Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фитохимическое изучение и стандартизация препаратов на основе экстрактов растений семейства Норичниковые

На правах р;

ШЕСТАКОВА ТАТЬЯНА СЕРГЕЕВНА

ФОТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТОВ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА НОРИЧНИКОВЫЕ

15 00 02 ~ фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

2 5 '

^илыу 32

Пермь-2007

003161732

Работа выполнена в Пермской государственной фармацевтической академии

Научный руководитель

Официальные оппоненты

доктор фармацевтических наук,

профессор Петриченко Василий Михайлович,

зав кафедрой ботаники и общей биологии

Пермской государственной фармацевтической академии

доктор фармацевтических наук,

профессор Фурса Николай Сергеевич,

зав кафедрой фармакогнозии с курсом ботаники

Ярославской государственной медицинской академии

кандидат фармацевтических наук, Бурцева Ирина Владимировна,

старший преподаватель кафедры фармакогнозии Пермской государственной фармацевтической академии

Ведущая организация

Сибирский государственный медицинский университет

Защита состоится 20 ноября 2007 года в « / ¿7» часов на заседании диссертационного совета Д 208 06801 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу 614990, г Пермь, ул Ленина, 48 тел 212-90-06

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии

Автореферат разослан « ^ » октября 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент

Метелева Е В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. В структуре современного фармацевтического рынка неуклонно растет доля препаратов на основе лекарственного растительного сырья По данным ВОЗ, сегодня около 80 % людей в мире используют фитопрепараты для лечения и профилактики различных заболеваний Широкий спектр их действия объясняется многокомпонентностью состава биологически активных веществ, одновременным присутствием соединений различной природы Мягкое терапевтическое действие, малая токсичность, редкое возникновение побочных явлений и, наконец, экономическая доступность - вот немногие из достоинств растительных средств

Растущий интерес населения и медицинских работников к фитотерапии стимулирует расширение и обновление ее ассортимента за счет внедрения в научную медицину растений народной медицины, разработки новых фитопрепаратов, выпуска лечебно-профилактических, парфюмерно-косметических и других видов продуктов на растительной основе

Перспективными объектами для разработки фитопрепаратов являются растения семейства Норичниковые (ScrophuUmaceae), традиционно применяемые в народной медицине различных стран В последние годы прошли испытания и разрешены к медицинскому применению норичник Бюргера - средство, улучшающее кровообращение, вероника виргинская - противовоспалительное средство при желудочно-кишечных заболеваниях; коровяк густоцветковый - муколитическое средство Потенциальными источниками для производства лекарственных препаратов являются вцды рода Очанка, Зубчатка, Вероника, Погремок, Коровяк

Повышенный интерес у медицинских работников и населения вызывают лекарственные средства на основе травы очанки Учитывая конъюнктуру рынка, фармацевтическими предприятиями выпущен рад препаратов на основе этого сырья «Звездная очанка» (ЗАО «Эвалар», Россия), «Миртикам» (НПП «Камелия», Россия), «Eyebnght» (« Nature's Way», США), «Ultra clear» («Royal body care International», Inc, США), «Очанка+Черника» (ООО «Нарине», Россия) и другие Пермским филиалрм ФГУП «Микроген» НПО «Биомед» разработан фитопрепарат «Уральская очанка», зарегистрированный в качестве биологически активной добавки к пшце

Не смотря на наличие целого ряда биологически активных добавок на основе травы очанки, сведения о стандартизации препаратов очанки отсутствуют В медицинской практике не используются ценные фармакологические свойства растений рода Зубчатка, Погремок, Вероника и других. Выше изложенное подчеркивает актуальность и новизну данной работы

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Целью настоящей работы является фотохимическое изучение, стандартизация и исследование биологической активности препаратов на основе экстрактов растений семейства Норичниковые

Для достижения поставленной цели исследования необходимо было решить следующие задачи:

• Изучить состав флавоноидов, иридоидов, фенолкарбоновых кислот, углеводов в экстракционных препаратах травы очанки коротковолосистой (БАД «Уральская очанка», сухого и жидкого экстрактов),

• Провести сравнительное изучение макро- и микроэлементного состава травы и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой и выявить закономерности извлечения элементов в различные лекарственные формы,

• Определить количественное содержание основных групп БАВ в экстракционных препаратах;

• Провести стандартизацию экстракционных препаратов и разработать проект ФСП на экстракт очанки жидкий,

• Определить соответствие технологических показателей качества таблеток «Уральская очанка» требованиям ГФ XI издания,

• Провести оценку биологических свойств БАД «Уральская очанка»,

• Разработать комбинированные препараты на основе экстрактов растений семейства Норичниковые с противовоспалительной, антимикробной и анестезирующей активностью и выявить наиболее перспективные для внедрения в медицинскую практику,

• Провести оценку комбинированных фитопрепаратов на содержание основных групп действующих веществ

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ:

1 Впервые изучен химический состав и определены параметры стандартизации экстракционных препаратов из травы очанки коротковолосистой сухого и жидкого экстрактов, БАД «Уральская очанка»

2 Установлены закономерности перехода макро- и микроэлементов в экстракционные препараты травы очанки

3 Проведено исследование биологических свойств БАД «Уральская очанка» установлена антикоагулянтная, противомикробная и противовоспалительная активность, сочетающаяся с низкой токсичностью

4 Впервые разработаны комбинированные препараты, содержащие экстракты растений семейства Норичниковые, ДМСО и местный анестетик Наиболее активными и перспективными для внедрения в медицинскую практику являются препараты с экстрактами очанки коротковолосистой, вероники дубравной и зубчатки обыкновенной

5 Определены физико-химические свойства, качественный состав и содержание действующих веществ в комбинированных фитопрепаратах, содержащих растительные экстракты, ДМСО и анилокаин

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Полученные данные по химическому составу и стандартизации могут бьггь использованы для оценки качества экстракционных препаратов очанки в производственных условиях

На основании данных фитохимического анализа разработан проект ФСП «Очанки экстракт жидкий»

Научно обоснована целесообразность применения БАД «Уральская очанка» в качестве противомикробного, антикоагулянтного и противовоспалительного средства

В результате скрининшвых исследований фармакологической активности доказана эффективность использования комплексных препаратов с экстрактом травы очанки коротковолосистой, вероники дубравной и зубчатки- обыкновенной в качестве противомикробных и противовоспалительных средств

Материалы диссертационного исследования использованы при разработке методического пособия к практическим занятиям для интернов и слушателей ФДПО по теме «Подлинность и количественное определение действующих веществ в экстракционных препаратах травы очанки»

Приоритет проведенных исследований подтвержден заявкой на получение Патента РФ на изобретение «Фармацевтический препарат для лечения заболеваний суставов и способ его получения»

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ: результаты фотохимических и биологических исследований экстракционных препаратов травы очанки коротковолосистой и комбинированных препаратов с экстрактами растений семейства Норичниковые СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры ботаники и общей биологии Пермской государственной фармацевтической академии (№ Гос регистрации 01910018875, протокол № 4 от 29 12 98)

