Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Этиологическая структура пастереллеза лошадей и разработка средств профилактики

Х2Р0ССИПС1СД ГОСУДАРСТБЗНЛД НЛТЧНО-ПССЛЕлО-ЗАТЗЭЬСКЯ! ÎŒÎCTÎÎTTT ПО KCSTPOJX, CTAIvIAFÏÏSA- ' ЩК И CE?Tnîî3L''C™! /ПИАРНЫХ ПРШЛРАТОЗ

На правах рукописи Ш 319:616,S8:579.843.9511:533.1-084

НУРАШЗТОЗ Талгаз Алъмухачетович

ЭТлОЛ0П'ЯБСК.\Я СТРУКТУРА ПАСТЕРНШЗА ЛСЕАДЕЙ И РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ЕРОтШТИКИ

16.ОС.03 - ветерг.нарная микробиология,

ВИРУСОЛОГИЯ, ЭПИЗООТОЛОГИЯ,

микология и шлаушлогия ■

A3T0P30SPAT

диссертации на соискание учено! степени кандидата аетерикаршх наук

Г.ТОСКЗА - IS92

Paáosa гяьъззх. со Всероссийской rccyjiapo^soaas; •::аг:.здогг^сйХ-С'1л: i azsiExyro по кошролю, с?аЕвдрл:2едаЕ i; cop-гогеришрис врзпарагове s Еаучш-последовауолхвгга • ьлсршшрЕоу i&csasjvo Kasososoli акздешк сйльг.кпозЕйоггзи^:

Ji^ylW

Нцушзг рукolojîi«osïï до:ыор ЕЭ'лр^шарпш:

щюфзооор P.E.

ÏSUOTBCV Еяэдлзргше xays

сшюанаи: доиор ьогоршшрнах паут.

Тсд'аршздов Н.Т,(Ш1131)

гасдЕда;- ьггор.'.шаршх иоух: Седове;:; В„Б. (ШЗВ)

Вздуаи: ершиьадо! - Koüimlsíizjí езгоршарши: окаДбааг

шзп.* lUlUCirp-iörsia ф

■ Задам cü'j.-cr.-cj 1992 г, в члгез

¿¿оадыьщ Сцохщасющювашюг-о Совзга ДД20,85.01 цра Ес;рсо CÜÜCI®Í: госдаро'лошоа Eajrino-aoosaKObascacjifw laosajvo LJ шггрояо, огаодаргизшда и оерто^шщЕ: npcHupuvcï

Главного управления ветеринарии Ышкяврагиа Семаго ?oooaüoi»a Федерации по адреоу: (123022, р.13озкгл5 Звэкдасрскжи:;, ПОООП; 5s ЕГНКИ)

С даесоршщэй mm овишюаиаяя а defeases; ETHirri

• Az¡20ps$úpa2 разослал ¿

39z

Hoixü Cj^S».'«^

Cncxizz ...■:, Cor;,.:; ^ .'.': -"¿в Ю,£0

.....

S I. ОНПАЯ ГАРАЯГлРИСТЕКА РАБСТЬ'

, ]

'Актуальность ряботц. Серьезный урон табунному коневодству наносят аннексионные болезни, среди которых особое значение ю.;еет пастереллез. Это недостаточно изученное заболевание лопсдей, характеризующееся при остром течении признака™ септицемии и геморрагического Еоспаленкя дыхательные путей к келудочко-кипечного тракта. Исследования, посвясенные пастереллезу лошадей, малочпелап-пн а нх результата носят противоречивый характер.

Работы 3aPS.,r G....CIS52, 1955, 1961), -a-^ofc. o.^urata в. (IS6I), :-.»idl'ston CIS72), Никифоровой H.M., Лукьянченхо A.B. (1971), . l=-г (1979), Сидорова M.A., Бовкун

Г.9. (I97S), Рустаыова L'.A. (IS82), Касимова H.A. (1983), Шегддэ-вича S.A. (1984), Косопаткина A.A. (1984), Геведзе В.И. (1986), Душука Р.В. (IS87) н других свидетельствуют о тоц, что пастереллез многих видов животных вызывается сероварианТЕ1Л - А,В,Д и В "г -.r'-iii г При этом, пастереллы серовариантов В и Е

вызывает острое течение болезни, протекавпео по типу геморрагической септицемии, а пастереллы серовариантов А и Д подострое и хроническое течение заболевания, проявляетееся по тану энзоотической пневмония.

