Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Биофармацевтический анализ некоторых аминосодержащих лекарственных средств

г б оа

МИШ1СТЕРСГВО*ЭДРАВООХРАШШ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАЦИИ

На правах рукописи

НОВИКОВ ДМИТРИЙ АЛЕКСЕЕВИЧ

БИОФАРУЛЦЕВГ ИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ АШНОСОДЕРЯА1ЩХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

МОСКВА-1994

Работа выполнена в Курском государственном медицинском университете.

Научный руководитель:

- доктор фармацевтических наук, профессор Хабаров А. А.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, старей научный сотрудник IL1L Дементьева; доктор медицинских наук, профессор Е П. Жердев.

Ведущее учреждение - Государственный научно - исследовательский институт по стандартизации и контролю лекарственна средств иинэдравыедпроыа Российской Федерации.

Защита состоится "Z^" .J&frá^g&g 1995 г. в "/Y " час. на заседании Специализированного сбвета Д 074.28.01 при Научно -исследовательском институте фармации (117418, Москва, ул. Красикова, 34).

С диссертацией можно овнакомитъся в библиотеке НИИ фармации.

Автореферат

Ученый секретарь специализированного совета кандадат фармацевтических наук, старший научный сотрудник

JLU. Боброва

ОЗЗАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОЩ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕ!й1 Современная медицина распологает широким арсеналом различных лекарственных средств, выпусюем!« фзрмацёв-тическими предприятиям^. Для оценки биоэквивалентности, безопасности и эффективности назначения препаратов требуются высокочувствительные, селективные и экспрессные методики аналива с целью контроля качества лекарственных средств, изучения фармако-кинетики и проведения терапевтического мониторинга.

При создании новых лекарственных форм становится актуальном разработка методик анализа действующих компонентов.

Объектами исследований явились препараты, которые были использованы при создании новых лекарственных форм сложного состава: алрессин, новокаинамид, сульфапиридазин, этоний, тримекаии я пиромекаин.

Сущэствувдю методы исследования выбранных лекарственных • средств разработаны недостаточно. Дая количественного определения выбранных препаратов используются методы, основали;« на измерении светопоглащгяня, при описании которых приводятся разноречивые данные о значениях максимумов светопогладания на спектральных кривых, не всегда указываются числовые значения молярных и удельных коэффициентов и т.д.

Имеются сведения о примененгаш хроматографических методов для оценки концентраций (терапевтической, токсической) изучаемых лекарственных средств. Однако, эти методики С или разработаны с использованием импортного оборудования, доступного только для узкого круга исследователей, поэтому в практике биофармацевтического анализа они не получили широкого применения. Кроме того, существующие методики анализа обладают недостаточными селективностью, чувствительностью, вкспресностьп, что ватрудняет их ис-польвование для определения препаратов в биологических объектах И лекарственных формах. 1

В связи о укаванным выше разработка новых чувствительных, селективных способов определения перечисленных препаратов в биологических объектах является одной из актуальных задач фармацевтического анализа. • •

• ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ КССЛКДОВАНКЯ Цель работы - поиск теоретических и экспериментальных подходов к хроматографическому анализу апрессина, новокаинамида, сульфапиридазина, этония, тримекаина, пироиекаика в лекарственных формах и биологических объектах.

Дм достижения указанной цели необходимо решить следующие вадачи:

- осуществить поиск оптимальных условий определения и выбор методов анализа апрессина, новокаинамида, сульфипиридааина, этония, тримекаина, пиромекаина;

- разработать методики выделения апрессина,сульфапиридазина, втояия, тримекаина и пиромекаина из объектов биологического происхождения;

- разработать методики хроматографического определения апрес-сива, сульфапиридазина, этония,тримекаина,пиромекаина в объектах Апологического происхождения;

- разработать способ очистки биоиввлечений от белковых примесей, мешающих проведению анализа;

- изучить экспериментальную фармакокинетику с использованием разработанных методик анализа.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЕ На основании изучения состава подвижной фезы,. выявлены аакономерности хроматографического поведения исследуемых соединений в зависимости от рК и содержания полярных компонентов, что позволило разработать высокоэффективные .хроматографические методики анализа изучаемых соединений в различных Объектах;

- на основании изучения процессов микроколоночной сорбции, выявлена прямая зависимость адсорбции белковых компонентов плазмы крови от величины рН извлечений,это положено ь основу раара? Сотаняой комплексной методики очистки плазмы крови от белков;

- на основании разработанных теоретических принципов и экспериментальных хроыотогрьфических подходов установлена возмож-

.ность использования разработанных способов определения исследуемых препаратов в присутствии близких по химической структуре соединений;

- на основании- разработанных методик анализа исследуемых препаратов в биологических жидкостях разработана методика сценки репаративного и' ранозашвлаюцагр действия комбинированных мазей терминальных анестетиков;

- Б -

- методами фармакскинетического моделирования с использованием одночастевой модели со всасыванием и статистической обработки результатов анализа определены величины основных фармако-кинетических параметров (Kel.Kol.Vd, и/2 и т. д.)в эксперименте' на лабораторных животных.

