Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Вирулентные иммуногенные свойства пастерелл

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ имени К.И. СКРЯБИНА

На правах рукописи

САШ1РА АЕДЕЛЬ КЕРИМ АЛИ

ВИРУЛЕНТНЫ? ! ШШУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ПАСТЕРЕЛЛ

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, викология и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ ■

диссертации на соискание ученой оилени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1991

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии имени К.И. Скрябина и Каирском университете Арабской Республики Erwies.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

БУРЛАКОВ В.А.

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук, профеооор

СИДОРОВ U.A. - кандидат ветеринарных наук, доцент ИАСШОВ H.A. •

Ведущая организация - Всесоюзный ордена Ленина научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Защита диссертации состоится V " февраля 1991 года в

/О часов на заседании специализированного совета K-I20.36.05 по защите диссертации на соискание ученой степени кандидат . наук в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии им. К.И, Скрябина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, евл. 377-93-83)»

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Академии. Автореферат разослан " я января 1991 года>

Ученый секретарь специализированного совета-

Федосеева Т.Н.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность теш. Паетереллезом болеют различные виды домашних и диких животных. Наиболее часто вспышки пастереллеза регистрируют в птицеводческих хозяйствах, на фермах крупного ро- -гатого скота и пумных зверей. Пастереллез в европейских стрз-нах вызывается возбудителем 3 разных иммунологических типов (А, В я Д по капсульному антигену) РавЪеигеПа тиЛ^схИйа . а на африканском континенте зарегистрирован и еще один тип возбудителя пастереллеза - тип Е. Однако, дифференциация разных иммунологических типов во всех странах довольно затруднительна. Сведения о вирулентности и накоплении пастеролл в органах и тканях различных нивотных противоречивы. Антигены, обуславливающие защитные свойства, являются предметом дискуссий исследователей, и вакцинные препараты в ряде стран, в том числе СССР, готовятся из одного только типа В Р.хт11;ос1аа . Pasteurella Ьаетоииса , ранее относимая к возбудителям пастереллеза исключена из данного семейства и в настоящее время относится к другому семейству бактерия - пастереллоподобннх. •

В целом противопастереллеэнне биопрепараты, готовящиеся биопроншленностью, несовершенны и не обеспечивают диагностику и профилактику заболевания политиповой природы.

На основании изложенного, исследования гто изучению иммунобиологических свойств различных штаммов типов А, В.и Д пи1Ъос1йа являются актуальными.

Цель-и задачи исследования, целью работ:: являлось сравнительное изучение иммунобиологических свойств различных шта»&юв р.шЯЬосааа . 3 этом плане реаэлись следующие задачи :

Г. Изучить распределение возбудителя в органах и тканях '

- г -

экспериментально зараженных животных.

2, Определить динамику показателей общего белка и глобулинов у цыплят, привитых различными типами вакцин.

3. Изучить иммуногенность различных типов вакцинных ' препаратов пастереллеза.

Научная новизна. Изучены вирулентные свойства различных штаммов паетерелл 3 типов, их накопление в различных органах и тканях птиц, установлена связь между уровней белка, показателями глобулина, имиуногенностыо и антигенностыо различных типов вакцинных препаратов.

Практическая-ценность работы. На основании проведенных исследований определены минимальные летальные дозы p.mltocida различных серотипов для мышей и цыплят. Установлены органы и ткани (печень, легкое) с максимальным накоплением паетерелл для отбора в качестве патматериала с целью проведения бакдиагности-ки заболевания. Даш рекомендации по использованию ыуяаданого штата, с целью изготовления вакцины.

Апробация работы. Материалы доложены и одобрены на научной конференции Каирского ветеринарного факультета и методической конференции MBА.

Публикации. По теме диссертации сдана в печать.для публикации в трудах Каирского ветеринарного факультета статья "Вирулентные свойства P.nultocida типов А, В и Д" и подготовлена статья для публикации в трудах МВА "Иммуногенность образцов вакцинных препаратов из вирулентных, мутэнтных и си . штаммов P.nultocida ;

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на IOI странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственнчх исследований, обсуждения,

выводов и предложений. Список использованной литературы включает публикации по тематике исследований. Материалы иллюстрированы 12 таблицами.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период 1987-1990 гг. в соответствии с государственными планами научных исследований в Каирском ветеринарном факультете и на кафедре микробиологии, вирусологии и биотехнологии Московской ветеринарной академии.