Иммунопрофилактика пастереллеза яавотяых занимает одно из основных мест в системе противоэпизоотических мероприятия. Пастереллез лоиадей в условиях табунного коневодства сопроводдается достаточно высокой леталькостьс, носительством патогенных пасте-релл, снижение!.' подуктивности, а такта тормозит введение племенного дел-". Вследствие, отсутствия Scкдинопро^илактики пастереллеза лошадеР расходуется значительные средства ка проведение лечебно-

профилактических и оздоровительных мероприятий по ликвидации заболевания.

В связи с этим, возникла необходимость детального изучения этиологической структуры и разработки специфической профилактики пастереллеза лошадеС.

Целт> к задачи исследовакиГ:. Цель исследований состояла в опро-делекхи этиологической структуры пастереллеза лошадей и разработка средств профилактики.

Поставленная цель предусматривала решение следующих задач:

1. Изучить эпизоотическую обстановку по пастереллезу лошадей в Республике Казахстан.

2. Выделить 02 клинически здоровых, больных к павашх лошадей культуры пастерелл и изучить их торфологическио, культуральзшо, фэрментативние, вирулентные, токснгепнне, антигенные ы кымуиоген-пые свойства.

3. Выяснить эффективность коммерческих 1: опитно-проьшиленшк. еорп£ протквопастереллозных вакцин на лабораторных ¡¡швотшлс прп зсракепш и пастереллама, ¡гвделенннш от лошадей.

А, Исгштать наиболео эффективный биопрепарат на лоаадах п сксперинэпто п в производственных условиях.

?1з.ущг-д рОЕнз^.' Впервые установлено этиологическое зкачанге Ра=1:»иг«11а тиШосайа серологических варнаков В (дом;ишрутапй), I. с Д в инфекционной патологии лошадей в условии табунного коневодства. Пьуяоаы ЕЕазоого£йГЕчесшс особ-пмстм и шихлг.о-цорчлло-гичзскос проявлена пастереллгза лсзг^еГ:.

Деьо ваучвее обосговавго про^плоктшел пастсрзллаза лсподгЗ пасляво£ форнолвглсцпкоП цро-гш; пастерздлоза круш.сго рогатого ско-уа, бу2полоБ г овец.

Получено свидетельство об изобретении на "ноу хау" "Способ профилактики пастереллеза лошадей".

Практическая значило ст;,- На основании результатов исследований разработаны:

"Рекомендации по мэрам борьбы и профилактики пастереллеза лошадей";

"Методические указания по лабораторной диагностике пастерел-лезов" (в соавторстве с БИЭВ)1*.

В производственных условиях организовало широкое применение лошадям масляной формолвакцинн против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов я овец, что позволило спизить заболеваемость и тягесть течения болезни.

Депонирован штат лпяьосхйа Л 99 (серовара В)

возбудителя пастереллеза лошадей в качестве контрольно-производственного в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратоз.

Подготовлен проект дополнений в НТД на форколвакцпну. против пастереллеза жвачных а свиней масляную относительно ее применения лошадям.

Агообядия тэаботн. Материалы диссертации дологепн на научных конференциях колоднх учепнх ВГНКИ ветпрепаратов (Москва, 1989 -1992), на научной конференции голодах ученых БИЭВ (Москва, 1989), на Всесоюзной конференции "Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов" (ВШ СССР, 1991), на заседаниях научно-проблемной методической комиссии по контролю и стандартизации препаратов против бактериальных и грибковых нифекций ВГНКИ ветпрепаратов (1988 - 1991), на ыежлабораторнои научно-производственном совещании сотрудников НТЗКИ ветпрепаратов (1992).

Дубликатам.' По результатам исследований опубликовано 3 работн^ одна сдана в печать.

Объем и структуру диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуддения результатов, вн-"водов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 4 рисунками. Список использованной литературы включает 192 источника, из них 105 иностранных авторов. .

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

Работа выполнена в 1988-1991 гг. в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против пастереллеза^ рожи и гемофилеза и на экспериментальной базе ОШ "Ыанихино" ЕГНКИ ветцрепаратов, в лаборатории по изучению инфекционных болезней лошадей и верблюдов Казахского НИВИ, в II коневодческих хозяйствах Алма-Атинской, Восточно-Казахстанской, Дхамбулской, Тургайской областей Казахст& на и Ульяновской области Российской Федерации.' Работа выполнена в соответствии с заданием 03.07.ЕЕ "Отобрать и внедрить высоко-иммуногенные штаммы пастерелл для изготовления инактивированвых вакцин и гиперишунной сыворотки",

В процессе проведения работы использовали:

1. Первичные документы, статистические данные, отчеты ветеринарной службы Министерства сельского хозяйства и продовольствия Казахстана за 1980-1990 гг.'

