Фармакогностическое изучение марьянника лугового

Галишевская, Елена Евгеньевна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение марьянника лугового

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Галишевская, Елена Евгеньевна Пермь 2004 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое изучение марьянника лугового

На призахрукописи

ГАЛИШЕВСКАЯ ЕЛЕНА ЕВГЕНЬЕВНА

ФАРМАКОГНОСГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ МАРЬЯННИКА

ЛУГОВОГО

Специальность 15.00.02—фермщсвтичосквя химия, фермвкогнооия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандитатафармологическихнаук

Пермь-2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Научный руководитель

кандидат химических наук, доцент Петриченко Василий Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Плеханова Татьяна Ивановна кандидат фармацевтических наук, доцент Решетникова Мария Дмитриевна

Ведущая организация

Пятигорская государственная фармацевтическая академия

Защита состоится 22 июня 2004 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГОУ ВПО «ПГФА Минздрава России» по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48, Тел. (3422) 129-006,123-445; Факс (3422) 129-476.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «ПГФА Минздрава России» по адресу: г.Пермь, ул. Крупской, 46.

Автореферат разослан 18 мая 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Актуальной проблемой фармацевтической науки на современном этапе является поиск новых эффективных препаратов для лечения заболеваний нервной и сердечно - сосудистой систем. Эти заболевания широко распространены и часто протекают в хронической форме, требующей длительного лечения. В этом случае незаменимыми являются препараты растительного происхождения, которые обладают рядом преимуществ по сравнению с синтетическими - малой токсичностью, мягкостью действия и редком возникновении аллергических реакций:

Основным источником для поиска новых лекарственных растений является арсенал средств народной медицины. С этой точки зрения особый интерес представляют растения семейства Норичниковых (Scrophulariaceae), содержащие разнообразные фенольные соединения, иридоиды, жирные кислоты, алкалоиды и обладающие разносторонней биологической активностью. Одним из представителей этого семейства является марьянник луговой (Melampyrum pratense L), широко распространенный на территории Западного Урала.

Марьянник луговой издавна известен в народной медицине под названием «черная трава» и используется как средство для лечения гипертонии, заболеваний сердца и нервной системы. Эффективность - марьянника при лечении данных заболеваний указывает на перспективность изучения химического состава и биологической активности извлечений из этого растения .

Однако недостаточная химико-фармакологическая изученность растения не позволяет использовать его в научной медицине. В связи с этим существует необходимость комплексного изучения химического состава и фармакологического действия марьянника лугового и разработки современных лекарственных средств из него с целью дальнейшего изучения и введения в медицинскую практику.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ состоит в комплексном изучении марьянника лугового; его химического состава, морфолого-анатомических признаков, возможности производства экстракционных препаратов, изучении их фармакологического действия, а также стандартизации лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- провести морфолого-анатомическое исследование травы марьянника лугового, выявить диагностические признаки;

- изучить химический состав биологически активных веществ по органам и фазам развития;

- разработать оптимальные условия получения экстракционных препаратов;

- провести исследование фармакологической активности и токсичности полученных препаратов;

- разработать и усовершенствовать методики качественного и количественного определения биологически активных веществ в траве и экстракционных препаратах;

- разработать проект нормативной документации (ФС) на сырье марьянника

лугового.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

1. Выявлены диагностические признаки в морфолого-анатомическом строении ' вегетативных органов марьянника лугового.

2. Изучен состав и распределение фенольных соединений и иридоидов по органам и фазам развития марьянника лугового.

3. Определен элементный, жирно- и аминокислотный состав марьянника лугового.

4. Разработаны методики количественного определения флавоноидов и иридоидов

5. Разработана технология получения экстракционных препаратов из травы марьянника лугового.

6. Изучена антитромбиновая, антиагрегантная, гипотензивная, противосу-дорожная активность и острая токсичность экстракционных препаратов марьянника лугового.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Научно обоснована целесообразность использования травы марьянника лугового для получения препаратов гипотензивного, антитромбинового, антиагрегантного и противосудорожного действия.

Разработаны оптимальные условия получения экстракционных препаратов из травы марьянника лугового.

Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов и иридоидов в сырье.

На основании данных фотохимического, фармакологического, морфолого-анатомического и товароведческого анализов разработан проект ФС «Трава марьянника лугового».

Приоритет проведенных исследований подтвержден Патентом РФ на изобретение «Способ получения средства, обладающего гипотензивной и антикоагулянтной активностью» (№ 2222339 опубл. бюлл. №3 от 27.01.2004).

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ: результаты морфолого-анатомических, фотохимических и фармакологических исследований; экспериментальные данные по стандартизации травы и препаратов марьянника лугового; обоснование возможности использования марьянника лугового в медицинской практике в качестве гипотензивного, антитромбинового, антиагрегантного и противосудоро-жного средства.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМАМИ: ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно - исследовательских работ кафедры ботаники с основами общей биологии Пермской государственной фармацевтической академии (№ Государственной регистрации 01.9.10018875, протокол № 4 от 29.12.98).

АПРОБАЦИЯ. Основные положения работы доложены и обсуждены на региональных конференциях: «Актуальные вопросы современной медицины» (Хабаровск, 2001); международной конференции: «Перспективы развития естественных наук в высшей школе» (Пермь, 2001); «Актуальные проблемы медицины и фармации» (Курск, 2002); научно-практических конференциях «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования» (Пермь, 2001; 2002; 2003).

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 20 работ, получен Патент РФ, которые отражают основное содержание диссертации.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на 152 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка литературы и приложения. В тексте содержится 54 таблицы, 23 рисунка. Список цитируемой литературы включает 136 источников, из них 21 на иностранных языках.

В обзоре литературы (Глава 1) рассмотрены вопросы систематики, распространения и биологических особенностей представителей рода Марьянник, встречающихся на территории Пермской области. Проанализирована степень химической изученности и дана характеристика основных групп БАВ. Приводятся сведения о применении в народной медицине и фармакологической активности. Обоснована цель диссертационной работы.

Вторая глава посвяшена описанию объектов и методов исследования.

В третьей главе отражены результаты анатомо-морфологических исследований марьянника лугового.

В четвертой главе изложены результаты химического исследования и динамика накопления фенольных соединений и иридоидов, приведены данные по исследованию жирных кислот и аминокислот и микроэлементного состава.

В пятой главе представлены результаты по разработке технологии экстракционных препаратов марьянника лугового, а также данные по изучению гипотензивной, антитромбиновой, антиагрегационной, противосудорожной активности и острой токсичности полученных фитопрепаратов.

В шестой главе, освещены материалы по разработке ФС «Трава марьянника лугового»; результаты товароведческого анализа и данные по разработке методик количественного определения флавоноидов и иридоидов в сырье.

Приложение включает проект ФС, а также материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Фармакогностические исследования проводили на образцах марьянника лугового (надземная часть с корнями), заготовленных в период с 1998 по 2001 год в Свердловской и Пермской областях.

Морфолого-анатомическое строение изучали на свежем и гербарном материале (30 -50 образцов) по общепринятым методикам.

Качественный состав и количественное содержание БАВ исследовали с помощью современных методов фотохимического анализа: метод избирательной жидкостной экстракции, хроматография на бумаге и в тонком слое, фотоэлектроколориметрия, УФ спектроскопия.

Жирнокислотный состав масла семян определяли методом хромато-масс-спекгрометрии на газовом хроматографе Hewlett-Packard 5890/П (США) с квадрупольным масс-спектрометром (HP MSD 5971) в качестве детектора.

Элементный состав определяли с помощью эмиссионного спектрального анализа на дифракционном спектрографе ДФС-13-1 методом испарения из кратера угольного электрода.

Фармакологические исследования проводили по общепринятым методикам, описанным в различных источниках.

МОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МАРЬЯННИКА

ЛУГОВОГО

Марьянник луговой на территории Пермской области произрастает в лесах разных типов, на опушках, полянах, лугах, низинных болотах, у дорог. Встречается часто по всей области. Большинство морфологических признаков характеризуется постоянством параметров. Вариабильность вида внутри фитоценоза незначительна.

Морфолого-диагностическими признаками травы марьянника лугового являются: форма листьев: яйцевидно-ланцетные, цельнокрайние; тип соцветия: редкая односторонняя кисть; форма прицветников: плоские, цельнокрайние, с 1-5 длинными узкими зубцами; венчик: форма - двугубый, верхняя губа -шлемовидная, нижняя - трехлопастная, длина венчика - более 8 мм, цвет -желтый; форма чашечки - короткоколокольчатая, длина зубцов - 2-3 мм; тип плода - коробочка, вскрывающаяся с одной стороны.

Диагностическими признаками анатомической структуры являются;

для листа - характерное строение клеток эпидермы верхней стороны, листовой пластинки (с верхней стороны листа - вдоль жилки веретеновидной формы, последовательно переходящее в удлиненно прямоугольные, волнистые и сильно извилистые); трихомы листа (простые одноклеточные и двух-трехклеточные, толстостенные, железки - четырехклеточные); для стебля -отношение первичной коры к радиусу (первичная кора слабо дифферинцирована), число рядов клеток ксилемы (4-30); для корней - опробковевшая эпидерма, строение проводящей системы (вторичное лучистое строение).

ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ И РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ ГРУПП БАВ МАРЬЯННИКА ЛУГОВОГО

На основании результатов качественного анализа установлено, что преобладающими группами БАВ марьянника лугового являются фенольные соединения и иридоиды. Изучена химическая изменчивость указанных групп

природных соединений по органам растения в зависимости от фазы развития, места произрастания и режима сушки.

