Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Изучение сравнительной кинетики растворения по процедуре "биовейвер" воспроизведенных лекарственных средств I класса биофармацевтической классификационной системы

005055665

На правах рукописи

МАЛАШЕНКО Евгения Александровна

ИЗУЧЕНИЕ СРАВНИТЕЛЬНОЙ КИНЕТИКИ РАСТВОРЕНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ «БИОВЕЙВЕР» ВОСПРОИЗВЕДЕННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ I КЛАССА БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ КЛАССИФИКАЦИОННОЙ СИСТЕМЫ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

2 2 НОЯ 2012

Москва —2012

005055665

Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России Научный руководитель: доктор фармацевтических наук,

профессор Раменская Галина Владиславовна

Официальные оппоненты:

Сливкин Алексей Иванович, доктор фармацевтических наук, профессор, декан фармацевтического факультета Воронежского государственного университета

Боковикова Татьяна Николаевна, доктор фармацевтических наук, начальник лаборатории химико-фармацевтических препаратов №1 Испытательного центра ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России

Ведущая организация: ФГБУ «Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова» РАМН

Защита состоится: «19» декабря 2012 г. в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, д. 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной медицинской библиотеке Первого МГМУ имени И.М. Сеченова (ЦНМБ) по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект д. 49. Автореферат разослан «2012 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор фармацевтических наук,

профессор /{¿Щ, Садчикова Наталья Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

На сегодняшний день главной национальной программой в области фармации является «Стратегия развития фармацевтической промышленности РФ на период до 2020 года», цель которой - переход на инновационную модель развития российской фармацевтической промышленности. Большое значение в реализации данной программы придается разработке новых оригинальных и воспроизведенных лекарственных средств отечественного производства. Согласно законодательству Российской Федерации для подтверждения эффективности и безопасности воспроизведенного лекарственного средства в сравнении с оригинальным (или другим препаратом сравнения, зарегистрированным к медицинскому применению в РФ), необходимо проведение либо сравнительных клинических исследований, либо сравнительных фармакокинетических исследований (исследований биоэквивалентности), проводимых на здоровых добровольцах. Достоинством таких исследований является их высокая информативность, однако они обладают и рядом значительных недостатков: этические сложности, поскольку они требуют вовлечения здоровых добровольцев, а в некоторых случаях - пациентов (онкологические и некоторые другие ЛС), длительность и высокая стоимость. В связи с этим большинством ведущих регуляторных агентств мира по здравоохранению (FDA, 2001 г., ВОЗ, 2006 г., МЗ Украины, 2007 г., ЕМА, 2010 г.) была утверждена процедура упрощенной государственной регистрации ЛС -«биовейвер», которая позволяет в некоторых случаях оценить взаимозаменяемость воспроизведенного ЛС и препарата сравнения на основании их биофармацевтических свойств и профилей растворения in vitro, отражающих физиологический состав сред разных отделов ЖКТ. При этом общепризнанными объектами исследования кинетики растворения по процедуре «биовейвер» являются ЛС I класса биофармацевтической классификационной систе-

мы.

Фактически, процедура «биовейвер» является ключевым трендом биофармации последнего десятилетия. Подтверждением этому может служить тот факт, что она принята на государственном уровне в США, Европейском Союзе и Украине, создание Международной Фармацевтической Федерации (Р1Р) специальной группы по биофармацевтической классификационной системе и процедуре «биовейвер», а также существование сотен публикаций в ведущих зарубежных и российских рецензируемых фармацевтических журналах. Данная процедура успешно зарекомендовала себя в реальной регуля-торной практике. Так, в Украине по процедуре «биовейвер» уже зарегистрировано 8 воспроизведенных лекарственных средств. В России на данный момент процедура не принята на государственном уровне, однако активно внедряется среди разработчиков воспроизведенных лекарственных средств с целью выбора и обоснования состава при создании новых лекарственных препаратов. Поэтому разработка стандартных методик и изучение биофармацевтических свойств наиболее актуальных препаратов из I класса БКС является важной научно-практической задачей для фармации.

Цель исследования - изучить сравнительную кинетику растворения воспроизведенных ЛС I класса БКС согласно процедуре «биовейвер».

