимов, Н.З. Изгина // Фармакология и токсикология. 1966. - Т. 29, №2. - С. 175 - 177.
149. Лакин, К.М. Ингибиторы агрегации тромбоцитов/ К.М. Лакин, В.А. Макаров, Н.В. Новикова// Фармакол. и токсикол. 1983. - № 3. — С. 113-126.
150. Лакин, К.М. Фармакологическая регуляция жидкого состояния крови/ К.М. Лакин, В.П. Балуда// Актуальные проблемы "гемостазиологии. Молекулярно — биологические и физиологические аспекты. — М.: Наука, 1981. -С. 430-461.
151. Ларин, И.В. Кормовые растения сенокосов и пастбищ СССР / И.В. Ларин, Ш.М. Агабабян, Т.А. Работнов и др.// В 3 т. М.; Л., 1951. - Т. 2. - 948 е.; 1956. - Т. 3. - 879 с.
152. Ларин, И.В. Кормовые растения СССР/ И.В. Ларин// Растит, сырье СССР: В 2 т. М.; Л., 1957. - Т. 2. - С. 152-325.
153. Лекарственные растения дикорастущие/ Под ред. А.Ф. Гаммерман, И.Д. Юркевича. 4-е изд. - Минск, 1968. — 390 с.
154. Лекарственные растения и их применение/ Под ред. И.Д. Юркевича, И.Д. Мишенина. 7-е изд. - Минск, 1976. - 590 с.
155. Листов, С.А. Методы элементного анализа в стандартизации и контроле качества лекарственных средств: Автореф. дисс. . докт. фармац. наук/ С.А. Листов. М„ 1990. - 38 с.
156. Ловкова, М.Я. Почему растения лечат? / М.Я. Ловкова, A.M. Рабинович, С.М. Пономарева и др. М.: Наука, 1989. - 256 с.
157. Ловцева, Е.А. Совершенствование способов контроля качества лекарственных средств производных пурина N — гликозидной структуры: Автореф. . канд. дис.фармац. наук/ Е.А. Ловцева. Пятигорск, 1993. — 18 с.
158. Луговые травянистые растения. Биология и охрана: Справ./ И.А. Губанов, К.В. Киселева, B.C. Новиков, В.Н. Тихомиров — М.: Агропромиздат, 1990.-183 с.
159. Лычев, В.Г. Диагностика и лечение диссименированного внутрисосудистого свертывания крови/ В.Г. Лычев. М.: Медицина, 1993. -160 с.
160. Ляпина, Л.А. Антикоагулянтно фибринолитические и гипогликемические эффекты препаратов из высших растений /Л.А. Ляпина, В.Е. Пасторова, B.C. Новиков и др.// Вестник Моск. ун-та. Сер. 16. Биология. -2001.-№2. -С. 3-7.
161. Ляпина, Л.А. Противосвертывающие и гемостатические компоненты растений (обзор)/ Л.А. Ляпина// Новости науки и техники. Гематология, 1997. -№ 3. С. 2-6.
162. Макарова, М.Н. Антирадикальная активность флавоноидов и их комбинации с другими антиоксидантами/ М.Н. Макарова, В.Г. Макаров, И.Г. Зенкевич// Фармация. 2004. - № 2. - С. 30-32.
163. Макро- и микроэлементный состав Euphrasia brevipila Burnat. et Gremli/ B.M. Петриченко, T.B. Сухинина, Н.С. Фурса и др.// Растит, ресурсы. — 2003. — Т. 39, вып. 3. С. 111-114.
164. Маркман, А.Л. Химия липидов/ А.Л. Маркман. Ташкент, 1963. — Вып. 1.-176 с.
165. Марголис, М.Г. Лекарственные растения в офтальмологии/ М.Г. Марголис// Вестн. офтальмологии. — 1976. — № 6. — С. 81-82.
166. Массагетов, П.С. Поиск алкалоидоносных растений в Средней Азии/ П.С. Массагетов// Тр. Всесоюз. ин-та лекарств, и аромат, растений, 1947. — Вып. 9. С. 3-38.
167. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. Часть II/ М.Д. Машковский М., Медицина, 1993. - 688 с.
168. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. 10-е изд./ М.Д. Машковский М., 1986. - Т. 1. - 624 е.; Т.2. - 575 с.
169. Мерзлек, М.Н. Активированный кислород и окислительные процессы в мембранах растительной клетки. Физиология растений/М.Н. Мерзлек; Под ред. И. И. Иванова. М., 1989. - Т. 6. - 165 с.
170. Мельникова, И.В. Антиоксидантная и антирадикальная активность видов Rosa L. флоры Приморского края/ И.В. Мельникова, Н.И. Кулеш, Е.А. Кольцова, П.Г. Горовой// Растит, ресурсы. — 2002. — Т. 38, вып. 1. — С. 25-33.
171. Методика бумажной хроматографии Сахаров, органических и аминокислот из растений. М.: Изд-во АН СССР, 1962. - 86 с.
172. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ. М.,1982. - 72 с.
173. Методические указания по семеноведению интродуцентов/ Под ред. Н.В. Цицина. М.: Наука, 1980. - 64 с.
174. Методы экспериментальной химиотерапии. 2-е изд./ Под ред. Г.Н. Першина. -М.: Медицина, 1971. - 539 с.
175. Микроэлементный состав Melampyrum pratense L. в окрестностях города Перми/ В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская, Н.С. Фурса, А.Ю. Запоров// Растит, ресурсы. 2003. - Т. 39, вып. 4. - С. 104 - 108.
176. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия: Учеб./ Д.А. Муравьева. М.: Медицина, 1981.-530 с.
177. Муравьева, Д.А. Содержание минеральных веществ в побегах омелы белой (Viscum album L.) в зависимости от дерева хозяина и состава почвы/ Д.А. Муравьева, О.И. Попов// Фармация. -1992. -Т. 41, № 1 С. 25-27.
178. Муравьева, В.И. Исследование растений, применяемых в народной медицине на содержание аскорбиновой кислоты / В.И. Муравьева, А.И. Баньковский //Тр. Всесоюз. н.-и. ин-та. лекарств, и аромат, растений. — М., 1947.-Вып. 9.-С. 39-118.
179. Муратов, С.Н. Принципы лекарственной терапии злокачественных опухолей в тибетской медицине/ С.Н. Муратов// Проблемы освоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего Востока. — Новосибирск, 1983. -С. 256-258.
180. Можеренков, В.П. Фитотерапия глазных болезней/ В.П. Можеренков, Б.В. Агофонов// Офтальмол. журн. 1978. -№ 5. - С. 366-369.