Фенольные соединения

Методом двумерной бумажной хроматографии обнаружено 23 вещества фенольной природы (табл. 1). По флюоресценции в УФ свете и отношению к хромогенным реактивам 6 веществ были отнесены к фенолкарбоновым кислотам и 17 - к флавоноидам. Три вещества в сравнении с аутентичными образцами (по значениям и УФ спектрам элюатов) определены как цинарозид (вещество 13), гиперозид (вещество 16), лютеолин (вещество 17). Из фенолкарбоновых кислот идентифицированы вещество 21 как хлорогеновая, 22 - кофейная, 23 - феруловая кислоты. Среди продуктов гидролиза фенольных веществ, экстрагируемых бутанолом, идентифицированы космоссиин и диосметин.

Сравнительный фитохимический анализ образцов травы, заготовленных в разных пунктах, показал, что наиболее стабильными компонентами являются цинарозид (КГ 0,45) и хлорогеновая кислота (КГ 0,64), а также вещества 7 (Я, 0,28) и 11 0,36), значения которых можно использовать для установления подлинности лекарственного растительного сырья.

Фракционирование и последующий хроматографический анализ очищенного на полиамиде комплекса фенольных соединений, подтвердил наличие в траве марьянника лугового лютеолина, цинарозида, гиперозида, хлорогеновой, кофейной и феруловой кислот.

Иридоиды

Компонентный состав иридоидов марьянника лугового представлен 6 веществами (табл. 2). По качественным реакциям на хроматограммах эти соединения разделены по окраске пятен на две группы. Вещества 1-4 проявляются только реактивом Бэкона-Эдельмана, что указывает на их принадлежность к иридоидным соединениям подгруппы каталпола. Вещества 5 и 6 проявляются как реактивом Бэкона-Эдельмана, так и другими реактивами. В сравнении с аутентичным образцом (по значению и методом добавки в извлечение) вещество 5 определено как аукубин. Проведена предварительная идентификация обнаруженных иридоидов (по значениям в стандартных условиях, в сравнении с литературными данными, а также по УФ спектрам элюатов с хроматограмм). Вещество 1 совпадает с изокаталполом; 2-е каталполом. Сравнительный фитохимический анализ образцов сырья, заготовленных в разных пунктах показал, что наиболее стабильными иридоидными компонентами марьянника лугового являются каталпол и аукубин, значения которых можно использовать в аналитических целях.

Данные о внутривидовой изменчивости комплекса БАВ марьянника лугового свидетельствуют о широкой вариабилыюсти компонентного состава: фенольных соединений (от 7 до 12 веществ) и иридоидов (от 2 до 5 веществ). Изменчивость компонентного состава БАВ связана, вероятно, в большей степени с уклоняющимся типом питания и паразитической формой существования.

Хроматографическая характеристика фепольных соединений Melampyrumpratense

№ веще. ства Значение ИР УФ УФ +Ш3 А1С1з,2% ггО(ыо3)2, 2% Реактив Гспфнера

Изопропанол/муравъ иная к-та/вода (2:5:6 БУВ (4:1:2)

1 0,31 0,12 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

2 0,63 0,15 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Голубой

3 0,66 0,24 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

4 0,36 0Д4 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Голубой

5 0,47 0,25 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

б 0,55 0,27 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

7 0,43 0,28 Темно- коричневый Желтый Желтый Голубой

8 0,52 0,33 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

9 0,85 0,31 Фиолетовый ' Фиолетовый Желтый Фиолетовый

10 0,47 0,35 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

11 0,59 0,36 Темно- коричневый Желтый Желтый Фиолетовый

12 0,62 0,39 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

13 0,45 0,45 Темно- коричневый Желтый Желтый Желтый

14 0,39 0,51 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

15 0,74 0,63 Фиолетовый Фиолетовый Желтый Фиолетовый

16 0,53 0,65 Темный Темный Желтый Желтый

17 0,73 0,86 Темно- коричневый Желтый Желтый Желтый

18 0,47 0,25 Голубой Ярко голубой Оранжевый

19 0,46 0,33 Голубой Ярко голубой Оранжевый

20 0,60 0,44 Голубой Ярко голубой Оранжевый

21 0,60 0,64 Ярко-голубой Желто-зеленый Желто-коричневый

22 0,60 0,84 Бледно-голубой Ярко-голубой Красно-коричневый

23 0,47 0,79 Бледно-фиолетовый Ярко голубовато-фиолетовый Оранжевый

Среднее значение пяти измерений

Характеристика иридоидов Melampyrumpratense

Вещество Значение Лг в системе Окраска пятен УФ - спектры, ^шах Название в-ва

БУВ (4:1:2) пропанол-вода(4:1) Реактив Бэкона-Эдельмана Реактив Шталя Реактив Трим-Хилла

видимый УФ-свет видимый УФ-свет видимый УФ-свет Экспериментальные ♦Литературные

1 0,10 0,15 желто-ораранжевая оранжевая — — — — ** — Изока-талпол

2 одо 0,34 желто-коричневая коричневая — — — ... 198 198 Каталпол

з- 0,37 0,36 светло-ооанжевая оранжевая — — -- — —

4 0,42 0,40 'светло-коричневая коричневая — — — — — —

5 0,47 0,41 коричневая темнокорич-невая сине-голубая темно-синяя серая фиолетовая 212 210 Аукубин

б 0,80 0,86 светло-коричневая темнокорич-невая сине-голубая темно-синяя — —

Примечание:* Мнацаканян В. А., 1986; **Спектральные характеристики не стабильны.

£ 3,5

а о | 3,0

2 О 2,5

1 2,0

§ 1.5

о.

й о 1.0

0,5

0,40

3,17

г-?

0,25 3 л- ... 4 -5 1.

стебли цаетги

0,70

0,08

корни плоды

Рисунок 1. Содержание флавоноидов в органах марьянника лугового.

о,б

1 0,5

1 (9 0,4

О 0,3

к л 0,2

3 0,1

0,57

вегетация

0,56

0,39

бутонизация

0,35

0,1«

цветение

плодоношение

отмирание

Рисунок 2. Содержание флавоноидов в траве марьянника лугового в различные фазы развития.

0,35

3 £ о.

0,33

воздушно-теневая

70* С

50° С

- 0Д9 0,28

■■ ! •ь 0,1«

к- г. £—' - *

3 *

г 4- **— „ 5-

30° С

Рисунок 3. Влияние температурных факторов на содержание флавоноидов в траве марьянника лугового.

* о.

и ц

14,0 12,0 10,0 8.0 6.0 4,0 2,0 0

0,62

0,70

стебли

11,98

fe«*?;

»J Г' & -

Вг-g-

1,84

т.

корня

6,33

FV '

Рисунок 4. Содержание иридоидов в органах Melampyrum pratense.

плоды

¡S

1 в-

§ о

34 3,0 2,5 2,0 1.5 1,0 0,5 0

3,0

■ 2,24

0,71 uo * x I l 1,24

SL4-fia, £ AP' ¡TV r L*

t í i» « i ' í «f

бутонизация

плодоношение

отмирание

цветение

Рисунок 5. Содержание иридоидов в траве Melampyrum pratense в различные фазы развития.

воздушно-тенева* 70° С 50® С 30° С

Рисунок 6. Влияние температурных факторов на содержание | иридоидов в траве Melampyrum pratense.

Динамика накопления БАВ

Исследовано количественное содержание флавоноидов и иридоидов в органах марьянника лугового зависимости от места сбора, фазы развития и режима сушки. Установлено, что максимальное количество БАВ накапливается в генеративных органах растения: флавоноидов в цветках - 3,17%, в плодах - 0,7%; иридоидов в цветках - 11,98%, в плодах - 6,33% (рис. 1, 4). Оптимальной для сбора является фаза цветения - начало плодоношения, так как в этот период отмечается максимальное содержание иридоидов (2,24-3,0%) и высокое количество флавоноидов (0,35-0,39%) (рис. 2, 5). Максимальное количество флавоноидов (0,33%) и иридоидов (3,33%) обнаружено в образцах, высушенных воздушно-теневым способом (рис. 3, 6), следовательно, данный способ сушки является рациональным.

Элементный состав

Установлен элементный состав в траве и органах марьянника лугового (19 элементов), в почве и вероятных «растениях-хозяевах» - Pinus sylvestris, Vaccinium vitis-idaea и Vaccinium myrtillus.

Элементный состав надземных и подземных органов марьянника лугового имеет близкое значение, однако, их количественное содержание отличается. Трава (надземная часть с корнями) содержит в максимальных количествах фосфор, марганец, барий, цинк, в минимальных - молибден, серебро, кобальт, бериллий. Элементами базипетального распределения являются фосфор, медь, цинк, свинец, молибден. Концентрация этих элементов во всех надземных органах выше, чем в корнях. Элементами акропетального распределения являются никель, серебро, барий, стронций, их концентрация в корнях выше, чем в надземных органах. Установлено, что элементный состав растений с нормальным и уклоняющимся типом питания имеет сопоставимое значение. Содержание токсичных элементов (свинец, медь) не превышает ПДК, принятые для чая (табл. 3).

Жирные кислоты

Анализ количественного содержания жирных кислот в семенах марьянника лугового показал, что доминирующими являются непредельные кислоты. В целом сумма ненасыщенных жирных кислот (линолевой, линоленовой, олеиновой) составляет 80,99%, причем их количественное содержание имеет близкое значение, что вероятно, связано с уровнем паразитизма М. лугового. Из непредельных кислот преобладает линоленовая, содержание которой составляет 29,55%, в минимальном количестве присутствует пальмитинолеиновая кислота -2,8% (табл. 4). Сумма насыщенных кислот установленного строения составляет 14,87%, из них в максимальном количестве содержится пальмитиновая кислота (13,0%), в минимальном - эйкозановая (0,57%).