Задачи исследования:

1. провести научно-обоснованный выбор объектов исследования - воспроизведенных лекарственных средств I класса БКС из Перечня ЖНВЛП;

2. разработать методику определения биофармацевтической растворимости активных фармацевтических субстанций, входящих в состав исследуемых ЛС;

3. провести валидацию разработанных и/или перенос (трансфер) фармакопейных методик количественного определения метопролола, бисопролола и индапамида;

4. определить биофармацевтическую растворимость активных фармацевтических субстанций, входящих в состав исследуемых ЛС;

5. на основании литературных и собственных экспериментальных данных подтвердить принадлежность исследуемых ЛС к заявленному классу БКС и BDDCS и оценить возможность установления эквивалентности данных ЛС

по процедуре «биовейвер»;

6. подобрать оптимальные условия изучения сравнительной кинетики

растворения согласно процедуре «биовейвер» исследуемых ЛС;

7. изучить сравнительную кинетику растворения согласно процедуре

«биовейвер» исследуемых ЛС;

8. сделать заключение об эквивалентности in vitro по процедуре «биовейвер» исследуемых лекарственных средств и сравнить его с результатами изучения биоэквивалентности.

Научная новизна. В работе впервые изучена сравнительная кинетика растворения воспроизведенных ЛС I класса БКС (бисопролол, метопролол, индапамид) по процедуре «биовейвер». По результатам серии экспериментов показано, что процедура «биовейвер» может применяться для оценки взаимозаменяемости воспроизведенных ЛС бисопролола, индапамида и метопро-лола.

Практическая значимость результатов исследования. Методики изучения сравнительной кинетики растворения внедрены в работу филиала «Клиническая фармакология» Научного Центра Биомедицинских Технологий РАМН и ООО «Технология лекарств» и успешно используются для установления эквивалентности in vitro воспроизведенных ЛС, содержащих бисопролол, индапамид и метопролол.

Апробация работы проведена на кафедре фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета Первого МГМУ имени

И.М. Сеченова (28.06.2012).

Основные результаты работы доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства» (Казахстан, Шымкент, 2009); научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная медицина и био-

безопасность» (Москва, 2009); итоговой научной студенческой конференции с международным участием «Татьянин день» (Москва, 2010); Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010); II Конгрессе Международного общества клинических фармакологов и фармацевтов стран СНГ (Москва, 2010); Конкурсе научных инновационных работ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (Москва, 2012).

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в проведении экспериментальных исследований, анализе и обобщении полученных результатов. Автором лично проведен выбор объектов исследования, разработка методик определения биофармацевтической растворимости субстанций и теста сравнительной кинетики растворения исследуемых ЛС, статистическая обработка результатов. Вклад автора является определяющим на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально - теоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и внедрения в практику.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 - «фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 5 - в изданиях, рекомендованных ВАК, и 2 - в иностранных журналах.

Связь темы исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках научно-исследовательской программы Первого МГМУ имени И.М. Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований». Номер государственной регистрации: 01.2.006 06352. Тема включена в план научных исследований кафедры фармацевтиче-

ской и токсикологической химии «Основные направления создания и оценки качества лекарственных средств»

Положения, выносимые на защиту

1. Экспериментальные результаты оценки биофармацевтических свойств субстанций бисопролола, индапамида и метопролола.

2. Методики изучения сравнительной кинетики растворения ЛС бисопролола, индапамида и метопролола.

3. Результаты оценки эквивалентности in vitro согласно процедуре «биовейвер» ЛС бисопролола, индапамида и метопролола.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 106 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), материалов и методов (глава 2), экспериментальной части (глава 3), общих выводов и списка литературы. Диссертация включает 39 таблиц и 22 рисунка. Библиографический список содержит 114 источников, из них 84 на иностранном языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы

Объекты исследования

Для проведения эксперимента были выбраны ЛС немедленного высвобождения, содержащие бисопролол, метопролол и индапамид. Все лекарственные средства зарегистрированы к медицинскому применению в РФ и были приобретены в аптечной сети г. Москва.

Препараты бисопролола: исследуемое ЛС: Нипертен, таб. п.п.о., 10 мг, ООО «КРКА-РУС», Россия, серия 6100110, годен до 01.2012 (далее - Нипертен), референтное ЛС: Конкор, таб. п.п.о., 10 мг, Мерк КГаЭ, Германия, серия 121567, годен до 09.2012 (далее - Конкор).

Референтное ЛС является оригинальным препаратом бисопролола. Действующим веществом исследуемых ЛС является бисопролола гемифума-рат.

Препараты индапамида: исследуемое JIC: Индапамид, таб. п.п.о. 2,5 мг, ОАО «Биохимик», Россия, серия 030111, годен до 02.2013 (далее - Индапамид), референтное ЛС: Арифон, таб. п.п.о. 2,5 мг, Лаборатории Сервье Индастри, Франция, серия 685325, годен до 04.2015 (далее - Арифон).

Референтное ЛС является оригинальным препаратом индапамида. Действующим веществом исследуемых ЛС является основание индапамида.

Препараты метопролола: исследуемое ЛС: Эгилок таб. 100 мг, Фармацевтический завод Эгис А.О, Венгрия, серия 2420Н0408, годен до 04.2013 (далее - Эгилок), референтное ЛС: Беталок таб. 100 мг, Астра-Зенека АБ, Швеция, серия КЕ2255, годен до 05.2013 (далее - Беталок).

