Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Заместительная и стимулирующая иммунокоррекция при ассоциативных инфекциях телят

На право к ру копке и

РГ6 од

2 5 |ЕК 2000 "

АФА НАС ЕМКО ВЯЧЕСЛАВ ИВАНОВИЧ

ЗАМЕСТИТЕЛЬНАЯ И СТИМУЛИРУЮЩАЯ ИММУНОКОРРЕКЦИЯ ПРИ АССОЦИАТИВНЫХ ИНФЕКЦИЯХ ТЕЛЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотолошя, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ОМСК - 2000

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и инфекционных болезней сельскохозяйственных животных ИВМ ОмГАУ

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

Красиков А.П.,

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор, заслуженный деятель науки РФ Смирнов П.Н., доктор ветеринарных наук, Бажин М.А..

Ведущее учреяедение: Новосибирский государственный

аграрный университет

Защита диссертации состоится "27" декабря 2000 г. в 13 ч. на заседании диссертационного совета Д. 120. 48. 01 в институте ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета по адресу: 644007 г. Омск, ул. Октябрьская, 92.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИВМ ОмГАУ.

Автореферат разослан "25" ноября 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных

наук, доцент

Жабин Н.П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время при большой концентрации животных на ограниченных территориях, применении новых технологий кормления и содержания в естественных условиях животноводческих ферм и комплексов стали преобладать полиинфекции.

Возбудители чаще действуют не в изолированном виде, а в ассоциациях с другими микроорганизмами.

А.П. Маркевич и В.М. Апатенко (1995) показали, что ассоциативные болезни обычно протекают с тяжелым исходом.

Ассоциации микроорганизмов особенно опасны для новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных, что связано с незавершенностью иммунологического созревания и пониженной интенсивностью иммунного ответа (Хорш Ф., 1981).

На смешанный характер протекания болезней молодняка сельскохозяйственных животных указывают многие исследователи (Ар-нольди К.В. с соавт., 1963; Лысенко И.П. с соавт., 1975; Гильяров М.С., 1978; Смирнов П.Н., 1979; Митрофанов П.М., 1979, 1980; Апатенко В.М., 1982; Wetzke J., et al., 1982; Никишова M.A. с соавт., 1983; Апатенко В.М., 1985; Колесниченко И.Д. с соавт., 1987; Марчук А.Т., 1988; Корж Б.А., Заонкевич Я.Д., 1988; Конопаткин A.A., 1988; Мищенко В .А. с соавт., 1988; Marschung F., 1988).

В связи с этим, весьма актуальным является поиск, разработка и внедрение новых универсальных способов лечения и профилактики болезней молодняка, в этиологии которых играют большую роль ассоциативные инфекции.

Исходя из этого, перед нами была поставлена задача по изысканию нового метода борьбы и профилактики болезней молодняка с учетом ассоциативных форм инфекций.

Тема диссертационной работы входит в государственную программу "Ассоциативные и инвазионные болезни животных (диагностика, профилактика и меры борьбы)" и имеет номер государственной регистрации 01.9.90000197.

Цель и задачи исследования. Целью исследований является разработка средства и метода иммунокоррекции при ассоциативных инфекциях телят.

Для решения этой проблемы поставлены следующие задачи:

1. Отработать технологию получения комплексного антимикробного препарата (КАП) и схему гипериммунизации быков-доноров для получения от них биологического сырья (крови).

2. Изучить профилактические и терапевтические свойства КАП в опыте на лабораторных животных.

3. Определить наиболее оптимальные и рациональные схемы применения КАП в опыте на телятах.

4. Изучить профилактическую и терапевтическую эффективность различных серий КАП в контролируемых производственных опытах.

5. Изучить изменения иммунологической реактивности телят на введение КАП.

6. Провести апробацию и внедрение схем применения КАП в производственных условиях базовых хозяйств.

Научная новизна

Предложено применение облученной УФ лучами консервированной крови от гипериммунизированных (пастереллезной, сальмонел-лезной, колибактериозной, энгерококковой вакцинами и антигенной суспензией из патологического материала от погибших телят) быков-доноров в сочетании с иммуномодуляторами (левамизол или поливи-нилпирролидон) и витаминами (В2, В6 , С) при ассоциативных инфекциях телят.

Изучена изменчивость иммунологической реактивности у новорожденных телят при введении комплексного антимикробного препарата в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ).

Теоретическая и практическая значимость работы

1. Отработана технология получения КАП.

2. Определены оптимальные схемы применения КАП, и изучена профилактическая и терапевтическая эффективность его различных серий в контролируемых производственных опытах на телятах.

3. Изучена изменчивость иммунологической реактивности новорожденных телят при применении КАП.

4. Предложены методические рекомендации по получению и применению комплексного антимикробного препарата (КАП) при ассоциативных инфекциях телят.

5. Результаты исследований дополняют полиэтиологическую концепцию инфекционной патологии, имеющей ассоциативный характер.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на юбилейной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и

аспирантов ИВМ ОмГАУ (Омск, 1998); межрегиональной научно-практической конференции «Роль инноваций в развитии регионов» в рамках промышленно-инновационного форума «Промтехэкспо-99» (Омск, 1999); учредительной конференции международной ассоциации паразитоценологов (Витебск, 1999); в передаче «Местные жители» ВГТРК 12 канал (Омск, 1999).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 5 научных работ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 15-ю рисунками, 17-ю таблицами. Список литературы включает 188 источника, в том числе 46 зарубежных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Основные этапы получения КАП.

