Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Влияние нилверма и фенасала на некоторые показатели иммунитета кур и их комбинированное применение в птицеводстве

.главное: управление ветеринарии мшштерства сельского шше1ва рос-сжской федераций

- санкт-петербургски1! вегершарный шстйгут ;

-На.правах рукописи

кулик Олег Максимович

УДС 619:616.995.1:636.52/.58-065

влияние нияверма и фенасш на некоторый----_

показатели шунигега кур и их комбшированйое" применение в сгщееодотбе

___^ Автор афера®

диссвртвция~на^ со ксгсанно учено 0 степе: я

кандидата ветеринарных нау«-

Специальность 16.00.04 -"Бвтеринарная фар<акологм . о токсикологией 1 —„

Санкт-Петербург 1993-.....

Работа выполнена во Всероссийском Государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и серти- . фикации ветеринарных препаратов.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ - доктор ветеринарных наук,

профессор ТИМОФЕЕВ Б.А^

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ - доктор медицинских наук

ЗАЦЕПШ ЭЛ., доктор ветеринарных наук ПРЩгЕШО н.д.

ВЕЮЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ - Московская ветеринарная академия.

Защи-т диссертации состоится " года

" в_часов на заседании Специализированного совета

Д.120.20.02 в Санкт-Петер5ургском ветеринарном институте /196006, Санкт-Петербург, Московский пр., 112/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского ¡..теринарного институту.

Ученый секретарь Специализированного совета ШУСТРОва к.в.

СБС/Л ХАРАКТЕРЮТЖА РАБОТЫ

Актуальность темн. Современное лтицегодстЕО, развивающееся на основе интенсивней технология, обуславливает сшьллие общей резистентности организма пч.лг . На ятом фоне особенно ярко отражено увеличение заболеваний, вызванных стрессовыми факторами, и гельминтами. Несмотря на различия в зависимости от методов одержания птица, почти во все;, птицеводческих хозяйствах регистрируют аскаридиоз и гетеракидоз. 3 настоящее воемя разработаны различные схемы борьбы с х«¡льминтозями кур, которые практически предусматриваю™ применение а тгельминтиков.

При дегельминтизации кур наиболее часто используют фено-т-ззин, фенасал, пиперазин, нилверм и другие препараты, что сбеспе«явает возрастание яйценоскости и снижение затрат корма до 1С %. При смешанных инвазиях необходимо птицу обр. батывать яеодиократио разнггга препаратами, что требует больших затрат ■рабочего зремени» а также значительный перерасход дефицитных 2 нале время алтгель«ичтиков. Снять шзеупомякутие проблемы де-гелькк'.тйзааая э птицеводстве бкло бы «озкознш при одновременном использовании комбинации нсепепагсг, обладающих пси смепи-завия сияергнческим действием', Исиольэсванче таких смесой позволило бы снизить дсзн препаратов, а. следоветельно- у ¡гх токсическое вгикаае на организм птиц...

Известно, что гельминтоза, дел.ьясь серьезным стресооша •£р,хторсм, лсизодтг к осла^тенкг напряженности иммунитета.

Изоезоть о»,-;го поз гол» применение препаратов, оСяедае-зих иммуиоаодухирующйа деРетгкек. ? настоящее время а гизотновод-стве стала широко использовать иаууасчсдуля?ср1, оказыг тющиб .«•.пргэяеннсе воздействие на основные ¿е-госн йеспеци^аческой та,г.-/:ти, "'.офагоцитарный индекс, хзлпераую //нкцда Т-яи4сг,хтсэ, хс.мпесгъс В-лим$оцитов. В последнее десятилетие в печати «ироко ссвецастся иммучо с тимулирующее действие ант-

ИзЕвот&к таккс- г.с ггчц?ругяий эффект д^им-гиени;.- иилзеома с фень^алоа при смеза«1.„-;с -аа^яа досадами а «тедам;- гздч-нпх киьотннх.

Использование прадло;. зкноЯ нами ноьсЛ хокЗинецл» лрегиря-тс> нилверма я фенасада, обладающей иьыуисмодулггрн.т.« вксу, позволило бы бол^е зффектието иг пользовать алтгеяьмин?-..^е яр-пара-й: в паицеЕОД. гне.

Цель и задачи исследования. Б задачу.наших исследований входило:

1. Изучить физико-химические свойства комбинаций из нилверма и фенасала.

2. Изучить влияние нилвпма и фечасала и их комбинации на не-оторые показатели иммунитета у кур /Т-лк^оциты, фагоцитарную активность, уровень гамма-глобулинов, лкзоцима, общего белки и гематологические данные/.

Я. Определить оптима. ,ное соотношение смеси нилверма с фенасалом для дегельминтизации кур против смешанной инвазии нематодами и цестодами.

4. Изучить параметры токсичности комбинапи нилверма с фенасалом /острую токсичность смеси, ее остаточное количество в организме кур, апе;гизирующие свойства и влияние на антитоксическую функцию печени/, определить влияние изучаемой комбинации на ветеринарно-санитарные показатели мяса птиц.

