Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Вирулентные и иммуногенные свойства пастерелл

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР • ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ имени К.И. СКРЯБИНА

На правах рукописи

С AM ИРА А ЕДЕ ЛЬ КЕРИМ АЖ

ВИРУЛЕНТНЫЕ И ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ПАСТЕРЕЛЛ

16.00.03 - Ветеринарная ыикробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ •

диссертации на соискание ученой степени кандидата ввтэринарншс наук

Москва - 1991

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии имени К.И. Скрябина и Каирском университете Арабской Республики Египет.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

БУРЛАКОВ В.А.

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук, профессор

СИДОРОВ U.A. - кандидат ветеринарных наук, доцент МАСИМОВ H.A. •

Ведущая организация - Всесоюзный ордена Ленина научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Защита диссертации оостоится "8" февраля 1991 года в

ja часов на заседании специализированного совета K-I20.36.05 по защите диссертации на соискание ученой степени кандидата . наук в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии им. К.И. Скрябина (1094-72, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, 1ел. 377-93-83)»

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Академии« Автореферат разослан " " января 1991 года.;

Ученый секретарь специализированного совета

Федосеева Т.Н.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Пастереллезом болеют различные виды домашних и диких животных. Наиболее часто вспышки пастереллеза регистрируют в птицеводческих хозяйствах, на фермах крупного ро- • гатого скота и пушных зверей. Пастереллез в европейских странах вызывается возбудителем 3 разных иммунологических типов (А, В и Д по капсульному антигену) Pasteuгella тиИ;ос1<1а « а на африканском континенте зарегистрирован и еще один тип возбудителя пастереллеза - тип Е. Однако, дифференциация разных иммунологических типов во всех странах довольно затруднительна. Сведения о вирулентности и накоплении пастерелл в органах и тканях различных животных противоречивы. Антигены, обуславливающие защитные свойства, являются предметом дискуссий исследователей, и вакцинные препараты в ряде стран, в том числе СССР, готовятся из одного только типа В Р.шиИ;ос1<1а . Pasteurella ЬаетоНИеа , ранее относимая к возбудителям пастереллеза исключена из данного сеыейства и в настоящее время относится к другому семейству бактерий - пастереллоподобных. ■

В целом противопастереллезнне биопрепараты, готовящиеся биопромншленностью, несовершенны и не обеспечивают диагностику и профилактику заболевания политиповой природы.

На основании излоненного, исследования по изучению иммунобиологических свойств различных штаммов типов А, В.и Д р. пыИос1с1а являются актуальными.

Цель-и задачи исследования. Целью работы являлось сравнительное изучение иммунобиологических свойств различных штаммов 1?.ли1ЬосХдя . 3 этом плане реагаятеь ' следующие задачи :

I. Изучить распределение возбудителя-в органах и тканях '

- г -

экспериментально зараженных животных.

2; Определить динамику показателей общего бедка и глобулинов у цыплят, привитых различными типами вакцин.

3. Изучить иммуногенность различных типов вакцинных ' препаратов пастереллеза.

Научная новизна. Изучены вирулентные свойства различных штаммов пастерелл 3 типов, их накопление в различных органах и тканях птиц, установлена связь между уровней белка, показателями глобулина, иммуногенностыо и антигенностыо различных типов вакцинных препаратов.

Практическая ценность работы. На основании проведенных исследований определены минимальные летальные дозы p.multocida различных серотипов для мышей и цыплят. Установлены органы и ткани (печень, легкое) с максимальным накоплением пастерелл для отбора в качестве пагматериала с целью проведения бакдиагности-ки заболевания. Даны рекомендации по использованию ыутацтного штампа с целью изготовления вакцины.

Апробация работы. Материалы доложены и одобрены на научной конференции Каирского ветеринарного факультета и методической конференции МВА.