2. Профилактические и терапевтические свойства КАП в опыте на лабораторных животных.

3. Разработка оптимальных и рациональных схем применения КАП.

4. Определение профилактической и терапевтической эффективности различных серий КАП.

5. Изменения иммунологической реактивности телят при введении КАП.

6. Применение КАП в производственных условиях базовых хозяйств, при ассоциативных инфекциях телят.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Исследования проводили в лаборатории микст-инфекций кафедры эпизоотологии ИВМ ОмГАУ и в лаборатории иммунологии детской клинической больницы № 2 г. Омска.

Строго контролируемые опыты на молодняке крупного рогатого скота выполняли в 2-х базовых хозяйствах - ТОО "Береговое" НижнеОмского района и колхозе им. Карла Маркса Омского района.

Материалом исследований служил комплексный антимикробный препарат (КАП), изготавливаемый на основе крови гипериммунизиро-ванных быков-доноров.

Объектами для экспериментальных исследований служили: молодняк крупного рогатого скота и морские свинки.

Индикацию и идентификацию возбудителей осуществляли микроскопическими, бактериологическими и серологическими методами.

Мазки для микроскопии окрашивали по Граму и Романовскому-

Гимзе.

Для бактериологических исследований использовали: МПА, МПБ, среды Эндо, Левина, Плоскирева, углеводные среды Гисса (агар с глюкозой, сахарозой, маннитом, мальтозой, лактозой).

Облучение крови УФ лучами проводили с помощью прибора "Спектр" при длине волны 270 нм.

Стерильность комплексного антимикробного препарата определяли по методике бактериологического контроля стерильности препаратов, ГОСТ 28085 - 89 от 1989 г., подготовленной государственным комитетом СССР по стандартам.

Безвредность препарата проверили в соответствии с техническими условиями 10-21 - 486 для противорожистой сыворотки от 1987 г.

Для постановки реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) в качестве антигенов использовали культуры полевых штаммов Pasteurella multocida, Salmonella dublin, Escherichia coli по отдельности, а также их ассоциацию.

Культуры были выделены от погибших телят подопытных хозяйств аспиранткой кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней животных ИВМ ОмГАУ Лобановой Н.В.

Реакцию бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) с цельной кровью выполнялась по методике К.Е. Балашова совместно с врачом лаборатории клинической иммунологии Ю.И. Пацулой.

Постановку опсоно-фагоцитарной реакции (ОФР) осуществляли по методике БелНИИЖ (Шшщенко С.И., 1985).

Расчет экономической эффективности применения КАП осуществляли в соответствии с методикой определения экономической эффективности использования в ветеринарии результатов НИР (отделение ветеринарии ВАСХНИЛ, 1987 г.).

Для расчета экономической эффективности пользовались статистическим сборником «Цены в Омской области» (Омск, 2000 г.).

Результаты исследований

Получение комплексного антимикробного препарата

КАП представляет собой облученную ультрафиолетовыми лучами консервированную кровь, полученную от быков-доноров, гиперим-мунизированных комплексом вакцин против возбудителей болезней молодняка и ассоциацией микроорганизмов, циркулирующих непосредственно в условиях конкретной фермы. Также препарат содержит водорастворимые витамины группы В, С и искусственный иммуностимуляторы левамизол или поливинилпирролидон (ПВП).

Технология получения КАП включает в себя 7 основных этапов:

1. Отбор и подготовка быков-доноров.

2. Грундиммунизация быков-доноров.

3. Гипериммунизация быков-доноров.

4. Подготовка к отбору крови.

5. Отбор крови.

6. Обработка полученного сырья.

7. Контроль препарата на стерильность и безвредность.

1. Отбор и подготовка быков-доноров.

В базовых хозяйствах отобрали по 15 голов клинически здоровых бычков 12 - 13 месячного возраста при средней массе 360 кг. После получения отрицательных результатов исследований на инфекционные болезни животные были пронумерованы и переведены в отдельные изолированные помещения. Для них, в соответствии с нормами кормления, был подобран сбалансированный по основным показателям кормовой рацион.

2. Грундиммунизация быков-доноров.

Для грундиммунизации животных, с учетом данных эпизоотической оценки хозяйств, применяли комплекс вакцин биофабричного производства против сальмонеллеза, колибактериоза, пастереллеза и энте-рококковой инфекции и инактивированную антигенную суспензию, изготавливаемую нами из патологического материала, от погибших телят. Грундиммунизацию быков-доноров проводили за два месяца до основных иммунизации.

3. Гипериммунизация быков-доноров.

Для гипериммунизации использовали комплекс антигенов как и при грундиммунизации. Гипериммунизацию Проводили по разработанной нами схеме, которая состояла из б - 7-ми циклов.

Цикл включал в себя иммунизацию быков-доноров и последующий отбор крови.

4. Подготовка к отбору крови.

Кровь от быков-доноров брали в бутыли с 10 % раствором цитрата натрия. Препарат расфасовывали во флаконы, в которые добавляли стабилизирующий раствор.

5. Отбор крови.

Быков-доноров за 12 часов до взятия крови прекращали кормить, потребление воды при этом не ограничивали. Отбор крови проводили на 10 сутки после иммунизации. От каждого быка-донора брали по 3 - 4 литра крови.

6. Обработка полученного сырья.