181. Морфолого-анатомическое строение некоторых видов очанки/ Т.И. Вотинова, В.М. Петриченко, И.Г. Тарасова, О.И. Винокурова// Материалы науч.-практ. конф. «80 лет фармацевтическому образованию на Урале: итоги и перспективы». — Пермь, 1998. С. 150.
182. Мнацаканян, В.А. Иридоидные гликозиды/ В.А. Мнацаканян. Ереван, 1986.- 187 с.
183. Минкин, Р.Б. Болезни сердечно-сосудистой системы/ Р.Б. Минкин. -СПб.: Акация, 1994. 272 с.
184. Михайлов, И.В. Справочник по гомеопатии/ И.В. Михайлов. М.: Медицина, 2000. - 120 с.
185. Насыров, Х.М. Фармакологические свойства некоторых растений семейства норичниковых, произрастающих в Башкирии: Автореф. дис. . канд. мед. наук/ Х.М. Насыров. Уфа, 1970. - 22 с.
186. Насыров, Х.М. Антибактериальные свойства некоторых растений семейства норичниковых/ Х.М. Насыров, Н.Н. Ворошилова, Ю.А. Глухарев// Дикорастущие и интродуцируемые полезые растения в Башкирии. Уфа, 1971. - Вып. 3.- С. 112-116.
187. Насыров, Х.М. Фармакологические свойства некоторых растений семейства норичниковых, произрастающих в Башкирии/ Х.М. Насыров// Фармакология и токсикология. 1971. — Т. 34, № 6. - С. 733-735.
188. Насыров, Х.М. О нейротропном действии растений сем-ва Норичниковых / X. М. Насыров, Ф.А. Зарудий// Современные проблемы фармакологии. — Киев, 1971. С. 85-93.
189. Насыров, Х.М. К фармакологии некоторых растений семейства норичниковых, произрастающих в Башкирии/ Х.М. Насыров// Материалы Всесоюз. науч. конф. по фармакол. и клинич. изуч. лекарств, препар. из растений. -М., 1972.-С. 113-116.
190. Никитина, B.C. Флавоноиды листьев малины и ежевики и их антиоксидантная активность/ B.C. Никитина, Г.В. Шендель, А.Я. Герчиков, Н.Б. Ефеменко// Хим.-фарм.-журн. 2000. — Т. 34, вып. 11. — С. 25-27.
191. Николаева, В.Г. К фармакогностическому изучению видов рода погремок, произрастающих в Белоруссии/ В.Г. Николаева/ Сб. научн. тр. Витеб. мед. ин-т, 1968. № 12. - С. 412-414.
192. Николаева, М.Г. Справочник по проращиванию покоящихся семян/ М.Г. Николаева, М.В. Разумова, В.Н. Гладкова. Д.: Наука. Ленингр. отд-ние, 1985.-348 с.
193. Николаева, М.Г. Физиология глубокого покоя семян/ М.Г. Николаева. — Л.: Наука. Ленингр. отд-ние, 1967. 207 с.
194. Николаева, М.Г. Классификация типов органического покоя семян/ М.Г. Николаева// Физиолого-бохимические проблемы семеноведения и семеноводства: научн. тр. Иркутск, 1973. - Ч. 1. — С. 65-77.
195. Николаев, С.М. Полифенольные комплексы при повреждени гепатобилиарной системы/ С.М. Николаев// Биологическое действие веществ природного происхождения. Улан-Удэ, 1983.-С. 149-154.
196. Никитичева, З.И. О взаимосвязях в развитии эндосперма и тканей семязачатка у видов семейства Scrophulariaceae и Orobanchaceae/ З.И. НикитичеваII Ботан. журнал. 1979. - Т. 64, № 11. - С. 1567-1581.
197. Ноздрюхина, Л.Р. Нарушение микроэлементного состава и пути его коррекции/ Л.Р. Ноздрюхина, Н.И. Гринкевич. М.: Медицина, 1980. — 278 с.
198. Носаль, М.А. Лекарственные растения и способы их применения в народе/ М.А. Носаль, И.М. Носаль. — Киев: Здоровье, 1960. — 256 с.
199. Овеснов, С. А. Конспект флоры Пермской области/ С.А. Овеснов. — Пермь: Изд-во Перм. гос. ун-та, 1997. 252 с.
200. Овчинников, Ю.М. Лечение растениями в оториноларингологии/ Ю.М. Овчинников, А.П. Петров// Вестн. Оториноларингологии. М., 1985. - № 3. — С. 88-91.
201. Окуджава, В.М. Нейрофизиологические механизмы эпилептической активности/ В.М. Окуджава. Тбилиси, 1969. - 224 с.
202. Определитель сосудистых растений Урала. М.: Наука, 1994. - 525 с.
203. Органикум. Практкум по органической химии (Перевод с нем.). М.: Мир, 1979.-Т. 1.-453 с.
204. Орлова, JI.B. Лекарственные растения и сборы, применяемые в народной медицине Белоруссии/ Л.В. Орлова// Материалы 1-го съезда фармацевтов БССР. Минск, 1966. - С. 52-60.
205. Отраслевой стандарт 91500. 05. 001. 00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». — Введ. с 01.11.01. - М.: Изд.-во стандартов, 2001. - 48 с.
206. Оценка антиагрегационной активности лекарственных средств. Методические рекомендации. — М., 1981. 27 с.
207. Панькова, И.А. Травнистые С-витаминоносы/ И.А. Панькова// Тр. Ботан. ин-та АН СССР. Сер. 5. Растит, сырье, 1949. Вып. 2. - С. 292-478.
208. Паушева, З.П. Практикум по цитологии растений/ З.П. Паушева. — М., 1988.-270 с.
209. Перельман, А.И. Геохимия ландшафта/ А.И. Перельман. М.: Высш. шк., 1975.-341 с.
210. Петриченко, В.М. Исследование марьянника лугового, произрастающего на Урале/ В.М. Петриченко, В.Б. Марценюк// Актуальные вопросы фармациии: Материалы межвуз. науч.- практ. конф. ПГФИ. Пермь, 1995.-С. 102.
211. Петриченко, В.М. Антимикробная активность извлечений из трех видов Euphrasia L./ В.М. Петриченко, Т.В. Сухинина, Т.Ф. Одегова и др.// Растит, ресурсы. 2002. - Т. 38, вып. 3. - С. 82 - 86.
212. Петриченко, В.М. Токсичность экстракционных препаратов марьянника лугового/ В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская, Б.Я. Сыропятов// Сборник работ 68-й итоговой сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук
213. Центрально-Черноземного научного центра РАМН. — Курск, 2002. — Ч. 2. — С. 203.