Публикации. По теме-диссертации сдана в печать.для публикации, в трудах Каирского ветеринарного факультета статья "Вирулентные свойства P.nultocida типов А, В и Д" и подготовлена статья для публикации в трудах.МВА "Иммуногенность образцов вакцинных препаратов из вирулентных, ыутантных и си штаммов P.multocida "

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 101 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственнчх исследований, обсуждения,

выводов и предложений. Список использованной литературы включает 74 публикации по тематике исследований. Материалы иллюстрированы 12 таблицами.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период 1987-1950 гг. в соответствии с государственными планами научных исследований в Каирском ветеринарном факультете и на кафедре микробиологии, вирусологии и биотехнологии Московской ветеринарной академии.

В лабораторных исследованиях по изучению вирулентных свойств, накоплению пастерелл в органах и тканях, иммунобиологических особенностей различных штаммов р.шиИ;ос1с1а использовано 265 белых мышей, 40 кроликов, 25 морских свинок и 250 цыплят 110-150-дневного возраста. В исследовательской работе использованы тстаммы пастерелл, полученные из коллекций Всесоюзного ордена Ленина научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко и Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов : № 8683 (тип А), № 681 (тип В) и Т-80 (тип Д). Также проводились исследования.с использованием мутантного, оУ и вирулентных итаммов Х-73 (5:А), Р-1059 (8:А) и печень-361 (9:А), хранящихся в коллекции Каирского ветеринарного факультета. Последняя группа штаммов была классифицирована не по капсульно.му, а соматическому антигену. Пастереллы выращивали в оптимизированном переваре Хоттингера от 6 до 24 часов при +37°С. Концентрацию микробных тел в материалах определяли различными- методам:' : по стандарту мутности спектрофотометрически *влк высеваы'л различных разведений на плотные -и жидкие питательные среды, или инокуляцией материалов этих разведений белым .

- л -

мышам. Четырем белый мышам инокулировали подкожно по 0,5 мл

-Т -ТТ

разведений материалов от 10 до 10 . Эти же разведения

(

материалов параллельно вносили в 4 сосуда в питательными средами по 1,0 мл. Наблюдение за животными при отсутствии гибели вели в течение 7 дней. При наличии роста в питательных средах проводили микроскопию мазков, окрашенных по Граму или Романовскому-Гимза. Аналогичным образом определяли концентрацию пастерелл в различных тканях животных. Предварительно готовили 10/5 суспензии органов на солевых растворах. Концентрацию микроорганизмов пересчитывали на I гр или мл исследуемой ткани и выражали в ЛД (БОЕ) 50/гр(мл).

При изучении иммунобиологических свойств атаммов и вакцинных препаратов были использованы три группы по 20 цыплят в в каждой 9-ти недельного возраста. Каждая группа была разделена на 7 подгрупп А, В, С, Д, Е, Г и I. Дополнительно по четыре цыпленка аналогичного возраста и породы содержались в.качестве контроля в каждой группе. Каждая подгруппа содержалась отдельно в чистых помещениях. Подгруппы А-Ж были заражены подкожно 10-кратными разведениями 18 часовых на мозго-сердечном бульоне культур каждого материала : мутанта, СУ или вирулентных ятаммов в дозах Ю8,. Ю7, 10б, Ю5, Ю\.Ю3 и .500 микроорганизмов.

Определение сывороточных белков.

Для определения количества белка в опытных сыворотках использовали классический метод с биуретовсй пробой. Использовали следующую методику, применяемую в ветеринарных центрах Каира: к 0,1 ил тестируемой сыворотки в проБирки добавляли .1,9 мл 95;« раствора сульфида натрия, и пробирку переворачивали 3 раза для тщательного перемешивания. Преципитат образовался

сразу же и был отделен центрифугированием при 3000 об./мин. Супернатант удаляли и к осадку добавляли 2 мл рабочего реагента Биурета, хорошо перемешивали и оставляли на 30 минут. За это время содержимое пробирок взбалтывали дважды для полного растворения. Через 30-40 минут измеряли экстенцию растворов на фоне биуретового раствора в спектрофотометре при длине волны 550 нм. В качестве стандарта 0,1 мл 17» раствора альбумина в 0,5 м с рН= 7,4 и добавляли 1,9 мл биуретового реактива. Процент иммуноглобулинов в исследуемой сыворотке определяли делением экстенции проб сыворотки на экстенцию стандарта.