Научная новизна. Установлено потенцирующее действие нилверма хри совместном применении с фенасслом при "■ельминтозах к. р. Изучены токсические и антгельминтные свойства этой смеси при нематодозах и цестод'зах кур. ДЦ^д этой смеси для белых мышей сос.авляет 447 /344+581/ мг,кг, что согласно ГОСТ 12.1.007-76 позво яет отнести ее к 3-му классу токсичности.

Практическая ценность. На основе иммунологических и пара-зитологических исследований разработана новая высокоэффективная комбинация антгельминтиков для лечения смешанной инвазии кур. Разработано наставление # 044-52 по применению комбинации чильерм + фенасал, нилверм + пиперазин, при смешанных инвазиях нематодами и цестодами: /аскаридиями и райетиниями, аскаридиями и гетеракисами/, которое утверждено заместителем началь-ика ГУВ ШХ и продовольствия СССР Пущиным В.Н. К ноябрь. 1991 года.

/тообация диссертации. Материалы диссертации были доложены:

1. На X и XI конференциях молодых ученых БШШ ветпрепа-ратов /г.Мо-ква, 19Ьв, 1990 г./.

2. На меклабораторном совещании научных сотрудников ВГНКИ ветпрепаратов /г.Ыоске 1991 г./.

На защиту выносятся: "" ~ -

Влияние нилверма и фенасала на некоторые показатели иму-нитета у кур и их комбинированное применеч; з против смешанной шеэзии нематодами и цестодами.

Публикации научных исследований. По теме диссертации onv6-ликоб"но 3 статьи, в которых изложены основные материалы вьтс ч-ненной работы.

Структура и обьем диссертации. Материал диссертации изложен на 120 страницах машинописного текста /исключая приложения/ и иллюстрирован 40 таблицами, б рисунками.

Список использованной л-чературы включает 143 наименования, в том числе »лостранных.

Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литература, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, предложения для практики, список литературы, приложения.

СОБСТВЕННЫЕ ИХЛЕДОВАНШ I. Материалы и методы исследования

Работа была выполнена в ¿986-1988 гг в лаборатории контроля и стандартизации противопаразитарных препаратов ВШКИ, лаборатории контроля и стандартизации хкмиотерапевтичес-их препаратов ГНЖИ ветпрепаратов и кормовых добавок, ОПХ "Манихи-но', а также в птицеводческих хозяйствах Московской, Львовской областей и Азербайджана.

I.I. Исследуемые материалы:

Изучению подвергались антгельминтики: нилверм, серии адм I0I3568? /Великобритания/ а фенас^.л, партии 3? 85, изготовленный в 1966 г.

При изучении им-укомодулирующж- свойств, токсичности и антгельминтной активности ис.атуедах препаратов и их -:омб"ча-ций были использованы клинически здороше лабораторные животные - цыплята и куры, а также спонтанно зараженные гельминтами куры. Всего в опытах было задействовано: 528 белых мыяей ыас-•сой тела 15-20 г, 56 морских свинок, массой тела 300-400 г.

120 клинически здоровых кур, в возрасте б месяцев, 20 клинически здоровых кур в возрасте 4-х месяцев, 50 клинически здоровых цыплят в возрасте одного месяца и 100 взрослых кур со смешанной инвазией аскаридиями и цестодами. '

Loa изучении подлинности комбинации нилверма с фенасалом применяли тонкослойную хроматографию и УФ-спект рофотоыетрию.

Изучение влияния нилверма, фенасала и их комбинаций на нек торые показатели иммунитета кур проводили путем определения уровня Т-лимфоцитов, гамма-глобулинов, общего белка, лизо-цима, фаыцитарной активности и гематологических показателей.

В экспериментах по выявлению иммуномодулирующего действия нилв~рма, фенаола и их комбинаций было использовано 120 клинически здоровых кур шестимесячного возраста, которых по принципу аналогов поделили на 8 равных групп.

Препараты птице вводили перорально, индивидуально, перед утренним кормлением в виде суспензии на 2%-нои крахмальном клейстере.

Кро ь у подопытной птицы брали из податальцевой вены за два дня до введения препаратов и на третий, пятый, седьмой, десятый и пятнадцатый дни после введения препаратов /антгель-мин'тикоУ.

Лейкоцитарную Формулу выводили по общепринятой методике, п-тем подсчета в мазке крови разных видов лейкоцитов /гетеро-фидов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов, моноцитов /Бесса-рабов J.5. с соавт., 1968/.

Процент Т-ли?-*юцитов определяли по розеткообразованию лимфоцитов кур с эритритами барана /Е-РШ/ /й.а.Болотников с соавт., 198?, Э.Х.Даугалиева, 1984, 1986/.

Уровень дизоцима определяли фотоэлектроколориметрическ.л ыегодом по А.Г.Дррофейчуку /1986/, с изменением температурного режима /39°С вместо 37°С/ реакции сыворотки крови кур с культурой Ко. Lysodecticus.

Опсоно-$агоцитарную реакцию проводили'по метода З.М.Берг-ма- а и Е.Ы.Славской в модификации ШИИВИ1.

