Ветеринарно-санитарная экспертиза различных видов рыб при анизакидозе

Дубинина, Марина Евгеньевна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Ветеринарно-санитарная экспертиза различных видов рыб при анизакидозе

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Дубинина, Марина Евгеньевна Чебоксары 2009 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.06

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Ветеринарно-санитарная экспертиза различных видов рыб при анизакидозе

На правах рукописи

ДУБИНИНА МАРИНА ЕВГЕНЬЕВНА

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ РЫБ ПРИ АНИЗАКИДОЗЕ

16.00.06 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза; 03.00.19 - паразитология

-1 0КТ 2009

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Чебоксары - 2009

003478458

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук.

Научные руководители:

доктор ветеринарных наук, профессор

Сапунов

Анатолий Яковлевич

доктор биологических наук, профессор

Гугушвили Нино Нодариевна

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, Софронов

профессор Владимир Георгиевич

доктор ветеринарных наук Садов

Константин Михайлович

Ведущая организация - ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия».

Защита состоится 16 октября 2009 г. в 13— часов на заседании диссертационного совета Д 220.070.02 при ФГОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия» (428003, г. Чебоксары, ул. К.Маркса, д. 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия».

Автореферат разослан 15 сентября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

В.Г. Семенов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Высокая заражённость рыб спиралевидными личинками Anisakis и промысловых беспозвоночных резко ухудшает их товарное качество, что приводит к значительным экономическим потерям. Заражению личинками Anisakis подвержены не только человек, но и ценные пушные звери при искусственном выращивании и другие полезные животные, для корма которых используют свежую морскую рыбу.

Медицинское и народно-хозяйственное значение имеют представители родов Anisakis, Contracaecum, Goezia, Histerothylacium, Porrocaecum, Pseudo-terranova из семейства Anisakidae. Они являются патогенными как для человека, так и для животных, негативно влияют на переработку и реализацию рыбы и морепродуктов (A.B. Гаевская, 2005; M.D. Valero, 2000).

Для организации успешной борьбы с анизакидозом и предотвращения заражения человека и животных, необходимо применять своевременные методы исследования и распознавания гельминтов, что позволяет осуществить постановку точного диагноза гельминтоза, которая служит началом всей цепи оздоровительных мероприятий (H.JT. Бурджанадзе,1937).

Исходя из того, что анизакидоз является широко распространенным заболеванием среди морских рыб семейства тресковые, сельдевые и корюшко-вые, используемых человеком в пищу, весьма актуальным является изучение влияния личинок Anisakis на качество рыбной продукции.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы было проведение исследований по усовершенствованию ветеринарно-санитарной экспертизы рыбы при заражении ее возбудителями анизакидоза, направленной на повышение качества и безопасности рыбной продукции.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить степень распространенности анизакидоза рыб и его медико-ветеринарное значение.

2. Провести органолептические, лабораторно-диагностические исследования мышечной ткани и внутренних органов здоровой рыбы и пораженной личинками Anisakis.

3. Определить динамику оптической плотности экстракта мышечной ткани рыбы, в зависимости от степени инвазии личинками Anisakis.

4. Изучить эффективность метода капиллярного электрофореза для определения качественных показателей рыбы при анизакидозе и избыточного аутолиза при нарушении температурного режима ее хранения.

5. Определить концентрацию летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани при анизакидозе.

Научная новизна. Впервые изучены и установлены параметры изменения биохимических показателей мышечной ткани при анизакидозе рыб. Установлено, что в мышечной ткани при анизакидозе образуются и накапливаются свободные аминокислоты, летучие органические вещества. Усовершенствованы лабораторные методы исследований с целью повышения информативности показателей качества рыбы. Обоснована теоретическая и практическая необходимость проведения исследований на капиллярном электрофорезе «Капель 103-Р» и газо-жидкостном хроматографе «Кристалл 2000-М» для установления качества и безопасности рыбы при анизакидозе.

Практическая значимость диссертационной работы состоит в объективной оценке качества и безопасности рыбы при анизакидозе вследствие установления в мышечной ткани дегенеративных изменений, не допущении использования для пищевых целей интенсивно пораженной рыбы. Эти сведения могут быть использованы в практике для контроля качества рыбы, а также в курсах лекций по токсикологии и ветеринарно-санитарной экспертизе с основами технологии и стандартизации продуктов животноводства.

Практическая значимость результатов исследований состоит в усовершенствовании лабораторных методов исследований, позволяющих давать наиболее объективную оценку качества рыбы при паразитарных заболеваниях.

Разработаны учебные пособия и методические рекомендации: «Вете-ринарно-санитарная экспертиза промысловой рыбы и рыбных продуктов», «Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса убойных животных», «Санитарно-гигиенические требования к холодильным камерам, технологическим процессам и хранению пищевых продуктов».

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертации доложены и обсуждены на IV Международном симпозиуме (Санкт-Петербург, 2008); на научной конференции молодых ученых, аспирантов, студентов и специалистов (Троицк, 2008); на научных и методических конференциях факультета ветеринарной медицины КубГАУ (Краснодар, 2006-2009).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации издано 4 научных работы, опубликованных в рекомендуемых Высшей аттестационной комиссией журналах: Труды Кубанского государственного аграрного университета - 1. В материалах IV международного симпозиума (Санкт-Петербург) - 2. В материалах конференции молодых ученых, аспирантов, студентов и специалистов (Троицк) - 1. Методические рекомендации (Краснодар) - 3.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Зараженность различных видов рыб возбудителями анизакидоза.

2. Особенности изменения физико-химических показателей мышечной ткани рыб.

3. Влияние степени зараженности рыбы анизакидами на концентрацию связанных и образование свободных аминокислот, накопление летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани.

4. Эффективность использования капиллярного электрофореза «Капель 103-Р» и газового хроматографа «Кристалл 2000-М» с целью установления качества и безопасности рыбы при анизакидозе и нарушении температурного режима хранения.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 157 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, заключения, выводов, предложений производству, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 24 таблицами, 8 рисунками. Список литературы включает 226 источников, в том числе 161 зарубежных авторов.

2. Материалы и методы исследований

Исследования выполнены в ГНУ Краснодарской НИВИ. В процессе проведения ветеринарно-санитарной экспертизы нами было выявлено гель-минтозное заболевание анизакидоз у рыб: из семейства тресковые - путассу северная (М1сготе51зии5 ро^авБои) и минтая (ТЬега§га); из семейства сельдевые - сельди атлантической (С1ирса barengus), из семейства анчоусовые (Еп§гаиН<1ае), отряда сельдеобразные - хамсы черноморской (Е^гаиПв епсга-51сЬо1из роШкив); семейства корюшковые (05тепс1ае) - мойвы (МаНоШв уШоБиз).

В зависимости от степени инвазии личинками Агша^Б пробы рыб разделили на группы. Пробы путассу разделили на четыре группы: первая - при инвазии от одной до двух личинок АшваМБ., вторая - от 9 до 13, третья - от 20 до 36, четвертая - от 44 до 63. Пробы минтая - на две группы: первая - при обнаружении личинок АшваМв от одной до двух, вторая - от 7 до 8. Пробы сельди - на три группы: первая - при обнаружении личинок Агша^Б от 10 до 14, вторая - от 15 до 20 и третья - от 31 до 42. Пробы хамсы разделили на четыре группы: первая -неинвазированная, вторая - инвазированная от 1 до 4 личинок АгиБа^Б, третья -от 15 до 20 и четвертая - от 21 до 27. Пробы мойвы разделили на две группы: первая - не инвазированная личинками АгнзаИв, вторая - от 4 до 8.

С целью установления доброкачественности рыбы и рыбной продукции нами были проведены экспериментальные исследования отобранных проб. Для этого согласно ГОСТу были исследованы следующие параметры: орга-нолептические показатели мяса рыбы и внутренних органов - внешний вид и

Рисунок 1 — Схема опыта

цвет, консистенция, запах мяса. Люминесцентный метод - «Определение качества и безопасности пищевых продуктов» прибором «ФИЛИН»; лабораторные исследования проб мяса (проба варки; количество водородных ионов; определение первичного распада белка - реакция на пероксидазу, редуктазу и с сернокислой медью; определение содержания аммиака в мясе рыбы; метод бактериоскопического анализа.

Определение оптической плотности экстракта из мяса проводили по методике H.H. Гугушвили, 2002 г. Из биохимических исследований определяли концентрацию связанных и свободных аминокислот с помощью капиллярного электрофореза «Капель 103-Р». Определение концентрации летучих органических веществ на газо-жидкостном хроматографе «Кристалл 2000-М».

Полученные результаты были подвергнуты биометрической обработке по И.А. Ойвину (i960), степень достоверности установлена по распределению Стьюдента.

3. Результаты собственных исследований

3.1 Физико-химические показатели путассу северной (Micromesistius poutassou), сельди атлантической (Clupca barengus), хамсы черноморской (Engraulis encrasicholus ponticus), минтая (Theragra), мойвы (Mallotus villosus)

Нами изучены органоморфометрические особенности и проведены па-разитологические исследования рыб, с помощью которых были выявлены личинки Anisakis: у путассу северной - от 1 до 63; минтая - от 1 до 8; сельди -от 10 до 42; хамсы от 1 до 27; мойвы - не инвазированная личинками Anisakis, и инвазированной от 4 до 8. В связи с этим нами были проведены физико-химические исследования мышечной ткани методом пробой варки, при которых было установлено, что инвазированная рыба личинками Anisakis (путассу от 9 до 63, сельдь - от 15 до 42, хамса - от 15 до 27, минтай - от 7 до 8, мойва - от 4 до 8) не пригодна в пищу.

Нами установлено, что у инвазированной путассу от одной до двух личинок Anisakis и не инвазированной хамсы и минтая концентрация водородных ионов составила от 7,24 до 7,28. Данное обстоятельство свидетельствовало о сомнительной свежести указанных рыб. В остальных пробах рыб, где было выявлено наличие личинок Anisakis, наблюдался сдвиг водородного показателя в сторону щелочной реакции, что свидетельствовало о патологическом процессе, вызываемом непосредственно личинками Anisakis, нарушающих целостность тканей, а также продуктами жизнедеятельности гельминтов.

С целью установления первичного распада белков в мясе рыбы нами была проведена качественная реакция с бензидином на активность фермента пе-роксидазы. С помощью перекиси водорода пероксидазы катализируют окисление различных веществ, включая фенолы. Фермент пероксидаза была активна у неинвазированной рыбы (хамсы и мойвы), реакция на активность фермента была положительной, и слабоактивная при минимальной инвазии путассу и минтая (1-2), хамсы (1—4); неактивная при максимальной инвазии путассу, сельди, хамсы, минтая и мойвы. Реакция на активность фермента пероксидазы была отрицательной независимо от степени инвазии личинками АшБаЫБ.

Нами установлено, что независимо от степени инвазии исследуемых рыб личинками Ашяак^, активность фермента редуктазы была положительной, а пероксидазы - отрицательной. При отсутствии инвазии личинками А1ша1ш, реакция на активность фермента редуктазы была отрицательной, пероксидазы - положительной.

При определении в исследуемых пробах продуктов первичного распада белков в бульоне (реакция с сернокислой медью) установлено, что у неинва-зированных рыб личинками АгиваМэ в мышечной ткани отсутствовал первичный распад белков и, напротив, при наличии хотя бы одной личинки качественной реакцией на сернокислую медь было выявлено, что в бульоне образовывались хлопья или желеобразный сгусток сине-голубого цвета. Это свидетельствовало о первичном распаде белка в мышечной ткани рыб, инва-зированных личинками АхшаИв.

В рыбе (хамса и мойва), не инвазированной личинками АгаБа^, содержание аммиака было до 30 мг/кг фарша, что свидетельствовало об отсутствии глубокого распада белков. Независимо от степени инвазии морских рыб личинками Аг^аклэ в мышечной ткани происходило накопление аммиака. Кроме того, при максимальной инвазии, по всей видимости, происходили как аэробный, так и анаэробный процессы глубокого распада белков мышечной ткани (путассу и сельдь).

С целью установления процессов распада тканей рыб, инвазированных личинками Ашвак^, нами была предложена методика по определению оптической плотности экстракта мышечной ткани. У инвазированной путассу от одной до двух личинок АшваЫз и неивазированной хамсы и мойвы оптическая плотность составила 0,49, 0,30 и 0,62 соответственно, что свидетельствовало о сомнительной свежести указанных рыб.

В остальных пробах рыб, где было выявлено наличие личинок Anisakis, наблюдалось повышение оптической плотности. Это свидетельствовало о патологическом процессе, вызываемом непосредственно личинками Anisakis, нарушающих целостность тканей, а также продуктами жизнедеятельности гельминтов. В процессе своей жизнедеятельности гельминты выделяют токсины и оказывают негативное действие на ткани органа, вызывая образование токсических белков. Высокие показатели оптической плотности, по всей видимости, зависели от степени инвазии гельминтами, что подтвердили физико-химические показатели исследуемых проб рыбы.

При проведении бактериологических исследований нами установлено, что в изучаемых пробах рыб количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) и колониеобразующие единицы (КОЕ) в 1 г рыбного сырья (1*1Е5), Staphilococcus aureus в 0,01 г рыбного сырья не обнаружены. Патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы, в 25 г рыбного сырья не обнаружены. Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) в 0,001 г рыбного сырья не обнаружены. V. Parahaemolyticus в 1,0 г рыбного сырья не обнаружены.

Следовательно, в исследуемых пробах рыб не были обнаружены патогенные микроорганизмы. Однако по физико-химическим показателям и интенсивной инвазии установлено, что рыба непригодна в пищу и ее следует направить на техническую утилизацию. При токсико-химическом исследовании как пораженной личинками Anisakis, так и неинвазарованной рыбы содержание ДДТ (4,4-дихлор-дифенилтрихлорэтан), ГХЦГ (гексахлорциклогексан) и их метаболитов, N-нитрозаминов, кадмия не превышало допустимые уровни.

3.2 Влияние степени инвазии личинками Anisakis на концентрацию связанных и свободных аминокислот, образование летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани различных видов рыб

Выявление концентрации связанных аминокислот в вытяжке мышечной ткани у различных видов рыб при инвазии личинками Anisakis имеет важное значение для установления качества и безопасности продукта. Высокая концентрация связанных аминокислот свидетельствует об отсутствии процессов распада белков мышечной ткани.

Нами была определена концентрация связанных аминокислот (аргинин, лизин, тирозин, фенилаланин, гистидин, лейцин, метионин, валин, пролин, треонин, триптофан, серии, а-аланин, глицин) у рыб (путассу, минтай, сельдь, хаема, мойва) в зависимости от степени их инвазии личинками Anisakis. При инвазии рыб личинками Anisakis происходило снижение связанных аминокислот в зависимости, как от степени инвазии, так и от вида рыбы. При инвазии сельди личинками Anisakis наблюдалось снижение концентрации связанных амино-

кислот, что, по всей видимости, обусловлено продуктами жизнедеятельности гельминтов. Однако при инвазии от 15 до 20 личинок АшБа^Б происходило снижение тирозина, фенилаланина, лейцина, метионина, треонина, серина, а-аланина и, напротив, повышение лизина относительно пораженной сельди от 31 до 42 личинок. В результате исследований нами установлено, что в вытяжке мышечной ткани сельди, инвазированцой от 10 до 14 личинок Ашва^в, общая концентрация связанных аминокислот была выше в 1,6 раза и в 1,5 раза, чем при инвазии от 15 до 20 и от 31 до 42 личинок соответственно (табл. 1).