Содержание химических элементов в почве (мг/кг почвы) и в Melampyrumpratense, Pinus sylvestris, Vaccinium vitis-idaea и V. myrtillus (мг/кг сухого сырья)

Элемент Почва Р. sylvestris хвоя К vitis-idaea побеги И а 1 5 t* U и Ü: М. pratense Индекс КБП Индекс ОСОР

корни стебли листья семена корни стебли листья семена листья корни стебли корни семена корни

Ni 36,1 2,8 1,3 2,1 12,7 17,7 23,7 7,3 3.0 2,5 2,5 3,0 0,8 0,8 1.0

Со 14,0 .ОД 0,13 0,2 0,7 0,8 1.6 0,4 0,7 0,5 0,7 - 0,7 1,0 0,7 1.0

Cr 93,6 1,4 1.3 >.1 0,7 1,2 1,6 0,4 0.1 0,1 0,1 0.1 1,0 1.0 1,0

Мп 935,5 283 260 351 706 1177 1583 80,6 10,0 10,0 10,0 2.0 1.0 1,0 од

V 140,3 0,3 0,4 0,5 0,7 - 1.6 - 0,1 - 0,07 - 1.0 -

Ti 2806,5 8.5 7,8 7,0 7,1 11,8 15,8 4,0 0,03 0,03 0,03 0,03 1,0 1.0 1,0

Sc 4,7 - - - - - - - - - - - - - ■

Р 1683,9 283 260 351 494 1177 1583 403 3,9 5.6 5,6 5,6 1.4 1.4 1,4

Ge 0,9 - - - - - • - - - - - - • -

Cu 56,1 2.8 4,7 5.3 12,7 23.5 31,7 7,3 3,0 3,3 3,3 3,0 1.1 1.1 1,0

Zn 65,5 16,9 78 17,6 21,2 211,9 316,6 64,5 4.3 25,7 28,6 22,9 «,7 6,0 5,3

Pb 46,8 1,4 18,2 1,1 0,7 11.8 1,6 8,1 ОД 0,3 0,2 4,0 1.0 U 20,0

Ag 0,6 0,3 0,8 0,3 0,1 0,07 0,1 0,04 3,3 1,0 1,5 1,7 0,5 0,3 0,5

Mo 2,8 0,04 0,05 0,07 0,07 ОД 0,2 0,06 0.3 0,5 0,5 0,5 1,5 1,5 1.5

Ba 654,9 8,5 46,8 63,2 129 117,7 110,8 16,1 2.6 1,4 1.0 0,6 0,4 0,55 ОД

Sr 187.1 1U 10,4 5,3 35,3 47,1 63,8 12,1 2.5 2,0 2.0 1.5 0,8 0,8 0,6

Sn 2,8 0,09 0,08 - - - - - - - - - - - -

Be 0,9 0,04 0,03 - - - 0,2 0,04 - - 1,0 1,0 - - -

Zr 280,7 1.4 1.3 1.8 2,1 3,5 7,9 0.7 0, 0,1 0.2 0,06 1,7 1,0 0,6

Ga 14,0 0,06 0,05 - - - - - - - - - - - -

Y 18,7 - - - - - - - - - - - - - -

Yb 1,9 - - - - - - - - - - - - - -

La 14,0 - - - - - - - - - - - - -

Nb 16,8 0,3 0,26 0,4 0,7 1,1 2,4 0,4 0,6 6,1 0.8 0.05 0,9 0,9

Li 9,4 - - - - - - - - - - - - - -

Примечание: прочерк означает, что содержание элемента меньше предела обнаружения

Жирнркислотный состав семян Melampyrum pratense

N Название кислоты Индекс Содержание,%

1 Миристиновая 14:0 0,75+0,02

2 Пальмитинолеиновая 16:1 2,80±0,06

3 Пальмитиновая 16:0 13,0±0,35

4 Линолевая 18:2 27,22+0,23

5 Линолековая 18:3 29,55±0,38

6 Олеиновая 18:1 21,43+1,25

7 Стеариновая 18:0 0,83+0,005

8 Эйкозановая 20:0 0,57+0,00

Сутц предельных кислот 14,87

Сумма непредельных кислот 80,99

Аминокислоты

Аминокислотный состав травы марьянника лугового представлен 22 веществами (табл. 5).

Таблица 5

Аминокислотный состав Melampyrum pratense

Ns Rf свидетель цветки корни плоды стебли листья

1 0,05 + +

2 0,07 + +

3 0,09 + +

4 0,13 * + +

5 0,13 D-L-оонитин + + + + +

6 0,15 +

7 0,17 L-аргкнин + + + + +

8 0,20 + + + + +

9 0,23 +

10 0,24 +

11 0,25 Серин +

12 0,26 +

13 0,26 L-глутаминовая к-та + ' + +

14 0,29 +

J5 0,32 + + + +

16 0,35 +

17 0,36 +

18 0,38 + + +

19 0,46 Р-аланин + +

20 0,51 + + + +

21 0,61 D-L-валин + + + +

22 0,73 Изолейцин + + +

По органам растения аминокислоты распределяются неравномерно. Максимальное количество компонентов (12 аминокислот) содержится в цветках и листьях, минимальное (9 аминокислот) - в корнях. В сравнении с аутентичными образцами (по значениям и методом добавки в извлечение) вещество 5 определено как Б-Ь-орнигин, вещество 7 - Ь-аргинин, 11 - серии, 13 - Ь-глутаминовая кислота, 19 - р-аланин, 21 - D-L-валин, 22 - изолейцин. Обнаруженные аминокислоты, и особенно L- глутаминовая кислота, вероятно, вносят значительный вклад в нейролептическую активность препаратов М. лугового.

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ЭКСТРАКЦИОННЫХ ПРЕПАРАТОВ МАРЬЯННИКА ЛУГОВОГО

С целью получения препаратов с высоким содержанием комплекса БАВ изучены экстракционные свойства травы марьянника лугового и разработана технология получения экстрактов жидкого и сухого. Оптимальными параметрами получения жидкого и сухого спиртового экстрактов являются: 50% этанол; степень измельчения сырья > 0,25 < 2,0 мм; время настаивания 6 часов; метод получения - реперколяция. В указанных условиях получены:

- экстракт спиртовый жидкий (1:1; на 50% этаноле; содержание флавоноидов -

0,52%; иридоидов-4,28%);

- экстракт спиртовый сухой (содержание флавоноидов - 3,67%; иридоидов -

7,54%).

Для сравнительной фармакологической оценки получен экстракт водный сухой (содержание флавоноидов - 2,00%; иридоидов - 5,35%), а также максимально очищенные препараты - комплекс флавоноидов (флавоноидов 8,81%), комплекс иридоидов (иридоидов 8,5%) и комплекс полисахаридов.

На предложенный способ получения максимально очищенных препаратов -комплекса флавоноидов, иридоидов и полисахаридов получен Патент РФ на изобретение.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЭКСТРАКЦИОННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Экстракты спиртовый жидкий и водный сухой обладают противосулорожной активностью. Экстракт жидкий оказывает незначительное действие в дозе 1 мл/кг. По сравнению с контролем латентный период судорог удлиняется примерно на 20%, а продолжительность жизни животных увеличивается более чем в два раза. Экстракт водный сухой не оказывает влияния на латентный период судорог, но в дозе 100 мг/кг достоверно увеличивает продолжительность жизни более чем в два раза, при этом выживаемость животных составляет 50%, а в дозе 200 мг/кг 100% (табл. 6).

Противосудорожная активность экстракционных препаратов Melampyrumpr átense

№ Образец Доза Количество животных, игг Латентный период судорог, сек Продолжительность жизни, сек Выживаемость, %

1 Коразол 100 мг/кг 6 80 ±8,9 102 ±8,3 0

2 Экстракт водный сухой 100мг/кг 6 81,7 ±17,2 Р>0,5 237,5 ±2,8 Р<0,01 50

200 мг/кг 6 73,3 ± 12,6 Р>0,5 — 100

3 Экстракт спиртовый сухой 100 мг/кг 6 82,4 ±6,3 Р>0,5 107 ± 8,4 Р>0,5 0

200мг/кг 6 86,7 ±12,9 Р>0,5 110,5 ±23,0 Р>0,5 0

4 Экстракт жидкий 1:1, на 50% этаноле 1 мл/кг 6 106,0 ±15,2 Р>0,01 236,2 ± 1,4 Р<0,001 0

По видимому, противосудорожный эффект экстрактов водного сухого и спиртового жидкого обусловлен согласованным действием всего комплекса БАВ, содержащихся в растении.

Обнаружена гипотензивная активность у экстрактов водного и спиртового сухих, а также комплекса флавоноидов и иридоидов (табл. 7).

