Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Влияние нилверма и фенасада на некоторые показатели иммунитета кур и их комбинированное применение в птицеводстве

ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ВЕГЕРШАРИИ ШАШТЕРСТВА СЕЛЬСКОГО ХОЗШЕТВА РОССИЯЖОй ФЕДЕРАЦИИ

С АНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ВЕГЕРШАРНЫЙ ШСТИГУТ

На правах рукописи

КУЛИК Олег Максимович

УЖ 619:616.995.1:636.52/.58-065

ВЛИЯНИЕ НИЛВЕРЦА И ФЕНАСАЛА НА НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА КУР И ИХ КОМБШИРОВАННОЕ ПРИМЕНЕНИЕ В ПГЩЕВОДОТВЕ

Автореферат

диссертации на соискание ученой степе: л кандидата ветеринарных наук

Специальность 16.00.04 - Ветерштрная фармакология

с токсикологией

Санкт-Петербург 1993

Работа выполнена во Всероссийском Государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ - доктор ветеринарных наук, 1

профессор ТИМОФЕЕВ Б.А.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ - доктор медицинских наук ■ ЗАЦШШ Э.П.,

доктор ветеринарных наук

паддаллю н.д.

ВЕ^ЛЦАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ - Московская, ветеринарная академия.

Защи-ч диссортации состоится ¿/У^^/О 1993 года

в часов на заседании Специализированного совета Д.120.20.02 в Санкт-Петербургском ветеринарном институте • /196006, Санкт-Петербург, Московский пр., 112/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Пе-

ШУСТРОМ У.Б.

тербургского 1^теринарного институту.

Ученый секретарь Специализированного совета

ОБЕ,.'Я ХАРАКТЕРИСТИК РАБОТЫ

Актуальность темы. Современное птицеводство, развивающееся на основе интенсивной технологии, обуславливает снилс.ше общей резистентности организма т.яг'. На этом фоне особенно ярко выражено увеличение заболеваний, вызванных стрессовыми факторами, и гельминтами. Несмотря на различия в зависимости от методов удержания птицы, почти во все;- птице во дческих хозяйствах регистрируют аскаридиоз и гетеракидоз. В настоящее время разработаны различные схемы борьбы с I ельминтозями кур, которые практически предусматриваю™ применение а. тгельминтиков.

При дегельминтизации кур наиболее часто используют фено-т"азин, фенасал, пипераэин, нилверм и другие препараты, что обеспечивает возрастание яйценосности и снижение затрат корма до 10 %. При смешанных инвазиях необходимо птицу обр.батывать неоднократно разнгии препаратами, что требует больших затрат рабочего времени, а также значительный перерасход дефицитных в наше время антгельминтиков. Снять вышеупомянутые проблемы дегельминтизации в птицеводстве было бы ьозмокным при одновременном использовании комбинации препаратов, обладающих при смешивании синергическим действием. Использование таких смесей позволило бы снизить дозы препаратов, а, следовательно, и их токсическое влияние на организм птиц...

Известно, что гельминтозы, явлллсь серьезным стрессовым фактором, приводят к осда^пения напряженности иммунитета.

Избегать этого позболит применение препаратов, обладающих иммуномодулирувщим действием. Р настоящее время в животновод-ггве стали широко использовать иммуномодуляторы, оказыгтющие направленное воздействие на основные фаигоры неспецк$ической задати, погипазэние фагоцитарный, индекс, хзлпернув функцию С-тафзцитов, золичество В-лимфоцитов. В последнее десятилетие з печати широко освещается иммуностимулирующее действие ант-■■ельминтнка нилверыа.

Известен также потенцирующий эффект применения нилвэрма с зен^алоы при смешанных инвазиях цест^дами и не ¡атодами хвач-щх жиьотных.

Использование Предло: )ннсй нами новой хоыбинац/и препзра-■с. нилверма а фенасада, обладающей юыунсмодуля'трныа действен, позволило бы бог^е эффективно не "'.ольэоЕать а:«гельминт-ле препараты в пгицевод^гге.

Цель и задачи исследования. В задачу ьаших исследований входило:

1. Изучить физико-химические свойства комбинаций из нил-верыа и фенасала.

2. Изучить влияние нилвпма и фенасала и их комбинации на не"оторые показатели иммунитета у кур /Т-ли<г2оциты, фагоцитарную активность, уровень гамма--лобулинов, лизоцима, общего белки и гематологические данные/.

Я. Определить оптима. ,ное соотношение смеси нилверма с фенасалом для дегельминтизации кур против смешанной инбэзии нем-что^ами и цестодами.

4. Изучить параметры токсичности комбишн"ш нилЕерма с фе-насалом /острую токсичность смеси, ее остаточное количество в организме кур, апе, гизируюдие свойства и злияние на антитоксическую функцию печени/, определить влияние изучаемой комбинации на ветеринарно-санитарные показатели мяса птиц.

Научная новизна. Установлено потенцирующее действие нилверма .ри совместном применении с фенасслоы при "■ельминтозех к,р. Изучены токсические и антгельыинтные свойства этой смеси при нематодозах и цестод'зах кур. ДД^д ЗТ0Й смеси для белах мьппей сос авляет 447 /344*581/ мг/Кг, что согласно ГОСТ 12.1.007-76 позво яет отнести ее к 3-му классу токсичности.