Уро. знь гамма-глобулинов в сыворотке крови изучали турб-X метрическим методом по белковым фракциям сыворотки кр^ви /П.А.Емельяненко с соавт., 1980, И.П.Кондрахин,- Н.В.Курилов, 19ь5/. Принцип метода ось^ван на том, что различные белковые фракции сыворотки крови осаждается фоофат.лши ^аст^.рами оп^е-де.-°нной к^ ¿центраони.

Изучение общей гематологической картины /количество ге::з-глобина. лейкоцитов, эритроцитов/ проводили по общепринятым методикам/й.П.Кондрахин, Н.В.Курилов, 1365/.

Все цифровые показатели экспериментальных данных обрабе • тывали методом вариационной статистики с определением результатов по таблице Стьюдента /по П.Ф.Рокицкому, Т967/.

выявление оптимальных соотношений и д^з нилверма у фена-сала проводили в опытах на 100 курах ч вазрс ;те 6 месяцев породы беллй леггорн, спойтанно инвазированных нематодам;, и цес-тодами. Для определения экстенсивности /ЭИ/ и интенсивность инвазии /ИИ/ использовали метод Фюллеборна. Для этой -ели убивали по 10 кур из обтей группы, с последующим вскрытием кишечников и подсчетов'гельминтов. Оставшуюся птицу весили, пометили к сформировали в группы по принципу аналогов.

Антгельминтикя задавали птице индивидуа "ьно перорально через зонд в виде растворов и суспензий на 2 % кшхмальном клейстера перед утренним кормлеьлем. Птица в контрольных группах получала только крахмальный клейстер.

Учет результатов проводили путем послеубойного ге^минто-логического вскрытая кишечников через 7-8 суток после дегельминтизации. По общепринятой формуле расчета определяли экстенс-эффективьость /ЭЭ/ и интенсэф^ективность /Ш/.

Изучение острой токсичности комбинац..й препаратов.

Опыты в этом направлении проводили ня 228 белых нелинейных штах /самки ' сашда/ массой 17-19 г и на 50 иыалнтах мэ-зячног">. воз раса. Каядуэ дозу проверяли на 6-ти мышах. Провезено 28 доз, 10 из аоторых дваядц.

Препараты у их комбинации вводили перорально, подкожно и знутрибгадинно в соотношениях 1:1, 1:4, 1:5. За животными наблюдали 7 суток, учитывая клиническое состояние и сроки гибели, »езудьтаты обрабатывал" по методу Литчфильда и Учлкоксокэ 'М.О.Беленький, 1263, А.Н.Кудрин, 1969/.

Для изуения переносимости комбинации ис нилваг«* и фена-;ала 1?шл»<тами месячного возраста, было шдабрано по принципу «алсов 5 групп по 10 птиц в каждой, из котошх одна группа -:онтрольная.

Цыплятам подопытных групп вводили перорально в .аде сус-юнзии на 2 % крахмальном клейстере комбинацию нилверма и $гча-:ала в определенных соотношениях. 'Зг двое суток до в веяния

препаратов, а тчкже череа одни, пять и двенадцать суток после их "ачи у всех цып.лт была взята кровь из подкрыльцовой вены и исследована на содержание гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов по вышеуказанным методикам. Проводил-! ежедневный учет кл.лйческого состоянчя цыплят во всех группах.

Влияние комб-эдации из ниг^ерма с фена^.алом на ветойнар-но-санитарныз показатели мяса и гистологическую структуру органов и тканей кур.

Опыт был ^оставлен на б клинически здоровых курах в возрасте 7 месяцев. Было создано две группы - опытную и контрольную. контрольная группа препараты не получала, подопытной птице -ввели орально, индивидуально комбинацию из нилверма и фена-ч,ала з соотношение 1:5, в дозе 0,04 г/гол. + 0,2 г/гол. соответственно. Все куры были убиты через 24 гаса, кусочки лимфоузлов, печени, почек, селезенкй, сердце отобраны для патолого-морфологичеекого исследования.

Органолептические и биохимические анализы проводили в соответствии с "Правила»«« ветеринарного осмотра убойных животных и ве ганэкспертизы мяса и мяснг: продуктов", 1983 г. , бактериологические исследования - согласно ГОСТ 21237-75. Мясо. Методы бактериологического аналг за. Гистологическую картину исследовали по общепринятой методике с гематоксилином - эози-ьом/О.В.Волкова, D.K.Елецкий, IS62/.

Изучение аллергизируащих свойств комбинации нилверма проводили по методу М.Л.Герпановича /1954/, В.И.Пнцвий /1984/. Принцип метода основан на проявлении гистаминного шока у животных, получавших препарат. Время, через которое наступает шок, по сраш.знии с временем'его прогзления у животных, не . получавших препарат, показывает, -бладает ли он аллергизирую-щими и а;.гигистаминными свойствами.

опыта было использовано 56 морских свшок, массой тгпа 300-400 г, из ко орых сфорк. гровано 7 равноценных групп по 8 животных в каждой. Нияверы, фс шеал и их комбинацию вводили свинкам орально в разовых и удвоенных догтх в форме суспензии на ..рахмальном клейстере. Свинкам первых 7 подгрупп через 1,5 часа, 'а вторых через 3 часа после введения антгедь_лнтнков . псокожно к ье*'-цирс ;али гистамин-в ф^рме 0,5%-ного водного раствора, приготовленного ex tempore в Дозе 0,5 jr/кг.