АПРОБАЦИЯ. Основные положения работы доложены и обсуждены на региональных конференциях «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования итоги и перспективы» (Пермь, 2001), X, XII, XIV, XV Всероссийской конференции «Экология проблемы и пути решения» (Пермь, 2002, 2005, 2006, 2007), «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005), международных, конференциях «Перспективы развития естественных наук в высшей школе» (Пермь, 2001), «Фармация и здоровье» (Пермь, 2005), «Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice» (Пермь, 2006), II Всероссийском съезде фармацевтических работников (Сочи, 2005), XIV российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007) ПУБЛИКАЦИИ. По результатам исследований опубликовано 16 работ, в том числе 8 статей и подана одна заявка на получение патента РФ (№2007113315 (014457), приоритет от 09 04 07)

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа выполнена на 165 страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 рисунками, 35 таблицами и состоит из введения, 5 глав, общих выводе» и приложения Список цитируемой литературы включает 253 источника, из них 48 на иностранных языках

В обзоре литературы (первая глава) рассмотрены биологические и химические свойства некоторых представителей семейства Норичниковые, а также приведены сведения о применении растений рода Очанка, Зубчатка и Вероника в народной и традиционной медицине Подробно изложены современные подходы к стандартизации сырья, содержащего флавоновды Обоснована цель диссертационной работы Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследования В третьей главе отражены результаты изучения химического состава и физико-химических свойств экстракционных препаратов из травы очанки коротковолосистой, а также сравнительного анализа их элементного состава Разработаны показатели качества препаратов для включения в нормативную документацию Изложены материалы оценки показателей качества таблеток «Уральская очанка»

В четвертой главе представлены данные по изучению фармакологических свойств БАД «Уральская очанка» антимикробной, противовоспалительной, антикоагулянтной активности, влиянию на бактерии нормофлоры кишечника, а также острой токсичности

Пятая глава посвящена фотохимическому и биологическому изучению комбинированных препаратов, включающих сухие экстракты очанки коротковолосистой, вероники дубравной, зубчатки обыкновенной, коровяка обыкновенного, погремка весеннего, а также анилокаин и димексид

Приложение включает проект ФСП на очанки экстракт жидкий (11), а также материалы, подтверждающие практическую значимость работы

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования служили экстракты растений семейства Норичниковые Euphrasia brempila Bumat et Gremh - очанка коротковолосистая, Odontites vulgaris Moench - зубчатка обыкновенная, Veronica chamaedrys L - вероника дубравная, Rhinanihus vemahs Schischk et Serg - погремок весенний, Verbascum thapsus L - коровяк обыкновенный

Образцы растений, надземную часть с корнями, заготавливали в период с 2002 по 2005 г.г. на территории России. Из пяти образце» травы очанки были получены по пять серий сухого и жидкого экстрактов В число объектов исследования входило пять серий БАД «Уральская очанка» производства НПО «Биомед» (г Пермь), основой которой является концентрированный водный экстракт из травы очанки коротковолосистой

Качественный состав и количественное содержание БАВ исследовали с помощью современных методов и приемов фитохимического анализа хроматография та бумаге и в

тонком слое сорбента, фотоэлекгроколориметрия, УФ спектроскопия Элементный состав определяли с помощью эмиссионного спектрального анализа на дифракционном спектрографе ДФС -3-1 методом испарения из кратера угольного электрода

Определение острой токсичности, антимикробных и противовоспалительных свойств, влияния на бактерии нормофлоры кишечника БАД «Уральская очанка» проведено в лаборатории биорегуляторов филиала ФГУП «Микроген» «Пермское НПО «Биомед» под руководством кандидата медицинских наук Сафоновой Галины Михайловны, за что автор выражает искреннюю благодарность

Определение противовоспалительной активности комбинированных препаратов на основе экстрактов из растений семейства Норичниковые, а также антикоагулянтной активности БАД «Уральская очанка» проведено на кафедре физиологии ПГФА под руководством доктора медицинских наук, профессора Сыропятова БЯ, за что автор выражает искреннюю благодарность

Антимикробные свойства комбинированных препаратов на основе экстрактов из растений семейства Норичниковые изучены на кафедре микробиологии ПГФА под руководством кандидата фармацевтических наук, доцента Новиковой В В, за что автор выражает искреннюю благодарность

ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ ОСНОВНЫХ ГРУПП БАВ ЭКСТРАКЦИОННЫХ ПРЕПАРАТОВ ОЧАНКИ

В результате проведенных исследований установлено, что экстракционные препараты очанки коротковолосистой содержат комплекс биологически активных веществ, который представлен флавоноидами, фенолкарбоновыми кислотами и иридоидами Методом бумажной и тонкослойной хроматографии проведено изучение компонентного состава БАВ в препаратах очанки и проанализирована частота встречаемости компонентов в пяти сериях

Фенолкарбоновые кислоты Установлено наличие шести соединений из группы фенолокислот (табл 1) С помощью аутентичных образцов доказано присутствие хлорогеновой кислоты - вещество 3, а также кофейной и феруловой кислот Состав кислот идентичен во всех препаратах, что свидетельствует об устойчивости соединений в процессе получения экстрактов

Таблица 1

Люмикесцентно-хроматографическая характеристика фенолокислот

Значение Иг Окраска

о 5

Номер вещест -ч- О ^ О СЯ 8 ■ УФ УФ + аммиак Реактив Гепфнера

1 0,48 0,68 бледно-голубая ярко-голубая бледно-оранжевая

2 0,55 0,61 ярко-голубая ярко-желто-зеленая —

3 0,64 0,66 ярко-голубая ярко-желто-зеленая коричневая

4 0,72 0,73 ... голубая бледно-оранжевая

5 0,55 0,40 бедно-голубая ярко-голубая —

6 0,75 0,34 голубая сине-голубая оранжевая

Флавоиоиды

Группа флавоноидов в препаратах представлена десятью соединениями (табл 2) В спиртовых экстрактах очанки присутствует большее количество компонентов по сравнению с препаратом «Уральская очанка» В спиртовые вытяжки лучше переходят соединения 7, 9 и 10, а в водные извлечения - вещество 3 Соединение 8 (табл 2) на хроматограммах сухого экстракта присутствует лишь в минорных количествах и обнаруживается только после обработки раствором алюминия хлорида

Таблица 2

Люминесцентно-хроматографическая характеристика флавоиоидных соединений экстракционных препаратов очанки

коротковалосистой

Значение К* Окраска веществ Количество серий препарата, содержащих данный компонент

Номер веществ: СЧ ■ч- соон 15% УФ УФ+ аммиак А1С1з, 5% гкхшзЬ 3% БАД «Уральская очанка» экстракт очанки

£ и Й ■ капли таблетки сухой жидкий

1 0,20 0,27 бледно-фиолетовая бледно-фиолетовая ярко-желтая бледно-фиолетовая 5 0 5 5

2 0,22 0,36 фиолетовая фиолетовая желтая бледно-желтая 5 0 5 4

3 0,22 0,69 - - желтая - 4 0 3 1

4 0,31 0,18 темно-фиолетовая ярко-желтая желтая желто-зеленая 5 3 5 5

5 0,37 0,18 бледно-фиолетовая бледно-фиолетовая желтая салатная 5 0 5 5

6 0,43 0,20 - - бледно-желтая бледно-желтая 5 0 3 5

7 0,50 0,26 бледно-фиолетовая + бледно-желтая бледно-желтая 0 0 4 4

8 0,54 0,58 темно-фиолетовая темно-фиолетовая темно-желтая ярко-желтая 5 0 4 5

9 0,61 0,41 бледно-фиолетовая - бледно-желтая бледно-фиолетовая 0 0 0 4

10 0,78 0,04 - - бледно-желтая - 0 0 3 3

цинарозид 0,35 0,18 темно-фиолетовая темно-желтая желтая салатная

В каплях «Уральская очанка», а также жидком экстракте очанки это вещество является одним из доминантных. Данный факт, вероятно, объясняется термолизом этого соединения в процессе сушки экстракта. К наиболее часто встречаемым отнесены флавоноидные соединения 2. 4 и 5. Вещество 5 в сравнении с аутентичным образцом определено как цинарозид. Соединения 2, 4 и 5 могут служить своеобразными «маркерами» при оценке подлинности препаратов.