В лабораторных исследованиях по изучении вирулентных свойств, накоплению пастерелл в органах и тканях, иммунобиологических особенностей различных атаммов Р.шиИ;ос1йа использовано 265 белых мышей, 40 кроликов, 25 морских свинок и 250 цыплят 110-150-дневного возраста. В исследовательской работе использованы таамнн пастерелл, полученные из коллекций Всесоюзного ордена Ленина научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко и Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарии* препаратов : № 8683 (тип А), К» 681 (тип В) и Т-80 (тип Д). Также проводились исследования с использованием мутангного, СУ и вирулентных штаммов Х-73 (5:А), Р-1059 (8:А) и печень-361 (9:А), хранящихся в коллекции Каирского ветеринарного факультета. Последняя группа штаммов била классифицирована не по капсульному, а соматическому антигену. Пастерелл« 2нр?тива-ли в оптимизированном переваре Хоттннгера от б до 24 часов при +37°С. Концентрацию микробных тел в материалах определяли различными- методам:; : по стандарту мутности спектрофотометрически пли высеванч различных разведет! на плотные -и жидкие питательные среды, или инокуляцией материалов этих разведений белым .

мышам. Четырем белым мытам инокулировали подкожно по 0,5 мл

-Т -ТТ

разведений материалов от 10 до 10 . Эти же разведения

с

материалов параллельно вносили в ^ сосуда в питательными средами по 1,0 мл. Наблюдение за животными при отсутствии гибели вели в течение 7 дней. При наличии роста в питательных средах проводили микроскопию мазков, окрашенных по Граму или Романовскому-Гимза. Аналогичным образом определяли концентрацию пастерелл в различных тканях животных. Предварительно готовили 10$ суспензии органов на солевых растворах. Концентрацию микроорганизмов пересчитывали на I гр или мл исследуемой ткани и выражали-в ЛД (БОЕ) 50/гр(мл).

При изучении иммунобиологических свойств штаммов и вакцинных препаратов были использованы три группы по 20 цыплят в в каждой 9-ти недельного возраста. Каждая группа была разде-. лена на 7 подгрупп А, В, С, Д, Е, Г и 1. Дополнительно по четыре цыпленка аналогичного возраста и порода содержались в качестве контроля в каждой группе. Каждая подгруппа содержалась отдельно в чистых помещениях. Подгруппы А-Д были заражены подкожно 10-кратными разведениями 18 часовых на мозго-сердечном бульоне культур каждого материала,: мутанта, СУ или вирулентных штаммов в дозах Ю8,. Ю7, 10б, Ю5, Ю*\ Ю5 и 500 микроорганизмов.

Определение сывороточных белков.

Для определения количества белка в опытных сыворотках использовали классический метод с биуретовсй пробой. Использовали следующую методику, применяемую в ветеринарных центрах Каира: к 0,1 мл тестируемой сыворотки в проЕирки добавляли .1,9 мл 95% раствора сульфида натрия, и пробирку переворачивали 3 раза для тщательного перемешивания. Преципитат образовался

сразу же и был отделен центрифугированием при 3000 об./мин. Супернатант удаляли и к осадку добавляли 2 мл рабочего реагента Биурета, хорошо перемешивали и оставляли на 30 минут. За это время содержимое пробирок взбалтывали дважды для полного растворения. Через ЗСМО минут измеряли экстенцию растворов на фоне биурэтового раствора в спектрофотометре при длине волны 550 нм. В качестве стандарта 0,1 мл 1% раствора альбумина в 0,5 м с рН= 7,4 и добавляли 1,9 мл биуретового реактива. Процент иммуноглобулинов в исследуемой сыворотке определяли делением экстенции проб сыворотки на экстенцию стандарта.

Серологические тесты.

РИГА.