Практическая ценность. На основе иммунологических и пара-зитолиГнческих исследований разраоотана новая высокоэффектив-ьая комбинация антгельыинтиков для лечения смешанной инвазии кур. Разработано наставление № 044-52 по применению комбинации ¡илье см + фенасал, нилверк + пиперазин, при смешанных инвазиях нематодами и цестодами: /аскаридияаи и райетиниями, аскаридиями и гетеракисами/, которое утверждено заместителем начальника ГУБ ЬЕХ и продовольствия СССР Гущиным В.Н. К ноябре 1991 года.

/тообвция диссертации. Материалы диссертации были доложены:

1. На X и XI конференц.шх молодых ученых БГНКИ ветпрепа-ратов /г-Ыо-ква, 19ЬсЗ, 1990 г./.

2. На ыеклабораторном совещании научных сотрудников БГНКИ ветпрепаратов/г.Моске 1991 г./.

На защиту выносятся:

Влитие нилверма и фенасала на некоторые показатели иммунитета у кур и их комбинированное применечгз против смешанной инвазии нематодами и цестодами.

Публикации научных исследований. По теме диссертации onv6-ликов"но 3 статьи, в которых изложены основные материалы выпсч-ненной работы.

Структура и обьем диссертации. Материал диссертации изложен на 120 страницах машинописного текста /исключая приложения/ и иллюстрирован 40 таблицами, б рисунками.

Список использованной л'тературы включает 143 наименования, в том числе иностранных.

Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, швода, предложения для практики, список литературы, приложения.

СОБСТВЕННЫЕ ЮСЛЕДОВАНШ I. Материалы и методы исследоьания

Работа была выполнена в ¿986-1988 гг в лаборатории контроля и стандартизации противопаразитарных препаратов ВШКИ, лаборатории контроля и стандартизации химиотерапевтичес"их препаратов ГНЖИ ветпрепаратов и кормовых добавок, ОПХ "Манихи-но', а также в птицеводческих хозяйствах Московской, Льеовской областей и Азербайджана.

I.I. Исследуемые материалы:

Изучен ¡и подвергались антгельминтики: нилверм, серии АДМ I0I3568? /Великобритания/ и фенас-.л, партии JP 85, изготовленный в 1986 г.

При изучении им-укомодулирующиг свойств, токсичности и антгельминтной активности ис.мтуемых препара\ов и их •;омб"ча-ций были использованы клинически здоровые лабораторные животные - цыплята и куры, а также спонтанно зараженные гельминтами куры. Всего в опытах было задействовано: 528 бе/ых мызой массой тела 15-20 г, 56 морс.сих свинок, массой тела 300^400 г,

120 клинически здоровых кур, в возрасте б месяцев, 20 клинически здоровых кур в возрасте 4-х месяцев, 50 клинически здоровых цыплят в возрасте одного месяца и 100 взрослых кур со смешанной инвазией аскаридиями и цестодами.

1.ри изучении подлинности комбинации нилверма с фенасалом применяли тонкослойную хроматографию и УФ-спектрофотометрию.

Изучение влияния нилверуа, фенасала и их комбинаций на нек торые показатели иммунитета кур провопили путем определения уровня Т-лимфоцитов, гамма-глобулинов, общего белка, лизо-цима, фаицитарной активности и гематологических показателей.

В экспериментах по выявлению иммуномодулирующего действия нилверма, фенасила и их комбинаций было использовано 120 клинически здорошх кур шестимесячного возраста, которых по принципу аналогов поделили на 8 равных групп.

Препараты птице вводили перорально, индивидуально, перед утренним кормлением в виде суспензии на 2%-ном крахмальном клейстере.

Кро ь у подопытной птицы брали из подкпыльцевой вены за два дня до введения препаратов и на третий, пятый, седьмой, десятый и пятнадцатый дни после введения препаратов /антгель-минтикоУ.

Лейкоцитарную формулу выводили по общепринятой методике, ггтем подсчета в мазке крови разных видов лейкоцитов /гетеро-филав, эозинофилов, б аз оф и лов, лимфоцитов, моноцитов /Бесса-рабов J.5. с соавт., IS88/.

Процент Т-лго**юцитоЕ определяли по розеткообразованиа лимфоцитов кур с эритритами барана /E-РОК/ /И.А.Болотников с соавт., 198?, Э.Х.Даугалиева, 1984, 1986/.

Уровень лизоцима определяли фотоэлектроколориыетрическ.л ыеюдом по А.Г.Дорофейчуку /1986/, с изменением температурного режима /39°С вместо 37°С/ ргзкции сыворотки крови кур с культурой Me. Iiysodecticus.

Опсоно-фагоцитарную реакцию проводили 'по методу ¿.Ы.Борг-ма' а и Е.М.Славской в модификации ШИИВШ.

Уро.энь гамма-глобулинов в сыворотке крови изучали турб-; метрическим методом по белковым фракциям сыворотки кр^ви /П.А.Емельяненко с соавт., 1980, И.П.Кондрахин,- Н.В.Курилов, 19а5/. Принцип метода ось¿вен на том, что разлгшые белковые фракции сыворотки крови осаждается фогфат.лши ^асть^рами оп^е-де.-^нной к«. 1центраиий.