Иридоиды

В препаратах обнаружено пять веществ из группы иридоидов. Вещества 3. 4 и 5 отнесены по характеру окрашивания хромогеиными реактивами к производным аукубина. Вещества 1 и 2 - к производным каталпола. Вещество 3, доминирующее во всех объектах, в сравнении с аутентичным образцом определено как аукубин.

Таблица 3

Компонентный состав иридоидов_

№ вещества Значение Яг БУВ. 4:1:2 Окраска пятен реактивом препарат

БАД «Уральская очанка» Экстракт очанки

Шталя Трим-Хилла Бэкона-Эдельмана капли таблетки сухой жидкий

1 0,21 - - коричневая + - - -

2 0,27 - - желтая + - + +

3 0.43 синяя черная коричневая + + + +

4 0,61 синяя - - - - - +

5 0.84 синяя черная коричневая + - + +

аукубин 0.41 синяя черная коричневая

Наибольшее количество соединений — четыре — обнаружено в жидком экстракте очанки, а также в каплях «Уральская очанка». При этом компонентный состав найденных иридоидов различен. Так. вещество 1 (1^=0,21) встречается лишь в Б АД «Уральская очанка». Данное соединение, по-видимому, преимущественно экстрагируется водой. Соединение 4 (1^1=0.61), напротив, присутствует только в жидком экстракте очанки, экстрагентом для которого является спирт этиловый 70 %. Соединения 2, 3 и 5 встречаются как в водном, так и в спиртовых извлечениях из травы очанки.

Свободные н связанные моносахариды Хроматографический анализ углеводов препарата «Уральская очанка» проведен путем двукратного восходящего хроматографирования в системе: пропанол - этилацетат -вода (7:1:2). Обнаружено четыре соединения (рис. 1).

I 05 г

| 04-

| 03

5

I 0.2

арабиноза

галактоза

г г

гсо _ связанные свободные

свидетелей моносахариды моносахариды

Рис. 1. Схема бумажной

хроматограммы моносахаридов капель «Уральская очанка».

В сравнении со свидетелями вещество 1 определено как галактоза, 2 - глюкоза, 3 -арабиноза и 4 - рамноза Галактоза и глюкоза находятся в препарате, как в связанном, так и в свободном состоянии, арабиноза и рамноза только в составе полисахаридов ТСХ - анализ Б АД «Уральская очанка» Изучены хроматографические характеристики препарата «Уральская очанка» Установлено, что наилучшее разделение комплекса фенольных соединений достигается в системе (этилацетат - метилэтилкетон- кислота муравьиная - вода 5 311) (табл 4) На ТСХ хроматограммах препарата проявляется 5 веществ фенольной природы На основании реакций с хромогенными реактивами вещества 1 и 3 отнесены к группе флавоноидов, а 2, 4, 5 - к фенолкарбоновым кислотам Из обнаруженных веществ доминирующим по интенсивности окраски является вещество 4, а вещества 1 и 2 присутствуют в минорных количествах

Таблица 4

Результаты ТСХ анализа препарата «Уральская очанка» в системе этилацетат: метилэтилкетон: кислота муравьиная; вода (5:3:1:1)_

№ Rr Окраска вещества

Видимый свет УФ-свет А1СЬ, 5% ZI0(N03)2, 3% Реактив Гепфнера

1 0,24 бледно-зеленая бледно-фиолетовая зеленая - -

2 0,44 зеленая бледно-фиолетовая зеленая зеленая коричневая

3 0,62 серая фиолетовая бледно-зеленая зеленая -

4 0,78 темно-зеленая темно-фиолетовая зелено-коричневая зелено-коричневая темно-коричневая

5 0,83 серо-зеленая фиолетовая коричневая коричневая темно-коричневая

Хл* 0,73 серая темно-фиолетовая - бледно- оранжевая

Фр** 0,78 оранжевая синяя - - коричневая

Примечание * Хл - кислота хлорогеновая, ** фр - кислота феруловая, *** - отсутствие

изменений в окраске

Пятно со значением Rt0,78 соответствует сумме гидроксикоричных кислот ТСХ анализ аутентичных образцов хлорогеновой и феруловой кислот показал близкие значения их коэффициентов распределения в изученной системе Параметры хроматографической характеристики фенольных соединений препарата "Уральская очанка" являются постоянными для пяти серий и могут использоваться в аналитических целях

Элементный состав В траве очанки присутствуют 18 элементов, среди которых доминирующими являются Р, Mn, Ва, Sr и Zn (табл 5) В экстракционных препаратах содержатся те же элементы, однако их концентрация значительно ниже Диапазон извлечений элементов в препараты варьирует в широких пределах Элементы, в зависимости от степени излечения располагаются в следующем порядке Р> Nb> Zr> V> Ti> Pb> Ni> Co> Ag> Ba>Cr>Cu>Sr>Mo>Zn>Mn Высокой степенью извлечения обладают Nb, Zr, V, Ti, Pb, низкой - Mn, Zn, Ga и Be, остальные элементы имеют средние значения степени извлечения - от 20 до 60 % Со, Сг и Sr лучше переходят в водные извлечения, чем в спиртовые V и Ва имеют одинаковую степень перехода в экстракционные препараты, полученные с использованием воды и спирта

Элементный состав травы и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой

Таблица 5

Образец Содержание микроэлементов в образцах, мг/100 г золы

Р Мп Еа Бг Ъ& Ъ № Си 2л Сг Со ЪГЬ 'V РЬ Мо ва Ве Ав

Трава >1000 500 70 60 50 18 15 10 5 3 2 0,9 0,6 0,5 0,5 оа од 0,015

Настойка >1000 90 30 10 7 15 10 3 5 1 1 0,7 0,5 0 0,15 од од 0

Экстракт жидкий >1000 15 30 10 10 10 9 5 5 0 0,9 0,9 0,5 0,4 0 0 0 0,01

Экстракт сухой водный >1000 100 30 20 15 15 10 4 4 3 1,5 0,9 0,5 0,6 ОД 5 0 0 0,018

Экстракт сухой спиртовый >1000 30 30 10 10 15 7 5 5 1 0,9 0,9 0,5 0,6 0,1 0 0 0,01

Отвар >1000 90 30 30 10 15 10 5 4 3 1,5 0,9 0,5 03 ОД 0 0 0,01

БАД «Уральская очанка» >1000 50 30 30 5 10 7 1 4 0 0,9 0,7 0,5 0,3 ОД 0 0 0

среднее значение степени извлечения в ЛФ, % 100,0 12,5 42,9 30,6 19,0 74,0 58,9 38,3 90,0 38,8 55,8 93,3 83,3 66,7 20,0 0 0 50,0

В БАД «Уральская очанка», в отличие от других препаратов, в незначительных количествах переходят медь и цинк (по 10%), что вероятно связано с особенностями технологического процесса

