Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Влияние антропогенно-экологических факторов на изменчивость биологических свойств возбудителей инфекций в регионе озера Байкал

на правах рукописи

ем^

Алексеева Саяна Мункуевна

ВЛИЯНИЕ АНТРОПОГЕННО - ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ИЗМЕНЧИВОСТЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИЙ В РЕГИОНЕ ОЗЕРА БАЙКАЛ

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Барнаул - 2004

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова.

Научный руководитель: заслуженный деятель науки

Республики Бурятия, доктор ветеринарных наук, профессор Цыдыпов Виктор Цыбанович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Никифоров Иван Парфирьевич

кандидат ветеринарных наук Бокова Татьяна Владимировна

Ведущая организация: Иркутская государственная

сельскохозяйственная академия

Защита состоится 31 марта 2004 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 в Институте ветеринарной медицины Алтайского государственного аграрного университета по адресу 656922, г. Барнаул, ул. Попова 276.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института ветеринарной медицины АГАУ.

Автореферат разослан «_»_2004 года.

Ученый секретарь. диссертационного совета доктор ветеринарных наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Все расширяющиеся антропогенные влияния на природную среду обуславливают изменение среды существования и негативно отражаются на состоянии биоценозов живых существ, влияя на их биологию, которая сопровождается изменением обмена веществ и, в конечном счете, на характер адаптивности к среде существования. Индикатором ее является изменчивость биологических характеристик, в частности, возбудителей инфекции, у которых наблюдаются появление атипичных форм.

В то же время происходят неконтролируемые изменения в молекуле генома микроорганизхма, что обуславливает влияние на биологическую характеристику и усиление вирулентности, патогенности при переходе из одной экологической среды в другую (при смене хозяев). Примером может послужить трагедия байкальской нерпы, когда вирус чумы плотоядных при переходе в другой организм изменил свои характеристики, и в результате появился новый вариант (Osterhaus Д., 1988).

Фенотипические признаки проявляются в отдельных случаях у бактерий лишь в 20% генотипического потенциала (генотипа). Поэтому фенотипически обнаруживается не все потенциально возможные проявления генотипа.

Условия природной среды региона озера Байкал со своей изменчивой природной климатической характеристикой может способствовать проявлению изменений биологических свойств организмов: во-первых, резистентности макроорганизма; во-вторых, биологической характеристики патогенных микробов в сторону усиления их вирулентности, что требует систематического и постоянного контроля за биологической изменчивостью в целях разработки параметров диагностических методов в условиях конкретного региона и под влиянием антропогенных факторов. В частности, влияние биологически активных препаратов (антгельминтики, гормоны, антибиотики).

Цель исследований. Провести изучение изменчивости биологических характеристик патогенных микробов, выделенных на территории Бурятии у больных и павших животных, под влиянием абиотических и биотических факторов. Также их адаптивные и экологические потенциалы.

Залами исследований:

I. научить биологическую характеристику возбудителей инфек-

3 | РОС.'НАЦИОНАЛЬНАЯ I

I библиотека I

цпй, встречающихся-на территории Бурятии;

2. определить влияние антгельмиитиков на биологические свойства патогенных микробов; . .

3. рассмотреть влияние гормонов на рост и развитие патогенных микробов;

4. исследовать биологические свойства атипичных форм сибиреязвенного микроба, выделенных в регионе озера Байкал;

5. выявить изменение фенотипических характеристик патогенных микробов в полевых условиях культивирования.

Научная новизна. Впервые на территории Бурятии выявлены из почвы скотомогильников атипичные формы сибиреязвенного микроба. Рассмотрена изменчивость бактерий под влиянием гормональных и антгельминтных веществ в.динамике роста микроорганизмов с позиции ветеринарной науки. Изучены их биологические и. экологические характеристики, проанализировано влияние,факторов внешней среды на патогенные.микроорганизмы в их естественной среде обитания. .

Теоретическая и практическая значимость работы..

Заложены теоретические основы изучения изменчивости биологических свойств патогенных микробов под влиянием аитгельминти-ков, гормонов и антибиотиков. Материалы диссертации использовались при санации организма животных от патогенных бактерий соче-танными антибиотиками.. Разработаны методические рекомендации по научно-обоснованному,одновременному проведению дегельминтизации и микробной санации организма. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах микробиологии, вирусологии и ВСЭ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. влияние антгельминтиков на изменчивость биологических свойств патогенных микробов;

2. действие гормонов на рост, размножение и изменение феноги-ппческих характеристик микробных культур;

3. изменчивость свойств,сибиреязвенного микроба;

4. биологические характеристики патогенных микробов в период существования в условиях естественной природной среды.

Апробация рабогы. Основные положения диссертации доложены

и обсуждены: на VI научно-практической конференции «Перспективные развития научных исследований молодых учёных и специалистов Урала и Сибири» (Троицк, 2002); международной научно-практической конференции; посвященной 130-летию образования Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (Казань, 2003); научно-практической конференции молодых учёных и аспирантов «Проблемы и перспективы развития АПК» (Улан-Удэ, 2003); международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию профессора В.Р.. Филиппова (Улан-Удэ, 2003); международной конференции, приуроченной к 60-летию образования факультета ветеринарной медицины (Ульяновск, 2003).

Публикации. Основные результаты научных исследований отражены в 5 печатных работах-

Тема диссертационной работы является самостоятельным разделом комплексной темы кафедры микробиологии, вирусологии и ВСЭ БГСХА им. В.Р. Филиппова «Проблемы ветеринарной инфектологии и экологии патогенных микробов в регионе озера Байкал» (№ гос.ре-гистрации 01.9.70005.375).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 184 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литерагуры, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Список литературы включает 168 источников, в т.ч. 32 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 60 таблицами и 19 рисунками.

Глава 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2Х Материалы и методы исследований;

Исследования проводили с 2000 по 2003 года на кафедре микробиологии, вирусологии и ВСЭ БГСХА им. В.Р.Филиппова, в Государственном Управлении Бурятской республиканской научно-производственной ветеринарной лаборатории и в лаборатории экологии возбудителей зоонозных инфекций Иркутского противочумного института, а также в полевых экспедиционных условиях, с выездами для взятия проб почв и материалов с животных.

Объектом исследования служили животные: 20 голов КРС, 35

свиней, 18 собак, 6 овец, один абортированный плод кобылы, 2 лисенка, 1 песец и I кролик; птицы: 1 попугай, 10 куриц, 5 эмбрионов; образцы почвы. Исследованы 36 проб почвы с опытных участков и 60 проб с территории скотомогильников, 50 штаммов полевых и музейных культур. Всего были проведены 2050 бактериологических исследований.