2. 157 штаммов пастерелл', в числе которых: 4 цроизводствен-ных, применяемых для изготовления коммерческих биопрепаратов; 20 эталонных, полученных из Германии и Швеции; 133 эпизоотических культуры, выделенные от паших и вынуждено убитых лошадей.'

3. Внутренние органы 156 павших, 73 вынуждено убитых и 2656 проб носовой слизи от клинически здоровых лошадей.

4. Опытные нивотные (3500 белых мышей массой 16-18 г, 260 кроликов породы шиншилла массой 2,0-3,0 кг, 41 лошадь со средней живой массой 200 кг, 50 петушков (4-х месячные) массой 1,0-1,5 кг.

5. 1447 лошадей для производственной апробации масляной фор-ыолвакцины против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов и овец.

2.1.1. Эпизоотическую ситуацию пастереллеза лошадей в Республике Казахстан изучали путем анализа ветеринарной отчетности ГУВ Минсельхозпрода республики за IS80-I990 гг., а также по результата там собственных исследований при выездах в неблагополучные коневодческие хозяйства по этому заболеванию согласно методических рекомендаций, разработанных Джупиной С.И. и Ведерниковым В.А. (1981). При этом, выясняли распространенность, заболеваемость, смертность, летальность, сезонность, периодичность, стационарность, напряженность эпизоотической ситуации по пастереллезу лошадей.

2.1.2. Клинические признаки и патологоанатоыическую картину болезни исследовали при спонтанном и экспериментальном заражении лошадей пастереллезом. Искусственное заражение лошадей проводили штаммом й 99 внутривенно, внутримышечно и перорадьно. Проявление болезни у лошадей устанавливали путем осмотра, пальпацией, аускуль-тацией, перкуссией в термометрией. Пагологоанатомические изменения устанавливали методом полного вскрытия, органы исследовали по методике Жакова VI.С. (1977).

2.1.3. Выделение пастерелл проводили по общепринятым методам путем посева из киндалин, слизистой носовой полости и паренхиматозных органов (сердце, легкие, печень, селезенка, почка, лим$о-

узлы) на Ш>', бульон и агар Хоттингера, кровяной агар. Слизь из верхних дыхательных путей получали у фиксированных клинически здоровых лошадей с помощью ватных тампонов, которые затем погружали в' пробирки с 5 мл стерильного физиологического раствора (рН 7,2 -7,4)/ Полученную суспензию высевали на чашки Петри с едовяным или сывороточным агаром. Мазки из культур и препараты-опечатки из органов окрашивали по Граму, Леффлеру и Ронановскому-Гимза.

2.I.J4.J Морфологические, культуралыше и ферментативные свойства культур пастерелл изучали по общепринятым методам. Вирулентность настерелл проверяли на белых мышах массой 16-18 г путем подкожной инъекции 18-часовой бульонной культуры в дозе 0,5 мл в Р asti т о

ведениях от 10 до 10 , с подсчетом количества мшфобных клеток. Обработку результатов с определением ЛД^ проводили по методу Кербера-Ашшрина.' Токсигешше свойства пастерелл выявляли на белых мышах массой 16-18 г путем внутрибршинных инъекций фильтратов 72-часовых бульонных культур в дозе 0,5 ш в разведениях от 1:2 до 1:128.

Серологически типировали штаммы пастерелл по капсульному апТИГеНу В РИГА И В РА на стекле (Carter G.R.yI955; Ilaaioku s., Kurata ,I2GX). Аягисызоротки ua эталонные и производственные иааш псстеролл сороиариакгов Л,В',Д п Е получали гипернммункза-цией роликов, у которых исключали пастерелл о ко сите льет во проверкой сыворотки крови в РА и РИГА', а также методом провокации кроликов на введение в носовую полость IjS-пого водного раствора брил-лиянгагрска. Типизацию 14 езолязов састералл по соматическому антигену проводили в РДВД (н-ddlestoa ,1972). Для этого получела типовые актисьгеаротки к 16 эталонным штаммам пастерелл lia 4-х ыесячшх петушках", у которых исключали споктанцую прещишти-

рупщув активность сыворотки' кроЕИ к соматическим антигенам эталонных штаммов пастерелл.

Кроме того, для выявления принадлежности изолятов к серовари-антам А и Д применяли тесты с гиалуронидазой и акрпфлавином (Carter G.3. :,I973,1975).' Наряду с этики гестами, изоляты, отно-сяииеся к сероварианту В, выявляли с помощью теста серозациты на белых мшах.