*

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТа На основе проведенных исследований разработаны и внедрены: методика определения количественного содержания этония в новых лекарственных формах сложного. состава (проект фармакопейной статьи на мазевые лекарственные формы сложного состава направлен в Фармакопейный комитет;

- ьгетодика выделения и количественного, определения алресси-на из объектов биологического происхождения (акт о внедрении от 16. 04. 91 Курского бюро судебно - медицинской экспертизы);

- методики анализа атония, тримекаина и очистки биологических извлечений от белковых примесей (акт о внедрении 31.09.93. Крского государственного медицинского университета) ;■

- методики анализа пиромекаина в сложных лекарственных формах (акт о внедрении 31.09.63. Кур-'кого государственного цинского университета);

- методика количественного определения апрессина в крови человека (акт о внедрении 22.11.04. Курского государственного медицинского университета).

СВЯЗЬ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно - исследовательски работ Курского государственного медицинского университета по проблеме- "Фармация".

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. В качестве объектов исследования были испольвованы апресскн, новокаинамид.сульфапирида-онн,атоний,тримекаин, пиромекаин отвечающие требованиям ГФ X (1968г.), биологические кидкости (кровь, шча), а тага« лабораторные животные. Для выполнения исследований были использованы методы микроколоночной сорбции, высокоэффективйой жидкостной хроматографии, газолидкостной хроматографии.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты диссертационной работы были доложены:

- на конференции молодых ученых Курского государственного медицинского института (г.Курск; 1988г.)

- на конференции "Актуальные вопросы фармацевтической"науки

и практики." (г.Курск 1991г.)

- на республиканской научной конференции Харьковского государственного университета (г. Харьков,1991 г.)

- на конференции "Синтез новых лекарственных препаратов." (г. Пэнаа, 1993г.) -

- на"конференции "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины и фармации." (г.Курск, 1993г.)

- на конференции "Решение актуальных задач фармации ка современном этапе." (г. Москва, 1994г.)

ПУБЛИКАЦИИ ПО РАБОТЕ. По материалам диссертационных исследований опубликовано 6 научных статей, материалы исследования вклвчены в проект фармакопейной статьи, для представления в Фармакопейный комитет Российской Федерации.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ СЛЕДУЮЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

- способы обнаружения и количественного определения апрес-сина, новокаинамида, судьфапиридазина, атония, тримекаина, пиро-мекаина в лекарственных формах и биологических объектах:

- способы выделения апрессийа, сульфапиридааина, атония, тримекаина, пиромекаина из объектов биологического происхождения;

- способы очистки извлечений иг биологических жидкостей от белковых примесей для последующего определения в них апрессина и сульфапиридааина;

г результаты исследования экспериментальной фармакокииети-гагаа на лабораторных животных.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа наложена на 1Б4 страницах машинописного текста, содержит 40 таблиц, 12 рисунков, состоит из введения, четырех глав, выводов, списка литературы, включающего 152 источников, в том числе 40, работ аарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ. Во введении отражается актуальность, научная новизна и практическая значимость исследований, определены их цель и вадачи.

• В первой главе (обзор литератур) дана физико - химическая характеристика апрессина, новокаинамида, сульфапиридааина, атония, тримекаина,пиромекаина , сравнительный анализ методов определений, изучаемых препаратов в лекарственных формах и биологических объектах, ■ рассмотрены методы подготовки проб иа биологи-

ческого материала к анализу, обобгззны фармакологические свойства. В главе два представлены разработанные хроматогрзфичесгаю методики качественного обнаружения и количественного определения исследуемых соединений в субстанциях и лекарственных формах. Глава три посвяиена методикам выделения исследуеьс/х препаратов из объектов биологического йроксхоядения. В четвертой главе отражены биофармацевтичсские исследования лекарственных ферм нового состава,-

1. Качественное обнаружение и шличественное определение агрессина, новскаинамида, сульфапкридаэина, этония, три-уекаина, пирсмеканна в субсталгнях и лекарственных формах методом ЕЗЖХ и ГНХ

В настоящее время отсутствуют надежные методик:! хроматогра-фического анализа, пригодные для спределнкя исследуемых препаратов в объектах биологического происхождения, выполненные на оте-' чествекном оборудовании ( Богдаркя П. А. и др., 1981,. СоЬЪ P. H et al. , 1972, Des Gupta V. et al. 1985 ).