Таблица 7

Влияние препаратов Melampyrumpr átense на артериальное давление

Препараты Доза мг/кг Исходное АД мм ртст Время после начала введения препарата

2 мин 5мин - 10 мин

АД мм ртст. Степ, сниж АД, % АД мм ртст Степ сниж АД. % АД, мм ртст. Степ сниж АД.%

Экстракт спиртовый 1 сухой 100 164,0 ±5,73 117,7 ±6,33 р<0,001 28,2 138,7±5,92 р<0,01 15,4 150,0*3,35 р>0,05 8,5

Экстракт водный сухой 160,0*8,21 115,7*12,41 р<0,02 27,7 135,0*737 р<0,05 15,6 143,3±6,94 р>0,05 10,4

Комплекс иридоидов SO 160,0 ±6,87 122,7±8,65 р<0.01 23,3 146,0±8,47 р>0,05 8,7 150,3±7,63 О>0,05 6,1

Комплекс флавоноидов 169,3 ± 3,56 125,3±4,05 1X0.001 26,0 150,7±6,55 р<0,05 11,0 156,0*6,22 р>0,05 7,8

Комплекс полисахаридов 170,0 ±2,00 170,0±2,00 0 170,0±2,00 0 170,0±2,00 р>0,05 0

Папаверина гидрохлорид 3 112,8 ±3,8 74,0 ±5,8 р<0,01 34,4 101,6 ±8,5 9,9

Установлено, что экстракты спиртовый и водный марьянника лугового проявляют гипотензивную активность в дозе 100 мг/кг, снижая артериальное давление через 2 минуты на 28,2% и 27,7% соответственно; через 5 минут на 15,4% и 15,6% соответственно. Комплекс иридоидов проявляет эффект в дозе 50 мг/кг - через 2 минуты после начала введения снижает артериальное давление на 23,3%. Комплекс флавоноидов также проявляет гипотензивное действие в дозе 50 мг/кг: через 2 минуты артериальное давление снижалось на 26,0%, через 5 минут - на 11,0%. Комплексы иридоидов и флавоноидов в дозах 5 мг/кг, 20 мг/кг, а также комплекс полисахаридов в исследуемых дозах явного эффекта не проявили.

Днтиагрегационная активность экстракционных препаратов. Установлено, что экстракт водный сухой не оказывает влияния на агрегацию тромбоцитов. Экстракт спиртовый сухой незначительно снижает процент агрегации -торможение 0,8%. Аналогичное действие было отмечено для комплекса иридоидов - торможение 1,2%. Комплекс полисахаридов уменьшал агрегацию на 12%. Наиболее высокую активность оказывает комплекс флавоноидов, процент агрегации тромбоцитов снижался на 33,3% (табл. 8).

Таблица 8

Антиагрегационная активность препаратов Ме1атругитргМете

К» Препарат Агрегация % Р

контроль опыт торможение

1 Экстракт водный сухой 93,7±3,01 95,0±3,16 0 --

2 Экстракт спиртовый сухой 93,7+3,01 92,9±2,99 0,8 >0,05

3 Комплекс флавоноидов 93,7+3,01 60,4+1,98 33,3 <0,001

4 Комплекс полисахаридов 93,7±3,01 81,7±2,01 12,0 <0,01

5 Комплекс иридоидов 93,7+3,01 92,5+3,98 1Д >0,05

6 Папаверин 97,5+1,58 25.8±1,39 71,7 <0,001

7 Тиклид 97,5±1,58 52,9+1,50 44,6 <0,001

8 Аспирин 97,5±1,58 72,9±2,39 24,6 <0,001

9 Дипиридамол 97,5±1,58 94,2+1,67 3,3 >0,05

10 Тримекаин • 97,5±1,58 50,4+2,28 47,1 <0,001

И Лидокаин 97,5+1,58 71,7+1,24 25,8 <0,001

Экстракт спиртовый жидкий (1:1, на 50% этаноле) марьянника лугового проявил антитромбиновую активность. В разведении 1:1 он увеличивал величину тромбинового времени на 63,0% (р<0,001). Неразведенный экстракт спиртовый жидкий марьянника увеличивал время образования кровяного сгустка на 217,4% (р<0,001)(табл.9).

Влияние экстракта жидкого Melampyrumpratenbe ua тромбиновое время

Разведение п Контроль, с Опыт, с Увеличение тромбинового времени, % Достоверность, Р

1:5 5 20,4 ±0,24 21,0 ±0,50 — >0,05

1:2 5 20,2 ± 0,20 20,6 ± 0,24 — >0,05

1:1 8 21,4 ±0,26 34,9 ±0,23 63,0 <0,001

Нераз веденный 8 20,7 ± 0,25 65,7 ±0,41 217,4 <0,001

РАЗРАБОТКА НОРМАТИВНОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ НА ЛЕКАРСТВЕННОЕ РАСТИТЕЛЬНОЕ СЫРЬЕ

Оформление проекта ФС проведено в соответствии с ОСТ № 91500.05.001 -

00. Товароведческий анализ травы проведен на 8 образцах цельного и измельченного сырья в пятикратной повторности. Определены числовые показатели: содержание флавоноидов, влажность, зольность и другие. Срок годности сырья рекомендовано установить до 3 лет.

Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в сырье марьянника лугового с использованием дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на цинарозид

Изучено влияние времени экстракции, природы и концентрации экстрагента, соотношения сырья и экстрагента на выход флавоноидов. Ошибка метода с достоверной вероятностью 95% составляет 5,5%. Рекомендуемое содержание суммы флавоноидов в сырье должно быть не менее 0,1%.

Разработана методика фотоэлектроколориметрического определения суммы иридоидов в сырье и экстракционных препаратах марьянник луговой в пересчете на аукубин. Рекомендуемое содержание суммы иридоидов в сырье должно быть не менее 1,35%.

ВЫВОДЫ

1. Melampyrum pratense встречается часто по всей территории Пермской области, произрастает в лесах разных типов, на опушках, полянах, лугах, низинных болотах, у дорог.

2. Выявлены диагностические признаки в морфолого-анатомическом строении вегетативных органов Melampyrumpratense.

3. Основными группами БАВ Melampyrumpratense являются: фенольные соединения и иридоиды. С помощью аутентичных образцов и УФ-спектроскопии доказано наличие цинарозида, лютеолина, гиперозида, кофейной, хлорогеновой, феруловой кислот и аукубина.

4. Изучена внутривидовая изменчивость качественного состава фенольных соединений и иридоидов в траве и органах М. pratense. Установлена широкая

вариабельность компонентного состава указанных веществ, связанная в большей степени с уклоняющимся типом питания, а не с экологическими условиями произрастания.

5. Высокое содержание действующих веществ (флавоноидов - 0,39%, • иридоидов - 3,33%) обнаружено в фазу цветения. Оптимальной является

воздушно-теневая сушка сырья.

6. Определен качественный состав и количественное содержание жирных кислот в масле семян М. pratense. Доминирующими являются непредельные кислоты - линоленовая (29,5%), линолевая (27,2%), олеиновая (21,4%).

7. Методом эмиссионного спектрального анализа определен микроэлементный состав (19 элементов) A/, pratense и его вероятных "хозяев". Установлено, что элементный состав растений с нормальным и уклоняющимся типом питания имеет близкое и сопоставимое значение. Содержание токсичных элементов (свинец, медь) не превышает ПДК, принятые для чая.

8. Аминокислотный состав травы М. pratense представлен 22 веществами. С помощью аутентичных образцов доказано наличие D-L-орнитина, L-аргинина, серина, L-глутаминовой кислоты, р-аланина, D-L-валина, изолейцина.

9. Разработана технология получения экстракта жидкого (1:1, 50% этанол), экстракта сухого, а также суммарных очищенных препаратов (комплекс флавоноидов, иридоидов и полисахаридов) • из травы М. pratense. Установлена противосудорожная, гипотензивная, антиагрегантная, антитромбиновая активность и низкая токсичность полученных фитопрепаратов.

361, при \ = 385 нм). Ошибка единичного определения составляет 5,5% при доверительной вероятности 95%.

11. Разработана методика фотоэлектроколориметрического определения суммы иридоидов в сырье и экстракционных препаратах М. pratense в пересчете на аукубин. Ошибка единичного определения составляет 4,53% при доверительной вероятности 95%.

12. Установлены оптимальные числовые показатели, регламентирующие доброкачественность сырья, на основании которых составлен проект ФС «Трава марьянника лугового».

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЮЩИЕ РАБОТЫ:

1. Патент 2222339. Способ получения средства, обладающего гипотензивной и антикоагулянтной активностью / В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская, Б.Я. Сыропятов, О.В. Трошкова; Перм. гос. фармацевт, акад. - № 2002108102/15; Заявл. 29.03.2002; Опубл. 27.01.2004; Приор. 29.03.2002 (Россия), Бюлл. №3. - 8 с.

2. Галишевская, Е.Е. Изучение анатомического строения марьянника лугового / Е.Е Галишевская, М.В. Загребина, В.Б. Марценюк, В.М Петриченко // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы юбилейной межвузовской научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава, посвященной 40-ому выпуску провизоров заочного обучения Пермской государственной фармацевтической академии. - Пермь, 2000. - С. 173.

3. Бабиян, Л.К. Исследование по разработке технологии экстракционных препаратов очанки и марьянника / Л.К. Бабиян, Г.Н. Сытник, Н.И. Шрамм и др. // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвузовской научно-практической конференции, посвященной 85-летию высшего образования на Урале. -Пермь, 2001.-С.95.

4. Сыропятов, Б.Я. Антиагрегационная активность марьянника лугового (сем. 8сюрки1апасеае I БЛ. Сыропятов, В.М. Петриченко, Е.Е Галишевская // Там же. - С. 120.

5. Трошкова, О.В. Изучение влияния на артериальное давление препаратов марьянника лугового / О.В. Трошкова, Е.Е Галишевская., В.М. Петриченко, Б.Я. Сыропятов // Там же. - С. 122.

6. Галишевская, Е.Е. Компонентный состав иридоидов марьянника лугового / Е.Е. Галишевская, В.М. Петриченко, Т.Н. Федорова // Там же. - С. 100.

7. Галишевская, Е.Е. Влияние температурных факторов на содержание фенольных соединений в траве марьянника лугового / Е.Е.Галишевская // Материалы IV межвузовской конференции студентов, аспирантов и молодых ученых.. В 2-х частях. - Пермь, 2001. - 4.1. - С.З.