Таблица 1 - Концентрация связанных аминокислот в вытяжке мышечной ткани сельди и хамсы (М±ш; п=10)

Связанные аминокислоты, мг/кг Количество личинок Anisakis на висцеро рыб

сельди хамсы

10-14 31-42 0 21-27

Аргинин 12442,33± 285,79 5596,551200,15 *** 10456,731 137,59 6174,55+83,8 ♦♦ ♦

Лизин 886,18± 23,77 253,8916,31*** 306,38+2,81 243,8717,61 ***

Тирозин 1487,611 36,59 1057,36124,98 *** 641,2816,05 511,6218,70 * * *

Фенил-аланин 3832,011 84,88 1374,94149,05 *** 758,23111,91 481,8919,76 * * *

Гистидин 33547,641 873,54 21241,981988,47 *** 50302,331 380,35 34289,181 1085,20***

Лейцин 12200,291 450,32 8377,381398,58 ** * 16349,401 491,70 10853,281 158,50 ***

Метионин 11615,871 354,68 11307,551407,14 22205,601 399,37 14858,64120 5,31 ***

Валин 5224,571 138,37 3582,461103,76 * * * 8889,711 116,98 6199,311 193,33 ***

Пролин 6177,731 53,23 4943,271202,47 ** * 11965,101 181,61 8471,13+ 120,44 ***

Треонин 28369,531 529,26 15254,361559,75 28622,761 388,58 20180,241 J9 ]4***

Триптофан 1063,281 31,73 868,97135,08*** 799,601 26,82 374,4918,57

Серин 4742,13+ 122,50 3503,14189,99 ** * 6481,591 122,76 3631,231 113,64 ***

а-аланин 21878,121 1052,04 16059,961703,78 39140,301 573,68 25174,181 927,81***

Глицин 8636,351 451,99 5606,081416,01 17711,981 555,87 10947,581 151,24***

*** Р>0,001

В вытяжке мышечной ткани путассу, и н Базирован ной от одной до двух личинок /\msakis, общая концентрация связанных аминокислот была выше в 1.4 раза, в 1,7 раза и в 2 раза, чем при инвазии от 9 до 13,от 20 до 36 и от 44 до 63 личинок соответственно, В вытяжке мышц минтая, ин базированного от одной до двух личинок Ат5ак]5, общая концентрация связанных аминокислот была выше в 1,4 раза, чем при инвазии от 7 до 8 личинок. В вытяжке мышц мойвы, № инвизированной личинками Ап1Ба1аз, общая концентрация связанных аминокислот была выше в 1,3 раза, чем при инвазии от 4 до 8 личинок соответственно (рис. 2).

«г/к г

250000 т-------•-------------------

150000 -

1-2 | 9-13 | 20-36 | 44-63 Путассу

пл

7-в Минтай

10—14 | 15-20| 31-42 I Сельдь

1-4 I 15-20,21-27 Хамса

0 ! 4-Мсква

Рисунок 2 - Общая концентрация связанных аминокислот в вытяжке мышечной ткани различных видов рыб

В результате исследований нами установлено, что у пораженных личинками АтздШ рыб концентрация связанных аминокислот в вытяжке мышечной ткани хамсы была выше, чем у сельди и мойвы в 1,5 раза, путассу -в 1,8 раза, минтая - в 1,2 раза. Снижение концентрации связанных аминокислот происходило за счет разрыва поли пептидных связей между аминокислотами и образования свободных аминокислот, что свидетельствовало о процессе распада белка, который, по всей видимости, обусловлен влиянием продуктов жизнедеятельности личинок нематод рода Аш$ак|$ (рис. 2).

В процессе жизнедеятельности личинок Лтза^з происходит распад белков мяса рыбы, в результате чего связанные аминокислоты переходят в свободные аминокислоты, которые быстро подвергаются дальнейшим изменениям. Превращение продуктов распада белков происходит через промежуточные вещества с образованием конечных, плохо пахнущих продуктов разложения, а именно: аммиака, сероводорода, скатола, индола, крезола, фенола.

меркаптанов и других веществ. Постепенно и непрерывно накапливаются летучие жирные кислоты, выделяется и накапливается углекислый газ.

При инвазии рыб личинками Ап¡как¡5 происходил распад белка на свободные аминокислоты, и изменялась их концентрация в зависимости, как от степени инвазии, так и от вида рыбы. При инвазии путассу личинками Ашзак^з установлено повышение концентрации свободных аминокислот: гистидина, метионина, Пронина, глицина и, напротив, снижение аргинина, лейцина, валина, треонина, триптофана, серии а, а-аланина, При инвазии путассу одной или двумя личинками Атм^Б отсутствовали свободные аминокислоты: лизин, тирозин и фенил ал анин. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышц п)тассу при инвазии от одной до двух личинок составила 3603,18 мг/кг фарша рыбы, при инвазии от 44 до 63 личинок Ал¡зак]5- 3622,35 мг/кг фарша рыбы (рис. 3).

С увеличением инвазии минтая личинками Ат5ак1к было установлено повышение концентрации свободных аминокислот: а-аланина, аргинина, гистидина, глицина, метионина, валина, пролина, тирозина, треонина, триптофана, серина, и, напротив, снижение фенилаланина, лейцина. При инвазии минтая двумя личинками Атзак15 отсутствовала свободная аминокислота — лизин. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани минтая при инвазии от одной до двух личинок составила 4302,03 мг/кг фарша рыбы, при инвазии от 7 до 8 личинок АтЕак^з -7888.12 мг/кг фарша рыбы (рис. 3).

I 1

ЭС4Н» 29000

- П п п -П 0 | 1 ■ 1» ¡-л

0 ППППП , 1, 1 1-1 | »-и | 20-зд | «4-и 1-2 | г-е ч>-и | и-го | -20 | 21 -27 1 О | М |

Рисунок 3 - Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани различных видов рыб

При инвазии сельди от 31 до 42 личинок Ашза^з наблюдалось увеличение концентрации свободных аминокислот: аргинина, пролина, лейцина, ме-

тионина, валина, глицина, треонина, триптофана, серина, а-аланина и, напротив, снижение гистидина и лизина. Однако, при инвазии от 15 до 20 личинок Атзак^ происходило снижение а-аланина, фенилаланина, аргинина, лейцина и, напротив, повышение гистидина, глицина, пролина, треонина, триптофана, серина, метионина и валина. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани сельди, пораженной от 10 до 14 личинок Агшак^, составила 5670,67 мг/кг фарша рыбы, при инвазии от 15 до 20 - 6750,53 мг/кг фарша рыбы, при инвазии от 31 до 42 - 7897,48 мг/кг фарша рыбы (рис. 3).

Из всех свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани сельди максимальная процентная концентрация приходилась на гистидин (17-26%), а-аланин (19-23%), аргинин (14-15%), глицин (13-15%), треонин (6-7%), ме-тионин (5-13%), и, напротив, минимальная - на лизин (0,3-0,4%), вапин (5-2,1%), триптофан (0,9-1,3%), серин (2-3%).

С увеличением инвазии хамсы личинками АшваМв наблюдалось увеличение концентрации свободных аминокислот, что, по всей видимости, обусловлено продуктами жизнедеятельности гельминтов. Однако при инвазии от одной до четырех личинок АшваМв происходило снижение тирозина; при инвазии хамсы от 15 до 20 - фенилаланина, при инвазии хамсы от 21 до 27 -тирозина, триптофана и фенилаланина относительно не пораженной личинками хамсы. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышц хамсы, не пораженной личинками, составила 19625,75 мг/кг фарша рыбы, при инвазии от одной до четырех личинок АгтаМв - 27919,49 мг/кг фарша рыбы, при инвазии хамсы от 15 до 20 - 28067,72 мг/кг фарша рыбы, при инвазии хамсы от 21 до 27 - 31804,49 мг/кг фарша рыбы (рис. 3).

Нами было установлено, что с увеличением инвазии мойвы от четырех до восьми личинок Ашва^Б происходило повышение концентрации всех свободных аминокислот, кроме глицина. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышц мойвы, не пораженной личинками, составила 5612,68 мг/кг фарша рыбы, при инвазии от четырех до восьми личинок Аги-ва^в - 7299,25 мг/кг фарша рыбы (рис. 3).

В результате исследований нами установлено, что в вытяжке мышечной ткани хамсы при максимальной инвазии личинками /\nisakis, концентрация свободных аминокислот была выше в 9 раз, чем у путассу, у мойвы и минтая и сельди - в 4 раза. Повышенная концентрация свободных аминокислот свидетельствовала о процессах распада белка (низкая концентрация связанных аминокислот), которая обусловлена влиянием продуктов жизнедеятельности личинок нематод рода Аш-БаИБ на качество рыбы. Однако высокая концентрация свободных аминокислот в мышечной ткани хамсы обусловлена не только наличием личинок АгизаЫБ, но и структурой ткани, в отличие от других изучаемых видов рыб (рис. 3).

У путассу, пораженной от одной до двух личинок Anisakis, концентрация связанных аминокислот по сравнению со свободными аминокислотами была выше в 41 раз, при поражении путассу от 44 до 63 личинок Anisakis - в 24 раза. При инвазии минтая от одной до двух личинок Anisakis концентрация связанных аминокислот была выше в 45 раз, при поражении минтая от 7 до 8 личинок Anisakis - в 16 раз, чем свободных аминокислот.

У сельди, пораженной от 10 до 14 личинок Anisakis, содержание связанных аминокислот было выше в 27 раз, при поражении сельди от 31 до 42 личинок Anisakis - в 13 раз, чем свободных аминокислот. У хамсы, не пораженной личинками Anisakis, содержание связанных аминокислот было выше в 11 раз, при поражении хамсы от 21 до 27 - в 5 раз. У не пораженной мойвы личинками Anisakis, содержание связанных аминокислот было выше в 25 раз, при поражении мойвы от 4 до 8 личинок Anisakis - в 14 раз, чем свободных аминокислот.

Свободные аминокислоты в дальнейшем подвергались процессу декар-боксилирования, в результате чего происходило выделение аммония. С увеличением инвазии наблюдалось некоторое снижение концентрации аммония, однако превышало максимально допустимые нормы. Данное обстоятельство, по всей видимости, связано с дальнейшим разложением аммония на менее ядовитые или неядовитые продукты распада белка.

После прекращения жизни рыб в их теле происходят необратимые процессы, протекающие в мышечной ткани и распад промежуточных продуктов при окислении органических веществ.

В связи с этим нами была установлена концентрация промежуточных продуктов при распаде органических веществ в мышечной ткани рыб при различной степени инвазии личинками Anisakis simplex, что позволит установить влияние продуктов их жизнедеятельности на накопление летучих органических веществ. Концентрация летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани путассу при максимальной зараженности (44-63 личинки Anisakis) была выше карбоновых кислот в 1,2 раза, альдегидов - в 1,3 раза, эфиров - в 2,8 раза, чем при минимальной инвазии (1-2 личинки Anisakis) (табл. 2).

Концентрация летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани минтая при максимальной зараженности (7-8 личинок Anisakis) была ниже альдегидов - в 16 раз, эфиров - в 1,5 раза и, напротив, выше карбоновых кислот в 1,1 раза, чем при минимальной инвазии (1-2 личинки Anisakis).

Общая концентрация летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани сельди при максимальной зараженности (31-42 личинки Anisakis) была выше альдегидов - в 2,1 раза, эфиров - в 2,3 раза, и, напротив, ниже кар-

боновых кислот - в 1,3 раза, чем при минимальной инвазии (10-14 личинок АшБаЫз).

Таблица 2 - Концентрация летучих органических компонентов в вытяжке мышечной ткани путассу и минтая (М±ш; п=10)

Органические летучие вещества, мг/кг Количество личинок Anisakis на висцеро рыб

путассу минтая

1-2 44-63 1-2 7-8

Уксусная 69,9610,54 76,5510,65*** 35,44±0,35 41,2510,48***

Пропионовая 2,30±0,09 0,2310,04*** - 0,17±0,01 * * *

Изомасляная 1,76±0,08 0,1210,01***

Масляная - 2,70±0,06***

Изовалериановая 1,17±0,01 - - 0,77±0,03***

Валериановая - - - 0,50+0,02* **

Каприловая 6,25+0,09 - - -

Метанол - - - 1,73+0,03***

Этанол об.% 0,01 ±0,01 0,02±0,01* 0,01 ±0,00 -

Фенилэтанол 7,06±0,16 18,59±0,29***

1-пропанол - 1,88+0,04***

Изоам иловый 7,25±0,0б 3,9510,09*** - 2,1710,02***

1-амилол 10,22±0,13 - 2,29+0,02 1,69Ю,01***

1-гексанол 2,39±0,07 - 1,39±0,01 -

1-бутанол 0,81 ±0,03 -

2-бутанол - 0,7110,05***

2,3-бутиленгликоль 19,29+0,22 45,83±0,61 *** - 5,4510,22***

1,3 -бу тиленгликоль 8,11±0,19 -

Изобутанол 5,77+0,12 -

Ацетальдегид 2,74±0,06 - 2,78±0,03 3,7810,12***

Фурфурол 15,34±0,15 1,1210,02*** 3,88±0,13 5,0310,19***

Ацетоин 12,42+0,17 15,7310,59*** 10,20+0,31 11,0310,27*

Диацетил 2,32±0,06 -

Этилацетат 4,14±0,0б - - 2,0210,04***

Метилкаприлат 2,77+0,06 - 2,0910,01 1,5110,05***

Этиллактат 1,34±0,03 0,38+0,05* ** 0,06±0,01 0,3210,03***

Этилбутират - 4,9510,09*** - 2,1610,01***

Метилацеталь - 0,5410,02 1,5510,04***

*Р<0,05; ***Р>0,001

Концентрация летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани при максимальной инвазии хамсы от 21 до 27 личинок АтэаМз была выше альдегидов в 1,3 раза, эфиров - в 3,3 раза и, напротив, ниже карбоно-вых кислот - в 2,6 раза, чем у не пораженной хамсы (табл. 3).

Концентрация летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани мой вы при максимальной зараженности (от 4 до 8 личинок АтваУз) была в 2,2 раза выше альдегидов и, напротив, в 1,4 раза ниже карбоновых кислот, эфиров - в 2,5 раза, чем у не пораженной личинками Агша^в.

Таблица 3 - Концентрация летучих органических компонентов в вытяжке мышечной ткани сельди и хамсы (М±ш; п=10)

Органические летучие вещества, мг/кг Количество личинок АшБа^Б на висцеро рыб

сельди хамсы

10-14 31-42 0 21-27

Уксусная 128,98±1,11 71,76+0,56 28,09+0,27 17,83+0,56***

Пропионовая 2,82+0,10 11,62+0,34*** 3,01+0,04 -

Изомасляная 0,77+0,04 - 0,96±0,03 -

Масляная 15,11+0,52 13,83±0,30* 19,17+0,42 -

Валериановая - 16,16+0,33 1,80+0,06 -

Изовалериановая 13,32+0,40 15,27±0,19*** 2,49±0,05 3,57±0,09***

Метанол 5,04+0,04 _ - _

Этанол об.% 0,05+0,01 0,02±0,01* 0,12+0,01 0,8б±0,04***

Фенилэтанол 5,36+0,27 4,79+0,20 6,63±0,14 27,30+0,63***

1-пропанол 26,77±0,98 54,91±0,50*** 42,33+0,70 101,20±0,95***

Изоамиловый 5,04±5,04 9,49±0,22*** 9,72±0,28 6,92±0,17***

1 -амилол 0,67+0,04 16,87+12,53*** 6,30±0,13 -

1 -гексанол 11,64+0,29 - 12,62±0,38 -

1-бутанол - - - 3,13±0,02

2,3-бутиленгликоль 46,33+0,92 _ 10,82±0,42 -

1,3-бутиленгликоль 5,78+0,16 _ 23,97±0,49 _

Метилацеталь _ _ - 1,51+0,03

Ацетальдегид 8,72+0,53 18,35±0,58*** - 10,80+0,31

Фурфурол 10,69+0,68 - - 3,17+0,13

Ацетоин 10,48+0,56 5,93+0,19*** 32,26±0,49 27,75+0,54***

Каприновый 18,65+0,34 - - -

Лимонен 3,49±0,13 - - -

Этилацетат 0,70±0,03 - - -

Метилкаприлат 5,02±0,02 4,37±0,06* 4,17+0,08 1,92+0,05***

Метилацетат 4,94+0,05 47,95+0,89*** 14,98+0,51 28,87+0,42***

Этилформиат 6,01 ±0,04 - 7,99+0,27 7,88+0,08

Этилбутират 6,44+0,04 - - -

Этилкаприлат 1,88+0,04 - - 42,07+1,80

Этиллактат 2,12±0,02 10,53+0,34*** - 7,67+0,23

Диацетил 2,99±0,03 - - -

*Р<0,05;***Р>0,001

У исследуемых рыб установлено разное количество летучих органических кислот. Так, из карбоновых кислот отсутствовала: валериановая кислота - у путассу; изовалериановая - у мойвы; масляная - у минтая; изомасляная -у минтая и мойвы. Каприловая кислота выявлена только в вытяжке мышечной ткани у сельди и путассу. Лимонен был выявлен в вытяжке мышечной ткани сельди.