В основу предлагаемой методики «юлогзэна обращгннэ - фагг.ыЯ вариант ВЭЖХ, поззоляюткЛ получить полное разделение всех компонентов, присутствующих э пробе. Определение весуств осуществляли на жидкостном хрсматогре4« ")>:лихрсн" с УФ детектором, на коленках pasмоpeu 60*2мм, наполненных сорбентов "ЗИазогЬ С18" с диаметром зерен около Bmîm. Рабочая длинна эолны для анализа опрес-скна 260 на, новскаинамида 200 им, сульфопиридазина 280 нм, три-шкаина 230 нм, пиромэклина 220 нм.

Условии хрсматографического разделения определены исходя кз предварительных экспериментальных данных. ПздагояоЯ фазой при анализе исследуема препаратов скулила смесь состоящая из метилового спирта изи адетонстркла н буферных растворов с различными оначзшямя рН (те&з. 1. ). Скорость потека подвижной фазы 100 кзи/ЮТ, объем пробы 10 мкл.

Качественное определенна исследуемы: препаратов проводили по относительному удерживанию, по ' евсоястному удерживание по спектральные отношнкям и методом "добавок".

КоличественикД анализ исследуемых соединений проводили катодом внутреннего стандарта и методой абсолютной калибровки. При Вгйоре внутреннего стандарта учитывали объем удерживания аиалн-вируемого препарата и образца.

Таблица 1

Значения относительных объемов удерживания (г) изучаемых препаратов

Анализируемый препарат Внутренний стандарт Состав подвижной фазы и рН г

апрессин иаониазид метанол : буферный раствор (75: 25),рН-7,5 1,36

. новокаинамид новокаин метанол : буферный раствор (15: 85),рН=4,0 0,67

сулъфеширидаоин этааол метанол : буферный раствор (30 ; 70), рИ<*4,5 0,69

тримекаин анестезин ацетонитрил : буферный раствор (30 : 70) ,рН-4,0 0,74

пиромекаин анестезин ацетонитрил : буферный раствор 0,75

1 (35 : 65),рН-4,0

После проведенных исследований в качестве внутреннего стандарта при количественном опеделении апрессина был выбран изониазмд, при определении нсвокаинамида - новокаин, при определении сульфапиридазина - этазол, при определении тримекаина и пиромекаина - анестевин.

Ревультаты количественного определения исследуемых препаратов методом БЭХХ в субстанции приведены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты ясшиастБокнсго определения апрессина, ноиокаинамида, сулсьфа-пиридалина, тримэкаика, акремекаина ызтодом БЗЖХ и субстанции

Взято на одалиэ Еайдено. Рагчзт по методу абсолютной калибровки. Клйдено. Расчет по ызтоду внутреннего стандзр! а.

k3t? u'¡a* Л» ьатролог. гаранте рис. ИСТ X метролог.- характерно.

1 •> 3 4 ■ Б 6 7 8

глрзсскн 0,2000 а',1бсо 0,1995 0,1616 S9.75 101,00 X г 99,БСЛ 5 - 1,1 <-01 0,2064 0,1654 103,20 104,00 X - 100,99* S - 1,6298

0-.2000 0,2807 100,25 Sx - 0,5126 .0,2004 100,14 Sx - 0,7289

0,25-10 0,2450 93,03 ¿X - 3,19 0,2500 98,43 лХ - 4,53

0,3320 0.32C3 S8.9B лЛ ■=■ 99,60 ± 1,43 £ - 1.44Z 0,3292 99,15 ¿X - 100,99 + 2,03 £ - 2.01Х

¡¡опста'Л- 0,09-13 0,2138 0,0351 6,3X32 1CJ0.CS 99,01 Г( - 100,91Х S - 0,9680 0,0934 0,2135 104,85 99,95 X » 101,993: S - 1.9Q76

i 0,1563 0,2005, im, еа Sx - 0,4332 ' 0,1983 100,73 Sx - 0,8531

1 0,2«4 0,2438 100,50 .»X - 2,69 0,2490 102,72 ¿X - 5,30

i ! ! i 0,3132 0,3194 101,98- ЛХ = 100,91 + 1,20 6- 1,19% 0,3184 101,66 ¿X - 101,99 i 2,37 â - 2,322

продолжение таблицы 2

1 г S 4 Б 6 7 8

сульфата-ридазии ' 0,55£Ю 0,2720 0.ББ20 0,2129 98,02 100,83 X - 100,2QZ S - 1,1600 0,5491 0,2729 05,41 100,33 X - 100,18* S - 1,0005