8. Галишевская, Е.Е. Изучение иридоидов марьянника лугового, произрастающего на Урале / Е.Е. Галишевская, В.М. Петриченко, А В. Хлебников, Т.Н. Федорова // Перспективы развития естественных наук в высшей школе: Материалы международной научной конференции, посвященной 80-летию со дня образования Естественнонаучного института при Пермском государственном университете (18-22 сентября 2001 г.). -Пермь, 2001.-Т. 1.-С.201 -205.

9. Галишевская, Е.Е. Фенольные соединения марьянника лугового, произрастающего на Урале / Е.Е. Галишевская, В.М. Петриченко, Т.А. Кулешова // Сборник работ 68-й итоговой сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН. В 2-х частях. - Курск, 2002. - Ч.2.- С.203.

10. Петриченко, В.М. Токсичность экстракционных препаратов марьянника лугового / В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская, Б Л. Сыропятов // Там же. -С. 243-244.

11. Томилов, А.Г. Влияние на тромбиновое время свертывания крови экстрактов некоторых растений семейства норичниковых / А.Г. Томилов, Т.В. Сухинина, Е.Е. Галишевская и дрУ/ Актуальные вопросы современной медицины: Материалы 58-й итоговой научной конференции студентов и молодых ученых (апрель 2001). -Хабаровск, 2001. - С. 114 - 115.

12. Галишевская, Е.Е. Элементный состав марьянника лугового / Е.Е. Галишевская, В.М. Петриченко // Материалы 67-й межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых. В 2-х частях. - Курск: КГМУ,

2002.-Ч.2.-С. 110.

13. Петриченко, В.М. Показатели качества травы марьянника лугового / В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская, Л.С. Макарова, С.Н. Лепина // Там же. - С. 137-138.

14. Галишевская, Е.Е. Фармакологическая активность препаратов марьянника лугового / Е.Е. Галишевская, БЛ. Сыропятов, В.М. Петриченко, О.В Трошкова // Здравоохранение Башкортостана: Специальный выпуск, посвященный 20-летию фармацевтического факультета БГМУ. - Уфа, 2002. -№2.-С. 142-144.

15. Томилов, А.Г. Влияние на тромбиновое время крови экстрактов марьянника лугового / А.Г. Томилов, Е.Е. Галишевская // Вестник РГМУ: Материалы Пироговской студенческой научной конференции. - Москва, 2002. - С. 157.

16. Трошкова, О.В. Гипотензивная активность препаратов марьянника лугового / О.В. Трошкова, Е.Е. Галишевская // Там же. - С. 157.

17. Петриченко, В.М. Анатомо-морфологическое строение Melampyrum pratense L. произрастающего в Пермской области / В.М. Петриченко, В.Б. Марценюк, Е.Е. Галишевская // Деп. в. ВИНИТИ 15.05.2003. № 958 В 2003. -Пермь, 2003-21с.

18. Петриченко, В.М. Микроэлементный состав Melampyrum pratense L. в окрестностях г. Перми / В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская, Н.С. Фурса, А.Ю. Запоров // Раст. ресурсы. - 2003. - Т.39, вып.4. - С. 104 - 108.

19. Петриченко, В.М. Жирнокислотный состав марьянника лугового / В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская, В.П. Гаранин // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвузовской научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава «Вузы и регион» ( 8-9 декабря 2003 г.) - Пермь,

2003.-С. 105-106.

20. Галишевская Е.Е. Фенольные соединения марьянника лугового / Е.Е. Галишевская, В.М. Петриченко, Т.А. Кулешова // Современные вопросы фармакогнозии: Межвузовский сборник научных трудов с международным участием, посвященный 20-летию кафедры фармакогнозии ЯГМУ. -Ярославль, 2004. - С. 73-84.

21. Петриченко, Й.М. Количественное определение суммы флавоноидов в траве марьянника лугового / В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская // Фармация. -

2004.-№1.-С.24-25.

Лицензия ПД-11-0002 от 15.12.99

Подписано в печать 12.05.2004. Формат 60X90/16. Набор компьютерный. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,0. Заказ № 360/2004.

Отпечатано на ризографе в отделе Электронных издательских систем ОЦНИТ Пермского государственного технического университета 614600, г. Пермь, Комсомольский пр., 29а, к.113, т.(3422) 198-033

»10439

Оглавление диссертации Галишевская, Елена Евгеньевна :: 2004 :: Пермь

Введение.

ГЛАВА 1. Биологическая, химическая и фармакологическая характеристика растений рода Марьянник (Обзор литературы).

1.1. Распространение, систематическое положение и биологические особенности.

1.2. Химический состав.

1.3. Экспериментальные и клинические данные о биологической активности растений рода Марьянник и применении их в научной и народной медицине.

ГЛАВА 2. Объекты и методы исследований.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы морфолого-анатомических исследований.

2.2.1. Макроскопический анализ растительного сырья.

2.2.2. Микроскопический анализ растительного сырья.

2.3 Методы химического исследования.

2.3.1 Методы качественного анализа.

2.3.2 Методы количественного анализа.

ГЛАВА 3. Морфолого-анатомические особенности марьянника лугового.

3.1. Морфологическая характеристика марьянника лугового.

3.2. Анатомическое строение марьянника лугового.

ГЛАВА 4. Химический состав и распределение основных групп биологически активных веществ марьянника лугового.

4.1. Качественный анализ на содержание основных групп действующих веществ.

4.2. Исследование фенольных соединений.

4.2.1. Изменчивость состава фенольных соединений марьянника лугового, заготовленного в разных пунктах.

4.2.2. Распределение фенольных соединений по органам и фазам вегетации.

4.2.3. Компонентный состав фенольных соединений в сырье, высушенном при различных температурных режимах.

4.2.4. Фракционирование комплекса фенольных соединений.

4.3. Исследование иридоидного комплекса.

4.3.1. Изменчивость иридоидного состава марьянника лугового, заготовленного в разных пунктах

4.3.2. Распределение иридоидов по органам и фазам развития.

4.3.3. Изменение иридоидного состава в зависимости от условий сушки сырья.

4.4. Динамика накопления флавоноидов и иридоидов в траве марьянника лугового.

4.4.1. Динамика накопления флавоноидов.

4.4.2. Динамика накопления иридоидов.

4.5. Элементный состав.<.

4.6. Качественный состав и содержание жирных кислот.

4.7. Изучение аминокислотного состава.

ГЛАВА 5. Технология получения и фармакологические свойства экстракционных препаратов.

5.1. Технология получения экстракционных препаратов.

5.1.1 Выбор оптимальной концентрации экстрагента.

5.1.2 Выбор степени измельченности сырья.

5.1.3 Выбор метода экстрагирования.

5.2. Фармакологические свойства экстракционных препаратов.

5.2.1. Противосудорожная активность.

5.2.2. Гипотензивная активность.

5.2.3. Антикоагулянтная активность.

5.2.4. Острая токсичность.

ГЛАВА 6. Разработка нормативной документации на лекарственное растительное сырьё.

6.1. Стандартизация лекарственного растительного сырья.

6.2. Методики качественного обнаружения групп биологически активных веществ в сырье.

6.3. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье.

6.4. Разработка методики количественного определения суммы иридоидов в сырье.

Выводы.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Галишевская, Елена Евгеньевна, автореферат

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Актуальной проблемой фармацевтической науки на современном этапе является поиск новых эффективных препаратов для лечения заболеваний нервной и сердечно - сосудистой систем. Эти заболевания широко распространены и часто протекают в хронической форме, требующей длительного лечения. В этом случае незаменимыми являются препараты растительного происхождения, которые обладают рядом преимуществ по сравнению с синтетическими — малой токсичностью, мягкостью действия и редким возникновением аллергических реакций.

Важнейшим при этом является поиск новых источников, способных расширить номенклатуру лекарственного сырья и лечебных средств на их основе.

Основным источником для поиска новых лекарственных растений является арсенал средств народной медицины. С этой точки зрения, особый интерес представляют растения семейства Норичниковые (Scrophulariaceac), содержащие фенольные соединения, иридоиды, жирные кислоты, алкалоиды и обладающие разносторонней биологической активностью. Одним из представителей этого семейства является марьянник луговой (Melampyrum pratense L.). Марьянник (М.) луговой известен в народной медицине под названием «черная трава» и используется как средство от головокружения, гипертонии, невралгии, судорожных состояний.

Эффективность * использования М. лугового в народной медицине при лечении заболеваний сердечно-сосудистой и нервной системы указывает на перспективность изучения химического состава и фармакологического действия этого растения. Недостаточная химико-фармакологическая изученность не позволяет использовать его в научной медицине. В связи с этим, комплексное изучение травы М. лугового является актуальным.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ состоит в комплексном изучении М. лугового: морфолого-анатомических признаков, химического состава, возможности производства экстракционных препаратов и изучении их фармакологического действия, а также стандартизации лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- изучить химический состав биологически активных веществ по органам и фазам развития;

- разработать оптимальные условия получения экстракционных препаратов;

- провести исследование фармакологической активности и токсичности полученных препаратов;

- разработать и усовершенствовать методики качественного и количественного определения биологически активных веществ (БАВ) в траве и экстракционных препаратах;

- разработать нормативную документацию (ФС) на сырье марьянника лугового.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

1. Выявлены диагностические признаки в морфолого-анатомическом строении вегетативных органов марьянника лугового.

2. Изучен состав и распределение фенольных соединений и иридоидов по органам и фазам развития марьянника лугового.,

3. Определен элементный, жирно- и аминокислотный состав марьянника лугового.

4. Разработаны методики количественного определения флавоноидов и иридоидов.

5. Разработана технология получения экстракционных препаратов из травы М. лугового.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Научно обоснована целесообразность использования травы М. лугового для получения препаратов гипотензивного, антитромбинового, антиагрегантного и противосудорожного действия.