Таблица 4 - Концентрация летучих органических компонентов в вытяжке мышечной ткани мойвы (М±т; п=10)

Органические летучие вещества, мг/кг Количество личинок АгшаШ на висцеро мойвы

0 4-8

Уксусная 1 83,67±0,52 50,39+0,64***

Пропионовая 0,60+0,01 0,28±0,02***

Маслянная - 6,38±0,10***

Валериановая 0,58+0,02 2,37±0,06***

Метанол - 8,80±0,19***

Этанол об.% 0,01±0,00 0,02±0,01*

Фенилэтанол 1,79±0,03 6,88±0,14***

1-пропанол - 2,41±0,02***

изоамиловый - 3,31 ±0,04* **

1-амилол 1,73±0,04 1,99±0,04***

1-бутанол - 2,36±0,03***

2-бутанол 0,50±0,02 -

2,3-бутиленгликоль 16,92+0,48 9,04±0,20***

1,3-бутиленгликоль 6,10±0,29 -

Изобутанол 1,62±0,02 -

Ацетальдегид 5,79±0,06 4,30±0,04***

Фурфурол - 8,72±0,23***

Ацетоин - 3,27±0,04***

Этилацетат 7,02±0,10 0,50±0,02***

Метилкаприлат - 1,41±0,03***

Этилкаприлат 0,47±0,03 0,71±0,04***

Этиллактат 0,44+0,04 1,33+0,02***

Этилбутират - 2,04+0,02***

Этилформиат 1,09±0,01 -

Изобутилацетат 1,11+0,01 -

Изо амилацетат 0,58±0,02 -

Метил ацетат 8,90±0,Ю -

Метильацеталь - 1,49±0,01***

Этильацеталь 0,34±0,02 0,54±0,03***

*Р<0,05;***Р>0,001

Среди спиртов выявлен метанол и его количество было выше у сельди, чем у хамсы в 1,3 раза, минтая - в 5,8 раза и мойвы - в 1,1 раза. Наличие кетонов (диацетил) у сельди выше, чем у путассу в 1,6 раза и хамсы -

в 1,7 раза. Из сложных эфиров изобутилацетат и изоамилацетат выявлены у мойвы. Концентрация фурфурола в вытяжке мышечной ткани сельди была выше, чем у мойвы и минтая (в 1,2 раза) и, напротив, ниже, чем у путассу (в

1.2 раза), хамсы (в 1,3 раза).

Концентрация ацетоина в вытяжке мышечной ткани сельди была ниже, чем у хамсы (в 3,6 раза), путассу (в 1,9 раза), и минтая (в 1,4 раза) и, напротив, выше, чем у мойвы (в 2,4 раза). Концентрация уксусной кислоты в вытяжке мышечной ткани сельди была выше, чем у минтая (в 2,4 раза), хамсы (в 1,7 раза), мойвы (в 1,4 раза) и путассу (в 1,3 раза). Концентрация масляной кислоты в вытяжке мышечной ткани сельди была выше, чем у путассу (в 7 раз), мойвы (в 2,4 раза) и хамсы (в 1,4 раза) (табл. 4).

При метаболизме личинок Атээ^э в тканях рыб накапливается значительное количество уксусного альдегида и продуктов его реакции со спиртами - ацеталей. Уксусный альдегид является не только побочным продуктом спиртового брожения, но и продуктом окисления спирта, который образуется в процессе жизнедеятельности личинок АшзаЫэ. Содержание уксусного альдегида может служить критерием степени окисленности продукта, который позволяет достоверно определить качество рыбной продукции. Последнее объясняется тем, что при поражении рыб личинками АшБаИБ мышечная ткань рыб характеризуется различной степенью окисленности, обусловленной инвазивностью и технологическим режимом их обработки.

Уксусный альдегид, образовавшийся в процессе жизнедеятельности личинок АшБа^э, взаимодействует, в первую очередь, с этиловым спиртом, образуя ацеталь. Продуктом реакции ацетальдегида является диацетил, который относится к классу кетонов, представляет собой жидкость желтого цвета и характеризует степень окисленности тканей рыб, особенно ухудшает орга-нолептические показатели продукта (запах, напоминающий сливочное масло). При окислении мышечной ткани рыб образуется избыточное количество ацетоина. Образовавшийся в больших концентрациях фурфурол придает запах перегретых отрубей, ухудшающий качество продукта. Из летучих кислот самую негативную оценку имеет масляная кислота, которая придает продукту запах прогорклого масла.

3.3 Влияние различных режимов хранения рыбы путассу на образование в мышцах свободных аминокислот, аминов и катионов металлов

При разных температурных режимах хранения и переработке инвази-рованной рыбы в вытяжке мышечной ткани путассу нами была определена концентрация свободных аминокислот: аргинина, лизина, тирозина, фенила-

ланина, гистидина, лейцина, метионина, валина, пролина, треонина, триптофана, серина, а-аланина, глицина.

В качестве контроля нами была использована вытяжка мышечной ткани путассу, пораженной гельминтами от одной до двух личинок Anisakis simplex, полученный при однократной дефростации в течение шести часов при температуре +18 - +20°С.

Фарш получен из мышечной ткани путассу, пораженной личинками Anisakis simplex (от 20 до 36) при однократной дефростации и выдерживании в течение 12 ч при температуре +18 - +20°С (первая опытная группа). При этом были выявлены следующие изменения состава свободных аминокислот относительно контроля в процентном соотношении: снижение содержания аргинина на 49%, лейцина - на 46%, серина - на 53%, а-аланина - на 5%, тирозина и триптофана - на 22%, валина - на 0,8%, пролина - на 3%, фенилаланина - на 36%; увеличение лизина - в 2,9 раза, гистидина - в 3,5 раза, глицина - в 1,7 раза, метионина - на 5%, треонина - на 26%.

В вытяжке из фарша рыбы путассу при двукратной дефростации и последующем хранении при температуре +18 - +20°С в течение 6 ч (вторая опытная группа) выявлено увеличение содержание аргинина на 1,3%, лизина на - 23% лейцина - на 42%, метионина на - 31%, валина - на 2%, треонина на 98%, а-аланина - на 13%, глицина и пролина - на 3% уменьшение тирозина на 66%, фенилаланина - на 58%, гистидина - на 82%, триптофана на -39%, серина - на 30% относительно контроля.

В вытяжке из фарша рыбы путассу при трехкратной дефростации и последующем хранении при температуре +18 - +20°С в течение 6 ч (третья опытная группа) установили увеличение содержания аргинина на 16%, лизина

- в 2,4 раза, гистидина - на 27%, валина - на 80%, треонина - на 34%, глицина

- на 0,73%, уменьшение количества серина - на 49%, а-аланина - на 2%, пролина - на 3%, метионина - на 12% лейцина - на 17%, тирозина на - 44%, фенилаланина - на 59%, триптофана - на 55% относительно контроля (табл. 5).

При многократной дефростации происходил распад белка на свободные аминокислоты, и изменялось их содержание. Количество лейцина, треонина, глицина увеличивалось, тирозина, фенилаланина, пролина, серина уменьшалось с увеличением кратности дефростации. Аминокислоты распадались на амины, в последующем наблюдалось увеличение содержания диметиламина и триметиламина при двукратной дефростации и снижение их количества при трехкратной дефростации. Это обусловлено накоплением в начальной стадии гниения в мясе промежуточных продуктов распада белка, а в стадии глубокого разложения - образованием конечных, менее ядовитых или неядовитых продуктов его распада. При различных режимах хранения происходило увеличе-

ние содержания катионов Ыа+ и уменьшение катионов К+. При многократной дефростации происходило вымывание катионов К+, что дополнительно подтверждает снижение питательной ценности мяса рыбы (табл. 5).

Таблица 5 - Содержание свободных аминокислот и аминов в вытяжке мышечной ткани путассу при различных режимах хранения (М±ш;п=15)

Свободные аминокислоты и амины Пробы вытяжки мышечной ткани путассу

Контрольная Опытная 1 Опытная 2 Опытная 3

Аргинин 15,97±0,29 8,11±0,11*** 16,18±0,23 18,54±0,19***

Лизин 2,71±0,07 7,83±0,13*** 3,32±0,11*** 6,42±0,11***

Тирозин 3,03±0,10 2,35±0,15*** 1,02±0,02*** 1,69±0,04***

Р-Фенил-аланин 1,22±0,01 0,78±0,04*** 0,52±0,05*** 0,50±0,05***

Гистидин 7,42±0,11 26,09±0,13*** 1,32±0,02*** 9,41 ±0,14***

Лейцин 3,60±0,06 1,94±0,08*** 5,09±0,11*** 2,98±0,12***

Метионин 8,71 ±0,16 9,12±0,18 11,44±0,12*** 7,63±0,15***

Валин 1,27±0,01 1,29±0,01 1,30±0,01 2,30±0,15***

Пролин 5,01±0,15 4,96±0,11 4,92±0,16 3,77±0,17***

Треонин 8,41 ±0,12 10,56±0,18*** 12,66±0,19*** 11,31±0,33***

Триптофан 5,41±0,12 4,23±0,16*** 3,29±0,12*** 2,45±0,10***

Серин 3,03±0,09 1,41±0,02*** 2,12±0,09*** 1,52±0,05***

а-аланин 17,65±0,10 16,85±0,29* 19,86±0,18*** 17,35±0,15

Глицин 16,46±0,21 28,65±0,22*** 16,95±0,25 16,58±0,23***

Аммоний 0,52±0,02 0,44±0,02** 0,30±0,01*** 0,75±0,04***

Диметила-мин 3,30±0,12 2,59±0,07*** 4,23±0,12*** 2,31±0,14***

Тримети-ламин 0,41±0,00 0,89±0,01 *** 0,80±0,03*** 0,32±0,00***

*Р>0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001

связано как со степенью инвазии, так и от вида рыбы. Свободные аминокислоты в дальнейшем подвергались процессу декарбоксилирования, в результате чего происходило выделение аммония. С увеличением инвазии наблюдалось некоторое снижение концентрации аммония, однако превышало максимально допустимые нормы. Данное обстоятельство, по всей видимости, связано с дальнейшим его разложением на менее ядовитые или неядовитые продукты распада белка. В процессе жизнедеятельности личинок АшБа^э в вытяжке мышечной ткани рыб выявлены летучие органические компоненты. Происходили процессы окисления в связи с образованием альдегидов, эфи-ров, кетонов, карбоновых кислот, в частности масляной кислоты, придающей продукту запах прогорклого масла. Также происходило спиртовое брожение, что приводило к образованию метанола (продукт распада метилового альдегида) и накоплению его в мышечной ткани рыб.

При многократной дефростации рыбной продукции происходил распад белка на свободные аминокислоты и накопление промежуточных продуктов (ди- и триметиламина) в начальной стадии гниения, а в стадии глубокого разложения, приводящему к образованию конечных, менее ядовитых продуктов.

Исходя из результатов научных исследований пораженную рыбу личинками АшваМв: путассу, сельдь и хамса - более 20; минтай и мойва - более 7, а также при нарушении температурных режимов хранения необходимо направить на техническую утилизацию.

ВЫВОДЫ

1. При паразитологическом исследовании проб рыб нами выявлено наличие личинок Ашза1а8 у путассу в количестве от 1 до 63, в сельди - от 10 до 42, хамсе - от 1 до 27, минтае - от 1 до 8, мойве - от 1 до 8 экземпляров, экс-тенсинвазированность рыбы гельминтами, в особенности, в весенний период года достигает 100%.

2. Установлено повышение концентрации водородных ионов и оптической плотности в мышечной ткани рыб при патологическом процессе, вызванном личинками Атташе.

3. Выявлена зависимость количества связанных аминокислот как от степени инвазии, так и от вида рыбы. В вытяжке мышечной ткани хамсы количество связанных аминокислот выше, чем у сельди и мойвы в 1,5 раза, путассу - в 1,8 раза, минтая - в 1,2 раза. Низкая концентрация связанных аминокислот в

мышечной ткани минтая обусловлена не только наличием личинок АгпБаМэ, но и структурой ткани, в отличие от других изучаемых видов рыб.

4. С увеличением степени инвазии сельди (от 15 до 20 личинок АшБа^) происходит снижение связанных аминокислот: тирозина, фенила-ланина, лейцина, метионина, треонина, серина, а-аланина и, напротив, повышение лизина относительно пораженной сельди (от 31 до 42 личинок).

5. Установлено, что при максимальном поражении личинками Ашва&Б рыб, концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани хамсы была выше в 9 раз, чем у путассу; в 4 раза - у мойвы, минтая и сельди. Повышенная концентрация свободных аминокислот свидетельствовала о процессах распада белка, обусловленных продуктами жизнедеятельности личинок нематод рода Ал1зак)5.

6. Свободные аминокислоты в дальнейшем подвергались процессу декар-боксилирования, в результате чего происходило выделение аммония. С увеличением инвазии наблюдалось некоторое снижение концентрации аммония. Данное обстоятельство, по всей видимости, связано с дальнейшим разложением аммония на менее ядовитые или неядовитые продукты распада белка.

7. При установлении летучих органических компонентов в вытяжке мышечной ткани рыб, инвазированных личинками Агша^э, выявлены процессы окисления с образованием альдегидов, эфиров, кетонов, карбоновых кислот, в частности, масляной кислоты, придающей продукту запах прогорклого масла.

8. Паразитирование личинок АтзаМв в организме рыб приводит к образованию метанола (продукт распада метилового альдегида) и накоплению его в мышечной ткани рыб.

9. Установлено, что при многократной дефростации происходит распад белка на свободные аминокислоты: повышение количества лейцина, треонина, глицина, и, напротив, снижение тирозина, фенилаланина, пролина, серина.

10. Выявлено повышение содержания ди- и триметиламина при двукратной дефростации и, напротив, его снижение при трехкратной дефростации, что обусловлено накоплением промежуточных продуктов распада белка в тканях рыбы в начальной стадии гниения, а в стадии глубокого разложения - образованием конечных, менее ядовитых продуктов распада.

11. Отмечено, что при многократной дефростации происходит увеличение содержания катионов и вымывание катионов К+, что дополнительно подтверждает снижение питательной ценности мяса рыбы.

12. Установлено, что рыба при интенсивной инвазии (путассу, сельдь и хамса - более 20; минтай и мойва - более 7 экземпляров) отличается более

низкими показателями качества, питательной (биологической) ценности и значительно меньшей потребительской способности.

Предложения производству

1. С целью обеспечения качества и безопасности рыбной продукции в процессе ее производства и реализации необходимо: повысить контроль технологического производства, уровень лабораторного анализа рыбной продукции в соответствии с нормативно-техническими документами, согласованными с органами и учреждениями территориального управления Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендовать Роспотребнадзору и Россельхознадзору РФ внести изменения в ветеринарно-нормативные акты и санитарные правила по использованию рыбы при гельминтозах и расширить масштаб методов исследований с использованием капиллярного электрофореза «Капель 103-Р» с целью установления качественных показателей рыбы и рыбных продуктов при различных режимах хранения.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Дубинина, М.Е. Физико-химические показатели рыбы путассу, пораженной личинками Anisakis simplex /М.Е. Дубинина, H.H. Гугушвили, Н.В. Когденко //Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутри-циологии: мат. IV междунар. симпоз. Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины-С-Пб., 2008.- С. 338-341.

2. Дубинина, М.Е. Образование свободных аминокислот, аминов и катионов в мышцах при различных режимах хранения рыбы путассу /М.Е. Дубинина, H.H. Гугушвили, Н.В. Когденко //Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии: мат. IV междунар. симпоз. Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины - С-Пб., 2008,- С. 341-343.

3. Дубинина, М.Е. Влияние степени инвазии личинками Anisakis на образование летучих органических веществ в экстракте мышц различных видов рыб /М.Е. Дубинина //Развитие агропромышленного комплекса: мат. XII междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых, аспирантов и специалистов Уральской госакадемии ветеринарной медицины.- Троицк, 2008,- С. 29-32.