0,2200 0,2244 102,00 S* » 0.Б183 0,2266 103,00 Sx - 0,8446

0.4400 0,4332 СЗ.Рв ЙХ - 3,22 0,4432 100,73 ¿X - Б.2Б

0ДБ20 0,1529 100,63 ¿X - 100,20 i 1, í- t.U 44 0,1497 98,49 ЛХ - 100,19 + 2 S - 2,351 35

гриыекаин 0,4500 0,4507 100,16 X - 100,231 o,45aa 101,96 X - 100,812

0,2700 0,2715 100,56 S - 1,2011 0,2770 102,59 S - 1,5076

0,3000 0,2948 98,27 Sx - 0,5372 • 0,2980 33,33 SX - 0,6743

0,1000 0.101Б 101,50 ¿X - 3,34 0,1009 100,90 ¿X - 4,19

0,5000 0,5034 100,68 ¿X - 100,23 ¿ 1, £- 1.491 49 0,4933 99,26 ¿X - 100,81 + 1 £ -1,851 07

пиромекаин 0,1500 0,1680 0.1Б30 ■ 0,1707 101,80 100,83 X - 100,76* S - 0,8617 0,1620 0,1707 101,33 101,61 X - 100,362 S - 1.3S09

0,2120 0,2082 101,13 Sx »* 0,3854 0,2082 93,21 Sx - 0,6176

0,2300 0,2396 100, £52 АХ - 2,40 0,2296 90,83 ¿X - 3,84

0,2400 0,2420 99,46 AX - 100,75 ± 1 £ - 1,062 .07 0,2420 100,83 дХ - 100,36 ± 1 £ - 1,711 72

Относительная опибка определения алрэсслпа в таблетках по 0,01 г. (сер.261290) 1,80Х,новокаииамида по 0,25 (сер.200985) 1.65Х, сульфопиридазина по 0,5 (сер. 804901) 1,75Х. Относительная озиб.'са определения изучаемих соединений в ргзстворах новокаи-намида 10Х (сер.75.119.7.),тримекаина 2Х (сер.03.914.12.), пиро-ксквина 0,5% (сер.71.605.б.») соответственно 1.82Z, 2,307., 2,00Х.

Для идентификации и ¡количественного опеделения этония нами была разработана газохроматогра£кческая методика. Вещество определяли на газовом хроматографе "Модель 3700" с пламенно -ионизационным детектором на коленке, заполненной сорбеном CHR0MAT0N N-AW-DMC3 0,160 - 0,200 с 5Z 0V-17.

Температура испарителя 220 °С, детектора- ISO °С, колонки -180 °С. Сксрсга газа-носителя ( гелий ) 30 нл/тн, скорсть водорода - 30 мл/мин , скорость воздуха - 300 мл/мин.

Вид типичной хроматографам приведен на Рис.1.

Хроматограма этония

л ■4

2

/L

О Ь,мин.

Рис. 1

1. хлорсодерлсащие вещество 2. дециловый спирт

Как видно иа рисунка 1, на хроматогрзмме фиксируются два пика этония вследствии его пирролитического разложения (Богда-рин Ю.А.и др., 1985.). Соотношения меяду пжяцадями двух пиков оставалось , по нашим данным, постоянным (0,43), независимо от содержания этон!И в смеси. В связи о этим нами использовалась для расчетов площадь второго пика.

' Качественный анализ прсгодился по относительному удержанию, по абсолютному удержанию и методом "добавок".

Количественный анализ этония в порошсах и лекарственных формах проводили методом внутреннего стандарта и методом абсо-лхггной калибровки. В качестве внутреннего стандарта был выбран клофелин.

. Результаты количественного определения этония в порошке и лекарственной форме методом ГХХ представлены в табл. 3.

Разработанная методика анализа атония, трк^каина, пироми-каина позволяет определить количество действующих веществ и изучить стабильность сложных лекарственных форм нового состава, табл. 4.

Таблица 3

Ревудьтаты количественного определения этония в субстанции и лекарственной форме методом ГЯХ.

Взято на анализ порошка Найдено вещества

(мкг) ' (мкг) (X) метролог, характер.

оооор 0,4508 0,2710 0,2950 0,1009 0, 4963 100,18 100,37 93,67 100,90 99,26 X - 99,88* 5 * 0,8971 Бх - 0,4012 ЛХ - 2,49 лХ - 99,88 ± 1,12 . £ ' 1.122

Содержание это-ьия в мази Найдено век^стаа

(мкг) (2) метролог, характер.