С помощью сифона и системы шлангов кровь пропускали через ультрафиолетовый облучатель «Спектр». Это переносной прибор с питанием от сети с напряжением 220 В. Источником ультрафиолетового излучения, с длиной волны 270 нм, являются две бактерицидные лампы ДРБ 8-1. Скорость протекания крови 0,5 л за 5 минут. Во флаконы добавляли иммуностимулятор левамизол или поливинилпирролидон и раствор витаминов С и группы В.

7. Контроль на безвредность и стерильность.

Стерильность КАП определяли путем посевов проб препарата на

МПА и МПБ. Посевы выдерживали в термостате, при температуре 37 ° С в течение 10 суток.

Безвредность препарата испытывали на белых мышах массой 18 -20 г, которым подкожно вводили препарат в дозе 0,5 мл, и на морских свинках массой 250 - 300 г, которым подкожно вводили по 5 мл препарата. За животными наблюдали 10 суток, следя за местными и общими изменениями.

Изучение динамики иммунного ответа в РНИФ у быков-доноров после гипериммунизации их ассоциацией антигенов

Нами были проведены исследования сборной крови от быков-доноров, гипериммунизированных ассоциацией антигенов (вакцины против пастереллеза, сальмонеллеза, колибактериоза, энтерококковой инфекции и антигенная суспензия из патологического материала от погибших телят).

Для постановки РНИФ использовали инактивированные антигены приготовленные из культур Р. multocida, S. dublin, Е. coli выделенных от погибших телят, и ассоциацию данных возбудителей.

Титры антител определяли после 1, 2, 3, 4, 5-й гипериммунизации с интервалами между ними 40 дней.

Пробы крови брали до гипериммунизаций и после их на 5, 10, 15, 20-е дни.

В результате исследований нами установлено, что многократные гипериммунизации, проводимые через 2 месяца после грундиммуниза-ции, приводят к повышению уровня специфических антител в 16-800 раз, достигая максимума после 3-й и 4-й гипериммунизаций.

При этом наиболее высокий уровень антител приходится на 1015 сутки после иммунизации, поэтому данные сроки являются наиболее оптимальными для отбора крови.

Изучение профилактических и терапевтических свойств КАП в экспериментальных условиях на лабораторных животных

Для моделирования смешанной инфекции использовали полевые штаммы микробов, выделенные из хозяйств (Е. coli, S. dublin, Р. multocida). Для заражения лабораторных животных применяли ассоциацию данных микроорганизмов.

Для этого из 2-суточных культур выделенных микроорганизмов готовили 1 млрд. микробные взвеси, которые смешивали в одинаковых пропорциях. Заражение белых мышей данной микробной взвесью вызывало гибель 80 % животных.

Для проведения опыта отобрали 16 морских свинок, из которых сформировали 4 группы:

1- для изучения профилактических свойств КАП (вводили препарат в дозе 0,5 мл, а через 3 дня заражали ассоциацией микроорганизмов);

2 - для изучения терапевтических свойств КАП (после заражения ассоциацией микроорганизмов дважды с интервалом 24 ч вводили препарат в дозе 1 мл.);

3 - контроль заражения (заражали ассоциацией микроорганизмов);

4 - плацебо-группа (вводили физиологический раствор).

Через 2 дня после заражения у морских свинок 2-й и 3-й группы отмечали ухуждщение аппетит, угнетение, понос (кал жидкий, серого цвета).

В 1 группе введение КАП не вызывало местных и общих отрицательных изменений у животных. После заражения, у одной морской свинки на 3 день отмечали нарушения системы пищеварения (понос), с последующим улучшением общего состояния к 5 дню после заражения.

Во 2-й группе после введения КАП зарегистрировали улучшение общего состояния и последующее выздоровление у 3-х животных, 1 свинка погибла на 5 день.

В контрольной группе на 6-8 день после заражения погибли все животные.

У павших животных при вскрытии обнаружен катарально-геморрагический энтерит, увеличение селезенки и печени.

При проведении бактериологических исследований патологического материала от павших и убитых с диагностической целью морских свинок 2-й и 3-й группы выделяли Е. coli в ассоциации S. dublin.

В опыте установлено, что КАП обладает ярко выраженными профилактическими (100 %) и хорошими терапевтическими (75 %) свойствами (табл. 1).

Таблица 1

Изучение профилактических и терапевтических свойств КАП

на морских свинках.

о Выделены

л Кол-во (гол.) о Выздоровев (гол.) о культуры

С >> П. % Заболе; (гол.) Погиб/ (гол.) Е. coli S. dublin Р. multocida Эффективность (%)

1 4 1 - - - - - 100

2 4 4 о э 1 + + - 75

3 4 3 - 3 + + - -

4 4 - - - - - - -

Определение оптимальных и рациональных профилактических и терапевтических схем применения КАП

Для определения оптимальных доз и кратности введения препаратов нами были разработаны 8 схем применения препарата с лечебной и 5 схем с профилактической целью. Исходные дозы препарата взяты с учетом известных дозировок применения глюкозо-цитратной крови.

Для проведения опыта по определению оптимальной терапевтической дозы и схемы применения КАП, по принципу аналогов было сформировано 8 групп больных телят по 5 голов в каждой.

У отобранных для опыта телят отмечалось угнетение, плохой аппетит, расстройство системы пищеварения (понос), у некоторых были признаки нарушения дыхательной системы (хрипы, кашель, частое дыхание, повышение температуры тела до 41,5 ° С).После введения КАП у выздоровевших телят улучшался аппетит, исчезали признаки нарушений дыхательной и пищеварительной систем.