Изучение общей гематологической картины /количество гемоглобина. лейкоцитов, эритроцитов/ провидили по общепринятым цетодикам/И.П.Кондрахин, Н.В.Курилов, 1965/.

Все цифровые показатели экспериментальных данных обрабе • тывали методом вариационной статистики с определением результатов по таблице Стьюдента /по П.Ф.Рокицкому, Т967/.

шявленив оптимальных соотношений и д^з нилвеома и фена-сала проводили в опытах на 100 курах ч Eospt -те б месяцев породы бепй леггорн, спойтанно инвазированных нематодам;, и цес-годаин. Для определения экстенсивности /ЭИ/ и интенсивности мвазии /Ш/ использовали метод ФюллебЪрна. Для этой -ели убивали по 10 кур из обшей груша, с последующим вскрытием кишеч-1иков и подсчетов гельминтов. Оставшуюся птицу весили, пометили и сформировали в группы по принципу аналогов.

Антгелькинтики задавали птицо индивидуально перорально :ерез зонд в виде растворов и суспензий на 2 % крахмальном лайстере перед утренним кормлеьием. Птица в контрольных трупах получала только крахмальный клейстер.

Учет результатов проводили путем послеубойного геломинто-огического вскрытия кисечников через 7-8 суток после дегель-интизаци». По общепринятой формуле расчета определяли экстенс-Йектив1.ость /ЭЭ/ и интенсэф^ективность /ИЭ/.

Изучение острой токсичности комбйнац.-й препаратов.

Опыты в этом направлении проводили на 228 белых нэлиней-к шшах /самки : самцы/ массой 17-19 г и на 50 цыплптах ме-гчног'1 Еозрагта. Капдуп дозу проверяла на 6-ти ыышах. ПроЕе-:но 28 доз, 10 из которых дваада.

Препараты v их комбинации вводили перорально, подкожно и :утрибгшкнно в соотношениях 1:1, 1:4, 1:5. За животными наб-дали 7 суток, учитывая клиническое состояние и сроки гибели, зультаты обрабатывал" по методу Литчфильда и Учлкоксокт .0.Беленький, 1963, А.Н.Кудрш, 1969/.

Для изуения переносимости комбинации ис нильерга и фена-ла цыплятами месячного возраста, было подобрано по принципу аяс^ов 5 групп по ID птиц в каждой, из которых одна группа -ирольная.

Цыплятам подопытных групп рводили перорально в -иде сус-Í3KH на 2 % крахмальном клейстере комбинацию нилверма и угнана в определенных соотношениях.-3.' двое суток до вве^зния

препаратов, а тчкже черея одни, пять и двенадцать суток после юс пачи у всех цып.лт была взята кровь из подкрыльцовой вены и исследована на содержание гемогло<ина, эритроцитов и лейкоцитов по вышеуказанным методикам. Проводят! ежедневный учет кл.лического состоянчя цыплят во всех группах.

Влияние комб'тнации из ниг^ерма с фенасалом на ветойнар-но-санитащыз показатели мяса и гистологическую структуру органов и тканей кур.

Опы^ был доставлен на б клинически здоровых курах в возрасте 7 месяцев. Было создано две группы - опытную и контрольную. контрольная группа препараты не получала, подопытной птице ввели орально, индивидуально комбинацию из нилверыа и фена-ч.ала з соотношение 1:5, в дозе 0,04 г/гол. + 0,2 г/гол. соответственно. Все куры были убиты через 24 '*аса, кусочки лимфоузлов, печени, почек, селезенкй, сердце отобраны для патолого-ыорфологического исследования.

Органолептические и биохимические анализы проводили в соответствии с "Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ве оанэкспертизы мяса и мяснг: продуктов", 1983 г., бактериологические исследования - согласно ГОСТ 21237-75. Мясо. Методы бактериологического атш за. Гистологическую картину исследовали по общепринятой методике с гематоксилином - эози-ьом /О.В.Волкова, Ю.К.Елецкий, 1982/.

Изучение аллергизирующих свойств кокяЗинации нилверда проводили по методу М.Л.Гершановича /1954/, В.И.Пыцкий /1984/. Принцип метода ос.юван на проявлении гкстаминного шока у животных, получаших преларат. Время, через которое наступает шок, по сраш.зник с временем'его прогзления у кивотных, не получавших препарат, показывает, .бладает ли он аллергизирую-щими и а;.гигистаминньщи свойствами.

/Чя опыта было использовано 56 морских свинок, массой т^ла 300-400 г, из ко орых сфорк. :ровано 7 равно цените групп по 8 животных в каждой. Нилверы, ф1 тсал и их комбинацию вводили свинкам орально в разовых и удвоенных доглх в форме суспензии на ..рахмальном кл-йстере. Свинкам первых 7 подгрупп через 1,5 часа, 'а вторых через 3 часа после введения антгедь_,интиков . педкожно к ье":цирс ,али гистамин-в £прме 0,5%-ного водного раствора, приготовлю .ного ех tem^-^oгe в дозе 0,5 лг/кг.