214. Петриченко, В.М. Спектрофотометрический метод определения содержания флавоноидов в Euphrasia brevipila Burn, et Gremli/ В.М. Петриченко, Т.В. Сухинина, Н.С. Фурса// Растит, ресурсы. 2002. - Т. 38, вып. 2.-С. 104-109
215. Петриченко, В.М. Анатомо-морфологическое строение Melampyrum pratense L., произрастающего в Пермской области/В.М. Петриченко, В.Б. Марценюк, Е.Е. Галишевская; Перм. гос. фармацевт, акад. — Пермь, 2003. — 21 е.: ил. Деп. в ВИНИТИ 15.05.2003, № 958.
216. Петриченко, В.М. Состав жирных кислот трех видов Verbascum L., произрастающих в Пермской области/ В.М. Петриченко, Т.А. Разумовская//Растит. ресурсы. — 2004. Т. 40, вып. 3. - С. 72-76.
217. Петриченко, В.М. Анатомическое строение Odontites serotina (Lam.) Dum., произрастающей в Пермской области/ В.М. Петриченко, Т.В.
218. Сухинина; Перм. гос. фармацевт, акад. Пермь, 2004. - 16 е.: ил. - Деп. В ВИНИТИ 09.06.2004, № 975.
219. Петриченко, В.М. Количественное определение суммы флавоноидов в траве марьянника лугового/ В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская// Фармация. — 2004. 1.-С. 24-25.
220. Поддубная-Арнольди, В. А. Характеристика покрытосеменных растений по цитоэмбриологическим признакам/ В.А. Поддубная-Арнольди. — М.: Наука, 1982.-352 с.
221. Поддубная-Арнольди, В. А. Общая эмбриология покрытосемянных растений/ В.А. Поддубная-Арнольди. М.: Наука, 1964. — 482 с.
222. Показатели качества травы марьянника лугового/ В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская, Л.С. Макарова, С.Н. Лепина// Материалы 67-й межвуз. науч. конф. Курск, 2002. - Ч. 2. - С. 137-138.
223. Положий, А.В. Лекарственные и перспективные для медицины растения Хакасии/ А.В. Положий. Томск: Томск, кн. изд-во, 1973. - 290 с.
224. Полная энциклопедия народной медицины. М.: АНЕ, 1996. - 752 с.
225. Полякова, Л.В. Флавоноидный комплекс Astragalus austrosibiricus Schischk. в природных популяциях Алтая/ Л.В. Полякова, Э.А. Ершова// Растит, ресурсы. 1996. - Вып. 1-2. - С. 81-87.
226. Поляковская, М. Лесные лекарственные растения/ М. Поляковская. — Варшава: Гос. изд-во с.-х. и лесн. лит., 1986. — 251 с.
227. Пономарев, В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья/ В.Д. Пономарев. М.: Медицина, 1976. - 204 с.
228. Попов, М.Г. Флора Средней Сибири. Т. 2/ М.Г. Попов. М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1959.-663 с.
229. Попов, А.И. Изучение влияния антропогенных факторов на элементный состав и ресурсы лекарственных растений Кемеровской области и республики Тыва: Автореф. дис. . доктора фармац. наук/ А.И. Попов. — Москва, 1995. -46 с.
230. Практическая фитотерапия: Полн. энцикл./ Т.А. Виноградова, Б.Н. Гажев, В.М. Виноградов, В.К. Мартынов. -М.: Олма-Пресс, 1998. 499 с.
231. Практикум по селекции и семеноводству полевых культур/ А.П. Горин, М.С. Дунин, Ю.Б. Коновалов и др.: Под ред. А.П. Горина. М., 1968. - 439 с.
232. Прозина, М. Н. Ботаническая микротехника/ М.Н. Прозина. М.: Высш. шк., 1960, - 260 с.
233. Прозоровский, В.В. Экспресс — метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки/ В.В. Прозоровский, М.П. Прозоровская, В.М. Демченко// Фармакол. и токсикол. 1978. - № 4. - С. 497 - 552.
234. Рабинович, М.И. Влияние марьянника лугового на сердечнососудистую деятельность/ М.И. Рабинович// Материалы 3-й Уральской конференции физиологов, биохимиков и фармакологов, посвященной 40-летию Удмуртской АССР. Ижевск, 1960. - С. 192-193.
235. Рабинович, М.И. К фармакологической характеристике некоторых лекарственных растений из семейства Норичниковых/ М.И. Рабинович// Материалы IX Всесоюзной фармакологической конференции. — Свердловск, 1961.-С. 211-212.
236. Рабинович, М.И. Семейство норичниковых источник получения новых растений сердечно-сосудистого действия /М.И. Рабинович, А.И. Шретер, А.В. Ермолин, З.Я. Глазырина, Л.Ф. Буравова // Тр. Троицкого вет. ин-та, 1969. -Т.13.-С. 74-81.
237. Рабинович, М.И. Семейство норичниковых источник новых растений сердечно-сосудистого действия/ М.И. Рабинович, А.И. Шретер, А.В. Ермолин, З.Я. Глазырина, Л.Ф. Буравова// Тр. Троицкого вет. ин-та. 1970. - Т.13, вып. 1. -С. 74-81.
238. Работнов, Т.А. Работы К. Линнея и его учеников в области изучения кормовых растений / Т.А. Работнов //Ботан. журн. 1940. Т. 25, № 2. - С. 144 — 154.
239. Раменский, Л.Г. Проблемы и методы изучения растительного покрова. Избранные работы/ Л.Г. Раменский. Л.: Наука, 1971. - 250 с.
240. Распространение и морфолого-анатомическая характеристика очанки татарской в Пермской области/ Т.И. Вотинова, В.М. Петриченко, О.А. Дармодехина, О.И. Винокурова// Актуальные проблемы фармации: Материалы научн.-практ. конф. Тюмень, 1994. - С. 139.
241. Растения для нас. Справочное издание/ К.Ф. Блинова, В.В. Вандышев, М.Н. Комарова и др.; Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. Спб.: Учебная книга, 1996. - 653 с.
242. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Caprifoliaceae — Plantaginaceae. — Jl.: Наука, 1990. 362 с.
243. Ремезова, Г.Л. Иван да - марья в дубовом лесу / Г.Л. Ремезова //Тр. Воронеж, гос. заповедника, 1954. - Вып. 5. - С. 186 - 188.
244. Роллов, А.Х. Дикорастущие растения Кавказа, их распространение, свойства и применение/ А.Х. Роллов. Тифлис, 1908. - 599 с.
245. Самылина, И.А. Использование хлорида алюминия для определения суммы флавоноидов в цветках боярышника/ И. А. Самылина, О.В. Евдокимова, М.В. Кашникова// Фармация. 1994. - № 6. - С. 42-45.