2.1.5. Кммуногенную активность изолятов пастерелл изучали

на белых мышах массой 16-18 г при подкожной иммунизации формолан-тигенами в дозах 1,0; 2,0; 4,0; 8,0 млрд. микробных клеток. Заражали штаммом ß 59 подкодно в дозе 5 ДД~0 через 30 дней после иммунизация по 10 животных, вакцинированных каддой дозой антигена и по 10 контрольных. ЕДдо рассчитывали по методу Кербера в модификации Ашмарина," Результаты обрабатыаали статистически (Ашмарин Й.И., Воробьев A.A.1, 1962).

2.1.6. Сравнительную эффективность противопастереллезных вакцин проверяли на кроликах. Для оценки иммуногенности вакцин и формолантигенов при заражении мкшей, кроликов и лошадей эпизоотическими и производственными штаммами пастерелл использовали коэффициент иммунологической эффективности.

2.1.7. Оценку противоэпизоотической и профилактической эффек-' тивности масляной формолнакцины против пастереллеза крупного рота-того скота, буйволов и овец на лошадях проводили согласно методическим рекомендациям, разработанным Джупиной С.*И. и Ведерниковым B.'A."1 (IS8I). Экономическую эффективность применения вакцины определяли по методике", разработанным Никитиным И.Н. и др.* (1987).'

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСОГЕДОВЖЯ

3.1. Эппзоотологические особенности пастереллеза лошадей в условиях табунного коневодства.

' Пастереллез лошадей ежегодно наносит экономический ущерб развитии табунного коневодства в Казахстане. Начиная с 1964 года данная инфекционная болезнь лошадей фиксируется в ветеринарной отчетности Главного управления ветеринарии республики. В республике имеется много пастбищ, которые из-за их разбросанности и отдаленности водопоев используются только для лошадей. Климат -резкоконтинентальный.

Анализ ветерианрной отчетности ГУВ Министерства сельского хозяйства и продовольствия Казахстана за I280-IS90 гг. свидетельствует о том, что в республике зарегистрировано 39II случаев пастереллеза лошадей в ICI пуша е. Ареал болезни охватывает 13 областей республики, но степень неблагополучия варьирует. В течение 1980-1990 гг. пр республике пало 2214 лошадей. Изучение фактических данных за 1980-1990 гг. показывает, что заболеваемость лошадей составила по республика в расчете 1:10000 - 24,0, смертность -14,0, летальность - 55,6$ от числа заболевших животных. Наибольшое число неблагополучных.пунктов, заболоншцс и павшие киеотних регистрировались в IS8I, 1983, 1985, 1990 гг. Увеличение чдеяа заболошмх шаютшх наблюдается через каздио 2-4 года, что обуслог-лено екпкешмм пммуыиота, нарастанием числа восприимчивых глвот-eux за счет ;.:олодншса и отсутствием гшаданопроуилактики.'-

.^.îbiiiili ни^ иастереллава в инфекционной патологии лошадеЕ по чш^у кеблагонолучил: пунктов составил 15,заболошпх ehboï-шх - 23,0$, павших кивотшх - 42,8$ за последние 10 лет по рес-

публике. Б структуре псстереллеза о/х дквотнкх за уназашпл" период на долю лошадей приходится неблагополучных пунктов - по числу заболеших япзоткых - 3,8^, по падеяу - 6,4£,

При изучении эпизоотической ситуации в хозяйствах было установлено", что к пастерзллезу восприимчивы лошади всех возрастов', независимо от породи я пола. Для пастероллеэа характерна стационарность неблагополучия, что обусловлено аастзреллоносительством среди неблагополучных групп жвотных II повторными вспышками заболевания при смешивании лоысдей-носителэй пастерелл со здоровы,;и грушами. 3 естественных условиях заражение происходит алиментарно при поедании кормов, загрязненных выделениями больных животных и при водопое. Возможно заражение при контакте с другими видами ;и;вотных. Такяе, заражение происходи? через дыхательные пути з форме воздушно-капельной инфекции." Сезонность вспышек пастррэллзза лоисдэЗ не является закономерной. Пасторэллез среди табуннкх лошадей мотет возникать в любое время года, но чаще болезнь.проявляется ранней весной и осенью. Увеличение числа заболевших гшвот-1Л1Х наблюдается через ;:агдкз 2-4 года.

3.2. Клинические и патологоакатомичеспле признаки пастероллеэа лошадей при спонтанном и экспериментальном заражении.