.1ри этом учитыва,..! время проявлю лия гист^линного шока, Iо' продолжительно Jть, гибель *и^тных.

Изучение влияния комбинации из нилвеща и фенасала ьа антитоксическую функцию печени проводил- методом гексеналовой тробы, которая основывается на длительности гексеналогого сна . Г мышей или крыс /В.Ф.Гладких с соавт., 1963; Д.Г.Розин, 1964; 1.Р,0станов, 1972; В.А.Рябова, 1974; С.З.Сперанский, 1980; '.П.Веселова, 1981; В.А.Рябова, 1982/.

Е эксперименте находилось 300 белых мь-чей, массой тела 15-20 г, которых разделили на ±0 " звных групп и 5 подгрупп. Ьппаы пег*нх трех групп ввели орально раствор нилверма в дозах га расчета одно-; дву- и пятикратной терапевтической для кур '0,03 г/кг, 0,06 г/кг и 0,15 г/кг/. Б 4-й и 6-й группах мышам сдавали комбинацию из нилверча и фенасала в дозах ' '0,04 г/кг + 0,2 '/кг; 0,08 г/кг + 0,4 г/кг и О.'.О г/кг + ■ I г/кг/. Мышам 7-ой контрольной группы ввели орально I % рахмальный ¿лейстер. Продолжитель"ость сна, выраженную в ми-утах, отсчитывали с момента принятия нивотнь^и "бокового по-ожения" до перЕых попыток измен-ть его.

Определение ос.аточных количеств фенаса: . в органах и канях кур проводили по методике, утвержденной ГУБ Госа^ропро-а СССР 24 января .389 года "Определение ветеринарного антх'ель-интного препарата "фенасал-2" /5,2-дихлор-4-ни.росалициланили-а/ в органах и тканях с/х животных".

Остатки нилверма в органах и тканях не определяли, так ак по данным Венгерской фирмы Гедеон Рихтер препарат дости-ает максимального уровня в крови через 30 минут, в пгзледум-ае часы концентрация его быстро падает, а через три дня в рганах и тканях животных обнаруживаются лишь ^леды антгельмин-икч.

2. Результаты исследований

2.1. Физихо-химич'зкие свойства смеси нилвечма с фрчасалом

В итоге исследований подобрана с: зтема хлоро'эрм : зцетон : гтанол : 25 % водный рас -вор аммцака /100:^0:7,5:1/. Резучьта-i ррботы показывают, ч.о в данной с :стеме обеспечивается хоро-;е разделение нилЕерма и фенасала / Rf нилверма - л,83 Rf ¡насала - 0,30/. По площади пятен можно количественно опреде-[ть соотношения препаратов в смесях.

С целью разработки количественного определения ни"Еерма и

фенасала использовали УФ-спектрофотометрию. Построены калибровочные графики поглощения нилверма в воде и фенасала в 0,01 н растворе соляной кислоты в спирте.

В итоге было показано, что для количественного определения компоненте j смеси можно использовать метод УФ спектрофото- . метрии с максимумом поглощения нилверма в 0,01 н раствора соляной кислоты в спирте при 216 нм, а фенасала при 332 нм.

2.2. Влияние нилверма и его комбинаций с фенасалом на некоторые показатели иммунитета кур

о результата проведенных исследований не выявлено отрица-тсяьне^о влияния изучаемых препаратов нилверма, фенасала и их комбинации на гемогаэтччеокие процессы в организме птицы. При введении одного нилверма и комбинаций антгельминтиков в терапевтической дозе отмечается тенденция к нарастанию количества эритроцитов в течение 5-15 дней посл^ обработки птицы /время Haöj. ¡денип/. Необходимо подчеркнуть, что прг использовании комбинации нилверма с фенасалом урюврнь эритроцитов в крови кур в большинстве случаев достоверно выше чем в контроле. Нил-Еерм, фенасал и их комбинации не оказывали заметного влияния на уровень гемоглобина в крови птиир. В то же время дробное вь-дение фенасала приводит к значительному снижению концентрации гемоглобина.-Достоверная разница констатирована на 5-й день.

Показано, что дробное введение птице нилверма в малнх дозах в течение 5 дней обеспечивает повышение сЗщей резистентности орга^из!.".

Обращает на себя внимание количественные изменения лейкоцитов у ку обработанных антгельминтиками. В группах, где применяли нилЕерм, отмечали ста.истически недостоверное повышение количества лелкоьлтов. Наблюдается тенденция к увеличению числа лейкоцитов с 3-10 по 15-й дни после обработки в грулпе, где применяли нилверм в комбинации с фенасалом. Отмечаете 1 существенно'- влияние на уровень лейкоцитов в крови кур дробного ььеде^.ня антгельминтиков, в частности наблюдае—.я сте-истииеокч достоверное снижение лейкоцитов в группе кур, по-лучаглих кильегм • ¿.енасал, по сравнению с груп ами кур, кото-xt!m ¡ii-олысьа л и хи.дай препарат в отдельности. Кол-.-шстео и а-

зофилов, эозинофилов, гетерофилов и моноцитов колеблется з г ределах фенологической нормы во всех группах на протяжении опыта.