В опыте установлено, что препарат при различных схемах применения обеспечивал терапевтическую эффективность от 60 % до 100 %. При этом, оптимальными схемами применения КАП при 100 % эффективности были 4, 6 и 7 (внутримышечное и подкожное введение в дозе 3 мл/кг трижды с интервалом 24 ч, внутримышечное и подкожное введение в дозе 4 мл/кг трижды с интервалом 24 ч, внутрибрюшин-ное введение в дозе 500 мл дважды с интервалом 36 ч, соответственно) (табл. 2).

Таблица 2

Терапевтическая эффективность КАП при различных дозировках,

способах и кратности введения препарата

№ п.п. Кол-во голов Способ введения препарата Доза Кратность введения Выздоровело (гол) Погибло (гол) Эффективность (%)

1 5 в/м 2 мл/кг дважды с интервалом 48 ч 3 2 60

2 5 в/м 2 мл/кг дважды с интервалом 24 ч 3 2 60

3 5 в/м + п/к 3 мл/кг дважды с интервалом 24 ч 4 1 80

4 5 в/м + п/к 3 мл/кг трижды с интервалом 24 ч 5 - 100

5 5 в/м + п/к 4 мл/кг дважды с интервалом 24 ч 4 1 80

6 5 в/м + п/к 4 мл/кг трижды с интервалом 24 ч 5 - 100

7 5 внутри-брюшино 500 мл дважды с интервалом 36 ч 5 - 100

8 5 внутрь 500 мл дважды с интервалом 36 ч 3 2 60

Учитывая одинаковую эффективность КАП в дозах 3 и 4 мл/кг и определенную трудоемкость выполнения внутрибрюшинных инъекций, считаем, что наиболее рациональной схемой применения КАП с

терапевтической целью является трехкратное введение его в дозе 3 мл/кг массы животного подкожно и внутримышечно.

Для определения оптимальной профилактической дозы и схемы применения КАП было сформировано 5 групп из новорожденных телят по 20 голов в каждой.

В данном опыте было установлено, что профилактическая эффективность препарата, в зависимости от схем применения, составляла 75 -95 %, и наиболее оптимальной и рациональной схемой применения КАП с профилактической целью является трехкратное подкожное введение с интервалом 10 дней, в дозе 2 мл/кг массы животного (табл. 3).

Таблица 3

Профилактическая эффективность КАП при различных дозах ___и кратности введения препаратов _

1 № группы Кол-во гол. Способ введения Доза (мл/кг) Кратность введения Заболело | (гол.) Эффективность. (%)

1 20 п/к 2 однократное введение 5 75

2 20 п/к 2 дважды с интервалом 10 дней 4 80

3 20 п/к • 2 трижды с интервалом 10 дней 1 95

4 20 п/к 3 дважды с интервалом 10 дней 2 90

5 20 п/к 3 трижды с интервалом 10 дней 1 95

Изучение профилактической и терапевтической эффективности различных серий КАП в опытах на телятах

На базе хозяйства ТОО "Береговое" нами были проведены испытания 5 различных серий КАП.

Изучение оптимального состава комплексного антимикробного препарата начали с определения профилактической и терапевтической эффективности консервированной облученной УФЛ крови гиперимму-низированных быков-доноров (КАП-1).

В I опыте на телятах установлена недостаточно высокая профилактическая (65 %) и терапевтическая (68 %) эффективность КАП-1.

Для увеличения активности КАП, нами в его состав были включены иммуномодуляторы левамизол и поливинлпирролидон (ПВП).

Во II опыФе провели сравнительное изучение профилактических свойств КАП различных серий:

КАП-2 - кровь быков-доноров, облученная УФЛ + левамизол в дозе 5 мг/кг массы животного;

КАП-3 - кровь быков-доноров, облученная УФЛ + поливинилпир-ролидон в дозе 75 мг/кг массы животного;

КАП-4 - кровь не иммунизированных быков, облученная УФЛ + левамизол в дозе 5 мг/кг массы животного.

Для проведения опыта было отобрано 9 групп по 10 голов в каждой и 3 группы по 5 голов (интактные группы) телят в возрасте 2-10 дней. Препараты вводили подкожно в область средней трети шеи и коленной складки. В результате проведенных исследований установлено, что наибольшая профилактическая эффективность (90-100 %) была у КАП-2 (табл. 4).

Таблица 4

Профилактическая эффективность КАП различных серий

№ п.п. Характеристика групп Кол-во. (гол) Доза КАП Заболело (гол.) Погибло (гол.) Эффективность (%)

(однократное введение)

1 КАП-2 10 2 мл/кг 1 1 90

2 КАП-3 10 2 мл/кг 2 2 80

3 КАП-4 10 2 мл/кг в 5 50

4 Контроль 5 - 4 3 -

(двукратное введение с интервалом 7-10 дней)

5 КАП-2 10 2 мл/кг 0 0 100

6 КАП-3 10 2 мл/кг 1 1 90

7 КАП-4 10 2 мл/кг 5 4 60

8 Контроль 5 - 3 3 -

(однократное введение)

9 КАП-2 10 3 мл/кг 0 0 100

10 КАП-3 10 3 мл/кг 2 2 80

И КАП-4 10 3 мл/кг 6 5 50

12 Контроль 5 - 5 3 -

В III опыте были изучены терапевтические свойства КАП трех серий: КАП-2, КАП-3 и новой серии КАП-5 в сравнении с антибактериальным препаратом - гентамицином.