При этом учитыва;.л время проявления гист^инного шока, и' пр-должительнс ^ть, гибель »и^отных.

- - Изучение влияния комбинации из нилвеца и сЬенасала на антитоксическую функции печени проворив" методом гексеналовой пробы, которая основывается на длительности гексеналогчгс сна у мышей или крыс /В.Ф.Гладких, с соавт., 1963; Д.Г.Розин, 1964; А.Р,Останов, 1972; В.А.Рябова, 1974; С.З.Сперанский, 1980; Г.П.Веселова, 1981; В.А.Рябова, 1982/.

£ эксперименте находилось 300 белых мьией, массой тела 15-20 г, которых разделили на ■ эвных групп и 5 подгрупп. Мышам пет-тых трех групп ввели орально раствор нилверма ч дозах из расчета одно-' дву- и пятикратной терапевтической для кур /0,03 г/кг, 0,06 г/кг и 0,15 г/кг/. В 4-Я и 6-й группах задавали комбинацию из нилверча и фенасала в дозах /0,04 г/кг + 0,2 г'кг; 0,08 г/кг + 0,4 г/кг и 0,°.0 г/кг + »■ I г/кг/. Мышам 7-ой контрольной группы ввели орально I % крахмальный клейстер. Продолжитель"ость сна, выраженную в миртах, отсчитывали с момента принятия животными "бокового по-яояения" до первых попыток измен-ть его.

Определение ос.аточных количес.в фенаса; : в органах и гканях кур проводили по методике, утвержденной ГУВ Госа^ропро-¿а СССР 24 января .389 года "Определение ветеринарного ант^ель-лмтного препарата "фенасал-2" /5,2-дихлор-4-ни.росалициланилк-;а/ в органах и тканях с/х животных".

Остатки нилверма в органах и тканях уч определяли, так сак по данным Венгерской фирмы Гедеон Рихтер препарат достигает максимального уровня в крови через 30 минут, в псоледум-цие часы концентрация его быстро падает, а через три дня в ¡рганах и тканях животных обнаруживаются лишь .леды анттельми;-гикч.

2. Результаты исследований

2.1. Физихо-химич' екие свойства смеси нилвепма с фечасалом

В итоге исследований подобрана с: стема хлоро'эрм : ацетон : аетанол : 25 % водный раствор аммиака /Ю0:Д0:7,5:1/. Реэучьтз- . ?ы ррботы показывают ч.о в данной с :стеме обеспечивается хоро-хее разделение нилверма и фе..асала / ЯГ нилверма - "\83 --'г зенаяала - 0,30/. По площади пятен можно количественно опреде-шть соотношения препаратов в смесях.

С целью разработки количественного определения нитаерма к

фенасала использовали УФ-спекгрофотометрию. Построены калибровочные графики поглощения нилверма в воде и фенасала в 0,01 н растворе соляной кислоты в спирте.

В итоге было показано, что для количественного определения компоненте з смеси можно использовать метод УФ спектрофото-метрии с максимумом поглощения нилверма в 0,01 н раствор«1 соляной кислоты в спирте при 216 нм» а фенасала при 332 нм.

2.2. Влияние нилверма и его комбинаций с фенасалом на некоторые показатели иммунитета кур

а результате проведенных исследований не выявлено отрица-тс1ьно^о влияния изучаемых препаратов нилверма, фенасала и их комбинации на гемопоэтччеокие процессы в организме птицы. При введении одного нилверма и комбинаций антгельминтиков в терапевтической дозе отмечается тенденция к нарастании количества эритроцитов в течение 5-15 дней пообработки птицы /время наб* ушнил/. Необходимо подчеркнуть, что прг использовании комбинации нилверма с фенасалом уровень эритроцитов в крови кур в большинстве случаев достоверно выше чем в контроле. Нил-Еерм, фенасал и их комбинации не "называли заметного влияния на уровень гемоглобина в крови птицы. В то же время дробное ведение фенасала приводит к значительному снижению концентрации гемоглобина.-Достоверная разница констатирована на 5-й день.

Показано, что дробное введение птице нилверма в малнх дозах в тгчение 5 дней обеспечивает повышение общей резистентности организм-.

Обращает на себя шимание кол^ественные изменения лейкоцитов у ку;, обработанных антгельминтиками. В группах, где применяли нилверм, отмечали ста.истически недостоверное поеы-аение количества лейкоьлтов. Наблгадется тенденция к увеличению числа лейкоцитов с 3-10 по 15 -й дни после обработки в гр>,ше, где применяли нилверм в комбинации с фенасалом. Отмечаете ч естественно'- влияние на уровень лейкоцитов в крови кур дробного вьедения антгельминтиков, в частности наблюдав1"^ сте-истичегкч г3оТОглрНОе снижение лейкоцитов в группе кур, по-лучокшх нильерм " фенасал, по сравнению с груп ами кур, потопа! иси.ьзсъйы кадай препарат в отд^лььости. Кол~-«есгво оа-

зофилов, эоэинофилов, гетерофилов и моноцитов колеблется з г ре-делах физиологической нормы во всех группах на протяжении опыта.