Оценка иммунного статуса птицы после обработки фенасалом показала снижение уровня фагоцитарной активности крови кур, -о-торал восстанавливалась 7 дней; заметно /статистически достоверно/ повышается этот показатель у кур после дач:- нилверма. Сор-местное применение фенасала н нилверма не изменяло фагоцитарную активность нейтрофилоз. После дрооной обработки изучаемый показатель вменялся по разноцу, в частности после дачи ни..верма на 15-й день отмечалось угнетение фагоцитарной активности /, ,о-стоверное снижение/, применение фенасала сопровождалось умень-пениеи фагоцитарной активное.я, которая восстанавливалась на 15-й день, совмэслгоо примечониг сопровождалось значительным повышением изучаемого показателя, особенно это шражено на 15-й день /таблицу № I, 2/.

Важным результатом исследования являются данные о возмог • ности с помощью нилвермз нивелировать отрицательное влияние фенасала на фагоцитарную активность крови кур. Использование комбинаций снтг,ельшятиков пли предварительная обработка кур в течение 5 дней малыми дозами нилверма обеспечивали высокую фагоцитар"ую активность, а, следовательно, неспецифическую ре-зистентнисть.

Влияние исследованных антгелыягнтияо^ на гуморальные ф. тетеры неспецкфической резистентности птицы /концентрация общего белка, уровень лкзоцкма, гамма-глобулга^в.' было незначительны}». Тчк, наб. эдалась тенденция к увеличению, уровня лизоцима в сыворотке крови кур, обработанных нилвс рмом или его комбинацией с фенасалм , что свидетельствует об гамунокорректирующеи свойствнклЕзрма, в то время как пр^ененнз фенасала называло постепенное сшпсенпа урошя лизоцима "рови кур в теченче первой нздела после обрабтхи /таблица В 3/.

Дробиоэ введенпз кейнтуекых препаратов не"вызывало достоверных разд.-игЯ в показателях уровня лизоцим.. в кро-и кур подопытных г~упп в течение срока наблюдений.

Не киели достоверных различий у птиц подопытных групп дан ■ кыз по концентрации общего белка и гамма-глобулинов в сыворотке крови. В это же время фенасал угнетал клечтоный фак'.зр специфической резистентности - Т-лии^оциты. Уровень Т-лии$оц«гов "а третий день после обработки терпе'вт :ческой дозой фенас-ла сии-

Таблица I

Влияние ант^ельминтикрв на фагоцитарную активность крови кур фагоцитировавших нейтрофилов/

Труп п а

Время взятия К{^ВИ I П ш 1У

Контрольная, вн т ге льминт ико в Ьо попала Нилвэрм 0,03 г/гол. два дня подряд Фенасал 0,3 г/гол., однократно Нилверм 0,04г/гол.+ + фенвсал 0,2 г/гол. однократно

До введения 59,3011,08 59,30+0,27 64,00+1,69 62,66+2,20

На: 3-й день 59,ЬО+2,Ю 70,60+0,23х 56,60+2,10 66,00+0,сЯ**

5-й день 61,60+1,08 • 69,60+3,20° 62,00+1,41 67,00+2, Ю+

7-й день 63,60+2,40 70,60+0,98х 70,00+0,47** 60,50+1,06

10-й день 63,30+1,96 60,30+0,27 63,00+1-63 61,60+0,95

' 15-й день 62,90+1,06 65,50+1,76 64,00+0,94 61,90+0,60

Примечание: Разница по сравнению с I /контрольной/ группой достоверна при х - Р< 0,001; хх - Р< 0,01; оР < 0,1; + - Р <0,05.

I

1-Н

го

Таблица 2

Фа1 оцитарная активность крови кур при дробном введении антгельиинтиков /% фагошгироваших найтрофилов/ . ,

Групп а

Вреия У У1 : УП • УШ

ВЗЯТИЯ крови' Контрольная, антгельминтиков на попала Нилверм 0,006г/гол. 5 дней подряд •фенасал 0,03г/гол. | 5 дней подряд !Нилверм О.ОСВг/гол. ,:пять дней подряд + :+ фенасал 0,2 г/гол. .на 5-й день

До ЕвеДения 62,70+2,70 ■ 67,00+1,00 67,30+1,10 55,70+3,30

На: 3-. день 6Т,?3+3,21 68,70+2,30х 63-,30+5,20 6о,70+1,52хх

5-й день 61,30+1,50 64,00-1,71 64,30^2,43 64,70+1,70

7-.. день 61,00+0,62 65,30+0,90 49,2 >9,40х 68,00+2,61°

ТО-й 'день 61,30+0,54 66,70+2,82 64,00+0,61 60,00+0,60

15-й день 63,71+2,22 63,30+0,29 67,70+1, Л+ 69,30±0,91°

Примечание: Разница по сравнению с У /контрольной/ группой достоверна при

- - Р < 0,001; хх - Р < 0,01; о - Р < 0,1; + - Р < 0,05.