Референтное ЛС является оригинальным препаратом метопролола. Действующим веществом исследуемых ЛС является метопролола тартрат.

Оборудование и реактивы

Изучение биофармацевтической растворимости субстанций проводили на термошейкере TS-100 (Biosan, Латвия). Количественное определение проводили на УФ-спектрофотометре Cintra 101 (GBC, Австралия), оснащенном программным обеспечением (Cintrai, версия 2.0). В качестве вспомогательного оборудования использовали: весы лабораторные AL 204 (Mettler Toledo, Швейцария), рН-метр FE-20 FiveEasy (Mettler Toledo, Швейцария), аппарат для фильтрации и дегазации растворов Solvent Clarification Kit (Waters, США), автоматические дозаторы Ленпипет (Thermo Scientific (ранее - Лен-пипет), Россия), центрифугу SL-16 (Thermo Scientific, США), вортекс-шейкер Reax Тор (Heidolph, Германия).

Тест сравнительной кинетики растворения проводили на аппарате «лопастная мешалка» DT 600 (Erweka, Германия). Количественное определение проводили на УФ-спектрофотометре Agilent 8453 (Agilent Technologies, США), оснащенном программным обеспечением (ChemStation). В качестве вспомогательного оборудования использовали: весы лабораторные ED224S (Sartorius, Швейцария), рН метр РН-744 (MetroHm, Швейцария), магнитную

мешалку RH Basic 2 (IKA, Финляндия), автоматические дозаторы Ленпииет (Thermo Scientific (ранее - Ленпипет), Россия).

В работе использовали мерную лабораторную посуду классов «А» (мерные колбы, вместимостью 20, 50, 100 мл), «AS» (аналитические пипетки, 1, 2, 5, 10 мл) и «В» (мерные цилиндры, 20 мл, 50 мл, 500 мл и 1000 мл).

В работе использовали следующие реактивы: вода дистиллированная (аквадистиллятор ДЭ-20, Электромедоборудование, Россия), хлористоводородная кислота (Сигма Тек, Россия, класс «х.ч.»), калия хлорид (Рапгеас, Испания, класс «х.ч.»), уксусная кислота (Рапгеас, Испания, класс «х.ч.»), натрия ацетат (Рапгеас, Испания, класс «х.ч.»), калия фосфат однозамещен-ный (Рапгеас, Испания, класс «х.ч.»), натрия фосфат двузамещенный (Рапгеас, Испания, класс «х.ч.»), этанол 96 %.

В работе использовали следующие стандартные образцы: бисопролол (USP RS, каталожный номер 1075757, серия H0J057, содержание бисопроло-ла 99,8 %), индапамид (USP RS, каталожный номер 1338801, серия Н1Е103, содержание индапамида 99,8 %), метопролола тартрат (USP RS, каталожный номер 1441301, серия I0G301, содержание метопролола тартрата 99,7 %).

Нормативные документы

Оценку эквивалентности in vitro по процедуре «биовейвер» проводили согласно рекомендациям ВОЗ, 2006 г. Тест сравнительной кинетики растворения проводили с учетом требований ОФС 42-0003-04 «Растворение» и Методических Указаний Минздравсоцразвития России «Оценка биоэквивалентности лекарственных средств», приложение 4, 2008 г. Экспериментальное изучение биофармацевтической растворимости субстанций проводили согласно рекомендациям FDA, 2001 г. Валидацию проводили согласно внутренней стандартной операционной процедуре лаборатории, основанной на

рекомендациях ICH, USP, FDA и АРФП.

Поиск информации по биофармацевтическим свойствам (растворимость, проницаемость) проводили в публикациях в рецензируемых научных журналах и монографиях, а также в базах данных по БКС.

Изучение биофармаг/евтической растворимости субстанций

Около 100 мг (точная навеска) исследуемой субстанции вносили в микроцентрифужные пробирки Eppendorf вместимостью 1,5 мл, прибавляли 1000 мкл соответствующего буферного раствора (0,1 M раствор хлористоводородной кислоты рН 1,2, ацетатный буферный раствор рН 4,5, фосфатный буферный раствор рН 6,8). Пробирки помещали в термостатируемый шейкер и встряхивали в течение 24 ч при температуре 37,0 °С при 1400 об/мин, затем незамедлительно центрифугировали при 13500 об/мин в течение 10 мин и отделяли надосадочную жидкость. Для каждой среды растворения испытание проводили в трех повторностях.