Оценка иммунного статуса птица после обработки фенасалом показала снижение уровня Фагоцитарной активности крови кур, -о-торая восстанавливалась 7 дней; заметно /статистически достоверно/ повышается этот показатель у кур после дачг нияверма. Совместное применение фенасала и чилверма не изменяло фагсргаарную активность нейтрофилов. После дробной обработки изучаемый показатель вменялся по разному, в частности после дачи ни..вермэ на 15-й день отмечалось угнетение г згоцитарной активности /, .о-стоверное снижение/, применение фенасала сопровл*далс-ь уменьшением фагот^тарюЯ йлгивнос. я, которая зоеетанр.вливалась на 15-й день, сок.гаслше примечениг сопровождалось значительным повышением изучаемого показателя, особенно это выражено на 15-й день /таблица № I, 2/.

Вакным результатом исследования являются данные о возмог • ности с помощью нилверма нивелировать отрицательное влияние фенасала на фагоцитарную активность крови кур. Использование комбинаций ент^эльминтиков или предварительная обработка кур в течение 5 дней малыш дозами нидверма обеспечивали высокую ф8гсцтгтар"ую активность, а, следовательно, неспецифическуз резистентность.

Втишие исследованных антгельминткко^ на гуморальные ф х-тора неспецифической резистентности птицы /концентрация общего белка, уровень лизоцтаа, гамма-глобулин^' было незначительны?'. Тчк, наб одалась тенденция к увеличению, уровня лизоцима в сыворотке крови кур, обработанных нилвс рмом или его комбинацией с фенгсаво! , что свидетельствует об ¡шчунояоуректирувщем свойствнидверма, в то время как применение фенасала шзывало постепенное снижение уровня лизоцима -рови ¿сур в течек че первой издали после обраСтки /таблица 3 3/.

Дробное введение испытуемых препаратов не'шзыва,.о достоверных разл!.4Ий в показателях уровня лизоцим.. в кро-и кур подопытных г-упп в течение срока наблюдений. -

Не имели достоверных различий у птиц подопытных групп дан то по концентрации общего белка и гамма-глобулинов в сыворотке крови. В это же время фенасал у-нетал клачтоный факг.эр специфической резистентности - Т-лимфоциты. Уровень Т-лимфоцлтов "а третий день после обработки терпе'вт ¡ческой дозой фенас-ла они-

Влияние ант^ельминтихпв на фагоцитарную активность крови кур /.} фагоцитировавших нейтрофилов/

Таблица I

Время

взятия

крови

Др введения На: 3-й день 5-й день 7-й день 10-й день • 15-й день

Группа

П

Ш

Контрольная, Шилверм 0,03 г/гол.:Фенасал 0,3 г/гол., антгельминтиков: два дня подряд : однократно ьь подучала : :

1У

Нилверм 0,04г/гол.+ + фенасал 0,2 г/гол. однократно

' 59,30+1,08 59,00+2,10 61,6011,(58 63,60+2,40 63,30+1,96 62,90+1,08

59,30+0,27

70,60+0,23х

69,60+3,20°

70,60+Р,98Х

60,30+р,27

65,50+1,76

64,00+1,69 56,60+2,10 62,00+1,41 70,00+0,47** 63,00+1 63 64,00+0,94

•хх

62,66+2,20 66,00+0,81 67,00+2, Ю+ , 60,50+1,06 61,Ь0+р,95 61,90*0,60

го

I

Примечание: Разни"а по сравнению с I /контрольной/ группой достоверна при х - Р.< 0,001;

хх - Р < 0,01; о Р < 0,1; + - Р < 0,05.

Таблица 2

Фаюцктарная активность крови кур при дробной введшим антгельминтиков /% фагогргироваших нейтрофилоц/

ГР/ПП а

. - Время У у1 : УП уш

. взятия крови' Контрольная, ; : антгельминтиковГНилверм 0,006г/гол. не получала .. ': 5 дней подряд :2>енасал 0,03г/гол. : 5 дней подряд :Нилверм 0,008г/гол. ,:пять дней подряд + :+ фенасал 0,2 г/гол. ; .на 5-й день

До введения 62,70+2,70 • 67,00+1,00 67,30+1,10 55,70+3,30 .

На: 3- день 6Т,?3+3,21 68,70+2,30х - 63,30+5,20 . . 66,70+1,52хх

5-й день 61,30+1,50 64,00; 1,71 ; 64,30+2,43 64,70+1,70 "

• 7-.. день 61,00+0,62 1 65,30+0,90 49,2 >9,40х 66,00+2,61° ;

ТО-й'день 61,30+0,54 66,70+2,82 64,00+0,61 60,00+0,60

15-й день 63,71+2,22 63,30+0,29 67,70+1, /?+ 69,30^0,91°

Примечание: Разница по сравнению с У /контрольной/ группой достоверна при - - Р < 0,001; хх - Р < 0,01; о - Р < 0,1; + - Р < 0,05.