Изучение морфологических,1 культуральных, тинкториальных, биохимических, гемолитических и патогенных свойств микроорганизмов проводили методами обшей микробиологии (Биргер М.О., 1983; Герхард Ф., 1983; Антонов Б.И., 1986). Для изучения тинкториальных свойств мазки микроорганизмов окрашивали по Граму, Ольту, Михину, Козловскому, Трухильо, Циль-Нильсену. Культуральные свойства изучали по характеру роста в жидких и твердых питательных средах (МПА, МПБ, МППБ, МПЖ кровяной МПА, агар и бульон Хоттингера и плоские дифференциально-диагностические среды). 'Для изучения биохимических свойств применяли среды Гисса, систему индикаторных бумажек (СИБ), пластины мультимикротестов. Чувствительность микроорганизмов к различным антибиотикам определяли методом диффузии в агаре с применением стандартных дисков, содержащих антибиотики (Чайковская СМ., Гивенталь Н.И., Резван СП., 1984).

Постановку биопробы проводили на белых мышах. При выявлении гемолитических свойств бактериальные культуры высевали на мясо-пептонный агар в чашках Петри, содержащий 5% дефибринированной крови барана. Для теста плазмокоагуляции исследуемую культуру смешивали с 0,5 мл плазмы крови кролика, разведенной.в стерильном физиологическом растворе и результат учитывали через 4 и 24 часа.

Для изучения экологической характеристики микроорганизмов использовали температурную вариабельность, различные концентрации и рН среды по отношению к динамике роста (Гайдукова НХ, 1993).

' Характер роста исследуемых.культур под влиянием антгельминт-ных препаратов определяли при посеве их на МПБ, содержащим 1% растворы мвертина, беламизола и аверсекта-2 путем нефелометрии на КФК-2 при светофильтре 590 им с кюветой рабочей длины 10 мм. Контролем служили культуры, не обработанные антгельминтиками.

При изучении микрофлоры половых органов самок мазки брали из влагалища коров с использованием квачей.

Для определения феномена «жемчужного ожерелья» сибпреязвеи-

ные микробы сеяли на МПА, содержащим 0,5 и 0,05 ЕД пенициллина в 1мл среды. Для определения чувствительности к сибиреязвенному бактериофагу (Гамма- МВА и К-ВИЗВ) культуры засевали на скошенный агар, затем на поверхность наносили каплю бактериофага. Для определения МИК бициллина-3 определяли методом серийных разведений агаровых культур, предварительно разведенных в физиологическом растворе; При определении питательных потребностей использовали плотную синтетическую среду, агаризованной агаром Дифко и 0,1 % глюкозой, затем засевали вегетативные клетки испытуемого штамма в дозе 100-150 клеток в мл. Для изучении плазмид-ного анализа в лунки полистиролового планшета для.иммунологи-ческих реакций вносились по 50.мкл лизоцимной смеси. Затем полная 18-20 час. культура из плотной среды суспензировалась в лизо-цимную смесь и выдерживалась при 37°С 30 минут после чего добавлялась 5 мкл раствора проиазы, и смесь повторно выдерживали. При иммуноферментном анализе исследуемый материал разносили в 0,05 моль/л карбонатном буфере рН 9,6 содержащем 1 % бычьего сывороточного альбумина (БСА), не содержащего антигена с последующей инкубацией в течение-1,5.час В лунки вносили в них по 0,1 мл конъ-югата в рабочем титре.

Антигенную специфичность изучали в РП, РДП, РПГА и РТПГА с использованием преципитирующей сибиреязвенной сыворотки.

Для изучения выживаемости, микробные культуры в лабораторных опытах изучали в стерильных почвах. Образцы почв заливали суспензией культур возбудителей в концентрации 2 млрд.м.т. в 1 мл физиологического раствора, чтобы над поверхностью увлажнённой почвы находилась суспензия толщиной 2-3 см. Для изучения микроорганизмов во внешней среде производили обсеменение опытных участков. На 0,5 м2объекта заливали по 500 мл МПБ с вышеописанной концентрацией (Кисленко В.Н., 2000). Химический анализ почв проводили по методике Аринушкиной Е.В. (1970).

При изучении действия дезинфицирующих растворов на исследуемые культуры микроорганизмов готовили процентные растворы формалина, соляной кислоты и щелочи. Влияние температурного фактора на рост исследуемых культур производили с использованием одномиллиардной взвеси в физиологическом растворе. Затем культуры инкубировали на водпо-паровон баме при температуре 60°С с последующими

высевами на МП А в пределах экспозиции от 3 до 60 минут.

При фотографировании использовали фотоаппарат «Зенит» и микрофотонасадку МФН-10. Экспериментальный материал обрабатывали методом вариационной статистики кафедры информатики и вычислительной техники БГСХА им. В.Р. Филиппова.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ* 2.2.1; Биологическая характеристика возбудителей инфекционных заболеваний, выделенных на территории Бурятии»

Бактериологическими исследованиями совместно с республиканской научно-производственной ветеринарной лаборатории, изучены микробные культуры, которые были выделены от разных видов животных с широким спектром взятия патологического материала (табл. 1).

Таким образом, по данным наших исследований и с Государственным Управлением Бурятской республиканской научно-производственной ветеринарной лаборатории выявлены патогенные бактерии у разных видов животных, и по биологическим свойствам идентифицированы как возбудители острых и хронических инфекций. Биологические характеристики соответствовали классическим вариантам по определению патогенных бактерий.

2.2.2. Влияние антгельминтиков: аверсекта-2, беламизола и ивертина на рост некоторых видов возбудителей инфекций и их биологические свойства .

Влияние аверсекта- 2 и беламизола.на биологические свойства микробов

Исследования проведены с использованием антгельминтиков на биологические свойства микроорганизмов и получены результаты, позволяющие выявить различные степени изменчивости биологических характеристик.