Для субстанции индапамида 800 мкл надосадочной жидкости переносили в полипропиленовые пробирки вместимостью 10 мл, прибавляли 1,6 мл соответствующего буферного раствора и перемешивали на вортекс-шейкере в течение 1 мин (разведение в 3 раза). Для субстанций метопролола и бисо-пролола 100 мкл надосадочной жидкости переносили в полипропиленовые пробирки вместимостью 10 мл, прибавляли 9,9 мл соответствующего буферного раствора и перемешивали на вортекс-шейкере в течение 1 мин. 1 мл полученного раствора переносили в полипропиленовые пробирки вместимостью 10 мл, прибавляли 9 мл соответствующего буферного раствора и снова перемешивали на вортекс-шейкере в течение 1 мин (разведение в 1000 раз).

Количественное содержание растворившихся субстанций определяли на УФ-спектрофотометре при длинах волн: 278 нм (бисопролол), 274 нм (ме-топролол), 240 нм (индапамид).

Статистическую обработку результатов эксперимента осуществляли с использованием пакета Microsoft Office Excel 2007 путем расчета среднего значения количества растворившейся субстанции и относительного стандартного отклонения (RSD, %). В том случае, если навеска субстанции полностью растворялась в 1000 мкл среды растворения, считалось, что ее биофармацевтическая растворимость в данном буферном растворе превышает 10 %. Для каждой величины растворимости субстанции в соответствующем бу-

ферном растворе проводили расчет отношения дозы к растворимости, которое рассчитывали по формулам, рекомендованным ВОЗ и FDA:

D/S = Dmax/S и D/S = ВРД/S, где:

D/S - отношение дозы к растворимости, мл;

Dmax - максимальная дозировка ЛС, зарегистрированная в РФ к медицинскому применению, мг;

ВРД - высшая разовая доза ЛС, мг;

S - биофармацевтическая растворимость, мг/мл.

Растворимость субстанций считается «высокой», если величина D/S принимает значения менее 250 мл.

Валидация и перенос методик

Разработанная методика количественного определения бисопролола была валидирована по основным характеристикам: специфичность, линейность, правильность, прецизионность (сходимость и воспроизводимость), аналитический диапазон, устойчивость, что позволяет ее применять для оценки биофармацевтической растворимости бисопролола. Аналитический диапазон методики составил 0,0046 - 0,0154 мг/мл.

По результатам переноса методик величины открываемое™ и относительного стандартного отклонения для препаратов метопролола и индапами-да соответствовали нормам. Таким образом, методики количественного определения метопролола и индапамида были применены в лаборатории без

процедуры валидации.

Изучение сравнительной кинетики растворения исследуемых ЛС

Условия исследования сравнительной кинетики растворения определяли экспериментальным путем, основываясь на рекомендациях ВОЗ, 2006 г. Аппаратом выбора для твердых дозированных лекарственных форм была лопастная мешалка (поскольку исследуемые ЛС не являются нераспадающимися, всплывающими или залипающими на стенке сосуда, для которых аппаратом выбора является вращающаяся корзинка) при 75 об/мин. Использовали среды растворения - 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты pH 1,2, аце-

татный буферный раствор рН 4,5, фосфатный буферный раствор рН 6,8, которые готовили согласно методикам USP 30/NF 25. Временные точки отбора проб подбирали таким образом, чтобы обеспечить достоверное описание профиля растворения с постепенным нарастанием и последующим выходом на плато.

Для препаратов бисопролола исследование проводили в объеме среды растворения 900 мл. Временные точки отбора проб: 5 мин, 10 мин, 15 мин, 20 мин, 30 мин. Для препаратов метопролола исследование проводили в объеме среды растворения 900 мл. Временные точки отбора проб: 10 мин, 15 мин, 20 мин, 30 мин, 45 мин. Для препаратов индапамида исследование проводили в объеме среды растворения 500 мл. Временные точки отбора проб: 10 мин, 15 мин, 20 мин, 30 мин, 45 мин.

В каждый из 6 сосудов для растворения с 900 или 500 мл соответствующей среды растворения, предварительно термостатированными при 37 ± 0,5 °С, помещали по 1 таблетке исследуемого лекарственного средства. Спустя указанные промежутки времени проводили отбор 5 мл среды, который незамедлительно восполняли таким же объемом чистой среды растворения, предварительно термостатированной при 37 ± 0,5 °С. Отобранные пробы незамедлительно фильтровали через фильтры «синяя лента», отбрасывая первые порции фильтрата. Параллельно и аналогичным образом проводили исследование референтного лекарственного средства.

Количественное определение проводили методом УФ-спектрофотометрии. Измеряли оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов на спектрофотометре в кварцевой кювете с толщиной слоя 10 мм в области максимального поглощения при длине волны 223 нм (бисопролол), 275 нм (метопролол), 242 нм (индапамид), используя в качестве раствора сравнения соответствующую среду растворения.