4. Гугушвили, H.H. Влияние продуктов жизнедеятельности личинок Anisakis simplex различных видов рыб на концентрацию связанных аминокислот /H.H. Гугушвили, М.Е. Дубинина //Тр. КубГАУ.- 2009,- Вып. № 1 (16).- С. 181-185.

5. Гугушвили, H.H. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса убойных животных /H.H. Гугушвили, Н.В. Когденко, К.В. Синецкий, М.В. Дубинина //Учебное пособие «Вектор» ИП «Селезнева».- Тимашевск.- Заказ №252,2009,- 97 с.

6. Гугушвили, H.H. Ветеринарно-санитарная экспертиза растительных масел и животных жиров /H.H. Гугушвили, Н.В. Когденко, К.В. Синецкий, М.В. Дубинина //Учебное пособие «Вектор» ИП «Селезнева».- Тимашевск.-Заказ №269.- 2009,- 66 с.

7. Гугушвили, H.H. Санитарно-гигиенические требования к холодильным камерам, технологическим процессам и хранению пищевых продуктов /H.H. Гугушвили, Н.В. Когденко, К.В. Синецкий, М.В. Дубинина //Учебное пособие: КГАУ, Краснодар.- Заказ №648.- 2009.- 85 с.

ДУБИНИНА МАРИНА ЕВГЕНЬЕВНА

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ РЫБ ПРИ АНИЗАКИДОЗЕ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Подписано к печати 14.09.09 Формат 60x84/16. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №1229

Отпечатано в тип. «Принт-Люкс». 428000, г. Чебоксары, пр. М. Горького, 26. Тел. (8352) 431-911

Оглавление диссертации Дубинина, Марина Евгеньевна :: 2009 :: Чебоксары

ВВЕДНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУТЫ.

1.1 Общая характеристика нематод семейства анизакид

1.2 Географическое распространение и эпизоотическая ситуация.

1.2.1 Распространение и встречаемость личинок Anisakis у рыб.

1.3 Биология развития рода Anisakis.

1.3.1 Дифференциальная диагностика личинок Anisakis simplex, Pseudoterranova decipiens, Contracaecum osculatum

1.3.2 Заражение людей личинками рода Anisakis

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Органоморфометрические особенности путассу северной (Micromesistius poutassou), сельди атлантической (Clupca barengus), хамсы черноморской (Engraulis encrasicholus ponticus), минтая (Theragra), мойвы (Mallotus villosus).

3.2 Паразитологические исследования путассу, минтая, сельди, хамсы и мойвы.

3.3 Органолептические исследования рыб.

3.4 Определение качества мяса рыб.

3.5 Определение продуктов первичного распада белков в экстракте мышц рыб.

3.6 Бактериоскопические и химико-токсикологические исследования проб рыб: путассу, минтая, сельди, хамсы и мойвы.65 3.7 Влияние степени инвазии личинками Anisakis на концентрацию связанных и свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани различных видов рыб.

3.8 Влияние степени инвазии личинками Anisakis на образование летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани различных видов рыб.

3.9 Влияние различных режимов хранения рыбы путассу на образование в мышцах свободных аминокислот, аминов и катионов.

3.10 Профилактические мероприятия, проводимые при анизакидозе рыб.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Дубинина, Марина Евгеньевна, автореферат

Актуальность работы. Проблема качества рыбы и рыбной продукции с учетом режимов хранения и заражения гельминтами занимает одно из ведущих мест в структуре питания населения, что способствует постоянному совершенствованию апробации и внедрению в производство современных достижений аналитической химии и физики. Это позволит разрабатывать комплексные алгоритмы диагностики, ускоряющие процесс выбраковки некондиционной продукции (С.А. Абдулмагомедов, В.М. Шахмалов, 1997;

A.С. Довгалев, Н.Т. Понтюшенко, В.П. Сергиев и др., 1998; В.В. Абрамян, 2002; B.I. Джть, 2002).

Нематоды семейства анизакид (Anisakidae) относятся к числу наиболее распространённых гельминтов. Взрослые формы и личиночные стадии Anisakis паразитируют в организме морских млекопитающих, птиц, рыб и рептилий, и только личиночные формы — в организме рыб и беспозвоночных. Однако в последние десятилетия возникла проблема заражения людей гельминтами, в частности нематодами родов Anisakis и Pseudoterranova, которое происходит в основном при употреблении человеком в пищу рыб или головоногих моллюсков, содержащих их живые личинки. Заражению личинками Anisakis подвержен не только человек, но и ценные пушные звери при их искусственном выращивании и другие полезные животные при кормлении их свежей морской рыбой, содержащей личинки (К.И. Скрябин, 1964; Р.С. Шульц, Е.В. Гвоздев, 1970; А.В. Гаевская, 2001; J.A. Castro-Pampillon е.а., 2002; L.A. Hamre, Е Karlsbakk, 2002; К. Konishi, Y. Sakurai, 2002;

B.А. Shields е.а., 2002).

Медицинское и народно-хозяйственное значение имеют представители родов Anisakis, Contracaecum, Goezia, Histerothylacium, Porrocaecum, Pseudoterranova из семейства Anisakidae. Они являются патогенными как для человека, так и для животных, негативно влияют на переработку и реализацию рыбы и морепродуктов. При высокой заражённости рыб и промысловых беспозвоночных резко ухудшаются их товарное качество, что приводит к значительным экономическим потерям (А.А. Шевцов, 1981; А.В. Гаевская, 2005; M.D. Valero, 2000; A. Armentia е.а., 2004; R. Bernardini, G. Mistrello, Е. Novembre, 2005; W. Saito е. a., 2005; D. Soh'z Gonzalez e. a., 2006).

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить степень распространенности анизакидоза рыб и его медико-ветеринарное значение.

5. Определить концентрацию летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани при анизакидозе.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации издано 4 научных работы, опубликованных в рекомендуемых Высшей аттестационной комиссией журналах: Труды Кубанского государственного аграрного университета — 1. В материалах IV международного симпозиума (Санкт-Петербург) — 2. В материалах конференции молодых ученых, аспирантов, студентов и специалистов (Троицк) — 1. Методические рекомендации (Краснодар) — 3.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Зараженность рыб возбудителями анизакидоза.

2. Особенности изменения физико-химических показателей мышечной ткани рыб.

3. Влияние продуктов метаболизма гельминта на концентрацию связанных и образование свободных аминокислот, накопление летучих органических веществ в экстракте мышечной ткани.

4. Эффективность использования капиллярного электрофореза «Капель 103-Р» и газового хроматографа с целью установления качества и безопасности рыбы при нарушении температурного режима хранения.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 156 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, заключения, выводов, предложений производству, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 24 таблицами, 8 рисунками. Список литературы включает 226 источников, в том числе 161 зарубежных авторов.

Заключение диссертационного исследования на тему "Ветеринарно-санитарная экспертиза различных видов рыб при анизакидозе"

ВЫВОДЫ

1. При паразитологическом исследовании проб рыб нами выявлено наличие личинок Anisakis у путассу в количестве от 1 до 63, в сельди - от 10 до 42, хамсе - от 1 до 27, минтае - от 1 до 8, мойве — от 1 до 8 экземпляров, экс-тенсинвазированность рыбы гельминтами, в особенности, в весенний период года достигает 100%.

2. Установлено повышение концентрации водородных ионов и оптической плотности в мышечной ткани рыб при патологическом процессе, вызванном личинками Anisakis.

1,8 раза, минтая - в 1,2 раза. Низкая концентрация связанных аминокислот в мышечной ткани минтая обусловлена не только наличием личинок Anisakis, но и структурой ткани, в отличие от других изучаемых видов рыб.

4. С увеличением степени инвазии сельди (от 15 до 20 личинок Anisakis) происходит снижение связанных аминокислот: тирозина, фенилаланина, лейцина, метионина, треонина, серина, а-аланина и, напротив, повышение лизина относительно пораженной сельди (от 31 до 42 личинок).

5. Установлено, что при максимальном поражении личинками Anisakis рыб, концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани хамсы была выше в 9 раз, чем у путассу; в 4 раза — у мойвы, минтая и сельди. Повышенная концентрация свободных аминокислот свидетельствовала о процессах распада белка, обусловленных продуктами жизнедеятельности личинок нематод рода Anisakis.

7. При установлении летучих органических компонентов в вытяжке мышечной ткани рыб, инвазированных личинками Anisakis, выявлены процессы окисления с образованием альдегидов, эфиров, кетонов, карбоновых кислот, в частности, масляной кислоты, придающей продукту запах прогорклого масла.

8. Паразитирование личинок Anisakis в организме рыб приводит к образованию метанола (продукт распада метилового альдегида) и накоплению его в мышечной ткани рыб.

10. Выявлено повышение содержания ди- и триметиламина при двукратной дефростации и, напротив, его снижение при трехкратной дефростации, что обусловлено накоплением промежуточных продуктов распада белка в тканях рыбы в начальной стадии гниения, а в стадии глубокого разложения — образованием конечных, менее ядовитых продуктов распада.

11. Отмечено, что при многократной дефростации происходит увеличение содержания катионов Na+ и вымывание катионов К+, что.дополнительно подтверждает снижение питательной ценности мяса рыбы.

12. Установлено, что рыба при интенсивной инвазии (путассу, сельдь и хамса — более 20; минтай и мойва — более 7 экземпляров) отличается более низкими показателями качества, питательной (биологической) ценности и значительно меньшей потребительской способности.

Предложения производству

1. С целью обеспечения качества и безопасности рыбной продукции в процессе ее производства и реализации необходимо: повысить контроль технологического производства, уровень лабораторного анализа рыбной продукции в соответствии с нормативно-техническими документами, согласованными с органами и учреждениями территориального* управления Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время актуально изучение влияния личинок Anisakis не только на организм рыб, но и человека. Высокая заражённость рыб спиралевидными личинками Anisakis и промысловых беспозвоночных резко ухудшают их товарное качество, что приводит к значительным экономическим потерям. Заражению личинками Anisakis подвержены не только человек, но и ценные пушные звери при искусственном выращивании и другие полезные животные, в корм которых используют свежую морскую рыбу.

Медицинское и народно-хозяйственное значение имеют представители родов Anisakis, Contracaecum, Goezia, Histerothylacium, Porrocaecum, Pseudo-terranova из семейства Anisakidae. Они-являются патогенными как для человека, так и животных, негативно влияют на переработку и реализацию рыбы и морепродуктов (А.А. Шевцов, 1981; А.В. Гаевская, 2005; M.D. Valero, 2000; A. Armentia e.a., 2004; R. Bernardini, G. Mistrello, E. Novembre, 2005; W. Saito e. a., 2005; D. Soliz Gonzalez e. a., 2006).

По данным M. D. Valero (2000) с возрастом у рыб происходит увеличение интенсивности инвазии. Заражение путассу личинками Anisakis начинается на первом году жизни при длине рыбы 15-18 см, а затем при переходе на питание эвфаузиидами (длина рыб при этом достигает 23-25 см) встречаемость нематод у них резко возрастает. С возрастом у путассу растёт не только интенсивность инвазии личинками Anisakis, но увеличивается и доля заражённых рыб в популяции. Выявлено, что рыбы длиной 17-18 см заражены A. simplex на 2,08 %, 19-20 см - на 5,76 %, 21-22 см - 6,25 %, 23-24 см -6,66 % и более 25 см - на 10,38 %.

По данным В.В. Абрамяна (2002), пищевая ценность рыбной продукции находится в прямой зависимости от интенсивности инвазии. В связи с этим необходимо проводить дополнительные исследования с целью выявления инвазии и обеззараживания сырья для дальнейшей переработки рыбной продукции.

Анализируя фактический материал, проведенный в экспериментальной части нашей работы, мы считаем необходимым сосредоточить свое внимание на изменениях мышечной ткани, проявляющихся при анизакидозе у рыб из семейства тресковые — путассу северная (Micromesistius poutassou) и минтая (Theragra); из семейства сельдевые - сельди атлантической, из семейства анчоусовые (Engraulidae), отряда сельдеобразные — хамсы черноморской (Еп-graulis encrasicholus ponticus); семейства корюшковые (Osmeridae) - мойвы (Mallotus villosus).

Нами изучены органоморфометрические особенности и проведены па-разитологические исследования рыб, с помощью которых были выявлены личинки Anisakis: у путассу северной от 1 до 63; минтая - от 1 до 8; сельди — от 10 до 42; хамсы не инвазированной личинками Anisakis и инвазированной от 1 до 27; мойвы - не инвазированной личинками Anisakis, и инвазированной от 4 до 8.

Из литературных источников известно, что гельминты причиняют огромный вред организму, в процессе своей жизнедеятельности вызывают интоксикацию как органа, так и в целом организма за счет токсоидов, которые являются сильными ядами. Всасываясь в кровь, токсоиды разносятся по организму и поражают в первую очередь такие ткани, как нервная и мышечная. И даже после своей гибели гельминты являются источником токсоидов, так как отравляющие вещества выделяются в результате разрушения возбудителя (Г.Ф. Соловьева, A.M. Красных, 1976; М.В. Томина, 1981; К. Inoue, S.I. Oshima, Т. Hirata, I. Kimura, 2000; L. Rolbiecki, J. Rokicki, 2002).

В связи с этим нами были проведены физико-химические исследования мышечной ткани методом пробой варки, при котором было установлено, что инвазированная рыба (путассу от 9 до 63, сельдь — от 15 до 42, хамса — от 15 до 27, минтай — от 7 до 8, мойва - от 4 до 8) личинками Anisakis не пригодна в пищу.

Нами установлено, что концентрация водородных ионов инвазированной путассу от одной до двух личинок Anisakis и не инвазированной хамсы и минтая составила от 7,24 до 7,28. Данное обстоятельство свидетельствовало о сомнительной свежести указанных рыб. В остальных пробах рыб, где было выявлено наличие личинок Anisakis, наблюдался сдвиг водородного показателя в сторону щелочной реакции, что свидетельствовало о патологическом процессе, вызываемом непосредственно личинками Anisakis, нарушающих целостность тканей, а также продуктами жизнедеятельности гельминтов.

С целью установления первичного распада белков в мясе рыбы нами была проведена качественная реакция с бензидином на активность фермента пероксидазы. С помощью перекиси водорода пероксидазы катализируют окисление различных веществ, включая фенолы.

Нами установлено, что независимо от степени инвазии исследуемых рыб личинками Anisakis, активность фермента редуктазы была положительной. При отсутствии инвазии личинками Anisakis, реакция на активность фермента редуктазы была отрицательной.

Фермент пероксидаза была активна у неинвазированной рыбы (хамсы и мойвы), реакция на активность фермента была положительной, и слабоактивная при минимальной инвазии путассу и минтая (1—2), хамсы (1-г4), неактивная при максимальной инвазии путассу, сельди, хамсы, минтая и мойвы, реакция на активность фермента пероксидазы была отрицательной независимо от степени инвазии личинками Anisakis.

При определении в исследуемых пробах рыб продуктов первичного распада белков (реакция с сернокислой медью) установлено, что у неинвази-рованных рыб личинками Anisakis в мышечной ткани отсутствовал первичный распад белков и, напротив, при наличии хотя бы одной личинки качественной реакцией на сернокислую медь было выявлено, что в бульоне образовывались хлопья или желеобразный сгусток сине-голубого цвета. Это свидетельствовало о первичном распаде белка в мышечной ткани рыб, инвазиро-ванных личинками Anisakis.

Органолептические показатели не являются основными показателями, подтверждающими доброкачественность рыбы. Лишь химическими методами удается выявить такие вещества как аммиак, летучие жирные кислоты, сероводород. На более поздних стадиях гнилостной порчи появляются индол и скатол, и поэтому устанавливать их в начальной стадии порчи нет необходимости. В рыбе (хамса и мойва), не инвазированной личинками Anisakis, содержание аммиака было до 30 мг/кг фарша, что свидетельствовало об отсутствии глубокого распада белков. Независимо от степени инвазии морских рыб личинками Anisakis в мышечной ткани происходило накопление аммиака. Кроме того, при максимальной инвазии, по всей видимости, происходили как аэробный, так и анаэробный процессы глубокого распада белков мышечной ткани (путассу и сельдь).