Абтоклавировэничй экстракт разводили фосфатно-буфер-ныы солевым раствором и соединяли в' равных объемах с 2,5% овечьими эритроцитами и помещали в колбу. Колбу выдерживали в водяной бане при температуре 3?°С в течение 3-х часов. Затем сенсибилизированные эритроциты промывали фосфятно-буферным со-лсеым раствором. В конце концов эритроциты осадили путем центрифугирования при 500 g в течение 20 минут. 0,33 взвесь сенсибилизированных клеток в фосфатно-буферном солевом'растворе использовали в качестве антигена. Удвоенные разведения исследуемых сывороток в пределах от 1:10 до 1:1280 били разлиты

''К

по 0,05 мл (50 кгл) в микрогитрационных пластинках для реакции гемагглютинации. К каждому раз^сдг^ню пмворотки добавляли равное количество (0,05 ил) 0,3£ взвеси сенсибилизированных эри-' тропитов. В кажднй комплект били включены два контроля -сенсибилизированное эритроцит.* плюс разбавитель й несенсибили-зировэнине ЭРП?Р0ДКТ7 с 'ЛССЛ-Л^ГвЧЕОЯ сывороткой. Пластинки

- б -

оставляли на ночь при комнатной температуре и через 18-20 часов учитывали результаты. ;

ЭЛИЭА-мэтод (Маршал и др.. 1981)

Бактериальную взвесь разбавляли до коэффициента поглощения 1,0 при 540 нм на спектрофотометре. Клетки разрушали'ультразвуком (до 6С$) в течение 50 минут на ультразвуковом Дисмембрато-ре-300. Обработанную ультразвуком суспензию цельных клеток хранили при температуре 4°С. Антиген разбавляли 1:4 буфером и использовали для нанесения в лунки пластинок (100 лунок-пластинок). Закрытые пластинки инкубировали в течение 24 часов при температуре 37°С и трижды промывали твин-80-фосфатно-буферныц раствором (ФБТдд). Затем в лунки добавляли сйворотки, разведенные в РВ^д, включая негативный и позитивный контрольные варианты сывороток, и инкубировали пластины при температуре 3?°С в течение 2 часов. За этим следовала трехкратная промывка раствором РВТ£д, после чего добавляли в 100 лунок раствор 1:400 кроличьего антикуриного иммуноглобулина, нонъюнгированно-го щелочной фосфотазой,- и пластины инкубировали еще 2 часа при температуре. 37°С. Промывка раствором РВТд0 повторялась трижды. Затем добавляли во все 100 лунок раствор субстрата (1мг р-нит-рофенилфосфата/мл субстратного буфера), после чего в течение одного часа наблюдали'за изменением интенсивности окраски, затем останавливали реакцию, добавлением 2 К раствора гидроокиси натрия. Реакцию учитывали микровлиэным ридером при 405 ни на фоне контроля (только раствор субстрата).

Интерпретация результатов.

Среднее значение абсорбционной способности сыворотки нормальных кур (негативный контроль), с трехкратным превышением отклонений от этих значений рассматривали в качестве показа-

теля позитивности для испытываемых образцов сыворотки.

Статистические методы обработки результатов.

Титры вирулентной активности (ЛД^) определяли по методу Леей и МиепсЬ. (1938).

Титры сывороток выявляли в РИГА и ЭЛИЗА-методом и выражали в log2 . При определении концентрации бактерий в культурах или суспензий органов проводили высевы 10-кратных разведений материалов на агаровые среды, проводили подсчет вырастающих колоний и вычисляли среднеарифметические показатели.

2.2. Результаты исследований.

Вирулентные свойства.