Статистическую обработку результатов эксперимента осуществляли с использованием пакета Microsoft Office Excel 2007 путем расчета среднего значения количества растворившейся субстанции и относительного стан-

дартного отклонения (ЯЗЭ, %). Достоверность результатов оценивали по величине относительного стандартного отклонения, величина которого не должна превышать 20 % для первой временной точки и 10 % - для остальных временных точек. При высвобождении в среду растворения более 85 % действующего вещества в течение 15 мин кинетика растворения считалась эквивалентной без математической оценки. В случае если в течение 15 мин в среду растворения высвобождалось менее 85 % действующего вещества, для оценки эквивалентности кинетики растворения ЛС производили расчет фактора СХОДИМОСТИ

Параллельно с проведением теста сравнительной кинетики растворения проводилась оценка скорости растворения исследуемых ЛС. В случае, если в течение 30 мин высвобождалось более 85 % действующего ЛВ, скорость растворения считается «быстрой»; если в течение 15 мин высвобождалось более 85 % действующего ЛВ, скорость растворения считалась «очень быстрой»; в остальных случаях скорость растворения считалась «медленной».

Валидация и перенос методик

Для количественного определения бисопролола применяли разработанную методику УФ-спектрофотометрического определения (поскольку все фармакопейные методики предлагают метод ВЭЖХ). Для количественного определения метопролола и индапамида использовали УФ-спектрофотометрические методики количественного определения, приведенные в фармакопеях. В связи с этим собственная методика была подвергнута процедуре валидации, а фармакопейные методики - процедуре переноса (трансфера). Для переноса методики для каждой из сред растворения параллельно готовили 2 стандартных раствора (из двух навесок), проводили их количественное определение согласно методике и рассчитывали величину открываемое™ (г, норма 98 - 102 %) и относительного стандартного отклонения (ЯЗЭ, норма не более 2 %). Валидацию методики проводили по следующим характеристикам: специфичность, линейность, правильность, прецизи-

онность (сходимость и воспроизводимость), аналитический диапазон, устойчивость.

Оценка состава вспомогательных веществ.

Оценка качественного состава вспомогательных веществ исследуемых ЛС проводилась на основании данных, представленных в инструкциях по медицинскому применению. Качественный состав вспомогательных веществ исследуемых ЛС приведен в Таблицах 1-3.

Таблица 1

Состав вспомогательных веществ препаратов бисопролола

Вспомогательное вещество Препарат

кремния диоксид коллоидный безводный 1,2

магния стеарат 1,2

кросповидон 2

целлюлоза микрокристаллическая 1,2

кукурузный крахмал 2

кальция гидрофосфат безводный 2

краситель железа оксид красный (Е 172) 2

краситель железа оксид желтый (Е 172) 2

диметикон 100 2

макрогол 400 1,2

титана диоксид (Е 171) 1,2

гипромеллоза 2910/15 1,2

натрия карбоксиметилкрахмал 1

повидон 1

тальк 1

1 - Исследуемый препарат

2 — Препарат сравнения

Таблица 2

Состав вспомогательных веществ препаратов метопролола

Вспомогательное вещество Препарат

лактозы моногидрат 2

магния стеарат 1,2

целлюлоза микрокристаллическая 1,2

карбоксиметилкрахмал натрия 1,2

кремния диоксид коллоидный безводный 1,2

повидон 1,2

1 - Исследуемый препарат

2 - Препарат сравнения

Состав вспомогательных веществ препаратов индапамида

_Вспомогательное вещество

картофельный крахмал___

кукурузный крахмал___

Препарат

_1_

1,2

кальция фосфат коллидон 30

оксипропилцеллюлоза Клуцел 1Р коллидон УА 64__

лактозы моногидрат

повидон

магния стеарат

белый пчелиный воск

титана диоксид глицерол

1,2

1,2

натрия лаурилсульфат гипромеллоза

макрогол 6000

1 - Исследуемый препарат

2 - Препарат сравнения

Результаты н их обсуждение

Биофармацевтическая растворимость

Величины отношения дозы к растворимости для исследуемых субстанций в каждой из трех сред приведены в Таблицах 4-6.