КАП-5 - кровь быков-доноров, облученная УФЛ + левамизол в дозе - 5 мг/кг массы животного + рибофлавин мононуклеотид в дозе 0,5 мг/кг + пиридоксин гидрохлорид в дозе 0,4 мг/кг + аскорбиновая кислота в дозе 3 мг/кг.

Для проведения опыта по принципу аналогов было подобрано 4 группы по 10 голов и одна 5 голов больных телят 2-30-дневного возраста с клиническими признаками нарушений функций систем пищеварения и дыхания.

В опыте установлено, что наибольшая терапевтическая эффективность была у КАП-5 (100%) и КАП-3 (90%). Эффективность лечения одним антибиотиком составила 60 % (табл. 5).

Таблица 5

Терапевтическая эффективность препаратов КАП ._

№ п.п. Характеристика групп Кол-во (гол.) Переболело в легкой форме (гол.) Переболело в тяжелой форме (гол.) Погибло (гол.) Эффективность (%)

1 КАП-2 10 6 2 2 80

2 КАП-3 10 8 1 1 90

3 КАП-5 10 9 1 0 100

4 Гентамицин 10 2 4 4 60

5 Контроль 5 - - 5 -

Изучение иммунологической реактивности телят, при введении КАП, в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) и опсоно-фагоцитарной функции клеток в ОФР

Для проведения опыта на базе колхоза им. Карла Маркса были отобраны 15 голов клинически здоровых телят 3-5-дневного возраста. Из них были сформированы опытные группы по 5 голов в каждой.

Первой группе телят КАП вводили подкожно, дважды с интервалом 10 дней в дозе 2 мл/кг.

Второй группе вводили консервированную облученную УФЛ кровь, полученную от здорового не иммунизированного быка. Кровь вводили подкожно, дважды с интервалом 10 дней в дозе 2 мл/кг.

Третья группа интактные животные, служили контролем.

Исследования проводили: до введения, на 3, 7, 10 дни после введения и на 5 день после повторного введения препарата.

У телят 1 -й и 2-й группы к 3 дню после введения препаратов наблюдали снижение общего количества лейкоцитов с 13,1 ± 0,9 до 9,3 ± 1,0 Г/л и с 12,9 ± 1,1 до 9,7 ± 1,2 Г/л (Р < 0,05), что можно объяснить реакцией на введение чужеродного белка (белки крови), в результате которой часть лейкоцитов участвовали в "захвате" и нейтрализации введенных антигенов (рис. 1).

В дальнейшем, к 10 дню в 1-й группе отмечали незначительное увеличение числа лейкоцитов до 9,8 ± 0,9 Г/л.

После повторного введения препаратов в 1-й и 2-й группах произошел подъем количества лейкоцитов (в 1-й е до 12,7 ±1,1 Г/л и во 2-й до 10,0 ±1,2 Г/л), что является ответной реакцией организма на повторное введение антигена. При этом, в группе, которой вводили КАП, подъем был более выражен (разница достоверна).

В контрольной группе на протяжении всего периода исследований наблюдали постепенное снижение лейкоцитов с 12,6 ± 1,1 Г/л до 9,7 ± 0,4 Г/л (Р < 0,05).

13

12

10

До введения

На 3 день

после введения

На 7 день

после введения

На Юдень

после введения

На 5 день

после повторного введения

-Группа 1 -Группа 2 -Группа 3

Сроки исследований

Рисунок 1. Динамика показателей количества лейкоцитов у телят различных групп

Аналогичная картина наблюдалась с абсолютным показателем лимфоцитов. После введения препаратов происходило снижение абсолютного- количества лимфоцитов в 1-й и 2-й группах с 7,6 + 0,8 Г/л до 4,7 ± 0,8 Г/л и с 7,5 ± 0,7 Г/л до 4,7 ± 0,4 Г/л (Р < 0,05) соответственно.

И в дальнейшем, в 1 -й и 2-й группах также отмечали подъем абсолютного числа лимфоцитов на 5 день после повторного введения (Р < 0,05). Причем в 1 группе увеличение количества лимфоцитов было более выраженным, чем во 2 группе (рис. 2).

-Группа 1 -Группа 2 -Группа 3

До введения На 3 день На 7 день На 10 день после после после

введения введения введения

На 5 день

после повторного введения

Сроки исследований

Рисунок 2. Динамика показателей абсолютного количества лимфоцитов у

телят различных групп

В то же время, наряду с уменьшением абсолютного числа лимфоцитов в 1-й и 2-й группах, нами установлено обратнопропорциональное увеличение показателей их пролиферативной активности в РБТЛ с ФГА на 3 день после введения препаратов. В 1-й группе показатель пролиферативной активности лимфоцитов увеличился с 3842 ± 198 до 10448 ± 68 имп./мин., а во 2-й группе с 3750 ± 64 до 9650 ± 100 имп./мин. (Р < 0,05).

В последующем, на 5 день после повторного введения препаратов, отмечали достоверное снижение пролиферативной активности лимфоцитов в 1-й и 2-й группах (рис. 3).

В контрольной группе пролиферативная активность увеличилась с 3922 ± 151 до 15414 ± 209 имп./мин. (Р < 0,05).