При изучении антгельминтиков на культурально-морфологичес-ких свойствах микробных культур видимых изменений не наблюдалось. При этом, в процессе культивирования St.aureus в присутствии антгельминтиков (аверсект-2, беламизол) утрачивал гемолитические свойства, которые восстановились в конце опыта. Такое подобное явление наблюдал В.В. Кузьмин (1951). В то же время у E.coli в про-

Таблица 1

Сводная таблица наименований выделенных штаммов патогенных микробов на территории Бурятии

Наименование культуры Вид животного

St.aureus Собака (смыв и гнойное выделение из препуциального мешка, истечения из глаз собаки)

St.albus КРС (легкие)

Str.pneumoniae Собака (верхние дыхательные пути)

Str. pyogenes Собака (1,5г) ■ (гнойное содержимое из препуциального мешка; соскоб кожи)

Str. faecalis Собака (гнойное поражение кожи)

P: vulgaris - Теленок(фекалии) • • . •

Собака (гнойное содержимое)

L.monocytogenes (II серотип) Крупный рогатый скот (паренхиматозные органы)

E.rhusiopathiae Свиньи (паренхиматозные органы, лимфоузлы)

E.coli Свиньи (толстый отдел кишечника)

E.coli (серотип 08) Собаки и свиньи (ЖКТ и фекалии)

E.coli (серотип 041) Теленок (ЖКТ)

E.coli (0101) Крупный рогатый скот (ЖКТ)

Вас. subtillus Попугай, 2мес.(фекалии)

S.gällinarum Курицы и цыплята (желудочки) <

S.typhiinurium Лисята, свиньи (паренхиматозные органы)

Собака (фекалии)

S.abortus-egui Абортированный плод кобылицы

Cl.tetani Овца (паренхиматозные органы)

Cl.oedematicus Овца (паренхиматозные органы)

Cl.perfringens Песец (печень)

Крупный рогатый скот (печень)

Собака (селезенка)

Ягненок (селезенка)

E.citrobacter Свинья (отечный экссудат, ЖКТ)

Овцематка (отечный экссудат)

Ps.aeruginosa Поросенок (селезенка)

B.klebsiella Собака (фекалии)

M.tuberculosis Крупный рогатый скот (части селезенки, печени, легких и лимфоузлов)

Bac.anthracis Крупный рогатый скот (селезенка, печень, лимфоузлы)

цессе культивирования гемолитические свойства не проявились, как и до введения антгельмннтика.

В результате проведенных исследований изучаемые препараты оказывали влияние на способности к ферментации отдельных уело-

водов, изменяя их биохимическую характеристику. Изучение проводилось в динамике в течение 24 часов с интервалом в 6 часов.

При одновременном изучении действия антибиотиков и изучаемых антгельминтных препаратов показали разные значения. У St.aureus с беламизолом наблюдалось постепенное повышение чувствительности к антибиотикам, использовавшимся в опыте, в то время как аверсект-2 не оказывал заметного влияния на изменение чувствительности данной культуры. Что касается беламизола, то он повышал чувствительность E.coli к ампициллину, левомицетину, тетрациклину и развивал устойчивость к канамицину и стрептомицину. А при культивировании E.coli с аверсектом-2 наблюдалось незначительное колебание изменение зоны задержки роста микробной культуры. Из вышеизложенного следует, что при культивировании патогенных микробов с антгельминтиками происходило изменение чувствительности и устойчивости их к антибиотикам.

При изучении антгельминтиков на динамику роста установили, что беламизол приостанавливал рост и размножение стафилококка, а аверсект-2 стимулировал рост этих микробных клеток. У E.coli под влиянием беламизола уровень роста был ниже, чем под действием аверсекта (рис. 1).

Рисунок 1

вкэигеиз. Влиямге антгелышнтика, антибиотиков на рост шкроорганизмов

-а-погмюМ№а/ъный(37С, рН 7,4). в^ипеде (контроль)

--пошноминал>ный(37С, рН 7,4).

Б^игеиБ с ааерсектом ——пол»мэм»*а11>«лй (Э7С.рН 7.4).

З^игеиб+аеерсект+ампицилгм -*-полтом»ал,«>1й(37С. рн7,4)

Б1 аигеи5-*-аверсе1сг* рифампицигоч

18 ч. 24 ч.

интервал времени -

Одновременное действие аверсекта-2 и антибиотиков на St.aureus в жидкой среде имело разное значение. Так, под влиянием ампициллина уровень роста выше по сравнению с контрольными данными, а рифам-пициллин замедлял рост культуры и действовал угнетающе (рис. 2).

Рисунок 2

SI жт» no№*«wwe/MiA юлро* (t 37Q pH7AteOOe5V • -

■—SS*Mt Ли—«»—wliifcrtpSTÇ рН7.< teQ 0.85V 1*£»ил«ЮГ1*| S4tfaus.nwo4i«№4fc«'i<t37üpH7.4.teg 0,85%)

E.coli. ГЬ^авчмцы'цснгрд»^ 37C. pH 7 A. NaО 0.85%) ■—Е.со*.ГЪ«мсм*шммр37С;рН7ЛМэС|

0.86%) 1%Бвламоолм *—E-cdl rbw«»Wbt*w(l37Q|iH7.«.Mia

0.85%)1%Аисамг_

роста

интервал времени

Влияние ивертина на биологические свойства микробных

культур

Изучены следующие виды микробов: St.aureus, E.coli, L.monocytogenes, S.typhimurium, сибиреязвенный вакцинный штамм 55 и Str. pneumoniae.

При наблюдении культурально-морфологических свойств под влиянием ивертина отметились незначительные изменения формы, расположения микроорганизмов, образование осадка и помутнение среды. Под действием ивертина у данных культур происходила временная утрата и восстановление гемолитических свойств, кроме' Str. pneumoniae, который не изменял свойство вызывать гемолиз под влиянием антгельминтиков.

Исходные культуры вызывали проявление изменчивости отдельных элементов биохимической активности, т.е. в одном случае подавление, в другом случае ее восстановление.

Изменение активности антибиотиков у некоторых микробных культур под влиянием препарата ивертина происходило в разные периоды культивирования. Это связано с тем, что микроорганизмы имеют плазмиды резистентности, ответственных за выживание бактерий в организме животного. В данном случае плазмида R, контролирующая множественную устойчивость к лекарственным препаратам, в том числе к антибиотикам.

Рост изучаемых культур в виде увеличения бактериальной массы (E.coli, S.typhimurium, L.monocytogenes, Str.pneumoniae) благоприят-

но проявлялся под воздействием однопроцентной концентрации ивер-тина. При этом не отмечалось подобного стимулирующего действия на сибиреязвенный вакцинный штамм 55, и наблюдалось достоверное угнетение роста St.aureus данным антгельминтиком.

Таким образом, культивирование патогенных микробов с антгель-минтиками показало заметное их влияние на изменение биологических характеристик микробных культур: Антгельминтики могут быть использованы в качестве санирующего средства при микробоноси-тельстве у животных и в то же время могут спровоцировать инфекционный процесс (Третьяков A.M., 2001).

2.2.3. Влияние гормональных препаратов на изменчивость патогенных микробов, выделенных из половых путей животных

В последнее время представляет интерес влияние биологически активных веществ, в частности, гормонов на некоторые виды микроорганизмов.