246. Сандалова, Л.К. Исследование стабильности мазевых основ: Автореф. . канд. дис. фармац. наук/ Л.К. Сандалова. -М., 1978. 18 с.
247. Сафаров, К.М. К вопросу об использовании красильных растений Азербайджана с лечебной целью/ К.М. Сафаров// Изучение и использование лекарств, раст. ресурсов СССР. Баку, 1964. - С. 352-359.
248. Сафина, Л.К. Анатомические исследования вероники ненастоящей/ Л.К. Сафина, К.Ж. Бозжанова// Известия АН Казах. ССР. Сер. биол. Алма-Ата, 1969. - № 6. - С. 46 - 49.
249. Серебряков, И.Г. Жизненые формы высших растений. В сб.: Полевая геоботаника. Т. 3. М.; Л.: Наука, 1964. - 530 с.
250. Синицкий, В.Н. Судорожная готовность и механизмы эпилептических припадков/ В.Н. Синицкий// Клиника эксперим. иссл. Киев, 1976. - 160 с.
251. Смирнова, Л.П. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного/ Л.П. Смирнова, Л.Н. Первых// Хим.-фарм. журн. 1998. - № 6. - С. 35-36.
252. Сравнительна эмбриология цветковых растений. Davidiaceae — Asteraceae. Л.: Наука, 1987. - 392 с.
253. Сравнительное морфологическое изучение видов рода Euphrasia L./ Т.В. Сухинина, В.М. Петриченко, Т.И. Вотинова, А.Д. Шустов// Актуальные проблемы медицины и фармации: Материалы научн. конф. Курск: КГМУ, 1999.-С. 351-353.
254. Современная фитотерапия/ Под ред. В. Петкова. София: Медицина и физкультура, 1982. - 504 с.
255. Соколов, Е.А. Охотничьи животные: Корма и питание промысловых зверей и птиц/ Е.А. Соколова. М., 1949. - Вып. 1. - 256 с.
256. Соколов, С .Я. Справочник по лекарственным растениям/ С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Медицина, 1985. - 464 с.
257. Стегайло, Е.А. Некоторые итоги фармакологического изучения лек. растений Киргизии/ Е.А. Стегайло, И.Ш. Забиров// Изучение и использование лек. растит, ресурсов СССР. Л., 1964. - 108 с.
258. Сухинина, Т.В. Влияние экологических условий на морфологию плодов и семян очанки/ Т.В. Сухинина, В.М. Петриченко, Т.И Вотинова// Экология: Проблемы и пути решения: Материалы VIII межвуз. конф. студентов, аспирантов и мол. ученых. Пермь, 1999. - С. 44.
259. Сухинина, Т.В. Разработка лекарственных форм на основе травы очанки/ Т.В. Сухинина, В.М. Петриченко, Л.К. Бабиян, Н.И. Шрамм// Актуальные проблемы медицины и фармации. Материалы 66-й науч. конф. студентов и молодых ученых. — Курск, 2001. — С. 346.
260. Сухинина, Т.В. Жирнокислотный состав очанки коротковолосистой/ Т.В. Сухинина, В.М. Петриченко, Н.С. Фурса// Материалы 67-й межвуз. конф. студентов и молодых ученых. В 2-х частях. Часть II. Курск, 2002. - С. 138139.
261. Сухинина, Т.В. Фенолкарбоновые кислоты рода Euphrasia L./ Т.В. Сухинина, Т.С. Шестакова, В.М. Петриченко// Экология: проблемы и пути решения: Материалы X Всерос. науч. практ. конф. (25-27 апр. 2002). — Пермь, 2002. - С. 181 - 187.
262. Сухинина, Т.В. Фармакогностическое изучение растений рода Очанка // Дисс. канд. фармац. наук/ Перм. гос. фармацевт, акад. — Пермь, 2002. -194 с.
263. Сюзев, П.В. Медоносные растения, дикорастущие в Пермской губернии/ П.В. Сюзев. Пермь, 1902. - 36 с.
264. Сюзев, П.В. Конспект флоры Урала в пределах Пермской губернии. — М.: Кушнарев и К0,1912. 206 с.
265. Терехин, Э.С. Паразитные цветковые растения/ Э.С. Терехин. — JL: Наука, 1977.-220 с.
266. Терехин, Э.С. О строении гаусторий у Omphalotrix, Phtheirospermum и Rhynchocorys {Scrophulariaceae)/ Э.С Терехин// Ботан. журн. — 1983. № 1. — С. 74-77.
267. Турищев, С.Н. Рациональная фитотерапия/С.Н. Турищев. М., 2000. -98 с.
268. Тюкавкина, Н.А. Хроматография на полиамидных сорбентах в органической химии/ Н.А. Тюкавина, В.И. Литвиненко, М.Ф. Шостаковский. Новосибирск: Наука, 1973. — 176 с.
269. Уткин, Л.А. Народные лекарственные растения Сибири/ Л.А. Уткин// Труды НИХФИ. Томск,1931. - Вып. 24. - 1-133 с.
270. Уткин, Л.А. Народные лекарственные растения Алтая и приалтайских степей/ Л.А Уткин// Журн. хим. фармац. пром - ти. - 1933. - № 1. - С. 25-30.
271. Федоров, Ал.А. Атлас по описательной морфологии высших растений. Лист/Ал. А. Федоров, М. Э. Кирпичников, З.Т. Артюшенко: Под ред. П.А. Баранова. М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1956. - 303 с.
272. Федоров, Ал.А. Атлас по описательной морфологии высших растений. Стебель и корень/Ал.А. Федоров, М.Э. Кирпичников, З.Т. Артюшенко: Под ред. П.А. Баранова. М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1962. - 350 с.
273. Федоров, Ан.А. Красильные растения СССР/Ан.А. Федоров, Б.Я. Розен// Растительное сырье СССР: В 2 т. М.; Л., 1950. - Т. 1. - С. 349-402.
274. Фелинг, Ф. Эндокринология и метаболизм /Ф. Фелинг, Дж. Вакетер, А. Бродус и др. М.: Мир, 1985. - Т. 2. - 360 с.
275. Фенолокислоты некоторых растений флоры Северного Кавказа/ В.А. Бандюкова, Г.Н. Земцова, Н.В. Сергеева, В.И. Фролова// Химия природ, соедин. 1970. - № 3. - С. 388.
276. Ферсман, А.Е. Избранные труды/ А.Е. Ферсман. М.: Изд-во АН СССР, 1953-1959.-Т. 1-5.