Серологические тесты.

РИГА..

Абтоклавированнчй экстракт разводили 1:4 фосфатно-буфер-ным солевым раствором и соединяли в' равных объемах с 2,5?» овечьими эритроцитами и помещали в колбу. Колбу выдерживали в водяной бане при температуре 37°С в течение 3-х часов. Затем сенсибилизированные эритроциты промывали фосфатно-буферным солевым раствором. В конце концов эритроциты осадили путем центрифугирования при 500 в в течение 20 минут. 0,3% взвесь сенсибилизированных клеток в фосфатно-буферном солевом 'растворе использовали в качестве антигена. Удвоенные разведения исследуемых сывороток в пределах от 1:10 до 1:1280 были разлиты

1 • к.

по 0,05 мл (50 кгл) в микротитрационных пластинках для реакции гемагглютинации. К каждому разведению сыворотки добавляли равное количество (0,05 мл) 0,37> взвеси сенсибилизированных эри~' троцитов. В каждый комплект били включены два контроля -сенсибилизированные эритроцит* плюс разбавитель й несеисибили-зировзнкые эритроциты с исследуемой сывороткой. Пластинки

оставляли на ночь при комнатной температуре и через 18-20 часов учитывали результаты. ■

ЭЛИЗА-метод (Маршал и др., 1981).

Бактериальную взвесь разбавляли до коэффициента поглощения 1,0 при 540 нм на спектрофотометра. Клетки разрушали'ультразвуком (до 60%) в течение 50 минут на ультразвуковом Дисмембрато-ро-300. Обработанную ультразвуком суспензию цельных клеток хранили при температуре 4°С. Антиген разбавляли 1:4 буфером и использовали для нанесения в лунки пластинок (100 лунок-пластинок). Закрытые пластинки инкубировали в течение 24 часов при температуре 37°С и трижды промывали твин-80-фосфатно-буферным раствором (ФБТдд). Затем в лунки добавляли сйворотки, разведенные в РВТ2д, включая негативный и позитивный контрольные варианты сывороток, и инкубировали пластины при температуре 37°С в течение 2 часов. За этим следовала трехкратная промывка раствором РВТцд, после чего добавляли в 100 лунок раствор 1:400 кроличьего антикуриного иммуноглобулина, конъюнгированно-'го щелочной фосфотазой,-и пластины инкубировали еще 2 часа при температуре. 37°С. Промывка раствором РВТдд повторялась трижды. Затем добавляли во все 100 лунок раствор субстрата (1мг р-нит-рофенллфосфата/мл субстратного буфера), после чего в течение одного часа наблюдали'за изменением интенсивности окраски, затем останавливали реакцию, добавлением 2 N раствора гидроокиси натрия. Реакцию учитывали микроэлизным ридером при 405 нм на фоне контроля (только раствор субстрата).

Интерпретация результатов..

Среднее значение абсорбционной способности сыворотки нормальных кур (негативный контроль), с трехкратным превышением отклонений от этих значений рассматривали в качестве показа-

теля позитивности для испытываемых образцов сыворотки.

Статистические методы обработки результатов.

Титры вирулентной активности (ЛДдд) определяли по методу Heed И Muench (1938).

Титры сывороток выявляли в РИГА и ЭЛИЗА-методом и выражали в 1об2 . При определении концентрации бактерий в культурах или суспензий органов проводили высевы IO-кратных разведений материалов на агаровые среды, проводили подсчет вырастающих колоний и вычисляли среднеарифметические показатели.

2.2. Результаты исследований.

Вирулентные свойства.