Таблица 4

Оценка биофармацевтической растворимости субстанции метопролола

Среда растворения

0,1 М раствор хлористоводородной кислоты рН 1,2

ацетатный буферный раствор рН 4,5

фосфатный буферный раствор рН 6,8

Б/в (Оп 100 мг)

< 1

< 1

<1

О/в (ВРД мг)

200

<2

<2

<2

Растворимость

«высокая»

«высокая»

«высокая»

Таблица 5

Среда растворения Б/в (П„1а„ = 10 мг) о/в мг) (ВРД = 10 Растворимость

0,1 М раствор хлористоводородной <0,1 <0,1 «высокая»

ацетатный буферный раствор рН 4,5 <0,1 <0,1 «высокая»

фосфатный буферный раствор рН 6,8 <0,1 <0,1 «высокая»

Таблица 6

Оценка биофармацевтической растворимости субстанции индапамида

Среда растворения

0,1 М раствор хлористоводородной кислоты pH 1,2

ацетатный буферный раствор pH 4.5

фосфатный буферный раствор pH 6,8

D/S (Dmax = 2,5 мг)

91,24

85,32

108,70

D/S (ВРД =2,5 мг)_

91,24

85,32

108,70

Растворимость

«высокая»

«высокая»

«высокая»

Таким образом, для каждой исследуемой субстанции в каждой из трех сред растворения биофармацевтическая растворимость была классифицирована как «высокая» на основании расчета величины D/S по максимальной дозировке, зарегистрированной к медицинскому применению и по высшей разовой дозе (критерий приемлемости: D/S < 250 мл).

Классификация исследуемых субстанций согласно БКС и BDDCS Достоверные данные по биофармацевтической растворимости бисо-пролола, метопролола и индапамида (в 3-х средах), установленные в соответствии с требованиями Руководств по БКС и процедуре «биовейвер»в литературе найдены не были. На основании собственных экспериментальных данных растворимость указанных субстанций была определена как «высокая». Литературные данные прямых (абсолютная биодоступность, исследования масс-баланса, исследования кишечной перфузии) и косвенных (исследования на культуре клеток Сасо-2, коэффициент распределения октанол-вода) методов позволяют определить проницаемость бисопролола, метопролола и индапамида как «.высокую». Интенсивность метаболизма метопролола и индапамида была определена как «высокая» (метаболизируются практически полностью), и «низкая» для бисопролола (интенсивность метаболизма около 50 %).

Таким образом, на основании литературных и собственных экспериментальных данных бисопролол, метопролол и индапамид были отнесены к I классу согласно БКС и BDDCS (кроме бисопролола - III класс BDDCS), что делает их потенциальными кандидатами для процедуры «биовейвер».

Оценка состава вспомогательных веществ

В целом, все вспомогательные вещества, входящие в состав исследуемых и референтных препаратов бисопролола, метопролола и индапамида, безопасны и широко применяются в фармацевтической практике. Некоторые вспомогательные вещества в составе оригинального препарата индапамида «Арифона» могут оказывать влияние на поведение ЛС в ЖКТ: лаурилсуль-фат натрия повышает растворимость малорастворимых ЛВ, что обеспечивает более «быстрый» профиль высвобождения (данное явление особенно актуально для ЛС немедленного высвобождения); белый воск, применяемый для глянцевания, может слегка «замедлять» профиль высвобождения на ранних точках (до 15 мин), что обеспечивает более медленное высвобождение действующего вещества из ЛФ.

Оценка эквивалентности профилей растворения исследуемых лекарственных средств

Усредненные профили высвобождения метопролола, бисопролола и

индапамида из исследуемых лекарственных средств приведены на Рисунках 1-9.

Рисунок 1

Усредненные профили высвобождения метопролола из исследуемых лекарственных препаратов в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты (рН 1,2).

Значение фактора сходимости 71,87

.ч-

/

время(МИН)

Рисунок 2

Усредненные профили высвобождения метопролола из исследуемых лекарственных препаратов в ацетатном буферном растворе (рН 4,5). Профили эквивалентны без математической обработки

О!

п

Рисунок 3

Усредненные профили высвобождения метопролола из исследуемых лекарственных препаратов в фосфатном буферном растворе (рН 6,8). Профили эквивалентны без математической обработки

Усредненные профили высвобождения бисопролола из исследуемых лекарственных препаратов в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты (рН 1,2). Профили эквивалентны без математической обработки.

Г '

11 (

-в- кшвлЧ". И>

i I

' [>. У Щ 15 2»

время(мни)

Рисунок 5

Усредненные профили высвобождения бисопролола из исследуемых лекарственных препаратов в ацетатном буферном растворе (рН 4,5). Профили эквивалентны без математической обработки

ж.

Нш'а^ис««. Iй

-»- К-.-ш.-ч'-1"

А

и 15 :о

ррсмн (>шн)

Усредненные профили высвобождения бисопролола из исследуемых лекарственных препаратов в фосфатном буферном растворе (рН 6,8). Профили эквивалентны без математической обработки

Рисунок 7

Усредненные профили высвобождения индапамида из исследуемых лекарственных препаратов в ОД М растворе хлористоводородной кислоты (рН1,2). Значение фактора сходимости {2 = 67,15 (профили эквивалентны).

15 ^ Л» 55 4<> 45

пргмя (мпн)

Усредненные профили высвобождения индапамида из исследуемых лекарственных препаратов в ацетатном буферном растворе (рН 4,5). Профили эквивалентны без математической обработки.