277. Филиппенко, Т.А. Фенольные соединения растительных экстрактов и их активность в реакции с дифенилпикрилгдразилом/ Т.А. Филиппенко, Н.И. Белая, А.Н. Николаевский// Хим.-фарм.-журн. 2004. - Т. 38, № 8. - С. 34-36.
278. Фитохимический анализ видов рода Euphrasia L./ В.М. Петриченко, Т.В. Сухинина, Т.И. Вотинова, JI.C. Макарова //Фармацевтическая наука и практика: Материалы межвуз. науч.- практ. конф., посвящ. ХХ-летию фармац. фак. КГМА. Кемерово, 1999. - с. 100.
279. Физиология и биохимия покоя и прорастания семян/ Пер. с англ.; Под ред. М.Г. Николаевой. М.: Колос, 1982. - 495 с.
280. Флора СССР/ Под ред. Б.К. Шишкина. М.; Д.: Изд-во.АН СССР, 1955. -Т. XXII.-705 с.
281. Флора Европейской части СССР/ Под ред. Ан. А. Федорова, Р.В. Камелина. Д.: Наука, 1981. - 380 с.
282. Френкель, Л.Д. Гомеопатическое лекарствоведение: Справочное руководство/ Л.Д. Френкель. Харьков: Эмуш, Велес, 1993. — 584 с.
283. Фризе, К.Х. Гомеопатическая терапия в оториноларингологии/ К.Х. Фризе; Пер. под ред. В.М. Захаренкова. Смоленск: Гомеопат, медицина, 1997.-89 с.
284. Фролова, В.И. Флавоноиды некоторых видов семейства Scrophulariaceae! В.И. Фролова, С.Ф. Джумырко// Химия природ, соедин. — 1984.-№5.-С. 655-656.
285. Фруентов, Н.К. Лекарственные растения Дальнего Востока/ Н.К. Фруентов. Хабаровск: Хабар, кн. изд-во, 1972. - 397 с.
286. Фурса, Н.С. Природные соединения сем. Brassicaceae как возможные хемотаксономические признаки/ Н.С. Фурса, В.Е. Авитесян// Растит, ресурсы. 1985. - Т. 21, вып. 2. - С. 109-130.
287. Хайдав, Ц. Лекарственные растения в монгольской медицине/ Ц. Хайдав, Т.А. Меньшикова. — Улан-Батор, 1978. — 192 с.
288. Хапкин, И.С. К вопросу о кровоостанавливающих препаратах/ И.С. Хапкин// Экспериментальные исследования биологически активных веществ лекарственных препаратов растительного и минерального происхождения. — Улан-Удэ, 1979. С. 99-102.
289. Хапкин, И.С. Влияние препаратов зубчатки поздней на свертывающую систему крови/ И.С. Хапкин, Р.Б. Гармаев// Матералы 4-го Всерос. съезда фармацевтов. Воронеж, 1981. - С. 498-499.
290. Харборн, Д. Введение в экологическую биохимию/ Д. Харборн. М., 1985.-311 с.
291. Харкевич, Д.А. Фармакология/ Д.А. Харкевич// М.: ГЭОТАР-Мед, 2002. - 728 с.
292. Хасанова, С.Р. Антиоксиданты и биологически активные соединения сборов/ С.Р. Хасанова// Фармация. 2003. - № 4. - С. 28-29.
293. Хефтман, Э. Биохимия стероидов / Э. Хефтман. М.: Мир, 1972.
294. Химический анализ лекарственных растений/ Под. ред. Н.И. Гринкевич, JI.H. Сафронич. -М.: Высш. шк., 1983. 175 с.
295. Хребтов А.А. Полезные и вредные растения Урала / А.А. Хребтов. -Свердловск, 1941. 256 с.
296. Хроматография на бумаге / Под ред. И.М. Хайса и К. Мацека. — М.: Иностр. лит., 1962. 851 с.
297. Хроматография. Практическое приложение метода: Пер. с англ. — М.: Мир, 1986.-329 с.
298. Хромосомные числа цветковых растений: Справ./ Под ред. Ан. А. Федорова. Л.: Наука Ленинингр. отд-ние, 1969. - 927с.
299. Цаценкин, И.А. Экологические шкалы для растений пастбищ и сенокосов горных и равнинных районов Средней Азии, Алтая и Урала/ И.А. Цаценкин; Под ред. Г.Т. Сидоренко. Душанбе: Дониш, 1967. — 226 с.
300. Целебные чаи/ Под ред. О. Родиченкова. М.: Изд-во ЭКСМО - Пресс; Лик - Пресс, 2001. - 208 с.
301. Червяков, Д.К. Лекарственные растения Бурят Монгольской АССР/ Д.К. Червяков. — Улан-Удэ: Бурят, кн. изд-во, 1949. - 96 с.
302. Черепанов, С.К. Сосудистые растения СССР/ С.К. Черепанов. — Л.: Наука, 1981.-509 с.
303. Чирятьев, Е.А. Виды флоры Сибири как источники антикоогулянтов прямого действия/ Е.А. Чирятьев, О.А. Русакова// Растит, ресурсы. 1994. -Т. 30,№4.-С. 21-28.
304. Шаварда, А.А. Антоксидантная активность видов флоры Алтая/ А.А. Шаварда, И.И. Чемесова, Л.М. Беленовская// Растит, ресурсы. 1998. - Т. 34, вып. 2. — С. 1-8.
305. Шарапов, Н.И. Масличные растения и маслообразовательный процесс/ Н.И. Шарапов. М.; Л.: АН СССР, 1959. - 443 с.
306. Шенников, А.П. Введение в геоботанику/ А.П. Шенников Л.: Изд-во Ленингр. ун-т, 1964. - 680 с.
307. Шкарина, Е.И. О влиянии биологически активных веществ на антиоксидантную активность фитопрепаратов/ Е.И. -Шкарина, Т.В. Максимова, И.Н. Никулина// Хим.-фарм.-журн. 2001. - Т. 35, вып. 6. - С. 4043.
308. Шмидт, В.М. О географическом распространении некоторых видов Odontites Zinn/ В.М. Шмидт// Ареалы растений флоры СССР. Л.: Изд-во ЛГУ, 1965.-С. 170-178.
309. Шмидт, В.М. Математические методы в ботанике/ В.М. Шмидт. — Л., 1984.-287 с.
310. Шретер, А.И. Лекарственная флора советского Дальнего Востока/А.И. Шретер. М.: Медицина, 1975. - 328 с.
311. Эдди, М.Ж. Противосудорожная терапия/ М.Ж. Эдди, Дж. X. Тайрер. -М.: Медицина, 1983.-384 с.