Трава, экстракционные препараты и БАД «Уральская очанка» по содержанию тяжелых металлов соответствует требованиям Сан ПиН 2 3 2 1078-01 Концентрация свинца не превышает допустимого значения, а кадмий и ртуть не обнаружены УФ-спектралыиая характеристика препаратов очанки В УФ спектре исследованных препаратов присутствуют три максимума поглощения при А, 215 нм, 286 - 292 нм и 330 нм У препарата «Уральская очанка» реакция комплексообразования с алюминия хлоридом сопровождается незначительным гипсохромным сдвигом второго максимума (примерно на 3-5 нм) и батохромным сдвигом третьего максимума (примерно на 4 нм) (рис 2) В дифференциальном спектре БАД «Уральская очанка» присутствует 4 максимума, при этом интенсивность поглощения в первых трех {% 229, 271 и 280 нм) незначительна, а доминирует пик X 388 нм Отношение оптической плотности при Адао ям и %292 ни (ОззсДЭюг) у пяти серий препарату находится в пределах 1,16 - 1,18, имеет стабильное значение и может использоваться в аналитических целях в качестве показателя подлинности

1 -препарат (раствор сравнения - 80% спирт этиловый), 2 - препарат с добавлением алюминия

хлорида (раствор сравнения -80% спирт этиловый), 3 -препарат с добавлением алюминия хлорида (раствор сравнения -препарат без добавления реактивов)

Рис 2 УФ спектры препарата «Уральская очанка» в разведении 11400 Спектральные характеристики экстрактов очанки несколько отличаются от спектров БАД При добавлении алюминия хлорида к разведению сухого экстракта гипсохромный сдвиг второго максимума поглощения составляет от 9 до 16 нм (рис 3) В то же время положение третьего максимума при 330 ± 2 нм остается неизменным В дифференциальном спектре сухого экстракта наблюдается три максимума поглощения при 231,274 и 386 нм При добавлении раствора натрия ацетата наблюдается гиперхромный эффект во втором и третьем максимумах поглощения При этом также заметен выраженный гипсохромный сдвиг второго максимума поглощения на 6 - 9 нм

В спектре жидкого экстракта очанки присутствуют два максимума поглощения при 215 и 330 нм (рис 4) Дифференциальные спектры жидкого экстракта, полученные по реакции комплексообразования с 2 % раствором алюминия хлорида схожи со спектральными характеристиками сухого экстракта При добавлении к реакционной смеси 8 % раствора натрия ацетата наблюдается выпадение мелкодисперсного осадка, что не позволяет изучить УФ-спектральные характеристики жидкого экстракт в этих условиях.

Проведенные исследования показали, что метод дифференциальной спсктрофотометрии при длине волны 384 - 386 нм может быть применен для количественной оценки содержания фяавоновдов в препаратах очанки

1 - сухой экстракт (раствор сравнения 40 % спирт этиловый), 2 - сухой экстракт с добавлением алюминия хлорида (раствор сравнения - 40 % спирт этиловый), 3 - сухой экстракт с добавлением алюминия хлорида (раствор сравнения - сухой экстракт без добавления реактивов), 4 - сухой экстракт с добавлением алюминия хлорида и ацетата натрия (раствор сравнения - сухой экстракт без добавления реактивов)

Рис 3 УФ спектры экстракта очанки сухого в разведении 1 2000

1 — жидкий экстракт (раствор сравнения - 70% спирт этиловый), 2 - жидкий экстракт с добавлением алюминия хлорида (раствор сравнения - 70% спирт этиловый), 3 - жидкий экстракт с добавлением алюминия хлорида (раствор сравнения - экстракт без добавления реактивов)

300 400 500

Рисунок 4 УФ спектры жидкого экстракта очанки в разведении 1 1250

Физико-химические свойства Жидкие препараты представляют собой растворы темно-коричневого цвета, в тонком слое прозрачные, со слабым специфическим запахом и горьковатым вкусом Сухой экстракт - рассыпчатую массу от темно-коричневого до черного цвета, кисло-горького вкуса, с выраженным травяным запахом

Физико-химические параметры БАД «Уральская очанка» изменяются в широком диапазоне плотность находится в пределах 1,094 - 1,140, сухой остаток -24,69 - 33,49 %, показатель преломления - 1,3820 - 1,4025 Между значениями плотности, сухого остатка и показателя преломления наблюдается прямо пропорциональная зависимость Увеличение плотности, от серии к серии находится в следующей последовательности 3—>2—>1—>4—>5, аналогичная последовательность отмечается для сухого остатка и показателя преломления

Плотность жидкого экстракта находится в пределах 0.9305 - 0,9453 г/см3, сухой остаток - 13.85 - 14.40 %. показатель преломления - 1,3815 - 1.3836.

Среднее значение содержания влаги в сухом экстракте очанки составило - 7.28 %.

Количественное содержание биологически активных веществ

Методом дифференциальной спектрофотометрии изучено содержание флавоиоидов в экстракционных препаратах очанки в пересчете на цинарозид. Среднее содержание флавоноидов в БАД «Уральская очанка» составляет 1.57 %. в жидком экстракте - 1.31 %, в сухом экстракте - 12.21 % (рис. 5). В нормативно-техническую документацию рекомендуется включить содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид не менее 1,0 % для БАД «Уральская очанка» и 1,0 % и 9.0 % - для жидкого и сухого экстракта очанки коротковолосистой, соответственно.

Определение содержания иридоидов 4 в препаратах проведено фотоэлектроколориметрическим методом Грегера - Симхена в пересчете на аукубин (рис. 5). Сумма иридоидов в каплях «Уральская очанка» колеблется от 0,25 до 0.41 %, среднее значение для пяти серий препарата составило 0,34±0,05 %. В жидком экстракте - 0,53 %, в сухом - 1,72 %. В таблетках «Уральская очанка» содержится 0.46 мг иридоидов на одну таблетку. В нормативную документацию на экстракционные препараты рекомендуется включить содержание иридоидов в жидком экстракте не менее 0,4 %, в сухом экстракте не менее 1,0%.

Для БАД «Уральская очанка» дополнительно установлено содержание органических кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту. Сумма органических кислот в каплях колеблется от 13,6 до 17,9 %. В таблетках «Уральская очанка» содержится 25,7 мг органических кислот на одну таблетку.

Жидкий экстракт очанки

Сухой экстракт очанки

БАД "Уральская очанка" (капли)

|о.34

N:

□ сумма органических кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту

□ сумма полисахаридов

■ сумма иридоидов в пересчете на аукубин

□ сумма флавоноидов в пересчете на цинарозид_

12.21

8 10 Содержание, %

12

Рис. 5. Среднее содержание БАВ в экстракционных препаратах очанки.

Количественное содержание полисахаридов в каплях «Уральская очанка» составляет 10,86 ±0.09%.