Влияние антгельминтиков на уровень лиэоцима /% лизиса/

Таблица 3

Группа

Время взятия "рови I П Ш : ту-

Контрольная, антгельминтиков не получала Нилверм 0,03 г/гол. два дня подря,. *генасал 0,3 г/гол., однократно :.»илверм 0,04гАал. + . ;+ фенасал 0,2 г/го~. : 'лнократно

До введения 11,10+0,33 10,80+0,45 10,80+0,30 .10,70+0,06

Нг : 3-й день 11*23+0,23 . 11,^0+0,47 10,30+0,27 11,36+0.14

5-й день тт,00+0,17 11,60+0,28 9,20+0,26х . 11,87+0,57

7-й день : 1.,70+0,14 11,36+0,22 9,60+0,32+ . 11,86+0,11

1г,-й день Ю,86±С,03 10,70+0,19° 11,00+0,14 .•11,02+0,16.

15-й.день 10,80+0,31 10,60^0,14 11,00+0,14 II,86+0,IIх*

Примечание: Разница по сравнении с I /контрольной/ группой достоверна при х - Р ^0,^1; хх - Р< 0,01; о - Р< 0,1; +-Р< 0,05.

желся примерно н • 7 %. Нилверм в большой степени повышал уровень Т-лим^оцитов. Среди популяций лимфоцитов отмечалось достоверное увеличение Т-клеток в перше 5-7 дней после обработки как разоьой терапевтической дозой, так и дробной доюй препарата. Использование нилверма . комбинации с фенасалом обеспечило нивелирование отрицательных влияний фенасала на иммунологическую реактивность организма птицы.

Таким образом, данные опытов свидетельствуют о том, что нилверм и комбинации нилверма с фенасалом повышали фагоцитарную активность и уровень Т-лиа4 ;цитов /таблицы №1, 2, 4, 5/.

В дальнейшем были проведены опыы по определению профилактического действия нилверма у цыплят к заражению аскаридия-v«.

Данные опыта указывают, что нилверм профилактирует заражение аскаридиями, если культура янц дана не р^ льше чем через сутки после введе"ия препарата. В группе цыплят, получавших нилверм в дозе 0,03 г/гол., однократно, а через сутки культуру 600 яиц аскаридий на птицу, прижилось в среднем.4,0 гельминта, в контрольной - 21,1 гельминта, то ее.., в 5 раз больше.

2.3. Выявление оптимальных соотношений ниларма с фенасалом и их антгельминтной активности

Определение оптимальных соотношений и доз нилверма с фенасалом проводили на 90 курах спонтанно инвазированных нематодами и цестодами.

Анализ результатов проведенных опытов показал, что ни..-верм действ; зт только как нематодоцид, фенасал как цестодоцид, а комбинация этих г.вух антгельминтиков 1ффективна при смешанной инвазии кур нематодами и цестодами.

2.4. Изучение острой токсичности нилверма, фенасала и их к^ .бинац й

Про-Еодили на белых мышах при пероральном, подкожном и внутрибрюшинном способах введения в грех сооп шениях т:1, I:' и 1:5.

По мере увеличения ^.озы фенасала токсичность комбинации снижалась. При оральном введении комбинаций в егтткоаении 1:1 ЛДзд превышала ХД-q с.лого нилвер-а": 1,5 раза, 1:4 - в 2 раза

Таблица 4

.Гтйствие антгельминтиков на Т-лимфоциты кур /%/

Групп а

1ремя взятия I П Ш : 1У

крови Контоольн.ая, гчтгёльминтиков не получала Нилверм 0,03г/гол., два дня пдряд :$енасал 0,3 г/гол. однократно 'Нил„ерм 0,04г/гол.+ •;+ фенасал п,? г/гол. ! однократно

До введения 27,33+1,73 29,00+1,41 28,67+1,52 27,33+0,27

На: 3-й день 2х,66+1,91 51,67+1,78х 21,67+2,68 32,00+0,36хх

5-й день 25,33+1,78 32,67+1,66хх 23,00+2,4.' 32,67+1,44хх

7-й день 22,67+0,72 29,00+0,82+ 22,67+2,70 30,67+1,36хх

10-й день 21,33+0,27 22,23+0,27 20,67+0,54 .24,33+0,27°

15-й день 22,40+0,31 22,31+0,45 20,81+0,18 24,18^0;38+

Примечание: Разница по сравнению с I /контрольной/ группой достоверна при х - Р < 0,001; хх - ?< 0,01; о - ?< 0,1; + - Р< 0,05.

Табтица 5

Д.йспие дробного введения антгельминтиков на Т-лим^оцитЫ кур /%!

Групп а

Время' взятия кровл У У1 УП УШ

Контрольная, антгельминтиков не получав Нилверм 0,006г/гол. 5 дней подряд Фенасал 0,03г/год., 5 дной подряд Нилвер.. О.ОСВг/гол. пять дней подряд + + фенасал 0,2 г/гол. на 5-й день

До вве"ения 25,76+0,92 21,67+2,33 25,33+1,26 21,30+0,71

На 3-й день 25,67+1,51 25,77+0,99 20,66+1,90хх 29,00+1,24х"

Р -й день 26,67+1,34 27,00+0,72 19,00+1,4Iх 29,х5+0,64е

7-й день 26,00+0,57 .27,00+0,81 19,33+0,98х 27,00+0,94

Г0-й да.ь 23,33+0,67 21,33+0,98 27 00+2,05 24,33+0,98

15-й день * 24,00+1,45 .3,00+0, К» 25,67+0,34 24,00+0,60

Примечание: Разница по сравнении с У /контрольной/ группой достоверна при х - Р < 0,001; хх - Р < 0,01; о - Р < 0,1; + - Р < 0,05.