Влияние антг^льмиитиков на уровень лизоцима /% лизиса/

Таблица 3

Группа

Время • ■ взятия "рови I П ш : 1У-

£онтрольная, антгельминтиков не получала :Нилверм 0,03 г/гол. : два дня подря^ ^ерасал 0,3 г/гол. однократно ^илверм 0,04гДол.+-•:+ фенасал 0,2 г/го". : . "шократно

До введения 11,10+0,33 10,80+0,45 10,80+0,30 10,70+^08

Нг: 3-й день 11*23+0,23 , II,¿0+0,47 10,30+0,27 • П,36±0,14

5-й день . тт,00±0,Х7 , 11,60+0,20 9,20+р,26х . 11,87+0,57

7-й день : I.,70+0,14 \ 11,36+0,22 9,60+0,32+ . И,86+0, II

V 10-й день ' 10,86>+Г,03 10,70+0,19° 11,00+0,14 ,•11,02+0,16

. ; ' 15-й день 10,80+0,31 Ю,6р+р,14 11,00+0,14 II ,86+0,11хх

Примечание: Разница по сравнению с I /контрольной/ группой достоверна при х - Р^О.ЛП; хх - Р < 0,01; о - Р < 0,1? + - Р < 0,05.

ж^лся примерно н 7 %. Нилверм в большой степени повышал уровень Т- лимфоцитов. Среди популяций лимфоцитов отмечалось достоверное увеличение Т-клеток в первые 5-7 дней после обработки , как разовой терапевтической дозой, так и дробной доик препарата. Использование нилверма . комбинации с фенасалом обеспечило нивелирование отрицательных влияний фенасала на иммунологическую реактивность организма птицы.

Таким образом, данные опытов свидетельствуют о том, что нилверм и комбинации нилверма с фенасалом повышали фагоцитарную активность и уровень Т-лим|;цитов /таблицы №1, 2, 4, 5/.

В дальнейшем были проведены опн™ы пи определению профилактического действия нилверма у цыплят к заражению аскаридия-мч.

Данные опыта указывают, что нилверм профилактирует заражение аскаридиями, если культура ям дана не р, .шве чем через сутки после введения препарата. В группе цыплят, получавших нилверм в дозе 0,03 г/гол., однократно, а через сутки культуру 600 яиц аскаридий на птицу, прижилось в среднем.4,0 гельминта, в контрольной - 21,1 гельминта, то ее., в 5 раз больше.

2.3. Выявление оптимальных соотношений нилверма с фенаса^м и их антгельминтной активности

Определение оптимальных соотно. ений и доз нилверма с фенасалом проводили на 90 Kvpax спонтанно давазированных нематодами и цестодами.

Анализ результатов проведенных опытов показал, что ни..-верм дейст^ эт только как нематодоцид, фенасал как цестодоцид, а комбинация этих ,;Еух антгельминтиков эффективна при смешанной инвазии кур нематодами и цестодами.

2.4. Изучение острой токсичности нилверма, фенасала к их,к.. .бинацй

Проводили на белых мышах при пероральном, подкожном и внуярибрюшинном способах введения в а^ех cooTf шениях т:1, I:' и 1:5.

По мере увеличения ^озы фенасала токсичность комбинации снижалась. .При оральном введении комбинаци" в с отношении 1:1 ЛД^д превышала Xfi-q с.лого нилвер«а ; 1,5 раза, 1:4 - в 2 раза

^йствие антгельминтиков на Т-лимфоциты кур /%/

Таблица 4

• Групп а

^ремя взятия 1 П Ш : 1У

крови Контрольная, г тггельминтиков не получала Нилверм 0,03г/гол., два дня г"\дряд Фенасал 0,3 г/гол. однократно ":Ни;.„ерм 0,04г/гол.+ ':+ фенасал л,? г/гол. однократно

До введения 27,33+1,73 29,00+1,41 28,67+1,52 27,33+0,27

На: 3-й день 2А,66+1,91 51,67+1,78х 21,67+2,68 32,00+0,Зб^

. 5-й день 25,33+1,78 32,67+1,66^ 23,00+2,4; 32,67+1,44хх

7-й день 22,67+0,72 29,00+0,82+ 22,67+2,70 30,67+1,36хх

10-й день 21,33+0,27 22,23+0,27 20,67+0,54 24,33+0,27°

15-й день 22,40+0,31 22,31+0,45 20,81+0,18 24,18^0;38+

Примечание: Разница по сравнению с I /контрольной/ группой достоверна при х - Р< 0,001; хх - Р< 0,01; о - Р< 0,1; + - Р< 0,05.

Табтица 5

Д.йст ;ие дробного введения антгельминтихов на Т-лимфоцитЫ кур /%!

Труп п а

Время взятия крови. У У1 : УП : УИ

Контрольная, антгальыинтиков не по.дуча«.л Нилверм 0,0%г/гол. 5 дней подряд :Фенасал 0,03г/год, : 5 дн^й подряд :Ни;шер.,1 0,008г/гол. ':пять дней подряд + :+ фенасал 0,2 г/гол. ; на 5-й день

До введения 25,76+0,92 21,67+2,33 25,33+1,26 21,30+0,71

На: 3-й день 25,67+1,51 25,77+0,99 20,6б+1,90хх 29,00+1,24х"

Р-й день 26,67+1,34 27,00+0,72+ 19,00+1,41х 29, .о+0,64е'

7-й день 26,00+0,57 27,00+0,81 19,33+0,98х 27,00+0,94

Г 0-й да.ь 23,33+0,67 21,33+0,98 27 00+2,05 24,33+0,98

■ 15-й день • 24,00+1,45 .-3,00+0,5? 25,67+0,34 24,00+0,60

Примечание: Разница по сравнению с У /контрольной/ группой достоверна при

х - Р< 0,001; хх - Р < 0,01; о - р < 0,1; + - Р <0,05.