Установлено, что в БАД «Уральская очанка» доминирует группа органических кислот, в спиртовых экстрактах очанки преобладает группа флавоноидов. Стандартизацию спиртовых экстрактов целесообразно проводить по содержанию флавоноидов и иридоидов, а БАД «Уральская очанка» по содержанию органических кислот и флавоноидов. Установленные средние значения содержания БАВ позволяют

определить минимально-допустимые значения показателей при стандартизации препаратов

Оценка показателей качества таблеток «Уральская очанка» Таблетки имеют светло-бежевый цвет, сладкий вкус и слабый специфический запах Поверхность гладкая, однородная с ровными краями, имеется риска Прочность на истирание, распадаемость и растворение таблеток соответствуют требованиям ГФ XI В двух сериях отклонение от средней массы и однородность дозирования не соответствует требованиям ГФ Точность дозирования можно повысить введением антифрикционных наполнителей, а также подбором оптимальных условий грануляции таблеточной массы БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТА «УРАЛЬСКАЯ ОЧАНКА» Антимикробные свойства Определение антимикробной активности препарата «Уральская очанка» проведено на плотной питательной среде в отношении 9 штаммов микроорганизмов (табл. 6)

Таблица 6

Антибактериальная активность препарата «Уральская очанка» на плотной

питательной среде

Тест-культура Контроль Разведения препарата

1 10 1 15 120 1 40 1200 1.400 1 1000 12000

Staphylococcus aureus №1 рост - - - - 10 колоний + ++++

Staphylococcus aureus №2 рост - - - - - - 1 колония ++

Staphylococcus epiderrmchs №1 рост - - - - - 7 колоний + ++++

Staphylococcus eptderrmchs № рост - - - - - - 1 колония +

Pseudomonas aeruginosa рост - + ++ +++ ++++ ++++ ++++ ++++

Streptococcus faecalus рост - - ++ +++ ++++ ++++ ++++ ++++

Klebsiella pneumoniae рост - ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++

Proteus vulgaris рост - + + ++ ++++ ++++ ++++ ++++

Esherihia coli рост +++ +++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++

Примечание * «-» полное отсутствие роста микроорганизмов, + более 10 колоний, ++ рост микроорганизмов на 1/6 -1/3 чашки Петри, +++ рост микроорганизмов на 1/2 чашки Петри, ++++ сплошной рост Препарат в разведении 1 10 полностью задерживает рост исследованных микроорганизмов, за исключением Е coli При увеличении разведения препарата антимикробная активность снижается Наиболее чувствительными к действию БАД оказались золотистый и эпидермальный стафилококки, рост которых подавляется даже при разведении 1 200

Влияние на нормофлору кишечника

Установлено, что препарат достоверно стимулирует рост и функциональную активность лактобактерий В разведении I 10 и 1 20 препарат достоверно стимулирует активность кислотообразования на селективной питательной среде МРС-1, а в диапазоне разведений 15-1 100 и на неселекгивной питательной среде (0,5 % раствор глюкозы),

однако только в разведении 1 5 это влияние статистически достоверно Повышенная кислотообразующая функция лактобакгерий связана со стимулирующим влиянием препарата на их рост При оценке действия препарата на бифидобактерии установлено, что в разведении 1 5 и 1 10 препарат снижает функциональную активность бактерий, а в разведении 1 20 и выше не оказывает достоверного влияния

Острая токсичность Оценка острой токсичности фитопрепарата «Уральская очанка» показала, что ЛД» при внутрибрюшинном введении препарата в пересчете на сухой остаток составляет 3950 мг/кг При пероральном введении гибели животных не наблюдали, поэтому ЛДда н максимально переносимую дозу установить не удалось

Противовоспалительная активность Изучение противовоспалительной активности показало наличие у препарата слабовыраженного действия в дозе 800 мг/кг максимальная активность составляет 25 % (при р>0,05) торможения отека и наблюдается через 3 часа после введения каррагенина Влияние на систему свертывания крови Установлено, что БАД «Уральская очанка» замедляет процесс свертывания крови, обладает прямым антикоагулянтным действием и может рассматриваться в качестве вспомогательного средства для профилактики тромбообразования (табл. 7) Среднее значение изменения свертываемости крови, для четырех серий, при разведении препарата 1 100 - составило 36 %, 1 50 -106 %, 1 10 - 514 %

Таблица 7

Влияние препарата «Уральская очанка» на процесс свертывания крови

Серия БАД/ разведение Время свертывания, сек Контроль Время свертывания, сек Опыт % изменения свертываемости р*

3 серия (1 100) 44,7±3,44 46Д±2,97 -3,1 >0,05

4 серия (1 100) 34,9±1,57 40,9±2,38 -17,2 >0,05

5 серия (1 100) 31,1±3,35 55,8±7,03 -79,4 <0,01

6 серия (1 100) 38,8±3,70 55,9±4,97 -44,1 <0,02

3 серия (1 50) 32,4± 1,26 105,(Ы7,11 -224,1 <0,001

4 серия (1 50) 33,2±3,27 67,3±10,08 -102,7 <0,02

5 серия (1 50) 29,4±2,02 47,4±7,33 -61,2 <0,05

6 серия (1 50) 25,1±2,43 34,6±6,47 -37,8 >0,05

3 серия(1 10) 34,9±2,00 194,0±32,32 -455,9 <0,001

4 серия (1 10) 32,0±2,75 178,7±45,08 -458,4 <0,001

5 серия (1 10) 22,6± 1,68 164,6±21,4 -628,3 <0,001

Гепарин 29,9±0,48 36,6± 1,82 -22,4 <0,01

Примечание * - доверительная вероятность

ФОТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ КОМБИНИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТОВ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА НОРИЧНИКОВЫЕ Получение комбинированных фитопрепаратов

Нами проведены исследования по разработке фитопрепаратов, включающих экстракты из растений семейства Норичниковые, анилокаин и димексид Использованы сухие спиртовые экстракты из следующих растений очанка коротковолосистая, зубчатка обыкновенная, вероника дубравная, погремок весенний, коровяк обыкновенный Препараты представляют собой прозрачную жидкость, коричневого цвета, специфического запаха (запах ДМСО), смешиваются с водой и спиртом этиловым в любых соотношениях

Скрининг препаратов на противовоспалительную и противомикробиую активность

Препараты с экстрактами растений семейства Норичниковые проявляют противовоспалительное действие(табл 8) Наибольший эффект наблюдается у препарата с экстрактом вероники У остальных препаратов эффект несколько ниже Наименьшая активность установлена у препарата с экстрактом погремка весеннего Модельные препараты в аналогичных условиях вызывают незначительное торможение воспалительного отека

Таблица 8

Противовоспалительная активность комбинированных препаратов и модельных

об разцов

№ Исследуемый образец включает Доза, мг/кг Число животных Торможение отека, %

при внутрибрюшинном введении

через 1 час через 3 часа

1 Экстракт вероники, анилокаин в 50 % димексцде 100 6 30** 63**

2 Экстракт зубчатки, анилокаин в 50 % димексцде 100 6 39** 42**

3 Экстракт очанки, анилокаин в 50 % димексцде 100 6 10 30**

4 Экстракт погремка, анилокаин в 50 % димексцде 100 6 3 17

5 Экстракт коровяка, анилокаин в 50 % димекснде 100 6 0 54**

6 Димексцд (50 %) +анилокаин 100 6 14 14

7 Димексцд (50 %) 100 6 0 0

8 Контроль (вода) — 7 ... ...