Перед изучением вопроса влияния гормонов на микрофлору влагалища определяли его микробный фон. В нашем опыте животные были здоровыми, без патологических изменений в мочеполовой системе. У пяти исследованных коров из влагалища были выделены 5 микробных культур, которые впоследствии были идентифицированы как St.aureus и E.coli, которые в аспекте биологической активности не обладали патогенностыо у лабораторных животных. Из других видов микроорганизмов выделялись представители рода Basillus и ряд других облигатных представителей микрофлоры влагалища.

Применяли методику, которая основывается на определении активности антибиотиков методом диффузии в агар. Контролем служили культуры микроорганизмов, не обработанные гормональными препаратами. Так, в нашем опыте гормон дексаметазон подавлял рост золотистого стафилококка, а преднизолон угнетал его. Гормоны эст-рофан и преднизолон тормозили рост вакцинного штамма 55. Использованные в опыте гормоны (дексаметазон, эстрофан, преднизолон, адреналин, гидрокортизон) на рост E.coli, S.typhimurium и сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ не оказывали влияния. Подобные результаты были получены у Темпер Э.Е., Сколубович Г.В. (1999).

Гормон эстрофан не угнетал рост St.aureus, St.albus, S.typhimutium

(музейных и полевых штаммов) и St.aureus (4), E.coli (3), выделенных из влагалища коров, в то же.время подавлял рост L.monocytogenes, Bac.pseudoanthracis, Str.pneumoniae, S.pullorum.

За период роста бактерий были изучены их биохимические характеристики. И было отмечено изменение ферментативной активности взятых в опыт микроорганизмов под влиянием гормонов. После действия гормонов E.coli приобретал способность сбраживать инозит, сибиреязвенный вакцинный штамм СТИ - маннит. У микробной же культуры S.typhimurium не наблюдалось изменения ферментативной активности (табл. 2).

При изучении биохимических свойств после роста на среде, содержащий гормон эстрофан исследуемые культуры теряли способность изменять инозит, но приобретали свойство сбраживать сорбит. В то же время способность сбраживать орнитин утрачивали культуры, выделенные из объектов внешней среды.

Таблица 2

Биохимические свойства микробных культур под влиянием гормонов

Гормоны Гидрокортизон Декса-метазон Адреналин Преднизолон Эстрофан Контроль

Е coli

Глюкоза + + + + + +

Манит + + . + + + ■ +

Сероводород • +■ + + + + +

Инозит + + + + + -

S. typhimurium

Глюкоза + + + + ' + +

Манит + + + + ■ + +

Сероводород + + + + +

Инозит + + + + + +

Сибиреязвенный вакцинный штамм СТИ

Глюкоза + + + + +

Манит + + + + 1 + -

Сероводород + + + + + +

Инозит + + + + + +

Стафилококки и сальмонеллы проявляли высокую чувствительность к антибиотикам: тетрациклину, левомицетнну и пенициллину.

Стафилококки и сальмонеллы проявляли высокую чувствительность к антибиотикам: тетрациклину, левомицетину и пенициллину.

Таким образом, гормоны, применяемые в акушерской практике, оказывали влияние на изменчивость биологических свойств (биохимические и в отношении активности антибиотиков): в одном случае, стимулировали рост, в другом, угнетали. Поэтому при использовании гормонов в качестве стимуляторов половой деятельности необходимо учитывать их влияние на рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и их роль в формировании патологического процесса в полозых органах коров.

2.2.4.1. Биологические свойства штамма второй вакцины

Ценковского после 30 — летнего хранения в музее кафедры

БГСХА

Становится актуальным проведение ревизии биологических свойств сибиреязвенных вакцинных штаммов, находящихся в длительном хранении в микробных музеях кафедр вузов страны. Нами установлено сохранение биологических свойств у изучаемого вакцинного штамма Ценковского с проявлением способности ферментировать углеводы - инозит и манит, что не наблюдалось у сибиреязвенного вак-ццнного штамма 55, выведенного путем селекции. При изучении его чувствительности к антибиотикам установлено, что временная резистентность отмечалась к пенициллину и приобреталась чувствительность к полимиксину при концентрациях соли 0,05, 0,85, 8,5 % и рН среды 4,9 и 7,0. В биохимическом отношении оказалось, что вторая вакцина Ценковского при исследовании в течение 24 часов сбраживала маннит, сорбит, глюкозу и временно выделяла сероводород. Сохранялась остаточная вирулентность на белых мышах и капсулообразование.

Оптимал ьный рост второй вакцины Ценковского наблюдался при температуре 37°С, низкие температуры оказывали негативное влияние на его рост: При изучении рН среды стабильный рост был при рН 7,0, при этом изучаемая микробная культура росла при всех исследуемых рН среды.

2.2.4.2. Характеристика атипичных форм сибиреязвенных бацилл, выделенных из проб почв скотомогильников Бурятии

Были исследованы 60 проб почв, взятых с территории скотомо-

гилышков (50-летней давности). Все пробы отбирались из почвы на глубине 15-20 см по 20-30 г каждая в стерильные колбы. При многократных пересевах были отобраны 12 чистых снорообразующих культур. Был дополнительно произведен посев на питательную специальную среду для сибиреязвенного микроба, и из них выделены четыре микробные культуры под шифром: 2-В, 2-П, 3-Б, 5-У1, которые имели подобные характеристики по морфологическим, культуральным и антигенным свойствам сибиреязвенным микробам

Представляли собой крупные Гр+ спорообразующие палочки со слегка закруглёнными концами, капсул не образовывали, были слабо подвижными, чувствительными к пенициллину, кроме культур 2-В и 3-Б. Слабовирулентные культуры на МПА росли в виде колонии - округлой, нетипичной формы мелких и средних размеров, с неровными краями; молодые колонии были в виде пушистых снежинок. На МПБ было отмечено образование хлопьевидного осадка. На 10% кровяном агаре гемолиз эритроцитов отсутствовал. В постановке РИФ и РДП реакции были положительными. Рост отмечался у всех вышеперечисленных культур. Контролем служил сибиреязвенный вакцинный штамм-55.

При втгутрибрюшишюм заражении культура 5-У1 оказалась слабо патогенной для белых мышей. Культуры 2-В и 3-Б оказались непатогенными, поскольку после заражение этими культурами животные оставались живыми и выделить их из организма не удалось. Путем пассажировании 2-П удалось восстановить вирулентные свойства данной культуры.