312. Эммануэль, М.Н. Физико-химические основы применения фенольных соединений в химии и биологии/ М.Н. Эммануэль// Фенол, соединения и их биолог, функции. М., 1968. - С. 311-331.
313. Энциклопедический словарь, лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учеб. пособие/ Под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. Спб.: Спец. лит., 1999. - 407 с.
314. Энциклопедия практической фитотерапии / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова, В.Д. Онипко, Ю.В. Лавренов. — Донецк: Сталкер, 2001. — 592 с.
315. Юсупова, Н.Я. Влияние очанки, произрастающей в Киргизии, на кровообращение и экспериментальную гипертонию/ Н.Я. Юсупова// Тр. Кирг. мед. ин та. - 1957. - Т. 9. - С. 83-87.
316. Юсупова, Н.Я. Влияние очанки на кровообращение и экспериментальную гипертонию: Дис. . канд. мед. наук/ Н.Я. Юсупова. — Ташкент, 1956. 210 с.
317. Ягодка, B.C. Фитотерапия в дерматологии и косметике/В.С. Ягодка — Киев: Здоровья, 1987. -133 с.
318. Ядовитые растения лугов и пастбищ / Отв. ред. Б. К. Шишкин. М.; Л., 1950.-526 с.
319. Якушкина, Н. И. Физиология растений/Н.И. Якушкина — М.: Просвещение, 1993.-351 с.
320. Ярцева, И.Б. Количественное определение суммы флавоноидов в траве одуванчика лекарственного/ И.Б. Ярцева, В.А. Куркин// Фармация. 1996. -№6.-С. 42-45.
321. Яценко-Хмелевский, А.А. Лекарственная флора средней Аджарии/ А.А. Яценко-Хмелевский, А.Я. Штромберг//Биологически активные вещества флоры Грузии. Тбилиси, 1960. - Т. 9. - С. 149-164.
322. An iridoid glucoside from Euphrasia pectinata/ T. Eros, M.Z. Berkman, D. Tasdemir, С. M. Ireland, I. Calis// Nat. Prod. 2000. - V. 63, № 10. - S. 14491450.
323. Antioxidative effect of ubiguinone on mitochondrial membranes/ L. Ladi, L. Cabrini, A.M. Sechi et al.// Biochem. J. 1984. Vol. 222. - P. 463-466.
324. Ahn, B. Z. Melampyroside, ein neus Iridoid aus Melampyrum sylvaticum L./ B.Z. Ahn, P. Pachaly // Tetrahedron. 1974. Vol. 30, N 22. - P. 4049 - 4054.
325. Armstrong, D. Free radical involvement in the formation of lipopigments/ L.D. Armstrong et al.// Free radical in molecular biology, aging, and disease. New York: Raven Press, 1984.-P. 163-180.
326. A.H. Cory, J.G. Cory// Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 1991. № 11. -S. 611-614.
327. Bassler, F. Heilpflanzen erkannt und angewandt/ F. Bassler. Radebbeul, Berlin, 1955.-420 s.
328. Braecke, M. Sur la presence d' aucubine et de melampyrite dans pluseurs especes de Melampyres / M. Braecke // C. r. Acad. sci. 1922. - T. 175. - P. 990 -992.
329. Bridel, M. Sur la presence d'un glucoside dedoublable par l'emulsine dansdeux especes du genre Melampyrum/M. Bridel, M. Braecke // C. r. Acad. sci. -1921.-Vol. 173.-P. 414-416.
330. Broda, B. Owyst^powaniu kwasu kawowego w niektorich roslinach leczych/
331. B. Broda, W. Jaronewski, L. Swi^tek// Acta pol. Pharm. 1960. - Vol. 17, № 4. -S. 301-306.
332. Bucke, M. Effects of catechins and citrus flavonoids on invasion in vitro/ M. Bucke, B. Vyneke, G. Optenakkar// Clin, and Exp. metast. 1991. - Vol. 9, № 1. -P. 13-25.
333. Buchanan, M. Thrombin: Jts Key Role in Thrombogenesis: Implications for its Inhibition Clinically/ M. Buchanan, S.J. Brister, F.A. Ofosu. CRC Press, 1995. - P. 24.
334. Bishop, Ch. J.A survey of higher plants for antibacterial substances/ Ch. J. Bishop, R.E. Mac Donald// Can. J. Bot. 1951. - Vol. 29. - № 3. - P. 260-269/
335. Biswas, K. Common medical plants of Darjeeling the Sikkim Himalayas / K. Biswas // Alipore, 1956. P. 157.
336. Bobear, Jean В. An analysis of populations of Jrish Euphrasia L./ Jean B. Bobear Watsonia. - 1969. - V. 7, № 2. - S. 68-91.
337. Born, G. V. R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and ints reversal/ G. Born// Nature, 1962. V. 194, № 4832. - P. 927-929.
338. Chen Xiao-Chuan. Jnhibitory effects of Acanthopanax gracilistylus saponins on human platelet aggregation and platelet factor 4 liberation in vitro/ Chen Xiao-Chuan, Xia Lan, Husong, Huang Guang// Acta Pharmacol. 1996. - 17, № 16. - P. 523-526.
339. Constantinescu, E. Contributiila studine farmacognostic al plantei Alectrolophus major Reich./ E. Constantinescu, N. Paslarasu, S. Jonescu// Farmacia (RSR). 1974. - Vol. 22. - №.3 - P. 129-134.
340. Cory, A.H. Use of an agueous soluble tetrazolium/ formazan assay for cell growth assays in culture/ A.H. Cory, T.C. Owen, J.A. Barltrop, J.G. Cory// Cancer Communications, 1991. № 3. - S. 207-212.
341. Deutsches Arzneimittel Codex. Stuttgard, 1997. - A-192.
342. Deutsches Homoopathisches Arzneibuch. Berlin, 1953 - 180 s.
343. Diener, H. Drogenkunde/ H. Diener. Leipzig, 1969. - 488 s.
344. Dragendorff, G. Die Heilpflanzen der verschienden Volker und Zeiten/ G. Dragendorff. Stuttgart, 1898. - 884 s.
345. Eckey, E.W. Vegetable fats and oils / E.W. Eckey. N.Y., 1954.
346. Pethes, E. Ingredients of several species of the Scrophulariaceae family/ E. Pethes, G. Marczal, A. Kery// Gyogyszet. 1973. - Vol. 17, № 4. - S. 129-131.
347. Elich, I. Die antibakteriale Aktivitat einiger eihemicher Plantago-Arten/ I. Elich Berlin, 1962. - S. 24-28.
348. Feuell, A.J. Jnsecticides/ A.J. Feuell. Weinheim, 1965. - 244 p.
349. Gaetano, G. Pharmacology of antiplatelet drugs/ G. Gaetano, V. Bertelle, C. Cerletti// Platellets Biol, and Pathol. 3. Amsterdam e.a., 1987. - P. 515-573.