С целью установления процессов распада тканей рыб, инвазированных личинками Anisakis, нами была предложена методика по определению оптической плотности экстракта мышечной ткани. У инвазированной путассу от одной до двух личинок Anisakis и не ивазированной хамсы и мойвы оптичеекая плотность составила 0,49, 0,30 и 0,62 соответственно, что свидетельствовало о сомнительной свежести указанных рыб.

При проведении бактериологических исследований нами установлено, что в изучаемых пробах рыб количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) и колониеобразующие единицы (КОЕ) в 1 г рыбного сырья (1*1Е5), Staphylococcus aureus в 0,01 г рыбного сырья не обнаружены. Патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы, в 25 г рыбного сырья не обнаружены. Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) в 0,001 г рыбного сырья не обнаружены. V. Parahemolyticus 1,0 г рыбного сырья не обнаружены.

При токсико-химическом исследовании проб рыб, пораженных личинками Anisakis, ДДТ и ГХЦГ и их метаболиты, N-нитрозамины, кадмий не превышали допустимые уровни.

По данным В.В. Пальмина, А.Г. Боткина, И.С. Гончарука, M.JI. Пентикяна, Х.В. Аюпова (2001) при гельминтозе происходит снижение не только количества общего белка и белковых фракций, но и заменимых и незаменимых аминокислот.

Нами была определена концентрация связанных аминокислот (аргинин, лизин, тирозин, фенилаланин, гистидин, лейцин, метионин, валин, пролин, треонин, триптофан, серин, а-аланин, глицин) у рыб (путассу, минтай, сельдь, хаема, мойва) в зависимости от степени их инвазии личинками Anisakis.

При инвазии рыб личинками Anisakis происходило снижение связанных аминокислот в зависимости, как от степени инвазии, так и от вида рыбы. При инвазии сельди личинками Anisakis наблюдалось снижение концентрации связанных аминокислот, что, по всей видимости, обусловлено продуктами жизнедеятельности гельминтов. Однако при инвазии от 15 до 20 личинок Anisakis происходило снижение тирозина, фенилаланина, лейцина, метионина, треонина, серина, а-аланина и, напротив, повышение лизина относительно пораженной сельди от 31 до 42 личинок. В результате исследований нами установлено, что в вытяжке мышечной ткани сельди, инвазированной от 10 до 14 личинок Anisakis, общая концентрация связанных аминокислот была выше в 1,6 раза и в 1,5 раза, чем при инвазии от 15 до 20 и от 31 до 42 личинок соответственно.

В вытяжке мышечной ткани путассу, инвазированной от одной до двух личинок Anisakis, общая концентрация связанных аминокислот была выше в 1,4 раза, в 1,7 раза и в 2 раза, чем при инвазии от 9 до 13, от 20 до 36 и от 44 до 63 личинок соответственно. В вытяжке мышечной ткани минтая, инвазиро-ванного от одной до двух личинок Anisakis общая концентрация связанных аминокислот была выше в 1,4 раза, чем при инвазии от 7 до 8 личинок. В вытяжке мышечной ткани мойвы, не инвазированной личинками Anisakis, общая концентрация связанных аминокислот была выше в 1,3 раза, чем при инвазии от 4 до 8 личинок.

В результате исследований нами установлено, что у пораженных личинками Anisakis рыб концентрация связанных аминокислот в вытяжке мышечной ткани хамсы была выше, чем у сельди и мойвы в 1,5 раза, путассу — в 1,8 раза, минтая — в 1,2 раза. Снижение концентрации связанных аминокислот происходило за счет разрыва полипептидных связей между аминокислотами и образования свободных аминокислот, что свидетельствовало о процессах распада белка. Данный процесс, по всей видимости, обусловлен влиянием продуктов жизнедеятельности личинок нематод рода Anisakis.

В процессе жизнедеятельности личинок Anisakis происходит распад белков мяса рыбы, в результате чего связанные аминокислоты переходят в свободные аминокислоты, которые быстро подвергаются дальнейшим изменениям. Превращение продуктов распада белков происходит через промежуточные вещества с образованием конечных, плохо пахнущих продуктов разложения, а именно: аммиака, сероводорода, скатола, индола, крезола, фенола, меркаптанов и других веществ. Постепенно и непрерывно накапливаются летучие жирные кислоты, выделяется и накапливается углекислый газ.

При инвазии рыб личинками Anisakis происходил распад белка на свободные аминокислоты, и изменялась их концентрация в зависимости, как от степени инвазии, так и от вида рыбы. При инвазии путассу личинками Anisakis установлено повышение концентрации свободных аминокислот гистидина, метионина, пролина, глицина и, напротив, снижение аргинина, лейцина, валина, треонина, триптофана, серина, а-аланина. При инвазии путассу одной или двумя личинками Anisakis отсутствовали свободные аминокислоты - лизин, тирозин и фенилаланин. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани путассу при инвазии от одной до двух личинок составила 3603,18 мг/кг рыбы, при инвазии от 44 до 63 личинок Anisakis - 3622,35 мг/кг рыбы.

С увеличением инвазии минтая личинками Anisakis было установлено повышение концентрации свободных аминокислот а-аланина, аргинина, гистидина, глицина, метионина, валина, пролина, тирозина, треонина, триптофана, серина, и, напротив, снижение фенилаланина, лейцина. При инвазии минтая двумя личинками Anisakis отсутствовала свободная аминокислота — лизин. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани минтая при инвазии от одной до двух личинок составила 4302,03 мг/кг рыбы, при инвазии от 7 до 8 личинок Anisakis - 7888,12 мг/кг рыбы.

При инвазии сельди от 31 до 42 личинок Anisakis наблюдалось увеличение концентрации свободных аминокислот аргинина, пролина, лейцина, метионина, валина, глицина, треонина, триптофана, серина, а-аланина и, напротив, снижение гистидина и лизина. Однако, при инвазии от 15 до 20 личинок Anisakis происходило снижение а-аланина, фенилаланина, аргинина, лейцина и, напротив, повышение гистидина, глицина, пролина, треонина, триптофана, серина, метионина и. валина. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани сельди, пораженной от 10 до 14 личинок Anisakis, составила 5670,67 мг/кг рыбы, при инвазии от 15 до 20 -6750,53 мг/кг рыбы, при инвазии от 31 до 42 - 7897,48 мг/кг рыбы.

Из всех свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани сельди максимальная процентная концентрация приходилась на гистидин (17-26%), а-аланин (19-23%), аргинин (14-15%), глицин (13-15%), треонин (6-7%), метионин (5-13%), и, напротив, минимальная - на лизин (0,3-0,4%), валин (5-2,1%), триптофан (0,9-1,3%), серин (2-3%).

С увеличением инвазии хамсы личинками Anisakis наблюдалось увеличение концентрации свободных аминокислот, что, по всей видимости, обусловлено продуктами жизнедеятельности гельминтов. Однако в зависимости от степени инвазии от одной до четырех личинок Anisakis происходило снижение тирозина; при инвазии хамсы от 15 до 20 - фенилаланина; при инвазии хамсы от 21 до 27 — тирозина, триптофана и фенилаланина относительно не пораженной личинками хамсы. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани хамсы, не пораженной личинками, составила 19625,75 мг/кг рыбы, при инвазии от одной до четырех личинок Anisakis

27919,49 мг/кг рыбы, при инвазии хамсы от 15 до 20 — 28067,72 мг/кг рыбы, при инвазии хамсы от 21 до 27 - 31804,49 мг/кг рыбы.

Нами было установлено, что с увеличением инвазии мойвы от четырех до восьми личинок Anisakis происходило повышение концентрации всех свободных аминокислот, кроме глицина. Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани мойвы, не пораженной личинками, составила 5612,68 мг/кг рыбы, при инвазии от четырех до восьми личинок Anisakis - 7299,25 мг/кг рыбы.

В результате исследований нами установлено, что в вытяжке мышечной ткани хамсы, пораженной личинками Anisakis, концентрация свободных аминокислот была выше в 9 раз, чем у путассу, мойвы и минтая; сельди — в 4 раза. Повышенная концентрация свободных аминокислот свидетельствовала о процессах распада белка (низкая концентрация связанных аминокислот), которая обусловлена влиянием продуктов жизнедеятельности личинок нематод рода Anisakis на качество рыбы. Однако высокая концентрация свободных аминокислот в мышечной ткани хамсы обусловлена не только наличием личинок Anisakis, но и структурой ткани, в отличие от других изучаемых видов рыб.

У путассу, пораженной от одной до двух личинок Anisakis, концентрация связанных аминокислот по сравнению со свободными аминокислотами было выше в 41 раз, при поражении путассу от 44 до 63 личинок Anisakis — в 24 раза. При инвазии минтая от одной до двух личинок Anisakis концентрация связанных аминокислот было выше в 45 раз, при поражении минтая от 7 до 8 личинок Anisakis - в 16 раз, чем свободных аминокислот.

После прекращения жизни рыб в их теле происходят необратимые процессы, протекающие в мышечной ткани и распад промежуточных продуктов при окислении органических веществ. В связи с этим нами была установлена концентрация промежуточных продуктов при распаде органических веществ в мышечной ткани рыб при различной степени инвазии личинками Anisakis simplex, что позволит установить влияние продуктов их жизнедеятельности на накопление летучих органических веществ.

Концентрация летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани путассу при максимальной зараженности (44—63 личинки Anisakis) была выше карбоновых кислот в 1,2 раза, альдегидов - в 1,3 раза, эфиров - в 2,8 раза, чем при минимальной инвазии (1-2 личинки Anisakis).

Концентрация летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани при максимальной инвазии хамсы от 21 до 27 личинок Anisakis была выше альдегидов в 1,3 раза, эфиров - в 3,3 раза и, напротив, ниже карбоно-вых кислот — в 2,6 раза, чем у не пораженной личинками Anisakis хамсы.

Концентрация летучих органических веществ в вытяжке мышечной ткани мойвы при максимальной зараженности (от 4 до 8 личинок Anisakis) была выше альдегидов в 2,2 раза и, напротив, ниже карбоновых кислот — в 1,4 раза, эфиров — в 2,5 раза, чем у не пораженной личинками Anisakis.

У исследуемых рыб установлено разное количество летучих органических кислот. Так, из карбоновых кислот отсутствовала: валериановая кислота — у путассу; изовалериановая — у мойвы; масляная — у минтая; изомасляная — у минтая и мойвы. Каприловая кислота выявлена только в вытяжке мышечной ткани у сельди и путассу. Лимонен был выявлен в вытяжке мышечной ткани сельди.

Среди спиртов наличие метанола было выше у сельди, чем у хамсы в 1,3 раза, минтая — в 5,8 раза и мойвы - в 1,1 раза. Наличие кетонов (диаце-тил) выявлено у сельди выше, чем у путассу в 1,6 раза и хамсы - в 1,7 раза. Из сложных эфиров изобутилацетат и изоамилацетат выявлены у мойвы.

Концентрация фурфурола в вытяжке мышечной ткани сельди была выше, чем у мойвы и минтая (в 1,2 раза) и, напротив, ниже, чем у путассу (в 1,2 раза), хамсы (в 1,3 раза). Концентрация ацетоина в вытяжке мышечной ткани сельди была ниже, чем у хамсы (в 3,6 раза), путассу (в 1,9 раза), и минтая (в 1,4 раза) и, напротив, выше, чем у мойвы (в 2,4 раза).

Концентрация уксусной кислоты в вытяжке мышечной ткани сельди была выше, чем у минтая (в 2,4 раза), хамсы (в 1,7 раза), мойвы (в 1,4 раза) и путассу (в 1,3 раза). Концентрация масляной кислоты в вытяжке мышечной ткани сельди была выше, чем у путассу (в 7 раз), мойвы (в 2,4 раза) и хамсы (в 1,4 раза).

При метаболизме личинок Anisakis в тканях рыб накапливается значительное количество уксусного альдегида и продуктов его реакции со спиртами - ацеталей. Уксусный альдегид является не только побочным продуктом спиртового брожения, но и продуктом окисления спирта, который образуется в процессе жизнедеятельности личинок Anisakis. Содержание уксусного альдегида может служить критерием степени окисленности продукта, который позволяет достоверно определить качество рыбной продукции. Последнее объясняется тем, что при поражении рыб личинками Anisakis мышечная ткань рыб характеризуется различной степенью окисленности, обусловленной инвазивностью и технологическим режимом их обработки.

Уксусный альдегид, образовавшийся в процессе жизнедеятельности личинок Anisakis, взаимодействует, в первую очередь, с этиловым спиртом, образуя ацеталь. Продуктами реакции ацетальдегида являются диацетил, который относится к классу кетонов, является жидкостью желтого цвета, характеризует степень окисленности тканей рыб, особенно ухудшает органо-лептические показатели продукта (запах, напоминающий сливочное масло). При окислении мышечной ткани рыб образуется избыточное количество аце-тоина. Образовавшийся^ в больших концентрациях фурфурол придает запах перегретых отрубей, ухудшающий качество продукта. Из.летучих кислот самую негативную оценку имеет масляная кислота, которая придает продукту запах прогорклого масла.

По данным авторов (А.В. Гаевская, 2005; Н. Kino, К. Watanabe К. Ма-tsumoio, 1993; М.Р. Lopez-Saez е.а., 2003; A. Armentia, М." Lombardero, С. Martinez, D. Barber, J.M. Vega, A. Callejo, 2004; M.L. Baeza, A. Rodriguez, V. Matheu, 2004; W. Saito e. a., 2005; A. Daschner, 2006; M. Rodero e.a., 2006; F.J. Martinez De Castro, 2007) при попадании в желудочно-кишечный тракт человека, личинки Anisakis активно внедряются головным концом в слизистую и подслизистую оболочки на всем его протяжении от глотки до толстого кишечника. Наиболее часто они обнаруживаются в стенках желудка и тонкого кишечника. На месте внедрения личинок развивается воспаление, сопровождающееся эозинофильной инфильтрацией, отеком, изъязвлением и геморагиями. В дальнейшем возможно1 формирование эозинофильных гранулем, некроза и перфорации кишечной стенки. Воспалительные процессы и нервно-рефлекторные реакции могут привести к непроходимости кишечника. Иногда личинки Anisakis мигрируют в желчный пузырь, протоки печени и поджелудочной железы, вызывая в этих органах воспалительные реакции и образование гранулем. У человека Anisakis до половой зрелости не развиваются, а срок жизни составляет от нескольких недель до 2—3 месяцев. Однако, симптомы заболевания, обусловленные токсико-аллергическим воздействием личинок гельминта на организм человека, в том числе и в результате формирования гранулем, могут наблюдаться на протяжении нескольких месяцев и даже лет. Инкубационный период составляет от нескольких часов до 7-14 суток. Во многом, клиническая картина заболевания обусловлена местом локализации паразитов. При нахождении личинок в просвете кишечника симптоматика может быть весьма скудной. При желудочной локализации (наиболее частая форма заболевания) больных беспокоит сильная боль в эпи-гастрии, тошнота, рвота, иногда с кровью. Отмечается субфебрильная или фебрильная лихорадка, развитие аллергических реакций немедленного типа (крапивница, отек Квинке). В случае ретроградной миграции личинок Anisakis из желудка в пищевод возникают боль и раздражение в горле, кашель. При кишечном анизакидозе больные жалуются на боли в области пупка и в правой подвздошной области, урчание в животе, метеоризм. Возможно возникновение симптомокомплекса острого живота, характерного для аппендицита или непроходимости кишечника. Течение заболевания может быть острым, подострым или хроническим.

По данным В.В. Абрамян (2001) гельминты нарушают структуру тканей поражаемого органа, питаясь его тканями и кровью, и причиняют огромный вред организму. Они поглощают значительные количества витаминов (в частности, В12, необходимого для нормального кроветворения, а также А и С), микроэлементов (медь является участником защитных иммунных процессов) и Сахаров.

При разных температурных режимах хранения и переработке инвазированной рыбы нами были изучены физико-химические показатели качества мяса путассу, пораженной гельминтами (от 20 до 36 личинок Anisakis). При многократной дефростации на электрофореграмме были зарегистрированы различные величины пиков, указывающих на качество мясного фарша путассу.