При изучения клпкака я патологоаиагог.дчоской гартлгп«' при спонтанном пастэрзллеззз лошадей установлено, что заболевание протекало остро и подостро по типу геморрагической еэпгкцемлл, с прекмуевственной локализацией инспекционных оча^оэ в ¿^рудной полости и кишечнике. Для всех больных лошадей было характерно угнетенное состояние, повышение температуры тела до 41°С, отказ от корма

жажда, нарушение координации движений. При аускультации слышны хрипы в легких. При пальпации грудной клетки отмечали сильное беспокойство и болезненность. У некоторых лошадей заболевание сопровождалось признаками коликов, болезненным кашлем, отечностью, кокь-юктивитом, нервными явлениями, диареей.

Смерть животных наступала в течение 5-10 часов, но не позже ' 2-3 суток после проявления первых симптомов заболевания.'

В результате патологоанатомических.исследований 156 трупов и 73 вынуждено убитых лошадей установлено, что острое и подострое течение данной инфекции характеризуется патологией органов дыхания? желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы и паренхиматозных органов. Множественные кровоизлияния (точечные, полосчатые, пятнистые) обнаружены и хорошо видны на слизистых и серозных оболочках, под эпикардом и эндокардом, на плевре, легких, печени, селезенке, брюшина, в толстом и тонком отделах-кишечника, на дне ■желудка. Лимфатические узлы увеличены с щювоизлияншши. Легкие отечны, гиперемированы/ В грудной, брюшной полостях и сердечной сорочке содержалось значительное количество красноватой жидкости.

Жеребята оказались восприимчивыми к внутривенному, внутримышечному и пероральному заражениям штаммом К 99. При этом^ клинические признаки и патологоанатомические изменения были типичны как И при спонтанном заболевании.-

3.3. Изоляция пастерелл.

Выделение пастерелл проводили, по общепринятым методам бактериологического исследования путем посева из взятых проб носовой слизи, кусочков паренхиматозных органов на ШБ, бульон и агар 1от-тингера, кровяной агар. В 1988-1931 гг. из проб слизи, паренхима-

тозннх органов (сердце, печень, легкие, селезенка, почка, лимфоузлы) от 229 павших и вынуздено убитых лошадей выделено 133 изо-

\

лята пастерелл, у которых изучали биологические свойства. Кроме того', наш при обследовании 2556 проб носовой слизи выявлено 650 носителей пастерелл.4 Эпизоотические штаммы пастерелл шсупивалл методом сублимации, запаивали ампулы под вакуумом и хранили при температуре +4...+8°С.

3.4. Биологические свойства эпизоотических и производственных штаммов пастерелл.

Культуральные, морфологические, (ферментативные, вирулентные, токсигеннке и антигенные свойства проверяли у 133 изолятов пастерелл, выделенных от лошадей и 4 производственных штаммов, применяемых в производстве коммерческих вакцин.'

Изучение культуралышх; морфологических, тинкториалышх и ферментативных свойств выделешшх культур позволило отнести их к ищу РазЪоигеЦа ти1-Ьос1<1а Изолированные от лошадей пастерэллн представляли собой грамотркцателыше, короткие,овоидные, палочки с закругленными краями размером от 0,15-0,25 мкм до 0,3-0,4 мпл, располагающиеся изолировано, парами, реже в виде цепочек. В культурах пастереллн полиморфна, наряду с овоидами встречалось большое количество коккообразных форм; Они хорошо окрашивались по Романов-скому-Гимза< синькой Леффлера.

Изоляты пастерелл росли на ЫЗБ и бульоне 1оттингера, образуя через 5-8 часов культивирования равномерное помутнение' с пыленэд-нш осадкой па дне пробирки.'.'Чераз 24-72 часа наступало просветление бульона и выпадал осадок, поднимающийся при встряхивании в виде "косички".' При посевэ на ША и агар 1оттингера с добавлением

5$ эритроцитов барана или 5—1сыворотки крови лошадей, через 24-48 часов отвечали образование мелких, гладких, прозрачных колоний ^ -формы у большинства исследуемых изолятов пастеролл, реке встречались колоты и а -форм.

У исследуемых культур пастеролл имелись незначительные отли-шш в ферментативных свойствах, характеризовавшиеся ферментацией глюкозы, сахарозы, машшта, сорбита, мальтозы с образованием кислоты и без виделешш газа. Слабо ферментировали ксилозу. Не ферментировали лактозу, инозит, рафинозу, арабинозу. Все штампы образовывали индол, сероводород, редуцировали 1штраты в нитриты, не разливали нелатин, не свертывали молока, не вызывали гемолиза эритроцитов барана и бшш неподвижны.'