350. Gamier, G. Ressaurces ir^dicinales de la flore fran9aise: T. 1-2/ G. Gamier, L. Bezanger. Beauquuesne, G. Debrause. - Paris, 1961-1511 p.
351. Gessner, O. Die Gift und Arzneipflanzen von Mitteleurope/ O. Gessner. — Heidelburg, 1953. 804 s.
352. Gleitz, J. The antitrombotic action of (+) kavain and (+) — kanavain/ J. Gleitz, A. Beile, P. Wilkens, T. Peters// Fibrinolysis. 10. Suppl. - 1996. - № 1. - P. 31.
353. Goun, E.A. Anticancer and antithrombin activity of Russian plants/ E.A. Goun, V.M. Petrichenko, S.U. Solodnikov, T.V. Suchinina, M.A. Kline, Glenn Cunningham, Chi Nguyen, H. Miles// Journal of Ethnopharmacology — 2001. № 81-S. 337-342.
354. Groger, D. Zur Kennthis iridoider Pflanzensteffe/ D. Groger, P. Simchen// Die Pharmazie. 1967. - Vol. 22, № 6. - S. 315.
355. Gun Jih-Hwa. Antiplatelet effect of gingerol isolated from Zingiber officinale/ Gun Jih-Hwa, Kon Feng-Nien, Jong Tiug-Ting, Teng Che-Ming// J. Pharm and Pharmacol., 1995. 47, № 4. - P. 329-332.
356. Hambler, D.J. Some taxonomie investigations on the genus Rhinanthus/ D.J. Hambler. Watsonia, 1958. - 4. - S. 101-116.
357. Harborn, J.B. The natural distribution in angiosperms of antocyanins acylated with aliphate dicarboxyc acids/ J.B. Harborn// Phytocemistry. 1986. - Vol. 25, N8.-P. 1887-1894.
358. Hartwell, J.L. Plants used against canccer/ J.L. Hartwell// Uoydia. 1968. -Vol. 31, №2.-P. 71-170.
359. Hegnauer, R. Chemotaxonomie der Pflanzen: Bd. 1-6/ R. Hegnauer. — Stuttgart, 1964.
360. Heneberg, R. Oil content and oil composition in some soybean lines derived from M. Goldsoy x M 14/ R. Heneberg, J. Culjat-Momirovic, B. Sebecic et al.// Poljopr. Znanstv. Smotra. 1981. - № 54. - P. 91-101.
361. Hildich, T.P. The chemical constitution of natural fats/ T.P. Hildich, P.N. Williams. London, 1964.
362. Hoppe, H. Drogenkunde: Bd. 1-2./ H. Hoppe. Berlin; New York, 1975. -1311 s.
363. Hultein, E. The total range of Euphrasia/ E. Hultein// Bot. notis. 1975. -Vol. 128, № 3 - P. 357-364.
364. In vitro antispasmodic activity of peracetylated penstemoniside, aucubin and catalpol/ A.V. Ortiz de Urbina, M.L. Martin, B. Fernandez et al.// Planta Med. -1994. V. 60, № 60. - P. 512-515.
365. Jalas, J. Tipification of the taxa of Euphrasia (Scrophulariaceae) discribed by finnish botanists/ J. Jalas, J. Kukkonen// Ann. bot. fenn. 1973. - Vol. 10, № 1. -P. 27-42.
366. Jalas, J. New nomenclatural combinations in Euphrasia, Rumex, silene and Stachys/ J. Jalas// Ann. bot. fenn. 1977. - Vol. 14, № 4. - P. 191-192.
367. Jorgensen, E. Die Euprasia Arten Norwegens. Bergens Mus. Aarbok 1916 — 1917, Naturvid. Раекке/ E. Jorgensen. - 420 s.
368. Klaren, C.H. Compounds of benzoicacid in hemiparasitic Scrophulariaceae/ C.H. Klaren// Acta bot. neer. 1973. - Vol. 22. - № 4. - P. 452-455.
369. Kooman, P. The occurrence of iridoid glucosides in the Scrophulariaceae/ P. Kooman// Acta bot. neer. 1970. - Vol. 19, № 3. - P. 329-340.
370. Krolikowska, M. Skladniki ziela swietlika tqkovego {Euphrasia rostkoviana Hayne.)/ M. Krolikowska// Rocz. Chem. 1967. - Vol. 41, № 2. - P. 327-336; №3.-P. 529-540.
371. Lunn, W.H. Studies on the Structure of Catalposide/ W.H. Lunn, D.W. Edward, J.T. Edward// Canad. J. Chem. 1962. - V. 40, № 1. - S. 104.
372. Madaus, G. Lehrbuch der biologischen Heilmittel: Bd. 3/ G. Madaus. -Berlin, 1974. S. 18855-22868
373. Matlawska, J. Sikorska M., Kowalewski Z. Zwiazki flawonoidave w herba Euphrasia! J. Matlawska, M. Sikorska, Z. Kowalewski// Herba pol. 1985. - № 34.-P. 119-123.
374. Matlawska, J. Zwiazki flawonoidave w herba Euphrasia! J. Matlawska, M. Sikorska, Z. Kowalewski// Herba pol. 1988. - № 3. - P. 97-102.
375. Mc Lafferty, F.W. The Wiley// NBS Registry of Mass Spectral Data/ F.W. Mc Lafferty, D.B. Stauffer. New York, 1989.
376. Medeiros, J. Antithrombin activity of medicinal plants of the Azores/ J. Medeiros, M. Contacia, J. Nguyen, C. Cunningham, G. Miles// Journal of Ethnopharmacology, 2000. № 72. - S. 157-165.
377. Mosig, A. Kurze Systematik der Arzneipflanzen mit Angabe ihren Drogen und Inhalstoffe/ A. Mosig. Dresden; Leipzig, 1961. - 172 s.
378. Muller, C.H. Phytotoxins: an ecological phase of phytochemistry Jn: Harborne J.B. (ed)/ C.H. Muller, C.H. Chou/ Phytochemical Ecology, Academic Press, London. 1972. - P. 201-216.
379. Neamtu, G. Cercetari chemotaxonomice la plantele superioare / G. Neamtu, C. Bodea // Stud. §i cerc. Biochim. 1970. - T. 13, N 3. - P. 405-410.
380. Pagani, F. Flavonoids for Melampyrum memorosum (Scrophulariaceae)! F. Pagani, G. Romussi// Boll. chim. farm. 1971. - Vol 110, N 12. - P. 695 - 703; Chem. Abstrs. - 1972. - Vol. 77, N 44556.