. Культуры 2-В, 2-П, 3-Б, 5-У1 были отнесены к атипичным сибиреязвенным микробам. Установили широкий диапазон изменчивости выделенных из проб почв сибиреязвенных штаммов, вплоть до полной утраты ими вирулентных свойств, но с сохранением отдельных признаков, характерных для возбудителя сибирской язвы.

Таким образом, в почвах с сибиреязвенными захоронениями в Бурятии выявили сибиреязвенные микробы с изменёнными биологическими свойствами (авирулентные, бескапсульные с остаточной вирулентностью).

2.2.4.3.Изучение изменчивости свойств сибиреязвенного микроба штамма СТИ под влиянием антибиотика бициллин-3

Проведено изучение биологических свойств резистентного штамма B.anthracis вариант СТИ к бициллину-3. Характеристика биоло-

Таблица 3

Биологические свойства штаммов В;ап1Ьгас15 СТИ-1, В.агПЬгааБ СТИ, В.сегеив

Биологический тест Результат

Сибиреязвенный шт. Вас.атЬгас^Б вариант СТИ Сибиреязвенный шт. Вас.атЫаси вариант СТИ-1 В.сегеиз 504

Характер роста на агаре Хоттингера Я-Э- форма Я форма. Я форма

Характер роста на булъонеХоттингера Я-Б-форма Помутнение- Я- прозрачный Я- легкое помутнение

Окраска по Грамму . Гр+ ■ . Гр+ Гр+

Подвижность Диффузный рост на 3-е сутки Диффузный рост на 3-е сутки ' Диффузный рост на 3-есут.

Гемолитические свойства «-»до48 ч. Наблюдения «-» до 48 ч. наблюдения «+» через 18 ч.

Протеолитическая активность + + -

Лецитиназная активность - - -

Фосфатазная активность - - +

Пенидиллиназная активность: - рост при 50 ЕД. - рост при 10 ЕД. - - + +

Феномен «Жемчужное ожерелье» - 0,05 ЕД. - 0,5 ЕД. + + -

Проба с сибиреязвенным фагом «Гамма» МВА + • -

Специфическое свечение при окраске люминесцмруюшей адсорбированной сывороткой + -Н--Н-

Чувствительность антибиотикам (метод дисков) Резистентный к оксациллину амниииллнну. эритромицину, олеанломииину, бензилпеницил ли ну Резистентный к полимиксину Резистентный к карбопе-нициллину, оксациллину, ампициллину, полимиксину, бензилпени циллину

Определение МИ К бициллнна-3 Рост при концентрации 300 ед/мл Рост при концентрации 0.3-10"' ед/мл Рост при концнтрашш ' 300 сд/мл

Питательные по> ребкости* валинивисимыи валннзавненмьш прототроф

Нммунофермснг-ны"| анализ** - + -

Ила чми.зный акали I*** ■ рхОГ, рх02 рхОГ. рх02* рх()Г.рх02"

РПГА(с :жгшен-ным днагностнку-моч) + + -

14111 Л специф. - сиецмфмч. пс сглшыась

Реакция чрецшш т-щш (Дско.ш) - + -

Примечание: *- Питательные потребности определялись согласно методическим рекомендациям, разработанным в Иркутском противочумном институте «Методические рекомендации по определению питательных потребностей у штаммов В.айЬтасЁ».- Иркутск, 1982 г.

**- Использовали коньюгаты, полученные в лаборатории экологии возбудителей зоонозных инфекций Иркутского противочумного института.

***- Плазмидный анализ проводили в соответствии с методическими рекомендациями, разработанными в Иркутском противочумном институте «Методические рекомендации по обнаружению плазмидных ДНК у штаммов В.аПЪгасЁж-Иркутск, 1986.

гических свойств изучаемого штамма дана в сравнении с биологическими свойствами, взятыми в качестве контроля штаммов Bac.anthracis СТИ-1 и В.сегеиз 504Данные представлены в таблице 3.

Таким образом, на основании вышеперечисленных результатов в таблице 3 и результатов, полученных в процессе проведённых исследований, установлено, что у изученного штамма, кроме таксономических признаков характерных для вида В.anthracis, зарегистрировали атипичные биологические свойства, что могут быть результатом воздействия на клетки микроорганизма антибиотика (бициллин-3).

2.2.5. Изучение биологических характеристик патогенных микробов в период пребывания в условиях естественной; природной среды:

Изучение изменчивости биологических характеристик патогенных бактерий в естественной природной среде обитания имеет важное научное значение в конструировании модельных проектов, экспериментов и разработке прогнозов векторов вероятности.

Нами изучалась жизнеспособность микробных изолятов в течение 6 месяцев (зима, весна и лето) в нестерильных и стерильных условиях. Так как интенсивность обменных процессов и разнообразных биологических процессов находятся в тесной зависимости от температурных условий, опыты проводились в 3-х вариантах: при комнатной температуре (20°С), в термостате (37°С) и в полевых условиях.

Почвы экспериментальных участков содержали определенный набор химических веществ. По проведенным исследованиям установлено, что количественное содержание гумуса составило 2,45-2,95 %; рН среды почвы соответствовало 6,4-6,6; содержание подвижных форм по Мачигену составило Р,0,- 5,27 п К,0 -• 10,04 мг жв/100г почвы;

обменные основания: Са2*- 22,0 и Mg2+- 5,5 мг экв/ЮОг почвы. .

Выделение B.megaterium и сибиреязвенного вакцинного штамма 55 прекратилось через 4 месяца исследования, а у St.aureus и L.monocytogenes через 5 месяцев. Во время выращивания бактерий в стерильной почве, при различных температурах варьировала количественная характеристика микробов на 1 гр. почвы..При 37°С количество микроорганизмов в суточной культуре было гораздо выше, чем при 20°С. Данный результат указывает на то, что взятые для опыта культуры в большинстве своем относились к мезофильной группе. Хотя отдельные группы микробов, культивируемые при 20°С, обладали свойством психрофильности (табл. 4).