Определяли вирулентность для мышей свежих культур бактерий и хранившихся при 0 - +4°С и -14°С в течение 21 дня; также провели исследования по изучению вирулентности для мышей пастерелл, пассированных на мясном агаре (10 пассажей без отбора колоний или каких-либо специальных методов селекции) и суспензий тканей от павчих после экспериментального заражения животных. Вирулентность была обусловлена введением 10-500 бактерий из свежеполученных культур и суспензий тканей животных, пав'лих после экспериментального подкожного заражения. Как • интактные, так и гнотобиотические мыши погибали в период от 12 до 72 часов после инокуляции испытуемых материалов. Патоло-гоанатомические изменения у павчшх мышей регистрировали обычно в легких (гиперемия, отек; и в виде геморрагий на слизистых кишечника у мыней, погибающих в более поздние сроки (48-72 часа). В процессе 10 пассажей на МПА штаммы всех типов пастерелл резко снимали или вообще утрачивали свои вирулентные свойства. •• Пастэрзллы всех типов били ;.эла резистентн« • и плохо сохрани-

лись при температуре 0 - +4°С и даже при -Г4°С. Вирулентность 'хранившихся культур проявлялась при инокуляции подкожно 50-1000 бактериальных тел. Отмечали значительное накопление пастерелл в крови, печени, селезенке и легких кроликов и кур, 'пасших после подкожной инокуляции Ю*1'0- I06'0 мыликых Морские свинки проявляли большую резистентность к инокуляции массивных доз бактерий, погибали от подострого течения заболевания' на 3-5 суток (поздние сроки), с чем, вероятно, и связано незначительное накопление вирулентного возбудителя в печеночао ткани.

В последующем были проведены исследования по определению вирулентности пастерелл типов А, В, Д для кроликов, морских свинок, кур и мышей, как интактных, так и иммунизированных двукратно культурой, инактивированной 0,4% формалином, при* инокуляции им внутримышечно 2,200 и 2000 бактерий из свежйпо-лученных культур. Типы А, В, Д вирулентны для мышей, кур и / кроликов при внутримышечной инокуляции в дозах 200 и 2000. • микробных тел из -свежепоЛученных культер. .Морские свинки проявляли большую устойчивость и часть их выживала при инокуляции 2000 микробных тел, а 200 микробных тел типов А и В вообще не.вызвали заболевания.-

•Данные опытов демонстрируют кммуногенкую' активность культур типов А и В, инактивированных формалином, причем иммунизированные мыши были устойчивы даже к инокуляции больших доз вирулентных пастерелл. Тип Д в этих опытах не обладал иммуногенными свойствами, что создает проблемы выбора штаммов при изготовлении вакцин из данного типа.

Подкожное введвние 500 бактериальных

клеток вирулентных египетских штаммов приводило к гибели 60$

инфицированных мышей в течение 48-72 часов. Дозы от 10^ до 10® бактериальных клеток обуславливали гибель 100$ инфицированных мышей спустя 18-43 часов после заражения. Мутантный штамм не вызывал гибели и общих расстройств у опытных животных. Штамм СУ был патогенным для мышей, но в менъзей степени, чем вирулентный штамм: при инфицировании мышей в дозах 500-1000 бактерий гибели не отмечали, и только 2 из 10 мышей, зараженных в дозе 10^ бактерий погибли 96-120 часов спустя после инокуляции.

Таким образом, вирулентность изучаемых штаммов колебалась в максимально допустимых пределах.

В печени, легких и селезенке птиц пастереллн. различных по вирулентности штаммов накапливались в более высоких концентрациях, чем в крови; причем бактерии могли быть выявлены в органах уже через 35 минут после внутривенной инокуляции. Отмечено, что чем выше вирулентность, тем выше концентрация бактерий в органах и наоборот.

■ • Авирулентный.(мутантный) и слабо вирулентный (СУ) штаммы через 72 часа после инокуляции в органах й тканях выявлять не удавалось. Дозы вирулентных штаммов от 5 х 102 до 10^ вызывали гибель 25-75% цыплят в течение 48 и 120 часов после инъекции; дозы 10^'° БОЕ и более вызывали 100^ гибель цыплят.

Мутантный штамм был авирулентен для цыплят даже при инокуляции подкожно массивных доз пастерелл. Штамм СУ мог вызывать гибель отдельных цыплят линь при инокуляции 1б0 млн. бактериальных клеток.

Антигенные свойства вакцинных препаратов.