Определяли вирулентность для мышей свеких культур бактерий и хранившихся при 0 - и в течение 21 дня; также провели исследования по изучению вирулентности для мышей пастерелл, пассированных на мясном агаре (10 пассажей без отбора колоний или каких-ллбо специальных методов селекции) и суспензий тканей от павтлх после экспериментального заражения животных. Вирулентность была обусловлена введением 10-500 бактерий из свежеполученных культур и суспензий тканей кивот-нюс, пав'тех после экспериментального подкожного заражения. Как интактные, так и гнотобноткческие мыгаи погибали в период от 12 до 72 часов после инокуляции испытуемых материалов. Патоло-гоанатомическке изменения у павших вдеей регистрировали обычно в легких (гиперемия, отек) и в виде геморрагий на слизистых кичечника у ютэй, погибающих в более поздние сроки (48-72 часа). В процессе 10 пассаже" но МПА штаммы всех типов пастсрзлл резко снизали или вообще утрачивали свои вирулентные свойства. ■ Пастэреллн всех типов б:ш! кпдо розяотевтна и плохо сохрани-

лись при температуре 0 - ■ и даже при -Г4°С. Вирулентность хранившихся культур проявлялась при инокуляции подкожно 50-1000 бактериальных тел. Отмечали значительное накопление пастерелл в крови, печени, селезенке и легких кроликов и кур, пасших после подкожной инокуляции 10^'°- 106,° мышиных ЛД50> Морские свинки проявляли большую резистентность к инокуляции массивных доз бактерий, погибали от подострого течения заболевания' на 3-5 суток (поздние сроки), с чем, вероятно, и связано незначительное накопление вирулентного возбудителя в печеночно ткани.

В последующем были проведены исследования по определению вирулентности пастерелл типов А, В, Д для кроликов, морских свинок, кур и мышей, как интактных, так л иммунизированных двукратно культурой, инактивированной 0,4% формалином, при' инокуляции им внутримышечно 2,200 и 2000 бактерий из свежбпо-лученяых культур. Типы А, В, Д вирулентны для мышей, кур и кроликов при внутримышечной инокуляции в дозах 200 и 2000. -микробных тел из свежепо'лученных культер. .Морские свинки проявляли больную устойчивость и часть их выживала при инокуляции 2000 микробных тел, а 200 микробных тел типов А и В вообще не,вызвали заболевания. •

•Данные опытов демонстрируй! кимуногенкув. активность культур типов А и В, йнактивированных формалином, причем иммунизированные мыши были устойчивы даже к инокуляции больших доз вирулентных пастерелл. Тип Д в этих опытах не обладал имыуногенннми свойствами, что создает проблемы выбора штаммов при изготовлении вакцин из данного типа.

Подкожное введение 500 бактериальных

клеток вирулентных египетских штампов приводило к гибели 60$

инфицированных мышей в течение 48-72 часов. Дозы от 1С)' до 10® бактериальных клеток обуславливали гибель 100$ инфицированных мылей спустя 18-43 часов после заражения. Цутантный штамм не вызывал гибели и общих расстройстз у опытных животных. Штамм СУ был патогенным для мышей, но в меньшей степени, чем вирулентный штамм: при инфицировании мышей в дозах 500-1000 бактерий гибели не отмечали, и только 2 из 10 мышей, зараженных в дозе 10^ бактерий погибли 96-120 часов спустя после инокуляции.

Таким образом, вирулентность изучаемых штаммов колебалась в максимально допустимых пределах.

В печени, легких и селезенке птиц пастереллы. различных по вирулентности штаммов накапливались в более высоких концентрациях, чем в крови; причем бактерии могли быть выявлены в органах уже через 35 минут после внутривенной инокуляции. Отмечено, что чем выше вирулентность, тем выше концентрация бактерий в органах и наоборот.

- • Авирулентный.(ыутантный) и слабо вирулентный (СУ) штаммы через 72 часа после инокуляции в органах и тканях выявлять не удавалось. Дозы вирулентных штаммов от 5 х I02 до 10^ вызывали гибель 25-75% цыплят в течение 48 и 120 часов после инъекции; дозы 105,° БОЕ и более вызывали 100% гибель цыплят.

Мутантннй штамм был авирулентен для цыплят даже при инокуляции подкожно MauOKs;:i:x доз пастерелл. Штамм СУ мог вызывать гибель отдельных цыплят лита при инокуляции IÜO млн. бактериальных клеток.

Антигенные свойства вакцинных препаратов.