В показателях опсоно-фагоцитарной реакции ФП, ФА, ФИ на 3 день после введения препаратов в группах 1-й и 2-й происходил подъем, который более выражен в 1 группе (ФП увеличился с 4,1 ± 0,4 до 12,4 ±1,8 ФА с 13,6 ± 0,8 до 28,8 ± 2,6 ФИ с 2,7 ± 0,1 до 12,4 ± 1,5 (Р < 0,05), что можно объяснить увеличением активности фагоцитов с введением специфических антител, а также образованием комплексов антиген-антитело при наличии эндогенной инфекции у телят или комплекса антиген-антитело адсорбированного на эритроцитах доноров.

Кроме того, повышение фагоцитарной активности может быть обусловлено реинфузией облученной УФЛ крови, что согласуется с данными С. МЛсу (1942), Я.С. 01пеу (1946), 8. \Visner (1974), а также наличием в составе КАП иммуностимулятора и витаминов.

В дальнейшем в 1-й и 2-й группах наблюдали достоверное увеличение показателей ОФР на 5 день после повторного введения препаратов, причем более выраженное в группе, которой вводили КАП.

В контрольной группе отмечали постепенное увеличение показателей ОФР, с достижением максимальных показателей в последнем исследовании.

18000 16000 14000 12000 10000 Э ООО 6000 4000 2000 0

-Группа 1 -Группа 2 -Группа 3

До введения На 3 день На 7 день На 10 день На 5 день Сроки исследований после после после после

введения введения введения повторного

введения

Рисунок 3. Динамика показателей РБТЛ с ФГА у телят различных групп

Применение комплексного антимикробного препарата в производственных условиях

За период нашей работы КАП прошел испытания и был внедрен в производственный цикл двух хозяйств Омской области: ТОО "Береговое" Нижне-Омского района и колхоз им. Карла Маркса Омского района.

За это время препарат был апробирован на более 5000 голов молодняка крупного рогатого скота.

Применение КАП в ТОО "Береговое", в первый же 1996 г., позволило снизить гтбель телят на 142 головы или на 12,4 % (по сравнению с исходным 1995 г).

Во второй год использования препарата, после отработки техники гипериммунизации быков-доноров и технологии получения КАП, было сохранено уже 283 головы, а гибель телят по сравнению с исходным контрольным годом была сокращена на 21,2 % .

В 1998 г. после улучшения и стабилизации обстановки по сохранности телят администрация отказалась от применения КАП, в результате чего вновь увеличился падеж телят. После возврата к применению препарата обстановка вновь нормализовалась, но момент был упущен, в результате удалось сохранить 163 головы, что на 100 животных меньше, чем в предыдущем году, однако на 13,8 % больше, чем в исходном 1995 году.

В 1999 году гибель телят составила 12,4 % от числа народившихся, что на 25,3 % меньше, чем в контрольном 1995 году.

Применение КАП в ТОО "Береговое" с 1996 г. по 1999 г. позволило достоверно повысить сохранность телят с 62,3 % в 1995 году до 87,6% в 1999 году (рис. 4).

1995 г 1996 г . 1997 г 1998 г 1999 г

Рисунок 4. Показатели сохранности телят в ТОО «Береговое» до применения КАП (1995 г.) и после его применения (1996-1999 гг.)

В колхозе им. Карла Маркса КАП применялся в 1998 г., в течение 5 месяцев. За данный период погибло 56 голов, что составило 6,9 % от числа новорожденных. В 1997 г., когда КАП не применялся, на данный период пало 114 голов, что составляло 11,6 %. Профилактическая эффективность КАП составила 93,1.

С января по май 1999 года в колхозе имени Карла Маркса в блоке № 5 фермы № 1 КАП применяли с профилактической и терапевтической целью на молодняке крупного рогатого скота. Контролем служили телята блока № 3, которым КАП не вводили.

В результате применения КАП из 312 телят блока № 5 погибло от болезней пищеварительной и дыхательной системы 22 головы, что составило 7 %. В блоке № 3 из 268 телят погибло 62 головы, что составило 23 %. Эффективность применения КАП в блоке № 5 составила 93 %.

Применение КАП в ТОО «Береговое» в период с 1996 г по 1999 г. позволило хозяйству ежегодно в 2-4 раза, по сравнению с исходным 1995 г., сокращать ущерб от гибели молодняка крупного рогатого скота, а общая сумма предотвращенного ущерба равна 59087,31 руб. (в сопоставимых ценах 1994 г.).

Предотвращенный экономический ущерб за 5 месяцев применения КАП в колхозе им. Карла Маркса составил 11616,24 руб., а экономический эффект на 1 руб. затрат на его применение равен 4,47 руб.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны схема гипериммунизации быков-доноров и технология изготовления из их крови комплексного антимикробного препарата (КАП) экологического плана, обладающего выраженными иммунокор-ректирующими и стимулирующими свойствами при ассоциативных инфекциях животных.

2. В экспериментальных условиях на морских свинках смоделирована ассоциативная инфекция (колибактериоз + сальмонеллез + пастерел-лез + стрептококкоз) и изучена профилактическая и терапевтическая эффективность КАП, которая составила 100 и 75 % соответственно.

3. Рациональной схемой применения КАП с терапевтической целью является трехкратное введение его с интервалом 24 ч в дозе 3 мл/кг массы животного подкожно и внутримышечно, а с профилактической целью - трехкратное подкожное введение с интервалом 10 дней в дозе 2 мл/кг массы животного.

4. Введение иммуномодуляторов (левамизол в дозе 5 мг/кг и поли-винилпирролидон в дозе 75 мг/кг) в состав КАП увеличивает эффективность профилактического применения препарата на 25-35 %, а терапевтического на 12-32%.