В качестве контроля нами была использована вытяжка, полученный из фарша рыбы путассу при однократной дефростации рыбы.

При многократной дефростации происходил распад белка на свободные аминокислоты с изменением их концентрации: увеличение лейцина, треонина, глицина и, напротив, уменьшение тирозина, фенилаланина, пролина, серина. Аминокислоты распадались на амины, в последующем при двукратном размораживании наблюдалось увеличение содержания диметиламина и триметила-мина и снижение его при трехкратном размораживании, что обусловлено накоплением в начальной стадии гниения в мясе промежуточных продуктов распада белка, а в стадии глубокого разложения - образованием конечных, менее ядовитых или неядовитых продуктов распада. При различных режимах хранения происходило увеличение содержания катионов Na+ и уменьшение катионов К+, а при многократной дефростации - вымывание катионов К+, что дополнительно подтверждается снижением питательной ценности мяса рыбы.

Таким образом, пищевая ценность рыбных продуктов находится в прямой зависимости от интенсивности инвазии. Результатами исследований нами установлено повышение концентрации водородных ионов и оптической плотности в мышечной ткани рыб при патологическом процессе, вызванном личинками Anisakis. Обратная корреляция наблюдалась между связанными аминокислотами и свободными. Снижение концентрации связанных аминокислот наряду с одновременным повышением свободных аминокислот было связано как со степенью инвазии, так и от вида рыбы. Свободные аминокислоты в дальнейшем подвергались процессу декарбоксилирования, в результате чего происходило выделение аммония. С увеличением инвазии наблюдалось некоторое снижение концентрации аммония, однако превышало максимально допустимые нормы. Данное обстоятельство, по всей видимости, связано с дальнейшим его разложением на менее ядовитые или неядовитые продукты распада белка.

В процессе жизнедеятельности личинок Anisakis в вытяжке мышечной ткани рыб выявлены летучие органические компоненты. Происходили процессы окисления в связи с образованием альдегидов, эфиров, кетонов, карбоновых кислот, в частности масляной кислоты, придающей продукту запах прогорклого масла. Также происходило спиртовое брожение, что приводило к образованию метанола (продукт распада метилового альдегида) и накоплению его в мышечной ткани рыб.

При многократной дефростации рыбной продукции происходил распад белка на свободные аминокислоты и накопление промежуточных продуктов (ди- и триметиламина) в начальной стадии гниения, а в стадии глубокого разложения, приводящие к образованию конечных, менее ядовитых продуктов.

Исходя из результатов научных исследований, следует отметить, что рыба, пораженная личинками Anisakis: путассу, сельдь и хамса — более 20; минтай и мойва - более 7, позволяет сделать вывод, что такая рыба не может быть использована для пищевых целей, а также при нарушении режимов хранения.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2009 года, Дубинина, Марина Евгеньевна

1. Абрамян В.В. Ветсанэкспертиза мяса и субпродуктов овец, пораженных гельминтами /В.В. Абрамян //Ветеринария. 2002. - №4. - С.44-46.

2. Багров А.А. Анизакидные личинки (род Anisakis) рыб Тихого океана: автореф. дисс. .канд. биол. наук /А.А. Багров М, 1985. — 24 с.

3. Багров А.А. О хозяино-паразитных отношениях личинок нематод рода (Nematoda: Anisakidae) /А.А. Багров //2-й Всесоюзн. Съезд пзразитоцено-логов: Тез. докл. — Киев: Наук, думка, 1983. — С. 35-36.

4. Бакай Ю.И. Некоторые данные по выживанию личинок Anisakis simplex в рыбе при промышленном производстве мороженой продукции на судах типа БМРТ /Ю.И. Бакай, А.Б. Карасев, Г.В. Зуйков //Тр. /ПИНРО. -Мурманск: Изд-во ПИНРО, 1998. С. 122-126.

5. Бауер О.Н. Ихтиопатология /О.Н. Бауер, В.А. Мусселиус, В.М. Николаева, Ю.А. Стрелков —М.: Пищ. промышленность, 1977. -431 с.

6. Бурджанадзе Н.Л. Глистные инвазии сельскохозяйственных животных Грузии по материалам 115-й СГЭ /Н.Л. Бурджанадзе //Тр. /ГиЭВ (Грузия). 1937.-Т.4.-С. 173-175.

7. Быков В.П. Зараженность рыб возбудителями гельминтозов в дельте Волги /В.П. Быков, И.Е. Зюзин, А.Д. Кушалиева // Ветеринария. 2002. - №8. -С. 28-30.

8. Вальтер Е.Д. К изучению инвазии гельминтами планктонных беспозвоночных Белого моря Е.Д. Вальтер, М.А. Валовая, Т.Н. Попова //Вестник Московского Университета. 1979. -№3. - С. 31-38.

9. П.Вялова Г.П. Паразиты мускулатуры горбуши Г.П. Вялова, В.В. Стексова //Рыбное хоз-во. 1994.- № 2.- С 42-43.

10. ГАЕВСКАЯ А.В. Анизакидные нематоды и заболевания, вызываемые ими у животных и человека /А.В. ГАЕВСКАЯ. Севастополь: ЭКОИС-Гидрофизика, 2005. — 223 с.

11. Гаевская А.В. Еще раз о значении данных по паразитам рыб для смежных дисциплин /А.В. Гаевская //Журн. общей биологии. 1989. - Вып. 1. -С. 123-127.

12. Гаевская А.В. Личинки анизакидных нематод — паразиты морских и океанических рыб /А.В. Гаевская, А.А. Ковалева //Экспресс-информация ЦНИИТЭИРХ (Сер. Обработка рыбы и морепродуктов). М., 1990.1. Вып. 9.-С. 17-36.

13. Гаевская А.В. Паразиты рыб Северо-восточной Атлантики: фауна, экология, особенности формирования: дис. . докт. биол. наук /А.В. Гаевская -Л., 1984.-1245 с.

14. ГАЕВСКАЯ А.В. Паразитология и патология рыб: энциклопедический словарь-справочник /А.В. ГАЕВСКАЯ М.: Изд-во ВНИРО, 2003. - 231 с.

15. ГАЕВСКАЯ А.В. Паразиты и болезни морских и океанических рыб в природных и искусственных условиях /А.В. ГАЕВСКАЯ — Севастополь: ЭКОСИ Гидрофизика, 2004. - 237 с.

16. ГАЕВСКАЯ А.В. Справочник болезней и паразитов морских и океанических промысловых рыб /А.В. ГАЕВСКАЯ. Севастополь: ЭКОСИ - Гидрофизика, 2001. - 262 с.

17. Гаевская А.В. Справочник основных болезней и паразитов промысловых рыб Атлантического океана /А.В. Гаевская, А.А. Ковалева. — Калининград: АтлантНИРО. Кн. изд-во, 1991. 208 с.

18. Гаевская А.В., Эколого-географические особенности паразитофауны обыкновенной ставриды Атлантического океана /А.В. Гаевская, А.А. Ковалева //Исследования биологических ресурсов Атлантическогоокеана. — Калининград, 1980-С. 18-24.

19. Горохов В.В. Анизакидоз сложная экологическая проблема /В.В.Горохов. //Ветеринария. - 1999. - №5 - С. 7-14.

20. Гроздилова Т.А. Личинки анизакид некоторых прибрежных рыб Белого моря /Т.А. Гроздилова //Краткие тез. докл. 2 Всесоюзн. Симп. по паразитам и болезням морских животных. Калининград: АтлантНИРО, 1976. - С. 19.

21. Гугушвили Н.Н.Определение питательной ценности свинины /Н.Н. Гугушвили, Е.Н. Муренький //Экологические проблемы современности: VII Междунар. Науч-практич. конф. Майкоп, 2006. -С. 276-278.

22. Довгалев А.С. Обеспечение качества и безопасности рыбной продукции /А.С. Довгалев, Н.Т. Понтюшенко, В.П. Сергиев и др. /Ветеринария. -1998.-№1-С. 7-12.

23. Догель В.А. Зоология беспозвоночных: учебник под ред. проф. Полянского Ю.И. -7-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. школа, 1981. - 606 с.

24. ИВАНОВ И.И. Биохимия гельминтов /И.И. ИВАНОВ. Труды ГЕЛАН, 1950.-С. 139-166.

25. Карасев А.В. Экологическая характеристика паразитофауны путассу Mi-cromesistius poutassou (Risso) /А.В. Карасев //Эколого-паразитологические исследования северных морей. Апатиты, 1984. — С. 82—88.

26. Карасев А.В. Паразиты путассу Micromesistius poutassou СевероВосточной Атлантики (фауна, экология, хозяйственное значение): дис. канд. биол. наук /А.В. Карасев. Мурманск, 1987. - 215 с.

27. Кротов А.И. Пути исследования физиологии гельминтов в связи с проблемой терапии гельминтозов /А.И. Кротов //Гельминты человека, животных и растений и борьба с ними. М., Изд-во АН СССР, 1963. - С. 29-31.

28. Кротов А.И. Физиология гельминтов (питание, осморегуляция, выделение) /А.И. Кротов. — Обзор литературы. — Мед. паразитол. и паразитарн. болезни, 1969. С. 226-233 .

29. Курочкин Ю.В. Методы паразитологического инспектирования морской рыбы и рыбной продукции (морская рыба-сырец, рыба охлажденная и мороженая) /Ю.В. Курочкин. М., 1989. - 43 с.

30. Малышева З.Б. Паразитофауна чёрного палтуса в Тихом океане /З.Б. Малышева //Материалы 3-ей Всесоюзн. конф. по морск. биол. /Севастополь. -Киев, 1988.-Ч. 2.-С. 71-72.

31. Мамаев Ю.Н. Паразитические черви камбаловых рыб дальневосточных морей /Ю.Н. Мамаев, A.M. Парухин, О.М. Баева //Паразитические черви животных Приморья и Тихого океана. — М.: Изд-во АН СССР, 1963. — С. 82-113.

32. МАРКОВ Г.С. Способы питания паразитических червей /Г.С. МАРКОВ. -Природа, 1946. — С.28-36 .

33. Мозговой А.А. Аскаридаты животных и человека и вызываемые ими заболевания. /А.А. Мозговой //Кн. 2. Основы нематодологии М.: Изд-во АН СССР, 1953.-615 с.

34. Мозговой А.А. Аскаридаты животных и человека и вызываемые ими заболевания в 23 ч. /А.А. Мозговой, В.И. Шахматова.// Кн. 3. Основы нематодологии М.: Наука, 1973. - 248 с.

35. Мордвинова Т.Н. Место и роль миктофовых рыб в паразитарной системе Мирового океана /Т.Н. Мордвинова //Экология. 2001. - Вып. 59. — С. 9 —12.

36. Николаева В.М. Выживание личинок нематод в разных температурных условиях /В.М. Николаева, Г.Ф. Шрамова //Биология моря. 1975. -Вып. 34. — С. 110-118.

37. Николаева В.М. К гельминтофауне рыб Средиземного моря /В.М. Николаева //Экспедиционные исследования в- Средиземном море в августе сентябре 1969 г. (64-й рейс НИС «Академик А. Ковалевский»). -Киев: Наук, думка, 1970. - С. 38^18.

38. Николаева В.М., Нематоды пелагических и придонно-пелагических рыб морей Средиземноморского бассейна /Н.Н. Найдёнова, В.М. Николаева

39. Тр. Севастоп. биол. ст.- 1964. Вып. 17.- С. 125-158.

40. Определитель паразитов позвоночных животных Чёрного и Азовского морей. Киев: Наук, думка, 1975. — 552 с.

41. Определитель паразитов пресноводных рыб. Т. 3. Паразитические многоклеточные. -Д.: Наука, 1987. 583 с.

42. Полякова О.И. Итоги и перспективы исследования по биохимии гельминтов /О.И. Полякова //Ветеринария. 1970. - №11. - С. 21-23.

43. Попова Т. Н., Инвазия беломорских полихет личинками аскаридат /Т.Н Попова, Е.Д. Вальтер //Проблемы паразитологии. Киев: Наук, думка, 1967.-С. 181-182.

44. Раймер JI.B. О распространении личинок гельминтов в планктонных животных Северного моря /JI.B. Раймер, X. Бергер, Б. Хеуер //Паразитология. 1971. - № 6. - С. 542 - 550.

45. Родюк Г.Н. Проблема анизакиоза салаки и пути её решения в Калининградской области /Т.Н. Родюк //Морская индустрия. — 2001. — №2 С. 22 -23.

46. Савинов В.А. Классификация резервуарного (паратенического) паразитизма в зависимости от его пложения в онтогенезе и последовательной смены»хозяев гельминтов / В.А. Савинов //Уч. зап. Калининск. пед. ин-та. 1969. - Вып. 67. - С. 83-113.

47. Савинов В.А. Некоторые общие закономерности стадийного развития гельминтов и их возникновения в филогенезе /В.А. Савинов //Уч. зап. Калининск. пед. ин-та. 1964. — Вып. 31. - С. 143 - 180.

48. Сапожников Г.И. Эколого-биологические основы профилактики паразитарных болезней рыб /Г.И. Сапожников //Ветеринария. — 2003. № 3. - С. 3-6.

49. Седов В.А. Профилактика болезней рыб и задачи ихтиопатологии /В.А. Седов, Г.И. Сапожников //Ветеринария. 1998. - № 5. - С. 3-8.

50. Сердюков A.M. Проблема анизакидоза /A.M. Сердюков //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1993. - № 2. - С. 50-54.

51. Скрябин К.И. Основы ветеринарной нематодологии /К.И. Скрябин, A.M. Петров. М., изд-во «Колос», 1964. - 527 с.

52. СМОГОРЖЕВСКАЯ JI.A. Гельминты водоплавающих и болотных птиц фауны Украины /Л.А. СМОГОРЖЕВСКАЯ Киев: Наук. Думка, 1976. - 416 с.

53. Соловьева Г.Ф. Паразиты животных и растений: обнаружение в желудке у человека /Г.Ф. Соловьева, A.M. Красных //Тр. Владивосток, 1989.-С. 131-133.

54. ТОМИНА М.В. Качество и микробиологическая оценка мяса при некоторых инвазионных заболеваниях животных /М.В. ТОМИНА. Киев, 1981 121 с.

55. ШЕВЦОВ А.А. Ветеринария паразитология /А.А. ШЕВЦОВ-М., 1981.-345 с.

56. Шишова О.А. Некоторые биохимические аспекты адаптации гельминтов к условиям существования /О.А. Шишова. В сб. «Материалы к научной конф. ВОГ», 1969. - Ч. 2., - С. 59-75.

57. Шульман С.С. Паразиты рыб Белого моря /С.С. Шульман, Р.Е. Шульман-Альбова. -М.-Л.: Изд. АН СССР, 1953.- 169 с.

58. Шульц Р.С. Основы общей гельминтологии /Р.С. Шульц, Е.В. Гвоздев. -М.: Наука, 1970. Т.1 - 492 с.

59. Джм1ь B.I. Ветеринарно-санитарная экспертиза рыбы, инвазированной нематодами рода Anisakidae: автореф. дис. . канд. вет. наук /В.1. Джм1ь. -Киев, 2002. 19 с.

60. Abollo Е. Anisakis infestation in marine fish and cephalopods from Galician waters: an updated perspective /Е. Abollo, C. Gestal, S. Pascual //Parasitol. Res. 200 Ib. - №87. - P. 492-499.

61. Abollo E. Fitness of the marine nematode Anisakis simplex s. str. in temperate waters of the NE Atlantic /Е Abollo, S. D'Amelio, S. Pascual //Dis. Aquat. Org.- 2001а. V. 45, № 2. - P. 131-139.

62. Adams A. M. Anisakid parasites, Staphylococcus aureus and Bacillus cereus in sushi and sashimi from Seattle area restaurants /A.M. Adams, L.L. Leja, K. Jinneman, J. Beeh, G.A Yuen //J. Food Prot. 1994. -V. 574. - P. 311-317.

63. Adroher F.J. Larval anisakids (Nematoda: Ascaridoidea) in horse mackerel (Trachurus trachurus) from the fish market in Granada (Spain) /F.J. Adroher, A. Valero, J. Ruiz-Valero, fglesias L //Parasitol. Res. 1996. - № 3. - P. 253-256.