Разработаны оптимальные условия получения экстракционных препаратов из травы М. лугового.

Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов и иридоидов в сырье.

На основании данных фитохимического, фармакологического, морфолого-анатомического и товароведческого анализов разработан проект ФС «Трава марьянника лугового».

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ: результаты морфолого-анатомических, фитохимических и фармакологических исследований; экспериментальные данные по стандартизации травы и препаратов марьянника лугового; обоснование возможности использования марьянника лугового в медицинской практике в качестве гипотензивного, антитромбинового, антиагрегантного и противосудорожного средства.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМАМИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно - исследовательских работ кафедры ботаники и общей биологии Пермской государственной фармацевтической академии (№ Государственной регистрации 01.9.10018875, протокол № 4 от 29.12.98).

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 20 работ и получен патент РФ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на 152 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка литературы и приложения. В тексте содержится 54 таблицы, 23 рисунка. Список цитируемой литературы включает 137 источников, из них 21 на иностранных языках.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое изучение марьянника лугового"

ВЫВОДЫ

2. Выявлены диагностические признаки в морфолого-анатомическом строении вегетативных органов Melampyrum pratense.

3. Основными группами БАВ Melampyrum pratense являются: фенольпые соединения и иридоиды. С помощью аутентичных образцов и УФ-спектроскопии доказано наличие цинарозида, лютеолина, гиперозида, кофейной, хлорогеновой, феруловой кислот и аукубина.

4. Изучена внутривидовая изменчивость качественного состава фенольных соединений и иридоидов в траве и органах М. pratense. Установлена широкая вариабельность компонентного состава указанных веществ, связанная в большей степени с уклоняющимся типом питания.

5. Высокое содержание действующих веществ (флавоноидов - 0,39%, иридоидов 3,33%) обнаружена в фазу цветения. Оптимальной является воздушно-теневая сушка сырья.

7. Методом эмиссионного спектрального анализа определен микроэлементный состав (19 элементов) М. pratense и его вероятных "хозяев". Установлено, что элементный состав растений с нормальным и уклоняющимся типом питания имеет близкое и сопоставимое значение. Содержание токсичных элементов (свинец, медь) не превышает ПДК, принятые для чая.

8. Аминокислотный состав травы М. pratense представлен 22 веществами. С помощью аутентичных образцов доказано наличие D-L-орнитина, Lаргинина, серина, L-глутаминовой кислоты, р-аланина, D-L-валина, изолейцина.

9. Разработана технология получения жидкого (1:1, 50% этанол), сухого экстракта, а также суммарных очищенных препаратов (комплекс флавоноидов, иридоидов и полисахаридов) из травы М pratense. Установлена противосудорожная, гипотензивная, антиагрегантная, антитромбиновая активность и низкая токсичность полученных фитопрепаратов.

10. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в сырье и экстракционных препаратах М. pratense с использованием дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на цинарозид (E1%i см = 361, при X = 385 нм). Ошибка единичного определения составляет 5,5% при доверительной вероятности 95%

11. Разработана методика фотоэлектроколориметрического определения суммы иридоидов в сырье и экстракционных препаратах М. pratense в пересчете на аукубин. Ошибка единичного определения ^ составляет 4,53% при доверительной вероятности 95%.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2004 года, Галишевская, Елена Евгеньевна

1. Анненков, Н.И. Ботанический словарь / Н. И. Анненков. 2-е изд. СПб., 1878.-645 с.

2. Базилевская, Н.А. Многолетние цветы открытого грунта / Н.А. Базилевская,

3. A.Г. Марков, Г.П. Олисевич, А.П. Радищев. М.', 1959. - 439 с.

4. Бандюкова, В.А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографии на бумаге / В.А. Бандюкова // Растительные ресурсы. 1965. - Т.1, вып. 4. - С.591-596.

5. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты некоторых растений флоры Северного Кавказа / В.А. Бандюкова, Г.Н. Земцова, Н.В. Сергеева, В.И. Фролова // Химия природных соединий. 1970. - №3. - С. 388.

6. Бандюкова, В.А. Природные С гликозиды флавоноидов / В.А. Бандюкова,

7. B.А. Югин //Химия природных соединений. 1981. - №1. - С. 5 - 24.

8. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды / В.А. Бандюкова //Химия природных соединений. 1983. - №2. - С. 271 - 275.

9. Барабой, В.А. Растительные фенолы и здоровье человека / В.А. Барабой. -М.: Наука, 1984.- 160 с.

10. Барковский, В.Ф. Дифференциальный спектрофотометрический анализ /В.Ф. Барковский, В.И. Ганапольский. -М.: Высш. шк., 1969.-95 с.

11. Бейлин, И. Г. Паразитизм и эпифитотиология / И.Г. Бейлин // М., Наука, 1986, С.70-80.

12. Беленький, M.JI. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / M.JI. Беленький. — JI.: Медгиз, 1963. 152 с.

13. Березина, М.П. Большой практикум по физиологии человека и животных / М.П. Березина, Н.Е. Василевская, М.С. Авербах и др. // Под ред. JI.JI. Васильева, И.А. Ветюкова. М.: Высшая школа, 1961. - С, 657.

14. Биохимические методы анализа растений / Перевод А.Н. Бояркина, Т.В. Венкстерн, Л.Я Полозовой, Р.И. Татарской, под редакцией и предисловием М.Н. Запрометова. М.,1960. - С.483-505.

15. Бранги, Т.А. К вопросу о механизмах успокаивающего влияния аминокислот на сократительную способность миокарда / Т.А. Бранги // Вопросы фармакологической регуляции деятельности сердца. М., 1969. - С. 84 - 85.

16. Брезгин, Н.Н. Лекарственные растения Верхневолжья / Н.Н. Брезгин. Ярославль, 1984.-320 с.

17. Вайнтруб, М.Я. О классификации побочных действий противоэпилептиче-ских препаратов / М.Я. Вайтруб // Сов. медицина, 1978. №7. - С.49-52.

18. Вайнтруб, М.Я. Побочное действие противоэпилептических препаратов: Методические указания / М.Я. Вайтруб. М., 1981.-41 с.

19. Вотчал, Б.Е. Сердечные гликозиды / Б.Е. Вотчал, М.Е. Слуцкий. М.: Медицина, 1973.

20. Викторов, С.В. Индикационная геоботаника: Учебное пособие./ С.В. Викторов, Г.Л. Ремезова. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1988. - 168с.

21. Галишевская, Е. Е. Влияние температурных факторов на содержание фенольных соединений в траве марьянника лугового / Е.Е. Галишевская // Материалы IV Межвузовской конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. Пермь, 2001. - 4.1. - С.З.

22. Галишевская, Е.Е. Фармакологическая активность препаратов марьянника лугового / Е.Е. Галишевская, Б.Я. Сыропятов, В.М. Петриченко, О.В. Трош-кова // Здравоохранение Башкортостана, специальный выпуск. 2002. - №2 С. 142-144.

23. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений // В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук и др.;- Новосибирск: Наука. Сиб. отделение. 1990. - 333 с.

24. Государственная фармакопея СССР, 10-е изд. / МЗ СССР.- Медицина, 1969. С.779-781.

25. Государственная фармакопея СССР, 11-е изд. М.: Медицина, 1987. - Вып. 1. Общие методы анализа. - 334 с.

26. Гринцевич, О.М. Лекарственные растения Западной области / О.М. Грин-цевич // Материалы к изучению естественных производительных сил Западной области. Смоленск, 1933. - Вып. 3. - С. 19-127.

27. Гром, И.И. Сведения о лекарственных растениях народной медицины Коми АССР / И.И. Гром // Вопросы фармакогнозии. Л., 1965. - Вып. 3. - С. 199 -214.

28. Дерябина, Ф.И. Лекарственные растения и сборы, применяемые в народной медицине Коми-Пермяцкого национального округа / Ф.И. Дерябина // Вопросы фармакогнозии. Л., 1965. - Вып. 3. - С. 215 - 224.

29. Дёготь А. В. Фитохимическое исследование некоторых представителей сем-ва Норичниковых // Диссертация на соискание учёной степени кандидата фарм. наук Дёготь А. В., Запорожье, 1971.

30. Деготь, А. В. Иридоиды семейства Норичниковых / А. В. Деготь, В. И. Лит-виненко //Современные проблемы фармацевтической науки и практики -Киев, 1972, С. 716-719.

31. Деготь, А.В. Иридоиды вегетативных или продуктивных органов и их частей зубчатки поздней / А.В. Деготь, Н.С. Фурса, В.И. Литвиненко // Фармац. журн. М., Наука, 1985. - С. 72.

32. Дьоготь, А.В. Ipiflo'Oji в родин! ранникових / А.В. Дьоготь, B.I. Литвиненко, И.О. Черних, 1.Г. Зоз // Фармац. журн. 1972. - Т. 27, №1. - С. 66.

33. Дьоготь, А.В. Розповсюдження та можливост1 використання в медицин! ipwo'wB родинифанникових / А.В. Дьоготь, М.С. Фурса, B.I. Литвиненко // Фармац. журн. 1984. - №5. - С. 36 - 41.

34. Джисман, Т. Биогенез фенолов растительного происхождения / Т. Джисман // Биогенез природных соединений. М., 1965. - С. 482 - 527.

35. Долгова, А.А. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии / А.А Долгова, Е. Я. Ладыгина. М.: Медицина, 1977. - 275 с.

36. Доля, B.C. Жирные масла семян некоторых видов сем. Scrophulariaceae и состав фенолов семян двух видов Verbascum L. / B.C. Доля, Д.В. Литвиненко // Растительные ресурсы. 1996. -Т.32, вып. 4. - С. 44 - 52.