Таблица 4

Динамика количественной характеристики микробов в стерильных условиях культивирования (37°С, 20°С) на Ггр. ночвы

мес. т°,с St .aureus Е. coli S.typhi-Murium B.megaterium Lmonocy-togenes Вак.шг. 55

I 37 8x106 18x10° 15x10° 12x10° 3x10" 8xl0P

20 (5x10° 2x10" 13х106 6x10" 2x10° 3xl0f

П 37 6x106 4x10й 5x10° 5x10° • 14,5x10" 25xl(f

20 4,5x10" 3x106 . 2х106 3x10° 10x10° 14x10°

Ш 37 9x106 8x106 4x10° 6x10° 14x10° 26x10°

20 6x10Ь 7x10° 4x106 4x10" 12x10° 13x10°

IV 37 7x106 9x10й ЗхЮ6 4,5x10° 16x10" 21x10°

20 1x10" 6,5x10° lxlO6 3x10° 15x10° 15x10°

V 37 - 13x10" 12x10° - 2x10° -

20 2x10° 8x106 11x10° - - -

VI 37 - 3x1 tf 3xltf г 1x10° -

20 1x10° 1x10" 1x10° - - -

При изучении микробных культур в полевых условиях выделение бактерий было различным. Количество микробов зависело от при-родно-климагических условий. К весенне-летнему периоду численность микробных клеток опытного участка имела тенденцию к увеличению, связанную-с повышением температуры среды. И в то же время наблюдалось противоположная тенденция снижения численности и отсутствия роста в летний период. Это связано с активизацией биохимических процессов в почве, которые негативно отражались на росте и-размножении микробов (табл; 5).

' Таблица 5

Динамика количественной характеристики микробов в полевых условиях

месяцы Уч 1, в Уч. 2, в Уч.З, в Уч.4, в т.ч. Уч.5, в Уч.5 в

т.ч. т.ч. T.H.S.typhi- B.megaterium т.ч. т.ч.

St.aurcus Е coli Murium L. monocytogenes Вак.шт. 55

I , 1,5x10" 5x10ft 1,5x10" 3x10" 8x10" 2x10"

И 3,5x10° 1x10" 0,4x10" 1x10" 2x10" 1x10"

. Ill 4x10" 1x10" 2x10" 5x10" 2x10" 1,5x10"

IV 2x106 2,5x10" 1x10" 1x10" 12x10" 3x106

V 2x10" 3x10" 4,5x10" 12x10" 2x10" 13x10"

VI 4x10" 4x10" 3x10" 5x10" 6x10" 5x10"

Наибольшей вариабельностью биохимических свойств подвергались микробы, длительно культивируемые в,стерильной каштановой среднесуглинистой почве при температурах 20°С и 37°С, чем при культивировании в полевых условиях..Из этого следует, что исследуемые микробы в полевых участках, находились в естественной природной среде (табл. 6).

■.•-,■■■ Таблица .6

Уровень показателей вариабельности признаков биохимических * свойств патогенных микробов в различных условиях культивирования, в %

Наименование Культуры 20°C 37°C Участок

St.aureus 50 50 20

E.coli 60 70 30

S.typhimurium 50 20 30

B.megaterium . 40 50 40

L.monocytogenes 60 20 30

Сиб. вак. шт. 55 50 60 40

При изучении действия антибиотиков изменчивость проявлялась следующим образом. У St. aureus отмечалась чувствительность при 20°С к тетрациклину, эритромицину и высокую к левомицетину; при 37°С устойчивость была только к тетрациклину. Микробы, выделенные в полевых условиях, проявляли устойчивость к. пенициллину. Кишечная палочка, инкубированная при 20°С, оказалась устойчива к рпфампнциллину, при 37°С - к тетрациклину, с участка - к пенициллину н стрептомицину. S.typhimurium с участка проявляла устойчи-

вость только к стрептомицину. В.те§а1епит проявлял антагонистическое действие к перечисленным антибиотикам, кроме канамицина и леиомицетина при 20°С и 37°С. Культуры, выделенные в полевых условиях, были устойчивы к левомицетину и чувствительны к.кана-мицину. Листерии оказались устойчивы к левомицетину при 37°С, но чувствительность к данному антибиотику проявлялась при культивировании в полевых условиях. Сибиреязвенный вакцинный штамм 55 был устойчив к пенициллину, канамицину и левомицетину. Взятый с участка он был чувствителен к канамицину. и левомицетину.

Из литературных источников известно что, оптимальными для существования и размножения сибиреязвенного микроба являлись почвы, содержащие более 3-5 % гумуса с нейтральной или слабощелочной реакцией (Иванова Д.П. и др., 1985). Рост возбудителя ингибировалея в большей степени кислыми, чем щелочными условиями среды. По нашим данным, токсичным действием обладала каштановая почва по отношению к Вас.ап1Ыас18, Вас.те§а1епит, Ь.топосу1ю§епе8,.81.аигеи8. Очевидно, этот факт указывает на экологическую пластичность микробов, обеспечивающую выживаемость в среде с минимальным содержанием питательных веществ органического происхождения; На рост Е.соН, БЛурЫтипит среднесуглинистая каштановая почва не оказывала негативного влияния, т.к. она явилась оптимальным экологическим условием, которая давала возможность роста, размножения и резервации.

2.2.6. Влияние химических соединений на рост микроорганизмов.

При изучении действия этих соединений мы использовали концентрации, обычно применяемые при обеззараживании различных поверхностей. Происходило избирательное действие дезинфектантов' на исследуемые микробные культуры. Так при экспозиции 2 часа отмечено, что в основном губительное действие оказывали высокие концентрации, чем при экспозиции 24 часа. При изучении микробных культур по отношению к 60°С самые устойчивые (более 5 минут роста) к данной температуре оказались вегетативный сибиреязвенный штамм 55, Ь.топосу1ю§епе8, Б1.аигеи8 (табл. 7, 8)

В нашем опыте использованные дезинфектанты оказались эффективными в санаиии для вышеуказанных патогенных микробов на модельных участках и могут быть рекомендованы в целях санации пастбищных участков.

Таблица 7

Действие химических соединений на рост микроорганизмов

Наименование Культуры Концентрация, %

MCI NaOH Формальдегид

S.lyphimurium 0.125*-0.06** 0,Ш~ 0.125 '' ' 0,06*-0,125**

В. mesaterium 2*-0.5*<; 2*-0,5** 2=4), 125**

Е. coli ■ 0,25*-0.25** 0,2Si:-0,25*:f 0,125*-0.015*:;!

Вак.шт.55 0.5*-0.06** . 0,12:5*-0,125:5* 0,25*-0.25,:'*

L.tnonocytoszenes 0.03i;-0.03::* 0,5*-0,06:':' 0,015i:-0,125,:"s

St.aureus 0,03:'-0,03** 0,03 »-0,125** 0.015*-0.015**

Примечание: *- экспозиция 2 часа; **-экспозиция'24 часа. В таблице представлены последние концентрации дезинфицирующих веществ, при которой рост не отмечен.

Таблица 8

Влияние температуры (60°С) на рост микроорганизмов

наименование культуры Экспозиция, мин.