0,2400 0,3600 0,4000 0,4400 0,8200 0,2280 0,3480 0,3880 0,4296 0,8090 95,00 96,67 97,00 97,64 98,66 X - 96,992 5 - 1,3485 Бх - 0,6031 дХ - 3,75 Л - 96,99 ±1,68 ё - 1,731

Таблица 4

• Результат количественного определения содержания этония, тримекаиаз и липоме каина, а исследуемых мазях прописью (1) и (2) после хранения в течении 1 года

Время хранения месяцы ПРЕПАРАТ Петрологические' характеристики

п XX 5 Бх лХ X 1 X £ х

1 2 3 4 5 6 7 8 9

СЕедиприго товленная атоний Б 98,00 1.43ЕЭ 0,6419 3,99 98,00 ± 1,78 1,82

тришпсаин 5 98,11 1,4426 0,6452 4,01 98,11 ± 1,79 " 1,83

Свеж?приго товленная атоний 5 98,16 1,4666 0,6559 - 4,08 98,16 4 1,83 1,86

пиромзкаин б 98,34 1,4243 0,б27г> 3,96 38,34 ± 1,77 1,80

1 атоний Б •98,00 1,6123 0,7213 4,48 98,00 ± 2,01 2,05

тркмекаин 5 98,07 1,4378 0,6430 3,28 98,07 + 1,47 1,50

1 атоний Б 98,00 1,4658 0,6555 4,07 98,00 1 1,82 1,86

пиромекаин 5 , 98,04 1,5018 0,6717 4,18 98,04 + 1,87 1,98

i 2 3 4 " Б

3 этоний Б 87,72 1.4757

трико каин 5 ВО,00 1,4894

3 этоний Б 07,71 ■ 1,4175*

• пироне каин ' Б . 08,00 1,6937

6 этоний Б 07,60 1,4205

триыекаин 5 98,00 1,6031

6 этоний Б 67,68 1,4204

пиромекаин б 98,00 1,6462

12 этоний 5 . 97,00 1,4345

тримекзин 5 97,64 1,6925

12 зтоний 5 97,60 1,4346

пиро 1*2 КЛИН 5 97,87 1,7238

¿0¿

- продсишенке таблицы <

6 7 в 9 «

0,6599 4,10 97,72 + 1,83 1,88

0,6661 4,14 98,00 ± 1,85 ' 1,89

0,6340 3,94 97,71 ± 1,76 1.80

0,7128 4.43 98,00 + 1,98 2,05

0,6353 3,96 97,68 + 1,77 1,81

0,7170 4,46 98,00 + 1,99 2,03

0,6352 3,95 97,66 1.77 1,61

0,7362 4j68 98,00 ± 2,05 2,09

0,6391 3,97 97,00 ±_ 1,78 1,82

0,7569 4,71 97,64 + 2,11 2,16

0,6416 3,99 97,60 + 1,78 1,83

0,7709 4,79 97,87 + 2,14 2,19 .

о

2. Выделение апресснка, сульфапиридазияа, этония, тримекаина, пиромекаииа иэ биологическая объемов.

Концентрация лекарственных средств в крови больного вовисит от введенной дозы и способа ее введении. Однако, Оольпоз влияние оказывают биологические особенности пациента - пол, возраст, заболевания, состояние желудочно-киоечпого тракта, сердечно-сосудистой системы, особенности метаболизма и экскреции (Холодов Л.Е., Яковлев ЕЕ, 1985г.). Объективную информацию о достаточности дозировки препарата могут дать только результаты его количественного определения в жидкостях организма.

Нами была разработана методика выделения апрессина и суль-фапиридааина из , крови с использование в качестве осадителя белковых компонентов 1,0 Н хлорной кислоты.

Получаемые при изолировании апрессина и сульфопиридазииа извлечения содержат большое количество белковых вегузств, которые мешают проведению анализа ( Ludden L. К. et al., 1980 ).

Нами была разработана методика очистки извлечений из биологических жидкостей с помогаю хроматографических патронов "Диа-пак". Cóдержание белковых примесей в полченних растворах определяли по методу, описанному Bredfor I. М. , 1976. , с использованием в качестве красителя кумасск голубого G-250. Измерение оптической плотности проводили с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при светофильтре с максимумом пропускания в области 590 10 нм, в кхззете с толщиной поглощающего слоя 50 мм. Сеэтопогло-е?5ккэ окражнных растворов подчиняется вакону Бутера-Ламберта-Бора в пределах кокцентаций от 5 до 100 мкг белка в пробе.

йедэлеиие этония, тримекаина и пиромекаина из гемолизиро-ванной крови проводили с помощью экстракции хлороформом. Полученные данные количественного содержания этония, тримекаина, пиромекаина в хлороформном экстракте в зависимости от рН показали, что оптимальным при экстракции этония является рН - 8,0, тримекаина рН- 11,0 - 12,0, пиромекаина рН- 12,0 - 14,0.