/

—»-Пичиолши

'Ьпохтшк" м! - » ЛгИ'^н :.> мг

J

25 Д(>

Г. |.1М11 [ м;ш г

Рисунок 9

Усредненные профили высвобождения индапамида из исследуемых лекарственных препаратов в фосфатном буферном растворе (рН 6,8). Значение фактора сходимости {2 = 43,80 (профили неэквивалентны)

Оценка скорости растворения лекарственных форм, т.е величин высвобождения действующих веществ из исследуемых ЛС в течение 15 мин и 30 мин в каждой из сред растворения, приведены в Таблицах 7-9.

Таблица 7

Процент высвобождения бисопролола спустя 15 и 30 мин

Время, мин Препарат Значение рН Скорость растворения

1,2 4,5 6,8

15 Т 96,97 104,30 102,85 очень быстро растворимая ЛФ

R 108,35 104,43 98,29 очень быстро растворимая ЛФ

30 Т 107,86 105,46 107,09 ___

R 104,60 107,17 103,45 —

Таблица 8

Процент высвобождения метопролола спустя 15 и 30 мин

Время, мин Препарат Значение рН Скорость растворения

1,2 4,5 6,8

15 Т 62,63 89,65 91,86 —

R 65,41 88,93 85,52 ___

30 Т 97,17 104,94 102,70 быстрорастворимая ЛФ

R 103,51 102,10 100,24 быстрорастворимая ЛФ

Таблица 9

Процент высвобождения индапамида спустя 15 и 30 мин

Время, мни Препарат Значение рН Скорость растворения

1,2 4,5 6,8

15 Т 81,82 92,07 96,23 ___

R 73,69 88,95 76,48 ___

30 Т 104,91 105,31 107,57 быстрорастворимая ЛФ

R 98,66 95,08 92,10 быстрорастворимая ЛФ

Оценка эквивалентности in vitro согласно процедуре «биовейвер» исследуемых лекарственных средств

Установление эквивалентности in vitro согласно процедуре «биовейвер» исследуемых лекарственных средств проводилась путем комплексной научной оценки литературных и экспериментальных данных по фармацевтическим субстанциям и лекарственным средствам. В учет принимались: экспериментальные значения биофармацевтической растворимости, литературные данные по проницаемости и метаболизму, состав вспомогательных веществ,

скорость растворения, эквивалентность профилей растворения в 3-х средах (pH 1,2, 4,5, 6,8). Результаты оценки эквивалентности in vitro для препаратов бисопролола, метопролола и индапамида обобщены и приведены в Таблице 10.

Таблица 10

Результаты оценки эквивалентности in vitro по процедуре «биовейвер»

исследуемых воспроизведенных JIC

Лекарственное средство

Показатель Бисопролол Метопролол Индапаммд

Растворимость «высокая» «высокая» «высокая»

Проницаемость «высокая» «высокая» «высокая»

Метаболизм «интенсивный» «интенсивный» «интенсивный»

Класс БКС I I I

Класс BDDCS III I I

Скорость растворения очень быстрая быстрая быстрая

Эквивалентность профилей растворения при рН 1,2, 4,5 и 6,8 эквивалентны при рН 1,2,4,5 и 6,8 эквивалентны при рН 1,2, 4,5 и 6,8 эквивалентны при рН 1,2,4,5; не эквиваленты при рН 6,8

Состав ВВ (качественный состав) Сходный Сходный референтный препарат содержит лаурилсульфат натрия, белый воск

Присутствие ВВ, влияющих на абсорбцию JIB Нет Нет лаурилсульфат натрия, белый воск

Соответствие требованиям эквива-1 лентности in vitro соответствует соответствует не соответствует

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведен научно-обоснованный выбор объектов исследования - лекарственных средств немедленного высвобождения I класса БКС, включенных в Перечень ЖНВЛП 2012 г на основании литературных данных: препараты бисопролола, метопролола и индапамида.

2. Подобраны условия определения биофармацевтической растворимости субстанций метопролола, бисопролола и индапамида методом встряхивания в термостатируемой колбе.

3. Разработанная методика количественного определения бисопролола методом УФ-СФМ была валидирована по основным характеристикам. Методики количественного определения индапамида и метопролола, приведенные в литературе, были подвергнуты процедуре переноса (трансфера) и применены в лаборатории без процедуры валидации.

4. Определена биофармацевтическая растворимость исследуемых субстанций методом встряхивания в термостатируемой колбе. Растворимость бисопролола, метопролола и индапамида была классифицирована как «высокая» согласно БКС

5. На основании литературных и собственных экспериментальных данных бисопролол, метопролол и индапамид были отнесены к I классу согласно БКС и ВББСЗ (кроме бисопролола - III класс ВБОСБ), что делает их потенциальными кандидатами к регистрации по процедуре «биовейвер».