Через 2 недели после вакцинации (первое введение) имело место существенное увеличение общего белка в сыворотке цыплят,

привитых живыми вакцинами (на 1,1-1,7 гр%). Через 2 недели после ревакцинации штаммом СУ уровень сывороточных белков продолжал возрастать.(до 7,6 гр%) с последующим постепенным снижением до близких к исходным на 12 неделе.

Ревакцинация мутантным штаммом вызвала снижение уровня белка через 2 недели (на 1,4 гр%) с последующим ростом этого показателя до 6,4 гр% (или) через 8 недель; даже через 12 недель у этой группы цыплят общий белок сыворотки на 0,6 гр% превышал показатели в контрольной группе.

Уровень сывороточного белка через 4 недели после иноку- ■ ляции инактивированной масляно-адъювантной вакцины был близок к его показателям до вакцинации, понижался на 0,9. гр% через 2 недели после ревакцинации, но превышал, его. во все'последующие сроки исследования на 0,7-1,5 гр%. -

Таким образом, было отмечено, что более резкое, но непродолжительное (4-6 недель'после ревакцинации) повышение уровня общего белка имело место при вакцинации и ревакцинации цыплят штаммом СУ. После ревакцинации мутантным штаммом и масляно-адъювантной вакциной непрожолжительное снижение уровня белка в последующие сроки компенсировалось и даже превышало показатели контроля при окончании опытов.

Показатели общих иммуноглобулинов в сыворотке этих групп коррелировали с показателями белка- в сыворотках. Так, высокий уровень иммуноглобулинов в сыворотке отмечен на 2-ой неделе после вакцинации СУ штаммов (2.336' гр%) и на 8-ой неделе после-вакцинации мутантным штаммом (2.075 гр%). После вакцинации масляно-адъювантной вакциной максимальный уровень полных иммуноглобулинов (2.169 гр%) наблюдали на 10-ой неделе. Наоборот, при использовании кквэго СУ штамма иммуноглобулины появ-

ляются на 2-ой неделе после вакцинации, по этот уровень в последующем снижался и оставался низким в течение 12 недель эксперимента. В отношении мутантного штамма показано, что сыворотка цыплят при первичном и повторном введении препарата показывала более низкую концентрацию уровня иммуноглобулинов (1.428 гр%). Пик (2.075 гр%) иммуноглобулинов регистрировали лишь на 8 неделе. Сыворотки, взятые от цыплят этих же групп исследовались на уровень антител (максимальное разведение сыворотки с положительным результатом реакции) в РИГА и ЗЛИЗА-тесте. Полученные показатели двух серологических тестов практически указывали на прямую коррелятивную зависимость между ними при выявлении антител у привитых; титры антител в ЭЛИЗА-тесте в 3-II раз превышали титры в РНГА. Изменения титров антител копировали полностью изменения показателей общего белка и сывороточных глобулинов у цыплят, привитых этими вакцинами.

Иммуногенность вакцинных препаратов.

В предварительных опытах вакцины были проверены на стерильность и реантогенность и удовлетворяли требованиям, предъявляемым к вакцинным препаратам. При гибели цыплят или проявлении клиники заболевания (отказ от корма, сонливость и т.п.) считали, что напряженность иммунитета у них недостаточна.

Отсутствие клинической реакции на заражение расценивали как наличие напряженного иммунитета на инокуляцию вакцин (из штамма.СУ, мутантного или 3-х валентной масляно-адъкщантной).

Во всех трех группах цыплят, привитых этой вакциной (трехвалентной инактизированной масляно-адъювантнсй), после заражения 3.различными по соматическому'антигену штаммами p.raulto-cida погибало реагировало от 50 до 60 голов. И только от 40 до 50$ привитой птицы имело напряженный иммунитет.

Гибель цыплят наблюдали с 2-х по 13 сутки после инокуляции вирулентного возбудителя. В эти же сроки в каждой группе переболело с последующим выздоровлением по 1-3 цыпленка, т.е. от 5 до 15% поголовья. Эти данные коррелируют с низкими уровнями антител, общего белка и глобулинов в период контрольного заражения у привитых масляно-адъювантной вакциной. Десять цыплят контрольных (непривитых) для этого опыта, также как и контрольные цыплята в других группах погибли в сроки от 2 до II дней после заражения.