и 1:5 - в 2,8 раза, а прй подкожном - ь 1,5; 2,8 и 5,7 раза соответственно.

Средняя смертел! :ая доза при введении в келудок нилверма равна 224 мг/кг /188*266,5/, фенасала - 13520 мг/кг /13126+ +13925/, комбинации из ни"Берма и фенасала /в терапевтическом соотношении 1:4 447 /344+581/. Согласно ГОСТ 12.1.007-76 нил-верм и его комбинацию с фенасалом следует отнести к третьему классу опасности, а фенасал,- к четвертому."

Была проверена та'"тсе переносимость комбинации нилверма : фенасала в соотношении I:*» и 1:5 в терапевтической и 10-ти кроной терапевтической дозах для месячных цыплят. Нилверм применяли в дозе 0,04 г/гол. Наблюдение за птицей проводили в течение 2-х недель после введения препаратов. Одновременно у цыплят исследпвс та гематологические показатели.

Анализ данных свидетельствует о снижении лейкоцитов у цыплят /ео всех группах/ через 1,5 и 12 суток /за исключением цыплят, получавших однократную дозу нилверма/ после дачи препарата. Вместе с тем аналогичное снижение имело место в : онт-рольной группе; восстановление к исходным показателям наблюдали лишь у цыллят, получавших однократную дозу комбинаций. Другие гематологические показателч были в пределах нормы.

Наши опыты свидетельствуют о хорошей переносимости нилверма цыплятами как в "тдьлъно~ти, так и в смеси с'фенасалои. Низкая токсичность фенасала связана не с плохой его всасываемостью, а с быстрым выведением и разрушением в организме /Б.А.Тимофеев, 1989/.

2.5. Влияние комбинацгч из ьилверма с фенасалом на ветеринарно-санитарные показатели мяса и гистологическую структуру органов и тканей кур

Результаты исследований показывают, что органолептические, бактериологические и физико-химические показатели мя~а кур, получавших комбинацию нилверм + Ленасал /0,04 г/гол. + 0,2 г/гол. соответственно/ и контрольных указывают на доброкачественность и нормальное созпевание мяса.

Ре.ультаты сра'внительного изучения гистосрезвв из органов кур, получавших комбинацию нилверм + фенасал и контрольных показали, что комбинации двух препаратов в терапевтической дозе О,,04 г/гол. + 0,2 г/гол. соотизтствеуно не оказывали отрица-

тельного влияние на микроструктуру лимфоузлов, печен- , почек, селезенки и сердца.

2.6. Аллергизирующие свойства комбинации из нил_зрма и фенасала и отдвль' ых компонентов

Опыты были выполнены на морских свинках методом гистамин-.¡ого шока.

Изучение аллергизирующих свойств нилверма, фенасала и их комбинаций показало, что в контрольной и подопытной группах основк-я масса животнь"; занимала бог .¡вое положение через 7-9 минут после введения гистамина. У некоторых свинок наблюдали судороги, возбуждение. Животные как в опытных, так и контрольных группах погибали в основном в пределах 10-30 минут, при получении двойной дозы нильерма - через 7-24 мш..

Следователи..), нилверм, фенасал, также их комбинации в терапевтической и удвоенных дозах не обладали аллергизирутади-ми свойствами.

2-7. Влияние комбинации нилверма и фенасала на антитоксическую функцию печени

Данные опыта показывают, чтс, нилЕерм и фенасал в течение первых суток не угнетал антитоксическую функцию печени при введении как в терапевтически /0,03 г/кг и 0,2 г/кг соответственно/, так и в пять раз увеличенных дозах.

В последующие двое суток чилверм дортоверно усиливал антитоксическую функцию печени, особенно четко это влияние проявилось через 48 часов после введения препаратов /сон длится 1,5-6,2 часа против 15,5 часов в контрольной группе/.

При совместном применении нилЕерма' с фенасалом продолжительность гексаналового сна опытных мышей достоверно отличалась от таковой в контроле-в сторону уменьшения.

Таким образом, нилверм, фенасал и их комбинации в терапевтических, .ДЕу- и пятикратных дозах нь обладал1 аллергтируюци.чи и гепатотоксическимк свойствами.

2.8. Остаточные количества фенасала з организме кур

Учитывая, что нилверм очень быстро выводится из организма животных, через три дня в органах и тканях обнаруживаются следы /0,01-0,02 мг/кг/, основное внимание было уделено изучению остатков фенг?ала в органах и тканях кур. Препарат вводили птице орально, однократно в дозе 0,2 г/гол. /доза взята из оптимального варианта комбинации нилверм + фенасал 1:5/.