5 8 10 13 15 20 30 40- 50 60

S.typhi murium ■ + ■ - • - - -

В. megaterium- + - - - -

Ecoli + - - - - . -

Вак.шг.55 + + - - - -

Lmonocytog. + +

St.aureus +■ + + + + - - -

Примечание: «+» наличие роста; «-» отсутствие роста

ВЫВОДЫ

1. Патогенные бактерии в зависимости от антропогенно-экологических факторов подвержены широкой фенотипической изменчивости адаптивного характера (морфо-культурального, биохимического и биологического свойств).

2. Аитгельминтные препараты, широко используемые в практике противомнвазионных мероприятий, с одной стороны, обладали способностью подавлять рост и размножение патогенных бактерий (белам и зол - St.aureus, E.coli, ивертин -сибиреязвенный вакцинный штамм 55 и St.aureus); с другой стороны стимулировать рост и размножение (аверсект-2 - St.aureus. E.coli, ивертин - E.coli, S.lyphimurium. L.rnonocytogenes n Slr.pncumoniae) с сопутствующей потерей и прпоб-

ретением способности сбраживать различные углеводы.

3. В полевых условиях культивирования у условно-патогенных и патогенных микробов (St.aureus, S.typhimurium, B.megaterium, L.monocytogenes, сибиреязвенный вакцинный штамм 55) через 6 месяцев наблюдался широкий спектр изменчивости ферментативной активности, связанной с выработкой ферментов адаптивности, обеспечивающей экологическую пластичность (потеря способности сбраживать одни углеводы и приобретение способности сбраживать другие углеводы).

4. При культивировании в полевых условиях у патогенных микробов наблюдалось изменение устойчивости и чувствительности к антибиотикам, связанные с изменениями Я-фактора.лекарственной устойчивости.

5 Каштановая среднесу глинистая почва Бурятии обладает токсичным действием по отношению к Bac.anthracis штамма 55, L.monocytogenes, St.aureus, B.megaterium.

6. Гормональные препараты оказывали модуляционное влияние нарост и размножение представителей микрофлоры влагалища коров. При использовании гормонов в качестве стимуляторов половой деятельности необходимо учитывать их влияние на рост патогенных микроорганизмов.

7. Установлен широкий диапазон изменчивости фенотипических характеристик сибиреязвенных микробов, выделенных из проб почв скотомогильников Бурятии (атипичные формы).

8. После длительного хранения (30 лет) в условиях музея кафедры у штамма второй вакцины Ценковского сохранились его биологические свойства, характерные для Baaanthracis (вирулентность, культурально-морфо-логические, серологические свойства и отношения к антибиотикам).

9. Под влиянием антибиотика бициллин-3 вакцинный штамм CTV1 Bac.anthracis приобрел атипичные биологические свойства (рост на бульоне и агаре Хоттингера, фосфатазная и протелиотическая активность) при сохранении таксономических признаков, характерных для вида B.unthracis.

10. Общепринятые дезинфектанты могут быть использованы в санации почвы с резервирующими в них патогенными микробами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы работы могут быть использованы:

1. в идентификации патогенных микробов, выделенных у животных - микробопосмтсден, подвергнутых дегельминтизации и санации атиоиотнкамп (технологическая карта «Календарный план

комплексного и систематического проведения диагностических и ве-теринарно-профилактических мероприятий в населенных пунктах Республики Бурятия»);

2. для выявления спектра изменчивости патогенных микробов в полевых условиях в целях контроля за потенциальной патогенностъю;

3. в целях диагностики атипичных форм сибиреязвенного микроба, выделенного из организма животных и почв в регионе озера Байкал;

4. дезинфицирующие средства (формальдегид, соляная кислота и щелочь) в рекомендуемых концентрациях могут быть использованы для оббезараживания животноводческих помещений, скотомогиль-

" пиков и пастбищ в профилактических целях;

5. в учебном процессе при чтении лекций и проведен ии лабораторно-практических занятий со студентами факультета ветеринарной медицины.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИЙ

1. Алексеева СМ., Хайдапова Р.Б., Цыдыпов В.Ц. Влияние физических факторов на изменчивость показателя чувствительности к антибиотикам // Материалы VI научно-практической конференции.-Троицк, 2002.- С.3-4.

2. Алексеева СМ., Цыдыпов В.Ц. О влиянии гормональных препаратов на рост некоторых патогенных бактерий // Материалы международной научно-производственной конференции по актуальным вопросам агропромышленного комплекса.- Казань, 2003.- С.3-4.

3. Алексеева СМ., Иванова О.М., Цыдыпов В.Ц. Рост некоторых возбудителей инфекций под действием препарата ивертина на территории оз. Байкал // Проблемы и перспективы развития агропромышленного комплекса Байкальского региона.- Улан-Удэ, 2003.- С.20-23.

4. Иванова О.М., Алексеева СМ., Цыдыпов В.Ц. Влияние авер-секта-2 на активность антибиотиков // Материалы международной конференции.- Улан-Удэ, 2003.- С. 116-117.

5. Алексеева СМ., Иванова О.М., Цыдыпов В.Ц. Влияние препарата антгельминтика ивертина на рост некоторых возбудителей ин-фекций//Материалы международной научно-практической конференции.- Ульяновск, 2003.- С. 204-205.

Лицензия ЛР № 021274 от 26 марта 1998 г.

Подписано в печать 20. 02. 2004. Формат 60x84 1/16 Бум.тип. Усл.печ.л. 1,5. Уч.-изд.л. 1,3- Тираж 100. Заказ № 167. Цена договорная.

И адат ел ьс г во ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Фипиппова». 670024, Улан-Уд-), ул. Пушкина, 8.

Актуальность темы. Все расширяющиеся антропогенные влияния на природную среду обуславливают изменение среды существования и негативно отражаются на состоянии биоценозов живых существ, влияя на их биологию, которая сопровождается гаменением обмена веществ и, в конечном счете, характера адаптивности к среде существования. Индикатором се является изменчивость биологических характеристик, в частности возбудителен инфекции, у которых наблюдается появление атипичных форм.

В то же время происходят неконтролируемые изменения в молекуле генома микроорганизма, что обуславливает влияние на биологическую характеристику и усиления вирулентности, патогенности при переходе из одной экологической среды в другую (при смене хозяев). Примером может послужить трагедия байкальской нерпы, когда вирус чумы плотоядных при переходе в другой организм изменил свои видовые характеристики, и в результате появился новый вариант (Osterhaus Л., 1988).

По данным литературы, фенотипические признаки проявляются в отдельных случаях у бактерий лишь в 20% генетического потенциала (генотипа). Поэтому феногипически обнаруживаются не все потенциально возможные проявления генотипа. Изменчивость генотипа и изменчивость фенотипа - принципиально разные вещи.