Для определения биологической активности изучаемых лекарственных средств нами исследовало содержание этония в поврежденных окогом тканях серых ыьааей. С этой целью разработана методика выделения этония иэ биологических тканей, поврежденных ожогом. Для выделения этония использовалась экстракция хлороформом. Предварительно была исследовала-зависимость полноты извлечения препарата от кратности экстракции и объема зкетрагента.

Оптимальным следует считать 3-кратную экстракцию (калдий раа по 5 мин.) биологической ткани порциями хлороформа, взятых в С0СШ10ПШИИ 1:5 к количеству исследуемой ткани.

3. Бкофармацевтические исследовании.алрессика, сульфапири-дазина, этония, тримекакна, пиромекаина.

Исподьвовоние хроматографических методов ари проведении клинических исследований является наиболее перспективным направлением и способствует повииению достоверности и экспресности анализа (U)юayat Н е1 а1. , 1973.).

Для анализа в биологических жидкостях алрессина, сульфапи-рвдаэпла, тримскаипа и пиромека;ша использовала разработанную методику ВЭЖХ - определения (табл. 5 ).

При анализе зтокия из биологических жидкостей и тканей Сьиа испольеовала разработанная методике, гаэохроматогрьфического оп-р-1 делении (табл. 6 ).

Разработанные методики выделения и анализа этония, сульфа-пиридоаииа, ьпрессика, тримекаина, пиромикаина были испсльеованы длл определения их в крови и тканях сколеримектальних животных при изучении степени проникновения действующ« ¡век/гств мазей нового состава в процессе лечения дозированного термического ожо-га(содержащими : пропись 1'этония-2,0 г., тркмекаина-5,0 Г., вспомогательных веадэсть до 100,0 г., пропись 2 этония-2,0 г., пиромекаина-5,0 г., вспомогательных вещести до 100,0 г.).

Таблица Б

Ревудътаты количественного определания апревсина, сульфапирвдазина, тония, тримекаина и пироиекакна в Оиологйч&скнх жидкостях.

ПРЕПАРАТЫ Метрологические характеристики

x 3 * дх . А x £ *

КРОВЬ апрессин 44,95 1,7413 0,7788 4,84 44,95 + 2,17 4,81

сульфеши-ридазин 69,45 2,1750 0,9227 6,05 69,45 + 2,70 3,89

атоний 65,34 2,7083 1,2112 7,53 65,34 ± 3,37 5,15

тришкаин 34,31 2,4756 1,1071 6,88 34,31 ± 3,08 8,97

пирошкакя 49,45 2,5158 1,1251 6,99 49,45 + 3,31 6,33

ЮТА аггрессин 64,62 1,8361 0,8435- 5,24 64,62 + 2,35 3,63

сульфапи-ридазик 62,24 2,6196 1,1715 7,23 82,24 + 3,26 3,96

Таблица б

Результаты количественного определения атония з биологических тканях (модельной смеси) методом Г2Х

Метрологические характеристики

п х X 5 Бх X X х

49,10 2,3746 1,0620 6,60 49,10 + 2,95 6,01

Нами такте проведены исшггаиия ранозажнвляюцаго и противоо-юэгового действия исследуемых мазей. Раны наносили с помощью специального трафарета скальпелем на подготовленные участки коки спины животных. 3 последующем проводили ежедкевнов дозированное лечение ран исследуемыми мазями о регистрацией размера плоедди скарификатов. У кивотних которых лечили мазями нового состава по прописи (1) н (2), заживление ран отмечалось на 4-Б сутки, у группы, которую лечили официнальной мазью на 6-7 сутки, а контрольных опытах (самозаживление) - на 9-11сутки. В последней группе были зарегистрированы случаи загноения ран.

Противоожоговое действие исследовали на модели дозированного термического ожога. Оценку состояния очага и окружающих тканей ( плошали олега) проводили ежедневно. В первые сутки у животных (серые мыши) наблюдали перфокадькоэ воспаление шириной 4-5 мм. Полная апителизация очага поражения происходила, у тавотных, получавших мазь нового состава по прописи (1) и (2) - на 6-7 сутки, офицкнальную мазь содержащую атоний - на 9-10 сутки, в контрольной группе ( самозаживление ) - на 13-14 сутки. У тавотных при применении мазей нового состава заживление ожогового повреждения завершалось эпителизоцией без рубцоЕЫх уплотнений и быстрым ростом шерсти, тогда как у контрольных 'животных на ожоговых участках образовались плотные рубцы , лкиенные волосяного покрова.