Вирулентные свойства исследуемых 133 эпизоотических штаммов изучали в опытах на белых мышах с определением ДЕдо* Вирулентность изолятов пастеролл варьировала в широки пределах. Значение ДС^д у 85 изолятов пастерелл (64$) составила 3-15 микробных клеток, у 8 изолятов (6,0$) - 0,5'Ю3 - 0,5'Ю5, у 14 изолятов (10,5$) -0,5*Ю5 - 0,5'Ю6; у 10 изолятов' (7,5$) - 0,5'Ю7 - 0,5' 1$ и у 16 изолятов (12,0$) - 0,5'.Ю3 соответственно микробных клеток. Значение ЛД50 производственных штаммов пастерелл равнялся 3-5 микробным клеткам. Различие вирулентных свойств изолятов пастерелл с низкой степенью патогенности заключается в том, что эти выделенные от лошадей культуры пастерелл (36$) принадлежат к серовариан-там А, Д и не типирушимся. ДК^д у данных культур пастерелл варьи-

о о

ровала от 0",5'10° до 0,5'Ю микробных клеток.

Из проверенных 14 изолятов токсигенными оказались 5 культур серовараанта Д. Внутрибршинное введение фильтратов их бульонных культур в разведениях от 1:2 до 1:16 вызывали гибель белых мышей

в течете 24-48 часов. Среди культур серовариантов Л и 3 токсиген-шх штаммов не обнаружено.

Серологическую типизацию эпизоотических штаммов пастерелл, выделешшх от лошадей, проводили в тестах с гиалурошщпзои, акри-флавином, серозашты на белых мышах, РЛ на стешю ( ;;и:11ока «шла :.. , 1961), РИГА (Ссхь»г с .а.,1955), РДЩ (н-ааг-.-иоп к.ь. » 1572). Типовые антисыворотки к капсульным и соматическим антигенам эталонных штаммов пастерелл были получены совместно с научным сотрудником лаборатории контроля и стандартизации препаратов против пастереллеза, рогд и гег/.офилеза БГНКИ ЕапоаниковоГ; ЕЛ'.

Наиболее удобными и простыми методами типизация пастерелл были тесты с акри-рювшгом и гиалуронидазой, а тают тест сероза-цктн на белых икшах. Пользуясь перечисленными методами нитрования 85 изолятов отнесли к сероварианту В, 8 - к А, 24 - к Д и ТС культур из удалось типировать, вследствие отрицательных результатов. По донным РДДП,14 отобранных культу пастерелл были отнесены к 2, 5, 8, II, 12 п 15-му серологическим типа,» (по н^ал^уоп к.ь. » 1572).'

3,5. Изучение иммунологического родства эпизоотических л производственных штаммов пасторелл.'

Иммуногенное родство производственных и эпизоотических птам-мол пастерелл установлено в опытах перекрестного заражения мышей, привитых моновакцинамп о определением коэффициента иммуполсгичес-кон эффективности;1 Установлено, что коновакцшш из производствэн-шк штаммов пастерелл предохраняла 70-80# п.аой от заражения штаммом Л 29.' Аналогичные результаты были получали при плмукизацил моновакцнной, приготовленной из штамма Л 59, при этом, контроль-

нке мыши поголовно вое пали от заражения штаммом 1Ь 99 и смесью производственных штаммов пастерелл.'

При оценке иммуногеннол активности 14 изолятов пастерелл установили, что при заражении штаммом J? SS, моновакцины из культур сероварианта В были наиболее эффективное, чем культуры серовариан-тов А и Д. Статистической обработкой результатов проверки иммуно-генности эпизоотических штаммов выявили доверительные границы ЗД50 (среднеэффективной иммунизирующей дозц) с надеиностья 99,7$ (М ± Зм) применительно к соровариантам: В равнялся соответственно 2,17-+ 3,43, Л - 4,17 ч- 5,13, Д - 3,68 + 5,12 млрд. микробных меток. Таким образом, культуры пастерелл серовариантов А и Д оказались менее ивдуногенннмп в сравнении с пастереллалш сероварианта В. SUgQ штамма В 99 равнялся 2,3 ¿ 0,16 млрд. микробных клеток.'

3.6. Разработка способа профилактики пастереллеза лошадей.

3.6.1. Сравнительное изучение эффективности противопастерел-лозных вакцин на кроликах.'