37. Зайцев, Г. Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике / Г. Н. Зайцев. М.: Наука, 1984. - 434 с.

38. Залесов, B.C. О противосудорожных свойствах производных бензиловой и дифенилуксусной кислоты. / B.C. Залесов // Фармакол. и токсикол. 1963. -Т. 26, № 4. - С. 418 - 431.

39. Запрометов, М.Н. Фенольные соединения и методы их исследования / М.Н. Запрометов // Биохимические методы в физиологии растений. — М., 1971. -С. 185-207.

40. Запрометов, М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. — М.: Высш. шк., 1974.-214 с.

41. Зарудий, Ф.С. К фармакологии марьянника лугового / Ф.С. Зарудий // Материалы 1-й объединенной науч. студ. конф. мед. вузов. Свердловск, 1961. -С. 5 - 6.

42. Зарудий, Ф.С. К фармакологии марьянника гребенчатого / Ф.С. Зарудий // Автореф. дис. канд. мед. наук. / Ф.С. Зарудий. Уфа, 1967. - 17 с.

43. Зарудий, Ф.С. Нейролептические свойства марьянника / Ф.С. Зарудий // Вопросы клинико-экспериментального изучения действия психотропных средств. Уфа, 1967.-С. 117-121.

44. Иванов, В.В. Норичниковые северного Прикаспия / В.В. Иванов // Флора и растительность северного Прикаспия. Л., 1975.- С. 52 - 97.

45. Иванов, С.Л. Климатическая теория образования органических веществ / С.Л. Иванов.-М.: АН СССР, 1961. С.

46. Измеров, Н.Ф. Параметры токсиметрии промышленных ядов при однократном воздействии / Н.Ф. Измеров, И.В. Санацкий, К.К. Сидоров. М.: Медицина, 1977.-С. 196-197.

47. Кабата-Пендиас, А Микроэлементы в почвах и растениях / А. Кабата

48. Пендиас, X. Пендиас // М., 1989. >

49. Карасек, Ф. Введение в хромато-масс спектрометрию / Ф. Карасек, Р. Клемент. М.,1993. С

50. Каримова, С.Г. Действующие вещества марьянника лугового {Melampyrum pratense) и марьянника гребенчатого {Melampyrum cristatum) / С.Г. Каримова // Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения в Башкирии. -Уфа, 1961. Вып.1. - С.137-142.

51. Каримова, С.Г. Гликозидная фракция марьянника гребенчатого и ее фармакологические свойства / С.Г. Каримова, Д.Н. Лазарева //Материалы совещ. по растительным ресурсам Южного Урала. Уфа, 1963. - С. 11-13.

52. Каримова, С.Г. Биохимические особенности марьянника гребенчатого / С.Г. Каримова // Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения в Башкирии. — Казань, 1968. Вып. 2. - С.111-125.

53. Каримова, С.Г. Предварительное химическое изучение некоторых видов сем. Норичниковых, произрастающих в Башкирии / С.Г. Каримова // Растит, ресурсы. 1969. - Т.5, вып. 1. - С. 47 - 54.

54. Каримова, С.Г. О химическом составе и фармакологических свойствах марьянника гребенчатого / С.Г. Каримова // Растит, ресурсы. 1969. Т.5, вып. 3.- С. 416-421.ч

55. Каримова, С.Г. / Биологические и биохимические особенности некоторых представителей семейства норичниковых (Scrophulariaceae) / С.Г. Каримова // Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения в Башкирии. Уфа, 1974.-Вып. 4.-С. 89- 105.

56. Каримова, С.Г. Интродукция некоторых норичниковых в Ботаническом саду Института биологии в Башкирии / С. Г. Каримова // Ресурсы и интродукция растений в Башкирии. Уфа, 1983. - С.63-70.

57. Клер, О.Е. О некоторых лечебных травах Среднего Урала / О.Е. Клер // Сб. Зап. Урал. о-ва. любителей естествознания. Екатеринбург, 1878. - Т. 4. - С. 51 - 105.

58. Клышев, JI.K. Флавоноиды растений ( Распространение, физико-химические свойства, методы исследования) / В.А. Бандюкова, JI.C. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 220 с.

59. Ковалевский, А. Л. Биогеохимия растений / A.JI. Ковалевский. Улан-Удэ, 1969. - С. 195-214.

60. Ковалев, В. Г. Нейроактивные аминокислоты и регуляция кровообращения /

61. B. Г. Ковалев // Тр. Волгоградского мед. ин-та. Волгоград, 1977. - Т. 30, вып. 3. - С. 13 - 16.

62. Коновалова, О.А. Количественное определение суммы валепотриатов в корневищах с корнями Valeriana officinalis L. / О. А.Коновалова, К.С. Рыбалко, J1.H. Толстых//Химико-фармацевтический журнал. — 1983. Т. 17, №7-С. 831-836.

63. Кретович, B.JI. О биохимических параметрах растений и некоторых особенностях изучения их / B.J1. Кретович // Биохимия растений. М., 1980.1. C. 100.

64. Кучеров, В.Е. Марьянник новое лекарственное растение / Е.В. Кучеров, С.Г. Каримова, Д.Н. Лазарева, Г.Г. Максимов, Ф.С. Зарудий, Н.З. Изгина // Вопросы рационального использования растительных ресурсов южного Урала. - Уфа, 1963. - С.24-27.

65. Лазарева, Д.Н. К фармакологии марьянника / Д.Н. Лазарева, Ф.С. Зарудий // Дикорастущие и интродуцируемые полезные растения в Башкирии. Уфа: БФАН СССР, 1961. - Вып.1. - С. 28-33.

66. Лазарева, Д.Н. О нейролептическом действии марьянника / Д.Н. Лазарева, Г.Г. Максимов, Ф.С. Зарудий, Н.З. Изгина // Вопросы рационального использования растительных ресурсов Южного Урала. Уфа, 1963. - С.29-31.

67. Лазарева, Д.Н. О нейротропном действии марьянника гребенчатого / Д.Н. Лазарева, С.Г. Каримова, Ф.С. Зарудий, Г.Г. Максимов, Н.З. Изгина // Фармакология и токсикология. 1966. - Т. 29, №2. - С. 175 - 177.

68. Ларин, И.В. Кормовые растения сенокосов и пастбищ СССР / И.В. Ларин, Ш.М. Агабабян, Т\А. Работнов, А.Ф. Любская, В.К. Ларина, М.А. Касимен-ко // В 3 т. М., Л., 1951. - Т. 2. - 948 е.; 1956. - Т. 3. - 879 с.

69. Ловкова, М.Я. Почему растения лечат? / М.Я. Ловкова, A.M. Рабинович, С.М. Пономарева и др. М.: Наука, 1989. - 256 с.

70. Люсов, В.А. Роль системы свертывания крови в развитии сердечнососудистых заболеваний. / В.А. Люсов // Превентивная кардиология. Под ред. Г.И. Косицкого. М.: Медицина, 1987. С. - 335 - 356.

71. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. 10-е изд. / М.Д. Машков-ский М., 1986. - Т.1. - 624 е.; Т.2. - 575 с.

72. Мизеров, М.И. Список трав и других лекарственных средств, употребляемых в Красноуфимском уезде / М. И. Мизеров, Н. Л. Скалозубов // Фармацевт. 1893. Год 1-й, № 17. - С. 612 - 614.

73. Минаева, В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование / В.Г. Минаева; Отв. ред. М. Н. Запрометов. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1978. - 255с.

74. Митрофанов, А.И. О противосудорожном действии пассиорипа / А.И. Митрофанов // Материалы 27-й научной конференции СГМИ Смоленск, 1968. - Т.26. - С.223-224.

75. Мнацаканян, В.А. Иридоидные гликозиды / В.А. Мнацаканян. Ереван, 1986.- 187с. .

76. Муравьева, В.И. Исследование растений, применяемых в народной медицине на содержание аскорбиновой кислоты / В.И. Муравьева, А.И. Баньков-ский //Тр. Всесоюз. н. -и. ин-та. лекарственных и ароматических растений. М., 1947.-Вып. 9. С.39-118.

77. Насыров, Х.М. Зарудий Ф.А. О нейротропном действии растений семейства Норичниковых / Х.М. Насыров, Ф.А. Зарудий // Современные проблемы фармакологии. Киев, 1971. - С.85-93.

78. Насыров, Х.М. Антибактериальные свойства некоторых растение семейства норичниковых /-Х.М. Насыров, Н.Н. Ворошилова, Ю.А. Глухарев // Дикорастущие и интродуцируемые полезые растения в Башкирии. Уфа, 1971. -Вып. З.-С. 112-116.

79. Николаева, М.Г. Физиология глубокого покоя семян / М.Г. Николаева. Л.: Наука, 1967.-206 с.

80. Овеснов, С.А. Конспект флоры Пермской области / С.А. Овеснов. Пермь: Перм. гос. ун-т, 1997. - 252 с.

81. ОСТ 91500.05.001 -00 Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. Введ.01.03.2000. - 2000. - 6 с.

82. Перельман, А.И/Геохимия ландшафта / А.И. Перельман. М., 1975.

83. Петриченко, В.М. Элементный состав Euphrasia brevipilia Burn, et Gremli./ B.M. Петриченко, T.B. Сухинина, H.C. Фурса, А.Ю. Запоров, А.В. Жекин // Растительные ресурсы, 2002. -Т.38, вып.1. С.

84. Полякова, Л.В. Флавоноидный комплекс Astragalus austrosibiricus Schischk. в природных популяциях Алтая / Л.В. Полякова, Э.А. Ершова // Растительные ресурсы. 1996.-Т.32, вып. 1-2.-С.81 -87.