и 1:5 - в 2,8 раза, а прй подкожном - ь 1,5; 2,8 и 5,7 раза соответственно.

Средняя смертел! :ая доза при введении в келудок нилверма равна 224 мг/кг /188*266,5/, фенасала - 13520 мг/кг /13126+ +13925/, комбинации из нилверма и фенасала /-в терапевтическом соотношении 1:4 447 /344+581/. Согласно ГОСТ 12.1.007-76 нилверм и его комбинации с феиасалоы следует отнести к третье^ классу опэсиости, а фенасал- к четвертому.'

Была проверена та"же переносимость комбинации нилверма : фенасала в соотношении 1:<» и 1:5 в терапевтической и 10-ти кроной терапевтической дозах для месячных цыплят. Нилверм применяли в дозе 0,04 г/гол. Наблюдение за птицей проводили • в течение 2-х недель после введения препаратов. Одновременно у цыплят исследовгзи гематологические псазатели.

Анализ данных свидетельствует о снижении лейкоцитов у цыплят /во всех группах/ через 1,5 и 12 суток /за исключением цыплят, получавших однократную дозу нилверма/ посла дачи препарата. Вместе с тем аналогичной снижение имело место в : энт: рольной группе; восстановление к исходным показателям наблюдали лишь у цмлят, получавших однократную дозу комбинаций. Другие гематологические показате/ч выли в пределах нормы.

Наши опыты свидетельствуют о хорошей переносимости нилверма цыплятами как в "тдьльности, так и в смеси с фенасалоы. Низкая токсичность фенасала связана не с плохой его всасываемостью, а с быстрым выведением и разрушением в организме /Б.А.Тимофеев, 1989/.

2.5. Влияние комбинацгч из нилверма с фенасалом на ветеринарно-санитарные показатели мяса и гистологическую структуру органов и тканей кур

Результаты исследований показывают, что органолептические, бактериологические и физико-химические показатели мя.а кур, получавших кслбинацию нилверм + Ленасал /0,04 г/гол. + 0,2 г/гол. соответственно/ и контрольных указывают на доброкачественность и нормальное созревание мяса.

Ре. ультаты сравнительного изучения гистосрезвв из органов кур, получаших комбинацию нилверм + фенасал и контрольных показали, что комбинации двух Препаратов в терапевтической дозе 0,04 г/гол. + 0,2 г/гол. сооть^тстве^но не оказывали отрица-

тельного влияние на микроструктуру лимфоузлов, печен- . почек, селезенки и сердца.

2.6. Аллергизирующие свойства комбинации из нил^зрма и фена'сала и отдьль нх компонентов

. Опыты были выполнены на морских свинках методом гистамин-лого шока.

Изучение аллергиэирующих свойств нилверма, фенасала и их комбинаций показало, что в контрольной и подопытной группах основная масса животнгч занимала бог.^ое положение через 7-9 минут после введения гистамина. У некоторых свинок наблюдали судороги, возбуждение. Животные как в опытных, так и контрольных группах погибали в основном в пределах 10-30 минут, при получении двойной дозы нилверма - через 7-24 ит.

Следователи-..), нилверм, фенасал, -! также их комбинации в терапевтической и удвоенных дозах не обладали аллергизируюди-ми свойствами.

2.7. Влияние комбинации чилверма и фенасала на антитоксическую функция печечи

Данные опыта показывают, что нилЕерм и фенасал в течение першх суток не угнетал антитоксическую функцию печени при введении как в терапевтических /0,03 г/кг и 0,2 г/кг соответственно/, так и в пять раз увеличенных дозах.

В последующие двое суток чилверм достоверно усиливал антитоксическую функцию печени, особенно четко это влияние проявилось через 48 часов после введения препаратов /сон длится 1,5-6,2 часа против 15,5 часов в контрольной группе/.

При совместном применении нилверма с фенасалом продолжительность гексаналового сна опытных мышей достоверно отличалась от таковой в контроле -в сторону уменьшения.

Таким образом, нилЕерм, фенасал и их комбинации в терапевтических, дву- и пятикратных дозах нь обладал!, аллерг/^ирующими и гепатотоксическимк свойствами.

2.8. Остаточные количества фенасала а организме кур

Учитывая, что нилверм очень быстро выводится из организма животных, через три дня в органах и тканях обнаруживаются следы /0,01-0,02 иг/кг/, основное внимание было уделено изучению остатков фенпала в органах и тканях кур. Препарат вводили птице орально, однократно в дозе 0,2 г/гол. /доза взята из оптимального варианта комбинации нилверм + фенасал I:5/.