5. После введения телятам КАП происходит снижение общего количества лейкоцитов и лимфоцитов, и подъем после повторного введения препарата. Наряду с уменьшением числа лейкоцитов и лимфоцитов установлено обратнопропорциональное увеличение показателей их пролифе-ративной активности в РБТЛ с ФГА.

7. Использование КАП в ТОО "Береговое" в 1996-1999 годах способствовало повышению сохранности телят на 13,8 - 25,3 %, а в колхозе им. Карла Маркса на 4,7 % за 5 месяцев применения. При этом эффективность препарата в ТОО «Береговое» составляла 76,1 - 87,6 %, а в колхозе им. Карла Маркса 93 - 93,1 %.

8. Применение КАП в ТОО «Береговое» в период с 1996 по 1999 год позволило хозяйству ежегодно в 2-4 раза сокращать ущерб от гибели молодняка крупного рогатого скота, по сравнению с исходным 1995 годом.

Экономический эффект в колхозе им. Карла Маркса при применении препарата составил 4,47 руб. на 1 руб. затрат.

Практические предложения

На основании результатов проведенных исследований разработаны методические рекомендации «Получение и применение комплексного антимикробного препарата при ассоциативных инфекциях телят», утвержденные на НТС Главного управления сельского хозяйства Омской области (протокол № 3 от 21 марта 2000 г.).

Список опубликованных работ

1. Афанасенко В.И. Меры борьбы и профилактики при ассоциативных инфекциях животных. // Актуальные проблемы инфекционных, паразитарных и незаразных болезней домашних животных и меры борьбы с ними. // Материалы юбилейной научно-производственной конференции сотрудников и аспирантов ИВМ ОмГАУ. Омск 1998 г. С. 24-26.

2. Афанасенко В.И., Красиков А.П. Изучение профилактической и терапевтической эффективности различных серий комплексного антимикробного препарата (КАП) при ассоциативных инфекциях телят в производственных условиях. // Материалы учредительной конференции международной ассоциации паразитоценологов. - Витебск, 1999. - С. 37-38.

3. Афанасенко В.И., Красиков А.П., Иванова О.Н., Лобанова Н.В., Якушкин A.C. Профилактика и меры борьбы с ассоциативными болезнями животных// Сб. тез. межрегиональной научно-практической конференции «Роль инноваций в развитии регионов» в рамках промыш-ленно-инновационного форума «Промтехэкспо-99». - Омск, 1999 г. - С. 43-45.

4. Афанасенко В.И., Красиков А.П., Скакун A.A. Ассоциативные инфекции телят // Материалы учебно-производственной конференции ИВМ ОмГАУ - Омск, 1999,- С. 68-69.

5. Афанасенко В.И. Профилактическая и терапевтическая эффективность комплексного антимикробного препарата (КАП) при ассоциативных инфекциях телят в производственных условиях // Информационный листок ЦНТИ № 35-99 - Омск, 1999.

Актуальность темы. Интенсификация животноводческой отрасли позволила ей выйти на новый уровень развития - встать на промышленную основу. Современные животноводческие хозяйства имеют четко отработанный производственный цикл, позволяющий получать максимальное количество продукции при минимальных затратах.

Перед животноводством поставлены большие и ответственные задачи, для решения которых требуется преодолеть имеющиеся недостатки и в полной мере использовать все резервы и возможности для развития этой отрасли сельского хозяйства. При специализации отрасли, и концентрации животных на ограниченных площадях требуется создание оптимальных зоогигиенических и ветеринарно-санитарных условий кормления и содержания животных, а также совершенствование методов борьбы и профилактики заболеваний.

Многие исследователи в последнее время стали пересматривать существующую моноэтиологическую концепцию инфекционной и инвазионной патологии "один возбудитель - одна болезнь -одно лекарство", так как в естественных условиях в организме больного обнаруживаются не чистая культура возбудителя, а в сочетании с разными видами симбионтов, в том числе условно-патогенными и сапрофитами (Пауликас В.Ю., 1990).

В естественных условиях преобладают полиинфекции, возбудители которых вызывают сложные, не полностью познанные патологические процессы. Эти болезни приобрели особую значимость в условиях современного интенсивного животноводства, при больших концентрациях животных одной популяции на ограниченных территориях ферм и комплексов. В результате создаются условия для многократных пассажей возбудителей и усиления их патогенности.

Установлено, что смешанные и ассоциативные болезни представляют собой результат воздействия на организм животного нескольких вирулентных или условно-патогенных возбудителей, которые могут формировать более или менее стойкие сочетания, или ассоциации. Развитие болезней разной этиологии зависит, прежде всего, от видового состава паразитоценоза. Основные возбудители в организме хозяина вступают с второстепенными сочленами паразитоценоза в сложные взаимодействия, от которых в дальнейшем зависит их существование.

При смешанных заразных болезнях клинические признаки зависят от многих факторов. При этом физиологическое состояние организма хозяина, особенности его защитных функций играют существенную роль. На течение болезни влияет не столько количественный, сколько качественный состав паразитов. Большое значение имеет взаимоотношение сочленов паразитоценоза: в случае синергизма болезнь протекает тяжело, при антагонизме или интерференции - легко или совсем не проявляется.

Ассоциации микроорганизмов особенно опасны для новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных, что связано с незавершенностью иммунологического созревания и пониженной интенсивностью иммунного ответа (Хорш Ф., 1981).