64. Agatsuta T. Electrophoretic studies on glucosephosphate isomerase and phosphoglu-comutase in two types of Anisakis larvae /Т. Agatsuta //J. Parasitol.- 1982. -V. 12, № 1.-P. 35-39.

65. Andrade A. The gastrointestinal helminths of the Franciscana, Pontoporia blainvillei, in southern Brazil /А. Andrade, M.C. Pinedo, J. Pereira //Annual Report International Whaling Commission. 1997. — № 47. — P. 669-673.

66. Angot V. Infestation de 7 poissons de consommation courante par des larves de nematodes anisakides; efficacite des methods de filetage. Consequences sanitaires et prophylactiques /V. Angot //Thesis (Biologic, Parasitologic). 1993a. - 285 p.

67. Angot V. European farmed Atlantic salmon (Salmo salar L.) are safe from anisakid larvae /V. Angot, P. Brasseur //Aquaculture. 1993b. - V. 118, № 3-4. -P. 339-344.

68. B. Ambarro Involvement of hidden allergens in food allergic reactions /В. Anibarro, F.J. Seoane, M.V. Mugica //J. Investig Allergol. Clin. Immunol. --2007. -№3. P. 168-172.

69. Aral H.P. Preliminary report on the parasites of certain marine fishes of British

70. Columbia /Н.Р. Aral //J. Fish. Res. Bd. Canada. 1969. - № 26. - P. 2319-2337.

71. Arias-Diaz J. Efficacy of albendazole against Anisakis simplex larvae in vitro /J. Arias-Diaz, J. Zuloaga, E. Vara, J. Balibrea, J.L. Balibrea //Dig Liver Dis. -2006.-№1.-P. 24-26.

72. Armentia A. Occupational asthma due to grain pests Eurygaster and Ephestia /А. Armentia, M. Lombardero, C.Martinez, D.Barber, J.M. Vega, A. Callejo //J. Asthma. 2004; №1. p. 99-107.

73. Arlian L.G. Characterization of allergens of Anisakis simplex /L.G. Arlian, M.S. Morgan, S. Quirce, F. Maranon, E. Fernandez-Caldas //Allergy. 2003. -№12.-P. 1299-1303.

74. Audicana M.T. Anisakis simplex: dangerous — dead and alive? /М.Т. Audicana, J. Ansotegui, L. F. de Corres, M.W. Kennedy //Trends Parasitol. 2002, №1. -P. 20-25.

75. BAER J.G. Ecology of animal parasites /J.G. BAER.-Urbana, Univ. Illinois Press, 1951.-224 p.

76. Baulis H.A. «Capsularia marina» and the Ascaridae of marine fish /Н.А. Baulis //Parasitology. 1944. - № 1. - P. 119-121.

77. Balbuena J.A. New data on the early development of Hysterothylacium aduncum (Nematoda: Aisakidae) /J.A. Balbuena, E. Karlbakk, M Saksvik, A. M. Kvemeth, A Nylund //J. Parasitol. 1998. - № 3. - P. 615-617.

78. Bernardini R. Cross-reactivity between IgE-binding proteins from Anisakis simplex and Dermatophagoides pteronyssinus /R. Bernardini, G. Mistrello, E. Novembre e.a. //J. Immunopathol Pharmacol. 2005. - №4. - P. 671-675.

79. Besprozvannykh V.V. Peter-the-Great Gulf fishes are a source of human invasion of the nematode Anisakis simplex (the family Anisakidae) /V.V. Besprozvannykh, A.V. Ermolenko, V.D. Kamnev //Med Parazitol (Mosk). 2004. - №3. - P. 21-24.

80. Blaylock R.B. The use of parasites in discriminating stocks of Pacific halibut

81. Hipoglossus stenolepis) in the Northeast Pacific /R.B. Blaylock, L. Margolis, J.C. Holmes //Fish. Bull. 2003. - V. 101, №. 1. - P: 1-9.

82. Boczon K. Biochemical and histochemical studies on Baltic herring infected with the larvae of Anisakis simplex II Acta Parasitol /К. Boczon, L. Gustowska, E. Wandurska. 1989. - V. 34, № 3. - P. 293-305.

83. BOJE J. Parasites as natural tags on cod in Greenland waters /J. BOJE /ACES CM, 1987.-№64.-10-p.

84. Brattey J. A. simplex technique for recovering larval ascaridoid* nematodes from the flesh of marine fish /J'. Brattey //J. Parasitol: 1988. - V. 74, №4. -P. 735-737.

85. Brattey J. Larval Anisakis simplex (Nematoda: Ascaridoidea) infection in* the musculature of Atlantic cod,,Gadus morhus, from Newfoundland and Labrador /J. Brattey, C.A. Bishop //Can. J. Fish Aquat. Sci. 1992. - V. 49, № 12. - P." 2635-2647.

86. Caballero M.L. Risk of sensitization to Anisakis simplex among the members of the families of patients with anisakiasis / M.L. Caballeroi I. Moneo //Med: Clin. (Bare). -2003. -№11. PI 412^413.

87. Caballero M.L. Several allergens from Anisakis simplex are highly resistant to heat and pepsin treatments /M.L. Caballero, I. Moneo // Parasitol Res. — 2004. — №3.-Pr 248-251.

88. Cabrera R. New case of human; infection by a Pseudoterranova decipiens larva (Nematode, Anisakidae) in Peru /R. Cabrera, M.A. Luna-Pineda, L. Su6rez-Ognio //Rev Gastroenterol Peru. 2003. - №3. - P. 217-220.

89. Carvajal J. Larval anisakids and other helminths in the hake, Merluccius gayi (Guichenot) from Chile /J. Garvajal, P: E. Cattan, C. Castillo, P. Schatte //J. Fish-Biol. 1979: - № 6: - P. 671-677.

90. Castro-Pampillon J. A. Selecting parasites for use in biological tagging of the Atlantic swordfish (Xiphias gladius) /J.A. Castro-Pampillon, M Soto-Bua,

91. R. Rodriguez-Dominguez //Fish. Res. 2002. - V. 59, № 1-2. - P. 259 - 262.

92. Cattan P. E. Study of the migration of larval Anisakis simplex (Nematoda: Ascaridida) in the Chilean hake, Merluccius gayi (Guichenot) /Р.Е. Cattan, J.A Carvajal //Fish Biol. 1984. - № 24. - P. 649-654.

93. Chai J.Y. Fish-borne parasitic zoonoses: status and issues /J.Y. Chai, K. Darwin Murrell, A.J. Lymbery //J. Parasitol. 2005. -№11-12. - P. 1233-1254.

94. Chai J.Y. Larval anisakids collected from the yellow corvine in Korea /J.Y. Chai, Y.M. Chu, W.M. Sohn, S.H. Lee //Korean J. Parasitol. 1986. -№>Г.-Р. 1-11.

95. Chandra G.V. Nematode infestation of fillets from Atlantic cod, Gadus mor-hus, off eastern Canada /C.V. Chandra, R.A. Khan //J. Parasitol. 1988. - №6. -P. 1038-1040.

96. Cho S.W. Immune reactions and allergy in experimental anisakiasis /S.W. Cho, H.N. Lee //Korean J. Parasitol. 2006. - №4. - P. 271-283.

97. Chord-Auger S. L'Anisakiase dans la region Nantaise. De 1 etal du poisson-nier au Cabinet du Medecin /S. Chord-Auger, M. Miegeville, P. Le Pape //Parasite. 1995. - №2. - P. 395-400.

98. Choudhury G.S. Fish parasite detection: Potential of biomagnetism /Seafood safety, processing and biotechnology /C.G. Bublitz, F. Shahidi, Y. Jones, D.D. Kitts. Lancaster, PA USA: Techn. Publ. Сотр. Inc. - 1997. - P. 41-51.

99. Costa G. Anisakid nematodes of the blackspot seabream, Pagellus boga-raveo, from Madeiran waters, Portugal /G. Costa, A. Madeira, T. Pontes, S.Dr Amelia //Acta Parasitol. 2004. - V. 49, № 2. - P. 156-161.

100. D'Amelio S. Genetic variation of the pinnipeds parasite Contracaecum og-morhini (Ascaridida, Anisakidae) /S. D'Amelio, S; Mattiucci, L Paggi, P. Orec-chia //Parassitologia. 1994. - №36 - P. 40.

101. Daschner A. Sensitization to Anisakis simplex: inhalant allergy versus gastroal-lergic anisakiasis /А. Daschner //Allergy Clin Immunol. 2006. - №4. - P. 968.

102. Davey J.T. A revision of the genus Anisakis Dujardin, 1845 (Nematoda: As-caridida) /J.T. Davey, J. Helminthol. 1971. - V. 45, № 1. - P. 51 - 72.

103. Deardorff T.L, Prevalence of Anisakis simplex in pen-reared and wild-caught salmon (Salmonidae) from Puget Sound, Washington /T.L. Deardorff, M.L. Kent //J. Wildl. Dis. 1989. -№ 3. - P. 416-419.

104. Dixon B. Variation in color of Pseudoterranova decipiens (Nematoda: Ani-sakidae) larvae correlates with haemoglobin concentration in the pseu-docoelomic fluid /В. Dixon, W. Kimmins, B. Pohajdak //Can. J. Fish Aquat. Sci.- 1993.-V. 50, №4.-P. 767-771.

105. Dong F.M. High hydrostatic pressure treatment of finfish to inactivate Anisakis simplex /F.M. Dong, A.R. Cook, R.P. Herwig //J. Food Prot. 2003. -V. 66, №10.-P. 1924.-1926.

106. Eltink A. Anisakis larvae (Nematoda: Ascaridida) in mackerel (Scomber scombrus L.) in ICES sub-areas, IV, VI and VIII in 1970-1971 and 1982 -1984 /А. Eltink //ICES CM. 1988. - P. 23-27 .

107. FAGERHOLM H.P. Parasites offish in Finland. VI. Nematodes /Н.Р. FAGERHOLM. Abo: Abo Akademi, 1982. - 128 p.

108. Feiler K. Erstfonde von Anisakis-larven in Zander, Stizostedion luciopercae aus Kustengewassern der Ostsee /К. Feiler, H. Winkler //Anfew. Parasitol. -1981. -№3.-P. 124-130.

109. Foti C. Risk factors for sensitization to Anisakis simplex: a multivariate statistical evaluation /С. Foti, M. Fanelli, V. Mastrandrea, R. Buquicchio, N. Cassano, A.Conserva, E.Nettis //J. Immunopathol Pharmacol. 2006. - №4. - P. 847-851.

110. Fuentes Aparicio V. Allergy to mammal's meat in adult life: immunologic and follow-up study /V. Fuentes Aparicio, I. Sanchez Marcen, A. Perez Mon-tero, M.L. Baeza, M. de Barrio Fernandez //J. Investig Allergol Clin Immunol. -2005.-№3.-P. 228-231.

111. Fujino T. Clinical, epidemiological studies on 150 cases of acute gastric ani-sakiasis in Gukuoka Prefecture /Т. Fujino, T. Ooiwa, Y. Ishii //Japan. J. Parasi-tol. 1984. - №1. - P. 73-92.

112. Garcia-Hernandez P. Anisakis simplex: the activity of larval products on the complement system /Р. Garcia-Hernandez, M. Rodero, C. Cuellar //Exp. Parasi-tol. -2007. -№1. P. 1-8.

113. Gonzalez-Munoz M. Detection of Anisakis simplex-induced basophil activation by flow cytometr /М. Gonzalez-Munoz, R. Luque, F. Nauwelaers, I. Moneo //Cytometry B. Clin. Cytom. 2005. - №1. - P. 31-36.

114. Gonzalez Quijada S. Anisakiasis gastrointestinal manifestations: description of 42 cases /S. Gonzalez Quijada, R. Gonzalez Escudero, L. Arias Garcia, A.R. Gil Martin, J. Vicente Serrano, E. Corral Fernandez //Rev Clin. Esp. — 2005.-№7.-P. 311-315.

115. Grabda J. From Anisakis simplex invasiology /J. Grabda. Arm. Acad. Med. Stetinensis. - 1973. - №10. - P. 39-45.

116. Hamre L.A. Metazoan parasites of Maurolicus miilleri (Gmelin) (Sternoptychidae) in Herdlefjorden, western Norway /L.A. Hamre, E. Karlsbakk //Sarsia. 2002. - V. 87, № 1. - P. 47-54.

117. Hartwich G. Schlauchwtirmer, Nemathelminthes, Rundoder Fadenwurmer, Nematoda, parasitische Rundwiirmer von Wirbeltieren. I. Rhabditida und As-caridida /G. Hartwich. — Die Tierwelt Deutschlands. — 1975. — 62 p.

118. Hierro I. In vivo larvicidal activity of monoterpenic derivatives from aromatic plants against L3 larvae of Anisakis simplex /I. Hierro, A. Valero, M.C. Navarro //Phytomedicine. 2006. №7. - P. 527-531.

119. Hojgaard D.P. Impact of temperature, salinity and light on hatching of eggs of Anisakis simplex (Nematoda, Anisakidae), isolated by a new method, and some remarks on survival of larvae /D.P. Hojgaard //Sarsia. 1998. - №1. — P. 21-28.

120. Hurst R.J. Marine invertebrate hosts of New Zeland Anisakidae /R.J. Hurst //N.Z.J. Mar. Freshwat. Res. 1984. - №18 - P. 187-196.

121. Iglesias R. Antigenic cross-reactivity in mice between third-stage larvae of Anisakis simplex and other nematodes /R. Iglesias, J. Leiro, F.M. Ibeira, M.T. Santamarina //Parasit. Res. 1996. - №83. - P. 378 - 381.

122. Im K.L Gastric anisakiasis cases in Cheju-do, Korea /К.1. Im, H.J. Shin, B.H. Kim, S.I. Moon//Korean J. Parasitol. 1995.-№3.-P. 179-186.

123. Inoue K. Possibility of anisakid larvae infection in farmed salmon /К. Inoue, S.I. Oshima, T. Hirata, I. Kimura //Fish. Sci. 2000. - № 6. - P. 1049-1052.

124. Jackson G.L. Experimental anisakiasis in pigs: course of infection with larval Anisakis sp. and Phocanema sp. nematodes from fishes /G.L. Jackson, J.W. Bier, W.L. Payne //Trans. Amer. Microsc. Soc. 1976. - №2. - P. 264-275.

125. Jackson G.L. The "New disease" status of human anisakiasis and North American cases: a review /G.L. Jackson //J. Milk Food Techn. 1975. - № 12. -P. 769-773.

126. Jarling C. Infestation of Atlantic chaetognaths with helminths and ciliates /С. Jarling, H. Kapp //Dis. Aquat. Org. 1985. - № 1. - P. 23-28.

127. Johnston Т.Н. Some Ascarid nematodes from Australian marine fish /Т.Н. Johnston, P.M. Mawson //Trans. Roy. Soc. S. Austr. 1943. - 67 p.

128. Kagei N. A case of abdominal syndrome caused by the presence of a large number of Anisakis larvae /N. Kagei, H. Isogaki //J. Parasit. 1992. - №2. -P. 251 -253.

129. Kagei N. A case of acute abdominal syndrome caused by Anisakis type-11 larva /N. Kagei, M. Sano, Y. Takahashi //J. Parasit. 1978a. - № 5. - P. 427-431.

130. Kagei N. On the examination against the parasites of Antarctic krill, Euphausia superba /N. Kagei, K. Asano, M. Kihala //Sci. Rep. Whales Res Inst. 1978b- - № 30. - P. 311-313.

131. Kakatcheva-Avramova D. The influence of low temperature on Contra-caecum aduncum Rudolph, 1802 larvae in Sprattus sprattus sultinus /D. Kakatcheva-Avramova, I. Todorov, I. Menkova //Helminthology. Sofia:. Bulg. Acad. Sci. - 1982.-№13.-P. 35-43.

132. Kameyama R. A case of immediate allergy to Anisakis following saury intake /R. Kameyama, A. Yagami, T. Yamakita, M. Nakagawa, K. Nagase, H. Ichikawa, K. Matsunaga //Arerugi. 2006. - №11. - P. 1429-1432.