Через 2 недели после вакцинации (первое введение) имело место существенное увеличение общего белка в сыворотке цыплят,

привитых живыми вакцинами (на 1,1-1,7 гр%). Через 2 недели после ревакцинации штаммом СУ уровень сывороточных белков продолжал возрастать (до 7,6 гр'/э) с последующим постепенным снижением до близких к исходным на 12 неделе.

Ревакцинация мутантным штаммом вызвала снижение уровня белка через 2 недели (на 1,4 гр?) с последующим ростом этого показателя до 6,4 (или) через 8 недель; даже через 12 недель у этой группы цыплят общий белок сыворотки на 0,6 гр% превышал показатели в контрольной группе.

Уровень сывороточного белка через 4 недели после инокуляции инактивированной масляно-адъювантной вакцины был близок к его показателям до вакцинации, понижался на 0,9. гр$ через 2 недели после ревакцинации, но превышал его, во все последующие сроки исследования на 0,7-1,5 гр%.

Таким образом, было отмечено, что более резкое, но непро-доджительное (4-6 недель'после ревакцинации) повышение уровня общего белка имело место при вакцинации и ревакцинации цыплят штаммом СУ. После ревакцинации мутантным штаммом и масляно-адъювантноЯ вакциной непрожолжителькое снижение уровня белка в последующие сроки компенсировалось и дзке превышало показатели контроля при окончании опытов.

Показатели общих иммуноглобулинов в сыворотке этих групп коррелировали с показателями белка- в сыворотках. Так, высокий уровень иммуноглобулинов в сыворотке отмечен на 2-ой неделе после вакцинации СУ итаммов (2.336' гр%) и на 8-ой неделе после'вакцинации мутантным штаммом (2.075 гр'Й). После вакцинации масляно-адъювантной вакциной максимальный уровень полных иммуноглобулинов (2.169 гр%) наблюдали на 10-ой неделе. Наоборот, при использовании живого СУ штампа иммуноглобулины появ-

ляются на 2-ой неделе после вакцинации, но этот уровень в последующей снижался и оставался низким в течение 12 недель эксперимента. В отношении мутантного штамма показано, что сыворотка цыплят при первично« и повторном введении препарата показывала более низкую концентрацию уровня иммуноглобулинов (1Л28 гр%). Пик (2.075 гр%) иммуноглобулинов регистрировали лишь на 8 неделе. Сыворотки, взятые от цыплят этих же групп исследовались на уровень антител (максимальное разведение сыворотки с положительным результатом реакции) в РИГА и ЭЛИЗА-тесте. Полученные показатели двух серологических тестов практически указывали на прямую коррелятивную зависимость между ними при выявлении антител у привитых; титры антител в ЭЛИЗА-гесте в 3-11 раз превышали титры в РИГА. Изменения титров антител копировали полностью изменения показателей общего белка и сывороточных глобулинов у цыплят, привитых этими вакцинами.

Иммуногенность вакциннпх препаратов.

В предварительных опытах вакцины били проверены на стерильность и реангогенность и удовлетворяли требованиям, предъявляемым к вакцинным препаратам. При гибели цыплят или проявлении- клиники заболевания (отказ от корма, сонливость и т.п.) считали, что напряженность иммунитета у них недостаточна.

Отсутствие клинической реакции на заражение расценивали как наличие напряженного иммунитета на инокуляцию вакцин (из штамма.СУ, мутантного или 3-х валентной масляно-адотвантной).

Во всех трех группах цыплят, привитых этой вакциной (трехвалентной инактивированной ыасляно-адъкшантнсй), после заражения 3,различными по соматическому'антигену ыташамн Р.пиИ;о~

п°гкбало или реагировало от 50 до 60 голов. 'Л только от 40 до 50$ привитой птицы югвло напряженный ишунятет.

Гибель цыплят наблюдали с 2-х по 13 сутки после инокуляции вирулентного возбудителя. В эти же сроки в каядой группе переболело с последующим выздоровлением по 1-3 цыпленка, т.е. от 5 до 15% поголовья. Эти данные коррелируют с низкими уровнями антител, общего белка и глобулинов в период контрольного заражения у привитых масляно-адъювантной вакциной. Десять цыплят контрольных (непривитых) для этого опыта, также как и контрольные цыплята в других группах погибли в сроки от 2 до II дней поело заражения.