В связи с этим весьма актуальным является поиск, разработка и внедрение новых универсальных способов лечения и профилактики болезней молодняка, в этиологии которых играют большую роль ассоциативные инфекции.

Тема диссертационной работы входит в государственную программу "Ассоциативные и инвазионные болезни животных (диагностика, профилактика и меры борьбы)" и имеет номер государственной регистрации 01.9.90000197.

Цель и задачи исследования. Целью исследований является разработка средства и метода иммунокоррекции при ассоциативных инфекциях телят.

Для решения этой проблемы поставлены следующие задачи:

1. Отработать технологию получения комплексного антимикробного препарата (КАП) и схему гипериммунизации быков-доноров для получения от них биологического сырья (крови).

2. Изучить профилактические и терапевтические свойства КАП в опыте на лабораторных животных.

3. Определить наиболее оптимальные и рациональные схемы применения КАП в опыте на телятах.

4. Изучить профилактическую и терапевтическую эффективность различных серий КАП в контролируемых производственных опытах.

5. Изучить изменения иммунологической реактивности телят на введение КАП.

6. Провести апробацию и внедрение схем применения КАП в производственных условиях базовых хозяйств.

Научная новизна. Предложено применение облученной УФ лучами консервированной крови от гипериммунизированных (пас-тереллезной, сальмонеллезной, колибактериозной, энтерококковой вакцинами и антигенной суспензией из патологического материала от погибших телят) быков-доноров в сочетании с иммуномо-дуляторами (левамизол или поливинилпирролидон) и витаминами (В2 , Вб , С) при ассоциативных инфекциях телят.

Изучена изменчивость иммунологической реактивности у новорожденных телят при введении комплексного антимикробного препарата в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ).

Теоретическая и практическая значимость работы

1. Отработана технология получения КАП.

2. Определены оптимальные схемы применения КАП, и изучена профилактическая и терапевтическая эффективность его различных серий в контролируемых производственных опытах на телятах.

3. Изучена изменчивость иммунологической реактивности новорожденных телят при применении КАП.

4. Предложены методические рекомендации по получению и применению комплексного антимикробного препарата (КАП) при ассоциативных инфекциях телят.

5. Результаты исследований дополняют полиэтиологическую концепцию инфекционной патологии, имеющей ассоциативный характер.

Основные вопросы выносящиеся на защиту. Выше перечисленные вопросы в качестве основных положений диссертации и выносятся на защиту

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на юбилейной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ Ом-ГАУ (Омск, 1998); межрегиональной научно-практической конференции «Роль инноваций в развитии регионов» в рамках промышленно-инновационного форума «Промтехэкспо-99» (Омск, 1999); учредительной конференции международной ассоциации паразитоценологов (Витебск, 1999); в передаче «Местные жители» ВГТРК 12 канал (Омск, 1999).

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ВЫВОДЫ.

1. Разработаны схема гипериммунизации быков-доноров и технология изготовления из их крови комплексного антимикробного препарата (КАП) экологического плана, обладающего выраженными иммунокорректирующими и стимулирующими свойствами при ассоциативных инфекциях животных.

2. В экспериментальных условиях на морских свинках смоделирована ассоциативная инфекция (колибактериоз + сальмонеллез + пастереллез + стрептококкоз) и изучена профилактическая и терапевтическая эффективность КАП, которая составила 100 и 75 % соответственно.

3. Рациональной схемой применения КАП с терапевтической целью является трехкратное введение его с интервалом 24 ч в дозе 3 мл/кг массы животного подкожно и внутримышечно, а с профилактической целью - трехкратное подкожное введение с интервалом 10 дней в дозе 2 мл/кг массы животного.

4. Введение иммуномодуляторов (левамизола в дозе 5 мг/кг и поливинилпирролидона в дозе 75 мг/кг) в состав КАП увеличивает эффективность профилактического применения препарата на 25-35 %, а терапевтического на 12-32%. •

5. После введения телятам КАП происходит снижение общего количества лейкоцитов и лимфоцитов, и подъем после повторного введения препарата. Наряду с уменьшением числа лейкоцитов и лимфоцитов установлено обратнопропорциональное увеличение показателей их пролиферативной активности в РБТЛ с ФГА.

7. Использование КАП в ТОО "Береговое" в 1996-1999 годах способствовало повышению сохранности телят на 13,8 - 25,3 %, а в колхозе им. Карла Маркса на 4,7 % за 5 месяцев применения. При этом эффективность препарата в ТОО «Береговое» составляла 76,1 -87,6 %, а в колхозе им. Карла Маркса 90 - 93,1 %.

8. Применение КАП в ТОО «Береговое» в период с 1996 года по 1999 год позволило хозяйству ежегодно в 2-4 раза сокращать ущерб от гибели молодняка крупного рогатого скота, по сравнению с исходным 1995 годом.

Экономический эффект в колхозе им. Карла Маркса при применении препарата составил 4,47 руб. на 1 руб. затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

На основании проведенных исследований и обобщения результатов внедрения комплексного антимикробного препарата в хозяйствах Омской области разработаны методические рекомендации «Получение и применение комплексного антимикробного препарата (КАП) при ассоциативных инфекциях телят».

Рекомендации рассмотрены и одобрены на заседании ученого совета ИВМ ОмГАУ от 1.03.2000 г., протокол № 5.

Утверждены на заседании секции животноводства Центра научного обеспечения АПК Главного управления сельского хозяйства и продовольствия администрации Омской области от 21.03.2000 г., протокол № 3.