6. Подобраны оптимальные условия изучения сравнительной кинетики растворения согласно процедуре «биовейвер» исследуемых ЛС. Количественное определение изучаемых ЛС проводили методом УФ-спектрофотометрии при помощи методик, использовавщихся при определеии биофармацевтической растворимости.

7. Изучена сравнительная кинетика растворения объектов исследования и установлено, что профили раствоения препаратов метопролола и бисопролола эквивалентны в каждой из трех сред растворения, в то время как профили растворения ЛС индапамида неэквивалентны при рН 6,8.

8. Проведен анализ биофармацевтических свойств активных фармацевтических субстанций I класса БКС: метопролола, бисопролола и индапамида - и сделан вывод, что эквавлентность их воспроизведенных ЛС может быть установлена in vitro по процедуре «биовейвер». Сделано заключение об эквивалентности in vitro исследуемых ЛС бисопролола и метопролола, что совпало с результатами фармакокинетических исследований. Сделано заключение о неэквивалентности исследуемых ЛС индапамида, что характеризует процедуру «биовейвер» как более дискриминаторный тест, чем изучение биоэквивалентности, при котором данные ЛС индапамида были признаны эквивалентными.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шохин И.Е, Раменская Г.В., Василенко Г.Ф., Малашенко Е.А. Изучение сравнительной кинетики растворения пролонгированных препаратов диклофенака натрия // Материалы международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства». - Шымкент, 2009. - т.2. - С. 128-130.

2 Шохин И.Е, Раменская Г.В., Василенко Г.Ф., Малашенко Е.А. Оценка эффективности и безопасности генерических лекарственных средств глибенкламида в условиях т vitro II Материалы научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная медицина и биобезопасность». - Москва, 2009. - С. 244-245.

3 Шохин И.Е, Раменская Г.В., Василенко Г.Ф., Малашенко Е.А. Изучение биофармацевтических свойств и сравнительной кинетики растворения препаратов глибенкламида II Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - Москва, 2009. -№6.-С. 36-38.

4 Шохин И Е Раменская Г.В., Василенко Г.Ф., Малашенко Е.А. Изучение сравнительной кинетики растворения препаратов ибупрофена // Вестник Воронежского Государственного Университета. - Воронеж, 2009. - №2. - С. 198-202.

5 Шохин И.Е., Малашенко Е.А. Анализ возможности замены исследовании биоэквивалентности in vivo на изучение сравнительной кинетики растворения in vitro при оценке эффективности и безопасности препаратов амлодипина на основании современных международных требований // Тезисы итоговой научной студенческой конференции с международным участием «Татьянин день». - Москва, 2010. - С. 199-200.

6 Шохин И.Е, Раменская Г.В., Василенко Г.Ф., Малашенко Е.А. Анализ возможности замены исследований биоэквивалентности на изучение сравнительной кинетики растворения при оценке эффективности и безопасности препаратов ибупрофена // Материалы сборника тезисов докладов XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва, 2010.-С. 747.

7 Shohin I.E., Ramenskaya G.V., Vasilenko G.F., Malashenko E.A., Davydova K.S Sychev D A Kukes V G In vitro dissolution kinetics studies of amlodipme tablets marketed m Russia under biowaiver condition // Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology. - Copenhagen, Denmark, 2010. - Vol. 107 (suppl. 1).-No. si.-p. 579.

8 Shohin IE , Ramenskaya G.V., Vasilenko G.F., Malashenko E.A. In vitro dissolution kinetics studies of amlodipine tablets marketed in Russia under biowaiver conditions // Dissolution Technologies. -Hockessin, DE, USA, 2010. - Vol. 17. - No 3. - pp. 20-22.

9. И.Е. Шохин, Г.В. Раменская, Г.Ф. Василенко, Е.А. Малашенко. Сравнительная кинетика растворения и биофармацевтические свойства лекарственных средств амлодипина // Фармация. - М, 2010. -№. 5. - С. 13-15.

10. И.Е. Шохин, Е.А. Малашенко. Изучение сравнительной кинетики растворения воспроизведенных лекарственных средств глибенкламида//Биомедицина -Москва 2010 -№4.-С. 149-150.

11. И.Е. Шохин, Г.В. Раменская, Г.Ф. Василенко, Е.А. Малашенко. Оценка возможности замены исследований биоэквивалентности in vivo на изучение сравнительной кинетики растворения in vitro (процедура «биовейвер») при определении взаимозаменяемости лекарственных средств («дженериков») // Химико-фармацевтический журнал -Москва, 2011. - т. 45. - №2. - С. 64-66.