Наблюдаемые изменения под воздействием различных антропогенно-экологических факторов - это реализация непроявленных потенциальных генетических характеристик.

Условия природной среды региона озера Байкал со своей изменчивой природной климатической характеристикой могут способствовать проявлению изменений биологических свойств организмов: во-первых, резистентности макроорганизма; во-вторых, биологической характеристики патогенных микробов в сторону усиления их вирулентности, что требует систематического и постоянного контроля за биологической шменчивостью в целях разработки параметров диагностических методов в условиях конкретного региона и под влиянием антропогенных факторов. В частности, влияние биологически активных препаратов (антгельминтики, гормоны, антибиотики).

Цели исследований. Провести изучение изменчивости биологических характеристик патогенных микробов, выделенных на территории Бурятии у больных и павших животных, под влиянием абиотических и биотических факторов. Также их адаптивные и экологические потенциалы. Задачи исследований:

1. изучить биологическую характеристику возбудителей инфекций, встречающихся на территории Бурятии;

2. определить влияние антгельминтиков на биологические свойства патогенных микробов;

3. рассмотреть влияние гормонов на рост и развитие патогенных микробов;

4. исследовать биологические свойства атипичных форм сибиреязвенного микроба, выделенных в регионе озера Байкал;

5. выявить изменение феиотипических характеристик патогенных микробов в полевых условиях культивирования.

Научная новизна. Впервые па территории Бурятии выявлены из почвы скотомогильников атипичные формы сибиреязвенного микроба. Рассмотрена изменчивость бактерий под влиянием гормональных и антгельминтных веществ в динамике роста микроорганизмов с позиции ветеринарной науки. Изучены их биологические и экологические характеристики, проанализировано влияние факторов внешней среды на патогенные микроорганизмы в их естественной среде обитания. Теоретическая и практическая значимость работы. 1. Заложены теоретические основы изучения изменчивости биологических свойств патогенных микробов под влиянием антгельминтиков, гормонов и антибиотиков.

2.Материалы диссертации использовались при санации организма животных от патогенных бактерий сочетанными антибиотиками.

3. Разработаны методические рекомендации по научно-обоснованному одновременному проведению дегельминтизации и микробной санации организма.

4.Рсзультаты исследований могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах микробиологии, вирусологии и ВСЭ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1 влияние анггельминтиков на изменчивость биологических свойств патогенных микробов;

2 действие гормонов на рост, размножение и изменение фенотипических характеристик микробных культур;

3 тменчнвость свойств сибиреязвенного микроба;

4 биологические характеристики патогенных микробов в период существования в условиях естественной природной среды.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на VI научно-практической конференции «Перспективные развития научных исследований молодых ученых и специалистов Урала и Сибири» (Троицк,2002); Международной научно-практической конференции, посвященной 130-летию образования Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (Казань, 2003); научно-практической конференции молодых ученых и аспирантов «Проблемы и перспективы развития АПК» (Улан-Удэ, 2003); Международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию профессора В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2003); Международной конференции, приуроченной к 60-летию образования факультета ветеринарной медицины (Ульяновск, 2003).

Публикации. Основные результаты научных исследований отражены в 5 печатных работах.

ВЫВОДЫ.

1. Патогенные бактерии в зависимости от антропогенно-экологических факторов подвержены широкой фенотипической изменчивости адаптивного характера (морфо-культурального, биохимического и биологического свойств).

2. Антгельминтные препараты, широко используемые в практике противоинвазионных мероприятий, с одной стороны, обладали способностью подавлять рост и размножение патогенных бактерий (беламизол - SLaureus, E.coli, ивертин - сибиреязвенный вакцинный штамм 55 и St.aureus); с другой стороны, обладали способностью стимулировать рост и размножение (аверсект-2 - St.aureus, E.coli, ивертин - E.coli, S.typhimurium, L.monocytogenes и Str.pneumoniae) с сопутствующей потерей и приобретением способности сбраживать различные углеводы.

3. В полевых условиях культивирования у условно-патогенных и патогенных микробов (St.aureus, S.typhimurium, B.megaterium, L.monocytogenes, сибиреязвенный вакцинный штамм 55) через 6 месяцев наблюдался широкий спектр изменчивости ферментативной активности, связанной с выработкой ферментов адаптивности, обеспечивающей экологическую пластичность (потеря способности сбраживать одни углеводы и приобретение способности сбраживать другие углеводы).

4. При культивировании в полевых условиях у патогенных микробов наблюдалось изменение устойчивости и чувствительности к антибиотикам, связанные с изменениями R-фактора лекарственной устойчивости.

5 Каштановая среднесуглинистая почва Бурятии обладала токсичным действием по отношению к Bac.anthracis штамма 55, L.monocytogenes, St.aureus, B.megaterium.

6. Гормональные препараты оказывали модуляционное влияние на рост и размножение представителей микрофлоры влагалища коров. При использовании гормонов в качестве стимуляторов половой деятельности необходимо учитывать их влияние на рост патогенных микроорганизмов.

7. Установлен широкий диапазон изменчивости фенотипических характеристик сибиреязвенных микробов, выделенных из проб почв скотомогильников Бурятии (атипичные формы).

8. После длительного хранения (30 лет) в условиях музея кафедры у штамма второй вакцины Ценковского сохранились его биологические свойства, характерные для Bac.anthracis (вирулентность, культурапьно-морфологические, серологические свойства и отношения к антибиотикам).

9. Под влиянием антибиотика бициллин-3 вакцинный штамм СТИ Bac.anthracis приобрел атипичные биологические свойства (рост на бульоне и агаре Хоттингера, фосфатазная и протелиотическая активность) при сохранении таксономических признаков, характерных для вида B.anthracis.

10. Общепринятые дезинфектанты могут быть использованы в санации почвы с резервирующими в них патогенными микробами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы работы могут быть использованы:

1. в идентификации патогенных микробов, выделенных у животных -микробоносителей, подвергнутых дегельминтизации и санации антибиотиками (технологическая карта «Календарный план комплексного и систематического проведения диагностических и ветеринарно-профилактических мероприятий в населенных пунктах Республики Бурятия»);

2. для выявления спектра изменчивости патогенных микробов в нолевых условиях в целях контроля за потенциальной патогенностью;

3. в целях диагностики атипичных форм сибиреязвенного микроба, выделенного из организма животных и почв в регионе озера Байкал;

4. дезинфицирующие средства (формапьдегид, соляная кислота и щелочь) в рекомендуемых конце!гграциях могут быть использованы для оббезараживания животноводческих помещений, скотомогильников и пастбищ в профилактических целях;

5. в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами факультета ветеринарной медицины.