Исследования фармакокинетических свойств лекарственных средств у яивотных позволяет наиболее рационально подойти к изучен™ клинической фармакокинетики, что необходимо для выбора оптимальных доз препарата ( Холодов А. С. и др. 1965г. ).

Коучснио окопе риментллькой фармакпшшетики алресснка к оуллфопирадасина проводил! на кроликах, преператы вводили в желудок через зонд в виде еодиых суспеивил. Идентификацию и коли-чественноо определение препаратов в крови проводили методом ВЗКХ Обработку полученных данных проводили на ЭВМ марки "Искра 1030. 11" по специалио разработанной программе.

Анализ полученных данных с применением ЭШ показал, что кинетика. апроссика и сульфапиридазкна при пероральном введении лучше всего описывается одночастевой моделью со всасыванием. Эта модель представляет .•экспоненциальное поступление лекарственного средства из подкамеры 0 (место введения) в основную камеру 1, моделирующую кровь и другие ткани, в которые проникает препарат. Е.Ы1Я построены гра^чгчеекие в&висимзсти изменения концентрации шроссииа и суяъфсширидозинз в крови кроликов в зависимости от времени (Рис. 2.).

Динамика изменений концентраций апресснна и сулъфапиридазина в крови кроликов в ва-висимости от времени после его перорольного введения в дозе БО иг/кг

С (ыкг/ил)

<50

/5

1

0,5

4,0

Ц,О Т (ч

Рис. 2

1. апрессин

2. сульфалиридавин

В табл.7 предстивлены фармакокинетическн? параметры, рассчитанные d соответствии с одпочастевой модель» со в с üc ив и ¡и ем.

TuÖ.CHLv'l 7

•Значение фармакокинетических параметров апрессина и сульфипиридааина i для перорального способа введения

Фармакокинетические параметры

Обозначения

алрессин

сульфаииридазин

Период подуэлимина-ции (ч. ) Т1/2

Константа скорости элиминации (ч ) Kol

Константа скорости абсорбции (ч ) Kol

Кажуиряся начальная концентрация (мкг/мл) Со Время достижения мзкеимальиой концентрации (ч.) Ттах Объем распределения

(х) V4

Удельный объем распределения (л/кг) "d шкеимальная концентрация (мкг/мл') Сшах ССяий клиренс (л/час) Clt Площадь под фармако-кинетической кривой

(ыкг*ч/ыл ) АИС

4,222 0,164 1,757 137,822

2,577

0,726

0,363

138,907 0,119

83967

3,846 0,469 2,660 263,856

1,227

0,380

0,190

264,926 0,179

56029

При изучении экспериментальной фарыакокинетики тримекаина и пироЕекаина, инъекционные раствори препаратов вводили кроликам в ыыицу задней лапы. Идентификацию и количественное определение препаратов в крови животных проводили по разработанным хроматог-рафггчесшш методикам. Анализ подученных дани их с помощью ЭВИ показал, что при внутримышечном введении динамика уровня препарата лучше всего апроксимируется одначастевой моделью со всасыванием. Построены графики изменения концентрации тримекаина и пиромекаи-на в крови кроликов в зависимости от времени после вводения (Реи. а)

Динамика изменения концентраций тримекаина и пи-роко каина а крови кроликов о аазисишстн от вре- * мани после их внутримышечного введения в дозеБО мг/кг.

С, мкг/мл

0,033 2,550 5,850 х<ч>'

Рис. 3.

1. тркмекани

2. пиромекаин

а

%

Реясчктапнвэ а соответствии о одночостевой шдолыо со Бса-сцвантам ¿■арыз.'са'зпотнческие параметры для Енутришлючпого вео-дения тргао!:а.'ша и пирошкашщ представлены в табл. 8.

Таблица 8

Значение Саркакогашет ичэс га« параметров триш каина к пироие каина для внутримьшэчиого способа введения

Сармакокинетические параметры Обозначение трииекаин пиромеканн

Период полуэяишна-

ции (ч.) Т1/2 1,241 0,637

Константа скорости 0,558

элиминации (ч ) Кв1 0,773

Константа скорости

абсорбции (ч") Хо1 2,861 1,-301

Кажущаяся начальная

концентрация (ыкг/ыл) Со 115,098 473,837

Время достижения

максимальной концен-

трации (ч.) Тшах 0,986 0,986

Объем распределения

(Д.) У<1 0,211 0,211

Удельный объем

распределения (л/кг! "а 0,106 0,106

максимальная кон-

центрация (мкг/мл) Сш 116,005 477,563

Общий клиренс (л/ч) си 0,485 0,163

Плогуздь под фармако-

кинетической кривой

(мкг*ч/мл) АИС 20616 613С8

- аг-

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании проведенных исследований шести лекарственных средств,содерлагцих аминогруппы, выявлены закономерности хро-матографического поведения е зависимости от рН и содержания по-, лярных компонентов в подвижной фазе.