Примечание * здесь и далее экстракт в концентрации 10 %, анилокаин 5 %, ** р < 0,05 по непарному t-критерию Стьюдента

Антимикробная активность Скрининг комбинированных препаратов на антимикробную активность проведен на жидкой питательной среде (табл 9) Наиболее выраженное противомикробное действие установлено у препаратов с экстрактом вероники и очанки, а низкая - с экстрактом погремка Добавление анилокаина в раствор димексвда в целом усиливает антибактериальный эффект препаратов

Образцы 2 и 3 (табл 9), показавшие наибольшую противомикробиую активность, подвергали исследованию на Staphylococcus epukrmdts АТСС 14930, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027, а также Candida albicans АТСС 885-653

Наибольшая активность наблюдается в отношении S epidemuchs, где оба препарата оказывают бактериостатическое действие в разведении 1 5120 Бактерицидное действие у препарата с экстрактом очанки выше и проявляется в разведении 1 5120 В отношении штаммов Р aeruginosa и С albicans более активен препарат с экстрактом вероники, его бактерицидная активность отмечена в разведении 1 320 Препарат с экстрактом очанки проявляет активность лишь в разведении 1 80 Сравнительный анализ активности

модельных образцов и препаратов показал, что растительные экстракты вносят значительный вклад в действие последних Совместное присутствие анилокаина, димексида и растительных экстрактов обеспечивает потенцирование антибактериального и противовоспалительного действия, что свидетельствует о рациональности состава комбинированных препаратов

Таблица 9

Противомикробная активность комбинированных препаратов и модельных

образцов

№ Исследуемый образец включает Влияние препарата на штаммы

51арИу1ососсив аигеи.ч ЕягЛегиАм со1г

1 Экстракт вероники, анилокаин в 50 % димексиде 1 1280* (1 2560) 1 1280 (1 2560)

2 Экстракт зубчатки, анилокаин в 50 % димексиде 1 160 1 80

3 Экстракт очанки, анилокаин в 50 % димексиде 1 1280(1 1280) 1 320 (1 1280)

4 Экстракт коровяка, анилокаин в 50 % димексиде 1 40 (1 80) 1 40 (1 80)

5 Экстракт погремка, анилокаин в 50 % димексиде 1 10 1 20

Раствор экстракта вероники в 50 % димексиде 1 640 (1 640) 1640(1 1280)

7 Раствор экстракта зубчатки в 50 % димексиде 120 1 10

8 Раствор экстракта очанки в 50 % димексиде 1 80 1 80

9 Раствор экстракта коровяка в 50 % димексиде 1 80 (1 80) 1 20

10 Раствор экстракта погремка в 50 % димексиде 1 40 1 10

11 Раствор анилокаина (5 %) в 50 % димексиде 120 1 10

12 Раствор димексида (50 %) 1 10 1 10

Примечание * - бактерицидное действие, в скобках бактериостатическое действие

Наиболее перспективными для внедрения в медицинскую практику являются препараты с экстрактами вероники дубравной, очанки коротковолосистой, зубчатки поздней Нами проведено изучение химического состава и физико-химических свойств этих препаратов

Химический состав, физико-химические свойства и стандартизация

Изучение химического состава показало, что для качественного анализа экстрактов, входящих в состав препаратов, рекомендуется использовать реакции с реактивами Шталя, Трим-Хилла, а также пробу Синода Для определения анилокаина -реакцию с натрия гидроксидом В составе препаратов идентифицирован цинарозид Плотность препаратов находится в пределах 1,1226 - 1,1288 г/см3, показатель преломления 1,4273 - 1,4343, содержание сухого остатка в препаратах колеблется от 12,2 до 14,0 %

В УФ спектрах обнаружено препаратов с экстрактами очанки, вероники и зубчатки присутствует по два максимума - коротковолновый 226 нм и длинноволновый 326, 315 и 320 нм, соответственно При добавлении А1С13 наблюдается батахромный сдвиг обоих максимумов Длинноволновые максимумы дифференциальных спектров могут

использоваться для подтверждения подлинности и количественного определения флавоноидов в препаратах

Количественное определение компонентов препаратов Расчет количественного содержания флавоноидов проводили методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием ГСО цинарозида Содержание флавоноидов в препарате с экстрактом очанки составляет 1,04 ± 0,01 %, вероники - 0,71 ± 0,07 %, зубчатки - 0,50 ± 0,08 % Содержание анилокаина установлено по реакции с натрия лаурилсульфатом в препарате с экстрактом очанки оно составляет 5,07 ± 0,04 %, в препарате с экстрактом вероники - 4,92 ± 0,06 %, а в препарате с экстрактом зубчатки -5,09 ± 0,05 %

Между значениями плотности и концентрации димексида в препаратах наблюдается линейная зависимость Рассчитана формула для количественного определения димексида в препаратах Содержание димексида в препарате с экстрактом очанки составляет 51,4 %, с экстрактом вероники — 52,13 %, а с экстрактом зубчатки - 48,0 % Среднее значение концентрации ДМСО для трех препаратов составляет 50,51 %

Для стандартизации препаратов рекомендованы пределы содержания анилокаина 4,8—5,2 %, димексида 50,0 ± 5,0 % В результате проведенных исследований предложены методики качественного и количественного анализа компонентов препаратов без их предварительного разделения

ВЫВОДЫ

1 Доминирующими труппами БАВ экстракционных препаратов очанки коротковолосистой являются флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты и иридоиды С помощью аутентичных образцов идентифицированы аукубин, цинарозид, хлорогеновая и кофейная кислоты, глюкоза, галактоза, арабиноза и рамноза

2 В траве и экстракционных препаратах очанки обнаружено 18 макро- и микроэлементов, из которых преобладают Мп, Ва, Яг, 2п, Т1, № Изучен характер перехода макро- и микроэлементов в экстракционные препараты Высокая степень извлечения (60 - 100 %) характерна для таких элементов как ниобий, цирконий, ванадий, титан, свинец; средняя (20 - 60 %) - для никеля, кобальта, хрома, меди, серебра, молибдена, бария, стронция, низкая (0 - 20 %) - для марганца и цинка

3 Изучены физико-химические свойства, разработаны методики подлинности и условия хроматографического анализа БАД «Уральская очанка», сухого и жидкого экстрактов очанки

4 Для количественной оценки содержания флавоноидов в экстракционных препаратах очанки рекомендован метод дифференциальной спектрофотометрии по реакции с алюминия хлоридом при длине волны 386±2 нм В нормативно-техническую документацию рекомендуется включить показатель содержания суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид не менее 1,0 % для БАД «Уральская очанка» и жидкого экстракта и 9,0 % - для сухого экстракта очанки коротковолосистой

5 Изучены показатели качества таблеток БАД «Уральская очанка» Установлено несоответствие средней массы таблеток и однородности дозирования требованиям ГФ XI издания Для повышения точности дозирования рекомендовано введение дополнительного количества антифрикционных наполнителей, а также подбор оптимальных условий стадии гранулирования таблеточной массы

6 Доказано наличие у БАД «Уральская очанка» антимикробной и противовоспалительной активности, а также прямого антикоагулянтного действия Препарат оказывает положительное влияние на рост и кислотообразующие свойства лактобактерий, обладает низкой токсичностью Проведенные исследования показали перспективность внедрения препарата «Уральская очанка» в медицинскую практику

7 Разработаны комбинированные препараты на основе экстрактов растений семейства Норичниковые, анилокаина и ДМСО Скрининг фитопрепаратов на противовоспалительную и противомикробную активность показал, что наиболее

эффективными являются препараты, содержащие экстракты вероники дубравной, зубчатки обыкновенной и очанки коротковолосистой 8 Изучен состав биологически активных веществ и физико-химические свойства комбинированных препаратов Содержание ДМСО в препаратах составляет 50±5 %, анилокаина 5,0±0,2 % Предложены методики качественного и количественного анализа компонентов комплексных препаратов

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЮЩИЕ РАБОТЫ:

1 Фармацевтический препарат для лечения заболеваний суставов и способ его получения II Заявка на патент № 014457, № регистрации 2007113315 от 9 04 007 (Соавторы Петриченко В М, Сухинина Т В, Сыропитов Б Я, Панцуркин В И )

2 Флавоноиды рода Euphrasia L // Перспективы развития естественных наук в высшей школе Материалы международной науч конф — Пермь, 2001 - Т 1 - С 206-210 (Соавт Петриченко В М, Сухинина Т В, Белоногова В Д )

3 Содержание суммы флавоноидов и окисляемых веществ в растениях рода Очанка // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования итоги и перспективы Материалы межвуз науч-практ конф - Пермь, 2001 - С119 (Соавт Петриченко В М , Сухинина ТВ)

4 Фенолкарбоновые кислоты рода Euphrasia L // Экология проблемы и пут решения Материалы международной науч -практ конф студентов, аспирантов и молодых ученых. - Пермь, 2002 - 42 -С181-187 (Соавт Петриченко ВМ, Сухинина Т В )

5 Влияние биологически активной добавки «Уральская очанка» на системный и локальный иммунный ответ // Экология проблемы и пути решения Материалы XIII Всерос науч-практ конф студентов, аспирантов и молодых ученых —, Пермь,2005 - 42 - С 119-120

6 Исследование иридоидов препарата «Уральская очанка» // Современные проблемы фармакологии и фармации Материалы Всерос науч -практ конф - Новосибирск; 2005 -С 229-231 (Соавт Петриченко В М )

7 Фенольные соединения препарата «Уральская очанка» // II Всерос съезд фармац. работников Материалы съезда - Сочи, 2005 - С 123 (Соавт Петриченко В М )

8 Биологически активные вещества препарата «Уральская очанка» // Фармация, 2005 — №6 - С 44-45 (Соатв Петриченко В М, Сухинина ТВ)

9 Состав биологически активных веществ растений семейства Норичниковые // Фармация и здоровье Материалы международной науч -практ конф - Пермь, 2005 - С 143 (Соавт Петриченко В М, Сухинина Т В , Чуракова М А)

10 Оценка токсичности фитопрепарата «Уральская очанка» // Экология проблемы и пути решения Материалы международной науч-практ конф студентов, аспирантов и молодых ученых - Пермь, 2006 - 42 - С 172 (Соавт Петриченко ВМ)

11 Биологическая активность травы очанки и ее фитопрепаратов II «Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice» Мат-лы междунар научно-практ конференции - Пермь, 25-27 сентября 2006 - С 127 (Соавт Сухинина Т В, Петриченко В М, Сыропятов Б Я )

12 БАД «Уральская очанка» - перспективное средство для профилактики тромбообразования // Материалы XIV национального конгресса «Человек и лекарство», 16 -20 апреля 2007 - М, 2007 - С 463 (Соавторы Петриченко В М, Сухинина Т В, Сыропятов Б Я)

13 Антикоагулянтная активность паразитирующих растений семейства Норичниковые II Материалы XIV национального конгресса «Человек и лекарство», 16 -20 апреля 2007 - М, 2007 - С 882 (Соавторы Петриченко В М, Сухинина Т В , Сыропятов БЯ)

14 Химический состав и биологическая активность препарата «Уральская очанка» //Фармация - 2006 - № 6 - С 35 -38 (Соавторы Петриченко В M, Сухинина Т В, Сафонова Г M )

15 Химический состав и показатели качества таблеток «Уральская очанка» // Фармация - 2007 - № 3 - С 40-42 (Соавторы Петриченко В M, Сафонова Г M, БабиянЛК идр)

16 Элементный состав травы и экстракционных препаратов очанки // Химико-фармацевтический журнал, в печати (Соавторы Петриченко В M, Сухинина ТВ)

17 ТСХ-анализ и биологическая активность препарата «Уральская очанка» // Вестник ПГФА - 2007 - № 2 - С 313-318 (Соавторы Петриченко В M, Сухинина Т В, Сафонова Г M )

Автор выражает искреннюю благодарность своему научному руководителю профессору Петриченко В.М - зав кафедрой ботаники и общей биологии ПГФА, дфн, за неоценимую помощь в выполнении работы.

Искренняя благодарность профессору Сыропятову Б. Я - зав кафедрой физиологии ПГФА, джн, Сафоновой Г.М - начальнику отделения БАЛ Пермского филиала ФГУП «Микроген» НПО «Биомед», канд биоя наук, Новиковой ВВ. - доц кафедры микробиологии ПГФА, кфн, Марковой ЛИ. - зав виварием ПГФА за помощь в исследовании биологической активности препаратов

Особая благодарность коллегам Сухининой ТВ. - доценту кафедры ботаники, кфн, Ягонцевой ТА —стпр каф ботаники, атакжеЛысовойВ В - методисту тф. ботаники за веру в научный потенщал и проявленное участие

Подписано в печать 03 10 2007 Формат 60*90/16 Набор компьютерный Бумага ВХИ Тираж 100 экз Уел печ л 1,25 Заказ № 178/2007

Отпечатано на ризографе в типографии ГОУ ВПО ПГФА 614070, г Пермь, ул Крупской, 46, тел/факс 8-901-266-59-37

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. В структуре современного фармацевтического рынка неуклонно растет доля препаратов на основе лекарственного растительного сырья. По данным ВОЗ, сегодня около 80 % людей в мире используют фитопрепараты для лечения и профилактики различных заболеваний. Широкий спектр их действия объясняется многокомпонентностью состава биологически активных веществ, одновременным присутствием соединений различной природы. Мягкое терапевтическое действие, малая токсичность, редкое возникновение побочных явлений и, наконец, экономическая доступность — вот немногие из достоинств растительных средств.

Растущий интерес населения и медицинских работников к фитотерапии стимулирует расширение и обновление ее ассортимента за счет внедрения в научную медицину растений народной медицины, разработки новых фитопрепаратов, выпуска лечебно-профилактических, парфюмерно-косметических и других видов продуктов на растительной основе.

Перспективными объектами для разработки фитопрепаратов являются, растения семейства Норичниковые (Scrophalariaceae), традиционно \ применяемые в народной медицине различных стран. В последние годы прошли испытания и разрешены к медицинскому применению норичник Бюргера - средство, улучшающее кровообращение; вероника виргинская — противовоспалительное средство при желудочно-кишечных заболеваниях; коровяк густоцветковый — муколитическое средство. Потенциальными источниками для производства лекарственных препаратов являются виды рода Очанка, Зубчатка, Вероника, Погремок, Коровяк.

Повышенный интерес у медицинских работников и населения вызывают лекарственные средства на основе травы очанки. Учитывая конъюнктуру рынка, фармацевтическими предприятиями выпущен ряд препаратов на основе этого сырья: «Звездная очанка» (ЗАО «Эвалар», Россия), «Миртикам» (НПП «Камелия», Россия), «Eyebright» («Nature's

Way», США), «Ultra clear» («Royal body care International», Inc., США), «Очанка+Черника» (ООО «Нарине», Россия) и другие. Пермским филиалом ФГУП «Микроген» НПО «Биомед» разработан фитопрепарат «Уральская очанка», зарегистрированный в качестве биологически активной добавки к пище.