133. Karl H: Ueberlebensfaehigkeit von Nematodenlarven (Anisakis simplex) bei der Herstellung von Heringsfilets nach Matjesart unter Verwendung frischer Rohware /Н. Karl //Inf. Fischwirtsch. 1987. - № 3. - P. 137 - 138.

134. Karl H. The Anisakis problem in Germany /Н. Karl //Bull. Scand: Soc. Parasitol. 2003. - №12. - P. 2002 - 2003.

135. Khan R.A. Parasites as biological indicators of stocks of Atlantic cod (Gadus morhud) off Newfoundland, Canada /R.A Khan, C. Tuck //Can. J. Fish Aquat. Sci. 1995. -№1. - P. 195-201.

136. Kijewska A. Ascaridoidea: a simple DNA assay for identification of 11 species infecting marine and freshwater fish, mammals, and fish-eating birds /А Kijewska, J. Rokicki, J. Sitko, G. Wgrzyn //Exp. Parasitol. 2002. - №1. -P. 35-39.

137. Kim C.H. A case report on human infection with Anisakis sp. in Korea /С.Н. Kim, B.S Chung, Y. Moon, S.H Chun, Korean J. Parasitol. 1971. - №1. -P. 39-43.

138. Kinne O. Diseases of marine animals /О. Kinne. Hamburg, //Introduction,

139. Pisces. 1984. - №4. - 541 p.

140. Kjaie M. Experimental infections of copepods and sticklebacks Gasterosteus aculeatus with small ensheathed and large third-stage of Anisakis simplex (Nematoda, Ascaridoidea, Anisakidae) /М. Ktfie //Parasitol. Res. — 2001. №1. -P. 32-36.

141. Rede M. Development to third-stage larvae occurs in the eggs of Anisakis simplex and Pseudoterranova decipiens (Nematoda, Ascaridoides, Anisakidae) /М. Kjafie, B. Berland, M. D. B. Burt //Can. J. Fish. Aquat. Sci. 1995. (Suppl. 1). -P. 134-139.

142. Landry T. Parasites of blueback herring (Alosa aes-tivalis) and of alewife (Alosa pseudoharengus) in the Miramichi River, New Brunswick /Т. Landry, A.D. Boghen, G.M Hare. //Can. J. Zool. 1992. - № 8. - P. 1622-1624.

143. Lang T. Infection of herring (Clupea harengus L.) with Anisakis sp. larvae in the western Baltic /Т. Lang, U. Damm, W. Weber //Arch. Fischereiwiss. -1990. -№1-2. -P. 101-117.

144. Larsen A.H. Interactions between ecto- and endoparasites in trout Salmo trutta /А.Н. Larsen^ J. Bresciani, K. Buchmann //Vet. Parasitol. 2002. -№ 1.1. P. 167-173.

145. Lee E.K. Length-weightage relationships, food, and parasites of Atlantic cod (Gadus mohrua) off coastal Labrador within NAFO Divisions 2H and 2J 3K /Е.К. Lee, R.A. Khan //Fish. Res. - 2000. - №45. - P. 65-72.

146. Levsen A. Low detection efficiency of candling as a commonly recommended inspection method for nematode larvae in the flesh of pelagic fish /А. Levsen, B.T. Lunestad, B. Berland //J Food Prot. 2005. - №4. - P. 828-832.

147. Lopez-Saez M.P. Is Anisakis simplex responsible for chronic urticaria? /М.Р. Lopez-Saez, J.M. Zubeldia, M. Caloto, S. Olalde, R. Pelta, M. Rubio, M.L. Baeza // Allergy Asthma Proc. 2003. - №35. - P. 339-345.

148. Lunneryd S.G. Anisakid nematodes in the harbour seal Phoca vitulina from the Kattegat-Skagerrak and Baltic /S.G. Lunneiyd //Ophelia. 1991. - №2. -P. 105-115.

149. Ma H.W. The infection status of anisakid larvae in marine fish and cephalopods from the Bohai Sea, China and their taxonomical consideration /H.W. Ma, T.J. Jiang., F.S. Quan, X.G. Chen //Korean J. Parasitol. 1997. -№1. - P. 19-24.

150. MacKenzie K. Some parasites and diseases of blue whiting, Micromesistius poutassou (Risso), to the north and west of Scotland and at the Faroe Islands /К. MacKenzie //Scott. Fish. Res. Rep. 1979. - № 17. - 17 p.

151. Marcogliese D.J. Corynosoma wageneri (Acanthocephala: Polymorphida) and Pseudoterranova decipiens (Nematoda: Ascaridoidea) larvae in Scottish shelf groundfish /D.J. Marcogliese, G. McClelland //Can. J. Fish. Aquat. Sci. -1992. № 10. - P. 2062-2069.

152. Marcogliese D.J. Fecundity of sealworm (Pseudoterranova decipiens) infecting grey seals (Halichoerus grypus) in the Gulf of St. Lawrence, Canada: lack of density-dependent effects /D.J. Marcogliese //J. Parasitol. 1997. - №11. -P. 1401-1409.

153. Margolis L. Helminths parasites from North Pacific anadromous Chinook salmon, Oncorhynchm tschawytscha, established in New Zealand /L. Margolis, N.P. Boyce /J. Parasitol., 1990. V. 76. - №1. - P. 133-135.

154. Margolis L. Parasites of White Sturgeon, Acipenser transmontanus, from the Fraser River, British Columbia /L. Margolis, Т.Е. McDonald //J. Parasitol.— 1986. -V. 77, №5. P. 794-796.

155. Margolis L. Response of mink (Mustela vison) to larval Anisakis simplex (Nematoda: Ascaridida) /L. Margolis, M. Beverley-Burton //J. Parasitol. — 1977a, №7. — P. 269-273.

156. Margolis L. Public health aspects of "codworm" disease /L. Margolis //J. Fish. Res. Bd. Can. 1977b. - №7. - P. 887-898.

157. Mattiucci S. Genetic and ecological data on the Anisakis simplex complex, with evidence for a new species (Nematoda, Ascaridoidea, Anisakidae) /S. Mattiucci, G. Nascetti, R. Cianchi, L. Paggi //J. Parasitol. 1997. - V. 83, № 3. -P. 401-416.

158. Mattiucci S. Genetic and morphological identification of Anisakis, Contracaecum and Pseudoterranova from Japanese waters (Nematoda, Ascaridoidea) /S. Mattiucci, L. Paggi, G. Nascetti, H. Ishikura //Syst. Parasitol. 1998. -V. 40, №2.-P. 81-92.

159. Mattiucci S. Genetic divergens and reproductive isolation between Anisakis brevispicula and Anisakis physeteris (Nematoda, Anisakidae) /S. Mattiucci, L. Paggi, G. Nascetti, E. Abollo //J. Parasitol. 2001. - № 1. - p. 9-14.

160. Mattiucci S. Molecular systematics, phylogeny and ecology of anisakid nematodes of the genus Anisakis /S. Mattiucci, G. Nascetti //Parasite. 2006, — №2.-P. 99-113.

161. Mattiucci S. Natural hybridization between seal anisakids Phocascaris pho-cae and P. cystophorae species (Nematoda, Ascaridoidea) /S. Mattiucci, R. Cianchi, G. Nascetti L.Paggi //Bull. Ca. Soc. Zool. 1996. - №27. - P. 79-85.

162. McConnell С.J. Settling rate and dispersal of sealworm eggs (Nematoda) determined using a revised protocol for myxozoan spores /C.J McConnell,

163. D.J. Marcogliese, M.W. Stacey //J. Parasitol. 1997. -№ 2. - P. 203-206.

164. Meseguer J. Anisakis simplex allergy and nephrotic syndrome /J. Meseguer,r

165. V. Navarro, I. Sanchez-Guerrero, B. Bartolome, J.M. Negro Alvarez //Allergol Immunopathol (Madr). 2007. - №5. - P. 216-220.

166. Miller L.N. Human antibody recognition of Anisakidae and Trichinella spp. in Greenland /L.N. Miller, T.G. Krause, A. Koch, M. Melbye, C.M. Kapel,

167. E. Petersen // Clin. Microbiol Infect. 2007. - №7. - P. 702-708.

168. Moneo I. Isolation of a heat-resistant allergen from the fish parasite Anisakis simplex Я. Moneo, M.L. Caballero, M. Gonzalez-Munoz, A.I. Rodriguez-Mahillo, R. Rodriguez-Perez, A. Silva //Parasitol Res. 2005. - №5. - P. 285-289.

169. Moneo I. Sensitization to the fish parasite Anisakis simplex: clinical and laboratory aspects /I. Moneo, ML. Caballero, R. Rodriguez-Perez, A.I. Rodriguez-Mahillo //Parasitol Res. 2007. - №4. P. 1051-1055.

170. Moravec F. Studies on parasitic .worms from Cuban fishes /F. Moravec, V. Barns //V6stn. Ceskoslov. Spolecn. Zool. 1971. - № 1. - P. 56-74.

171. Moreno-Ancillo A. Allergic reactions to Anisakis simplex parasitizing seafood /А. Moreno-Ancillo, M. T. Caballero R.Cabanas, R. Contreras //Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1997. - V. 79. - P. 246-250.

172. Nagasawa K. Review of human pathogenic parasites in Japanese common squid (Todarodes pacificus) I Okurani T, O'Dor R.K., Kubodera T. //Recent Advances in Fisheries Biology. Tokai Univ. Press, Tokyo. - 1993. - P. 293 — 312.

173. Noh J.H. A case of acute gastric anisakiasis provoking severe clinical problems by multiple infection /J.H. Noh, B. Kim, S.M. Kim, M. Ock, M.I. Park, J.Y. Goo // Korean J. Parasitol. 2003. - №2. - P. 97-100.

174. Odening K. Conception and terminology of hosts in Parasitology /К. Oden-ing //Advances in Parasitology. 1976. - V. 14. - P. 1-93.

175. Olafsdottir D. Anisakid nematodes in the common seal (Phoca vitulina L.) in Icelandic waters ID. Olafsdottir, E. Hauksson //Sarsia 1998. - № 4. - P. 309 - 316.

176. Oliva M. E. Parasites of the flatfish Paralichthys adspersus (Steindachner, 1867) (Pleuronectiformes) from northern Chile /М.Е. Oliva, R.E. Castro R. Burgos //Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 1996. - V. 91, № 3. - P. 301-306.

177. Oshima T. Anisakiasis Is the sushi bar guilty? /Т. Oshima //Parasitol. Today. - 1987. - V. 3, № 2. - P. 44-48.

178. Pascual S. Histopathology of larval Anisakis simplex В (Nematoda, Anisakidae), parasites of short-finned squid in the S. E. North Atlantic /S. Pascual, A. Gonzales, C. Arias, A. Guerra //Bull. Eur. Ass. Fish Pathol. 1995. - № 5. -P. 160-161.

179. Perteguer M.J. Application of the PCR-RFLP technique for the species-specific identification of nematodes involved in human anisakiasis

180. MJ. Perteguer, G. Ortiz, E. Garcia, M. Flores, E. Rodriguez, F.M. Ubeira, T. Garate //Med Clin (Bare). 2004. -№15. - P. 122-128.

181. Podolska M. The role of cod (Gadus morhus L.) in the life-cycle of Anisakis simplex (Rudolphi, 1802) (Nematoda, Anisakidae) in the southern Baltic Sea — an overview /М. Podolska //Medd. Havsfiskelab. Lysekikl. 1995. - P. 115-122.

182. Reimer L.W. Investigations of shallow and deepwater prawns and fishes on parasites and a short note on biomass of plankton of the coast of the P.R. Mozambique /L.W Reimer //Angew. Parasitol. 1984. - №2. - P. 27-35.

183. Rolbiecki L. Illstage Anisakis simplex (Rudolphi, 1809) (Nematoda; Anisakidae) larvae in herring caught in autumn from the Polish part of the Vistula Lagoon /L. Rolbiecki, J. Rokicki / Piscaria. 2002. -№ 1. - P. 105-110.

184. Saito W. Pulmonary anisakiasis presenting as eosinophilic pleural effusion /W. Saito, K. Kawakami, R. Kuroki, H. Matsuo, K. Oishi, T. Nagatake //Respi-rology. 2005. - №2. - P. 261-262.

185. Shields B.A. The nematode Anisakis simplex in American shad (Alosa sapidissima) in two Oregon rivers /В.А. Shields, P. Bird, M.J. Liss, K.L. Groves //J. Parasitol. 2002. - № 5. - P. 1033-1035.

186. Silva M.E. Occurrence of Anisakis sp. In fish off Portuguese West coast and evalution of zoonotic potential /М.Е. Silva, J.C. Eiras //Bull. Eur. Ass. Fish Pathol. 2003. - № 1. - P. 13-17.

187. Skfrnisson K. Pseudoterranova decipiens (Nematoda, Anisakidae) larvae reported from humans in Iceland after consumption of insufficiently cooked fish / K. Skirnisson // Laeknabladid. 2006. - №1. - P. 21-25.

188. Smith J. W. Experimental transfer of Anisakis sp. larvae (Nematoda: As-caridata) from one fish host to another /J. W. Smith //J. Helminthol. 1974. -№3. - P. 229-177.

189. Sun S. Anisakidae larvae found in marine fisher and squids from the Gulf of Tonking, the East China Sea and the Yellow Sea /S. Sun //Japan. J. Med. Sci. Biol. 1991. -№44. - P. 99-108.

190. Szostakowska B. Prevalence of anisakin nematodes in fish from Southern Baltic Sea /В. Szostakowska, P. Myjak, M. Wyszynski, H. Pietkiewicz, J. Rokicki //Pol J Microbiol. 2005. - №54. - P. 41-45

191. Tanabe M. A case report of ectopic anisakis /М. Tanabe, Y. Miyahira, E.Okuzawa, M. Segawa //Jap. J. Parasitol. 1990. - P. 397-399.

192. Thiel P. H. Anisakiasis /Р.Н. Thiel //Parasitology. 1962. - V. 32, Suppl. -P. 145-153.

193. Того С. Seropositivity to a major allergen of Anisakis simplex /С.Того, M.L. Caballero, M. Baquero, J. Garcia-Samaniego, I.Casado, P. Martinez,

194. Т. Alarcon, I. Moneo // Clin Microbiol Infect. 2006. - №5. - P. 453^158.

195. Ugenti I. Gastric anisakidosis: personal experience /I. Ugenti, A. De Ceglie, F. Ferrarese, C. Rizzo, R. Manta, G. Fabiano //Chir Ital. 2004. - №2. -P. 301-305.

196. Umehara A. Molecular identification of the etiological agent of the human anisakiasis in Japan /А. Umehara, Y. Kawakami, J. Araki, A.Uchida //Parasitol. 2007.-№3.-P. 211-215.

197. Valero A. Larval Anisakids parasitizing the blue whiting, Micromesistius poutas-sou, from Motril Bay in Mediterranean region of southern Spain /А. Valero, J. Marthin Esteban, C. Pascual //J. Helminton. 2000. - №3. - P. 361-364.

198. Vails A. Anisakis and anisakiosis /А. Vails, C.Y. Pascual, M. Martin Esteban //Allergol. Immunopathol (Madr). 2003. - №6. - P. 348-355.

199. Wootten R. Observational and experimental studies on the acquisition of Anisakis sp. larvae (Nematoda: Ascaridida) by trout in fresh water /R. Wootten, J.W. Smith //J. Parasitol. 1975. - № 3. - P. 373-378.

200. Young P.C. Larval nematodes from fish of the subfamily Anisakinae and gastro-intestinal lesions in mammals /Р.С. Young, D. Lowe //J. Сотр. Pathol. -1969.-№79.-P. 301-313.

201. Yu H.S. Anisakis simplex: analysis of expressed sequence tags (ESTs) of third-stage larva /H.S. Yu, S.K. Park, K.H. Lee, S.J. Lee, S.H. Choi, M.S. Ock, H.J. Jeong // Exp Parasitol. 2007. - №1. - P. 51-56.

202. Zapatero Remon L. Food-protein-induced enterocolitis syndrome caused by fish /L. Zapatero Remon, E. Alonso Lebrero, E. Martin Fernandez, M.L.Martmez Molero //Allergol Immunopathol (Madr). 2005. - №6. - P. 312-316.