При разработки способа профилактики пастереллеза лошадей представляли интерес эмульгированные, масляные и поливалентные вакцины, так как они наиболее активно стимулируют иммуногенез.' В опытах с трехкратной повторностью были использованы: I. Эмульгированная вакцина против пастереллеза. крупного рогатого скота," буйволов и овец (серии 104, 105, 106); 2. Эмульгированная вакцина против пастереллеза свиней (серии 117 12, I3)'J 3. Масляная формолвак-цика против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов и овец (серии I, 2, 4); 4." Масляная формолвакцина против пастереллеза квачннх и свиней (серии 8, 9, II); 5. ГОА формолвакцина против пастереллеза свиней поливалентная (серии 3, 4, 5); 6. Эмульгиро-

ванная поливалентная формолвакцина против пастереллеза свиней (серии 4,5,6). Результаты испытания эффективности перечисленных вакцин показали, что поливалентные биопрепараты создают иммунитет у 70$ привитых кроликов и моновалентные у 80% подопытных животных при заражении штаммом К 59. Контрольные кролики пали 100^.'

Полученные данные ориентировали нас на решении вопроса специфической профилактики пастероллеза лошадей существующими противо-пастереллезными биопрепаратами.'

З.'6.2. Проверка напряженности иммунитета против пастереллеза у лошадей,.привитых масляной формолвакциной против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов ц овец.'

Проверку напряженности иммунитета у лошадей, иммунизированных масляной формолвакциной против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов и овец проводили в три этапа.

На первом этапе, проводили вакцинацию лошадей вышеназванной вакциной в трех дозах. На втором этапе, определили минимальную летальную дозу штамма Л 99 на лошадях. На третьем этапе, заранали вакцинированных и контрольных лошадей.

В первые 24-48 часов после введения Еакцины у некоторых лошадей наблюдали незначительное угнетение, повышение температуры тела на 0,5 - 1,2°С, на месте введения образовывалось уплотнение до размеров грецкого ореха, В течете 4-7 месяцев-уплотнение исчезало.' Через 30 дней после вакцинации проводили зарааение вакгчниро-ванных и контрольных лошадей отнитрованной дозой однооугочной бульонной культуры штамма й 99.1 На паядую д^зу вакцины было взято по 6 лошадей, а в контрольной груше 3 лошади.

Результаты проведенного опыта свидетельствуют о том',' что масляная формолвакцина против пастереллеза крупного рогатого сиота,

буйволов и овец в дозе 1,5 мл вакцины обеспечила невосприимчивость у 83,3$ привитых лошадей против пастереллеза, в дозах 3,0 и 6,0 мл - у 100!? лошадей, при поголовной гибели контрольных животных.

3.6.3.' Агглютинирующая и превентивная активность сывороток крови лошадей, вакцинированных против пастереллеза.4

Изучение агглютинирующей и превентивной активности сывороток крови лошадей, вакцинированных против пастереллеза, показало, что антитела в сыворотке крови лошадей появляются на 7-10-й дни после их иммунизации и достигают максимального титра (1:160) на 20-30-й дни (срок наблюдения). При проверке превентивных свойств сывороток в реакции серозащиты на белых мышах установлено; что сыворотки лошадей второй и третьей групп предохраняли от гибели 87-10С$ зараженных пасгереллезом мышей на 30-й день после иммунизации» а в первой группе - 75$.'

3.7. Эффективность масляной формолвакцины против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов и овец на лошадях в производственных условиях.

В условиях производства эффективность масляной формолвакцины против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов и овец изучали в стационарно неблагополучных хозяйствах по пастервллезу лошадей, где из года в год отмечались периодические вспышки заболевания с большим падежом конепоголовья и где наличие пастереллезной инфекции' среди табунных лошадей подтверядалось бактериологическими исследованиями.' К тагам хозяйствам мы отнесли совхоз игл. Джамбула Дт^амбулской, совхозы "Еыжсай" и "Дхиделинский" Алма-Атинской областей.

Следует указать, что до применения биопрепарата в совхозе им. Джамбула пало 31 лошадь, в совхозах "Еылысай" и "Дкиделинский" соответственно - 34 и 89. Сезонность проявления пастереллеза лошадей в данных хозяйствах неодинаковая.' Так, в совхозе "Еылысай" эпизоотические вспышки за три года происходила в декабре, январе и феврале. В совхозах им.Джамбула и "Дшщелинский" была сходная сезонность проявления болезни, так как максимальное число заболевших и павших животных приходилось на июнь, июль, август и сентябрь.'

Вакцину применяли лошадям внутримышечно в дозе 3 мл (1,5 мл по обе стороны шеи) в возрасте от одного года и старше. На месте введения вакцины образовывались уплотнения до размеров грецкого ореха.' Эти уплотнения исчезали в течение 4-7 месяцев после иммунизации. Отмечали незначительное угнетение животных на введение биопрепарата. Летальных исходов после вакцинации не было.'

Проверкой эффективности вышеназванной вакцины установлено} что биопрепарат предохраняет лошадей от острого и подострого заболевания пастереллезом, при этом, падеж сократился в 2,9 - 4,3 раза."