Результаты по распределению фенасала ь органах и тканях кур через различные интерва.н времени после введения препарата пока али, что фенасал всс¡ывается в небольших количествах и неравномерно. В печени, почках, селезенке, сердце и мышцах препарат достигает максимума в первые сутки, в легком обнаружены лишь следы на тое^ьи сутки. Преимущественное его накопление в печени следует обьяснить тем, что данный орган является барьером, через который проходит основная масса лекарственных Ее-ществ, и в дальнейшем элиминируется с желчью. Обнаружение фенасала в почках на двадцатый день свидетельствует о его периодическом поступлении ..з тканей организма в органы выделения кур.

ВЫВОДЫ

1. Кс_.бинация нилверм - фенасал представляет собой физи-чес..у.. смесь. Для идентификации этих препаратоь в комбинации можно использовать тонкослойную хроматографию в жидкой фазе: хлорофирм-ацетон-метанол-22$-ный раствор водный аммиака /ТОО:0.0:7,5:1/. ЕГ нилверм" составляет 0,83, фенасала -

- 0,30. Для количественного определение компонентов смеси следует применять УФ-спектрофотометрию с максимумом поглощения в 0,<">1 н раствора соляной кислоты в спирте при 276 нм. а фе-часал - при 332 нм.

2. При скармливании очного нилверма и в комбинации с фе-насалом в терапевтических дозах отмечается тенденция повышения количества эритроцитов: уровень гемоглобина не изменяется за период наблюдения '15 дней/.

3. Нилверм и его комбинация с фенасалом при скармливании курам вызывают достоверное повышение количества лейкоцитов. Пятикратное применение нилверма с фенасалом сопровождается достоверным снижением количества лейкоцглов.

4. Нилверм и его комбинация с фенаса^ом не изменяют лейкоцитарную фор!4улу крови кур.

5. Фенасал понижает фагоцитарную актчгчость нейт^офилов крови кур, которая восстанавливается через 7 дней; при назначении одного нилверма наблюдается достоверное повышение этого показателя крови кур. Совместное однократное применение нилверма и фенасала не изменяет фагоцитарную г:<тивносгь нейтрофи-лов, при пятикратном применении комбинации r-еет место значительное "эвышение фагоцитарной активности.

6. Нилверм, фенасал и их комбинации не влияют на уровень лизоцима, концентрацию общего белка и уровень гамма-глобулина в крови кур.

7. Фенасал уменьшает уровень Т-дам$оцитов гров'я кур, а нилЕерм повышает их число. Использование нилверма в комбинации с фенасалом сопровождается нивелированием отрицательного влияния фенасала на иммунологическую реактишость кур.

8. Предварительное введение /за I и б суток/ нилверма цыплятам в дозе 0,03 г/голо^у и 0,05 г/гохов> в течение б дней при их последующем заражении яйцами аскаридий сопровождается низким развитием инвазии /4-9 аскаридий на I голову/.

9. Комбинация нилверм-фенасал в соотношении 1:5 в дозах 0,04 + 0,2 г/голову обладает 100 % эф$ектигаостьа : ротиз аска-пидий, 80 % против цестод при смешанной инвазии кур.

10. Средняя смертельная доза при в ведении в желудок белил ¡лягаы нилверма составляет 224 мг/кг /188*2"6,5/, комб..нации

из нилверма и фенасала в огнопении 1:4 - 447 /344*531/ мг/кг массы тела, что дает основание отнести их согласно ГОСТ 12.т.007-76 к 3-"у классу опасности, а фенасал, J^q которого равна 1Я520 мг/кг /1^126+13^5/ - к 4-му классу.

11. Комбинация нилверма и фенасала в оптимальном яиде /1:5/ не влияет на ветеринарно-санитарные показатели мяса кур, не изменяет гистоструктуры органов и тканей ггиц, не с^ладает аллергизирухпим действием, и не угнетает антгтокс..ческую функцию печени.

12. Фенасал из с рганов и тканек птиц после дачи комбинации нилЕерм + фенасал /в оптимальном соотношении/ ЕЫД-ляе: :я через 30 дней.

првдгошш для поши

1. На основе иммунологических и паразитологических исследований разработана новая высокоэффективная комбинация антгель-мин: псов для лечения смешанной инвазии .кур.

2. Разработано наставление № 044-52 по применению комбинации нилверм + фенасал, нилверм + ьиперазин, при смешанных инвазиях нематодами и цестодами: /аскаридиями и райетиниями, аска-ридиями и гетеракисами/, которое утверждено заместителем начальника ГУЬ ШХ и продовольствия СССР Гущиным В.Н. 14 ноября 1991 года.

ШЕОК РАБОТ, ОПУБЛЖОЕАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Надыкто М.З., Кулик О.М. Токсичность комбинации нилверма с фенасалом. - Контроль качества химиотерапевтических препаратов: Сб.научн.тр. ВШКИ. - М., I9S7. - С. II0-II4.

2 Кул' я О.М., Кощшбас Г.И. Изучение влияния препарата нилверм и смесей препаратов нилверм + пиперазин и нилверм + + фенасал на Т -систему иммунитета у кур, - RK "Ветеринария", 1990. - № 2. - Г. 13.

3. Надыкто М.Б., Кулик О.М. Эффективность антгельминтиков при "мешанных инвазиях кур. - Ветеринария, 1991. - 3. -

С. 43-46.