85. Пономарев, В.Д. Эксрагирование лекарственного сырья / В.Д. Пономарев. -М.: Медицина, 1976.

86. Попов, Д.М. Контроль качества сырья и препаратов пустырника спектрофотометрическим методом / Д.М. Попов, Е.В. Пащинская, J1.H. Коваленко // Фармация. 1992. - №4. - С. 27-31.

87. Практическая фитотерапия: Поли, энцикл. / Т.А. Виноградова, Б.Н. Гажев, В.М. Виноградов, В.К. Мартынов.-М.: Олма-Пресс, 1998.-499 с.

88. Прозоровский, В.В. Экспресс — метод определения средней эффективой дозы и ее ошибки / В.В Прозоровский, М.П. Прозоровская, В.М. Демченко // Фармакол. и токсикол. 1978. - №4. - С. 497 - 552.

89. Прозина, М.Н. Ботаническая микротехника / М.П. Прозина. М.: Высш. шк., 1960.-260 с.

90. Просовский, М.А. Фармакогностическое изучение ромашки душистой // Дис. канд. фармац. наук: 15.00.02/М.А. Просовский. Пермь, 1986. - 144 с.

91. Рабинович, М.И. Влияние марьянника лугового па сердечно-сосудистую деятельность / М.И. Рабинович // 3-я Уральская конференция физиологов, биохимиков и фармакологов, посвящённая 40-летию Удмуртской АССР. -Ижевск, 1960.-С. 192-193.

92. Рабинович, М.И. К фармакологической характеристике некоторых лекарственных растений из семейства Норичниковых / М.И. Рабинович // Материалы IX Всесоюзной фармакологической конференции. Свердловск, 1961.-С.211-212.

93. Рабинович, М.И. Семейство норичниковых источник новых растений сердечно-сосудистого действия / М.И. Рабинович, А.И. Шретер, А.В. Ермолин, З.Я. Глазырина, Л.Ф. Буравова // Тр. Троицкого вет. ин-та. 1970. - Т. 13, вып. 1. - С. 74 — 81.

94. Работнов, Т.А. Работы К, Линнея и его учеников в области изучения кормовых растений / Т.А. Работнов //Ботан. жури. 1940. Т. 25, № 2- С. 144 - 154.

95. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование, сем-во Caprifoliaceae Plantaginaceae. - М.:Наука, 1990. -328 с.

96. Ремезова, Г.Л. Иван да - марья в дубовом лесу / Г.Л. Ремезова //Тр. Воронеж. гос. заповедника, 1954. - Вып. 5. - С. 186- 188.

97. Ржехин, В.П. Руководство по методам исследования, технохимическому контролю и учету производства в масложировой промышленности / В.П. Ржехин, А.Г. Сергеев. В 5т. - Л., 1967. - Т. 1. - С.98. Сан.ПиН 2.3.2.560-96

98. Соколов, Е. А. Охотничьи животные: Корма и питание промысловых зверей и птиц. М., 1949. - Вып. 1.-256 с.

99. Соколов С. Я. Справочник по лекарственным растениям / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Медицина, 1985. - 464 с.

100. Сухинина Т. В. Фармакогностическое изучение растений рода Очанка // Ав-тореф. дисс. канд. фарм. наук / Т.В. Сухинина. Пермь, 2002. - 20с.

101. Сюзев, П.В. Медоносные растения, дикорастущие в Пермской губернии / П.В.Сюзев. Пермь, 1902. - 36 с.ч

102. Томилов, А.Г. Влияние на тромбиновое время свертывания крови экстрактов некоторых растений семейства норичниковых / А.Г. Томилов, Т.В. Сухинина, Е.Е. Галишевская // Актуальные вопросы современной медицины. -Хабаровск 2001.-С. 114-115.

103. Томилов , А. Г. Влияние на тромбиновое время крови экстрактов марьянника лугового / А. Г. Томилов, Е. Е. Галишевская //Вестник РГМУ: Материалы Пироговской студенческой научной конференции. М., 2002. С. 157.

104. Фелинг, Ф. Эндокринология и метаболизм /Ф. Фелинг, Дж. Вакетер, А. Бро-дус и др. М.: Мир, 1985. - Т.2. - 360 с.

105. Флора СССР // Ред. тома Б. К. Шишкин, Е. Г. Бобров М.,Л.: Академия наук СССР, 1955. - Т.22. - С.540.

106. Флора Европейской части СССР / Под ред. Ан.А. Федорова, Р.В. Камелина. -Л.: Наука, 1981.-380 с.

107. Фурса, Н.С. Рентгенофлуоресцентный анализ элементного состава листьев багульника крупнолистного. / Н.С. Фурса, Т.А. Бакланова, М.В. Белоусов, М.С. Коротаева // Здравоохранение Башкортостана. Уфа, 2002. - № 2. - С. 97-98.

108. Хефтман, Э. Биохимия стероидов / Э. Хефтман. М.: Мир, 1972.

109. Химический анализ лекарственных растений: Учеб. пособие для фармац. вузов / Ладыгина Е.Я., Сафронович Л.Н., Оряшенкова В.Э. и др.; Под. ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронович. -М.: Высш. шк., 1983. 176 с.

110. Хребтов А.А. Полезные и вредные растения Урала / А.А. Хребтов. Свердловск, 1941. - 25$ с.

111. Хроматография на бумаге / Под ред. И.М. Хайса и К. Мацека. М.: Иностр. лит., 1962.-851 с.

112. Хроматография. Практическое приложение метода: Пер. с англ. М.: Мир, 1986.-329 с.

113. Эдди, М.Ж. Противосудорожная терапия / М.Ж. Эдди, Дж.Х. Тайрер. М.: Медицина, 1983.-384 с.

114. Ядовитые растения лугов и пастбищ / Отв. ред. Б. К. Шишкин. М.; Л., 1950. 526 с.I151 "

115. Ярцева, И.Б. Количественное определение суммы флавоноидов в траве одуванчика лекарственного / И.Б. Ярцева, В.А. Куркин // Фармация. 1996. -№4. - С. 24-27.

116. Ahn, В. Z. Melampyroside, ein neus Iridoid aus Melampyrum sylvaticum L.I B.Z. Ahn, P. Pachaly // Tetrahedron. 1974. Vol. 30, N 22. - P. 4049 - 4054.

117. Akao Т., Kobashi K., Aburaola M. Enzumic studies on the animal and intestinal bacterial metabolism of Geniposide // Biol. Pharm. Bull. 1994, - V.17, №12, -P. 1573-1576.

118. Biswas, K. Common medical plants of Darjeeling the Sikkim Himalayas / K. Biswas//Alipore, 1956.-P. 157

119. Braecke, M. Sur la presence d'aucubine et de melampyrite dans pluseurs especes de Melampyres / M. Braecke // C. r. Acad. sci. 1922. T. 175. - P.990 - 992.

120. Bridel, M. Sur la presence d'un glucoside dedoublable par l'emulsine dansdeux especes du genre Melampyrum/ M. Bridel, M. Braecke // C. r. Acad. sci. 1921. Vol. 173.-P. 414-416.

121. Chaudhuri, R. K. Minor iridoid glucosides of Melampyrum sylvaticum / R.K. Chaudhuri, O. Sticher // Planta med. 1980. Vol. 39, N 2. - P.l40 - 143.

122. Greger G., Simchen P. Zur Kenninis iridoider Pflanzensteffe // Die Pharmazie, 22, №6, 1967 S.315.

123. Damtofl, S. Iridoid glucosides from Melampyrum! S. Damtoft, S. B. Hansen, B. Jacobsen, S. R. Jensen, B. J. Nelsen // Phytocemistry. 1984. Vol. 23, N 10. - P, 2387-2389.

124. Dragendorff, G. Die Heilpflansen der verschienden Volker und Zeiten. Stuttgart, 1898.- 884 S.

125. Harborn, J. B. The natural distribution in angiosperms of antocyanins acylated with aliphate dicarboxyc acids / J. B. Harborn // Phytocemistry. 1986. Vol. 25, N 8.-P. 1887-1894.

126. Hoppe, H. Drogenkunde: Bd 1 -2. Berlin; New York, 1975. Bd 1. 1311 S.

127. Kimula A., Okuba Т., Tacanot T. Constituents of Catalpa ovata, Iakugaku Zasshi, 1963- P.83, 635.

128. Klimek B. 6 0 - p - Coumarajlcatalpol from Verbascum lychnitis // Planta Med., 1991,-V.57, №3.-P.298.

129. Neamtu, G. Cercetari chemotaxonomice la plantele superioare / G. Neamtu, c. Bodea// Stud. §i cerc. Biochim. 1970. T. 13, N 4. - P. 405-410.

130. Ortiz de Urbina A.V., Martin M.L., Fernandes B. et al. In vitro antispasmodic activity of peracetylated penstemonoside, aucubin and catalpol // Planta med. -1994, V.60, №6/ - P.512-515.

131. Swi^tek, L. Glucosydy iridoidowe w rodzinie Scrophulariaceae / L.Swi^tek //Acta pol. Pharm. 1973. T.30, N 2. S.203-212.

132. Tan R. H., Wolfender J. L., Ma W.G. et al. Secoiridoide and antifungal aromatic acide from Gentiana algida//Phytochemistry, 1996,-V.41, №1,-P.11-116.

133. Wehmer, C. Die Pflanzenstoffe: Bd 1-2. Jena, 1929. Bd 1. 640 S; 1931, Bd 2. 1514 S.

134. Wehmer, C. Systematische Verbreitung und Vjrkjmmtn von Betainen, Cholin und Muscarin / C.Wehmer, Hadders M. // Handbuch der Pflanzenanalyse: Bd 1-4. Wien, 1933. Bd4, T.l. - S.291-298.