Экономический эффект от применения масляной формолвакцины против

к .

пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов и овец на лошадях в трех хозяйствах в сумме составил 54595,31 руб.' после вакцинации 1447 лошадей? Предотвращенный' экономический ущерб составил 37,73 руб. в расчете на одно привитое кивотное.' Эффективность данного способа профилактики пастереллеза лошадей на I рубль затрат 25',15 РУ<5Г

Производственный и экспериментальный опыты на лошадях проводили совместно со старшим научным сотрудником лаборатории по изучению инфекционных болезней'лошадей и верблвдов Казахского ШЕИ Коримблевым УЛТ."

ВЫВОДЫ

1.' Пастереллез имеет широкое распространение во многих коневодческих хозяйствах Республики Казахстан и характеризуется стационарностью, периодичностью (с интервалом 2-4 года), проявлением болезни в виде спорадических случаев, энзоотических и эпизоотических вспышек, незакономерной сезонностью, при этом летальность достигает 50-80$ от числа заболевших животных.'

2." Наблюдаемые клинические признаки и патологоанатомическая картина при спонтанном и экспериментальном заражении лосадей типичны для острого течения пастереллеэа по типу геморрагической септицемии и были сходны по проявление заболевания других видов кивотных?

3.' Из паренхиматозных органов 229 пятит и вынуждено убитых лошадей изолировано 133 культуры пастерелл, из которых 85 (64^) изолятов отнесены к сероварнанту В, 24 (18£) изолята к Д, 8 (6£) И80лятов к А и 16 (125?) изолятов не удалось типировать.' Таким образом', установлено этиологическое значение Рага°иг"11а тииос1аа серологических вариантов В (доминирующий), А и Д г условиях табунного коневодства.'

4; При сравнительном изучении биологических свойств виделейных культур пастерелл и референтных штаммов - наиболее вируиент- ■ пши являлись культуры пастерелл сероварианта В, ДД50 которых равнялась 3-15 микробным клеткам! средней вирулентностью обладали культуры сероварианга 3 - 0,5*10° - 0,5 •105 м.к.' и низкой степены; патогенности культуры сероварианта Д - 0,5*10® - 0,5*10® м.к.*, токсигенными культурами были пастереллы сероварианта Д."

5. Б опытах па лошадях установлено, что при однократной внутримышечной иммунизации лошадей масляной формолвакциной против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов и овец предохранялось в дозе 1,5 ил вакцины - 83^3$, а в дозах 3,0 и 6,0 мл - 100$ привитых гсивотных пря поголовной гибели контрольных.'

6." Применение предложенной вакцины в неблагополучных по пастереллезу лошадей коневодческих хозяйствах снимет заболеваемость и падез животных в 2,9-4,3 раза и экономически является целесообразны;.!, так как эффективность данного снооба профилактики па I рубль затрат равен 25,15 руб.'

•ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЭДСЕЕНИЯ

1.' Разработана совместно с Казахским НИВИ,рекомендации по шрам борьбы и профилактике пастереллеза лошадей, которые утверждены II октября IC9I года НТС секции . ветеринарии Глнцстер-ства сельского хозяйства и продовольствия Казахстана.

2." Подготовлены,совместно с ВИЭЗ "Методические указания по лабораторной диагностика пастереллвзов" .

3. Получено свидетельство об изобретении па "ноу хау" "Способ профилактики пастереллеза лошадей".'

СПИСОК

работ, опубликованных по теме диссертации

1. Пастереллез лошадей / Тулзпбаев C.S., Керимбаев 7.Н., Ку-рахмтгов Т.А. // Вэстник сельскохозяйственной науки Казахстана.'-IS87.- :» 10.- С.63-65.

2. Эффективность масляной формолвакцины против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов и овец на лошадях //.Дуиук Р.В., Керимбаев 7.Н., Сансызбаев А.P., Нурахметов Т.А. // Тезисы докладов Бсесопзной конференции по государственному контроля ветеринар-

- 22 -

ных препаратов.'- М. ,1991.'- С. 161-162.

3. Нурахметов Т.'А.' Превентивная и агглютинирующая активность сывороток лошадей, иммунизированных против пастереллеза // Тезисы докладов Всесоюзной конференции по государственному контролю ветеринарных препаратов."- '¿.,1991,- С. 159-161.'

Подписано в печать 2J.0 j.Si. оаказ ,;;. ;■ Ти~>а.1 ги С.х. -¿/1С

Москва.Т;гаог]-а"::я ГЛ.;£1