Наиболее иммуногенной оказалась живая вакцина из мутант-ного штамма Р.иаШ;ос1йа.

В группе из 60 цыплят, привитых этой вакциной, поело заражения тремя разными штаммами отмечали гибель на 3-13 сутки 2-х - 4-х цыплят и I - 2 цыпленка переболевали, т.е. напряженный иммунитет не формировался у 10-30% вакцинированных цыплят; 70-3® цыплят имели надежную защиту против-экспериментального •инфицирования.

Вакцина из штамма СУ .также имела неплохие перспективы в отношении иммуногенности: напряженный иммунитет формировался у 60-85^ привитого поголовья при 100% гибели контрольных (непривитых цыплят).

формирование напряженного иммунитета у вакцинированных живыми вакцинами цыплят сопровождалось ж индукцией пика антител и уровня общего белка и глобулинов в сроки, близкие ц срокам проведенного контрольного заражения.

з. вывода

1. Производственные таимы различных серотипов пастерелл (А, В, Л 5:А, 8:А, 9:А) были высоко вирулентны для белых мыаей, кроликов и кур и менее вирулентны для морских свинок при подкожной и внутримышечной инокуляции.

Гибель мышей наблюдали при инокуляции вирулентных штаммов в дозах от 2 до 1000 БОЕ.

2. P.multocida вирулентных и авирулентных штаммов (5:А, 8:А,' 9:А) выявляли з легких и селезенке цыплят через 35 минут после инфицирования с максимальным накоплением возбудителя в этих тканях через 24-48 часов; слабо вирулентный штамм Си обнаруживали в низких концентрациях, а авирулентнчй мутантный штамм в крови выявить не удавалось.

3. Вакцина из авирулентного мутантного штамма Си вызывали на 14 сутки после-прививки цыплят значительное увеличение количества сывороточных белков и иммуноглобулинов (на 1,1 -1,8 гр% и 0,6 - 2,2 гр% соответственно); увеличение их на инокуляцию масляно-адъювантной вакциной было менее существенно.

Показатели сывороточного белка значительно понижались (на 0,9 и 1,4 гр$ соответственно) на 14 сутки после ревакцинации птиц мутантной и иасляяо-адъювантными вакцинами; реинокуля-ция вакцины из вдакма Си вызывала увелтчение количества сывороточных белков через 2 недели на. 1,5 гу'," с яппяализодш-ей этих показателей через 10-12 недель.

4. Ревакцинация обусловливала значительное повышение урорня сывороточных антител с максимальным накопление:«' до 440 и 5120 е РИГА и ЗЛИЗА-тесте соответственно на tgtosHno-t>Av вантную.вакцину через ГО недель и до 320 и 1440 (РИГА и

ЭЛИЗА-тест соответственно) на вакцину из ыугантного штамма через 8 недель; пик антител на реинокуляцию вакцины С и регистрировали через 2 недели в титрах 480 и 5120 2 РИГА и ЭЛИЗА-тесте соответсвенно. Через 2 недели после решюкуля-ции первых двух вакцин отмечали наименьшие титры антител.

5. Инакгивировавные масляно-адьввангныв вакцины вызывали формирование напряквнного иммунитета только у 40-50$ привитых цыплят. Наиболее иммуногенной была кивая вакцина из иутанг-ного штамма; она создавала напряженный иммунитет к заражению вирулентными исходными штаммами типов 5:А, 8:А и 9:А у 70—80J& цыплят после двукратной вакцинации с интервалом в 2 педели. Данный тип вакцины был наиболее перспективны« для изготовления коммерчеких. образцов вакцины против пастреляеза птиц.

4. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ .

НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. В наставлении по лабораторной диагностике пастереллеза птиц предусмотреть взятие в качестве патыагериала.для исследований проб легкого я селезенки.

2. Рекомендовать для производства коммерческой вакцины в Арабской Республике Египет мутантный штамм Р. muitooida.