Наиболее иммуногенной оказалась живая вакцина из иутант-ного ¡ятамма Р.ти11;ос1(1а.

В группе из 60 цыплят, привитых этой вакциной, после заражения тремя разными штаммами отмечали гибель на 3-13 сутки 2-х - 4-х цыплят и I - 2 цыпленка переболевали, т.е. напряженный иммунитет не формировался у 10-30% вакцинированных цыплят; 70-90% цыплят имели надежную защиту против экспериментального •инфицирования.

Вакцина из штамма СУ .также имела неплохие перспективы в отношении иммуногенности: напряженный иммунитет формировался у 60-85% привитого поголовья при 100$ гибели контрольных (непривитых цыплят).

Формирование напряженного иммунитета у вакцинированных живыми вакцинами цыплят сопровождалось и индукцией пика антител и уровня общего белка и глобулинов в сроки, близкие ц срокам проведенного контрольного заражения.

3. выводы

1. Производственные штаммы различных серотипов пастерелл (А, В, Д 5:А, 8:А, 9:А) были высоко вирулентны для белых мышей, кроликов и кур и менее вирулентны для морских свинок при подкожной и внутримышечной инокуляции.

Гибель мышей наблюдали при инокуляции вирулентных штаммов в дозах от 2 до 1000 БОЕ.

2. P.multooida вирулентных и авирулентннх штаммов (5:А, 8:А,' 9:А) выявляли в легких и селезенке цыплят через 35 минут после инфицирования с максимальным накоплением возбудителя в этих тканях через 24-48 часов; слабо вирулентный штамм Ш обнаруживали в низких концентрациях, а авирулзнтнчй мутантный штамм в крови выявить на удавалось.

3. Вакцина из авирулентного мутантного штамма Си вызывали на 14 сутки после-прививки цыплят значительное увеличение количества сывороточных белков и иммуноглобулинов (на 1,1 -1,8 гр% и 0,6 - 2,2 гр% соответственно); увеличение их на инокуляцию масляно-адъювантной вакциной было менее существенно.

Показатели сывороточного белка значительно понижались (на 0,9 и 1,4 гр% соотвеФственно) на 14 сутки после ревакцинации птиц мутантной и масляно-адъювантньши вакцинами; реиног.уля-ция вакцины из штамма Си вызывала увелтчение количества сывороточных белков через 2 недели на 1,5 гр% с нормализацией этих показателей через 10-12 недель.

4. Ревакцинация обусловливала значительное повышение уроеня сывороточных антител с максимальный накоплением до 440 и 5120 в РИГА и ЭЛИЗА-тесте соответственно на клсляно-адыг-вантную.вакцину через 10 недель и до 320 и I44G (РИГА л

ЭЛИЗА-тест соответственно) на вакцину из ыутантного штамма через 8 недель; пик антител на реинокуляцию вакцины С и регистрировали через 2 недели в титрах 480 и 5120 в РИГА в ЭЛИЗА-тесте соответсвенно. Через 2 недели после реинокуля-ции первых двух вакцин откачали наименьшие тигры аягитэл.

5. Инактивированные масляно-адъювантные вакцины вызывали формирование напряженного иммунитета только у 40-50$ привитых цыллят. Наиболее имыуногенной была живая вакцина из путант-ного штамма; она создавала напряненный иммунитет к заражению вирулентными исходными штаммами типов 5:А, 8:А и 9sA у 70-80% цыплят пооле двукратной вакцинации с интервалом в 2 недели. Данный тип вакцины был наиболее перспективный для изготовления коммерчеких,образцов вакцины против пастреллеза птиц,

4. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ .

НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. В наставлении по лабораторной диагностике паотереллеза птиц предусмотреть взятие в качестве патматвриала,для исследований проб легкого и селезенки.

2. Рекомендовать для произввдства коммерческой вакцины в Арабской Республике Египет нугантный штамм Р. nuitooida.