Следует отметить, что, не смотря на наличие целого ряда биологически активных добавок на основе очанки, сведения о стандартизации препаратов очанки отсутствуют. В медицинской практике не используются ценные фармакологические свойства растений рода Зубчатка, Погремок, Вероника и других. Выше изложенное подчеркивает актуальность и новизну данной работы.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы является фитохимическое изучение, стандартизация и исследование биологической активности препаратов на основе экстрактов растений семейства Норичниковые.

Для достижения поставленной цели исследования необходимо было решить следующие задачи:

• Изучить состав флавоноидов, иридоидов, фенолкарбоновых кислот, . углеводов в экстракционных препаратах травы очанки коротковолосистой (БАД «Уральская очанка», сухого и жидкого экстрактов);

• Провести сравнительное изучение макро- и микроэлементного состава травы и экстракционных препаратов очанки коротковолосистой и выявить закономерности извлечения элементов в различные лекарственные формы;

• Определить количественное содержание основных групп БАВ в экстракционных препаратах;

• Провести стандартизацию экстракционных препаратов и разработать проект ФСП на очанки экстракт жидкий;

• Определить соответствие технологических показателей качества таблеток «Уральская очанка» требованиям ГФ XI издания;

• Провести оценку биологических свойств Б АД «Уральская очанка»;

• Разработать комбинированные фитопрепараты на основе экстрактов растений семейства Норичниковые с противовоспалительной, антимикробной и местноанестезирующей активностью и выявить наиболее перспективные для внедрения в медицинскую практику;

• Провести оценку комбинированных фитопрепаратов на содержание основных групп действующих веществ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ:

1. Впервые изучен химический состав и определены параметры стандартизации экстракционных препаратов из травы очанки коротковолосистой: сухого и жидкого экстрактов, БАД «Уральская очанка».

2. Установлены закономерности перехода макро- и микроэлементов в экстракционные препараты травы очанки.

3. Проведено исследование биологических свойств БАД «Уральская очанка»: установлена антикоагулянтная, противомикробная и противовоспалительная активность, сочетающаяся с низкой токсичностью.

4. Получены комбинированные препараты, содержащие экстракты растений семейства Норичниковые, ДМСО и местный анестетик. Наиболее активными и перспективными для внедрения в медицинскую практику являются препараты с экстрактами очанки коротковолосистой, вероники дубравной и зубчатки обыкновенной.

5. Определены физико-химические свойства, качественный состав и содержание действующих веществ в комбинированных фитопрепаратах, содержащих растительные экстракты, ДМСО и анилокаин.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Полученные данные по химическому составу и стандартизации могут быть использованы для оценки качества экстракционных препаратов в производственных условиях.

Научно обоснована целесообразность применения БАД «Уральская очанка» в качестве противомикробного, антикоагулянтного и противовоспалительного средства.

На основании данных фитохимического анализа разработан проект ФСП «Очанки экстракт жидкий».

В результате скрининговых исследований биологической активности доказана эффективность использования комбинированных препаратов с экстрактами очанки коротковолосистой, вероники дубравной и зубчатки обыкновенной в качестве противомикробных и противовоспалительных средств.

Материалы диссертационного исследования использованы при разработке методического пособия к практическим занятиям для интернов и слушателей ФДПО по теме: «Качественное и количественное определение действующих веществ в экстракционных препаратах травы очанки».

Приоритет проведенных исследований подтвержден заявкой на1 получение Патента РФ на изобретение «Фармацевтический препарат для лечения заболеваний суставов и способ его получения». НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ: результаты фотохимических и биологических исследований экстракционных препаратов травы очанки коротковолосистой и комбинированных препаратов с экстрактами растений семейства Норичниковые.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры ботаники и общей биологии Пермской государственной фармацевтической академии (№ Гос. регистрации 01.9.10018875, протокол № 4 от 29.12.98).

АПРОБАЦИЯ. Основные положения работы доложены и обсуждены на: региональных конференциях «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы» (Пермь, 2001); X, XII, XIV, XV Всероссийской конференции «Экология: проблемы и пути решения» (Пермь, 2002; 2005; 2006; 2007), «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005); международных конференциях «Перспективы развития естественных наук в высшей школе» (Пермь, 2001), «Фармация и здоровье» (Пермь, 2005), «Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice» (Пермь, 2006); II Всероссийском съезде фармацевтических работников (Сочи, 2005); XIV российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007).

ПУБЛИКАЦИИ. По результатам исследований опубликовано 16 работ, в том числе 8 статей и подана одна заявка на получение патента РФ (№ 2007113315 (014457), приоритет от 09.04.07).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа выполнена на 166 страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 рисунками, 35 таблицами и состоит из введения, 5 глав, общих выводов и приложения. Список цитируемой литературы включает 253 источника, из них 48 на иностранных языках.

ВЫВОДЫ

1. Доминирующими группами биологически активных веществ экстракционных препаратов очанки коротковолосистой (БАД «Уральская очанка», сухой и жидкий экстракты) флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты и иридоиды. С помощью аутентичных образцов идентифицированы аукубин, цинарозид, кислоты хлорогеновая и кофейная, глюкоза, галактоза, арабиноза и рамноза.

2. В траве и экстракционных препаратах очанки коротковолосистой обнаружено 18 макро- и микроэлементов, из которых преобладают Мп, Ва, Эг, Ъп, Тл, №. Изучен характер перехода макро- и микроэлементов в экстракционные препараты. Высокая степень извлечения (60 - 100 %) характерна для таких элементов как ниобий, цирконий, ванадий, титан, свинец; средняя (20 — 60 %) — для никеля, кобальта, хрома, меди, серебра, молибдена, бария, стронция; низкая (0 - 20 %) — для марганца и цинка.

3. Изучены физико-химические свойства, разработаны методики подлинности и условия хроматографического анализа БАД «Уральская очанка», сухого и жидкого экстрактов очанки.

4. Для количественной оценки содержания флавоноидов в экстракционных препаратах очанки рекомендован метод дифференциальной спектрофотометрии по реакции с алюминия хлоридом при длине волны 386±2 нм. В нормативную документацию рекомендуется включить показатель содержания суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид не менее 1,0 % для БАД «Уральская очанка» и жидкого экстракта и 9,0 % -для сухого экстракта очанки коротковолосистой.

5. Изучены показатели качества таблеток БАД «Уральская очанка». Установлено несоответствие средней массы таблеток и однородности дозирования требованиям ГФ XI издания. Для повышения точности дозирования рекомендовано введение дополнительного количества антифрикционных наполнителей, а также подбор оптимальных условий стадии гранулирования таблеточной массы.

6. Доказано наличие у БАД «Уральская очанка» антимикробной и противовоспалительной активности, а также прямого антикоагулянтного действия. Препарат оказывает положительное влияние на рост и кислотообразующие свойства лактобактерий, обладает низкой токсичностью. Проведенные исследования показали перспективность внедрения препарата «Уральская очанка» в медицинскую практику.

7. Получены комбинированные препараты на основе экстрактов растений семейства Норичниковые, анилокаина и ДМСО. Скрининг фитопрепаратов на противовоспалительную и противомикробную активность показал, что наиболее эффективными являются препараты, содержащие экстракты вероники дубравной, зубчатки обыкновенной и очанки коротковолосистой.

8. Изучен состав биологически активных веществ и физико-химические свойства комбинированных препаратов. Содержание ДМСО в препаратах составляет 50±5 %, анилокаина 5,0±0,2 %. Предложены методики качественного и количественного анализа компонентов комбинированных препаратов.