381. Picroliv protectes chronic hepatotoxicity in rats/ R. Rastogi, S. Saksena, N.K. Gard et al.// Planta Med. 1996. - V. 62, № 3. - P. 283-285.
382. Prospective cohort trial of Euphrasia single-dose eye drops in conjunctivitis/ M. Stoss, C. Michels, E. Peter, R. W. Gorter// Altern Complement Med. 2000. -Vol. 6, № 6. - S. 499-508.
383. Rao, L.V. Active site-blocked activated factor VII as an effective antithrombotic agent: mechanism of action/ L.V. Rao, M. Ezban// Blood Coagulation and Fibrinlysis. 2000. - 11. - P. 135-143.
384. Raunkiaer, C. Plant Life Forma/ C. Raunkiaer. Oxford, 1937.
385. Salama, O. Jridoidglucoside von Euphrasia rostkoviana Hayne. / O. Salama, O. Sticher/ Planta med. 1983. - Vol. 47, № 2. - P. 90-94.
386. Sahai, A. Seed germination and seedling morphologenesis in parasitic angiosperms of the families Scrophulariaceae and Orobanchaceae! A. Sahai, K.R. Shivanna// Seed. Sci Technol. 1982. - Vol. 10, № 5. - P. 565-583.
387. Sell, P.D. A revision of the North American species of Euphrasia L./ P.D. Sell, P.F. Yeo// Bot. J. Linnean Soc. 1970 - V. 63, № 3. - P. 189-234.
388. Silverstein, R.M. Spectrometric Identification of Organic Compounds/ R.M. Silverstein, G.C. Bassler. Wiley, New York, 2 nd ed, 1967.
389. Simpson, MJ.A. Fruit characters and seed germination of Euphrasia disperma Hook f./ MJ.A. Simpson// N. Z. J.Bot. 1977. - Vol. 15, № 1. - S. 181183.
390. Soo, R. Arten und Unterarten der Gattung Rhinanthus in Europa/ R. Soo// Acta Bot. Acad. Scient. Hung. 1970. - 16. - № 1-2. - S. 193-206.
391. Sticher, O. Euphraside, a new iridoid glycoside from Euphrasia salisburgensis Hoppe./ O. Sticher, O. Salama// Helv. chim. acta. 1981. - Vol. 64, № l.-P. 78-81.
392. Structural considerations on the iridoids as anti-inflammatory agents/ M.C. Recio, R.M. Giner, S. Monez et al.// Planta Med. 1994. - Vol. 60, № 3. - P. 232234.
393. Suparna, M. Naturally oceuring iridoids with phormacological activity/ M. Suparna, J. Ranjana, M. Silobrata // Jndian J. Pharm Sci. 1998. - Vol. 60, № 3. -P. 123-127.
394. Swiatek L. Glucozydy iridoidowe w rodzinie Scrophulariaceae! L. Swiatek// Acta pol. pharm. 1973. T. 30, № 2. - S. 203-212.
395. Toth, L. Uber die Flavonoide von Odontites rubra (Baumg.) Opiz/ L. Toth, M. Bulyaki, Gy Bujtas// Pharmazie. 1980. - Jg. 35, H. 5-6. - S. 335-336.
396. Toth, L. Uber die Flavonoide von Rhinanthus angustifolius Gmel. et Soo/ L. Toth, M. Bulyaki, Gy Bujtas// Pharmazie. 1981. - Jg. 36, H. 8. - S. 577.
397. Toth, L. Uber weitere Flavonoide von Rhinanthus angustifolius Gmel. et Soo/ L. Toth, M. Bulyaki, Gy Bujtas// Pharmazie. 1986. - Jg.41, H. 1. - S. 72.
398. Vitamin E and the heart: possible role as antioxidant/ R. Ferrari, O. Viscoli, C. Guarnieri, M. Caldarera// Acta vitaminol. and enzymol. 1983. - Vol. 5, № 1. — P. 11-22.
399. Yagi, K. A simple fluorimetric assay for lipoperoxide in blood plasma/ K. Yagi// Biochem. Med. 1976. - Vol. 15, № 2. - P. 212-216.
400. Yeo, P.F. Germination, seedlings and formation of haustoria in Euphrasia/ R.F. Yeo// Watsonia. 1961. - Vol. 5, № 2. - S. 46 - 49.
401. Yeo, P.F. New chromosome counts in Euphrasia/ R.F. Yeo// Candollea. — 1970. Vol. 25, №1. s. 21—24.
402. Yeo, P.F. A toxonomic revision of Euphrasia in Europe/ R.F. Yeo// Bot. J. Linnean Soc. 1978. - V. 77, № 4. - S. 223-228, 329-330.
403. Weber, V. Methodenbuch. Band XIV. Die Untersuchuhg von Heil und Gewurzpflanzen/ V. Weber, E. Wegner. -Rradebeul und Berlin, 1953. - 198 s.
404. Weber, H. Zur Morphologie der Haustorien von Rhinantoides (Scrophulariaceae)/ H. Weber, F. Weberling. — Ber Deutsch. Bot. Ges. 1975. — 880 s.
405. Weber, H. Anatomische Studien an den Haustorien einiger parasitischer Scrophulariaceen Mitteleuropas/ H. Weber. Ber. Deutsch. Bot. Ges. — 1976. — 89 s.
406. Weber, H.C. Untersuchungen an parasitischen Scrophulariaceae (Rhinanthoideen) in Kultur. J. Keimung und Entwicklungsweise/ H.C. Weber// Flora.-1981.-Bd. 171.-№ l.-S. 23-28.
407. Weiss, R.F. Lerbuch der Phytoterapie/ R.F. Weiss. Stuttgart, 1974. - 360 s.
408. Wehmer, C. Die Pflanzenstoffe: Bd 1-2./ C. Wehmer. Jena, 1929. - Bd 1.-640 s.; 1931.-Bd2. - 1514 s.
409. Wehmer, C. Systematische Verbreitung und Vjrkjmmtn von Betainen, Cholin und Muscarin/ C.Wehmer, M. Hadders// Handbuch der Pflanzenanalyse: Bd 1-4. -Wien, 1933. Bd 4, Т. 1. - S. 291 -298.
410. Wettstein, R. Monographie der Gattung Euphrasia/ R. Wettstein. Leipzig, 1896.-146 s.
411. Wettstein, R. Untersuchungen uber den Saeson Dimorphismus im Pflanenreiche/ R. Wettstein. - Denkschr. Akad. Wiss. Wien, 1901. - P. LXX. - S. 305.