2. На основании полученных экспериментальных данных разработаны методики качественного определения апрессина, новокаина-мида, сульфапиридазина, тримекаина и пиромекаина в лекарственных формах методом ВЗКХ. Идентификация проводится по абсолютному и относительному времени удерживания, по спектральным отношениям и т методу "добавок". Предел обнаружения апрессина к сульфалири-дяэина - 2 мкг/мл, новокаинамида, тримекаина, пиромекаина - 4 мкг/мл.

3. На основании исследований, проведенных методом ГЯХ, выбраны оптимальные условия и предложена эффективная методика идентификации зтония. Разработанная методика имеет преимущества по сравнению с НД,так как позволяет повысить чувчтвительность обнаружения зтония в 10 раз (0,1 мкг/мл вместо 1 икг/мл).

4. На основании исследований, проведенных методами ВЕСКХ и ГЖХ,'предложены эффективные, универсальные методики количественного определения апрессина, сульфапиридазина, ново1саиншкда, это-ния, тримекаина, пиромекаина в субстанции и лекарственных формах. Методики дают возможность определять примеси и полупродукта синтеза в процессе производства. Методики основаны на сочетании количественного хроматографического анализа с математическими приемами обработки и интерпретации полученных данных. Разработанные методики имеют преимудествапо сравнению с КД, как бодео селективные и чувствительные.

8. На основе сравнительного исследования способов осаждения белков плазмы крови, показана и обоснована целесообразность применения 1,0 Н раствора хлорной кислоты для осаждения белиовых компонентов при определении апрессина и сулъфалиридавина в крови.

б, На основании изучения процессов микроколоночной сорбции выявлена прямая зависимо» адсорбции белковых компонентов плазмы крояи от величины рН извлечений, что позволило разработать ©ф-

фективную метододау предварительной подготовки биологических проб для последуворго хроматографического анализа.

7. № основании сравнительного анализа способов выделения этония, тримекаина и пиромекаина ив биологических объектов выявлены преимугества разработанных методик экстракции хлороформом по полноте кавлечения и точности перед ранее кввестнымн.

8. На основании изучения оптимальных условий анализа препаратов иетодоми ВЗЯХ и ГЯХ разработаны методики их хроматографического определения в биологических объектах отличающиеся высокой чувствительностью и селективностью.

0. На основе ивучения вакономарностей высвободдения атония, тримекаина, пиромекаина из мазевых лекарственных форм различного состава на моделях лечения ран - скарификатов и дозированного термического ожзга определена их репаративная и рановаживляпаая активность.

10. № основе использования одночастевой фармакокинетичес-кой издали со всасывая нем и разработанных хроматографических методик вкалива в вкоперименте на лабораторных хмаотшгх определены фарыыажяяетнчэскиа парамэтры изучаемых препаратов при различных путях их введения.

Jtv

ПО TDffi ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУСТЗ® РАБОТЫ:

1. Квач А. С., Плехов С. а , Новиков Д, А. Определение сульфа-пиридааина методом ВЭЖХ. //.Актуальные вопр. фармацевт ич. науки и практики: Тез. докл. науч. конф. - 4 2. - Курск, 1991. - С. 44-45.

2. Квач А. С., Плехов С. а , Новиков Д. А. Определение алрес-сина в биологическом материале методом ВЭЖХ, //Актуальные вопр. эксперимент, и клинич. медицины и фармации: Тев. докл. науч. конф. - Курск, 1993. - С. 145-148.

3. Квач А. С., Плехов 0. Е , Новиков Д. А. Модифицированный метод определения белка. //Синтеа новых лекарственных препаратов: Т^з. докл. науч. конф. - Пенза, 1992. - С. 20 -21.

4. Применение высокоэффективной видкэсгной хроматографии для анализа новокаинамида в субстанции и инъекционных растворах. / А. С. Квач , II А. Еошлнина , С. В. Плохой, Д. А. Новиков //Реали-вация научных достижений в практической фармации: Тов. док. респ. науч. конф. 16-18 о кг. - Харьков, 1991. - 0.162-163.

Б. Хабаров A.A., Ланкрутаева Т.А., Новиков.Д.А. Испольеова-ние метода высокоэффективной жидкостной хроматографии при изучении возможных взаимодействий в комбинированных ыэзях терминальных анестетиков. // Решение актуальных вадач фармации на современном этапе: Tea. докл. науч. конф. — Москва, 1994. - С. 233.