Результаты по распределений фенасала в органах и тканях кур через различные интервал времени после введения препарата пока али, что фенасал всг :ывается в небольших количествах и неравномерно. В печени, почках, селезенке, сердце и мышцах препарат достигает максимума в первые сутки, в легком обнаружены лишь следы на тое^ьи сутки. Преимущественное его накопление в печени следует объяснить тем, что данный орган является барьером, через который проходит основная масса лекарственных веществ, и в дальнейшем элиминируется с желчью. Обнаружение фенасала в почках на двадцатый день свидетельствует о его пе~ио-дическом поступлении ..з тканей организма в органы выделения кур.

ВЫВОДЫ

1. Комбинация нилверм - фенасал представляет собой физи-чес..у- смесь. Для идентификации этих препаратоь в комбинации можно использовать тонкослойную хроматографию в жидкой фазе: хлорофирм-ацетон-метанол-22%-ный раствор водный аммиака /Т00:10:7,5:1/. иг нилверм" составляет 0,83, фенасала -

- 0,30. Для количественного определение компонентов смеси следует применять Уа-спектрофотометрию с максимумом поглощения в 0,П1 н раствора соляной кислоты в спирте при 276 нм. а фе-!асал - при 332 нм. .

2. При скармливании очного нилверма и в комбинации с фенасалом в терапевтических дозах отмечается тенденция повышения количества эритроцитов: уровень гемоглобина не изменяется за период наблюдения /15 дней/.

3. Нилверм и его комбинация с фенасалом при скармливании курам вызывают достоверное повышение количества лейкоцитов. Пятикратное применение нилверма с фенасалом сопровождается достоверным снижением ког--чества ^ейкоцг.~ов.

4. Нилверм и его комбинация с фенаса^ом не изменяют лей-хоцитарную формулу крови кур. - ~------

5. йенасал понижает фагоцитарную актчгчость нейт^офилов крови кур, которая восстанавливается через 7 дней; при незначении одного нильерма наблюдается достоверное повышение этого показателя крови кур. Совместное однократное применение нил-верма и фенасала не изменяет фагоцитарную гхтивиость нейтрофи-лов, при пятикратном применении комбинации г-еет место значительное г звышение фагоцитарной активности.

6. Нилверм, фенасал и их комбинации не влияют на уровень лиэоцима, концентрацию общего белка и уровень гг:,ма-глобулина в крови кур.

7. Фенасал уменьшает уровень Т-лимфоцитов грови кур, а нилверм повышает их число. Использование нилверма в комбинации с фенасалом сопровождается нивелир чванием отрицательного влияния фенасала на иммунологическую реактивность кур.

8. Предварительное введение /за I и 6 суток/ нилверма цыплятам в дозе 0,03 г/голо^у и 0,05 г/голо^ в течение 6 дней при их последующем заражении яйцами аскаридий сопровождается низким развитием инвазии /4-9 аскаридий на I голову/.

9. Комбинация нилверм-фенасал в соотношении 1:5 в дозах 0,04 + 0,2 г/голову обладает 100 % эффективностью : ротив аска-пидий, 80 % против цестод при смешанной инвазии кур.

10. Средняя смертельная доза при введении в желудок белым мышам нилверма составляет 224 мг/кг /188+2"6,5/, комб..лации

из нилверма и фенасала в отношении 1:4 - 447 /344*581/ мг/кг массы тела, что дает основание отнести иу согласно ГОСТ 12.т.007-76 к 3-'<у классу опасности, а фенасал, J!¿qq которого равна Р520 мг/кг /Iá126*13925/ - к 4-му классу.

11. Комбинация нилверма и фенасала в оптимальном °иде fl'.b/ не влияет на ветеринарно-санитарные показатели мяса кур, ле изменяет гистоструктуры органов и тканей ггиц, не обладает зллергизирукиим действием, и не угнетает ант1-токс..ческую функцию печени.

12. Фенасал из срганов и тканек птиц после дачи комбинации нилЕерм + фенасал /в оптимальном соотношении/ шд-ляег. ;я через 30 дней.

прбдгоженш для пк-кши

1. На основе иммунологических и паразитологических исследований разработана новая высокоэффективная комбинация антгель-мт: псов для лечения смешанной инвазии .кур.

2. Разработано наставление № 044-52 по применению комбинации нилверм + фенасал, нилверм + ьиперазин, при смешанных инвазиях н-матодами и цестодами: /аскаридиями и райетиниями, аска-ридиями и гетеракисами/, которое утверждено заместителем начальника ГУЬ ШХ и продовольствия СССР Гущиным Б.Н. 14 ноября 1991 года.

сшеок работ, опубликованных по теме диссертации

I. Надыкто М.В., Кулик О.М. Токсичность комбинации нилверма с фенасалом. - Контроль качества химиотерапевтических препаратов: Сб.научн.тр. ВШКИ. - М., 1987. - С. II0-II4.

2- Кул к О.М., Коцрмбас Г.К. Изучение влияния препарата нилверм и смесей препаратов нилверм + пиперазин и нилверм + + фенасал на Т -систему иммунитета у кур. - FE "Ветеринария", 1990. - Sä 2. - Г. 13.

3. Надыкто М.В., Кулик О.М. Эффективность антгельминтиков при "мешанных инвазиях кур. - Ветеринария, 1991. - Ш 3. -

С. 43-46.